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442 © IWA Publishing 2019 Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019

Ocorrência dos genogrupos I e II de norovírus na água de

recreação de quatro praias da cidade de Belém, região
amazônica brasileira
Danielle Rodrigues de Deus, Dielle Monteiro Teixeira, Jainara Cristina dos
Santos Alves, Vanessa Cavaleiro Smith, Renato da Silva Bandeira,
Jones Anderson Monteiro Siqueira, Lena Líllian Canto de Sá Morais,
Hugo Reis Resque e Yvone Benchimol Gabbay

RESUMO

Este estudo teve como objetivo investigar a presença de norovírus (NoV) em águas recreativas Danielle Rodrigues de Deus
Programa de Pós-Graduação em Biologia
de quatro praias estuarinas localizadas na Ilha de Mosqueiro, cidade de Belém, Amazônia Parasitária na Amazônia,
Universidade Estadual do Pará,
brasileira, durante dois anos de monitoramento (2012 e 2013). As partículas de NoV foram Tv. Perebebui, 2623, Marco, Belém,
PA CEP 66087-662,
concentradas em uma membrana de filtragem pelo método de adsorção-eluição e detectadas por
Brasil
RT-PCR (reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa) seminested e sequenciamento.
Dielle Monteiro Teixeira
A positividade do NoV foi observada em 37,5% (39/104) das amostras de água de superfície, com o Jainara Cristina dos Santos Alves
Renato da Silva Bandeira
genogrupo GI (69,2%) ocorrendo em uma frequência maior do que o GII (25,7%), com uma Jones Anderson Monteiro Siqueira
Hugo Reis Resque
cocirculação de ambos os genogrupos em duas amostras (5,1%). Esse vírus foi detectado em
Yvone Benchimol Gabbay (autora correspondente)
todos os pontos de amostragem analisados, apresentando a maior taxa de detecção na Praia do Seção de Virologia, Instituto Evandro Chagas,
Saúde
Paraíso (46,2%). Estatisticamente, houve uma relação de dependência entre os níveis de maré e a Secretaria de Vigilância,
Ministério da Saúde do Brasil,
detecção positiva, com uma frequência maior nos períodos de maré alta (46,7%) do que nos de Br. 316 Km 07 S/N, Levilandia, Ananindeua,
PA CEP 67030-000,
maré baixa (25%). Os meses com as maiores taxas de detecção (abril de 2012 e abril/maio de
Brasil
2013) foram precedidos por períodos de maior precipitação (março de 2012 e fevereiro/março de E-mail: yvonegabbay@iec.gov.br

2013). A análise filogenética mostrou a circulação da variante pandêmica antiga (GII.4-US_95-96) e Vanessa Cavaleiro Smith
Programa de Pós-Graduação em Virologia, Instituto
GI.8. A detecção de NoV demonstrou a contaminação viral nas praias e evidenciou o risco à Evandro Chagas, Secretaria de Vigilância em
Saúde,
saúde dos banhistas, principalmente por meio de atividades recreativas como o banho, e
Ministério da Saúde do Brasil,
destacou a importância de incluir a pesquisa de vírus entéricos no monitoramento da qualidade Br. 316 Km 07 S/N, Levilandia, Ananindeua,
PA CEP 67030-000,
da água para fins recreativos. Brasil

Palavras-chave: região amazônica, praias, norovírus, RT-PCR, semi-nested, águas superficiais Lena Líllian Canto de Sá Morais
Seção de Meio Ambiente, Instituto Evandro
Chagas, Secretaria de Vigilância em Saúde,
Ministério da Saúde do Brasil,
Br. 316 Km 07 S/N, Levilandia, Ananindeua,
PA CEP 67030-000,
Brasil

INTRODUÇÃO

Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por

convidado
 O despejo de esgoto não tratado em corpos d'água é um dos
principais fatores que contribuem para o aumento da
contaminação fecal em ambientes aquáticos usados para
recreação e representa um grande risco para a saúde humana
(Gibney et al. ����; Sekwadi et al. ����). Os vírus entéricos
são transmitidos pelo
doi: 10.2166/wh.2019.304
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via fecal-oral e sua presença em águas recreativas já foi bem
relatada (Vergara et al. ����).
Nos últimos anos, o desvendamento da distribuição
mundial do norovírus (NoV) justificou a importância de
incluí-lo na vigilância epidemiológica, uma vez que esse
vírus é um dos mais comuns.
 443 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
é considerado a principal causa de surtos de gastroenterite
aguda viral (AGE) em todo o mundo, sendo responsável por
46% dos surtos relatados em áreas com diferentes tipos de
águas destinadas à recreação (Patel et al. ����; Sinclair et
al. ����).
No Brasil, a avaliação da qualidade da água para
recreação não inclui patógenos virais em sua análise. As
condições para banho são regulamentadas pela resolução
CONAMA nº 274/2000, que se baseia na presença de
coliformes termotolerantes, Escherichia coli (E. coli) e
enterococos (BRASIL ����). No entanto, vários estudos
demonstraram que os vírus entéricos estão amplamente
disseminados em diferentes matrizes de regiões brasileiras,
incluindo água de superfície e esgoto não tratado de Belém
(Teixeira et al. ����) e água de recreação de Manaus
(Vieira et al. ����), Florianópolis (Rigotto et al.
����) e Rio de Janeiro (Vieira et al. ����; Victoria
et al. ����a).
O NoV pertence ao gênero Norovirus,
Caliciviridae. Ele é dividido em sete genogrupos (GI-GVII)
e é transmitido pela via fecal-oral, principalmente por meio
de alimentos e água contaminados (Vinjé ����). Os NoV
GI, GII e GIV foram associados a infecções humanas, sendo
o GII, especialmente o genótipo 4 (GII.4), responsável pela
maior parte dos casos e surtos de AGE (Ramani et al.
����; Vinjé ����). Em ambientes aquáticos, o GI é
amplamente descrito em uma frequência maior ou igual à do
GII (Kitajima et al. ����; Lee et al. ����; Zhu et al.
����).
Em Belém, palafitas são comumente observadas ao
longo dos cursos d'água que drenam e circundam a região,
onde o esgoto humano é normalmente lançado in natura
(Ribeiro ����). Além disso, a precariedade do setor de
saneamento, com baixíssimos índices de coleta e tratamento
de esgoto, revela que mais de 90% do esgoto gerado nesse
município é lançado sem qualquer tratamento prévio nos
corpos d'água que fazem parte da rede de drenagem que
d e s á g u a na Baía do Guajará (Trata Brasil ����). No
presente estudo, a presença de NoV foi investigada em
amostras coletadas durante um período de dois anos de
monitoramento de águas recreativas ao longo de quatro
praias estuarinas na Ilha de Mosqueiro, um importante
balneário localizado na Região Metropolitana de Belém.
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Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
MÉTODOS
Área de estudo
A Ilha de Mosqueiro tem aproximadamente 33.232
habitantes e é um distrito administrativo da cidade de Belém,
capital do estado do Pará, no norte do Brasil, na região
amazônica (IBGE
����). A cidade está localizada na margem da Baía do
Guajará, formada pela confluência dos rios Guamá, Acará e
Moju. A Ilha do Mosqueiro tem 17 km de praias estuarinas e
está localizada a 80 km de Belém, em um ambiente
altamente dinâmico em frente à Baía do Marajó, com fortes
correntes de maré e alta turbidez, fazendo com que a água
pareça lamacenta. Essa ilha é cercada por vários pequenos
corpos d'água conhecidos regionalmente como furos e
igarapés. Além disso, a Baía de Marajó é confluente com a
Baía de Guajará e o Oceano Atlântico, formando um
família ambiente estuarino típico na costa amazônica do Brasil
(Bastos et al. ����; Gregório & Mendes ����; Sousa et al.
����). O clima nessa região é quente e úmido, com uma
temperatura média anual de 26◦ C, uma precipitação média
de 2.834 mm/ano e dois períodos sazonais distintos: alta
(dezembro a junho) e baixa (julho a novembro) estação
chuvosa (PMB ����).
As praias de Farol (FR), Murubira (MU), Areião (AR) e
Paraíso (PA) foram selecionadas para investigar a presença
de NoV ao longo da Ilha de Mosqueiro (Figura 1). Todas
essas praias são muito frequentadas e recebem galerias de
drenagem de águas pluviais e esgoto não tratado de
residências e bares localizados nas proximidades,
principalmente durante feriados e férias. A Praia do Paraíso
é a mais próxima do Oceano Atlântico e a mais distante de
um centro urbano. As praias do Farol e Murubira são as mais
frequentadas durante as férias e feriados. A Praia do Areião
está localizada no centro urbano da Ilha, na região mais
próxima da Baía do Guajará.
Coleta de amostras e concentração viral
Um total de 104 amostras de águas superficiais foram
coletadas mensalmente de janeiro de 2012 a dezembro de
2013, principalmente após os finais de semana e feriados,
com coletas quinzenais em julho, representando um período
de grande aumento no número de banhistas devido às férias
escolares.
As partículas virais foram concentradas a partir de 2 L
 de amostras
444 deet água
D. R. de Deus peloem
al. | Norovirus método de eluição
águas superficiais por
de quatro adsorção
praias na
da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira
filtragem do

