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Os genomas mitocondriais de morcegos orelhudos,Macrotus waterhousiie

Macrotus californicus(Chiroptera: Phyllostomidae: Macrotinae)
Karen J. Vargas-Trejoa, Jorge Ortegab, Yocelyn T. Gutiérrez-Guerreroc, Edgar G. Gutiérrezb, J.
Antonio Baezad,e,f,*
aLicenciatura en Biología, Facultad de Estudios Superiores Iztacala, Universidad Nacional Autónoma de México, Av De Los Barrios 1, Los Reyes Ixtacala, Hab Los Reyes
Ixtacala Barrio de los Árboles/Barrio de los Héroes, 54090 Tlalnepantla de Baz, México
bLaboratorio de Bioconservación y Manejo, Posgrado en Ciencias Químico Biológicas, Departamento de Zoología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto
Politécnico Nacional, Prolongación de Carpio y Plan de Ayala S/N, Col. Sto. Tomás, 11340 Ciudad de México, México
cMuseu de Zoologia de Vertebrados, Departamento de Biologia Integrativa, Universidade da Califórnia Berkeley, Berkeley, CA, EUA
dDepartamento de Ciências Biológicas, Clemson University, 132 Long Hall, Clemson, SC 29634, EUA
eSmithsonianMarine Station em Fort Pierce, 701 Seaway Drive, Fort Pierce, FL 34949, EUA
fDepartamento de Biología Marina, Facultad de Ciencias del Mar, Universidad Católica del Norte, Larrondo 1281, Coquimbo, Chile

ARTIGOINFO ABSTRATO

Editado por Eric Alexander Lewallen Na família rica em espécies Phyllostomidae, o gêneroMacrotus('morcegos orelhudos) contém apenas duas espécies;
Macrotus waterhousii, distribuído no oeste, centro e sul do México, Guatemala e algumas ilhas do Caribe, eMacrotus
Palavras-chave: californicus, distribuído no sudoeste dos EUA, na península de Baja California e no estado de Sonora no México.
genoma mitocondrial Neste estudo, sequenciamos e montamos o genoma mitocondrial deMacrotus waterhousiie caracterizou em
Macrotus
detalhes este genoma e o do congenéricoM. californicus. Em seguida, examinamos a posição filogenética de
Filogenética
Macrotusna família Phyllostomidae com base em genes codificadores de proteínas (PCGs). Os genomas
Phyllostomidae
PCGs mitocondriais ricos em AT deM. waterhousiieM. californicustêm 16.792 e 16.691 pb de comprimento,
Região de controle respectivamente, e cada um codifica 13 PCGs, 22 genes de tRNA, 2 genes de rRNA e uma região de controle não
codificante putativa de 1.336 e 1.232 pb de comprimento, respectivamente. Sintenia mitocondrial emMacrotusé
idêntico ao relatado antes para todas as outras espécies cofamiliares. Nas duas espécies estudadas, todos os tRNAs
exibem uma estrutura secundária 'típica' de trevo, com exceção detrnS1, que não possui o braço D. Uma análise de
pressão seletiva demonstrou que todos os PCGs estão sob seleção purificadora. O CR das duas espécies apresenta
três domínios previamente relatados em outros mamíferos, incluindo morcegos: seqüências associadas terminais
estendidas (ETAS), central (CD) e bloco de seqüência conservada (CSB). Uma análise filogenética baseada nos 13
PCGs mitocondriais demonstrou queMacrotusé monofilético e a subfamília Macrotinae é um grupo irmão de todos
os filostomídeos remanescentes em nossa análise, exceto Micronycterinae. A montagem e análise detalhada desses
genomas mitocondriais representa um passo adiante para continuar melhorando a compreensão das relações
filogenéticas dentro da família rica em espécies Phyllostomidae.

Abreviaturas:PCGs, Genes Codificadores de Proteínas; tRNA, RNA de transferência; rRNA, RNA ribossômico; CR, Região de Controle; ETAS, Sequências Associadas Terminais Estendidas; CD, Central;
CSB, Bloco de Sequência Conservada;trnA, Transferir RNA especificando Alanina;trnC, Transferir RNA especificando cisteína;trnD, Transferir RNA especificando ácido aspártico; trnE, Transferir RNA
especificando o ácido glutâmico;trnF, Transferir RNA especificando Fenilalanina;trnG, Transferir RNA especificando Glicina;trnH, Transferir RNA especificando histidina;trnI, Transferir RNA especificando
Isoleucina;trnK, Transferir RNA especificando Lisina;trnL1, ARN de transferência especificando Leucina 1;trnL2, ARN de transferência especificando Leucina 2;trnM, Metionina de especificação de RNA de
transferência;trnN, Transferir RNA especificando Asparagina;trnP, Transferir RNA especificando Prolina;trnQ, Transferir RNA especificando Glutamina;trnR, Transferir RNA especificando Arginina;trnS1,
ARN de transferência especificando Serina 1;trnS2, ARN de transferência especificando Serina 2;trnT, Transferir RNA especificando triptofano;trnV, Transferir RNA especificando Valina;trnY, Transferir
RNA especificando Tirosina;rrnL, Grande subunidade ribossômica do RNA;rrnS, RNA de subunidade ribossômica pequena; atp6, subunidade 6 da ATP sintase;atp8, subunidade 8 da ATP sintase;espiga,
citocromob;cox1, subunidade 1 da citocromo oxidase;cox2, subunidade 2 da citocromo oxidase;cox3, subunidade 3 da citocromo oxidase;nad1, subunidade 1 da NADH desidrogenase;nad2, subunidade
2 da NADH desidrogenase;nad3, subunidade 3 da NADH desidrogenase;nad4, subunidade 4 da NADH desidrogenase;nad4l, subunidade 4L da NADH desidrogenase;nad5, subunidade 5 da NADH
desidrogenase;nad6, subunidade 6 da NADH desidrogenase.
* Autor correspondente: Departamento de Ciências Biológicas, Clemson University, 132 Long Hall, Clemson, Carolina do Sul, EUA.
Endereço de e-mail:artibeus2@aol.com (J. Ortega),jbaezam@clemson.edu (JA Baeza).

