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Frank, T., Netzel, G., Kammerer, DR, Carle, R., Kler, A., Kriesl, E., Bitsch, I., Bitsch, R. e Netzel, M.
(2012), o consumo de Hibiscus sabdariffa L. extrato aquoso e seu impacto no potencial antioxidante
sistêmica em indivíduos saudáveis. J. Sci. . Agric Food, 92: 22072218. doi: 10.1002 / jsfa.5615
* CSIRO Food and Nutritional Sciences, PO Box 745, Archerfield BC, QLD 4108, Austrália.
História publicação
Resumo (/doi/10.1002/jsfa.5615/abstract)
Artigo
Referências (/doi/10.1002/jsfa.5615/references)
Citado por (/doi/10.1002/jsfa.5615/citedby)
Resumo
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3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
FUNDO: Para avaliar os benefícios à saúde atribuídos ao Hibiscus sabdariffa L. um, aberto, randomizado, de duas vias crossover estudo foi
realizado para comparar o impacto de uma solução aquosa H. sabdariffa L. extrair (HSE) sobre o potencial antioxidante sistêmico (AOP;
ensaiada por férrico reduzindo o poder antioxidante (FRAP)) com um tratamento de referência (água) em oito voluntários saudáveis. As
variáveis
foram biocinéticos as áreas sob a curva (AUC) do plasma FRAP, ácido ascórbico e urato que estão acima da concentração de pré
dose, e as quantidades excretadas na urina em 24 h (AE 024 ) de antioxidantes, tal como testado por FRAP , ácido ascórbico, ácido úrico,
malondialdeído (biomarcador para estresse oxidativo), e ácido hipúrico (metabolito e potencial biomarcador para a ingestão de polifenóis
totais).
RESULTADOS: HSE causou significativamente mais elevada da AUC do plasma de FRAP, um aumento em Ae 024 de FRAP, ácido
ascórbico e ácido hipúrico, ao passo que a excreção foi reduzida de malondialdeído. Além disso, as principais antocianinas hibiscus, bem como
um conjugado de glucuronido pode ser quantificados na urina dos voluntários (0,02% da dose administrada).
CONCLUSÃO: O HSE aquosa investigada neste estudo aumentou a AOP sistêmica e reduziu o estresse oxidativo em humanos. Além disso,
o aumento da excreção urinária de ácido hipúrico após o consumo de HSE indica uma alta biotransformação dos polifenóis HSE ingeridas,
muito provavelmente causadas por microbiota do cólon. Copyright © 2012 Sociedade da Indústria Química
INTRODUÇÃO
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3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
Propriedades antioxidantes desencadeados por espécies de plantas têm uma gama completa de aplicações de perspectiva na área da saúde humana.
Nos últimos anos, a prevenção de doenças cardiovasculares e do cancro tem sido associada com a ingestão de frutas, vegetais ou chás ricos em
antioxidantes naturais, o que sugere que uma maior ingestão de tais compostos poderiam reduzir o risco de mortalidade por estas doenças. 1 , 2
alimentos vegetais contêm fibras, vitaminas, fitoesteróis, compostos de enxofre, carotenóides e ácidos orgânicos, que contribuem para os efeitos
sobre a saúde, mas também contêm uma variedade de polifenóis, que são cada vez mais considerados agentes de protecção eficazes. 3 Portanto, em
busca de fontes de novos antioxidantes, nos últimos anos algumas plantas medicinais têm sido amplamente estudados para determinar seu potencial
antioxidante e atividade de eliminação de radicais. 4
Roselle Tropical ( Hibiscus sabdariffa L., Malvaceae) é anual, ereta, espesso, herbáceo subarbusto que cresce a 8 pés (2,4 m) de altura e
geralmente consiste de um cálice vermelho com cinco grandes sépalas. 5 H. sabdariffa extractos são uma rica fonte de polifenóis, com antocianinas
como os principais constituintes fenólicos. Peng et al. 6 pode detectar e caracterizar, de H. sabdariffa extracto, antocianinas (por exemplo,
delfinidina3sambubioside e cianidina3sambubioside), kaempferol3glucósido, um derivado de quercetina, bem como vários ácidos fenólicos e
os seus derivados, tais como o ácido gálico, ácido protocatecuico, ácido 5cafeoilquínico, 4 caffeoylquinic ácido, ácido clorogênico, derivado
feruloilquínicos, e ácido cafeico. As antocianinas são responsáveis
pelas cores vermelhas, púrpuras e azuis de muitas frutas e legumes. Eles
também fornecem a indústria de alimentos com substitutos naturais para alguns alimentos corantes sintéticos. 7 Os mais comuns que ocorrem
naturalmente antocianinas são os 3 O glucosides ou 3,5di O glucosides de cianidina, delfinidina (em ordem crescente de hidroxilação) ,
peonidina, petunidina e malvidina (em ordem crescente de metoxilação). 8 , 9 Numerosos estudos, principalmente in vitro experimentos e animais,
demonstraram uma ampla gama de propriedades biológicas para as antocianinas, incluindo antioxidante, antiinflamatória, antimicrobiana e anti
cancerígena atividades. 9 Sua ingestão diária foi estimada entre 12,5 mg nos EUA e 82 mg na Finlândia, que é consideravelmente maior do que o
consumo estimado para muitos outros polifenóis. 9 , 10 delfinidina3sambubioside e cianidina3sambubioside foram identificada como a principal
antocianina hibiscus, com delfinidina3glucósido e cianidina3glucósido que ocorrem em quantidades menores. 8
As acções farmacológicas de extractos cálice incluem forte in vitro e in vivo, actividade antioxidante. 11 Indução de apoptose em células de
leucemia humana e de células de carcinoma gástrico humano pode ser demonstrada com delfinidina3sambubioside e um extracto de hibisco rico
em polifenóis, respectivamente. 12 , 13 ou extractos de flores Além disso, secas H. sabdariffa são ingredientes populares na medicina herbal
asiática e são usados
para tratar a hipertensão, febre, doenças do fígado e inflamação. 1214 Recentemente, McKay et al. 15 relataram que o
consumo diário de três porções de H. sabdariffa (hibisco) de chá, uma quantidade facilmente incorporados na dieta, de forma eficaz em baixar a
pressão arterial préadultos e levemente hipertensos.
