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Consumo de Hibiscus sabdariffa L. extrato aquoso


e seu impacto no potencial antioxidante sistêmica
em indivíduos saudáveis
1. Thomas Frank 1 ,
2. Gabriele Netzel 2 ,
3. Dietmar Kammerer R 3 ,
4. Reinhold Carle 3 ,
5. Adolf Kler 4 ,
6. Erwin Kriesl 4 ,
7. Irmgard Bitsch 5 ,
8. Roland Bitsch 2 e
9. Michael Netzel 2, *

Artigo publicado on­line: 13 FEB 2012

DOI: 10.1002 / jsfa.5615

Copyright © 2012 Sociedade da Indústria Química

Edição

Jornal da Ciência da Alimentação e Agricultura


Volume 92 , Issue 10 , (/doi/10.1002/jsfa.v92.10/issuetoc) páginas 2207­2218 , 15 de agosto de 2012

(http://www.altmetric.com/details.php?
domain=onlinelibrary.wiley.com&citation_id=609281)

Informações adicionais
Como Cite

Frank, T., Netzel, G., Kammerer, DR, Carle, R., Kler, A., Kriesl, E., Bitsch, I., Bitsch, R. e Netzel, M.
(2012), o consumo de Hibiscus sabdariffa L. extrato aquoso e seu impacto no potencial antioxidante
sistêmica em indivíduos saudáveis. J. Sci. . Agric Food, 92: 2207­2218. doi: 10.1002 / jsfa.5615

Informação sobre o autor

Consultor privado, 65812 Bad Soden, Alemanha

Instituto de Nutrição, Universidade Friedrich Schiller de Jena, 07743 Jena, Alemanha

Instituto de Ciência de Alimentos e Biotecnologia da Universidade de Hohenheim, 70599 Stuttgart,


Alemanha

Plantextrakt GmbH & Co. KG, 91487 Vestenbergsgreuth, Alemanha

Instituto de Nutrição, Justus Liebig Universidade Giessen, 35392 Giessen, Alemanha

Email: Michael Netzel (Michael.Netzel@csiro.au)

* CSIRO Food and Nutritional Sciences, PO Box 745, Archerfield BC, QLD 4108, Austrália.

História publicação

1. Edição on­line publicou: 11 JUN 2012


2. Artigo publicado on­line: 13 FEB 2012
3. Manuscrito aceites: 08 de janeiro de 2012
4. Manuscrito Revisado: 27 DEC 2011
5. Manuscrito recebida: 15 NOV 2010

Resumo (/doi/10.1002/jsfa.5615/abstract)
Artigo
Referências (/doi/10.1002/jsfa.5615/references)
Citado por (/doi/10.1002/jsfa.5615/citedby)

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(298K) (/doi/10.1002/jsfa.5615/epdf)Obter PDF (298K) (/doi/10.1002/jsfa.5615/pdf)
Palavras­chave:
Hibiscus sabdariffa L .; polifenóis; potencial antioxidante; malondialdehyde; ácido hipúrico; seres humano

Resumo
1. Início da página
2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências

FUNDO: Para avaliar os benefícios à saúde atribuídos ao Hibiscus sabdariffa L. um, aberto, randomizado, de duas vias crossover estudo foi
realizado para comparar o impacto de uma solução aquosa H. sabdariffa L. extrair (HSE) sobre o potencial antioxidante sistêmico (AOP;
ensaiada por férrico reduzindo o poder antioxidante (FRAP)) com um tratamento de referência (água) em oito voluntários saudáveis. As
variáveis ​
foram biocinéticos as áreas sob a curva (AUC) do plasma FRAP, ácido ascórbico e urato que estão acima da concentração de pré­
dose, e as quantidades excretadas na urina em 24 h (AE 0­24 ) de antioxidantes, tal como testado por FRAP , ácido ascórbico, ácido úrico,
malondialdeído (biomarcador para estresse oxidativo), e ácido hipúrico (metabolito e potencial biomarcador para a ingestão de polifenóis
totais).

RESULTADOS: HSE causou significativamente mais elevada da AUC do plasma de FRAP, um aumento em Ae 0­24 de FRAP, ácido
ascórbico e ácido hipúrico, ao passo que a excreção foi reduzida de malondialdeído. Além disso, as principais antocianinas hibiscus, bem como
um conjugado de glucuronido pode ser quantificados na urina dos voluntários (0,02% da dose administrada).

CONCLUSÃO: O HSE aquosa investigada neste estudo aumentou a AOP sistêmica e reduziu o estresse oxidativo em humanos. Além disso,
o aumento da excreção urinária de ácido hipúrico após o consumo de HSE indica uma alta biotransformação dos polifenóis HSE ingeridas,
muito provavelmente causadas por microbiota do cólon. Copyright © 2012 Sociedade da Indústria Química

INTRODUÇÃO
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2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
Propriedades antioxidantes desencadeados por espécies de plantas têm uma gama completa de aplicações de perspectiva na área da saúde humana.
Nos últimos anos, a prevenção de doenças cardiovasculares e do cancro tem sido associada com a ingestão de frutas, vegetais ou chás ricos em
antioxidantes naturais, o que sugere que uma maior ingestão de tais compostos poderiam reduzir o risco de mortalidade por estas doenças. 1 , 2
alimentos vegetais contêm fibras, vitaminas, fitoesteróis, compostos de enxofre, carotenóides e ácidos orgânicos, que contribuem para os efeitos
sobre a saúde, mas também contêm uma variedade de polifenóis, que são cada vez mais considerados agentes de protecção eficazes. 3 Portanto, em
busca de fontes de novos antioxidantes, nos últimos anos algumas plantas medicinais têm sido amplamente estudados para determinar seu potencial
antioxidante e atividade de eliminação de radicais. 4

Roselle Tropical ( Hibiscus sabdariffa L., Malvaceae) é anual, ereta, espesso, herbáceo sub­arbusto que cresce a 8 pés (2,4 m) de altura e
geralmente consiste de um cálice vermelho com cinco grandes sépalas. 5 H. sabdariffa extractos são uma rica fonte de polifenóis, com antocianinas
como os principais constituintes fenólicos. Peng et al. 6 pode detectar e caracterizar, de H. sabdariffa extracto, antocianinas (por exemplo,
delfinidina­3­sambubioside e cianidina­3­sambubioside), kaempferol­3­glucósido, um derivado de quercetina, bem como vários ácidos fenólicos e
os seus derivados, tais como o ácido gálico, ácido protocatecuico, ácido 5­cafeoilquínico, 4 ­caffeoylquinic ácido, ácido clorogênico, derivado
feruloilquínicos, e ácido cafeico. As antocianinas são responsáveis ​
pelas cores vermelhas, púrpuras e azuis de muitas frutas e legumes. Eles
também fornecem a indústria de alimentos com substitutos naturais para alguns alimentos corantes sintéticos. 7 Os mais comuns que ocorrem
naturalmente antocianinas são os 3­ O ­glucosides ou 3,5­di­ O ­glucosides de cianidina, delfinidina (em ordem crescente de hidroxilação) ,
peonidina, petunidina e malvidina (em ordem crescente de metoxilação). 8 , 9 Numerosos estudos, principalmente in vitro experimentos e animais,
demonstraram uma ampla gama de propriedades biológicas para as antocianinas, incluindo antioxidante, anti­inflamatória, antimicrobiana e anti­
cancerígena atividades. 9 Sua ingestão diária foi estimada entre 12,5 mg nos EUA e 82 mg na Finlândia, que é consideravelmente maior do que o
consumo estimado para muitos outros polifenóis. 9 , 10 delfinidina­3­sambubioside e cianidina­3­sambubioside foram identificada como a principal
antocianina hibiscus, com delfinidina­3­glucósido e cianidina­3­glucósido que ocorrem em quantidades menores. 8