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 445 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
Figura 1 | Mapa das quatro praias da Ilha de Mosqueiro, Região Metropolitana de Belém, Pará. Fonte: Laboratório de Geoprocessamento (LABGEO) Instituto Evandro Chagas, Secretaria de
Vigilância em Saúde, Ministério da Saúde do Brasil.
membrana (Katayama et al. ����), obtendo um volume final de
2 ml após uma segunda filtração usando uma unidade de filtro
centrífugo Amicon Ultra-15 (Merck Millipore, Irlanda).
Detecção molecular de NoV
O RNA viral foi extraído de 400 μl da amostra concentrada usando
guanidina isotiocianato (método de sílica) (Boom et al. ����).
A semi-nested RT-PCR (r e a ç ã o em cadeia da polimerase
com transcrição reversa) foi realizada em duas etapas com primers
específicos para a detecção de NoV (Boxman et al. ����). Na
primeira etapa, a RT-PCR foi realizada com os primers JV13I e
JV12Y (327 bp), visando o gene da RNA polimerase dependente
de RNA (RdRp) na ORF1 (região A). Todas as misturas de RT-
PCR tinham um volume total de 10 μl contendo 2 μl de RNA, 40
mM de desoxinucleotídeos
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Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
(0,5 μl), 10× de tampão de PCR (1,0 μl), 50 mM de MgCl2
(0,3 μl), 20 μM de cada primer (0,375 μl), 20 U/μl de Super
Script II Reverse Transcriptase (0,1 μl) (Invitrogen, EUA) e
5 U/μl de Taq DNA polimerase (0,2 μl) (Invitrogen, EUA).
Na segunda etapa, esse produto de RT-PCR foi submetido a
reações semi-aninhadas separadas, usando os pares de
primers JV13I/GI e JV12Y/NoroII-R para detecção
específica de GI e GII, respectivamente. Resumidamente, 2
μl de produtos de RT-PCR foram adicionados a um volume
final de 25 μl contendo 40 mM de desoxinucleotídeos (1,0
μl), tampão de PCR 10× (2,5 μl), 50 mM de MgCl2 (1,0 μl),
20 μM de cada primer (0,65 μl) e 5 U/μl de Taq DNA
polimerase (0,2 μl) (Invitrogen, EUA). Os ácidos nucleicos
foram testados sem diluição e com diluição de 10 vezes.
Os produtos foram analisados em eletroforese em gel de
agarose a 1,5% e corados com SYBR Safe DNA Gel Stain
(Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). Os amplicons de 187
 446 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira

e 236 pb visualizados sob luz UV foram considerados como Dados de maré e precipitação
indicativos de NoV GI e GII, respectivamente. Em todos os
Os dados de maré foram obtidos no site do Centro de
procedimentos, foram usados controles positivos (amostra
Hidrografia da Marinha
positiva de fezes de NoV previamente sequenciada) e
(https://www.marinha.mil.br/chm/tabuas- de-mare), de
negativos (água sem ácido nucleico). Para evitar a
acordo com as tábuas de marés disponíveis e considerando
contaminação cruzada, todos os testes foram realizados em
os dias e horários das coletas realizadas nos anos de 2012
salas separadas.
e 2013, usando como referência os quatro principais
períodos do dia disponíveis no site, com as respectivas
Genotipagem de NoV alturas máximas (maré alta) e mínimas (maré baixa) dos
níveis de maré medidas em metros (m).
Após a RT-PCR seminested, o RNA das amostras positivas
As informações sobre precipitação pluviométrica foram
foi analisado pelo SuperScript III One-Step RT-PCR System
baixadas do site do Instituto Nacional de Meteorologia
com Platinum Taq DNA Polymerase (Invitrogen, Carlsbad,
(http://www.inmet.gov.br/
CA, EUA), usando na primeira rodada os primers
portal/index.php?r=home/page&page=rede_estacoes_auto_
Mon431/Mon432/G2SKR (Anderson et al.
graf).
����; Fankhauser et al. ����) visando a região de junção
ORF1-ORF2 do genoma, com um amplicon esperado de 550
pb. Na segunda rodada, os pares de primers COG1F/
Análise estatística
G1SKR (aninhado) e COG2F/G2SKR (semaninhado), que
têm como alvo a região 50 ORF2, foram usados para
As análises descritivas e analíticas dos dados foram realizadas com
detecção específica de GI (380 pb) e GII (390 pb),
o software BioEstat 5.3 (Ayres et al. ����). A associação entre
respectivamente (Kojima et al.
positividade, níveis de maré e a precipitação média do dia de
����; Kageyama et al. ����). As reações foram realizadas
coleta em relação ao dia anterior foi avaliada pelo teste de
de acordo com as instruções do fabricante.
regressão logística simples. O teste do qui-quadrado foi realizado
As amostras positivas analisadas na região 50 ORF2
para comparar a positividade obtida no primeiro e no segundo
que produziram amplicons de boa qualidade foram
semestre. Os resultados foram considerados estatisticamente
purificadas com os kits comerciais QIAquick® PCR
significantes quando p ≤ 0,05.
Purification ou QIAquick® Gel Extraction (QIAGEN,
Valencia, CA, EUA), seguindo as instruções do
fabricante. As sequências foram
obtido usando o BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequen-
cing Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). A As sequências de nucleotídeos do NoV GI e GII
montagem das sequências de NoV foi realizada com o obtidas neste estudo foram enviadas ao banco de dados
Geneious GenBank sob os números de acesso de nucleotídeos
v.10.0.8 (Kearse et al. ����) por meio do método de MH165841-MH165844.
mapeamento de referência usando protótipos de NoV do
banco de dados do NCBI. O alinhamento foi obtido usando
o Aliview
O programa IQTree v.3.0 (Larsson ����) com a estratégia do
programa MAFFT (v.7.221) (Katoh & Standley ����) e
comparado comoutras sequências armazenadas no GenBank.
Uma árvore filogenética foi construída com o programa
IQTree v.1.3.0 (Nguyen et al. ����), usando a máxima
verossimilhança com 1.000 réplicas de bootstrap,
desconsiderando os valores estatísticos com suporte inferior
a 70%, e a árvore gráfica foi editada usando o programa
MEGA 6.0 (Tamura et al. ����).
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 RESULTADOS