Não há dúvida de que os benefícios de saúde atribuída a H. sabdariffa precisa de ser ligada à exposição sistémica à fracção de compostos ingeridas
que estão disponíveis para a actividade antioxidante e fisiológica, respectivamente. Somente estudos de intervenção humanas utilizando H.
sabdariffa são capazes de determinar a sua eficácia na prevenção de doenças crônicas e estabelecer recomendações de dose baseadas na ciência.
O presente estudo foi realizado para determinar o efeito de uma única administração oral de uma solução aquosa H. sabdariffa extrair em sistêmica,
ou seja, ex vivo potencial antioxidante (AOP), avaliadas pela férrico reduzindo o poder antioxidante (FRAP) de ensaio em mulheres jovens
caucasianos do sexo masculino e saudável. As concentrações plasmáticas contra foram analisados cursos de tempo e as alterações da linha de base
(isto é, valor de prédose), bem como o AOP de urina. Para caracterizar a fracção de compostos fenólicos ingeridas que reforcem a AOP, a área
sob a curva (AUC) acima da linha de base foi derivado a partir das concentrações de plasma individuais.
MATERIAL E MÉTODOS
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5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
Chemicals
A menos que indicado de outra forma, todos os produtos químicos foram adquiridos a Merck (Darmstadt, Alemanha). Delfinidina3glucósido foi
comprado de polifenóis Laboratories como (Sandnes, Noruega), cianidina3glucósido foi fornecida por Roth (Karlsruhe, Alemanha), e cianidina
3sambubioside e delfinidina3sambubioside foram fornecidas pelo Institute of Química Alimentar da Technische Universität Braunschweig
(Alemanha). Água deionizada foi utilizada por toda parte.
Assuntos
Oito voluntários não fumadores saudáveis
(quatro homens e quatro mulheres) com idades entre 2227 anos (idade média de 24 ± 1,9 anos) e um
índice de massa corporal médio de 21,6 (± 2,7 kg m 2 ) foram incluídos se encontrou com o seguinte critérios de inclusão: 1845 anos de idade e
de boa condição clínica geral, avaliada pela história clínica. Indivíduos com hipersensibilidade conhecida de drogas, história de doença psiquiátrica
ou médica clinicamente significativa, estenose aórtica, a gravidez (incluindo gravidez presumida), lactação, padrão patológico de ECG, ou história
de abuso de drogas ou álcool foram excluídos. O estudo foi realizado em conformidade com a Declaração de Helsinque (Versão Outubro de 2000)
e alterações e exigências regulatórias internacionais e locais. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Friedrich Schiller de
Jena, Faculdade de Medicina (código 16561611 / 05). Os indivíduos deram seu consentimento informado por escrito antes da participação no
estudo.
Bebidas
As seguintes bebidas do estudo foram administradas:
Após uma noite de jejum, os tratamentos foram tomados em conjunto com pães brancos às 8:00 am no dia de estudo. Nesses dias, em ambos os
períodos, apenas o consumo de água ( ad libitum ) e duas refeições padronizadas (dois rolos de pão de trigo branco com 60 g de queijo fatiado
(Gouda) para almoço e jantar, respectivamente) era permitido. As amostras de sangue venoso foram feitas prédose (tempo 0), bem como 0,5, 1,
1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6, 8 e 10 h após a administração. Cada amostra de sangue (18 ml) foi recolhido num tubo revestido de ácido
etilenodiaminotetracético. As amostras de sangue foram centrifugadas (10 minutos, 2000 x g , 8 ° C) dentro de 10 min após a recolha para a
preparação do plasma.
Além disso, anulado urina dos indivíduos nos períodos 1 e 2 foram coletados durante 24 h após o tratamento em recipientes de laboratório de urina
escura. Durante o período de recolha de urina foi armazenada a 4 ° C, e foram adicionados conservantes. Para análise de metabolitos de HSE e
antocianinas, as alíquotas de plasma (2 ml) e de urina (7 mL) foram estabilizados com 0,44 mol L 1 ácido trifluoroacético (TFA; 0,4 mL) e ácido
fórmico (2 ml), respectivamente, enquanto que para o A análise do ácido ascórbico e ácido úrico alíquotas de plasma (0,6 ml) e de urina (1 ml)
foram estabilizadas com um volume igual de 10% (w / v) de meta fosfórico. Todas as amostras foram armazenadas congeladas a 80 ° C até ser
analisado.
