Machine Translated by Google

https://dx.doi.org/10.21577/0103-5053.20210039

Artigo J. Braz. Chem. Soc., vol. 32, nº 7, 1405-1412, 2021

©2021 Sociedade Brasileira de Química

Desenvolvimento de um Método TD-NMR para Monitorar o Teor de Óleo de Castanha do Pará:

Uma Abordagem Verde e de Baixo Custo

Úrsula A. Ribeiro, a Leonardo C. Queiroz, a Agide G. Marassi, b André S. Carvalho,b

Gabriel A. Barros,a Daniel M. Consalter,b Jaqueline A. Bezerra, a,c Alan DC Santos, *,a Luiz Alberto
Colnagod e Marcos B. Machado *,a

a Núcleo de Estudos Químicos de Micromoléculas da Amazônia (NEQUIMA), Av. Prof. Gen.

Rodrigo Octávio Jordão Ramos, 1200, Setor Norte, ICE, Bloco 10, Coroado I, 69067-005 Manaus-AM,
Brasil
b
Tecnologia de Instrumentos Finos (FIT), Rua Laura Villani Piovesan, 130, Jardim Ipanema 1,
3563-652 São Carlos-SP, Brasil

c Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas (IFAM), Av. Prof. Sete
de Setembro, 1975, Centro, 69020-120 Manaus-AM, Brasil
d
Embrapa Instrumentação, Rua XV de Novembro, 1452, CP 741, 13560-970 São Carlos-SP, Brasil

O crescimento da popularidade internacional do óleo de castanha do Brasil (Bertholletia excelsa, Bonpl.) exigiu
um olhar mais atento sobre os aspectos de qualidade das castanhas. Neste contexto, a espectroscopia de
ressonância magnética nuclear 1 H no domínio do tempo (TD-NMR) pode ser uma ferramenta útil para avaliar a
porção lipídica de tais matrizes. Neste trabalho, um método TD-NMR foi desenvolvido e validado para avaliar o teor
de óleo diretamente da castanha do Brasil seguindo as normas ISO 10565:1998 e DOQ-CGCRE-008.
A validação completa foi abordada cobrindo a faixa de trabalho de 0,67 a 25,00 g (coeficiente de determinação, R2 =
0,9993). Os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) foram 0,20 e 0,67 g, respectivamente. Os ensaios de
repetibilidade e precisão intermediária atenderam aos requisitos do guia. Os teores de óleo obtidos em dois
laboratórios (equipamentos diferentes) foram estatisticamente semelhantes (66,93 ± 4,69 e 70,13 ± 4,15%),
evidenciando a robustez do método. A abordagem desenvolvida tem potencial para ser adotada como método de
referência industrial para monitoramento in situ do teor de óleo da castanha-do-pará.

Palavras-chave: Bertholletia excelsa, quantificação de óleo, validação, Soxhlet, RMN de baixo campo, qualidade

Introdução como leite de castanha-do-Pará, confeitos de castanha-do-pará,

A castanha-do-pará (Bertholletia excelsa Bonpl.) é um produto
economicamente valioso originário principalmente da Amazônia
brasileira, peruana e boliviana. Consideradas o principal produto
extrativo exportado pelo Brasil, essas castanhas se destacam por
barras de cereais, chocolates e preparações de farinha de farelo,
também podem ser encontrados no mercado.3,5 Após a extração do
óleo, o subproduto da oleaginosa (torta) ainda pode ser explorado
em a indústria alimentícia ao oferecer um extrato denominado “leite”,
além de proteínas concentradas e isoladas do bolo desengordurado.3

