AVALIAO MICROBIOLGICA DE DESINFETANTES QUMICOS DE USO DOMSTICO

Jorge Timenetsky*

TIMENETSKY, J. Avaliao microbiolgica de desinfetantes qumicos de uso domstico. Rev. Sade pbl., S. Paulo, 24:47-50,1990. RESUMO: Em 1988 e no primeiro semestre de 1989 cinco desinfetantes de uso domstico foram divulgados atravs de publicao televisiva. Para avaliar as propriedades antimicrobianas desses produtos os mesmos foram testados por um mtodo qualitativo (Duio-Uso com 10 carreadores, mtodo convencional e outro simplificado adaptado) e outro quantitativo, tambm adaptado. Os compostos ativos dos produtos descritos nos respectivos rtulos foram: l Paraclorofenol (O- Benzil) 0,1%; 2 ter 2,4,4' Cloro (III) 2' hidroxifenilico 0,1%; 3 N-alquildimetil benzil amnio-Cloreto de alquil dimetil etil benzil amonio 50% 1,6%; 4 formaldedo 37% (soluo de 0,3%); 5 Sem informao. Os microrganismos utilizados foram: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 e Salmonella choleraesuis ATCC 10708. No mtodo qualitativo, a cepa de pseudomonas foi recuperada dos desinfetantes l, 2 e 3. Todos os desinfetantes mostraram um efeito germicida de 5,0 (99,999% de reduo) em 15 segundos frente s trs cepas. O desinfetante 3 estava contaminado com Enterobacter sp na ordem de 104 clulas por ml. Este contaminante foi sensvel diante dos desinfetantes l, 4 e 5, frente metodologia qualitativa, e relativamente resistente frente ao desinfetante 2, na metodologia quantitativa. DESCRITORES: Desinfetantes. Avaliao microbiolgica.

INTRODUO Em 1985, no Brasil, adotou-se a diluio-uso, padronizada pela Association of Official Analytical Chemist (AOAC), como mtodo oficial na avaliao microbiolgica de desinfetantes, para qualificar esses produtos para efeito de registro e comercializao 4,6 . Muitos desinfetantes de uso hospitalar, na ocasio, foram desqualificados por no atingirem os padres microbiolgicos necessrios7. Desde ento, os fabricantes comearam a alterar a formulao e a embalagem de seus produtos desinfetantes, bem como a melhorar o esclarecimento para seu uso, atendendo s novas exigncias8. Numa etapa intermediria deste programa, alguns produtos, com a formulao j alterada, apesar de qualificados microbiologicamente, foram considerados txicos8,9. Desta maneira, diante da necessidade de qualificar maior nmero de produtos, procurou-se conciliar a baixa toxicidade com o espectro de ao antimicrobiano na desinfeco hospitalar. Assim, flexibilizaram-se alguns padres microbiolgicos8' 9 sem o comprometimento da qualidade do produto. Essa avaliao no foi divulgada e discutida para produtos desinfetantes de uso domstico em sua grande variedade, como ocorreu com os desinfetantes hospitalares, por razes diversas. Novos desinfetantes domsticos esto surgindo e coexistindo com outros mais antigos ou tradicionais15. sabido

que os desinfetantes domsticos, por questes inerentes sua comercializao, so escolhidos pelo consumidor com base em critrios arbitrrios e/ou subjetivos e, conseqentemente, empregados erroneamente. Embora esses produtos no possuam os mesmos objetivos que os de uso hospitalar, devem, do mesmo modo, possuir atividade antimicrobiana por definio e atender aos respectivos padres microbiolgicos que por sua vez so mais flexveis do que os de uso hospitalar 1,4,14,15 (domsticos avaliados com 2 espcies bacterianas; hospitalares avaliados com 5 espcies bacterianas e uma fngica, conforme o ambiente hospitalar). A metodologia da diluio-uso pode qualificar ou desqualificar um mesmo produto desinfetante, dependendo do laboratrio que realiza a trabalhosa metodologia padronizada. Desta maneira, sugere-se que poucos laboratrios sejam credenciados para avaliao e que a metodologia seja simplificada 10. Assim, no sentido de colaborar com o estudo da avaliao microbiolgica de desinfetantes de uso domstico, rea carente em nosso meio3,15, propusemo-nos a realizar estudo com 5 produtos desinfetantes divulgados pela publicidade televisiva, no ano de 1988, e no primeiro semestre de 1989, por metodologia quantitativa adaptada e outra qualitativa, esta baseada na metodologia da diluio-uso utilizando etapas padronizadas e outras simplificadas.

Departamento de Microbiologia do Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo Av. Prof. Lineu Prestes, 1374 05508 So Paulo, SP Brasil.

