Anatomia foliar – Juazeiro

Metodologia – Estudo anatômico

Para as análises anatômicas foram retiradas uma folha completamente expandida

do x nó de cada planta, com duas repetições para cada ciclo, totalizando 24 folhas. As
folhas dos tratamentos controle (ciclos 0-3) e de reirrigação (ciclos 0-3) foram fixadas
em paraformaldeído 4%, seguidas por desidratação em série etílica (10 – 70%). Já para
o tratamento de seca (ciclos 0-3) as folhas foram armazenadas em etanol 100% para
evitar reidratação. Posteriormente, fragmentos da lâmina foliar incluindo nervura
central, margem e região entre margem e nervura central foram obtidos e submetidos à
desidratação em álcool n-butílico e incluídos em historresina (Leica Historesin
Embedding Kit, Leica, Germany). Secções transversais com espessura de 5 µm foram
obtidas com micrótomo rotativo (RM 2155, Leica) e dispostas em lâminas histológicas.
Essas lâminas foram submetidas ao processo de coloração com ácido periódico – reativo
de Schiff (PAS) e azul de toluidina e montadas com Entellan (Merck, Germany). As
lâminas foram analisadas e fotografadas com microscópio de luz (Zeiss Axioskop 40
HBO 50, Zeiss, Germany) e software AxioVision (Version 4.8.2.0).

Resultados – Anatomia foliar

As folhas da espécie estudada são planas, dorsiventrais e hipoestomáticas, com

nervura central proeminente na face abaxial, apresentando contorno convexo (Fig. 1A,
C-E). A epiderme é uniestratificada e possui células com paredes periclinais externas
espessadas (Fig. 1A, C-E); essas células são, em geral, alongadas periclinalmente e
apresentam tamanho semelhante por toda sua extensão (Fig. 1C-E), exceto na nervura
central. Na nervura central as células epidérmicas na face abaxial são menores e
predomina-se o formato arredondado (Fig. 1A); estômatos não foram observados nessa
região. Ainda na nervura central, é evidente um grande feixe vascular, além do mesofilo
apresentando células corticais de formato arredondado (Fig. 1A); poucas células
corticais ocorrem na face adaxial (Fig. 1A-B), interrompendo a continuação do
parênquima clorofiliano. O feixe vascular da nervura central é colateral, apresentando
formato arqueado e circundado por fibras (Fig. 1B). No restante da lâmina o mesofilo é
diferenciado nos parênquimas paliçádico, que é uniestratificado, e lacunoso, com três a
quatro camadas de células (Fig. 1C-E). Os feixes vasculares no restante da lâmina
também são colaterais, mas são menores que aquele da nervura central e possuem
formato arredondado. Alguns destes feixes de maior calibre também são envoltos por
fibras (Fig. 1D). A margem foliar apresenta formato arredondado (Fig. 1D). Grãos de
amido ocorrem nas células corticais da nervura central e nos cloroplastos das células
dos parênquimas paliçádico e lacunoso. Na nervura central os grãos de amido são
observados em todos os tratamentos (Fig. 1A-B; 2A-B; 3A-B), porém sua quantidade
parece variar, mesmo entre indivíduos de um mesmo tratamento; a detecção destes
grãos se deu pela reação positiva ao PAS. Idioblastos contendo cristais podem ocorrer
entre as células do xilema e floema (Fig. 1B; 2B), no parênquima paliçádico (Fig. 1C;
2C-D; 3D-E) e na bainha que circunda os feixes vasculares tanto na nervura central
(Fig. 2B) ou em nervuras laterais (Fig. 3D). A estrutura anatômica da folha do juazeiro
se manteve em todos os tratamentos (Fig. 1-3), embora alguns efeitos do estresse
hídrico também possam ser evidenciados.