sua composição química, que se caracteriza pelo alto teor de
proteínas, lipídeos insaturados, carboidratos, minerais essenciais
(notadamente o selênio) e vitaminas.1-3 Aspectos nutricionais valor
e sabor agradável da castanha-do-pará (in natura) também ganharam
popularidade internacional.
O óleo presente nessas castanhas é tipicamente obtido por
prensa hidráulica e utilizado para fins culinários ou na indústria
cosmética.4 Outros produtos à base de castanha do Pará, como
*e-mail: alandiegormn@gmail.com; marcosmachado@ufam.edu.br
Os métodos atuais realizados na extração da castanha-do-brasil
aumentam o potencial de contaminação com consequente risco à
saúde do consumidor e, portanto, tem levado a uma crise na
confiança do consumidor.2 Por exemplo, foi demonstrado que a
presença de aflatoxinas produzidas por fungos (por exemplo,
Aspergillus flavus, A. nomius e A. parasiticus) está associada ao
câncer de fígado humano.2,3,6 Além disso, o natural a germinação
das castanheiras é difícil e demorada, contribuindo para sua
classificação como vulnerável à extinção.7 Com esse cenário, surgiu
uma maior exigência quanto à qualidade desse produto, incluindo a
Machine Translated by Google
1406 Desenvolvimento de um Método TD-NMR para Monitorar o Teor de Óleo de Castanha do Brasil
avaliação dos aspectos físicos, químicos e biológicos da matéria-prima.
Métodos capazes de avaliar a química da castanha intacta e seus
subprodutos (por exemplo, óleo e torta) tornaram-se essenciais, pois
podem ajudar a monitorar a qualidade dos produtos finais e
intermediários ao longo da cadeia produtiva. A química do óleo da
castanha-do-pará tem sido caracterizada por um alto teor de ácidos
graxos insaturados.8 Mais de 70% do óleo é composto de triglicerídeos
com a posição dos ácidos graxos (ácidos palmítico, oleico e linoleico)
na estrutura do glicerol. 9 Tocoferol, fitoesteróis e compostos fenólicos
também foram relatados nesta oleaginosa e, juntamente com seus
ácidos graxos e teor de selênio, são responsáveis pela relevância
nutricional e funcional da castanha-do- pará.1,10,11
Com relação aos aspectos químicos, a Agência Nacional de
Vigilância Sanitária (ANVISA) preconiza que o controle de qualidade
do óleo da castanha-do-pará seja realizado pela avaliação dos índices
de acidez e peróxido.12 O índice de peróxido tem se mostrado um
parâmetro muito importante, pois mede o estado oxidativo inicial do
óleo expresso em oxigênio ativo por quilograma de óleo equivalente.13
Além disso, o índice de saponificação, a refração e a densidade são
frequentemente investigados.
Normalmente, as análises de óleos de nozes requerem o uso de
métodos de extração como prensagem a frio e métodos baseados
em solventes orgânicos.14 Tais abordagens podem levar a pequenos
rendimentos ou degradação da amostra. Para superar esses
problemas, técnicas que obedecem aos princípios da Química Verde
ganharam popularidade, como a extração com fluido supercrítico
(SFE)15 e a ressonância magnética nuclear no domínio do tempo
(TD-NMR). Este último tem se mostrado uma alternativa adequada
para avaliar o teor de óleo diretamente das nozes.14 Como ferramenta
robusta, rápida, não destrutiva, econômica e versátil, com
potencial para medições online e in situ , o TD-NMR tem sido
amplamente empregado no controle e garantia de qualidade de
alimentos.16-21 Nas últimas duas décadas, as aplicações de TD-
NMR se expandiram para estudos básicos de alimentos, incluindo
status da água, compartimentalização da água e mobilidade molecular
por meio de medições de relaxamento e difusão.22 TD- As análises
de RMN são baseadas na intensidade de
decaimento de indução livre (FID) e sinais de eco de spin, tempos
de relaxamento transversal e longitudinal (T1 e T2, respectivamente)
e difusão molecular (D).23 O TD-NMR permite adquirir informações
sobre a densidade de prótons de componentes sólidos e líquidos. Os
componentes sólidos das nozes, como proteínas e carboidratos,
podem ser determinados usando sondas com tempo morto muito
pequeno (menos de 10 µs) e sequências de eco sólido, como eco de
sanduíche mágico (MSE) e eco sólido otimizado para radiofrequência
de Rhim e Kessemeier
J. Braz. Chem. Sociedade
(RK-ROSE).24 Por outro lado, componentes líquidos, como óleo
vegetal ou conteúdo de água móvel, podem ser medidos com sonda
padrão usando sinais FID ou spin-eco.25
Seguindo o método proposto pela ISO 10565:199814 (a sequência
de pulsos spin eco: 90º-ÿ-180º), a amplitude máxima do FID adquirida
durante a primeira etapa do experimento (após o pulso de 90°) é
proporcional ao número de prótons das fases aquosa e oleosa da
amostra. Após um tempo ÿ1 e pulso de 180°, um sinal spin-eco é
refocalizado e atinge a amplitude máxima em outro tempo ÿ2, onde
ÿ1 = ÿ2 e é proporcional apenas ao teor de óleo.14 Por isso, TD-NMR
pode ser usado para medir a quantidade de óleo e gordura em
diversas matrizes, inclusive diretamente das sementes.25-27 Nesse
contexto, este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um
método para avaliar o teor de óleo de castanhas de B. excelsa in
natura via TD-NMR.
Experimental
Aquisição de amostras
A castanha-do-Pará foi doada pela Profª Dra. Ariane Mendonça
Kluczkovski, da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade
Federal do Amazonas (UFAM), que adquiriu as amostras de uma
usina processadora localizada no Estado do Pará (Brasil). O óleo foi
extraído de 904 g de castanha-do-pará por meio de prensagem a frio,
utilizando-se uma prensa hidráulica Tecnal TE-098 (Piracicaba,
Brasil). A quantidade de óleo extraído foi medida em um béquer (500
mL), transferida para um frasco âmbar e mantida em temperatura
ambiente (25 °C). Após a decantação dos resíduos, a camada clara
foi transferida para outro frasco âmbar e mantida em temperatura
ambiente. O óleo resultante foi usado para construir as curvas
analíticas. Para aplicação do método TD-NMR e extração exaustiva,
foram selecionadas castanhas-do-Pará in natura , pesadas e
analisadas para determinação do teor de óleo em porcentagem
(massa/massa).
experimentos de RMN
Os experimentos de TD-NMR foram realizados em um
espectrômetro SpecFIT (Fine Instrument Technology (FIT), São
Carlos, Brasil, espectrômetro nº 1), equipado com um ímã permanente
de 0,33 T e uma sonda de 40 mm de diâmetro, e espectrômetro
SLK-200 NMR (Spinlock Magnetic Resonance Solution, Córdoba,
Argentina, espectrômetro No. 2), equipado com um ímã permanente
de 0,23 T 1 H a 15 MHz e uma sonda de 38 mm de diâmetro,
(espectrômetro No. 1) e 10 MHz (espectrômetro observando
No. 2).
Os dados foram adquiridos por sequência de pulso spin-eco com 64
varreduras, comprimento de pulso de 90° de 14,0 µs, tempo morto de
20,0 µs, ÿ1 de 3.300 µs com tempo de aquisição iniciado em 2.800 µs,
Machine Translated by Google
Vol. 32, nº 7, 2021 Ribeiro e cols.
Comprimento de pulso de 180° de 28,0 µs e atraso de reciclagem (RD) de 1,0 s.
Os espectros foram registrados com 1.024 pontos de dados (Figura 1).
Durante as análises, a temperatura da amostra e a umidade foram
mantidas em 33 ± 2 °C e 63 ± 3%, respectivamente. O tempo experimental
total durou cerca de 64 s para cada amostra, sem incluir o tempo utilizado
para a preparação da amostra.
O espectrômetro nº 2 foi utilizado para aplicação do método em um
segundo laboratório. Os comprimentos de pulso foram calibrados semanalmente.
Para determinação de ÿ1 foram obtidas medidas experimentais variando
ÿ1 de 2.100 a 3.500 µs, sendo que a intensidade máxima foi alcançada
quando ÿ1 foi de 2.300 µs.
Figura 1. Diagrama da sequência de pulsos spin-eco.
método de validação
Os parâmetros de desempenho do método foram avaliados seguindo
as diretrizes de validação de métodos de ensaio químico DOQ-CGCRE-008
do Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (INMETRO)
do Brasil.28
Linearidade e faixa linear de trabalho
Inicialmente, foi realizado um ensaio utilizando diferentes quantidades
de óleo de castanha-do-pará para construir uma curva analítica preliminar
(0,04-46 g). Tal teste de triagem permitiu verificar a relação entre a
resposta do instrumento e a quantidade de óleo e planejar a avaliação dos
demais parâmetros de validação. Os testes de Grubbs e Cochran foram
realizados para investigar a presença de outliers e a igualdade das
variâncias. As curvas analíticas foram então construídas e a análise de
variância (ANOVA) empregou o teste F para investigar sua linearidade.
Além disso, a análise de resíduos foi realizada para investigar a
aleatoriedade dos dados.
A faixa de trabalho foi definida somente após o estabelecimento dos
limites de quantificação e detecção. A faixa linear de trabalho foi
determinada a partir da curva da faixa de trabalho observando o ponto
exato onde a curva perdeu a resposta linear. A sensibilidade das curvas
construídas ao longo do estudo foi monitorada por suas inclinações.
Curva de calibração
Diferentes quantidades de óleo de castanha do Brasil foram pesadas
(2,00-16,00 g) e analisadas via TD-NMR. As amostras foram
1407
preparados e analisados em sete repetições. A presença de outliers foi
verificada por meio dos testes de Grubbs e Cochran. A curva analítica foi
construída usando a intensidade do sinal versus a quantidade de óleo. A
linearidade da curva foi testada via ANOVA usando o teste F-Snedecor.
Além disso, os resíduos foram calculados para determinar o viés. Os
testes estatísticos foram realizados no software Minitab® (18.1).29
Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)
A intensidade do ruído foi medida pela aquisição de sete espectros
de um tubo de NMR vazio. A média e o desvio padrão dessas medidas
foram usados para
calcular o LOD e LOQ teórico através das equações 1 e 2, respectivamente.
LOD = X + t × s (1)
LOQ = X + 10 × s (2)
onde X é a média da intensidade do ruído encontrada nos espectros, s é
seu desvio padrão e t é da distribuição t de Student. Depois disso, os
espectros de TD-NMR foram adquiridos usando quantidades de óleo de
castanha-do-pará acima e abaixo do LOD teórico. O LOD final foi definido
interpolando as intensidades dos sinais na curva analítica, bem como
comparando os desvios padrão de cada medição. Definido o LOD,
amostras contendo o óleo mínimo pesado (n = 6) foram preparadas para
verificar se poderiam ser detectadas e diferenciadas do ruído dos espectros.
Precisão
Para o teste de precisão, foram construídas sete curvas analíticas
utilizando uma faixa de 3,00 a 23,00 g de óleo.
Repetibilidade A
repetibilidade do método foi investigada por dois analistas usando
dois espectrômetros. Eles construíram independentemente seis curvas