As acções farmacológicas de extractos cálice incluem forte in vitro e in vivo, actividade anti­oxidante. 11 Indução de apoptose em células de
leucemia humana e de células de carcinoma gástrico humano pode ser demonstrada com delfinidina­3­sambubioside e um extracto de hibisco rico
em polifenóis, respectivamente. 12 , 13 ou extractos de flores Além disso, secas H. sabdariffa são ingredientes populares na medicina herbal
asiática e são usados ​
para tratar a hipertensão, febre, doenças do fígado e inflamação. 12­14 Recentemente, McKay et al. 15 relataram que o
consumo diário de três porções de H. sabdariffa (hibisco) de chá, uma quantidade facilmente incorporados na dieta, de forma eficaz em baixar a
pressão arterial pré­adultos e levemente hipertensos.

Não há dúvida de que os benefícios de saúde atribuída a H. sabdariffa precisa de ser ligada à exposição sistémica à fracção de compostos ingeridas
que estão disponíveis para a actividade antioxidante e fisiológica, respectivamente. Somente estudos de intervenção humanas utilizando H.
sabdariffa são capazes de determinar a sua eficácia na prevenção de doenças crônicas e estabelecer recomendações de dose baseadas na ciência.

O presente estudo foi realizado para determinar o efeito de uma única administração oral de uma solução aquosa H. sabdariffa extrair em sistêmica,
ou seja, ex vivo potencial antioxidante (AOP), avaliadas pela férrico reduzindo o poder antioxidante (FRAP) de ensaio em mulheres jovens
caucasianos do sexo masculino e saudável. As concentrações plasmáticas contra foram analisados ​ cursos de tempo e as alterações da linha de base
(isto é, valor de pré­dose), bem como o AOP de urina. Para caracterizar a fracção de compostos fenólicos ingeridas que reforcem a AOP, a área
sob a curva (AUC) acima da linha de base foi derivado a partir das concentrações de plasma individuais.

Além disso, as amostras de plasma e de urina devem ser analisados ​


para antocianinas hibiscus e metabolitos, assim como para ácido ascórbico e
ácido úrico como importantes compostos antioxidantes em fluidos biológicos. 16 , 17, ácido hipúrico, como um biomarcador potencial de
polifenóis totais de admissão 18 e de malondialdeído (MDA ), um biomarcador para o stress oxidativo, 19 foram também quantificados nas
amostras de urina.

MATERIAL E MÉTODOS
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3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências

Chemicals
A menos que indicado de outra forma, todos os produtos químicos foram adquiridos a Merck (Darmstadt, Alemanha). Delfinidina­3­glucósido foi
comprado de polifenóis Laboratories como (Sandnes, Noruega), cianidina­3­glucósido foi fornecida por Roth (Karlsruhe, Alemanha), e cianidina­
3­sambubioside e delfinidina­3­sambubioside foram fornecidas pelo Institute of Química Alimentar da Technische Universität Braunschweig
(Alemanha). Água deionizada foi utilizada por toda parte.

Assuntos
Oito voluntários não fumadores saudáveis ​
(quatro homens e quatro mulheres) com idades entre 22­27 anos (idade média de 24 ± 1,9 anos) e um
índice de massa corporal médio de 21,6 (± 2,7 kg m ­2 ) foram incluídos se encontrou com o seguinte critérios de inclusão: 18­45 anos de idade e
de boa condição clínica geral, avaliada pela história clínica. Indivíduos com hipersensibilidade conhecida de drogas, história de doença psiquiátrica
ou médica clinicamente significativa, estenose aórtica, a gravidez (incluindo gravidez presumida), lactação, padrão patológico de ECG, ou história
de abuso de drogas ou álcool foram excluídos. O estudo foi realizado em conformidade com a Declaração de Helsinque (Versão Outubro de 2000)
e alterações e exigências regulatórias internacionais e locais. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Friedrich Schiller de
Jena, Faculdade de Medicina (código 1656­1611 / 05). Os indivíduos deram seu consentimento informado por escrito antes da participação no
estudo.

Bebidas
As seguintes bebidas do estudo foram administradas:

• Bebida Experimental: 10 g H. sabdariffa L. extrair (pó), dissolvido imediatamente antes do


consumo em 200 mL de água da torneira (referido como SMS); fabricante: Plantextrakt
GmbH & Co KG, D­91487 Vestenbergsgreuth, Alemanha; capacidade antioxidante: FRAP:
20 , 21 3,24 mmol Fe 2+ equivalentes por análise, teor de fenólicos totais por ensaio de
Folin­Ciocalteu: 21 , 22 239,1 equivalentes de ácido gálico mg (GAE) por análise;
antocianinas totais (soma de cianidina­3­glucósido (0,15 mg), cianidina­3­sambubioside
(65,56 mg), delfinidina­3­glucósido (2,42 mg), e delfinidina­3­sambubioside (62,12 mg)):
130,25 mg por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC); 23, ácido ascórbico não foi
detectável. 24 , 25 Os detalhes dos métodos analíticos utilizados estão descritos na secção
que se segue.
• Bebida de referência (controle): 200 mL de água da torneira.
Design de estudo
Este estudo foi um, aberto, randomizado bidireccional crossover. Os indivíduos foram distribuídos aleatoriamente para receber uma dose única de
HSE ou água, e, após um período de lavagem de duas semanas, a dosagem e os testes foram repetidos de um modo cruzado. O tamanho da amostra
foi fixado arbitrariamente, ou seja, sem poder e cálculo do tamanho da amostra. Os participantes aderiram a sua dieta habitual, mas teve de se abster
de alimentos e bebidas ricos em polifenóis e ácido ascórbico a partir de 24 h antes do tratamento. Eles foram instruídos a abster­se de álcool e de
medicamentos, incluindo over­the­counter drogas, ao longo do estudo. Os indivíduos eram livres para se retirar do estudo a qualquer momento.

Após uma noite de jejum, os tratamentos foram tomados em conjunto com pães brancos às 8:00 am no dia de estudo. Nesses dias, em ambos os
períodos, apenas o consumo de água ( ad libitum ) e duas refeições padronizadas (dois rolos de pão de trigo branco com 60 g de queijo fatiado
(Gouda) para almoço e jantar, respectivamente) era permitido. As amostras de sangue venoso foram feitas pré­dose (tempo 0), bem como 0,5, 1,
1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6, 8 e 10 h após a administração. Cada amostra de sangue (18 ml) foi recolhido num tubo revestido de ácido
etilenodiaminotetracético. As amostras de sangue foram centrifugadas (10 minutos, 2000 x g , 8 ° C) dentro de 10 min após a recolha para a
preparação do plasma.