https://doi.org/10.1016/j.gene.2023.147295
Recebido em 6 de outubro de 2022; Recebido no formulário revisado em 25 de janeiro de 2023; Aceito em 15 de fevereiro de 2023
Disponível online em 18 de fevereiro de 2023
0378-1119/© 2023 Elsevier BV Todos os direitos reservados.
KJ Vargas-Trejo et al.
1. Introdução
A família Phyllostomidae, endêmica dos neotrópicos, é uma das mais ricas em
espécies e ecologicamente diversas entre os morcegos (Chiroptera) (Simons, 2005
). O principal traço morfológico que define esta família é a presença de uma “folha
nasal”, uma protuberância carnuda no topo do nariz que varia muito de tamanho
de uma espécie para outra; em algumas espécies mede o mesmo comprimento da
cabeça, enquanto em outras é quase imperceptível, e mesmo em outras espécies
é nula (Rojas e outros, 1999). A família exibe uma disparidade impressionante em
termos de tamanho do corpo, coloração, estratégias de alimentação, abrigos e
estrutura social, entre muitos outros traços ecológicos, comportamentais e
fisiológicos.Datzamann et al., 2010; Medina Martín, 2017; Mejía-Quintanilla et al.,
2020; Turcios-Casco et al., 2020).
A família consiste em 59 gêneros, incluindo o gêneroMacrotusque contém
duas espécies descritas até o momento:Macrotus waterhousiidistribuído no oeste,
centro e sul do México, Guatemala e algumas ilhas do Caribe eMacrotus
californicusdistribuído no sudoeste dos EUA, e na Península de Baja California e no
estado de Sonora no México (Simons, 2005). O “morcego orelhudo mexicano”M.
waterhousiié um morcego de tamanho médio, com pelagem no dorso que pode
variar do cinza claro ao marrom escuro e barriga acastanhada a marrom (López &
Medellín, 2005), um longo tragus pontudo, um largo uropatágio que envolve a
cauda e se estende além da membrana, orelhas unidas por uma dobra de pele e
uma folha nasal reta e lanceolada (López & Medellín, 2005).Macrotus waterhousii
habita florestas tropicais decíduas, de pinheiros e subtropicais. Encontra-se desde
o nível do mar até 2.650 m de altitude (Núñez, 2005) e é freqüentemente
encontrado em cavernas não habitadas por outros morcegos (Silva-Toboada, 1979
). Macrotus waterhousiialimentam-se principalmente de insetos (ou seja,
ortópteros, besouros e mariposas, entre outros -Núñez, 2005), embora
ocasionalmente consumam frutas (Baker e outros, 1979).Macrotus waterhousiié
listado pela IUCN como uma espécie de menor preocupação (IUCN, 2021). Por sua
vez, o “morcego orelhudo da Califórnia”Macrotus californicustambém é um
morcego de tamanho médio, o pelo do dorso varia do cinza claro ao marrom
escuro, e no ventre costuma ser prateado (Baker e outros, 1979). Suas orelhas são
grandes, possuem um longo trago pontiagudo, um largo uropatágio que envolve
a cauda e se estende além da membrana, e uma folha nasal reta e lanceolada (
Téllez-Girón & López-Forment, 2005).Macrotus californicushabita matagais nos
desertos de Sonora e Mojave, na região do rio Colorado no sul da Califórnia, em
Nevada e Arizona e em todo o oeste do México (BCI, 2022). Encontra-se desde o
nível do mar até 1.000 m de altitude (Findley & Jones, 1965) e se refugia em
cavernas, minas e túneis (Téllez-Girón & López-Forment, 2005). Essa espécie se
alimenta principalmente das partes moles de insetos noturnos, como grilos,
mariposas, besouros e cicadáceas, que capturam no solo ou em voo.
Ocasionalmente, morcegos foram observados consumindo frutas (Corbet e Harris,
1991; Téllez-Girón & López-Forment, 2005).Macrotus californicusé listado pela
IUCN como uma espécie de menor preocupação (IUCN, 2021). Importante,
M. waterhousiieM. californicusexibem considerável similaridade morfológica que
levou a confusão taxonômica no passado. Na verdade, eles foram considerados
sinônimos até 1979, quando com base em caracteres cromossômicos, foram
reconhecidos como duas espécies diferentes (Salão, 1981).
Em geral, existem poucos estudos ecológicos, populacionais e genéticos
com foco no gêneroMacrotus(Sanchez & Wilson, 2016; Luviano, 2017). Este
estudo faz parte de um grande esforço para gerar recursos genômicos para
morcegos filostomídeos que habitam o sul da América do Norte, incluindo o
país megadiverso do México. Neste estudo, montamos o genoma
mitocondrial completo deM. waterhousiie caracterizou-o em detalhes
seguindo recomendações emBaeza et ai. (2022). Além disso, um genoma
mitocondrial pertencente aMacrotus californicus que está disponível no
GenBank, mas que não tem nenhuma publicação associada, foi anotada
novamente, caracterizada em detalhes e comparada com a de
M. waterhousii. Especificamente, examinamos e comparamos a composição de
nucleotídeos de todos os genomas mitocondriais e o perfil de uso de códons e
restrições seletivas em genes codificadores de proteínas (PCG). Além disso,
exploramos as estruturas secundárias para cada gene de tRNA e examinamos
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a organização da suposta região de controle. Finalmente, com base nos
PCGs mitocondriais, examinamos a posição filogenética do gênero Macrotus
entre outros membros da família rica em espécies Phyllostomidae. Os
recursos genômicos gerados neste estudo estão disponíveis para pesquisas
futuras com foco, entre outros, no entendimento das relações filogenéticas
dentro da família Phyllostomidae.
2. Material e métodos
2.1. Coleta de amostras, extração de DNA, preparação de biblioteca e
sequenciamento
Uma amostra de tecido deM. waterhousii(NCBI:txid124750), fixado em
etanol 95%, foi doado pelo Museo de Zoología 'Alfonso L. Herrera',
Faculdade de Ciências, Universidade Nacional Autônoma do México, Cidade
do México, México. A amostra foi coletada no estado de Guerrero, México.
Especificamente, em Taxco de Alarcón, cava da mina “El Fraile”. O indivíduo
foi identificado pelo pessoal do Museo de Zoologia, Universidade Nacional
Autônoma do México (detalhes do comprovante do espécime, coleção:
GHC033, número de catálogo: 12465). O DNA total foi isolado usando o
protocolo Phenol-Chloroform e o DNA Blood and Tissue Kit (Qiagen)
seguindo o protocolo fornecido pelo fabricante, a amostra de DNA foi
quantificada usando Qubit (13.710 ng/ul) e avaliamos a qualidade usando
nanodrop (A260/ 280>1.8) (Thermofisher). As bibliotecas de espingardas de
extremidades pareadas (PE) foram sequenciadas em um sequenciador de
plataforma Illumina HiSeq 4000 150. Um total de 375.623.209 pares de
leituras foram gerados e disponibilizados pela instalação de
sequenciamento no formato FASTQ, e todas essas leituras (disponíveis no
repositório de dados NCBI SRA sob o número de acesso SRR9087860) foram
usadas para montar de novo o genoma mitocondrial deM. waterhousii.
2.2. Montagem do genoma mitocondrial
O genoma mitocondrial deM. waterhousiifoi montadode novo usando o
pipeline GetOrganelle v1.6.4 (Jin e outros, 2020). O genoma mitocondrial de
M. californicusdisponível no banco de dados GenBank (NC_037136.1) foi
usado como seed. Para a execução da sequência, um tamanho de k-mer =39
foi usado.
2.3. Anotação, curadoria manual e caracterização do genoma
mitocondrial.
A anotação do genoma mitocondrial montado foi realizada nos
servidores web MITOS (https://mitos.bioinf.uni-leipzig.de/index.py
- Bernt e outros, 2013) e MITOS2 (https://mitos2.bioinf.uni-leipzig. de/index.py-
Donath e outros, 2019) usando o código genético dos vertebrados. A curadoria
das anotações e as correções dos códons de início/parada foram realizadas
manualmente, usando a ferramenta ExPASy Translate Tool no servidor Web
ExPASy (https://web.expasy.org/translate/-Artimo et al., 2012) e MEGA X (Kumar e
outros, 2018). Mitogenomas de outros filostomídeos foram usados como
referência para correções de códons start/stop (Wang e Yang, 2012). A
visualização curada do mitogenoma foi realizada com o servidor web GenomeVx (
https://wolfe.ucd.ie/GenomeVx/-Conant & Wolfe, 2008).
Uma análise da composição de nucleotídeos e perfis de uso de códons de
genes codificadores de proteínas (PCG) foi realizada. A composição de
nucleotídeos foi calculada no MEGA X, enquanto o perfil de uso de códons para
PCGs foi estimado usando o código genético de vertebrados no servidor web
Codon Usage (https://www.bioinformatics.org/sms2/codon_usage.html). Além
disso, as frequências de aminoácidos e RSCU (Relative Synonymous Codon Usage)
foram calculadas sobre todo o mitogenoma no servidor web EZmito (https://
ezmito.unisi.it/ezcodon-Stothard, 2000).
Pressões seletivas em cada PCG mitocondrial foram exploradas.
Estimamos o número de substituições não sinônimas por site não
sinônimo (KA= dN= SA/EUA), o número de substituições sinônimas por
site sinônimo (KS= dS= SS/EUS) e calculou a razão KA/KS(ω) usando o
software KaKs_calculator 2.0 (Wang e outros, 2010).
KJ Vargas-Trejo et al. Gene 863 (2023) 147295