analíticas em seis dias diferentes usando o método desenvolvido, em um
total de 12 curvas analíticas. Apenas as curvas adquiridas pelo mesmo
analista tiveram seus desempenhos comparados. O desvio padrão relativo
(RSD) foi utilizado para avaliar a repetibilidade conforme estabelecido pela
Association of Official Analytical Chemists (AOAC).30 Como os resultados
foram expressos em gramas, as massas utilizadas foram normalizadas
para definir a faixa de aceitação.
Precisão intermediária A
precisão intermediária foi avaliada intradia (seis curvas analíticas
foram construídas) e interdias (oito curvas analíticas foram construídas)
por dois analistas. A presença de outliers foi investigada por meio do teste
de Grubbs. RSD do intermediário
Machine Translated by Google
1408 Desenvolvimento de um Método TD-NMR para Monitorar o Teor de Óleo de Castanha do Brasil
a precisão, em diferentes tempos e analistas, foi calculada pela
equação 3 (Spi (TO)). A análise ANOVA foi utilizada para verificar a
equivalência estatística das curvas analíticas construídas pelos dois
analistas.
(3)
onde m é o número total de amostras, n é o número de réplicas, yjk é
o resultado individual de cada amostra e y a média dos resultados de
cada amostra.
Limite de precisão (PL)
PL permitem o monitoramento de diferenças significativas em um
determinado nível de confiança. Para determinação do PL, foi
empregada a equação 4.
(4)
onde t está relacionado com o valor da abcissa da relação bilateral
A distribuição t de Student , com intervalo de confiança de 95,35%,
reflete a diferença de duas medidas, e s é o RSD calculado a partir
dos testes de repetibilidade, reprodutibilidade ou precisão intermediária.
Segundo o INMETRO, para os casos em que não há método
comparativo avaliável, a equação HORRAT pode ser utilizada para
avaliar a aceitação dos aspectos estudados no método recém-
desenvolvido (equação 5).
(5)
onde RSDr é o RSD do parâmetro de precisão estudado e PRSDr é
a reprodutibilidade prevista obtida a partir da equação de Horwitz.
No presente trabalho, a reprodutibilidade predita obtida a partir
da equação de Horwitz foi 2. Caso o valor encontrado fosse menor
ou igual a 2, os resultados foram considerados satisfatórios. Além
disso, a análise de interação dos efeitos principais explorados nos
experimentos (equipamento, analista, dia, período e peso) foi realizada
por meio do gráfico de efeitos principais obtido por ANOVA. Para
isso, foi empregado o software Minitab® 18.1.29
Extração por convecção do teor de óleo pelo método Sohxlet
A extração convectiva de petróleo de quinze
amêndoas de nozes, previamente submetidas a análises de TD-NMR,
foi realizada usando um extrator tipo Soxhlet (Modelo LUCA-201/6-E
da Lucaderma, São José do Rio Preto, Brasil). Essas nozes foram
despolpadas, esmagadas manualmente, pesadas,
J. Braz. Chem. Sociedade
e embrulhados com papel filtro, sendo divididos em três grupos
contendo cinco amêndoas cada. Cada amêndoa desses três grupos
foi submetida individualmente à extração exaustiva com n-hexano
(200 mL cada, grau HPLC, Tedia Co Inc, Fairfield, EUA) por 6, 8 ou
10 h, respectivamente. Após as extrações, as amostras foram
concentradas em rotaevaporador (Fisatom 801, São Paulo, Brasil) a
40 ºC. Os óleos obtidos foram submetidos à centrifugação (modelo
Hettich RotoFix 32A, Tuttlingen, Alemanha) a 4.000 rpm (2.862 G-
force) por 30 min. A fase superior das amostras foi separada, seca
em dessecador e pesada. Após encontrar a normalidade, ANOVA
(One-Way, teste de Tukey, 95% de significância) e teste T (p < 0,05)
foram realizados.
Os resultados obtidos foram expressos como média ± desvio padrão
da razão de massa. O software Minitab® 18.1 foi empregado nessas
análises.29
Resultados e discussão
A condição de oxidação dos óleos investigados foi previamente
avaliada pelos índices de ácido e peróxido, conforme exigido pela
ANVISA.12 Os valores encontrados para as amostras foram
satisfatórios e possibilitaram sua utilização para o desenvolvimento
do método TD-NMR (ver seção Informações Suplementares (SI)) .
Verificação dos parâmetros de validação
Seletividade
A seletividade do método foi assegurada pela ISO 10565:1998,
que determina a RMN pulsada adequada para avaliar o teor de óleo
de oleaginosas comerciais desde que as amostras tenham teor de
água inferior a 10%.14
LOD e LOQ
A abordagem da intensidade do ruído levou a valores de LOD e
LOQ de 0,16 e 0,35 g, respectivamente. Porém, com base no estudo
do desempenho da curva para massas próximas a esses valores,
pode-se observar que LOD e LOQ foram 0,20 e 0,67 g,
respectivamente; já para valores inferiores a 0,20 g, o RSD foi superior
a 10% e, para massas superiores a 0,67 g, o RSD foi inferior a 4%
(Tabela S1, seção SI). Vale ressaltar que o INMETRO preconiza
valores de RSD ÿ 5%.31
Esses resultados podem ser corroborados ao verificar a curva
analítica (Figura S1, seção SI). O ponto mínimo que pode ser
diferenciado do valor em branco com confiabilidade foi de 0,20 g. A
Figura S1 também mostra a região com os sinais mais influenciados
pelos ruídos dos equipamentos. Além disso, após 0,67 g, o valor
mínimo de dispersão foi alcançado em relação à linha de tendência
desenhada (Figura S2, seção SI).
Machine Translated by Google