Um 447
total de
D. R.104 amostras
de Deus de água
et al. | Norovirus de superficiais
em águas superfície foi analisado
de quatro praias da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira
para ampliação da região parcial do gene RdRp do genoma do
NoV por RT-PCR seminested. O NoV foi detectado em
37,5% (39/104) das amostras. O NoV GI 69,2% (27/39)
apresentou uma frequência maior do que o GII 25,7%
(10/39), e a cocirculação de ambos os genogrupos também foi
verificada em duas amostras (5,1% - 2/39) (Tabela 1),
detectadas nas praias de Paraíso e Murubira na segunda
quinzena de julho e em novembro de 2012, respectivamente.
Esse vírus foi detectado em todos os pontos de
amostragem. A maior ocorrência de NoV foi observada na
Praia do Paraíso (46,2% - 26/12), seguida pelas praias do
Farol (42,3% - 26/11), Areião (34,6% - 26/9) e Murubira
(26,9% - 26/7) (Tabela 1).

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 448 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira

Tabela 1 | Detecção de NoV GI e GII de acordo com os ciclos de maré em 104 amostras de água de recreação de quatro praias da Ilha de Mosqueiro, Região Metropolitana de Belém, Pará

Maré alta % (nº de positivos/total) Maré baixa % (nº de positivos/total)

Ponto de coleta GI GII GI + GII Total GI GII GI + GII Total Positividade

total

Farol 60 (9/15) 0 (0/15) 0 (0/15) 60 (9/15) 9.1 (1/11) 9.1 (1/11) 0 (0/11) 18.2 (2/11) 42.3 (11/26)
Murubira 33.3 (5/15) 0 (0/15) 6.7 (1/15) 40 (6/15) 9.1 (1/11) 0 (0/11) 0 (0/11) 9.1 (1/11) 26.9 (7/26)
Areião 26.7 (4/15) 13.3 (2/15) 0 (0/15) 40 (6/15) 9.1 (1/11) 18.2 (2/11) 0 (0/11) 27.3 (3/11) 34.6 (9/26)
Paraíso 26.7 (4/15) 13.3 (2/15) 6.7 (1/15) 46.7 (7/15) 18.2 (2/11) 27.3 (3/11) 0 (0/11) 45.5 (5/11) 46.2 (12/26)
Total 36.7 (22/60) 6.7 (4/60) 3.3 (2/60) 46.7 (28/60) 11.4 (5/44) 13.6 (6/44) 0 (0/44) 25 (11/44) 37.5 (39/104)

Nos dois anos de estudo, 57,7% (60/104) das amostras
foram coletadas na maré alta e 42,3% (44/104) na maré
baixa. O NoV foi detectado com maior frequência durante a
maré alta (46,7% - 28/60) do que durante a maré baixa (25%
- 11/44) (Tabela 1). A análise estatística mostrou uma
relação de dependência entre os níveis de maré e a
positividade (p = 0,0386). A distribuição dos genogrupos foi
diferente entre os ciclos de maré. Na maré alta, a maioria das
amostras positivas foi classificada como GI (36,7%) e uma
pequena porcentagem como GII
(6,7%) e GI + GII (3,3%) (Tabela 1), enquanto durante a
maré baixa a frequência foi semelhante entre os genogrupos,
com 11,4% para GI e 13,6% para GII (Tabela 1).
Durante o período de estudo, o NoV foi detectado em
todas as praias em abril de 2012 e abril/maio de 2013,
seguido pelos meses de março (PA, MU e FR), primeira
quinzena de julho de 2012 (PA, FR e AR) e dezembro
(MU, FR e AR) de 2013, com a detecção em três praias
(Figura 2). Embora não tenha havido relação estatística (
p = 0,0877)

Figura 2 | Distribuição mensal de NoV em águas de recreação de quatro praias da Ilha de Mosqueiro, Região Metropolitana de Belém, Pará. Pos, positividade; Prec, precipitação.

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brasileira

Tabela 2: Detecção e genotipagem de NoV pela região ORF2 de extremidade 5' (capsídeo)

Sequenciamento parcial do
Semi-aninhado (GII) e capsídeo
RT-PCR aninhado (GI) GI GII GI + GII
Ponto de coleta N Positivo Genótipo (N) Genótipo (N) Genótipo (N)

Areião 3 GI.8 (1) NG (1) -

NG (1)
Farol 2 NG (2) NG (1) -
Murubira 2 NG (1) - GII.4/NG (1)
Paraíso 5 NG (2) GII.4 (2) -
NG (1)
Total 13 53.8% (7/13) 38.5% (5/13) 7.7% (1/13)

NG, não genotipado.