Além disso, anulado urina dos indivíduos nos períodos 1 e 2 foram coletados durante 24 h após o tratamento em recipientes de laboratório de urina
escura. Durante o período de recolha de urina foi armazenada a 4 ° C, e foram adicionados conservantes. Para análise de metabolitos de HSE e
antocianinas, as alíquotas de plasma (2 ml) e de urina (7 mL) foram estabilizados com 0,44 mol L ­1 ácido trifluoroacético (TFA; 0,4 mL) e ácido
fórmico (2 ml), respectivamente, enquanto que para o A análise do ácido ascórbico e ácido úrico alíquotas de plasma (0,6 ml) e de urina (1 ml)
foram estabilizadas com um volume igual de 10% (w / v) de meta ­fosfórico. Todas as amostras foram armazenadas congeladas a ­ 80 ° C até ser
analisado.

Procedimentos
Ensaio FRAP
O ex vivo AOP no plasma e urina, bem como a capacidade antioxidante de HSE foram medidos fotometricamente utilizando o ensaio de acordo
com FRAP Schlesier et al. 21 e Benzie e Strain, 20 com pequenas modificações. 30 ul de água desionizada e uma solução a 10 ul de amostra (HSE,
plasma ou urina) foram misturados com 200 ul de reagente FRAP que consiste de cloreto férrico e 2,4,6­tripyridyl­ s ­triazina (TPTZ) em tampão
de acetato. A absorvância foi medida após 8 minutos a 595 nm com um leitor de microplacas Anthos modelo HT2 (Anthos, Krefeld, Alemanha). A
AOP / capacidade antioxidante foi calculada utilizando a diferença de absorvância entre a amostra e em branco e uma solução adicional paralela Fe
(II) padrão, e os resultados foram expressos em micromoles ou milimoles de Fe 2+ equivalentes.

Teor de fenólicos totais


O conteúdo fenólico total de HSE foi determinada utilizando o ensaio de Folin­Ciocalteu 21 , 22 e foi realizada em um espectrofotômetro Uvidec­
610 (Jasco, Gross­Umstadt, Alemanha). HSE amostras foram diluídas com água desionizada (1:20), e foram ensaiadas directamente a 750 nm,
com ácido gálico servir como um padrão. O teor de fenólicos totais foi expressa como miligramas de equivalentes de ácido gálico (GAE) por 200
mL HSE (dose administrada).

Antocianinas HSE, metabolitos de antocianinas e ácido hipúrico por


HPLC
Antocianinas HSE e metabolitos no plasma e urina foram extraídos com um cartucho em fase sólida (Sep­Pak ® C18, Waters, Milford, MA,
EUA), como descrito por Miyazawa et ai. 26 e Felgines et al. , 27 , respectivamente, com ligeiras modificações.

Plasma: O cartucho foi lavado com 10 mL de metanol e equilibrada com 10 ml de 1,5 mol L ­1 ácido fórmico. Posteriormente, 2 mL de amostra de
plasma diluído com 0,4 ml de 0,44 mol L ­1 solução de TFA foi aplicada ao cartucho equilibrada. Os componentes solúveis em água, bem como
lipidos polares e neutros foram removidos em sucessão por 10 mL de ácido fórmico (1,5 mol L ­1 ), 10 mL de diclorometano e 10 mL de benzeno.
As antocianinas foram eluídos com 10 ml de 0,44 mol L ­1 TFA em metanol. A fase de metanol foi recolhida e o solvente foi removido sob vácuo
com um evaporador rotativo (ER 121 Rotavap, Buchi, Flawil, Suíça), com a temperatura do banho mantida a 30 ° C. Os extractos foram
redissolvidos em 300 mL de fase móvel de HPLC antes da análise. Alíquotas de 15 ul (para a identificação de metabolitos de HSE antocianinas e
detecção por HPLC de matriz de fotodiodos (PDA) ionização ­electrospray (ESI) Espectrometria de massa ­tandem (MS / MS); sistema de I) e de
50 mL (para quantificação por HPLC­ PDA, sistema II), respectivamente, foram utilizados para análise por HPLC.
Urina: acidificados amostras de urina foram descongeladas e mantidas durante 60 minutos à temperatura ambiente antes da extracção em fase
sólida (SPE) para obter o rendimento máximo dos catiões flavílio coloridas. O cartucho de SPE foi activada com 10 mL de metanol e equilibrada
com 10 ml de 12 mmol L ­1 HCl aquoso antes da utilização. Subsequentemente, 9 ml de urina acidificada foi aplicada ao cartucho equilibrada. O
cartucho foi então lavado com 10 ml de 12 mmol L ­1 HCl aquoso, e antocianinas foram eluídos com 15 ml de 12 mmol L ­1 HCl em metanol. O
extracto metanólico foi evaporado sob azoto até um volume de 1 ml a 35 ° C. Alíquotas de 15 ul (para a identificação de metabolitos de HSE e
antocianinas, sistema de I) e de 50 mL (para quantificação, o sistema II), respectivamente, foram utilizados para análise por HPLC.

Ácido hipúrico: urina não tratado foi centrifugado a 8400 x g e diluiu­se com água desionizada (1: 200, v / v) antes da análise de HPLC (sistema
II). Alíquotas da amostra para análise LC­MS (Sistema I) foram preparados utilizando SPE como descrito para antocianinas e metabolitos de SMS.

A HSE diluído foi centrifugado (5 min, 8400 × g , 8 ° C) e analisadas quanto antocianinas sob as mesmas condições que as descritas abaixo
(sistema II).

Identificação de antocianinas HSE, antocianina metabolitos, e ácido hipúrico (sistema I): Caracterização de compostos fenólicos de HSE foi
conduzida utilizando uma série de HPLC Agilent 1100 (Agilent, Waldbronn, Alemanha), equipado com software ChemStation, um desgaseificador
G1379A, uma bomba de gradiente binário G1312A , um amostrador automático G1313A, um forno de coluna G1316A e um detector de conjunto
diodo G1315B. A separação foi realizada com uma coluna Phenomenex ® coluna de Aqua (250 x 4,6 mm di; 5 um) com uma coluna de guarda
C18 ODS (4,0 x 2,0 mm ID) operado a uma temperatura de 25 ° C. A fase móvel (antocianinas e metabolitos de antocianina) consistiu de
acetonitrilo­ácido fórmico­água (87: 10: 3, v / v / v, eluente A) e de ácido fórmico e acetonitrilo­água (40:10:50, v / v / v, eluente B) usando um
programa de gradiente da seguinte forma: 10% de B até 25% de B (10 min), 25% de B até 31% de B (5 min), 31% de B até 40% de B (5 min),
40% de B até 50% de B (10 min), 50% de B a 100% de B (10 minutos), 100% de B até 10% de B (5 min), isocrático 10% B (5 min). A
monitorização foi realizada a 520 nm com um caudal de 0,8 ml min ­1 . Para a separação de compostos fenólicos não antocianina um sistema
solvente de 2% (v / v) de ácido acético em água (eluente A) e de ácido acético a 0,5% em água e acetonitrilo (50:50, v / v; eluente B) com o seguinte
programa de gradiente foi utilizado: 10% de B até 24% de B (20 min), 24% de B até 30% de B (20 min), 30% de B até 55% de B (20 min), 55% de
B a 100% de B (15 min), isocrático 100% B (8 minutos), 100% de B a 10% B (2 min), 10% isocrático B (5 min). A monitorização foi realizada a
280 nm com um caudal de 1,0 ml min ­1 . O sistema de HPLC foi acoplado on­line a um Bruker (Bremen, Alemanha) modelo Esquire 3000+
espectrómetro de massa de armadilha de iões utilizando uma interface entre ESI e software de controlo Esquire. Positivos (antocianinas) e
compostos fenólicos (não­antocianinas) espectros de massa de íons negativos, respectivamente, foram registrados no intervalo de m / z 50­1000.
Utilizou­se azoto como gás de secagem a um caudal de 11 L min ­1 e como nebulização de gás a uma pressão de 65 psi (antocianinas); os
parâmetros para a análise de compostos fenólicos não antocianina foram de 12 L min ­1 e 70 psi, respectivamente. A temperatura nebulizador foi
fixada em 365 ° C e um potencial de ± 4000 V foi utilizado no capilar. Hélio foi utilizado como gás de colisão a uma pressão de 4,0 x 10 ­6 mbar.
Os espectros de dissociação foram obtidas com uma amplitude de fragmentação de 1,0 V.