Comparando-se os tratamentos, nota-se que o estresse causado pela restrição

hídrica pode causar efeitos, de maior ou menor intensidade, nas células epidérmicas, no
mesofilo e no feixe vascular da nervura central (Tabela 1). Nas condições controle
(ciclos 0 a 3) as células estão túrgidas e observa-se que no mesofilo as células dos
parênquimas paliçádico e lacunoso apresentam grande quantidade de cloroplastos (Fig.
1C-E); tal efeito causa uma coloração mais escura nestes tecidos (Fig. 1C-E). Em
condições de seca nota-se que, inicialmente (ciclos 0 a 2), os sintomas podem incluir
perda de turgor nas células epidérmicas da face abaxial e/ou redução na quantidade de
grãos de amido dos cloroplastos (Fig. 2C-D); essa redução é percebida pela coloração
mais clara dos parênquimas paliçádico e lacunoso (Fig. 2C-E). Nestes primeiros ciclos o
mesofilo também pode apresentar células mais espaçadas, mesmo aquelas paliçádicas
(Fig. 2D), formando espaços intercelulares conspícuos. Todos estes efeitos são
intensificados no ciclo 3, onde as células epidérmicas da face abaxial e do mesofilo
apresentam maior perda de turgor (Fig. 2E). Em todos os tratamentos de seca observa-se
que as fibras que envolvem o feixe vascular da nervura central possuem coloração mais
escura (Fig. 2A-B) que aquelas dos tratamentos controle (Fig. 1A-B) e de reirrigação
(Fig. 3A-B). Após a reirrigação é evidente que os cloroplastos voltam a ser abundantes,
armazenando grãos de amido (Fig. 3C-E). Ainda com a reirrigação, as células voltam a
ficar túrgidas (Fig. 3D-E), porém, inicialmente (ciclo 0), pode acontecer das células
epidérmicas da face abaxial ainda não terem completado esse processo (Fig. 3C).
Figura 1. Anatomia foliar do Juazeiro em condições normais de irrigação (controle).
Tratamentos controle: ciclo 1 (A-B, D), ciclo 0 (C), ciclo 3 (E). A. Aspecto geral da
nervura central. B. Detalhe da nervura central evidenciando o feixe vascular e células
corticais. C e E. Aspectos gerais da região entre nervura central e margem. D. Aspecto
geral da margem. (Setas indicam cristais; Pontas de seta indicam grãos de amido em
células corticais; Quadrado indica células corticais; C, córtex; Es, estômato; Fi, fibras;
M, mesofilo; Ph, floema; PP, parênquima paliçádico; SP, parênquima lacunoso; VB,
feixe vascular; X, xilema). Barras: A (100 µm); B-E (50 µm).

Figure 1. Leaf anatomy of Juazeiro under normal irrigation conditions (control). Control
treatments: cycle 1 (A-B, D), cycle 0 (C), cycle 3 (E). A. General aspect of the midrib.
B. Detail of the midrib showing the vascular bundle and cortical cells. C and E. General
aspects of the region between the midrib and the margin. D. General aspect of the
margin. (Arrows indicate crystals; Arrowheads indicate starch grains in cortical cells;
Square indicates cortical cells; C, cortex; Es, estomata; Fi, fibers; M, mesophyll; Ph,
phloem; PP, palisade parenchyma; SP, spongy parenchyma; VB, vascular bundle; X,
xylem). Scale bars: A (100 µm); B-E (50 µm).

Figura 2. Anatomia foliar do Juazeiro em condições de seca. Tratamentos de seca: ciclo