MATERIAL E MTODOS Microorganismos 8: Staphylococcus aureus ATCC 6538 Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 e Salmonella choleraesuis ATCC 10708 Desinfetantes: (composto ativo e concentrao descrita no rtulo). 1 - Pinho-sol (Ortobenzil paraclorofenol a 0,1%) 2 - Frish (ter 2,4,4' tricloro 2' hidroxifenlico a 0,1%) 3 - Harpic-WC (Cloreto de alquil dimetil benzil amino-cloreto de alquil dimetil etil benzil amino 50 a 1,6%) 4 - Pato-Purific (Formaldedo 37%, sol a 0,3%) 5 -Thunder (No apresenta formulao) Meios de subcultivo4 - Caldo e Agar Nutriente Mtodo qualitativo: Diluio-uso padronizada pela AOAC4 com 10 carreadores, para efeito de triagem, inoculados separadamente nos respectivos subcultivos. Diluio-uso mtodo simplificado adaptado neste trabalho, baseado nos mesmos princpios da AOAC4, com 10 carreadores para efeito de triagem, inoculados conjuntamente em frascos Erlernmeyer com l00ml de meio para subcultivo. Mtodo quantitativo adaptado 15 - Determinao do efeito germicida. Suspenso teste (0,5ml de caldo nutriente com bactrias desenvolvidas em 24 h + 5,0ml do desinfetante em teste). Verificao do nmero de unidades formadoras de colnias (u.f.c.) sobreviventes aps 15 segundos de contato. A suspenso teste foi avaliada pela amostra realizada com ala bacteriolgica padronizada (4mm de dimetro)4. Confirmao da identidade das bactrias utilizadas no incio de cada experimento quando os subcultivos foram positivos15. Controle da interferncia de resduos de desinfetantes nos subcultivos na: Metodologia qualitativa padronizada: Carreadores estreis foram mergulhados nas solues dos desinfetantes, retirados, o excesso de desinfetante removido, e inoculados simultaneamente com carreadores contaminados para subcultivo a 37C por 24 h15. Metodologia qualitativa simplificada: Carreadores estreis foram mergulhados nas solues desinfetantes, removidos em grupo de 10 e submetidos

a lavagens cuidadosas com gua destilada estril, num Erlenmeyer (este procedimento tambm ocorreu na avaliao de cada produto); em seguida, foram inoculados e subcultivados conjuntamente com 10 carreadores contaminados em l00ml de Caldo Nutriente. Metodologia quantitativa adaptada: Inoculouse simultaneamente em 15 ml de Agar Nutriente, fundido e resfriado, uma alada da soluo do desinfetante e outra de uma suspenso conhecida de bactrias para a verificao da alterao de u.f.c., aps incubao a 37C por 24h15. RESULTADOS E DISCUSSO Como j constatamos em outra oportunidade, a metodologia da diluio-uso pode ocultar atividade antimicrobiana importante. Portanto, um acompanhamento pela avaliao quantitativa sempre interessante15. Para colaborar com a recente proposta de simplificar o mtodo de avaliao microbiolgica de desinfetante e tendo por base a metodologia da diluio-uso, conferimos que o fato de 10 carreadores tratados com desinfetante e subcultivados conjuntamente no alterava os resultados em relao ao mtodo padronizado para fins de triagem. Assim, a economia de tempo, material e, conseqentemente, a atividade tcnica pde ser reduzida sem interferir nos princpios da metodologia (Tabela). Diante da metodologia qualitativa, tanto no protocolo padronizado como no simplificado, os produtos 2 e 3 permitiram a recuperao das cepas de Pseudomonas e de Salmonella. Desta maneira, apenas os produtos l, 4 e 5 estariam de acordo com o padro microbiolgico de triagem necessrio aos desinfetantes domsticos. Os produtos 4 e 5 tambm atingiram padres microbiolgicos para desinfetantes institucionais e hospitalares destinados a reas no crticas, pois no permitiram a recuperao da cepa de Pseudomonas 4 (Tabela). A metodologia quantitativa por ns anteriormente adaptada 15 mostrou que todos os produtos provocaram um efeito germicida de pelo menos 5 (99,999% de reduo) em 15 segundos sobre as bactrias padres utilizadas. Esse tipo de reduo reconhecido e sugerido, desde que o inculo inicial possua cerca de 109 bactrias por ml5. Como em nosso caso o objetivo era apenas avaliar atividade antimicrobiana, a suspenso teste possua cerca de 10 7 bactrias por ml; entretanto, essa situao semelhante ao nmero de bactrias contidas em cada cilindro carreador 12, embora num mtodo as bactrias estejam em suspenso e, em outro, aderidas superfcie metlica. A atividade antibacteriana evidenciada no mtodo quantitativo no pode ser desprezada em relao ao mtodo qualitativo, principalmente quando este utilizado para a qualificao de produtos desinfetantes 4,13,l5.