Quantificação de antocianinas HSE, metabolitos, e ácido hipúrico (sistema II): Quantificação de antocianinas HSE e metabolitos no plasma e na
urina foi realizada seguindo o método de Kammerer et al. 23 O sistema de HPLC consistiu de uma bomba de L­6200, um AS ­4000 auto­injector
(Merck­Hitachi, Darmstadt, Alemanha), e um detector de conjunto de fotodíodos 990 (Waters, Eschborn, Alemanha) equipado com uma coluna
Prontosil Eurobond RP­18 (5 um, 250 x 4,0 mm di, Bischoff, Leonberg , Alemanha) e um LiChrospher ® 100 RP­18, pré­coluna (5 um, 4,0 x 4,0
mm di, Merck). A HPLC analítica foi realizada à temperatura ambiente. A composição da fase móvel, programa de gradiente, o comprimento de
onda de detecção, bem como a taxa de fluxo era o mesmo que o descrito para o sistema de antocianinas (I). Antocianinas e metabolitos individuais
HSE foram quantificados usando curvas de calibração externa de cianidina­3­glucósido, cianidina­3­sambubioside, delfinidina­3­glucósido e
delfinidina­3­sambubioside.

Ácido hipúrico foram analisados ​e quantificados de acordo com o método de HPLC relatados por Kubota et ai. , 28 com ligeiras modificações. As
amostras foram eluídas por uma coluna RP­18 Prontosil Eurobond sob condições isocráticas com acetonitrilo­ácido acético­água (78: 20: 2, v / v /
v; pH 2,2), e monitorizada a 235 nm. As concentrações urinárias de ácido hipúrico foram calculados a partir de uma curva de calibração externa
ácido hipúrico.

O ácido ascórbico e ácido úrico por HPLC


Plasma e na urina (estabilizado com meta ­fosfórico) foram centrifugadas (5 minutos, 8400 x g , 8 ° C) e os sobrenadantes foram injectadas
directamente para um Prontosil Eurobond coluna RP­18 (sistema II) e eluída sob condições isocráticas com água acidificou­se com ácido sulfúrico
a pH 2,2. 24 , 25 A detecção foi realizada a 245 nm com um caudal de 0,8 ml min ­1 . O ácido ascórbico e ácido úrico foram identificados por
comparação dos seus tempos de retenção e espectros de UV­visível característico com aqueles de sintético L de ácido ascórbico e ácido úrico,
respectivamente. As concentrações nas amostras foram calculados a partir externo L de ácido ascórbico e ácido úrico curvas de calibração,
respectivamente.

A HSE diluído foi centrifugado (5 min, 8400 × g , 8 ° C) e analisados ​


para o ácido ascórbico sob as mesmas condições tal como descrito acima.
Malondialdeído por HPLC
MDA concentrações na urina foram determinadas por isocrática de fase inversa (RP) ­HPLC de acordo com Volpi e Tarugi 29 com ligeiras
modificações. A urina foi misturado com ácido 2­tiobarbitúrico (TBA) e hidroxitolueno butilado (BHT) e incubou­se a 95 ° C durante 45 min.
Após arrefecimento em gelo, as amostras foram centrifugadas (10 minutos, 8400 x g , 8 ° C) e os sobrenadantes foram diluídas (1:10) antes da
análise de HPLC. A separação do complexo MDA­TBA (sistema II) foi realizada utilizando uma coluna Prontosil Eurobond RP­18 equipado com
um LiChrospher ® 100 RP­18, pré­coluna e uma fase móvel composta por 35% de metanol e 65% 50 mmol L ­1 tampão de fosfato dissódico, pH
7,0. O complexo foi eluída a um caudal de 0,8 ml min ­1 e monitorizado por um detector de fluorescência Merck­Hitachi F­1050 (ex .: 515 nm; in .:
553 nm). As concentrações urinárias de MDA foram calculados a partir de uma curva de calibração externa MDA.

Intra­dia e inter­dia variabilidade provou ser inferior a 10% para todos os métodos analíticos.

Biokinetics e avaliação estatística


Avaliação biocinética não compartimental foi realizada de acordo com métodos convencionais, utilizando qualquer modelo. 220 de WinNonlin ®
software, versão 5.0 (Pharsight Corporation, Mountain View, CA, EUA). As seguintes variáveis ​ biocinéticos foram determinados a partir dos
campos de plasma de concentração­tempo de FRAP, ácido ascórbico e ácido úrico: 'base ", definida como a última ausente não concentração de
plasma antes da ingestão da bebida estudo, isto é, o valor de pré­dose medido a t = 0 h, e a área sob a curva (AUC) acima da linha de base. A AUC
acima da linha de base foi calculada de acordo com a regra trapezoidal linear. A análise biocinética baseou­se as concentrações plasmáticas do
doseamento e tempos nominais de amostragem; o cronograma de amostragem foi seguido exatamente.

Além disso, as quantidades de antioxidantes ensaiadas por FRAP, MDA, antocianinas HSE e metabolitos, ácido hipúrico, ácido ascórbico e ácido
úrico excretada na urina de 24 h (AE 0­24 ) foram determinados por multiplicação da concentração da respectiva substância a analisar na urina pela
volume da amostra de urina de 24 h.

As variáveis ​
biocinéticos no plasma e urina foram sintetizadas usando o número de observações, média aritmética e desvio padrão (DP), mínimo,
máximo e médio para cada tratamento.

Variáveis ​
não transformadas, da linha de base, AUC acima da linha de base e Ae 0­24 foram analisados ​
com um modelo linear de efeitos mistos
com prazos fixos para tratamento, período, seqüência e sexo, e termo aleatório para indivíduo dentro da sequência por sexo:

ajustados por mínimos quadrados generalizados (GLS), com máxima verossimilhança (REML) estimativas restritos de variâncias e covariâncias,
usando WinNonlin ® , versão 5.2.1 (Pharsight Corporation). Para linha de base, a AUC acima da linha de base e Ae 0­24 , estimar e 90% de
intervalo de confiança (IC) para a relação entre os meios de tratamento (HSE / água) foram obtidos calculando estimativa e IC 90% para o contraste
dando a diferença entre as médias dos tratamentos no âmbito modelo linear de efeitos mistos. A linha de base variável foi submetido a análise, a fim
de verificar se o pressuposto de que não efeitos de reporte é viável. Para verificar se a suposição de distribuição normal é válido, foram criadas
parcelas QQ dos residuais. Não foi feita nenhuma adaptação do nível de alfa para múltiplas análises.