Vol. 32, nº 7, 2021 Ribeiro e cols. 1409

As magnitudes finais de LOD e LOQ foram obtidas quando
amostras sextuplicadas, com valores de 0,20 e 0,67 g, foram
analisadas resultando em RSD de 7,46 e 2,67%, respectivamente.
Além disso, o LOQ apresentou boa precisão com 98% de
recuperação, o que atende aos requisitos do INMETRO
(98-102%).28
Linearidade e faixa de trabalho linear
A faixa de trabalho linear foi construída após investigar a curva
analítica preliminar (subseção “Linearidade e faixa de trabalho
linear” na seção Experimental) e determinada usando o LOQ e o
LOD. Vários espectros foram adquiridos usando diferentes
quantidades de óleo, desde o LOD até a saturação do equipamento
(Figura S2).
Um total de 39 pontos foram medidos e todas as amostras foram
preparadas e analisadas em triplicata. Assim, as curvas de
calibração utilizadas para avaliação do teor de óleo da castanha in
natura variaram de 0,67 a 25,09 ge seus desempenhos analíticos
foram assegurados pela investigação dos parâmetros de validação.
A qualidade dos dados usados para
A construção da curva analítica foi verificada pela ANOVA, que
mostrou uma boa correlação dos resultados e a característica
normal da distribuição dos dados pela análise dos resíduos do
histograma (Figura S3, seção SI). A análise do gráfico residual
(valores previstos versus valores reais) revelou o caráter aleatório
dos dados, o que está de acordo com os requisitos do INMETRO
(Figura S4, seção SI).
A linearidade da curva analítica foi então confirmada (coeficiente
de determinação, R2 = 0,9993) sem presença de outliers (Figura
S5, seção SI).
Repetibilidade
Os valores de RSD encontrados no ensaio de repetibilidade
do método foram inferiores a 5%, conforme exigido pelo
INMETRO.28 Além disso, o teste HORRAT apresentou valores
inferiores a 2% para todos os pontos avaliados (Tabela 1). A curva
analítica construída pelos dois analistas foi reproduzível e
apresentou excelentes coeficientes lineares (Figura S6, seção SI).
Os valores de recuperação analítica foram avaliados para todas
as curvas e estiveram de acordo com a faixa preconizada pelo INMETRO (98-10

Tabela 1. Estudo de repetibilidade realizado por dois analistas em seis dias diferentes usando dois espectrômetros

Normalizado
exp. Massa Ave. o. massa SD Exp. RSD permitido RSD PL / % HORRAT
massa / %

Analista nº 1
3.009 3.004 13 0,04 1.3 ÿ 1,3 3,66 0,65

7.918 8.007 34 0,09 1.2 ÿ 1,3 3.25 0,58

13.103 13.012 57 0,13 1,0 ÿ 1,3 2.86 0,51

17.903 18.015 78 0,13 0,7 ÿ 1,3 2.01 0,36

22.983 23.018 100 0,17 0,7 ÿ 1,3 2.09 0,37

Espectrômetro
nº 1
Analista nº 2
3.009 3.002 13 0,04 1.2 ÿ 1,3 3.37 0,60

7.906 8.004 34 0,04 0,5 ÿ 1,3 1,48 0,26

13.107 13.007 57 0,08 0,6 ÿ 1,3 1,76 0,31

18.076 18.009 79 0,08 0,4 ÿ 1,3 1.17 0,21

22.936 23.012 100 0,05 0,2 ÿ 1,3 0,63 0,11

Analista nº 1
1.877 2.008 10 0,01 0,8 ÿ 1,3 2.14 0,38

6.052 6.023 34 0,00 0,1 ÿ 1,3 0,15 0,03

8.135 8.031 45 0,00 0,0 ÿ 1,3 0,08 0,02

14.245 14.054 80 0,01 0,0 ÿ 1,3 0,14 0,02

17.885 18.067 100 0,04 0,2 ÿ 1,3 0,61 0,11

Espectrômetro
nº 2
Analista nº 2
1.904 2.034 11 0,01 0,5 ÿ 1,3 1.35 0,24

6.079 6.053 34 0,00 0,0 ÿ 1,3 0,02 0,00

8.176 8.063 46 0,01 0,1 ÿ 1,3 0,17 0,03

14.299 14.087 80 0,01 0,1 ÿ 1,3 0,28 0,05

17.925 18.103 100 0,00 0,0 ÿ 1,3 0,06 0,01

exp. massa: massa experimental média; ave. o. massa: massa teórica média; DP: desvio padrão; Exp. RSD: desvio padrão relativo experimental; RSD permitido: desvio padrão relativo
permitido; PL: limite de precisão; HORRAT: valor encontrado usando a equação 5.
Machine Translated by Google