Procedimentos
Ensaio FRAP
O ex vivo AOP no plasma e urina, bem como a capacidade antioxidante de HSE foram medidos fotometricamente utilizando o ensaio de acordo
com FRAP Schlesier et al. 21 e Benzie e Strain, 20 com pequenas modificações. 30 ul de água desionizada e uma solução a 10 ul de amostra (HSE,
plasma ou urina) foram misturados com 200 ul de reagente FRAP que consiste de cloreto férrico e 2,4,6tripyridyl s triazina (TPTZ) em tampão
de acetato. A absorvância foi medida após 8 minutos a 595 nm com um leitor de microplacas Anthos modelo HT2 (Anthos, Krefeld, Alemanha). A
AOP / capacidade antioxidante foi calculada utilizando a diferença de absorvância entre a amostra e em branco e uma solução adicional paralela Fe
(II) padrão, e os resultados foram expressos em micromoles ou milimoles de Fe 2+ equivalentes.
Plasma: O cartucho foi lavado com 10 mL de metanol e equilibrada com 10 ml de 1,5 mol L 1 ácido fórmico. Posteriormente, 2 mL de amostra de
plasma diluído com 0,4 ml de 0,44 mol L 1 solução de TFA foi aplicada ao cartucho equilibrada. Os componentes solúveis em água, bem como
lipidos polares e neutros foram removidos em sucessão por 10 mL de ácido fórmico (1,5 mol L 1 ), 10 mL de diclorometano e 10 mL de benzeno.
As antocianinas foram eluídos com 10 ml de 0,44 mol L 1 TFA em metanol. A fase de metanol foi recolhida e o solvente foi removido sob vácuo
com um evaporador rotativo (ER 121 Rotavap, Buchi, Flawil, Suíça), com a temperatura do banho mantida a 30 ° C. Os extractos foram
redissolvidos em 300 mL de fase móvel de HPLC antes da análise. Alíquotas de 15 ul (para a identificação de metabolitos de HSE antocianinas e
detecção por HPLC de matriz de fotodiodos (PDA) ionização electrospray (ESI) Espectrometria de massa tandem (MS / MS); sistema de I) e de
50 mL (para quantificação por HPLC PDA, sistema II), respectivamente, foram utilizados para análise por HPLC.
Urina: acidificados amostras de urina foram descongeladas e mantidas durante 60 minutos à temperatura ambiente antes da extracção em fase
sólida (SPE) para obter o rendimento máximo dos catiões flavílio coloridas. O cartucho de SPE foi activada com 10 mL de metanol e equilibrada
com 10 ml de 12 mmol L 1 HCl aquoso antes da utilização. Subsequentemente, 9 ml de urina acidificada foi aplicada ao cartucho equilibrada. O
cartucho foi então lavado com 10 ml de 12 mmol L 1 HCl aquoso, e antocianinas foram eluídos com 15 ml de 12 mmol L 1 HCl em metanol. O
extracto metanólico foi evaporado sob azoto até um volume de 1 ml a 35 ° C. Alíquotas de 15 ul (para a identificação de metabolitos de HSE e
antocianinas, sistema de I) e de 50 mL (para quantificação, o sistema II), respectivamente, foram utilizados para análise por HPLC.
Ácido hipúrico: urina não tratado foi centrifugado a 8400 x g e diluiuse com água desionizada (1: 200, v / v) antes da análise de HPLC (sistema
II). Alíquotas da amostra para análise LCMS (Sistema I) foram preparados utilizando SPE como descrito para antocianinas e metabolitos de SMS.
A HSE diluído foi centrifugado (5 min, 8400 × g , 8 ° C) e analisadas quanto antocianinas sob as mesmas condições que as descritas abaixo
(sistema II).
Identificação de antocianinas HSE, antocianina metabolitos, e ácido hipúrico (sistema I): Caracterização de compostos fenólicos de HSE foi
conduzida utilizando uma série de HPLC Agilent 1100 (Agilent, Waldbronn, Alemanha), equipado com software ChemStation, um desgaseificador
G1379A, uma bomba de gradiente binário G1312A , um amostrador automático G1313A, um forno de coluna G1316A e um detector de conjunto
diodo G1315B. A separação foi realizada com uma coluna Phenomenex ® coluna de Aqua (250 x 4,6 mm di; 5 um) com uma coluna de guarda
C18 ODS (4,0 x 2,0 mm ID) operado a uma temperatura de 25 ° C. A fase móvel (antocianinas e metabolitos de antocianina) consistiu de
acetonitriloácido fórmicoágua (87: 10: 3, v / v / v, eluente A) e de ácido fórmico e acetonitriloágua (40:10:50, v / v / v, eluente B) usando um
programa de gradiente da seguinte forma: 10% de B até 25% de B (10 min), 25% de B até 31% de B (5 min), 31% de B até 40% de B (5 min),
40% de B até 50% de B (10 min), 50% de B a 100% de B (10 minutos), 100% de B até 10% de B (5 min), isocrático 10% B (5 min). A
monitorização foi realizada a 520 nm com um caudal de 0,8 ml min 1 . Para a separação de compostos fenólicos não antocianina um sistema
solvente de 2% (v / v) de ácido acético em água (eluente A) e de ácido acético a 0,5% em água e acetonitrilo (50:50, v / v; eluente B) com o seguinte
programa de gradiente foi utilizado: 10% de B até 24% de B (20 min), 24% de B até 30% de B (20 min), 30% de B até 55% de B (20 min), 55% de
B a 100% de B (15 min), isocrático 100% B (8 minutos), 100% de B a 10% B (2 min), 10% isocrático B (5 min). A monitorização foi realizada a
280 nm com um caudal de 1,0 ml min 1 . O sistema de HPLC foi acoplado online a um Bruker (Bremen, Alemanha) modelo Esquire 3000+
espectrómetro de massa de armadilha de iões utilizando uma interface entre ESI e software de controlo Esquire. Positivos (antocianinas) e
compostos fenólicos (nãoantocianinas) espectros de massa de íons negativos, respectivamente, foram registrados no intervalo de m / z 501000.