Figura 1.A) Representação circular do genoma mitocondrial emMacrotus waterhousii. Crédito da foto: Juan Cruzado Cortés. B) Representação circular do genoma mitocondrial em
Macrotus californicus. Crédito da foto: Alan Harper.

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tabela 1
Arranjo e anotação do genoma mitocondrial completo de A)Macrotus waterhousii(Mw) e B)Macrotus californicus(Mc). CR = Região de Controle. Cont. = Continuidade.

Nome Tipo Começar Parar vertente Comprimento Começar Parar Anticódon Cont.
(pb)

mw Mc mw Mc mw Mc mw Mc mw Mc mw Mc

trnF(ttc) tRNA 1 1 68 68 + 68 68 TTC 0 0

rrnS rRNA 69 69 1036 1035 + 968 967 0 0
trnV(gta) tRNA 1037 1036 1105 1104 + 69 69 GTA −2 0
rrnL rRNA 1104 1105 2676 2665 + 1573 1561 2 2
trnL2(tta) tRNA 2679 2668 2754 2743 + 76 76 TTA 2 2
nad1 PCG 2757 2746 3713 3702 + 957 957 ATG TAA −1 −1
trnI(atc) tRNA 3713 3702 3781 3770 + 69 69 ATC −3 −3
trnQ(caa) tRNA 3779 3768 3851 3840 – 73 73 CAA −1 −1
trnM(atg) tRNA 3851 3840 3919 3908 + 69 69 ATG 0 0
nad2 PCG 3920 3909 4963 4952 + 1044 1044 ATA MARCAÇÃO −2 −2
trnW(tga) tRNA 4962 4951 5029 5019 + 68 69 TGA 17 18
trnA(gca) tRNA 5048 5038 5116 5106 – 69 69 GCA 0 0
trnN(aac) tRNA 5117 5107 5189 5179 – 73 73 AAC 33 33
trnC(tgc) tRNA 5223 5213 5288 5280 – 66 68 TGC 0 0
trnY(tac) tRNA 5289 5281 5354 5346 – 66 66 TAC 1 1
cox1 PCG 5356 5348 6900 6892 + 1545 1545 ATG TAA 0 −3
trnS2(tca) tRNA 6901 6890 6969 6958 – 69 69 TCA 7 7
trnD(gac) tRNA 6977 6966 7043 7032 + 67 67 GAC 0 0
cox2 PCG 7044 7033 7727 7716 + 684 684 ATG MARCAÇÃO TAA 3 3
trnK(aaa) tRNA 7731 7720 7796 7785 + 66 66 AAA 1 1
atp8 PCG 7798 7787 8001 7990 + 204 204 ATG TAA − 43 − 43
atp6 PCG 7959 7948 8639 8628 + 681 681 ATG TAA −1 −1
cox3 PCG 8639 8628 9422 9411 + 784 784 ATG T 0 0
trnG(gga) tRNA 9423 9412 9491 9480 + 69 69 GGA 0 6
nad3 PCG 9492 9487 9839 9828 + 342 342 ATA TAA T 0 0
trnR(cga) tRNA 9840 9829 9907 9896 + 68 68 CGA 0 0
nad4l PCG 9908 9897 10.204 10.193 + 297 297 ATG TAA −7 −7
nad4 PCG 10.198 10.187 11.575 11.564 + 1378 1378 ATG T 0 0
trnH(cac) tRNA 11.576 11.565 11.643 11.632 + 68 68 CAC 0 0
trnS1(agc) tRNA 11.644 11.633 11.703 11.692 + 60 60 CAG 1 14
trnL1(cta) tRNA 11.705 11.707 11.774 11.776 + 70 70 CTA 0 −4
nad5 PCG 11.775 11.773 13.598 13.582 + 1824 1815 ATA TAA − 17 4
nad6 PCG 13.582 13.587 14.106 14.105 – 525 528 ATA ATG TAA 3 3
trnE(gaa) tRNA 14.110 14.109 14.178 14.176 – 69 68 GAA 4 3
espiga PCG 14.183 14.181 15.322 15.320 + 1140 1140 ATG AGA 0 0
trnT(aca) tRNA 15.323 15.321 15.391 15.387 + 69 67 ACA −1 6
trnP(cca) tRNA 15.391 15.394 15.456 15.459 – 66 66 CCA 0 0
CR 15.457 15.460 16.792 16.690 + 1336 1232