1410 Desenvolvimento de um Método TD-NMR para Monitorar o Teor de Óleo de Castanha do Brasil J. Braz. Chem. Sociedade

Precisão intermediária 70,13 ± 4,15% com as quantidades de óleo variando de 61,35 a

As curvas de precisão intermediária mostraram-se satisfatórias 75,68%. Como mostrado, esses resultados são bastante
valores Spi (TO) para intra e interdias, com melhores resultados semelhantes e dão uma boa indicação da robustez do método.
encontrado para o último. Nenhum outlier foi encontrado, como pode ser visto

na Figura S7 (seção SI). Os parâmetros de aceitabilidade Tabela 3. Teores de óleo de castanha-do-brasil determinados por dois analistas em
diferentes espectrômetros usando o método recém-desenvolvido
calculados estão descritos na Tabela 2. Além disso, a equivalência
estatística das curvas analíticas construídas para ambos os
Teor de óleo / %
analistas e em dias diferentes foi confirmada por ANOVA,
Amostra Analista nº 1 e Analista nº 2 e
comprovando que o método desenvolvido tem boa precisão e
equipamento nº 1 equipamento nº 2
exatidão mesmo quando reproduzido por diferentes operadores 1 69,39 71.07
(Figura S8, seção SI). 2 75.07 71,94

3 62,28 66,52
Tabela 2. Parâmetros de aceitabilidade calculados para as análises intra e interdias.
4 65,86 72,74
Os experimentos foram realizados em dois espectrômetros
5 69,41 75,49

Massa média / g Spi (PARA)

/% PL / % 6 70,90 67,34

Durante o dia 7 69.03 68.19

3.003 0,4 1.3 8 56,59 66,99

8.006 0,3 0,7 9 66,91 65.04

13.009 0,4 1.1 10 66,86 73,79

18.012 0,4 1.1 11 71,43 61,35

23.015 0,3 0,9 12 63,87 75,68

Espectrômetro
nº 1
Inter-day 13 67,99 69,32
3.003 1.2 3.4 14 68,30 72,68
8.006 0,6 1.7 15 60.07 73,75
13.009 0,8 2.2 66,93 70.13
Média
18.012 0,7 2.0 RSD 4,69 4.15
23.015 0,6 1.7 RSD: desvio padrão relativo.

Durante o dia

2.016 0,5 1.3

O desempenho do método TD-NMR foi comparado com a
6.037 0,2 0,5
extração Soxhlet convencional, que é um método conhecido
8.048 0,1 0,4
destrutivo, demorado e trabalhoso. Além disso, a extração Soxhlet
14.074 0,1 0,3
requer a determinação do tempo para a extração exaustiva. Por
18.091 0,1 0,4 isso, foram avaliados três tempos de extração (6, 8 e 10 h).
Espectrômetro
nº 2
Inter-day ANOVA dos teores de óleo obtidos da extração Soxhlet em três
2.015 0,5 1.3