Utilizouse azoto como gás de secagem a um caudal de 11 L min 1 e como nebulização de gás a uma pressão de 65 psi (antocianinas); os
parâmetros para a análise de compostos fenólicos não antocianina foram de 12 L min 1 e 70 psi, respectivamente. A temperatura nebulizador foi
fixada em 365 ° C e um potencial de ± 4000 V foi utilizado no capilar. Hélio foi utilizado como gás de colisão a uma pressão de 4,0 x 10 6 mbar.
Os espectros de dissociação foram obtidas com uma amplitude de fragmentação de 1,0 V.
Quantificação de antocianinas HSE, metabolitos, e ácido hipúrico (sistema II): Quantificação de antocianinas HSE e metabolitos no plasma e na
urina foi realizada seguindo o método de Kammerer et al. 23 O sistema de HPLC consistiu de uma bomba de L6200, um AS 4000 autoinjector
(MerckHitachi, Darmstadt, Alemanha), e um detector de conjunto de fotodíodos 990 (Waters, Eschborn, Alemanha) equipado com uma coluna
Prontosil Eurobond RP18 (5 um, 250 x 4,0 mm di, Bischoff, Leonberg , Alemanha) e um LiChrospher ® 100 RP18, précoluna (5 um, 4,0 x 4,0
mm di, Merck). A HPLC analítica foi realizada à temperatura ambiente. A composição da fase móvel, programa de gradiente, o comprimento de
onda de detecção, bem como a taxa de fluxo era o mesmo que o descrito para o sistema de antocianinas (I). Antocianinas e metabolitos individuais
HSE foram quantificados usando curvas de calibração externa de cianidina3glucósido, cianidina3sambubioside, delfinidina3glucósido e
delfinidina3sambubioside.
Ácido hipúrico foram analisados e quantificados de acordo com o método de HPLC relatados por Kubota et ai. , 28 com ligeiras modificações. As
amostras foram eluídas por uma coluna RP18 Prontosil Eurobond sob condições isocráticas com acetonitriloácido acéticoágua (78: 20: 2, v / v /
v; pH 2,2), e monitorizada a 235 nm. As concentrações urinárias de ácido hipúrico foram calculados a partir de uma curva de calibração externa
ácido hipúrico.
Intradia e interdia variabilidade provou ser inferior a 10% para todos os métodos analíticos.
Além disso, as quantidades de antioxidantes ensaiadas por FRAP, MDA, antocianinas HSE e metabolitos, ácido hipúrico, ácido ascórbico e ácido
úrico excretada na urina de 24 h (AE 024 ) foram determinados por multiplicação da concentração da respectiva substância a analisar na urina pela
volume da amostra de urina de 24 h.
As variáveis
biocinéticos no plasma e urina foram sintetizadas usando o número de observações, média aritmética e desvio padrão (DP), mínimo,
máximo e médio para cada tratamento.
Variáveis
não transformadas, da linha de base, AUC acima da linha de base e Ae 024 foram analisados
com um modelo linear de efeitos mistos
com prazos fixos para tratamento, período, seqüência e sexo, e termo aleatório para indivíduo dentro da sequência por sexo:
ajustados por mínimos quadrados generalizados (GLS), com máxima verossimilhança (REML) estimativas restritos de variâncias e covariâncias,
usando WinNonlin ® , versão 5.2.1 (Pharsight Corporation). Para linha de base, a AUC acima da linha de base e Ae 024 , estimar e 90% de
intervalo de confiança (IC) para a relação entre os meios de tratamento (HSE / água) foram obtidos calculando estimativa e IC 90% para o contraste
dando a diferença entre as médias dos tratamentos no âmbito modelo linear de efeitos mistos. A linha de base variável foi submetido a análise, a fim
de verificar se o pressuposto de que não efeitos de reporte é viável. Para verificar se a suposição de distribuição normal é válido, foram criadas
parcelas QQ dos residuais. Não foi feita nenhuma adaptação do nível de alfa para múltiplas análises.
Coeficientes de correlação de Pearson foram calculados para explorar a relação entre cada ácido ascórbico e ácido úrico em relação as
concentrações plasmáticas de FRAP, respectivamente.
O nível de significância estatística foi fixado em P <0,05. Todos os testes estatísticos foi puramente exploratória.
RESULTADOS
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2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
Plasma
Concentração versus tempo curvas de ácido ascórbico, ácido úrico e
FRAP
As alterações absolutas da linha de base de ascórbico e ácido úrico, bem como os níveis plasmáticos de FRAP em diferentes tempos de
amostragem após a administração de HSE ou água são apresentados na Fig. 1 . Em média, houve apenas pequenas alterações nas concentrações
plasmáticas de ascórbico e ácido úrico contra o tempo na comparação dos dois tratamentos. A maior variação média da concentração no plasma foi
atingido FRAP 1 h pósdose (Fig. 1 ). Começando a partir de 2 h após a dose o nível plasmático FRAP média diminuiu continuamente abaixo do
nível prédose, após administração de HSE. Após a administração de água, houve um declínio quase linear no nível médio de plasma FRAP abaixo
do nível prédose (Fig. 1 ).