O KA/KSA razão é considerada como uma medida das pressões seletivas que
atuam sobre um gene e indica neutralidade quando KA/KS= 1, seleção negativa ou
purificadora quando KA/KS<1, e seleção positiva ou diversificada quando KA/KS>1 (
Wang e outros, 2010). Até o momento, apenas alguns estudos conduziram um KA/
KSanálise de proporção focada em PCGs mitocondriais em morcegos
filostomídeos. O KA/KSvalores paraM. waterhousiiforam baseados em uma
comparação pareada comDesmodus rotunduseEctophylla alba(Gen-Bank:
NC_022423 e NC_022419111, respectivamente). O modelo γ-MYN foi usado
durante os cálculos para contabilizar taxas de mutação variáveis em locais de
sequência usando o software KaKs_Calculator 2.0 (Wang e outros, 2009; Wang e
outros, 2010).
As estruturas secundárias dos genes de tRNA mitocondrial foram
previstas com o programa MiTFi (Jühling et al., 2012) disponível no
MITOS2 e visualizado com o servidor web FORNA (https://rna.tbi.
univie.ac.at/forna-Kerpedjiev et al., 2015).
A região de controle foi estudada com mais detalhes; sua composição de
nucleotídeos foi calculada no MEGA X. Além disso, a presença de
microssatélites nesta região foi detectada usando o servidor web
Microsatélite Repeats Finder (https://insilico.ehu.es/mini_tools/microsate
llites/-Bikandi e outros, 2004). Em seguida, a presença de repetições em
tandem foi determinada usando o servidor web Tandem Repeats Finder (
https://tandem.bu.edu/trf/trf.html-Benson, 1999) e, finalmente, para prever
a estrutura secundária dessa região e identificar estruturas em gancho, a
estrutura de RNA do servidor web (https://rna.urmc.rochester. edu/
RNAstructureWeb/Servers/Predict1/Predict1.html-Bellaousov et al., 2013) foi
usado.
2.4. Filomitogenômica da família Phyllostomidae
A posição filogenética deMacrotusem relação a outros representantes da
família Phyllostomidae foi examinado usando o genoma mitocondrial recém-
montado mais os genomas mitocondriais de 38 espécies pertencentes à família
Phyllostomidae, disponíveis no banco de dados Gen-Bank. Usamos o pipeline
MitoPhAST (Tan e outros, 2016) para inferência filogenética. Como grupos
externos para realizar a análise filogenética, incluímos uma espécie pertencente à
família Mormoopidae (Pteronotus rubiginosus), uma espécie pertencente à família
Mystacinidae (Mystacina tuberculata) e uma espécie pertencente à família
Noctilionidae (Noctilio leporinus) (Tabela Suplementar 1). O MitoPhAST primeiro
extraiu todas as 13 sequências de nucleotídeos PCG das espécies disponíveis no
GenBank e quaisquer outras fornecidas pelo usuário (ou seja,M. californicus eM.
Waterhousieu). As sequências de nucleotídeos PCG foram então traduzidas para
aminoácidos antes de cada sequência de aminoácidos PCG ser alinhada usando
Clustal Omega (Sievers e Higgins, 2014). Regiões mal alinhadas foram removidas
com trimAl (Capella-Gutiérrez et al., 2009) antes que o conjunto de dados fosse
particionado e os melhores modelos de ajuste de evolução de sequência fossem
selecionados com ProtTest (Abascal e outros, 2005). Finalmente, os alinhamentos
de aminoácidos PCG concatenados e particionados foram usados para realizar
uma busca de árvore filogenética de máxima verossimilhança (ML) no software IQ-
TREE (Nguyen e outros, 2015). A robustez da topologia da árvore ML foi verificada
por 1.000 pseudo-replicações bootstrap da busca da árvore.

4
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mesa 2
Análise de uso de códons de PCGs no genoma mitocondrial deMacrotus waterhousiieMacrotus californicus.