6.035 0,2 0,5 tempos diferentes mostraram que não há diferença estatisticamente
8.044 0,2 0,5 significativa entre os tempos de extração (Figura S9, seção SI).
14.064 0,2 0,4 Portanto, a média geral do teor de óleo obtido pelo método Soxhlet
18.079 0,2 0,5 foi de 55,2 ± 5,0%.
Spi (TO): valor encontrado pela equação 3; PL: limite de precisão. Os diferentes resultados encontrados pelas duas abordagens
podem ser consequência da extração incompleta de lipídios pelo
Aplicação do método método de Soxhlet. Para confirmar essa hipótese, o teor de óleo
de tortas (resíduos de castanha do Pará), salvos após a extração
As intensidades de sinal da castanha-do-brasil foram exaustiva, foram analisados via TD-NMR, mostrando um valor
interpoladas na curva analítica para obtenção de seus teores de médio de 14,9 ± 6,4% (Figura S10, seção SI). Esse resultado
óleo. A Tabela 3 apresenta os resultados de dois conjuntos de mostrou que a porção lipídica retida na torta é significativa e os
amostras analisados em dois laboratórios. Para o analista nº 1 e teores de óleo determinados pelo método Soxhlet foram
espectrômetro nº 1 o teor médio de óleo foi de 66,93 ± 4,69% com subestimados. Quando os valores de teor de óleo encontrados
valores variando de 56,59 a 75,07%, enquanto para o analista nº por extração exaustiva foram adicionados ao valor de óleo de
2 e espectrômetro nº 2 o valor médio informado foi resíduos de castanha do Pará
Machine Translated by Google
Vol. 32, nº 7, 2021 Ribeiro e cols.
de 70,2 ± 6,1% foi encontrado, o que é estaticamente igual aos
resultados adquiridos pelo método TD-NMR, teste T, p < 0,05 (Figura
S11, seção SI). Niu et al.32 compararam o desempenho do método
TD-NMR e da extração Soxhlet para determinar o teor de óleo em
Sacha inchi. Maior precisão e eficiência foram observadas quando
TD-NMR foi usado. O método Soxhlet requer várias etapas (por
exemplo, remoção de solvente e pesagem do óleo extraído) e isso
pode contribuir para discordâncias entre os resultados.
Quantidades de óleo de castanha do Brasil obtidas pelo método TD-NMR
reproduziu a tendência descrita na literatura, que por sua vez variou
entre 60-70%.3,10,11,15 No entanto, o presente estudo relata a
primeira quantificação de óleo diretamente da castanha-do-pará.
Conclusões
O método TD-NMR provou ser uma melhoria na análise tradicional
do teor de óleo de castanha do Brasil. O TD-NMR não requer extração
usando solventes orgânicos agressivos e pode ser realizado em um
tempo menor. Este método foi validado com base no DOQ-
CGCRE-008, e os resultados encontrados ao longo do processo de
validação atendem aos requisitos do INMETRO. A aplicação do
método foi realizada em dois laboratórios (equipamentos diferentes)
e levou a valores semelhantes de teores de óleo: 66,93 ± 4,69 e
70,13 ± 4,15%, para o laboratório 1 e 2, respectivamente. Esses
valores foram superiores aos encontrados quando se utilizou a
extração convencional, o que evidencia a desvantagem desse método.
A simplicidade e a possibilidade de automação da espectroscopia TD-
NMR tornam essa abordagem bastante promissora para o
monitoramento in situ do teor de óleo da castanha-do-pará ao longo
da cadeia produtiva, o que pode ajudar a garantir a qualidade do
produto.
Informação suplementar
Dados complementares estão disponíveis gratuitamente em http://
jbcs.sbq.org.br em arquivo PDF.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer à Coordenação de
Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), à
Financiadora de Estudos de Projetos e Programas (FINEP) e ao
Centro Analítico da UFAM pelo apoio financeiro, bolsas de estudo e
infraestrutura, e ao Dr. , pela leitura crítica e revisão do manuscrito, e
Katlin Suellen Rech, pela concepção artística do resumo gráfico.
1411
Contribuições do autor
Úrsula A. Ribeiro foi responsável pela concepção, metodologia,
validação, investigação, análise formal e redação do projeto original;
Leonardo C. Queiroz pela validação, análise formal e investigação;
Gabriel A. Barros pela investigação; Agide G. Marassi para validação;
André S.
Carvalho pelos recursos; Daniel M. Consalter pelos recursos;
Jaqueline A. Bezerra pela investigação e recursos; Alan DC Santos
pela visualização e redação-revisão e edição; Luiz Alberto Colnago
pela conceituação, recursos, visualização e redação-revisão e edição;
Marcos B. Machado pela supervisão, redação-revisão e edição,
análise formal, conceituação e metodologia.
Referências
1. Costa, PAD; Ballus, CA; Teixeira-Filho, J.; Godoy, HT;
Alimentos Res. Int. 2010, 43, 1603.
2. Manual de Segurança e Qualidade para a Cultura da Castanha
do-Brasil; Embrapa Informação Tecnológica: Brasília, 2004,
disponível em https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/
item/18218/1/MANUALSEGURANCAQUALIDADEParaa
culturadacastanhadoBrasil.pdf, acessado em março de 2021.
3. Freitas-Silva, O.; Venâncio, A.; Alimentos Res. Int. 2011, 44, 1434.
4. Pacheco, AM; Scussel, VM; Castanha do Brasil-da Floresta
Tropical ao Consumidor; Editoração: Florianópolis, Brasil, 2006.
5. Souza, MLD; Menezes, HCD; Ciência Alimentar. Tecnol. 2004,
24, 120.
6. Arrus, K.; Branco, G.; Abramson, D.; Claro, R.; Holley, RA;
J. Stored Prod. Res. 2005, 41, 513.
7. União Internacional para a Conservação da Natureza (IUCN); O
Lista Vermelha de Espécies Ameaçadas da IUNC, versão 2020.1, disponível
em https://www.iucnredlist.org/species/32986/9741363,
acessado em março de 2021.
8. Rodrigues, JE; Araújo, ME; Azevedo, FFM; Machado,
NT; J. Supercrítico. Fluidos 2005, 34, 223.
9. Holÿapek, M.; Jandera, P.; Zderadiÿka, P.; Hrubá, L.; j.
Cromatogr. A 2003, 1010, 195.
10. Santos, OV; Corrêa, NCF; Carvalho, RN; Costa, CE
F.; França, LFF; Lannes, SCS; Alimentos Res. Int. 2013, 51,
841.
11. Yang, J.; LWT-Food Sci. Tecnol. 2009, 42, 1573.
12. Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA);
Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 270, de 22/09/2005,
disponível em bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/anvisa/2005/
rdc0270_22_09_2005.html#:~:text=Regulamento%20
Técnico%20de%20Procedimentos%20Operacionais,
Brasília%2C%20DF%2C%2006%20nov, acessado em março
2021.
Machine Translated by Google