Variáveis
biocinéticos
Os dados sobre a extensão da alteração da capacidade antioxidante no plasma, tal como caracterizada pela AUC acima da linha de base são
resumidos na Tabela 1 . Os valores da linha de base (definida como os níveis de prédose a t = 0 h) são também apresentados na Tabela 1 . Os
dados sobre a excreção urinária são relatados na Tabela 2 . As estimativas de relações de tratamento de HSE (teste) contra água (de referência) em
conjunto com os limites de confiança de 90% estão detalhadas na Tabela 3 .
Tratamento
Linha
Parâmetro AUC acima da de base AUC acima da Linha
Parâmetro AUC acima da de base AUC acima da Linha
analítico linha de base a b linha de base de Base
FRAP c N 8 8 8 8
SD 85,9 113
O ácido N 8 8 8 8
ascórbico d
O ácido N 8 8 8 8
úrico d
uma AUC acima da linha de base = área sob a curva que está acima da linha
de base, calculada de acordo com a regra trapezoidal linear.
b Linha de base = a última concentração no plasma não ausentes antes da
ingestão da bebida estudo, isto é, valor de prédose em t = 0 horas no
dia do estudo.
c Unidade de linha de base: umol L 1 ; AUC: h? Mol L 1 .
d Unidade de linha de base: mg L 1 ; AUC: mg L h 1 .
Os valores são arredondados para três algarismos significativos.
Tabela 2. Resumo da quantidade excretada nas primeiras 24 h na urina (Ae 024 )
após a administração de uma dose oral única de uma solução aquosa Hibiscus
sabdariffa L. extrato ou água para indivíduos jovens e saudáveis
Tratamento
FRAP (mmol) N 8 8
MDA (nmol) N 8 8
Delfinidina3sambubioside N 8 8
(ug)
Média ± SD 6,54 ± 3,41 nd
Cianidina3sambubioside N 8 8
(ug)
Monoglucuronide N 8 8
delfinidina (ug)
Índice de tratamento de
Biocinéticos Hibiscus / água (90%
Parâmetro variável intervalo de confiança) Significância
Matriz analítico (unidade) um ( P valor) b
ascórbico (mg L 1 )
AUC ácido ascórbico acima dos valores basais foram 3,84 ± 5,45 mg L h 1 após o tratamento HSE e 2,47 ± 2,89 mg L h 1 após a água (Tabela 1
). A diferença entre os dois tratamentos não foi estatisticamente significativa (ver Tabela 3 ). A AUC acima dos valores da linha de base de ácido
úrico variou entre 0,0 e 20,1 mg L h 1 (valor médio 7,82 ± 7,52 mg L h 1 ) após o tratamento HSE, e entre 0,0 e 74,2 mg L h 1 (valor médio de
14,4 ± 25,6 h mg L 1 ), depois água (ver Tabela 1 ), com nenhuma diferença significativa entre os dois tratamentos (ver Tabela 3 ). A Tabela 3
também mostra basal quase idêntica (prédose), os níveis de FRAP entre tratamentos, enquanto que uma linha de base estatisticamente significativa
inferior ascórbico e ácido úrico foi comprovada mediante a administração de HSE. Não houve períodos, seqüência ou sexuais efeitos significativos,
quer na linha de base ou na AUC acima da linha de base.
As antocianinas ou metabolitos de antocianina comum, tais como formulários desnaturado ou glucuronídicos / conjugados de sulfato não foram
detectados nas amostras de plasma após o tratamento HSE.
Urina
FRAP Ae 024 valores variaram 4,6610,7 mmol, com um valor médio de 7,75 ± 1,80 mmol após o tratamento HSE e 6,14 ± 1,72 mmol depois da
água. Ácido hipúrico ( m / z 178/134) Ae 024 valores variaram 180541 mg, com um valor médio de 447 ± 78,1 mg após o tratamento HSE e 331
± 86,9 mg depois da água. MDA Ae 024 valores variaram 1,183,18 mol com um valor médio de 1,60 ± 0,38 nmol após o tratamento HSE e 2,08
± 0,69 nmol depois da água. Ae 024 de ácido ascórbico foi de 12,7 ± 5,66 mg após HSE e 8,48 ± 6,10 mg após água. Ae 024 de ácido úrico foi
213 ± 81,3 mg após HSE e 249 ± 131 mg após a água (Tabela 2 ). Excepto para o ácido úrico, a diferença de tratamento foi estatisticamente
significativa para cada analito urinário ensaiados (ver Tabela 3 ). Houve um efeito significativo sobre a sequência Ae 024 de ácido ascórbico, e um
efeito significativo sobre o sexo Ae 024 de FRAP, ácido hipúrico e MDA.
A média Ae 024 de antocianinas de hibisco e metabolitos (soma) foi de 29,1 ± 12,6 mg após o tratamento HSE. Cianidina3sambubioside foi a
principal antocianina (18,7 ± 11,4 g) (Tabela 2 ). Os espectros de massa de experiências representativas de dissociação induzida por colisão
corroborando atribuição de pico encontramse ilustrados na Fig. 3 . No início do estudo e no tratamento controle, nenhuma das amostras de urina
continha quaisquer quantidades detectáveis de antocianinas ou metabolitos de antocianina comum (por exemplo, derivados de antocianinas
metilados e / ou glucuronada).