Macrotus waterhousii Macrotus californicus

Aminoácido códon Número /1000 Fração Número /1000 Fração

ala GCG 2 0,53 0,01 8 2.11 0,03

ala GCA 74 19h47 0,32 79 20.86 0,33
ala GCT 73 19.21 0,31 60 15.84 0,25
ala GCC 85 22.36 0,36 91 24.03 0,38
Cys TGT 10 2.63 0,40 15 3,96 0,68
Cys TGC 15 3,95 0,60 7 1,85 0,32
asp GAT 34 8,95 0,55 30 7,92 0,48
asp GAC 28 7.37 0,45 32 8.45 0,52
cola MORDAÇA 20 5.36 0,21 16 4.22 0,17
cola GAA 75 19.73 0,79 78 20,60 0,83
Phe TTT 90 23.68 0,41 107 28.25 0,48
Phe TTC 132 34,73 0,59 115 30.37 0,52
Gly GGG 28 7.37 0,13 34 8,98 0,15
Gly GGA 90 23.68 0,42 82 21.65 0,37
Gly GGT 41 10.79 0,19 43 11h35 0,19
Gly GGC 54 14.21 0,25 63 16.64 0,28
Dele GATO 44 11.58 0,46 48 12.67 0,48
Dele CAC 52 13.68 0,54 52 13.73 0,52
ilha ATT 162 42,62 0,50 185 48,5 0,58
ilha ATC 164 43.15 0,50 133 35.12 0,42
Lys AAG 9 2.37 0,10 12 3.17 0,13
Lys AAA 83 21.84 0,90 82 21.65 0,87
leu TTG 13 3.42 0,02 21 5,55 0,03
leu TTA 119 31.31 0,19 149 39.22 0,24
leu CTG 32 8.42 0,05 30 7,92 0,05
leu CTA 307 80,77 0,49 265 69,98 0,42
leu CTT 66 17.36 0,11 84 22.18 0,13
leu CTC 89 23.41 0,14 78 20,60 0,12
Conheceu ATG 45 11.84 0,18 33 8.71 0,14
Conheceu ATA 199 52,35 0,82 204 53,87 0,86
Asn AAT 61 16.05 0,39 65 17.16 0,42
Asn AAC 95 24,99 0,61 89 23h50 0,58
Pró CCG 3 0,79 0,02 1 0,26 0
Pró CCA 65 17.10 0,33 66 17.43 0,33
Pró CCT 43 11.31 0,22 59 15.58 0,29
Pró CCC 85 22.36 0,43 77 20.33 0,38
Gln CAG 12 3.16 0,14 11 2,90 0,13
Gln CAA 72 18.94 0,86 72 19.01 0,87
arg CGG 1 0,26 0,01 1 0,26 0,02
arg CGA 38 10 0,57 38 10.03 0,58
arg CGT 9 2.37 0,13 12 3.17 0,18
arg CGC 19 5 0,28 15 3,96 0,23
Ser AGT 20 5.26 0,07 17 4,49 0,06
Ser CAG 37 9.73 0,13 35 9.24 0,13
Ser TCG 5 1.32 0,02 5 1.32 0,02
Ser TCA 79 20.78 0,28 70 18h48 0,26
Ser TCT 72 18.94 0,25 56 14.79 0,21
Ser TCC 74 19h47 0,26 85 22h45 0,32
thr ACG 11 2.89 0,03 13 3.43 0,04
thr ACA 153 40,25 0,44 150 39,61 0,43
thr AGIR 96 25.26 0,28 88 23.24 0,25
thr ACC 84 22.10 0,24 101 26.67 0,29
Val GTG 14 3,68 0,08 23 6.07 0,12
Val GTA 99 26.05 0,54 92 24.29 0,48
Val GTT 43 11.31 0,23 38 10.03 0,20
Val GTC 29 7.63 0,16 39 10h30 0,20
viagem TGG 13 3.42 0,13 14 3,70 0,14
viagem TGA 91 23,94 0,88 89 23h50 0,86
Tyr TAT 74 19h47 0,56 66 17.43 0,50
Tyr TAC 58 15.26 0,44 65 17.16 0,50
Fim AGG 0 0 0 0 0 0
Fim AGA 1 0,26 0,09 1 0,26 0,02
Fim MARCAÇÃO 2 0,53 0,18 1 0,26 0,02
Fim TAA 8 2.10 0,73 9 2.37 0,10

3 Resultados e discussão
Os genomas mitocondriais deMacrotus waterhousii(depositado no GenBank
com o número de acesso OP205373) eM. californicustêm um comprimento total
de 16.792 e 16.691 pb, respectivamente. Os dois genomas mitocondriais codificam
37 genes; 13 são genes codificadores de proteínas (PCGs), 22 genes de tRNA e 2
genes de rRNA (rrnS e rrnL), além de um relativamente
região não codificante longa 1.336 e 1.232 pb de comprimento emMacrotus
waterhousii eM. californicus, respectivamente (Figura 1). Nas duas espécies,
a maioria dos genes PCG (nad1, nad2, cox1, cox2, atp8, atp6, cox3, nad3,
nad4l, nad4, nad5, eespiga) e tRNAs (trnF, trnV, trnL2, trnI, trnM, trnW, trnD,
trnK, trnG, trnR, trnH, trnS1, trnL1etrnT) são codificados na fita pesada (H),
com exceção de PCG (nad6) e oito tRNAs (trnQ, trnA, trnN, trnC, trnY, trnS2,
trnEetrnP) que são codificados na cadeia de luz (L)

5
KJ Vargas-Trejo et al.
Figura 2.Análise de pressão seletiva nos PCGs de A)Macrotus waterhousiie B)Macrotus californicus. Relação Ka/Ks para cada PCG.
(tabela 1). Composição gênica e arranjo no genoma mitocondrial deM.
waterhousiieM. californicusé idêntico ao relatado anteriormente para
todas as outras espécies pertencentes à família Phyllostomidae (Pumo
et al., 1998; Botero-Castro et al., 2013; 2018; Vivas-Toro et al., 2021).
Os genomas mitocondriais deM. waterhousiieM. californicussão compactos e
apresentam cinco e seis sobreposições curtas (1-3 pb de comprimento),
respectivamente, entre genes consecutivos. As duas espécies apresentaram três
longas sobreposições, uma de (43 pb) entre os genes (atp8eatp6) e as outras duas
diferiram para cada espécie;M. waterhousiiapresentou uma sobreposição de 17
pb de comprimento entrenad5enad6e outra sobreposição de 7 pb de
comprimento entre os genesnad4lenad4. EmM. californicus, ocorreu uma
sobreposição de 7 pb de comprimento entre os genesnad4lenad4e
6
Gene 863 (2023) 147295
o último tinha 4 pb de comprimento entre os genesnad5enad6. As sobreposições
de genes acima mencionadas são semelhantes àquelas relatadas anteriormente
em outros filostomídeos (Meganathan et al., 2012; Vivas-Toro et al., 2021) (Figura 1
).
A composição de nucleotídeos no genoma mitocondrial de
M. waterhousiié o seguinte: A = 32,4%, T = 27,8%, G = 13,3% e C =
26,5% com teores de A + T e G + C de 60,2% e 39,8%, respectivamente. O
mitogenoma deM. californicusapresenta uma composição de nucleotídeos
semelhante à deM. waterhousii: A = 32,2%, T = 28,1%, G = 13,5% e C = 26,2%;
com um teor de A + T de 60,3% e um teor de C + G de 39,7%. O conteúdo
geral de A + T relatado para ambas as espécies está dentro da faixa
observada anteriormente em outras espécies da família Phyllostomidae (
Meganathan et al., 2012; Botero-Castro et al., 2013).
KJ Vargas-Trejo et al. Gene 863 (2023) 147295

Figura 3.Estrutura secundária dos 22 tRNAs no genoma mitocondrial de A)Macrotus waterhousiie B)Macrotus californicus.

