1.

Considere as seguintes afirmações relativas aos espetros de absorção entre 380-600 nm das formas oxidada e
reduzida do citocromo c dos mamíferos:

i) Os espetros são perfeitamente sobreponíveis no intervalo 380-460 nm.

ii) Os espetros apresentam 6 pontos isosbésticos, um dos quais a 550 nm.

iii) O espetro da forma reduzida apresenta um pico de absorvância a 550 nm.

iv) A adição de ferricianeto de sódio diminui irreversivelmente a absorvância a 550 nm.

R: i) é falsa, uma vez que os espetros não são sobreponíveis; ii) é falsa, uma vez que os pontos isosbésticos são 410,
437, 504, 526, 542 e 556 nm; iii) é verdadeira; iv) não é a adição de ferricianeto de sódio que diminui a absorvância
a 550 nm, mas sim de ferricianeto de potássio.

2. Para a observação dos diferentes estados de oxidação / redução do citocromo c por espectroscopia do visível,
um dos reagentes utilizado foi o ditionito de sódio. Este reagente (indique a resposta correta):

a) Foi utilizado para reduzir o citocromo c e originou uma diminuição da absorvância a 550 nm.

b) Foi utilizado para oxidar o citocromo c e originou um aumento da absorvância a 550 nm.

c) Foi utilizado para reduzir o citocromo c e originou um aumento da absorvância a 550 nm.

d) Foi utilizado para oxidar o citocromo c e originou uma diminuição da absorvância a 550 nm.

e) Todas as afirmações são falsas.

R: c), uma vez que o ditionito de sódio é responsável pela redução do átomo de ferro presente no citocromo c (Fe ),2+

e esta redução provoca o aparecimento de um pico de absorvância a 550 nm.

3. Em que fase da mitose ocorre a descondensação dos cromossomas:

a) Anafase e metafase

b) Profase

c) Telofase

d) Pró-metafase

e) Profase e telofase

R: Na profase ocorre condensação dos cromossomas, o que exclui as hipóteses b) e e). Na metafase os cromossomas
atingem a sua condensação máxima, o que exclui as hipóteses a) e d). A resposta correta é a c).
4. Qual dos seguintes estímulos conduz as células à apoptose?

a) Isquémia

b) Dano genómico

c) Alterações do pH

d) Lesões agudas

e) Nenhuma das anteriores.

R: a), c) e d) podem causar danos às células mas não levam à ocorrência da apoptose. Já irregularidades ao nível do
genoma podem fazer com que a célula não passe num dos vários pontos de controlo e induzir a sua apoptose. A
resposta correta é a b).

6. O DNA genómico extraído a partir de 5ml de sangue foi solubilizado em 200ul de tampão TE. De seguida juntou-
se num 20ul de solução de DNA + 980ul de tampão TE e leu-se a absorvância a 260nm e 280nm. Os valores obtidos
foram os seguintes: A260 = 0,302 e A280 = 0,188. Calcule a pureza, a concentração da solução de DNA, a massa de
DNA extraído e indique qual das seguintes respostas é correta.

a) Pureza = 0,62; [DNA] = 470 ug/ml; m (DNA) = 94ug

b) Pureza = 1,6; [DNA] = 755 ug/ml; m (DNA) = 151ug

c) Pureza = 0,62; [DNA] = 15,1 ug/ml; m (DNA) = 3,02ug

d) Pureza = 1,6; [DNA] = 755 ug/ml; m (DNA) = 15,1ug

e) Pureza = 1,6; [DNA] = 470 ug/ml; m (DNA) = 94ug

8. No decurso das aulas práticas, ao realizar a extração de DNA cromossómico a partir de sangue bovino,
adicionou SDS antes de incubar a amostra a 55º C. A adição deste composto nesta fase teve a seguinte função:

a) Desnaturar as proteínas ligadas ao DNA

b) Lavar as células sanguíneas

c) Desnaturar o DNA

d) Precipitar as proteínas do soro

e) Nenhuma das hipóteses está correta

R: O SDS é um detergente iónico, capaz de destruir a membrana nuclear e de desnaturar proteínas. Neste caso, irá
desnaturar as histonas. A resposta correta é a a).
9. Qual a finalidade da centrifugação do sangue após adição do triton X-100 e Igepal?