Os pressupostos subjacentes ao projeto de cruzamento foram atendidas: não houve seqüência ou período efeitos estatisticamente significativos
(com as exceções acima mencionadas) que teria invalidado o julgamento.
Os coeficientes de correlação para o ácido ascórbico plasma contra os níveis plasmáticos FRAP foram 0,17 (HSE, P > 0,05) e 0,12 (água, P >
0,05), respectivamente. Os coeficientes de correlação de ácido úrico no plasma contra níveis FRAP plasma foram 0,49 (HSE, P <0,001) e 0,40
(água, P <0,001), respectivamente (Fig. 4 ).
DISCUSSÃO
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7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
O objetivo do presente estudo foi avaliar o impacto de uma dose oral única de um extrato aquoso de H. sabdariffa L. (HSE) na AOP sistêmica. Os
dados obtidos a partir de oito voluntários saudáveis
de ambos fêmea indicam que o consumo de HSE levou a um AOP melhorada em comparação
com a água utilizada como um tratamento de referência. A AOP reforçada como ensaiado pelo FRAP foi de natureza a curto prazo com um tempo
médio de pico por volta de 1 hora após a administração. Este resultado está em linha com os resultados relatados por outros: aumento da AOP de
plasma ensaiado por FRAP foi observada após o consumo de vinho tinto e uísque, 30 de espinafre e morangos, 31 chá preto e chá verde, 32 , bem
como farelo de trigo. 33
Como mostrado na Tabela 2 , houve um aumento da quantidade de antioxidantes ensaiadas por FRAP excretada nas voluntários 24 h de urina após
o consumo de HSE, em comparação com água. Resultado semelhante foi encontrado em um estudo recentemente publicado. Preço et al. 33
relataram um aumento significativo em polifenois totais urinários e potencial antioxidante (ensaiado por FRAP) em 18 indivíduos saudáveis
após o
consumo de ricos em polifenóis farelo de trigo. Deve notarse que Tepel et al. 34 indicado no comentário sobre as terapias antioxidantes e doenças
vasculares que os antioxidantes podem prevenir a diminuição da função renal aguda causada por isquemia, meios de contraste ou drogas. Portanto,
o reforço da concentração urinária em antioxidantes pode ter relevância fisiológica relativa à protecção do tecido renal funcional.
O ácido ascórbico e ácido úrico são antioxidantes importantes nos fluidos biológicos tais como sangue e urina e contribuir substancialmente para o
in vivo da capacidade antioxidante. 16 , 17 Uma vez que o ensaio mede FRAP uma ampla variedade de antioxidantes do plasma e urina, incluindo o
ácido úrico e ácido ascórbico, 20 , 35 , 36 ambos os compostos foram determinados para excluir a possibilidade de que o aumento em AOP
observada após a ingestão de HSE foi devido ao aumento dos níveis destes antioxidantes. Além disso, estudos anteriores demonstraram a
correlação do consumo de frutose e o aumento das concentrações de ácido úrico no plasma humano e, subsequentemente, aumentar a capacidade
antioxidante do plasma. 37 , 38 Uma vez que os níveis de ácido ascórbico e de urato não se alterou de forma significativa a partir da linha de base
após o consumo de SMS, que não continha mensurável quantidades de frutose ou outros açúcares, concluímos que o AOP plasma reforçada foi
provavelmente causado por compostos fenólicos de SMS e seus metabólitos. Esta opinião é corroborada pelo fato de que encontramos apenas uma
fraca correlação entre o ácido úrico e FRAP, mas nenhuma correlação entre o ácido ascórbico e FRAP. Tal como demonstrado para o plasma, os
nossos dados de amostras de urina, também demonstraram que o consumo de HSE não resultou em reduções estatisticamente significativas maior
excreção de ácido úrico em 24 h. Em contraste com a AUC no plasma acima da linha de base, houve um aumento da proporção acentuadamente
tratamento para Ae 024 de ácido ascórbico superior a 20% de referência (água). Este resultado é surpreendente uma vez que a HSE testado era
praticamente desprovido de ácido ascórbico. Assim, não se pode excluir que o aumento de AOP na urina é confundida pelo aumento da excreção
de ácido ascórbico após ingestão de HSE (12,7 contra 8,48 mg dentro de 24 h). No entanto, como média a excreção de ácido úrico no prazo de 24
horas após o consumo de HSE foi ~36 mg inferior (tendência; P > 0,05) em comparação com o controlo (213 contra 249 mg), é improvável que o
pequeno aumento (valor absoluto) de ácido ascórbico tem um efeito significativo sobre a AOP urinária após a ingestão HSE.
Nós minimizado o impacto do pequeno número de indivíduos recrutados usando o desenho do estudo crossover. Nós encontramos ácido ascórbico
plasmático elevado estatisticamente significativa e os níveis de nosso estudo no tratamento de controle de linha de base de urato (prédose). Estas
medidas de base foram período dependente e pode indicar que o período de eliminação não foi suficiente para garantir que essas linhas de base não
são influenciados pelo tratamento anterior; isto é, eles foram afectados por arrastamento. É também possível que confusão, tais como variações
sazonais de temperatura, a exposição a alérgenos do ambiente, a poluição e os agentes patogénicos podem ter influenciado ascórbico e ácido úrico
no estado sujeitos. No entanto, esta observação não invalida os resultados deste estudo uma vez que a AUC do cálculo baseiase nas alterações que
se refere à linha de base. Além disso, o impacto de eventuais diferenças de base em um estudo cruzado foi minimizado, pois cada sujeito agiu como
seu próprio controle.