7
KJ Vargas-Trejo et al.
Entre os morcegos pertencentes à família Phyllostomidae,D. rotundus
apresentou o menor teor de A + T (52,3 %), enquanto o maior teor foi
relatado para o morcego branco hondurenho,E. alba(62,2%) (Botero-Castro
et al., 2018; Vivas-Toro et al., 2021) (Tabela Suplementar 1). Da mesma
forma, o teor de G + C nas duas espécies estudadas (M. waterhousii eM.
californicus) está dentro da faixa relatada anteriormente para outros
morcegos filostomídeos (Meganathan et al., 2012; Botero-Castro et al., 2013
). O conteúdo G + C mais alto e mais baixo foi relatado paraD. rotundus
(47,7%) eE. alba(37,8%), respectivamente (Botero-Castro et al., 2018; Vivas-
Toro et al., 2021).
Nos genomas mitocondriais deM. waterhousiieM. californicus, nove (nad1,
cox1, cox2, atp8, atp6, cox3, nad4l, nad4, eespiga) e dez (nad1, cox1, cox2, atp8,
atp6, cox3, nad4l, nad4, nad6, eespiga) PCGs usaram ATG como códon de início,
enquanto os quatro restantes (nad2, nad3, nad5, enad6) e três (nad2,nad3,enad5)
PCGs usaram ATA como códon de início, respectivamente. Nas duas espécies
estudadas, oito PCGs usaram TAA como stop códon e oespigagene usou AGA
como um códon de parada alternativo. Em
M. waterhousii,nad2ecox2usou TAG como um códon de parada ecox3e nad4
exibiram códons de parada incompletos. EmM. californicus, apenasnad2
usou TAG como stop códon e três PCGs (cox3, nad3,enad4) exibiram códons
de parada incompletos (tabela 1).
Nos PGCs deMacrotus waterhousiieMacrotus californicus,cada aminoácido foi
codificado por pelo menos dois códons diferentes. A maioria dos aminoácidos
presentes nas duas espécies apresentou preferência por códons terminados em
adenina e foi detectado um menor uso de aminoácidos terminados em timina,
citosina e guanina. Os códons mais usados em
M. waterhousiieM. californicusforam CTA (Leu, utilizado 307 vezes [80,77 %
do total] e 265 vezes [69,98 % do total], respectivamente), ATA (Met, utilizado
199 vezes [52,35 %] e 204 vezes [ 53,87%], respectivamente), ATC (Ile, usado
164 vezes [43,15%] emM. waterhousii) e ATT (Ile, usado 185 vezes [48,5%]
emM. californicus). Por sua vez, os códons usados com menos frequência
(excluindo os códons de parada) emM. waterhousiiforam CGG (Arg, usado
uma única vez [0,26 % do total]), CGG (Ala, usado 2 vezes [0,53 %]) e CCG
(Pro, usado 3 vezes [0,79 %]) , enquanto emM. californicus,os códons menos
usados foram CCG (Pro usado uma vez, [0,26 %]), CGG (Arg, usado uma vez
[0,26 %]) e TCG (Ser, usado 5 vezes [1,32 %] ) (mesa 2). Nossos resultados são
consistentes com o uso de códons relatados em outros morcegos, como
Sturnira parvidenseEctophylla alba, que, assim como nas espécies do nosso
estudo, apresentam CTA (Leu), ATT (Ile) e ATA (Met) como os códons mais
utilizados. Os códons menos usados na mesma espécie foram CGG (Arg),
TCG (Ser) e CCG (Pro) (Baeza et al., 2022; Vivas-Toro et al., 2021). O uso
desses códons está relacionado à expressão gênica e à eficiência da
tradução, por isso há uma preferência por códons que são traduzidos mais
rapidamente, a fim de reduzir o tempo e o esforço gastos na tradução (
Hanson & Coller, 2018). Fatores evolutivos, como pressões de mutação,
restrições seletivas e deriva genética, são as três principais razões que dão
origem ao viés de uso de códons interespécies.Galtier et al., 2018). O RSCU
observado nos PCGs deMacrotus waterhousiieM. californicusfoi consistente
com os relatados anteriormente para outros morcegos pertencentes às
famílias Phyllostomidae e Vespertilionidae (Meganathan et al., 2012; Vivas-
Toro et al., 2021).
O KA/KSrazões exibidas por todos os PCGs mitocondriais dos dois
morcegos estudados exibiram valores<1, indicando que todos esses genes
estão sob seleção purificadora (todos os valores P<0,05). Os genes com o
menor KA/KSos valores eramespiga,cox1,cox2, ecox3, enquanto aqueles com
o maior KA/KSos valores eramatp8enad6. (Figura 2). O K médioA/KS
razão (±SD) para o 13 PCG foi de 0,0718 (±0,0425) e 0,0770 (±0,0627) emM.
waterhousiieM. californicus, respectivamente. Os valores acima
mencionados estão dentro da faixa relatada para as poucas outras espécies
cofamiliares nas quais a pressão seletiva de PCGs foi examinada (por
exemplo,E. albaK médioA/KSvalor = 0,0404 [±0,0418],D. rotundus, Diphylla
ecaudata,eDiaemus YoungiK médioA/KSvalores = 0,06 [± 0,10] -Botero-Castro
et al., 2013; Vivas-Toro et al., 2021). O K relativamente altoA/KSvalores
detectados ematp8enad6genes nas duas espécies estudadas está de acordo
com o relatado pelos poucos estudos anteriores que exploraram diferenças
nas pressões seletivas entre PCGs mitocondriais em
8
Gene 863 (2023) 147295
outras espécies de morcegos (Meganathan et al., 2012; Vivas-Toro et al., 2021;
Baeza et al., 2022).
Os 22 tRNAs do genoma mitocondrial deM. waterhousiie
M. californicuscada um tem um comprimento combinado de 1.507 bp.
Comprimentos individuais de tRNA para as duas espécies variaram de 60 pb
(trnS1) a 76 pb (trnL2). Todos os tRNAs têm uma estrutura secundária 'trevo'
excetotrnS1, que não possui o braço DHU (Fig. 3). Um truncadotrnS1é
frequentemente relatado na literatura entre metazoários, incluindo
morcegos, entre outros mamíferos (Bruijn et al., 1980; Sprinzl et al., 1998;
Jühling et al., 2012). Até o momento, a única descrição detalhada de
estruturas secundárias em tRNAs mitocondriais de representantes da família
Phyllostomidae é a de Ectophylla alba(Vivas-Toro et al., 2021).
Uma comparação mais detalhada de genes de tRNA entreE. alba,
M. waterhousii, eM. californicusrevelou que o comprimento do receptor de
aminoácidos e das hastes do anticódon é quase o mesmo (7 e 5 pb,
respectivamente) em todos os tRNAs nas três espécies, exceto emtrnR, em que o
receptor de aminoácidos e a haste do anticódon tinham 6 pb e 5 pb de
comprimento, respectivamente, em todas as três espécies. EmE. albae as duas
espécies deMacrotus, o comprimento das hastes TΨC dos tRNAs varia entre 4 e 5
pb, exceto trnT emM. waterhousiique tem 2 pb de comprimento, etrnVem ambas
as espécies deMacrotus, que tem 3 pb de comprimento. Por sua vez, o
comprimento das hastes do braço DHU é muito semelhante emMacrotusspp. eE.
alba, com um comprimento de 3 ou 4 pb.
O comprimento dorrnSerrnLgenes no genoma mitocondrial de
M. waterhousiieM. californicuseram muito parecidos (rrnS=968 e 967 pb e
rrnL=1.573 e 1.561 pb, respectivamente). Esses valores também são muito
semelhantes aos relatados anteriormente para outras espécies da mesma
família (Botero-Castro et al., 2018). Nas duas espécies, esses genes foram
localizados próximos um do outro, separados portrnV, entretrnFetrnL2. Em
M. waterhousii,a composição de nucleotídeos dorrnSgene é o seguinte:
A = 35%, T = 23,3%, G = 18,1% e C = 23,6%, e o dorrnL gene é o
seguinte: A = 36,7%, T = 24%, G = 17,4% e C = 21,9%. O rrnSerrnLgenes
deM. californicusexibem uma composição de nucleotídeos semelhante
à dosM. waterhousii(rrnS: A = 35%, T = 23,4%, G = 17,8% e C = 23,8%;
rrnL: A = 35,9%, T = 23,2%, G = 18,1% e C = 22,8%). O conteúdo A + T dos
dois genes é semelhante entre as duas espécies congêneres (M.
waterhousiiconteúdo A + TrrnS=58,3% errnL =60,7%;M. californicus rrnS
=58,4 % errnL=59,1%). Além disso, o conteúdo observado de A + T
estimado para os genes de RNA ribossômico de Macrotusspp. é mais
semelhante ao relatado em outras espécies familiares (por exemplo,
Lonchorhina aurita,rrnS=57,1% errnL=58,3%;Lophostoma silvicolum:
rrnS=54%,rrnL=58,4% -Botero-Castro et al., 2018).
A região de controle deM. waterhousiieM. californicusexibe uma
composição de nucleotídeos como segue: A = 30,5 e 28,7%, T = 25,9 e 27,1%,
G = 17,2 e 17,2% e C = 26,4 e 27%, respectivamente . Essa composição de
nucleotídeos é muito semelhante àquela relatada anteriormente para as
espécies cofamiliaresE. alba(Vivas-Toro et al., 2021). O servidor web
Microsatélite Repeat Finder detectou um total de 12 (a maioria com motivos
de dinucleotídeos AC, GT, CG e CC) microssatélites no CR de ambos
M. waterhousiieM. californicus(Tabela Suplementar 3). Três e quatro repetições
em tandem, respectivamente, foram detectadas dentro da região de controle de
M. waterhousiieM. californicususando o servidor web Tandem Repeats Finder. Um
maior aproveitamento de A e C foi observado em todas as repetições (Tabela
Suplementar 4). Um total de 20 possíveis estruturas secundárias foram previstas
para a região de controle do genoma mitocondrial de ambas as espécies pela
ferramenta RNAstructure Web Server (Bellaousov et al., 2013). Os valores de
configuração de energia livre de Gibbs [ΔG] variaram entre
− 203,3 e − 202,2 kcal/mol emM. waterhousiie − 162,3 e − 161,4 kcal/mol em
M. californicus(Complementar Fig. 1). Todas as estruturas secundárias
previstas exibiram estruturas em forma de grampo de diferentes
comprimentos em direção ao centro da região. A região controle das duas
espécies é semelhante ao CR de outras espécies de filostomídeos em que
esta região foi estudada em detalhes, comoE. alba(Vivas-Toro et al., 2021) e
Sturnira parvidens(Baeza et al., 2022).
Uma análise comparativa dos CRs mitocondriais das duas espécies
estudadas deMacrotuscom o deE. alba(Vivas-Toro et al., 2021)
KJ Vargas-Trejo et al. Gene 863 (2023) 147295