Coeficientes de correlação de Pearson foram calculados para explorar a relação entre cada ácido ascórbico e ácido úrico em relação as
concentrações plasmáticas de FRAP, respectivamente.

O nível de significância estatística foi fixado em P <0,05. Todos os testes estatísticos foi puramente exploratória.

RESULTADOS
1. Início da página
2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências

Plasma
Concentração versus tempo curvas de ácido ascórbico, ácido úrico e
FRAP
As alterações absolutas da linha de base de ascórbico e ácido úrico, bem como os níveis plasmáticos de FRAP em diferentes tempos de
amostragem após a administração de HSE ou água são apresentados na Fig. 1 . Em média, houve apenas pequenas alterações nas concentrações
plasmáticas de ascórbico e ácido úrico contra o tempo na comparação dos dois tratamentos. A maior variação média da concentração no plasma foi
atingido FRAP 1 h pós­dose (Fig. 1 ). Começando a partir de 2 h após a dose o nível plasmático FRAP média diminuiu continuamente abaixo do
nível pré­dose, após administração de HSE. Após a administração de água, houve um declínio quase linear no nível médio de plasma FRAP abaixo
do nível pré­dose (Fig. 1 ).

Figura 1. As médias aritméticas (± SD) de alterações


absolutas da FRAP plasma, ácido ascórbico e ácido úrico a
partir de pré­dose (linha de base, t níveis ao longo do tempo
após administração oral única de qualquer extracto de
hibisco ou água = 0 h) ( n = 8 por tratamento).
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(/doi/10.1002/jsfa.5615/figure.pptx?
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Variáveis ​
biocinéticos
Os dados sobre a extensão da alteração da capacidade antioxidante no plasma, tal como caracterizada pela AUC acima da linha de base são
resumidos na Tabela 1 . Os valores da linha de base (definida como os níveis de pré­dose a t = 0 h) são também apresentados na Tabela 1 . Os
dados sobre a excreção urinária são relatados na Tabela 2 . As estimativas de relações de tratamento de HSE (teste) contra água (de referência) em
conjunto com os limites de confiança de 90% estão detalhadas na Tabela 3 .

Tabela 1. Resumo das variáveis ​ biocinéticos no plasma após a administração de


uma dose oral única de uma solução aquosa Hibiscus sabdariffa L. extrato ou água
para indivíduos jovens e saudáveis

Tratamento

Extrato de hibisco Água

Linha
Parâmetro AUC acima da de base AUC acima da Linha
Parâmetro AUC acima da de base AUC acima da Linha
analítico linha de base a b linha de base de Base

FRAP c N 8 8 8 8

Média ± 67,0 ± 47,6 692 ± 6,69 ± 10.2 688 ±

SD 85,9 113

Mediano 59,9 (14,3, 151) 698 1,35 (0,00, 683


(min., (551, 25,8) (535,
Max.) 795) 856)

O ácido N 8 8 8 8
ascórbico d

Média ± 3,84 ± 5,45 3,97 ± 2,47 ± 2,89 6,56 ±


SD 1,15 2,41

Mediano 2,33 (0,00638, 3,90 1,94 (0,00, 6,85


(min., 16,5) (2,79, 8,48) (2,68,
Max.) 6,26) 10,1)

O ácido N 8 8 8 8
úrico d

Média ± 7,82 ± 7,52 De 11,9 14,4 ± 25,6 18,8 ±


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SDserá interrompido em 11 de julho de 2015, 10: 00­16: 00
± 3,26 5,62
BST / 05: 00­11: 00 EDT / 17: 00­23: 00 SGT para manutenção essencial. No
entanto, pode haver um possível atraso para a hora de início podem mudar.
Mediano 5,88 (0,00, 20,1) 11,5 3,33 (0,00, 18,7
Desculpas para a inconveniência.
(min., (8,18, 74,2) (10,5,
Exibir mensagens
Max.) 17,9) 27,7)

uma AUC acima da linha de base = área sob a curva que está acima da linha
de base, calculada de acordo com a regra trapezoidal linear.
b Linha de base = a última concentração no plasma não ausentes antes da
ingestão da bebida estudo, isto é, valor de pré­dose em t = 0 horas no
dia do estudo.
c Unidade de linha de base: umol L ­1 ; AUC: h? Mol L ­1 .
d Unidade de linha de base: mg L ­1 ; AUC: mg L h ­1 .
Os valores são arredondados para três algarismos significativos.
Tabela 2. Resumo da quantidade excretada nas primeiras 24 h na urina (Ae 0­24 )
após a administração de uma dose oral única de uma solução aquosa Hibiscus
sabdariffa L. extrato ou água para indivíduos jovens e saudáveis

Tratamento

Parâmetro analítico Extrato de


(unidade) hibisco Água

FRAP (mmol) N 8 8

Média ± SD 7,75 ± 1,80 6,14 ± 1,72

Mediano (min., 7,24 (5,89, 10,7) 5,55 (4,66,


Max.) 9,52)

Ácido hipúrico (mg) N 8 8

Média ± SD 447 ± 78,1 331 ± 86,9

Mediano (min., 452 (315, 541) 354 (180,


Max.) 446)

MDA (nmol) N 8 8

Média ± SD 1,60 ± 0,381 2,08 ± 0,694

Mediano (min., 1,57 (1,18, 2,32) 1,87 (1,32,


Max.) 3,18)

O ácido ascórbico (mg) N 8 8

Média ± SD 12,7 ± 5,66 8,48 ± 6,10

Mediano (min., 10,5 (5,79, 24,2) 6,25 (1,75,


Max.) 18,5)

O ácido úrico (mg) N 8 8

Média ± SD 213 ± 81,3 249 ± 131

Mediano (min., 198 (140, 388) 212 (134,


Max.) 542)

Delfinidina­3­sambubioside N 8 8
(ug)
Média ± SD 6,54 ± 3,41 nd

Mediano (min., 5,88 (2,47, 12,7) nd


Max.)

Cianidina­3­sambubioside N 8 8
(ug)

Média ± SD 18,7 ± 11,4 nd

Mediano (min., 14,7 (9,39, 43,3) nd


Max.)

Monoglucuronide N 8 8
delfinidina (ug)

Média ± SD 3,92 ± 1,60 nd

Mediano (min., 4,11 (1,81, 6,77) nd


Max.)

Antocianinas totais (mg) N 8 8

Média ± SD 29,1 ± 12,6 nd

Mediano (min., 26,3 (15,4, 53,3) nd


Max.)

Os valores são arredondados para três algarismos significativos.


ND, não detectável.