MDA urinária foi significativamente reduzido de 2,08 ± 0,691,60 ± 0,38 pmol (23% contra controlo) após o consumo e valores HSE estão na
mesma gama como relatado por Piche et al. 39 para adultos humanos (2,05 mol). MDA urinário tem sido amplamente utilizado em modelos
animais e em seres humanos como um biomarcador nãoinvasiva da peroxidação lipídica induzida pelo stress oxidativo. 19 A excreção reduzida
MDA sugere que a produção renal de MDA e / ou a produção sistémica de MDA foram reduzidos após HSE ingestão. MDA foi encontrada em
níveis elevados em várias doenças relacionadas com a supostamente danos dos radicais livres. 40 Recentemente, Gorelik et al. 41 demonstraram
significativamente diminuída taxas de excreção urinária de MDA 6 horas após o consumo de costeletas de peru com vinho tinto, em comparação
com um controlo (em um estudo cruzado randomizado com 10 indivíduos saudáveis). Com base nos seus resultados, que sugeriu que os polifenóis
do vinho tinto exercer um efeito benéfico por uma nova função: a inibição da absorção de MDA, devido à formação de um aduto entre polifenóis
do vinho tinto e aldeídos no tracto gastrointestinal. Num outro estudo duplocego, randomizado, cruzado com 12 homens saudáveis, Weinbrenner
et al. 42 , demonstrou uma redução significativa em MDA urinária (24 h de urina) na sequência de uma intervenção de 4 dias com azeites que
contêm diferentes quantidades de compostos fenólicos. A diminuição observada no MDA urinária após a ingestão HSE no presente estudo sugere
que os compostos antioxidantes do hibiscus, tanto em suas formas intactas ou como metabólitos, pode ter um efeito redutor sobre o estresse
oxidativo in vivo e, portanto, poderia proporcionar benefícios protetores para a saúde humana.
O consumo de HSE resultou no aparecimento de antocianinas HSE nativos (cianidina3sambubioside e delfinidina3sambubioside) e, pelo
menos, de dois metabolitos identificados antocianina cianidina (monoglucuronide e delfinidina monoglucuronide) na urina dos voluntários (Tabela
2 e Fig . 3 ). Devese notar que as taxas de excreção para cianidina monoglucuronide não foram determinadas como as concentrações urinárias
estavam abaixo do limite inferior de quantificação (1,3 ng mL 1 ). A recuperação urinária de antocianinas intactas e metabolitos foi 29,1 ± 12,6 ug
em 24 h, correspondendo a 0,022 ± 0,010% da dose administrada antocianina. Estes dados estão dentro do intervalo conforme relatado na literatura
para as taxas de excreção urinária de antocianinas e metabólitos após a ingestão de alimentos ricos em antocianina (relatado gama: 0,0045%). 3 , 9 ,
43 Além disso, a detecção de antocianinas intactas e metabolitos está de acordo com resultados relatados por outros: vários estudos de
biodisponibilidade descobriram que as formas glicosídicas de antocianinas são absorvidos intactos e aparecem em fluidos biológicos como plasma
e na urina, enquanto que outros estudos descobriram antocianinas para estar presente na forma de metabolitos (dadoschave de 30 publicados
estudos em humanos que lidam com biodisponibilidade de antocianina foram resumidos por Mazza e Kay). 9
Sem antocianinas HSE nativas ou metabolitos de antocianina comum tais como derivados metilados ou glucuronídicos / conjugados de sulfato
foram encontrados no plasma após o tratamento HSE. Nós minimizado o risco de degradação das antocianinas durante a preparação e
armazenamento da amostra devido ao fato de que usamos métodos avaliadas e armazenadas as amostras em condições adequadas (80 ° C e ≤ pH
2). 44 , 45 No entanto, apesar destas precauções, não podemos excluir menores perdas durante a amostragem eo processo de extração.
Em um estudo anterior com H. sabdariffa L. extrato, Frank et al. 44 determinadas as concentrações plasmáticas máximas de 2,2 e 1,3 ng mL 1 para
cianidina3sambubioside e delfinidina3sambubioside, respectivamente, 1,5 h após a ingestão. No entanto, tem de notarse que a dose ingerida de
antocianinas totais foi 300 mg em comparação com o presente estudo (~130 mg). Em um estudo por McKay et al. , 15 os efeitos anti
hipertensivos dos hibiscus consumo de chá em seres humanos pré e levemente hipertensos foram investigados. Observouse um efeito de pressão
arterial chá de hibisco redução, mas os autores não conseguiram detectar antocianinas hibiscus no plasma sanguíneo ou na urina dos sujeitos. Com
base nos seus resultados, McKay e colaboradores sugeriram que, devido à baixa dose diária total de antocianina (7,04 mg três porções) as
quantidades absorvidas e excretados de antocianinas podem ter ficado abaixo do limite de detecção no plasma e urina como medido por HPLC.