Figura 4.A) Domínios funcionais dentro da Região de Controle deMacrotus waterhousiieMacrotus californicus(Extended Termination Associated Sequences (ETAS), Central
(CD) e Conservated Sequence Block (CSB) com as localizações de seus respectivos blocos conservados). Estrutura secundária de repetições Tandem no CR de B)
M. waterhousiie C)M. californicus. D) Blocos conservados destacados dentro de cada domínio na região de controle deM. waterhousiieM. californicus.

9
KJ Vargas-Trejo et al. Gene 863 (2023) 147295

93 Artibeus jamaicensis
100 Artibeus aequatorialis
100 Artibeus lituratus
82 100 Artibeus lituratus
Artiibeus ravus
57
Enchistenes hartii
Ectophylla alba
Chiroderma salvini
100 Platyrrhinus umbratus
100
100 Platyrrhinus matapalensis
100 Sturnira ludovici
100 Sturnira tildae
94 Sturnira luisi
padeiro Sturnira
100
padeiro Sturnira
92
padeiro Sturnira
Rhinophylla pumilio
Glyphonycteris daviesi
65 100 Carollia perspicillata
89
carollia castanea
92 Brachyphylla cavernarum
100 Glossophaga soricina
27 Choeroniscus menor
100 anoura caudifera
97
anoura cultrata
93 Anoura geoffroyi
Lonchorhina aurita
100 espectro de vampiro
81 47 Chrotopterus auritus
83 Tonatia maresi
100
Phyllostomus discolor
88 Lophostoma silvicolum
100 Lophostoma brasiliense
95
Hsunycteris thomasi
Lonchophylla robusta
100
98 Lonchophylla concava
100 Lonchophylla concava
75 Diphylla ecaudata
100
Diaemus youngii
100 Desmodus rotundus
47 100 Desmodus rotundus
100 Macrotus californicus
Macrotus waterhousii
100 Micronycteris hirsuta
Micronycteris me galotis
100 Micronycteris megalotis
Pteronotus rubiginosus
100 Mystacina tuberculata
100 Noctilio leporinus

Figura 5.Análise filogenética das duas espécies estudadas do gêneroMacrotuse espécies pertencentes à família Phyllostomidae. Árvore filogenética obtida a partir da
análise ML, baseada no alinhamento concatenado de aminoácidos dos 13 PCGs presentes no genoma mitocondrial.