Entre a positividade do NoV e a média de precipitação, os
meses com maior positividade (abril/2012 e abril/maio de
2013) foram precedidos por períodos
precipitação (março/2012 e fevereiro/março de 2013)
(Figura 2). Apesar da presença significante de NoV em
períodos com maiores níveis de precipitação em Belém, a
análise para verificar a positividade observada entre o
primeiro e o segundo semestres não mostrou relação
estatisticamente significante ( p = 0,067).
Na RT-PCR semi-nested/nested, um total de 33,3%
(13/39) amostras foram positivas para a região de junção
ORF1-ORF2 do genoma do NoV, e essas amostras foram
genogrupadas como GI (53,8% - 7/13), GII (38,5% - 5/13) e
GI + GII (7,7% - 1/13) (Tabela 2). Entre elas, a análise
filogenética do sequenciamento parcial da região do
capsídeo foi feita para quatro amostras, das quais três foram
classificadas como GII.4, demonstrando semelhança com a
variante US-95-96, e uma como GI.8; as demais não
apresentaram sequências confiáveis e,
puderam ser genotipadas (Figura 3).
Entre as amostras positivas para NoV, a porcentagem
mais alta foi encontrada em amostras de RNA não diluído,
com 53,8% (21/39), em comparação com amostras de RNA
diluído (15,4%, 6/39).
DISCUSSÃO
De acordo com o ranking de saneamento, a cidade de Belém
ocupa a terceira posição entre os 10 piores municípios do
país, com índices muito baixos de coleta (7,1%) e tratamento
(1,9%) de esgoto (Trata Brasil ����). Esses dados destacam
os riscos à saúde pública associados à
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contaminação fecal e circulação de NoV em águas
recreativas. Assim, a presença desse vírus ao redor da Ilha
de maior de Mosqueiro pode estar relacionada ao despejo de esgoto,
direta ou indiretamente, pela drenagem de águas pluviais
nas praias estudadas. Embora não haja relatos de surtos
recreativos causados pela água no Brasil, vários estudos
realizados em outras regiões do mundo destacaram surtos
causados por patógenos virais após contato recreativo com
águas superficiais contaminadas por fezes (Sinclair
et al. ����; Di Bartolo et al. ����; Sekwadi et al. ����).
No Brasil, a presença do NoV e de outros vírus entéricos
foi descrita em diferentes tipos de água para recreação (mar,
lagoa e rio), revelando o risco de exposição dos banhistas a
doenças transmitidas pela água (Miagostovich et al. ����;
Vieira et al.
����). A presente análise, realizada em praias estuarinas,
obteve uma taxa de positividade para NoV de 37,5% por meio
de semi-nested RT-PCR, um valor superior aos descritos
portanto, não anteriormente no país em investigações relacionadas à
disseminação desses vírus em ambientes aquáticos por meio de
reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real
(qPCR) e nested PCR (Vieira et al. ����; Vicoria et al. ����a;
Teixeira et al. ����).
O NoV foi investigado em águas de recreação no Rio de
Janeiro por meio de dois estudos diferentes: um no mar e
outro em água doce. No primeiro estudo, o NoV foi
detectado em 14% das amostras de três praias urbanas de
água salgada (Arpoador, Ipanema e Leblon) (Victoria et al.
����a). Além disso, uma positividade de 17,5% foi
observada em água doce de uma lagoa urbana (Rodrigo de
Freitas), que está interconectada com outros ecossistemas
(Rio Macacos e Praia do Leblon) (Vieira et al. ����). O
resultado obtido na
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brasileira

Figura 3 | Árvore filogenética dos genótipos GI e GII do NoV encontrados em águas recreativas de quatro praias da Ilha de Mosqueiro, Região Metropolitana de Belém, Pará. Construída
usando análise de máxima verossimilhança e 1.000 réplicas de bootstrap. As amostras do presente estudo são destacadas em negrito e preenchidas com losangos.

A presença de NoV no rio (33,3%) que deságua na lagoa foi
consistente com a obtida na praia do Areião (34,6%),
enquanto na praia do Leblon a presença de NoV foi menor
(16,7%) do que a observada em todas as praias d o presente
estudo.
Na região norte, o NoV GI e GII (33,9%) foi encontrado
em águas superficiais e esgoto de Belém (Teixeira et al.
����) e o NoV GII em águas superficiais (5,8%) e
amostras de água do rio Negro (7,4%) em Manaus
(Miagostovich et al. ����; Vieira et al. ����).
A maior circulação de GI (74,3%) em comparação com
GII (30,7%) está de acordo com a frequência detectada em
amostras ambientais (rios e esgoto) (Kitajima et al. ����;
Lee et al. ����; Farkas et al. ����). No entanto, em
amostras clínicas de Belém, o GII predominou em estudos de
crianças hospitalizadas e ambulatoriais tratadas por sintomas de
gastroenterite (Aragão et al. ����; Siqueira et al. ����).
A detecção de genogrupos relacionados a infecções
em humanos sugere que a possível contaminação dos
visitantes das praias da Ilha do Mosqueiro com a
disseminação do NoV GI nesse ambiente pode estar mais
relacionada à ocorrência de infecção assintomática ou
esporádica, que pode não exigir atenção médica (Kitajima et al.
����; Wade et al.
����). Essa hipótese é reforçada pela prevalência de

Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por

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 451 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
GI comparado ao GII em casos assintomáticos descritos em
crianças da cidade de Belém por Siqueira et al. (����a).
As pequenas diferenças na positividade
observadas entre cada praia podem estar relacionadas às
características específicas de cada área, às condições
climáticas, à influência de fatores ambientais (maré e chuva) e
aos impactos antropogênicos na qualidade
resultantes da urbanização.
A maior positividade observada na Praia do Paraíso
pode estar ligada a vários fatores que favorecem a redução
da poluição, devido à distância da praia em relação ao
centro da Ilha e aos poucos bares e hotéis adjacentes à
praia. Além disso, há uma área de enseada, o que favorece
a sedimentação de matéria orgânica e, como esses vírus
são encontrados em baixa concentração em amostras
ambientais, o provável acúmulo de partículas virais nesse
local aumentou sua disponibilidade para
molecular (Bosch et al. ����; Farkas et al. ����).
Farol e Murubira são consideradas as praias mais
populares da Ilha de Mosqueiro e são usadas para atividades
recreativas, como o kitesurf. Além disso, durante os feriados
e as férias, elas recebem um grande despejo de esgoto das
casas vizinhas, que entra diretamente nas praias e nos corpos
d'água que circundam a região. Localizada no centro urbano
da Ilha de Mosqueiro (bairro Vila), a Praia do Areião recebe
intensa influência urbana por meio de residências, bares,
restaurantes e hotéis com excessivo lançamento de efluentes
que chegam a essa praia sem nenhum tipo de tratamento. A
lavagem de pequenas embarcações de pesca que atracam na
Praia do Areião possivelmente contribui
contaminação da água devido ao lançamento de resíduos
sólidos e líquidos (Viana ����).
Métodos moleculares, como RT-PCR, são amplamente
utilizados pela maioria dos estudos para a detecção e
posterior genotipagem de NoV em ambientes aquáticos em
todo o mundo (Victoria et al.
����; Lee et al. ����; Zhu et al. ����). O Semi-nested RT-PCR
também foi aplicado no Uruguai, empregando os mesmos
primers usados nesta pesquisa e obtendo uma ocorrência
maior (51%) nas amostras de águas residuais diretamente
descarregadas do Rio Uruguai, que delineia a tríplice
fronteira entre Brasil, Argentina e Uruguai (Victoria et al.
����B). Um estudo recente realizado em três praias da
Argentina apresentou um resultado semelhante (31,8%) ao
encontrado na presente análise (37,5%), empregando a
abordagem RT-PCR seminested (Masachessi et al. ����).
Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por
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Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
De acordo com Abdelzaher et al. (����), o movimento da
água causado pela maré alta permite que os indicadores
de NoV microbianos alcancem a coluna de água após a submersão da
zona entremarés. Da mesma forma, a alta frequência de NoV
na maré alta sugere que a zona de lavagem exposta ao
movimento da água entre a maré baixa e a maré alta poderia
da água ter facilitado o transporte de partículas virais para a
superfície aquática (Vandieken et al. ����).
A relação entre a precipitação e a frequência de NoV
não mostrou sazonalidade durante o período analisado ( p
= 0,0877). Isso pode estar associado ao fato de que, na
região amazônica, não há estações do ano definidas, com
predominância de períodos mais ou menos chuvosos. No
entanto, a presença marcante desse agente foi observada
em todas as praias estudadas nos meses de abril de 2012 e
abril/maio de 2013, e em 75% das praias estudadas nos
detecção meses de março e dezembro de 2012, correspondendo ao
período de maior índice pluviométrico em Belém
(dezembro a junho). Durante esse período, a disseminação
desses agentes nas águas superficiais pode estar associada
ao aumento do escoamento urbano (galerias pluviais e
esgoto não tratado) (Haramoto et al. ����). Esses dados
corroboram um estudo realizado no Rio de Janeiro, onde a
concentração de NoV foi maior após eventos de chuva
(Victoria et al. ����a).
Em julho, há uma diminuição das chuvas, mas a ilha costuma
receber muitos visitantes/turistas devido às férias escolares,
principalmente nos finais de semana. A grande aglomeração de
pessoas associada ao aumento da água residual produzida pelos
para a banhistas pode ter influenciado diretamente a propagação desses
vírus na água e favorecido sua detecção em amostras coletadas
logo após os dias mais visitados (WHO ����).
Neste estudo, a RT-PCR de uma etapa para a
genotipagem do NoV usando primers direcionados à região
5' ORF2 possibilitou a detecção de dois genótipos diferentes
(GI.8 e GII.4) nas praias de Mosqueiro. O genótipo GI.8
também foi identificado em amostras de esgoto coletadas no
Uruguai (Victoria et al. ����) e em casos de AGE entre
pacientes hospitalizados e ambulatoriais na Guatemala (Estévez et
al. ����). Em Belém, o GI.8 foi detectado anteriormente em
rio, córrego impactado e esgoto não tratado no ano de 2010,
com alta similaridade nucleotídica com o encontrado na
Praia do Areião (Teixeira et al. ����).
Diversas variantes da pandemia GII.4 foram associadas
a epidemias globais de AGE, produzindo grandes
 452 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
impacto na saúde pública (Kroneman et al. ����; van
Beek et al. ����). Entre os genótipos que circulam no
Brasil, o GII.4 continua sendo o mais prevalente (Fioretti et
al. ����), sendo responsável por 72% dos surtos causados
por NoV no Rio Grande do Sul (Andrade et al. ����). O
estudo anterior (2008-2010) mostrou a circulação de outras
variantes GII.4 semelhantes a Den Haag 2006b, New
Orleans 2009 e Sydney 2012 em águas superficiais e esgoto
não tratado da cidade de Belém (Teixeira et al. ����). No
entanto, no presente estudo, a variante US_95/96 foi
encontrada pela primeira vez em amostras de água para fins
recreativos dessa cidade.
Recentemente, um estudo descreveu o envolvimento
dessa variante em eventos de
intragenotípica (US_95-96/ Kaiso_2003) em amostras
fecais de crianças hospitalizadas em Belém no ano de 2003
(Siqueira et al. ����). Essa variante predominou entre as
crianças hospitalizadas e ambulatoriais da cidade de
Belém entre 1998 e 2000, com casos na população até 2002
(Siqueira et al. ����b). A detecção da variante pandêmica
mais antiga mostra a necessidade de monitorar as cepas
após episódios epidêmicos devido à evolução do NoV,
possivelmente por meio de mutações e recombinação, o
que poderia dar início a novos casos epidêmicos de EAG
causados por essas novas cepas. A primeira detecção da
variante US_95/96 nas amostras ambientais da Ilha de
Mosqueiro sugere a circulação dessa cepa em casos
assintomáticos ou mais brandos na população de Belém,
pois, embora seja uma variante pandêmica, ainda não foi
associada a essa variante.
com surtos ou casos clínicos descritos nesta cidade.
A presença de substâncias inibidoras, como partículas de
sedimento de fine, não foi avaliada e pode ser considerada
uma limitação desta pesquisa devido à possibilidade de
interferência na caracterização dos NoV detectados nas
praias de Mosqueiro. No entanto, enfatizamos que neste
estudo foi aplicado o uso de membranas d e filtro, sílica e
diluição de ácidos nucleicos, que são comumente usados
como meio de remover possíveis inibidores da enzima RT
e/ou DNA polimerase (Boom et al. ����; Queiroz et al. ����;
Farkas et al. ����). É extremamente importante usar
marcadores (controles internos) para avaliar o nível de
inibição, principalmente em estudos de virologia ambiental,
e proporciona uma interpretação
procedimento de detecção (Haramoto et al. ����).
Não foi possível avaliar a recuperação viral e isso pode
ser uma limitação deste estudo, já que a eficiência do
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Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
O método de PCR usado pode ser influenciado por variáveis
intrínsecas de cada ambiente aquático e a presença viral
geralmente ocorre em níveis baixos no ambiente (Bosch et
al. ����). Embora não sejam indicativas da infectividade
da partícula viral, as variações da PCR, como a RT-PCR
aninhada e semaninhada, são usadas satisfatoriamente para a
detecção de NoV em amostras ambientais devido à sua alta
especificidade e sensibilidade (Kitajima et al. ����; Victoria
et al. ����).
De acordo com o valor de E. coli utilizado pela
legislação brasileira (BRASIL ����), 92,3% (96/104) das
amostras coletadas neste estudo foram consideradas
adequadas para banho; no entanto, a presença de NoV foi
recombinação identificada em 37,5% (36/96) dessas amostras (os dados de
E. coli foram gentilmente fornecidos pelo Laboratório de
Meio Ambiente do Instituto Evandro Chagas - dados não
publicados). A relação entre a presença de NoV e os valores
de E. coli observados neste estudo está de acordo com os
observados nas praias do Rio de Janeiro consideradas
adequadas para banho de acordo com as concentrações
máximas de E. coli (Victoria et al. ����a). Isso reforça a
urgência mundial de estabelecer parâmetros virais
associados aos bacteriológicos para garantir uma avaliação
mais completa da qualidade da água usada para recreação,
uma vez que não há correlação entre as concentrações
bacterianas e a presença de vírus (Wyn-Jones & Sellwood
����; Updyke et al. ����).
CONCLUSÃO
Este estudo verificou a circulação do NoV em praias
normalmente frequentadas por moradores de Belém e
turistas de outros estados brasileiros. Isso enfatiza que o
risco à saúde dos banhistas não deve ser negligenciado
devido à distribuição mundial de surtos e casos esporádicos
de gastroenterite causada por vários vírus entéricos em águas
recreativas, como praias, lagoas e rios. Além disso, a
circulação ambiental do genótipo GII.4 corrobora os dados
clínicos da mesma região que o relacionam principalmente
com casos de gastroenterite viral. A detecção do GI.8
mais segura do mostrou que as cepas relacionadas ao genogrupo GI estão
circulando na população, mas sua carga real pode ser
subestimada por fatores como infecções assintomáticas ou
leves. A identificação do tipo genético é extremamente
 importante, pois fornece