a) Romper as membranas celulares

b) Precipitar o complexo lípido-detergente, obtendo os núcleos isolados no sobrenadante

c) Precipitar o complexo proteína-lípido-detergente, obtendo os núcleos isolados no sobrenadante

d) Precipitar os complexos lípido-detergente e proteína-lípido-detergente, obtendo os núcleos isolados no

sobrenadante

e) Obtenção dos núcleos no precipitado

R: Os núcleos são demasiado densos para ficarem em suspensão no sobrenadante após centrifugação, o que exclui
as hipótese b), c) e d). O rompimento das membranas celulares é feito pela simples adição do detergente, não
sendo necessário centrifugar, o que exclui a hipótese a). A centrifugação é feita para precipitar os núcleos, o que
vai permitir descartar o sobrenadante e, com ele, os organelos celulares. A resposta correta é a e).

10. Na extração de DNA do sangue precipitou-se o DNA:

a) Pela adição de etanol absoluto, pois as interações DNA-DNA são energeticamente mais favoráveis do que as
interações DNA-solvente

b) Pela adição de NaCl saturado, pois as interações proteína-álcool são energeticamente mais favoráveis do que as
interações DNA-solvente

c) Pela adição de etanol absoluto, pois as interações DNA-solvente são energeticamente mais favoráveis do que as
interações DNA-DNA

d) Pela adição de NaCl saturado, pois as interações proteína-proteína são energeticamente mais favoráveis do que
as interações proteína-solvente

e) Nenhumas das anteriores está correta

R: Sabe-se que a precipitação do DNA é feita pela adição de etanol absoluto, o que elimina as respostas b) e d). A
resposta c) é descartada pois, se as interações DNA-solvente fossem mais favoráveis, o DNA dissolvia-se em vez de
precipitar. A resposta correta é a a).

11. Durante a mitose, os filamentos de cromatina tornam-se curtos, espessos e espiralados na:

a) Metafase

b) Citocinese

c) Profase

d) Anafase

e) Telofase

R: Na telofase os filamentos de cromatina sofrem despiralização, o que exclui a hipótese e). Na anafase e na
citocinese não sofrem quaisquer alterações do ponto de vista da condensação, o que exclui as hipótese b) e d). Na
metafase é quando os cromossomas atingem a sua condensação máxima, no entanto este processo inicia-se na
profase. A resposta correta é a c).
14. Considere a seguinte expressão: O citocromo c é uma proteína transportadora de _____, que pode sofrer
reação de _____ através da adição de _____ de _____, passando o seu átomo de Fe a Fe . Complete a expressão
2+ 3+

com as palavras abaixo indicadas, tendo em conta a ordem correta.

a) oxigénio; oxidação; ditionito; sódio

b) eletrões; redução; ferricianeto; potássio

c) eletrões; oxidação; ferricianeto; potássio

d) oxigénio; redução; ferricianeto; potássio

e) eletrões; oxidação; ditionito; sódio

R: O citocromo c transporta eletrões, não oxigénio (o oxigénio é o reagente de uma reação que o citocromo c realiza
graças à energia da cadeia de transporte de eletrões, que o permite converter oxigénio diatómico em água).
Finalmente, se o átomo de ferro passa de Fe para Fe então isso significa que perdeu um eletrão. Uma substância
2+ 3+

que perde eletrões diz-se oxidada, e a substância que oxida o citocromo c é o ferricianeto de potássio. A resposta
correta é a c).

38 Considere a seguinte expressão: O citocromo C é uma proteína transportadora de ____________, capaz de

sofrer reacção de ____________ pela adição de ____________ de ____________, caracterizada por um aumento
da absorvância a 550 nm. Complete a expressão com as palavras abaixo indicadas, tendo em conta a ordem
correcta.

<C> oxigénio; redução; ferricianeto; potássio.

<C> oxigénio; redução; ditionito; sódio.

<C> electrões; redução; ditionito; sódio.

<C> electrões; oxidação; ditionito; sódio.

<C> electrões; oxidação; ferricioaneto; potássio.

<C> Não sei / Não respondo.

15. Para observação dos diferentes estados de oxidação / redução do citocromo c por espectroscopia do visível,
um dos reagentes utilizados foi o ditionito de sódio. Este reagente:

a) Foi utilizado para reduzir o citocromo c e originou uma diminuição da absorvância a 550 nm

b) Foi utilizado para oxidar o citocromo c e originou um aumento da absorvância a 550 nm

c) Foi utilizado para reduzir o citocromo c e originou um aumento da absorvância a 550 nm

d) Foi utilizado para oxidar o citocromo c e originou uma diminuição da absorvância a 550 nm

e) Todas as afirmações são falsas

R: A resposta correta é a c) (ver justificações anteriores).