Tabela 3. Comparação das variáveis ​ biocinéticos obtidos após a administração de


Hibiscus sabdariffa L. extrato e água

Índice de tratamento de
Biocinéticos Hibiscus / água (90%
Parâmetro variável intervalo de confiança) Significância
Matriz analítico (unidade) um ( P ­valor) b

Plasma FRAP Linha de base 100,5 (95,7, 105,4) 0,833


(umol L ­1 )

AUC acima da 1.001,9 (504,2, 1.499,7) 0,012


AUC acima da 1.001,9 (504,2, 1.499,7) 0,012
linha de base
(mol L h ­1 )

Ácido Linha de Base 60,5 (40,2, 80,8) 0,009

ascórbico (mg L ­1 )

AUC acima 155,2 (36,3, 274,3) 0,402


dos valores
basais (mg L h
­1 )

Ácido Linha de Base 63,3 (41,6, 85,0) 0,017


úrico (mg L ­1 )

AUC acima 54,3 (­92,5, 201,1) 0,567


dos valores
basais (mg L h
­1 )

Urina FRAP Ae 0­24 (mmol) 126,3 (113,7, 138,8) 0,007


c

Ácido Ae 0­24 (mg) 135,1 (119,6, 150,5) 0,005


hipúrico

MDA Ae 0­24 (imol) 76,8 (61,0, 92,5) 0,028

Ácido Ae 0­24 (mg) 149,2 (126,2, 172,2) 0,006


ascórbico

Ácido Ae 0­24 (mg) 85,8 (50,0, 121,6) 0.470


úrico

uma Os mínimos quadrados média (LSM) de hibisco em percentagem do


LSM de água.
b A probabilidade ( P ­valor) associado a F ­Estatísticas é dado para o
termo tratamento do modelo linear de efeitos mistos.
c Quantidade excretada na urina dentro de 24 h.
FRAP AUC acima dos valores da linha de base variou 0,0­151? Mol L h ­1 , com média de 67,0 ± 47,6 mol L h ­1 (média ± SD) após o tratamento
HSE e 6,69 ± 10,2 mol L h ­1 depois da água. A diferença entre os dois tratamentos foi estatisticamente significativa (ver Tabela 3 ). A Figura 2
ilustra que um único aumento na AUC acima do nível da linha de base FRAP ocorreu após tratamento HSE em todos os sujeitos.

Figura 2. individual e média aritmética (± SD) FRAP AUC


acima da linha de base (pré­dose) por tratamento.
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AUC ácido ascórbico acima dos valores basais foram 3,84 ± 5,45 mg L h ­1 após o tratamento HSE e 2,47 ± 2,89 mg L h ­1 após a água (Tabela 1
). A diferença entre os dois tratamentos não foi estatisticamente significativa (ver Tabela 3 ). A AUC acima dos valores da linha de base de ácido
úrico variou entre 0,0 e 20,1 mg L h ­1 (valor médio 7,82 ± 7,52 mg L h ­1 ) após o tratamento HSE, e entre 0,0 e 74,2 mg L h ­1 (valor médio de
14,4 ± 25,6 h mg L ­1 ), depois água (ver Tabela 1 ), com nenhuma diferença significativa entre os dois tratamentos (ver Tabela 3 ). A Tabela 3
também mostra basal quase idêntica (pré­dose), os níveis de FRAP entre tratamentos, enquanto que uma linha de base estatisticamente significativa
inferior ascórbico e ácido úrico foi comprovada mediante a administração de HSE. Não houve períodos, seqüência ou sexuais efeitos significativos,
quer na linha de base ou na AUC acima da linha de base.

As antocianinas ou metabolitos de antocianina comum, tais como formulários desnaturado ou glucuronídicos / conjugados de sulfato não foram
detectados nas amostras de plasma após o tratamento HSE.

Urina
FRAP Ae 0­24 valores variaram 4,66­10,7 mmol, com um valor médio de 7,75 ± 1,80 mmol após o tratamento HSE e 6,14 ± 1,72 mmol depois da
água. Ácido hipúrico ( m / z 178/134) Ae 0­24 valores variaram 180­541 mg, com um valor médio de 447 ± 78,1 mg após o tratamento HSE e 331
± 86,9 mg depois da água. MDA Ae 0­24 valores variaram 1,18­3,18 mol com um valor médio de 1,60 ± 0,38 nmol após o tratamento HSE e 2,08
± 0,69 nmol depois da água. Ae 0­24 de ácido ascórbico foi de 12,7 ± 5,66 mg após HSE e 8,48 ± 6,10 mg após água. Ae 0­24 de ácido úrico foi
213 ± 81,3 mg após HSE e 249 ± 131 mg após a água (Tabela 2 ). Excepto para o ácido úrico, a diferença de tratamento foi estatisticamente
significativa para cada analito urinário ensaiados (ver Tabela 3 ). Houve um efeito significativo sobre a sequência Ae 0­24 de ácido ascórbico, e um
efeito significativo sobre o sexo Ae 0­24 de FRAP, ácido hipúrico e MDA.

A média Ae 0­24 de antocianinas de hibisco e metabolitos (soma) foi de 29,1 ± 12,6 mg após o tratamento HSE. Cianidina­3­sambubioside foi a
principal antocianina (18,7 ± 11,4 g) (Tabela 2 ). Os espectros de massa de experiências representativas de dissociação induzida por colisão
corroborando atribuição de pico encontram­se ilustrados na Fig. 3 . No início do estudo e no tratamento controle, nenhuma das amostras de urina
continha quaisquer quantidades detectáveis ​de antocianinas ou metabolitos de antocianina comum (por exemplo, derivados de antocianinas
metilados e / ou glucuronada).

Figura 3. Cromatogramas de HPLC representativo para


PDA e espectros de massa. (A) A urina humana (sujeito 3)
recolhidas após a ingestão de 200 ml de água da torneira
(controle; A1) e 200 mL HSE (A2), respectivamente. A
detecção foi realizada a 520 nm. Atribuição de pico: (a)
delfinidina­3­sambubioside, (b) cianidina­3­sambubioside,
(c) monoglucuronide cianidina e (d) monoglucuronide
delfinidina. (B) espectro de massa Representante de
experimentos de dissociação induzida por colisão
corroborando atribuição de pico. As antocianinas foram
detectados no modo de ião positivo. (A) delfinidina­3­
sambubioside; m / z 597 (b) cianidina­3­sambubioside; m / z
581 (c) monoglucuronide cianidina; m / z 463 (d) delfinidina
monoglucuronide; m / z 479.
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Os pressupostos subjacentes ao projeto de cruzamento foram atendidas: não houve seqüência ou período efeitos estatisticamente significativos
(com as exceções acima mencionadas) que teria invalidado o julgamento.

Os coeficientes de correlação para o ácido ascórbico plasma contra os níveis plasmáticos FRAP foram 0,17 (HSE, P > 0,05) e ­ 0,12 (água, P >
0,05), respectivamente. Os coeficientes de correlação de ácido úrico no plasma contra níveis FRAP plasma foram 0,49 (HSE, P <0,001) e 0,40
(água, P <0,001), respectivamente (Fig. 4 ).