1412 Desenvolvimento de um Método TD-NMR para Monitorar o Teor de Óleo de Castanha do Brasil J. Braz. Chem. Sociedade

13. Ramalho, VC; Jorge, N.; Quim. Nova 2006, 29, 755. 25. Pedersen, HT; Munck, L.; Engelsen, SB; Geléia. Petróleo Chem.

14. ISO 10565:1998: Oleaginosas - Determinação Simultânea de Óleo Sociedade 2000, 77, 1069.

e conteúdo de água-método usando pulso magnético nuclear 26. da Rocha, G.; Colnago, LA; Moraes, TB; Zagonel, GF;

Espectrometria de ressonância, ISO: Genebra, 1998. de Muniz, GIB; Peralta-Zamora, PG; Barison, A.; Energia

15. Zanqui, AB; da Silva, CM; Ressutte, JB; de Morais, DR; Combustíveis 2017, 31, 5120.

Santos, JM; Eberlin, MN; Cardozo-Filho, L.; Visentainer, J. 27. Santos, ONA; Folegatti, MV; Dutra, LM; Andrade, IP
V.; Gomes, STM; Matsushita, M.; J. Braz. Chem. Sociedade 2020, S.; Fanaya Jr., ED; Lena, BP; Barison, A.; Santos, ADC;
31, 603. Ind. Culturas Prod. 2017, 109, 918.

16. Colnago, LA; Moraes, TB; Monaretto, T.; Andrade, DF 28. Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade

Em Ressonância Magnética na Ciência Alimentar: Definindo Alimentos por Industrial (INMETRO); DOQ-CGCRE-008, Orientações sobre

Ressonância magnética; Capozzi, F.; Laghi, L.; Belton, PS, eds.; Validação de Métodos Analíticos, INMETRO: Rio de Janeiro,

The Royal Society of Chemistry: Londres, Reino Unido, 2015, p. 1-16. 2016, disponível em http://www.inmetro.gov.br/Sidoq/Arquivos/

17. Santos, PM; Corrêa, CC; Forato, LA; Túlio, RR; Cruz, Cgcre/DOQ/DOQ-Cgcre-8_05.pdf, acessado em março de 2021.

GM; Colnago, LA; Controle Alimentar 2014, 38, 204. 29. Minitab® 18.1; Minitab Inc., State College, PA, EUA, 2017.
18. Castell-Palou, A.; Rosselló, C.; Femenia, A.; Bom, J.; Simal, 30. Associação dos Químicos Agropecuários Oficiais (AOAC); AOAC

S.; J. Food Eng. 2011, 104, 525. Manual do Programa de Métodos Verificados por Pares sobre Políticas e
19. Ribeiro, ROR; Mársico, ET; Carneiro, CS; Monteiro, M. Procedimentos; AOAC Internacional: Rockville, 1998, disponível

LG; Conte Jr., CA; Mano, S.; de Jesus, EFO; LWT-Alimentos em https://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.
ciência Tecnol. 2014, 55, 90. 196.7223&rep=rep1&type=pdf, acessado em março de 2021.

20. Salomonsen, T.; Sejersen, MT; Viereck, N.; Ipsen, R.; 31. Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade

Engelsen, SB; Int. Dairy J. 2007, 17, 294. Industrial (INMETRO); Vocabulário Internacional de Metrologia: Conceitos

21. Zhang, Q.; Saleh, ASM; Shen, Q.; Tecnologia de Bioprocessos Alimentares. Básicos e Gerais e Termos Associados, 3ª ed.;
2013, 6, 2562. INMETRO: Duque de Caxias, 2012, disponível em https://www.
22. Todt, H.; Guthausen, G.; Burk, W.; Schmalbein, D.; Kamlowski, bipm.org/utils/common/documents/jcgm/JCGM_200_2012.
A.; Química Alimentar. 2006, 96, 436. pdf, acessado em março de 2021.

23. Flores, DWM; Colnago, LA; Ferreira, MD; Spoto, M. 32. Niu, L.; Li, J.; Chen, M.-S.; Xu, Z.-F.; Ind. Culturas Prod. 2014,
AF; Microchem. J. 2016, 128, 113. 56, 187.

24. Garcia, RHS; Filgueiras, JG; de Azevedo, ER; Colnago,

AL; Nucl. de estado sólido. Magn. Resson. 2019, 104, 101619. Enviado: 9 de dezembro de 2020

Publicado online: 23 de março de 2021

Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Creative Commons Attribution License.