453 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira

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 454 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
dados sobre a circulação de cepas comuns ou emergentes na
comunidade.
AGRADECIMENTOS
Agradecemos ao Laboratório de Microbiologia Ambiental
pela assistência técnica, ao Instituto Evandro Chagas pela
coleta e concentração das amostras (Denise Santos,
Raimundo Pio Girard e Nayara Rufino) e ao Laboratório de
Geoprocessamento (Clístenes Catete) pelo mapeamento da
Ilha de Mosqueiro, Belém-Pa. Agradecemos à Coordenação
de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
pela concessão da bolsa de mestrado, à Universidade do
Estado do Pará e ao Instituto Evandro Chagas pelo apoio
financeiro.
CONFLITO DE INTERESSES
Os autores declaram não haver conflito de interesses.
REFERÊNCIAS
Abdelzaher, A. M., Wright, M. E., Ortega, C., Solo-gabriele, H. M.,
Miller, G., Elmir, S., Neyman, X., Shih, P., Bonilla, J. A.,
Bonilla, T. D., Palmer, C. J., Scott, T., Lukasik, J., Harwood,
V. J., McQuaig, S., Sinigalliano, C., Gidley, M., Plano,
L. R. W., Zhu, X., Wang, J. D. & Fleming, L. E. ���� Presença
de patógenos e micróbios indicadores em uma fonte não
pontual praia marinha subtropical de recreação. Applied and
Environmental Microbiology 76 (3), 724-732.
Anderson, A. D., Garrett, V. D., Sobel, J., Monroe, S. S.,
Fankhauser, R. L., Schwab, K. J., Bresee, J. S., Mead, P. S.,
Higgins, C., Campana, L. & Glass, R. I. ���� Surto
multiestadual de gastroenterite por vírus do tipo Norwalk
associado a um fornecedor comum. American Journal of
Epidemiology 154 (11), 1013-1019.
Andrade, J. S. R., Rocha, M. S., Carvalho-Costa, F. A., Fioretti,
J. M., Xavier, M. P. T. P., Nunes, Z. M. A., Cardoso, J., Fialho,
A. M., Leite, J. P. & Miagostovich, M. P. ���� Norovírus
associados a surtos de gastroenterite aguda no Estado do Rio
Grande do Sul, Brasil, 2004-2011. Journal of Clinical
Virology 61 (3), 345-352.
Aragão, G. C., Oliveira, D. d. S., Santos, M. C. d., Mascarenhas,
J. D. P., Oliveira, C. S. d., Linhares, A. d. C. & Gabbay, Y. B.
���� Caracterização molecular de norovírus, sapovírus e astrovírus em
crianças com gastroenterite aguda de Belém,
Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por
convidado
Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
Pará, Brasil. Revista Pan-Amazônica de Saúde 1 (1), 149-
158.
Ayres, M., Ayres Jr, M., Ayres, D. L. & dos Santos, A. S. ����
BioEstat 5.0: Aplicações Estatísticas nas Áreas de Ciências
Biológicas e Médicas, 5ª ed., São Paulo, Brasil. Instituto de
Desenvolvimento Sustentável Mamirauá-IDSM/MCT/
CNPq, Belém, pp. 364.
Bastos, T. X., Pacheco, N. P., Nechet, D. & Sá, T. D. d. A. ����
Aspectos climáticos de Belém nos últimos cem anos. Série
Documentos (Embrapa Amazônia Oriental) 128, 1-31.
Boom, R., Sol, C., Salimans, M. M. M., Jansen, C. L., Wertheim- van
Dillen, P. & van der Noordaa, J. ���� Método rápido e
simples para purificação de ácidos nucleicos. Journal of Clinical
Microbiology 28 (3), 495-503.
Bosch, A., Guix, S., Sano, D. & Pinto, R. M. ���� Novas ferramentas
para o estudo e a vigilância direta de patógenos virais na água.
Current Opinion in Biotechnology 19 (3), 295-301.
Boxman, I. L. A., Tilburg, J. J. H. C., te Loeke, N. A. J. M.,
Vennema, H., Jonker, K., de Boer, E. & Koopmans, M. ����
Detecção de norovírus em mariscos na Holanda.
International Journal of Food Microbiology 108 (3), 391-396.
BRASIL ���� Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA).
Resolução nº 274, de 29 de novembro de 2000. Define os
critérios de balneabilidade das águas brasileiras. Diário
Oficial da União, Seção 1 de 25 de janeiro de 2001, pp. 70-
71.
Di Bartolo, I., Pavoni, E., Tofani, S., Consoli, M., Galuppini, E.,
Losio, M. N., Ruggeri, F. M. & Varisco, G. ���� Surto de
norovírus transmitido pela água durante uma excursão de verão
no norte da Itália. New Microbiology 38 (1), 109-112.
Estévez, A., Arvelo, W., Hall, A. J., López, M. R., López, B., Reyes,
L., Moir, J. C., Gregoricus, N., Vinjé, J., Parashar, U. D. &
Lindblade, K. A. ���� Prevalência e diversidade genética de
norovírus entre pacientes com diarreia aguda na Guatemala.
Journal of Medical Virology 85 (7), 1293-1298.
Fankhauser, R. L., Monroe, S. S., Noel, J. S., Humphrey, C. D.,
Bresee, J. S., Parashar, U. D., Ando, T. & Glass, R. I. ����
Tendências epidemiológicas e moleculares de "vírus do tipo
Norwalk" associados a surtos de gastroenterite nos Estados
Unidos. The Journal of Infectious Diseases 186 (1), 1-7.
Farkas, K., Hassard, F., McDonald, J. E., Malham, S. K. & Jones,
D. L. ���� Avaliação de métodos moleculares para a detecção e
quantificação de ácidos nucleicos derivados de patógenos em
sedimentos. Frontiers in Microbiology 8 (53), 1-12.
https://doi. org/10.3389/fmicb.2017.00053.
Farkas, K., Cooper, D. M., McDonald, J. E., Malham, S. K., de
Rougemont, A. & Jones, D. L. ���� Dinâmica sazonal e
espacial de vírus entéricos em águas residuais e em águas
receptoras ribeirinhas e estuarinas. Science of the Total
Environment 634, 1174-1183.
Fioretti, J. M., Bello, G., Rocha, M. S., Victoria, M., José Paulo
Gagliardi, L. & Miagostovich, M. P. ���� Dinâmica temporal do
norovírus GII. 4 variantes no Brasil entre 2004 e 2012. PLoS
ONE 9 (3), 1-7.
Gibney, K. B., O'Toole, J., Sinclair, M. & Leder, K. ���� Carga de
doença atribuída à transmissão pela água de doenças
selecionadas
 455 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
patógenos entéricos, Austrália, 2010. American Journal
of Tropical Medicine and Hygiene 96 (6), 1400-1403.
Gregório, A. M. S. & Mendes, A. C. ���� Batimetria e
sedimentologia da baía de guajará, belém, estado do
pará, Brasil. Amazônia: Ciência G Desenvolvimento 5 (9),
53-72.
Haramoto, E., Katayama, H., Oguma, K., Koibuchi, Y., Furumai,
H. & Ohgaki, S. ���� Effects of rainfall on the occurrence of
human adenoviruses, total coliforms and Escherichia coli in