Outra explicação possível para a detecção de falha de antocianinas hibiscus nos fluidos corporais investigados poderia ser um extenso metabolismo
de delfinidina e cianidina glicosídeos absorvidos.
Recentemente, Vitaglione et al. 43 relataram que o ácido protocatecuico, que exibe uma atividade antioxidante marcado, foi o principal metabólito da
glicosídeos cianidina em seres humanos, representando ~44% dos pigmentos ingeridos em 6 h plasma pósconsumo. Eles concluíram que o
"fenómeno de 'relatado em alguns ensaios clínicos, que o aumento da capacidade antioxidante no plasma não se correlacionar com a quantidade
pequena ou insignificante de antocianinas intactas e / ou os seus metabolitos e glucuronizados metilados, poderia ser explicada pela presença de
ácido protocatecuico . 43 Os metabolitos como o ácido protocatecuico pode ser formado no intestino pequeno, corrente sanguínea e por a
microbiota intestinal (cólon), respectivamente. 43 A presença de ácido protocatecuico e outro ainda não identificado antocianina metabolitos com
actividade antioxidante no plasma e analisadas amostras de urina após HSE consumo não pode ser excluída, uma vez que o procedimento analítico
foi focada na detecção e identificação de antocianinas nativas de SMS e seus glucuronizados comum / derivados metilados. Além disso, a
contribuição significativa dos polifenóis metabolitos para a actividade antioxidante in vivo também foi relatado por outros. 4648 Assim, seria
altamente desejável, no futuro, in vivo, os estudos com animais e / ou seres humanos para utilizar antocianinas marcados para a identificação de
todos os principais metabolitos, particularmente metabólitos produzidos pelo microbiota intestinal.
Neste estudo, a excreção urinária média de ácido hipúrico aumentada significativamente por 116 mg de 24 h 1 após o consumo de 200 mL de HSE
(~1.4 dobra aumentar contra controlo). Ácido hipúrico é considerado como sendo um metabolito que resulta da degradação microbiana de
polifenóis no cólon, seguido de conjugação com glicina hepática. 18 ácido hipúrico pode ser um biomarcador da ingestão de polifenóis totais, tendo
sido avaliado como um indicador do consumo urinária polifenol de chá e . Outros alimentos ricos em polifenóis 18 , 49 , 50 Recentemente, Mulder
. et al 51 relataram que o chá preto e chá verde consumo teve efeitos comparáveis
sobre a excreção de ácido hipúrico urinário: a dose diária de
polifenóis nos sólidos de chá preto ensaiadas pelo Folin Ciocalteu foi 9,08 mmol equivalentes de ácido gálico (GAE), eo correspondente aumento
na excreção hippurate na urina foi 1,86 mmol 24 h 1 (20%). Para o chá verde, os valores correspondentes foram de 13,3 mmol GAE consumida
por dia, o que resulta em um aumento na excreção urinária de hipurato de 2,33 mmol de 24 h 1 (18%). No presente estudo, uma dose oral única de
200 mL de HSE (1,4 mmol GAE) resultou numa excreção adicional de 0,65 mmole de ácido hipúrico 24 h 1 (46% da dose), que indica que os
polifenóis HSE pode ter uma taxa mais elevada em biotransformação os dois pontos em comparação com preto e verde polifenóis do chá. O
significado fisiológico potencial de metabolitos do cólon de polifenóis foi avaliada e resumidos por Williamson e Clifford. 52 Os autores sugerem
que, devido ao facto de que estes catabolitos ocorrer in vivo, em concentrações mais elevadas significativos do que os seus respectivos compostos
parentais, pelo menos parte do biológica actividades atribuídas a polifenóis de plantas são, devido às suas metabolitos do cólon.
CONCLUSÕES
1. Início da página
2. Resumo
3. INTRODUÇÃO
4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
No presente estudo, foi possível demonstrar que uma dose oral única de HSE causou um aumento significativo do potencial antioxidante do plasma
humano e urina, bem como uma diminuição significativa na MDA urinária, o que indica a in vivo potencial antioxidante de hibisco. Além disso, um
aumento significativo da excreção urinária de ácido hipúrico no prazo de 24 h após o consumo HSE indica um alto biotransformação dos polifenóis
HSE ingeridas, provavelmente causadas pela microbiota colônica. Para o nosso conhecimento, o presente estudo é o primeiro que descrever tais
efeitos fisiológicos em humanos saudáveis após o consumo HSE aguda. Embora baseado em um pequeno número de indivíduos, nossos
resultados estabeleceram uma base para investigações mais abrangentes para avaliar os potenciais benefícios do consumo HSE tanto aguda como
crónica, e avaliar o modo de ação. Portanto, estudos de seguimento são necessários para identificar os espectros completa de in vivo metabolitos no
plasma e na urina e investigar sua interação com processos de doenças crônicas, utilizando ensaios baseados em células e modelos animais
adequados.
Agradecimentos
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4. MATERIAL E MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSSÃO
7. CONCLUSÕES
8. Agradecimentos
9. Referências
Este estudo foi financiado por Plantextrakt GmbH & Co. KG, Vestenbergsgreuth, Alemanha. Os autores agradecem a todos os voluntários que
participaram deste estudo. Além disso, a preparação de cianidina3sambubioside e delfinidina3sambubioside pelo Prof. Dr. Peter Winterhalter,
Technische Universität Braunschweig (Alemanha) é reconhecido agradecimento.
Referências
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