demonstrarda imprensa ência do th domínios funcionais ree (ETAS, Central e CSB)
comumente observados no mesmo CR de outros morcegos (Fig. 4) (Pumo et al.,
1998). O comprimento de cada domínio (ETAS = 326 pb, Central = 351 pb e CSB =
623 pb) está dentro do intervalo relatado anteriormente para outras espécies de
mamíferos, incluindo morcegos (Sbisà et al., 1997; Vivas-Toro et al., 2021; Baeza et
al., 2022). O relativamente longo tandem rico em CAa sequência de repetição foi
positiva no domínio CSB entre os blocos CSB1 e CSB2. T sua sequência em tandem
foi1 6 (motivo: CGTA-CACGTAC ACGTA) e 12 (motivo: ACACGTACACGC) pb de
comprimento no registro de controleíon o fM. waterhousiium dM. californicus
respectivamente (Fig. 4).
A região ETAS1, com um comprimento de 57 bp, apresentou menor variabilidade que
o bloco ETAS2 com 64 bp, concordando com a noção de que ETAS1 é
um golpeReg servido íon que tem um papel importante durante a replicação
do genoma mitocondrial (Matson e Baker, 2001). Estudos anteriores
sugeriram que os domínios ETAS e CSB de mamíferos evoluem rapidamente,
mostrando mais variabilidade de nucleotídeos do que o domínio CD que, por sua vez, é
altamente conservado em mamíferos (Sbisà et al., 1997; Pesole e outros, 1999).
Mais estudos sobre a organização da região controle em representantes da
família Phyllostomidae são necessários para melhorar o entendimento
de variação e a dinâmica evolutiva do CR em morcegos e além.
3.1. Posição filogenética do gênero Macrotus
A topologia da árvore filogenética ML (49 terminais, 3.791 caracteres de
aminoácidos e 1.221 sites informativos) apoiou a monofilia da família
Phyllostomidae, mas os valores de suporte foram baixos (valor de inicialização [bv]
= 47) (Fig. 5). Com os Phyllostomidae, as duas espécies estudadas pertencentes ao
gêneroMacrotusagrupados em um clado filogenético totalmente suportado (bv =
100); que, por sua vez, era irmã de todos os demais gêneros e subfamílias de
filostomídeos, com exceção da subfamília Micronycterinae. Outras subfamílias
totalmente ou bem suportadas dentro dos Phyllostomidae foram Desmodontinae,
representadas por três espécies pertencentes a três gêneros diferentes (
Desmodus rotundus, Diaemus youngi, eDiphylla ecaudata), Stenodermatinae,
representado por 13 espécies pertencentes a seis gêneros diferentes (Artibeus
aequatorialis,
A. jamaicensis,A. lituratus,A. ravus,Chiroderma salvini,Ectophylla alba,
Enchistenes hartii,Platyrrhinus matapalensis,padeiro Sturnira,S. ludovici,
S.luisieS. tildae), Glossophaginae, representado por seis espécies pertencentes a
quatro gêneros (anoura caudifera,A. cultrata,A. geoffroyi, Branchyphylla
cavernarum,Choeroniscus menoreGlossophaga soricina), Phyllostominae,
representado por seis espécies pertencentes a cinco gêneros (Chrotopterus
auritus,Lophostoma brasiliense, L. silvicolum, Phyllostomus

10
KJ Vargas-Trejo et al.
descolorir,Tonatia maresieespectro de vampiro) e, por fim, Lonchophyllidae,
representado por três espécies pertencentes a dois gêneros diferentes (
Hsunycteris thomasi,Lonchophylla concavaeL. robusta). No geral, as relações
filogenéticas aqui reveladas estão de acordo com as relações previamente
recuperadas dentro da família Phyllostomidae com base em um número
menor de loci mitocondriais e nucleares (Rojas e outros, 2016); bem como
genomas mitocondriais completos (Botero-Castro et al., 2013 2018;
Camacho et al., 2022).
4. Conclusão
Este estudo reuniu o genoma mitocondrial completo deMacrotus
waterhousii, analisou-o em detalhes e comparou-o com o genoma
mitocondrial de sua espécie irmãM. californicus. A comparação dos dois
genomas mitocondriais em termos de sintenia, uso de nucleotídeos, uso de
códons e pressão seletiva em PCGs, entre outros, revelou pouca variação
dentro do gênero. Essas diferenças mínimas na arquitetura do genoma
mitocondrial e nas características aqui reveladas nas espécies congêneres
estudadas e, em geral, entre os representantes da família Phyllostomidae
não são necessariamente inesperadas, considerando o papel conservado
que os genes mitocondriais desempenham. A colocação filogenética deM.
waterhousiibaseada em genes codificadores de proteínas confirma a
monofilia do gêneroMacrotuse indica que este gênero se irradiou no início
da história evolutiva da família Phyllostomidae. Este novo recurso genômico
paraM. waterhousiirepresenta um passo à frente para melhorar nossa
compreensão da genética populacional desta espécie.
Declaração de contribuição de autoria do CRediT
Karen J. Vargas-Trejo:Metodologia, Análise formal, Investigação,
Curadoria de dados, Redação – rascunho original, Visualização.Jorge
Ortega:Metodologia, Análise formal, Investigação, Curadoria de dados,
Redação – rascunho original, Visualização.Yocelyn T. Gutiérrez-Guerrero:
Metodologia, Análise formal, Investigação, Curadoria de dados, Redação –
rascunho original, Visualização.Edgar G. Gutiérrez:Metodologia, Validação,
Investigação, Recursos, Redação – rascunho original.J. Antonio Baeza:
Conceituação, Metodologia, Análise formal, Validação, Investigação,
Curadoria de dados, Redação – rascunho original, Visualização, Supervisão.
Declaração de Interesse Concorrente
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes
conhecidos ou relacionamentos pessoais que possam parecer influenciar o
trabalho relatado neste artigo.
Disponibilidade de dados
Todos os dados estão disponíveis no Genbank
Agradecimentos
A JAB agradece ao Dr. Vincent P. Richards pelo suporte em
bioinformática. Esta pesquisa foi apoiada por Creative Inquiry e Clemson
Thinks 2, Clemson University. Os autores agradecem a Juan Cruzado Cortés
e Alan Harper por permitirem o uso de suas fotografias deM. waterhousiie
M. californicus, respectivamente. Este projeto foi parcialmente financiado
pelo Proyecto Fronteras de la Ciencia-CONACyT (15307) do México.
Apêndice A. Dados suplementares
Dados complementares a este artigo podem ser encontrados online em
https://doi. org/10.1016/j.gene.2023.147295.
11
Gene 863 (2023) 147295
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