seawater. Water Science G Technology 54 (3), 225-230.
Haramoto, E., Kitajima, M., Hata, A., Torrey, R. J., Masago, Y.,
Sano, D. & Katayama, H. ���� Uma análise do progresso
recente nos métodos de detecção e prevalência de vírus
entéricos humanos na água. Water Research 135, 168-186.
Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE) ����
Disponível em: https://ww2.ibge.gov.br/home/estatistica/
populacao/censo2010/sinopse/sinopse_tab_rm_zip.shtm
(acessado em 13 de setembro de 2018).
Kageyama, T., Kojima, S., Shinohara, M., Uchida, K., Fukushi, S.,
Hoshino, F. B., Takeda, N. & Katayama, K. ���� Ensaio
amplamente reativo e altamente sensível para vírus do tipo
Norwalk baseado em transcrição reversa-PCR quantitativa em
tempo real. Journal of Clinical Microbiology 41 (4), 1548-
1557.
Katayama, H., Shimasaki, A. & Ohgaki, S. ���� Desenvolvimento de
ummétodo de concentração de vírus e s u a aplicação na
detecção de enterovírus e do vírus norwalk na água do mar
costeira Desenvolvimento de um método de concentração de
vírus e sua aplicação na detecção de enterovírus e do vírus
norwalk na água do mar costeira. Applied and Environmental
Microbiology 68 (3), 1033-1039.
Katoh, K. & Standley, D. M. ���� MAFFT multiple sequence
alignment software version 7: improvements in performance
and usability. Molecular Biology and Evolution 30 (4), 772-
780.
Kearse, M., Moir, R., Wilson, A., Stones-Havas, S., Cheung, M.,
Sturrock, S., Buxton, S., Cooper, A., Markowitiz, S., Duran,
C., Thierer, T., Ashton, B., Meintjes, P. & Drummond, A. ����
Geneious basic: an integrated and extendable desktop
software platform for the organization and analysis of
sequence data. Bioinformatics 28 (12), 1647-1649.
Kitajima, M., Oka, T., Haramoto, E., Takeda, N., Katayama, K. &
Katayama, H. ���� Distribuição sazonal e diversidade genética
dos norovírus dos genogrupos I, II e IV no rio Tamagawa,
Japão. Environmental Science G Technology 44 (18), 7116-
7122.
Kitajima, M., Haramoto, E., Phanuwan, C., Katayama, H. &
Furumai, H. ���� Detecção molecular e genotipagem de
norovírus humano em água de afluentes e efluentes em uma
estação de tratamento de águas residuais no Japão. Journal of
Applied Microbiology 112 (3), 605-613.
Kojima, S., Kageyama, T., Fukushi, S., Hoshino, F. B., Shinohara,
M., Uchida, K., Natori, K., Takeda, N. & Katayama, K. ����
Primers de PCR específicos para genogrupo para detecção de
vírus do tipo Norwalk . Journal of Virological Methods 100 (1-
2), 107-114.
Kroneman, A., Vega, E., Vennema, H., Vinjé, J., White, P. A.,
Hansman, G., Green, K., Martella, V., Katayama, K. &
Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por
convidado
Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
Koopmans, M. ���� Proposal for a unified norovirus
nomenclature and genotyping (Proposta para uma nomenclatura
e genotipagem unificadas de norovírus). Archives of Virology
158 (10), 2059-2068.
Larsson, A. ���� Aliview: um visualizador de alinhamento rápido e leve
e um editor para grandes conjuntos de dados. Bioinformatics 30
(22), 3276-3278.
Lee, G.-C., Kim, M.-J., Kim, J. I. & Lee, C. H. ���� Ocorrência e
caracterização molecular de norovírus em águas superficiais
coreanas entre 2007 e 2010. Journal of Microbiology and
Biotechnology 24 (4), 556-562.
Masachessi, G., Pisano, M. B., Prez, V. E., Martínez, L. C.,
Michelena, J. F., Martínez-Wassaf, M., Giordano, M. O., Isa,
M. B., Pavan, J. V., Welter, A., Nates, S. V. & Ré, V. ����
Vírus entéricos em águas superficiais da Argentina: detecção
molecular e de vírus viáveis. Applied and Environmental
Microbiology 84 (5), 1-12.
Miagostovich, M. P., Ferreira, F. F. M., Guimarães, F. R., Fumian,
T. M., Diniz-Mendes, L., Luz, S. L. B., Silva, L. A. & Leite,
J. P. G. ���� Detecção e caracterização molecular de vírus
de gastroenterite que ocorrem naturalmente nas águas de
igarapés de Manaus, Amazônia Central, Brasil. Applied and
Environmental Microbiology 74 (2), 375-382.
Miagostovich, M. P., Guimarães, F. R., Vieira, C. B., Fumian, T. M., da
Gama, N. P., Victoria, M., de Oliveira, J. M., Mendes,
A. C., Gaspar, A. M. & Leite, J. P. ���� Avaliação da qualidade da
água em uma região de fronteira entre a Mata Atlântica e uma
área urbanizada no Rio de Janeiro, Brasil. Food and
Environmental Virology 6 (2), 110-115.
Nguyen, L. T., Schimidt, H. A., Haeseler, A. V. & Minh, B. Q. ����
IQ-TREE: a fast and effective stochastic algorithm for
estimating maximum likelihood phylogenies. Molecular
Biology and Evolution 32 (1), 268-274.
Patel, M. M., Widdowson, M. A., Glass, R. I., Akazawa, K., Vinjé,
J. & Parashar, U. D. ���� Revisão sistemática da literatura
sobre o papel dos norovírus na gastroenterite esporádica.
Emerging Infectious Diseases 14 (8), 1224-1231.
Prefeitura Municipal de Belém. Anuário Estatístico do Município
de Belém (PMB) ���� Caracterização do Território. Disponível
em: http://www.belem.pa.gov.br/transparencia/wp-
content/uploads/2017/06/1_01_Caracterizacao-do-
Territorio.pdf (acessado em 12 de setembro de 2018).
Queiroz, A. P. S., Santos, F. M., Sassaroli, A., Hársi, C. M.,
Monezi, T. A. & Mehnert, D. U. ���� Membrana de
filtro eletropositivo como alternativa para a eliminação de
inibidores de PCR de amostras de esgoto e água.
Applied and Environmental Microbiology 67 (10),
4614-4618.
Ramani, S., Atmar, R. L. & Estes, M. K. ���� Epidemiology
de norovírus humanos e atualizações sobre o desenvolvimento de
vacinas.
Current Opinion in Gastroenterology 30 (1), 25-33.
Ribeiro, K. T. S. ���� Ocupação histórica e evolução urbana em
Belém-Pará. In: Água E Saúde Humana em Belém. Cejup,
Belém, pp. 81-133.
Rigotto, C., Victoria, M., Moresco, V., Kolesnikovas, C. K., Corrêa,
A., Souza, D. S. M., Miagostovich, M. P., Simões, C. M. O. &
Barardi, C. R. M. ���� Avaliação de adenovírus, hepatite A
 456 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica
brasileira
presença de vírus e rotavírus em amostras ambientais em
Florianópolis, sul do Brasil. Journal of Applied Microbiology