16. Na observação de diferentes tipos de células ao microscópio:

a) a ampliação corresponde à capacidade de separar dois pontos tão próximos quanto possível um do outro

b) a ampliação corresponde a acentuar as diferenças entre os constituintes da preparação de modo a fazer

sobressair uns em relação aos outros

c) a resolução relaciona a dimensão do objeto com a sua dimensão real

d) a resolução corresponde à capacidade de separar dois pontos tão próximos quanto possível um do outro

e) a lente mais próxima do esfregaço é designada por ocular

R: A lente mais próxima do esfregaço é designada por objetiva. A resposta correta é a a).

15. Na observação de diferentes tipos de células ao microscópio a maior ampliação utilizado foi:

a) 40 X

b) 100 X

c) 400 X

d) 1000 X

e) 10000 X

R: A ampliação total utilizada é calculada multiplicando a ampliação da ocular pela ampliação da objetiva a ser
utilizada. Ampliação da ocular = 10 X; maior ampliação usada na objetiva = 100 X (imersão). 100 x 10 = 1000 X. A
resposta correta é a d).

16. Na extração não enzimática de DNA nuclear do sangue humano:

a) o Igepal atua como anticoagulante do sangue

b) o NaCl foi adicionado para remover as histonas do DNA

c) o SDS foi adicionado para precipitar as histonas do DNA

d) o etanol absoluto gelado foi usado para a lise dos eritrócitos

e) o etanol absoluto gelado foi utilizado para precipitar o DNA

R: O Igepal é um detergente, o que significada que a sua função não é impedir a coagulação do sangue, mas sim
destruir a membrana plasmática, de forma a ser possível a separação dos organelos celulares. O NaCl não remove
as histonas do DNA, dissolve-as. O SDS não precipita as histonas, desnatura-as. O etanol absoluto gelado precipita
o DNA ao obrigar a formação de complexos DNA-DNA, energeticamente mais favoráveis que os complexos DNA-
álcool. A resposta correta é a e).
17. Na extração não enzimática de DNA nuclear do sangue humano:

a) o EDTA atua como anticongelante do sangue

b) o Igepal atua como anticoagulante do sangue

c) o NaCl dissolve as proteínas

d) o SDS foi adicionado para remover as histonas do DNA

e) o etanol absoluto gelado foi utilizado para a lise dos eritrócitos

R: o EDTA atua como anticoagulante, não anticongelante. O Igepal é um detergente (ver justificação da pergunta
16). O etanol absoluto precipita o DNA, não destrói os eritrócitos. O NaCl não dissolve as proteínas, precipita-as. O
SDS desnatura as proteínas, fazendo com que estas percam a sua função normal. A resposta correta é a d).

18. Na extração não enzimática do DNA nuclear do sangue humano:

a) o EDTA atua com anticongelante do sangue

b) o Igepal foi utilizado para a lise dos eritrócitos

c) o SDS foi utilizado para a lise dos eritrócitos

d) o NaCl dissolve as proteínas

e) o tampão TE foi utilizado para precipitar o DNA

R: o EDTA atua como anticoagulante, não como anticongelante. O Igepal destrói a membrana celular, não os
eritrócitos. O SDS é responsável pela desnaturação (dissolução) das proteinas, não pela lise dos eritrócitos. O NaCl
não dissolve as proteínas, precipita-as.

20. Na observação de diferentes tipos de células ao microscópio com a objetiva de maior ampliação foi utilizado:

a) água destilada

b) parafina

c) óleo de imersão

d) óleo de alta viscosidade

e) tampão fosfato

R: A objetiva de maior ampliação é a de imersão. A resposta correta é a c).

35. Qual a finalidade da centrifugação do sangue após a adição do triton X-100 e igepal?

a) Romper as membranas celulares.

b) Precipitar o complexo lípido-detergente, obtendo desta forma os núcleos isolados no sobrenadante.
c) Precipitar o complexo proteína-lipido-detergente, obtendo desta forma os núcleos isolados no
sobrenadante.
d) Precipitar os complexos lipido-detergente e proteína-lipido-detergente, obtendo desta forma os núcleos
isolados no sobrenadante.
e) Obtenção dos núcleos no precipitado.
f) Não sei / Não respondo.