Figura 4. A correlação entre o ácido ascórbico e FRAP no


plasma depois de extracto de hibisco ( r = 0,17, P > 0,05) e
água ( r = ­ 0,12, P > 0,05), ea correlação entre o ácido úrico
no plasma e FRAP após extracto de hibisco ( r = 0,49, P
<0,001) e água ( r = 0,40, P <0,001). A linha cinza,
ponderada localmente scatter­plot suavização (curva
LOESS).
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DISCUSSÃO
1. Início da página
2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
O objetivo do presente estudo foi avaliar o impacto de uma dose oral única de um extrato aquoso de H. sabdariffa L. (HSE) na AOP sistêmica. Os
dados obtidos a partir de oito voluntários saudáveis ​
de ambos fêmea indicam que o consumo de HSE levou a um AOP melhorada em comparação
com a água utilizada como um tratamento de referência. A AOP reforçada como ensaiado pelo FRAP foi de natureza a curto prazo com um tempo
médio de pico por volta de 1 hora após a administração. Este resultado está em linha com os resultados relatados por outros: aumento da AOP de
plasma ensaiado por FRAP foi observada após o consumo de vinho tinto e uísque, 30 de espinafre e morangos, 31 chá preto e chá verde, 32 , bem
como farelo de trigo. 33

Como mostrado na Tabela 2 , houve um aumento da quantidade de antioxidantes ensaiadas por FRAP excretada nas voluntários 24 h de urina após
o consumo de HSE, em comparação com água. Resultado semelhante foi encontrado em um estudo recentemente publicado. Preço et al. 33
relataram um aumento significativo em polifenois totais urinários e potencial antioxidante (ensaiado por FRAP) em 18 indivíduos saudáveis ​
após o
consumo de ricos em polifenóis farelo de trigo. Deve notar­se que Tepel et al. 34 indicado no comentário sobre as terapias antioxidantes e doenças
vasculares que os antioxidantes podem prevenir a diminuição da função renal aguda causada por isquemia, meios de contraste ou drogas. Portanto,
o reforço da concentração urinária em antioxidantes pode ter relevância fisiológica relativa à protecção do tecido renal funcional.

O ácido ascórbico e ácido úrico são antioxidantes importantes nos fluidos biológicos tais como sangue e urina e contribuir substancialmente para o
in vivo da capacidade antioxidante. 16 , 17 Uma vez que o ensaio mede FRAP uma ampla variedade de antioxidantes do plasma e urina, incluindo o
ácido úrico e ácido ascórbico, 20 , 35 , 36 ambos os compostos foram determinados para excluir a possibilidade de que o aumento em AOP
observada após a ingestão de HSE foi devido ao aumento dos níveis destes antioxidantes. Além disso, estudos anteriores demonstraram a
correlação do consumo de frutose e o aumento das concentrações de ácido úrico no plasma humano e, subsequentemente, aumentar a capacidade
antioxidante do plasma. 37 , 38 Uma vez que os níveis de ácido ascórbico e de urato não se alterou de forma significativa a partir da linha de base
após o consumo de SMS, que não continha mensurável quantidades de frutose ou outros açúcares, concluímos que o AOP plasma reforçada foi
provavelmente causado por compostos fenólicos de SMS e seus metabólitos. Esta opinião é corroborada pelo fato de que encontramos apenas uma
fraca correlação entre o ácido úrico e FRAP, mas nenhuma correlação entre o ácido ascórbico e FRAP. Tal como demonstrado para o plasma, os
nossos dados de amostras de urina, também demonstraram que o consumo de HSE não resultou em reduções estatisticamente significativas maior
excreção de ácido úrico em 24 h. Em contraste com a AUC no plasma acima da linha de base, houve um aumento da proporção acentuadamente
tratamento para Ae 0­24 de ácido ascórbico superior a 20% de referência (água). Este resultado é surpreendente uma vez que a HSE testado era
praticamente desprovido de ácido ascórbico. Assim, não se pode excluir que o aumento de AOP na urina é confundida pelo aumento da excreção
de ácido ascórbico após ingestão de HSE (12,7 contra 8,48 mg dentro de 24 h). No entanto, como média a excreção de ácido úrico no prazo de 24
horas após o consumo de HSE foi ~36 mg inferior (tendência; P > 0,05) em comparação com o controlo (213 contra 249 mg), é improvável que o
pequeno aumento (valor absoluto) de ácido ascórbico tem um efeito significativo sobre a AOP urinária após a ingestão HSE.

Nós minimizado o impacto do pequeno número de indivíduos recrutados usando o desenho do estudo crossover. Nós encontramos ácido ascórbico
plasmático elevado estatisticamente significativa e os níveis de nosso estudo no tratamento de controle de linha de base de urato (pré­dose). Estas
medidas de base foram período dependente e pode indicar que o período de eliminação não foi suficiente para garantir que essas linhas de base não
são influenciados pelo tratamento anterior; isto é, eles foram afectados por arrastamento. É também possível que confusão, tais como variações
sazonais de temperatura, a exposição a alérgenos do ambiente, a poluição e os agentes patogénicos podem ter influenciado ascórbico e ácido úrico
no estado sujeitos. No entanto, esta observação não invalida os resultados deste estudo uma vez que a AUC do cálculo baseia­se nas alterações que
se refere à linha de base. Além disso, o impacto de eventuais diferenças de base em um estudo cruzado foi minimizado, pois cada sujeito agiu como
seu próprio controle.

MDA urinária foi significativamente reduzido de 2,08 ± 0,69­1,60 ± 0,38 pmol (­23% contra controlo) após o consumo e valores HSE estão na
mesma gama como relatado por Piche et al. 39 para adultos humanos (2,05 mol). MDA urinário tem sido amplamente utilizado em modelos
animais e em seres humanos como um biomarcador não­invasiva da peroxidação lipídica induzida pelo stress oxidativo. 19 A excreção reduzida
MDA sugere que a produção renal de MDA e / ou a produção sistémica de MDA foram reduzidos após HSE ingestão. MDA foi encontrada em
níveis elevados em várias doenças relacionadas com a supostamente danos dos radicais livres. 40 Recentemente, Gorelik et al. 41 demonstraram
significativamente diminuída taxas de excreção urinária de MDA 6 horas após o consumo de costeletas de peru com vinho tinto, em comparação
com um controlo (em um estudo cruzado randomizado com 10 indivíduos saudáveis). Com base nos seus resultados, que sugeriu que os polifenóis
do vinho tinto exercer um efeito benéfico por uma nova função: a inibição da absorção de MDA, devido à formação de um aduto entre polifenóis
do vinho tinto e aldeídos no tracto gastrointestinal. Num outro estudo duplo­cego, randomizado, cruzado com 12 homens saudáveis, Weinbrenner
et al. 42 , demonstrou uma redução significativa em MDA urinária (24 h de urina) na sequência de uma intervenção de 4 dias com azeites que
contêm diferentes quantidades de compostos fenólicos. A diminuição observada no MDA urinária após a ingestão HSE no presente estudo sugere
que os compostos antioxidantes do hibiscus, tanto em suas formas intactas ou como metabólitos, pode ter um efeito redutor sobre o estresse
oxidativo in vivo e, portanto, poderia proporcionar benefícios protetores para a saúde humana.

O consumo de HSE resultou no aparecimento de antocianinas HSE nativos (cianidina­3­sambubioside e delfinidina­3­sambubioside) e, pelo
menos, de dois metabolitos identificados antocianina cianidina (monoglucuronide e delfinidina monoglucuronide) na urina dos voluntários (Tabela
2 e Fig . 3 ). Deve­se notar que as taxas de excreção para cianidina monoglucuronide não foram determinadas como as concentrações urinárias
estavam abaixo do limite inferior de quantificação (1,3 ng mL ­1 ). A recuperação urinária de antocianinas intactas e metabolitos foi 29,1 ± 12,6 ug
em 24 h, correspondendo a 0,022 ± 0,010% da dose administrada antocianina. Estes dados estão dentro do intervalo conforme relatado na literatura
para as taxas de excreção urinária de antocianinas e metabólitos após a ingestão de alimentos ricos em antocianina (relatado gama: 0,004­5%). 3 , 9 ,
43 Além disso, a detecção de antocianinas intactas e metabolitos está de acordo com resultados relatados por outros: vários estudos de
biodisponibilidade descobriram que as formas glicosídicas de antocianinas são absorvidos intactos e aparecem em fluidos biológicos como plasma
e na urina, enquanto que outros estudos descobriram antocianinas para estar presente na forma de metabolitos (dados­chave de 30 publicados
estudos em humanos que lidam com biodisponibilidade de antocianina foram resumidos por Mazza e Kay). 9

Sem antocianinas HSE nativas ou metabolitos de antocianina comum tais como derivados metilados ou glucuronídicos / conjugados de sulfato
foram encontrados no plasma após o tratamento HSE. Nós minimizado o risco de degradação das antocianinas durante a preparação e
armazenamento da amostra devido ao fato de que usamos métodos avaliadas e armazenadas as amostras em condições adequadas (­80 ° C e ≤ pH
2). 44 , 45 No entanto, apesar destas precauções, não podemos excluir menores perdas durante a amostragem eo processo de extração.