2 (A-B, D), ciclo 0 (C), ciclo 3 (E). A. Aspecto geral da nervura central. B. Detalhe da
nervura central evidenciando o feixe vascular; nota-se a coloração mais escura das
fibras. C-E. Aspectos gerais da região entre nervura central e margem: em C nota-se
perda de turgor nas células epidérmicas da face abaxial; em E nota-se perda de turgor
nas células epidérmicas da face abaxial e do mesofilo; em D e E nota-se que as células
do mesofilo são espaçadas; nas três imagens é mostrado que o mesofilo apresenta
coloração mais clara, indicando diminuição na quantidade de grãos de amido nos
cloroplastos. (Setas indicam cristais; Pontas de seta indicam grãos de amido em células
corticais; C, córtex; Fi, fibras; M, mesofilo; Ph, floema; PP, parênquima paliçádico; SP,
parênquima lacunoso; VB, feixe vascular; X, xilema). Barras: A (100 µm); B-E (50
µm).
Figure 2. Leaf anatomy of Juazeiro under drought conditions. Drought treatments: cycle
2 (A-B, D), cycle 0 (C), cycle 3 (E). A. General aspect of the midrib. B. Detail of the
midrib showing the vascular bundle; note the darker coloring of the fibers. C-E. General
aspects of the region between the midrib and the margin: in C there is a loss of turgor in
the epidermal cells of the abaxial surface; in E there is a loss of turgor in the epidermal
cells of the abaxial surface and the mesophyll; in D and E it is noted that the mesophyll
cells are spaced apart; in the three images it is shown that the mesophyll has a lighter
color, indicating a decrease in the amount of starch grains in the chloroplasts. (Arrows
indicate crystals; Arrowheads indicate starch grains in cortical cells; C, cortex; Fi,
fibers; M, mesophyll; Ph, phloem; PP, palisade parenchyma; SP, spongy parenchyma;
VB, vascular bundle; X, xylem). Scale bars: A (100 µm); B-E (50 µm).

Figura 3. Anatomia foliar do Juazeiro em condições de reirrigação. Tratamentos de

reirrigação: ciclo 0 (A, C), ciclo 2 (B), ciclo 1 (D), ciclo 3 (E). A. Aspecto geral da
nervura central. B. Detalhe da nervura central. C-E. Aspectos gerais da região entre
nervura central e margem mostrando que as células retomam turgidez e que os
cloroplastos voltam a apresentar mais grãos de amido; em C nota-se que a perda de
turgor ainda pode estar presente nas células epidérmicas da face abaxial. (Setas indicam
cristais; Pontas de seta indicam grãos de amido em células corticais; C, córtex; Fi,
fibras; M, mesofilo; Ph, floema; PP, parênquima paliçádico; SP, parênquima lacunoso;
VB, feixe vascular; X, xilema). Barras: A (100 µm); B-E (50 µm).

Figure 3. Leaf anatomy of Juazeiro under reirrigation conditions. Re-irrigation

treatments: cycle 0 (A, C), cycle 2 (B), cycle 1 (D), cycle 3 (E). A. General aspect of the
midrib. B. Detail of the midrib. C-E. General aspects of the region between the midrib
and the margin showing that the cells recover turgidity and that the chloroplasts once
again present more starch grains; in C it is noted that the loss of turgor may still be
present in the epidermal cells of the abaxial surface. (Arrows indicate crystals;
Arrowheads indicate starch grains in cortical cells; C, cortex; Fi, fibers; M, mesophyll;
Ph, phloem; PP, palisade parenchyma; SP, spongy parenchyma; VB, vascular bundle;
X, xylem). Scale bars: A (100 µm); B-E (50 µm).
Tabela 1. Efeitos do estresse hídrico nas folhas do Juazeiro; para cada ciclo duas repetições. A intensidade de cada efeito é indicada como
ausente (-), moderada (+) ou forte (++).
Controle Seca Reirrigação
Efeitos do estresse hídrico Ciclo Ciclo Ciclo Ciclo Ciclo
Ciclo 0 Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3 Ciclo 0 Ciclo 1 Ciclo 2
3 0 1 2 3
Células epidérmicas com perda
-/- -/- -/- -/- -/+ -/+ -/+ +/++ -/+ -/- -/- -/-
de turgor (face abaxial)
Células do mesofilo com perda
-/- -/- -/- -/- -/- -/- -/- +/+ -/- -/- -/- -/-
de turgor
Diminuição dos cloroplastos no
-/- -/- -/- -/- +/+ +/+ +/++ +/++ -/- -/- -/- -/-
mesofilo
Mesofilo com células mais
-/- -/- -/- -/- -/- +/+ +/+ +/++ -/- -/- -/- -/-
espaçadas
Coloração mais escura nas fibras
que envolvem o feixe vascular da Sim Sim Sim Sim
nervura central*
* Não foi quantificada a intensidade na variação da coloração.