Tambm sabido que os testes "in vitro" conferem apenas a atividade antimicrobiana de um produto desinfetante mas no a real capacidade de desinfeco de um ambiente que, por sua vez, pode ter diversos fatores interferentes, alguns at imprevisveis, prejudicando a atividade antimicrobiana de um composto ativo 13,15. Por esta razo, os testes padronizados ou no so discutveis, e no existe um nico mtodo de avaliao microbiolgica que considere todas as variveis no contexto geral de desinfeco2,5. O uso de cepas bacterianas padres e representativas tambm questionado pois, do mesmo modo, no representam as condies reais num processo de desinfeco 2,5. Na avaliao quantitativa verificamos que o produto nmero 3 estava contaminado com Enterobacter sp, na ordem de 104 clulas por ml do produto. Esse produto, apesar de ter se revelado eficaz na metodologia qualitativa, padronizada e simplificada, frente cepa de Staphylococcus, no o foi para a cepa de Salmonella, conferindo em nosso caso a representatividade de Salmonella chole raesuis. A atividade antibactcriana dos produtos l, 2, 4 e 5 foi realizada frente cepa do microrganismo contaminante. Apenas o produto nmero 2 permitiu a recuperao de Enterobacter sp tanto na avaliao qualitativa quanto na quantitativa. Entretanto, na avaliao quantitativa, o produto nmero 2 revelou ainda possuir um efeito germicida de pelo menos 3 (99,9% de reduo) aps 10 min de contato. Paradoxalmente, neste ltimo experimento, a representatividade da cepa de Salmonella na metodologia qualitativa pode ser questionada. O achado da contaminao em questo, inclusive em outras embalagens do produto e pertecentes ao mesmo lote, pode sugerir descuidos na elaborao da formulao, estoque e/ou embala-

gem do produto. Entretanto, sabido que produtos desinfetantes base de quaternrios de amnio, caso do produto nmero 3, so mais passveis de contaminao por questes inerentes a esse composto, sendo, portanto, s vezes suplementados com preservantes como o etanol11. Sugerimos, portanto, que produtos desinfetantes de uso domstico, base de quaternrios de amnio, sejam comercializados com cautela. O achado de cepas resistentes ou contaminantes faz parte do contexto geral do controle microbiolgico de desinfetantes, com exceo das bactrias esporuladas2,5,13. Os resduos de desinfetantes levados para os subcultivos no interferiram no desenvolvimento bacteriano, nas metodologias quali e quantitativa. Os subcultivos positivos confirmaram apenas a presena das cepas utilizadas no incio de cada experimento, com exceo do produto nmero 3 onde tambm se caracterizou, atravs de isolamento, um microrganismo contaminante (Enterobacter sp). Na metodologia qualitativa com o produto 3, todos os tubos para subcultivo apresentaram turvao; e apenas 4 tubos permitiram tambm a recuperao de Pseudomonas e 3 de Salmonella nos respectivos experimentos (Tabela). Na metodologia simplificada houve a recuperao da cepa bacteriana padro juntamente com Enterobacter sp. Na metodologia quantitativa no houve a recuperao das cepas padres, apenas do microrganismo contaminante. A ala bacteriolgica padronizada transportou em mdia 5,3 x 105 clulas de Staphylococcus aureus, 8,7 x 105 clulas de Pseudomonas aeruginosa e 4,3 x 105 clulas de Salmonella choleraesuis.

Concluindo, os produtos desinfetantes divulgados atravs de um expressivo veculo de comunicao, a televiso, revelaram em nossas condies laboratoriais possuir atividade bactericida, atingindo um dos principais objetivos de um desinfetante. Entretanto, diante dos padres microbiolgicos nacionais, dois estariam desqualificados, dois foram compatveis com a sua categoria e ou-

tros dois atingiram padres superiores aos necessrios. Na metodologia quantitativa, todos apresentaram efeito germicida de pelo menos 5 em 15 segundos frente s cepas padres. Surpreendentemente, um produto estava contaminado com Enterobacter sp na ordem de 104 clulas por ml e esta cepa foi parcialmente resistente frente aos quatro outros produtos.

TIMENETSKY, J. [Evaluation of chemical disinfectants for household use]. Rev. Sade pbl., S. Paulo, 24: 47-50,1990. ABSTRACT: Five disinfectants for household use were advertised on television during 1988 and the first half of 1989. The products were tested by a qualitative (Use-Dilution with 10 carriers, a conventional and simplified, adapted method) and a qualitative, adapted method with a view to evaluating their antimicrobial activity. The active compounds of the products, according to their respective labels were: 1 Parachlorophenol (0-Benzil) 0.1%; 2 Eter 2.4.4' Chloro (III) 2' hydroxiphenylic 0.1%; 3 N - alkyl dimethylbenzyl ammonium chlorides, N - alkyl dimethylethybenzyl ammonium 50% - 1.6%; 4 Formaldehyde 37% (0.3% solution); 5 No information. The microorganisms used were: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 and Salmonella choleraesuis ATCC 10708. In the qualitative method the pseudomonas strain was recovered from disinfectants 1, 2, and 3 and the salmonella strain from disinfectants 2 and 3. All disinfectants showed germicidal effect 5.0 (99.999%) of reduction) in 15 seconds against all strains. Disinfectant 3 was contamind with Enterobacter sp to the order of 104 cells/ml. This contaminant was sensitive against disinfectants 1, 4 and 5, in the qualitative method and had a relative resistance to disinfectant 2 in the quantitative method. KEYWORDS: Disinfectants. Microbiological evaluation.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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