Em um estudo anterior com H. sabdariffa L. extrato, Frank et al. 44 determinadas as concentrações plasmáticas máximas de 2,2 e 1,3 ng mL ­1 para
cianidina­3­sambubioside e delfinidina­3­sambubioside, respectivamente, 1,5 h após a ingestão. No entanto, tem de notar­se que a dose ingerida de
antocianinas totais foi ­300 mg em comparação com o presente estudo (~130 mg). Em um estudo por McKay et al. , 15 os efeitos anti­
hipertensivos dos hibiscus consumo de chá em seres humanos pré e levemente hipertensos foram investigados. Observou­se um efeito de pressão
arterial chá de hibisco redução, mas os autores não conseguiram detectar antocianinas hibiscus no plasma sanguíneo ou na urina dos sujeitos. Com
base nos seus resultados, McKay e colaboradores sugeriram que, devido à baixa dose diária total de antocianina (7,04 mg três porções) as
quantidades absorvidas e excretados de antocianinas podem ter ficado abaixo do limite de detecção no plasma e urina como medido por HPLC.
Outra explicação possível para a detecção de falha de antocianinas hibiscus nos fluidos corporais investigados poderia ser um extenso metabolismo
de delfinidina e cianidina glicosídeos absorvidos.

Recentemente, Vitaglione et al. 43 relataram que o ácido protocatecuico, que exibe uma atividade antioxidante marcado, foi o principal metabólito da
glicosídeos cianidina em seres humanos, representando ~44% dos pigmentos ingeridos em 6 h plasma pós­consumo. Eles concluíram que o
"fenómeno de 'relatado em alguns ensaios clínicos, que o aumento da capacidade antioxidante no plasma não se correlacionar com a quantidade
pequena ou insignificante de antocianinas intactas e / ou os seus metabolitos e glucuronizados metilados, poderia ser explicada pela presença de
ácido protocatecuico . 43 Os metabolitos como o ácido protocatecuico pode ser formado no intestino pequeno, corrente sanguínea e por a
microbiota intestinal (cólon), respectivamente. 43 A presença de ácido protocatecuico e outro ainda não identificado antocianina metabolitos com
actividade antioxidante no plasma e analisadas amostras de urina após HSE consumo não pode ser excluída, uma vez que o procedimento analítico
foi focada na detecção e identificação de antocianinas nativas de SMS e seus glucuronizados comum / derivados metilados. Além disso, a
contribuição significativa dos polifenóis metabolitos para a actividade antioxidante in vivo também foi relatado por outros. 46­48 Assim, seria
altamente desejável, no futuro, in vivo, os estudos com animais e / ou seres humanos para utilizar antocianinas marcados para a identificação de
todos os principais metabolitos, particularmente metabólitos produzidos pelo microbiota intestinal.

Neste estudo, a excreção urinária média de ácido hipúrico aumentada significativamente por 116 mg de 24 h ­1 após o consumo de 200 mL de HSE
(~1.4 ­ dobra aumentar contra controlo). Ácido hipúrico é considerado como sendo um metabolito que resulta da degradação microbiana de
polifenóis no cólon, seguido de conjugação com glicina hepática. 18 ácido hipúrico pode ser um biomarcador da ingestão de polifenóis totais, tendo
sido avaliado como um indicador do consumo urinária polifenol de chá e . Outros alimentos ricos em polifenóis 18 , 49 , 50 Recentemente, Mulder
. et al 51 relataram que o chá preto e chá verde consumo teve efeitos comparáveis ​
sobre a excreção de ácido hipúrico urinário: a dose diária de
polifenóis nos sólidos de chá preto ensaiadas pelo Folin­ Ciocalteu foi 9,08 mmol equivalentes de ácido gálico (GAE), eo correspondente aumento
na excreção hippurate na urina foi 1,86 mmol 24 h ­1 (20%). Para o chá verde, os valores correspondentes foram de 13,3 mmol GAE consumida
por dia, o que resulta em um aumento na excreção urinária de hipurato de 2,33 mmol de 24 h ­1 (18%). No presente estudo, uma dose oral única de
200 mL de HSE (1,4 mmol GAE) resultou numa excreção adicional de 0,65 mmole de ácido hipúrico 24 h ­1 (46% da dose), que indica que os
polifenóis HSE pode ter uma taxa mais elevada em biotransformação os dois pontos em comparação com preto e verde polifenóis do chá. O
significado fisiológico potencial de metabolitos do cólon de polifenóis foi avaliada e resumidos por Williamson e Clifford. 52 Os autores sugerem
que, devido ao facto de que estes catabolitos ocorrer in vivo, em concentrações mais elevadas significativos do que os seus respectivos compostos
parentais, pelo menos parte do biológica actividades atribuídas a polifenóis de plantas são, devido às suas metabolitos do cólon.

CONCLUSÕES
1. Início da página
2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências

No presente estudo, foi possível demonstrar que uma dose oral única de HSE causou um aumento significativo do potencial antioxidante do plasma
humano e urina, bem como uma diminuição significativa na MDA urinária, o que indica a in vivo potencial antioxidante de hibisco. Além disso, um
aumento significativo da excreção urinária de ácido hipúrico no prazo de 24 h após o consumo HSE indica um alto biotransformação dos polifenóis
HSE ingeridas, provavelmente causadas pela microbiota colônica. Para o nosso conhecimento, o presente estudo é o primeiro que descrever tais
efeitos fisiológicos em humanos saudáveis ​ após o consumo HSE aguda. Embora baseado em um pequeno número de indivíduos, nossos
resultados estabeleceram uma base para investigações mais abrangentes para avaliar os potenciais benefícios do consumo HSE tanto aguda como
crónica, e avaliar o modo de ação. Portanto, estudos de seguimento são necessários para identificar os espectros completa de in vivo metabolitos no
plasma e na urina e investigar sua interação com processos de doenças crônicas, utilizando ensaios baseados em células e modelos animais
adequados.

Agradecimentos
1. Início da página
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3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências

Este estudo foi financiado por Plantextrakt GmbH & Co. KG, Vestenbergsgreuth, Alemanha. Os autores agradecem a todos os voluntários que
participaram deste estudo. Além disso, a preparação de cianidina­3­sambubioside e delfinidina­3­sambubioside pelo Prof. Dr. Peter Winterhalter,
Technische Universität Braunschweig (Alemanha) é reconhecido agradecimento.

Referências
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2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
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5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
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