109 (6), 1979-1987.
Sekwadi, P. G., Ravhuhali, K. G., Mosam, A., Essel, V., Ntshoe,
G. M., Shonhiwa, A. M., McCarthy, K., Mans, J., Taylor,
M. B., Page, N. A. & Govender, N. ���� Surto de
gastroenterite transmitido pela água na costa de KwaZulu-
Natal, África do Sul, dezembro de 2016/janeiro de 2017.
Epidemiologia e Infecção 146 (10) (janeiro de 2017), 1318-
1325.
Sinclair, R. G., Jones, E. L. & Gerba, C. P. ���� Vírus em surtos
de doenças transmitidas pela água para fins recreativos: uma
revisão. Journal of Applied Microbiology 107 (6), 1769-
1780.
Siqueira, J. A. M., Linhares, A. d. C., de Carvalho, T. C. N., Aragão,
G. C., Oliveira, D. d. S., Dos Santos, M. C., Sousa, M. S.,
Justino, M. C. A., Mascarenhas, J. D. P. & Gabbay, Y. B. ����
Infecção por norovírus em crianças internadas por
gastroenterite aguda em Belém, Pará, norte do Brasil. Journal
of Medical Virology 85 (4), 737-744.
Siqueira, J. A. M., Bandeira, R. d. S., Justino, M. C. A., Linhares,
A. d. C. & Gabbay, Y. B. ���� Characterization of novel
intragenotype recombination events among norovirus
pandemic GII.4 variants. Infection, Genetics and Evolution
44, 361-366.
Siqueira, J. A. M., Júnior, E. C. S., Linhares, A. d. C. & Gabbay,
Y. B. ����a Análise molecular de norovírus em amostras de
crianças inscritas em um estudo de 1982-1986 em Belém,
Brasil: um estudo longitudinal baseado na comunidade. Journal
of Medical Virology 89 (11), 1894-1903.
Siqueira, J. A. M., Bandeira, R. D. S., Oliveira, D. D. S., Dos Santos,
L. F. P. & Gabbay, Y. B. ����b Diversidade de genótipos e
evolução molecular de norovírus: um estudo abrangente de 30
anos (1982-2011) com crianças do norte do Brasil. PLoS ONE
12 (6), 1-21.
Sousa, R. C. d., Pereira, L. C. C., Costa, R. M. d. & Jiménez, J. A.
���� Gestão de praias estuarinas na costa amazônica por meio
da aplicação de índices de capacidade de carga recreativa .
Tourism Management 59, 216-225.
Tamura, K., Stecher, G., Peterson, D., Filipski, A. e Kumar, S.
���� MEGA6: análise de genética evolutiva molecular versão
6.0. Molecular Biology and Evolution 30 (12),
2725-2729.
Teixeira, D. M., Hernandez, J. M., Silva, L. D., Oliveira, D. d. S.,
Spada, P. K. d. P., Gurjão, T. C. M., Mascarenhas, J. D. P.,
Linhares, A. C., Morais, L. L. C. S. & Gabbay, Y. B. ����
Ocorrência de norovírus GIV em amostras ambientais de
água da cidade de Belém, Região Amazônica, Brasil. Food
and Environmental Virology 8 (1), 101-104.
Teixeira, D. M., De Pontes Spada, P. K., De Sá Morais, L. L. C.,
Fumian, T. M., De Lima, I. C. G., Oliveira, D. S., Bandeira,
R. B., Gurjão, T. C., Sousa, M. S., Mascarenhas, J. D. &
Gabbay, Y. B. ���� Norovirus genogrupos I e II em
amostras ambientais de água da cidade de Belém, norte do
Brasil. Journal of Water and Health 15 (1), 163-174.
Instituto Trata Brasil ���� Ranking do Saneamento. Disponível em:
http://www.tratabrasil.org.br/datafiles/estudos/
Baixado de http://iwaponline.com/jwh/article-pdf/17/3/442/639187/jwh0170442.pdf por
convidado
Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
ranking/2016/relatorio-completo.pdf (acessado em 14
Setembro de 2018).
Updyke, E. A., Wang, Z., Sun, S., Connell, C., Kirs, M. & Wong,
M. ���� Human enteric viruses-potential indicators for
enhanced monitoring of recreational water quality (Vírus
entéricos humanos-indicadores potenciais para monitoramento
aprimorado da qualidade da água para recreação). Virologica
Sinica 30 (5), 344-353.
van Beek, J., de Graaf, M., Al-Hello, H., Allen, D. J., Ambert-Balay,
K., Botteldoorn, N., Eden, J. S., Fonager, J., Hewitt, J., Iritani,
N., Kroneman, A., Vennema, H., Vinjé, J., White, P. A. &
Koopmans, M. ���� Molecular surveillance of norovirus,
2005-16: an epidemiological analysis of data collected from
the NoroNet network. The Lancet Infectious Diseases 18 (5),
545-553.
Vandieken, V., Sabelhaus, L. & Engelhardt, T. ���� A dinâmica do
vírus é influenciada pela estação, marés e transporte advectivo em
sedimentos permeáveis entre marés. Frontiers in Microbiology 8,
1-12.
Vergara, G. G. R. V., Rose, J. B. & Gin, K. Y. H. ���� Avaliação de
risco de norovírus e adenovírus humanos em águas superficiais
recreativas. Water Research 103, 276-282.
Viana, I. G. S. ���� Análise do processo de uso e ocupação da orla
da praia do areião (ilha de mosqueiro-pa), tendo em vista o
cumprimento das diretrizes do plano nacional de
gerenciamento costeiro. Revista Geonorte 8 (30), 63-77.
Victoria, M., Rigotto, C., Moresco, V., Correa, A. d. A.,
Kolesnikovas, C., Leite, J. P. G. & Miagostovich, M. P. ����
Avaliação da contaminação por norovírus em amostras
ambientais da cidade de Florianópolis, sul do Brasil. Journal
of Applied Microbiology 109 (1), 231-238.
Victoria, M., Fumian, T. M., Rocha, M. S., Dalmao, F., Leite,
J. P. G., Girones, R. & Miagostovich, M. P. ����a
Disseminação de vírus gastroentéricos e influência de
eventos de chuva em praias urbanas no Brasil. Journal of
Applied Microbiology 117 (4), 1210-1218.
Victoria, M., Tort, L. F. L., García, M., Lizasoain, A., Maya, L.,
Leite, J. P. G., Cristina, J., Colina, R. & Miagostovich, M. P.
����b Avaliação de vírus gastroentéricos de águas residuais
despejadas diretamente no rio Uruguai, Uruguai. Food and
Environmental Virology 6 (2), 116-124.
Victoria, M., Tort, L. F. L., Lizasoain, A., García, M., Castells,
M., Berois, M., Divizia, M., Leite, J. P. G., Cristina, J. &
Colina, R.
���� A detecção molecular de norovírus em amostras de
esgoto do Uruguai revela uma alta diversidade genética e a
substituição da variante GII.4 ao longo do tempo. Journal of
Applied Microbiology 120 (5), 1427-1435.
Vieira, C. B., Mendes, A. C. d. O., Guimarães, F. R., Fumian, T.
M., Leite, J. P. G., Gaspar, A. M. C. & Miagostovich, M. P.
���� Detecção de vírus entéricos em águas recreativas de
uma lagoa urbana na cidade do Rio de Janeiro, Brasil.
Memorias Do Instituto Oswaldo Cruz 107 (6), 778-784.
Vieira, C. B., Corrêa, A. A., de Jesus, M. S., Luz, S. L. B., Wyn-
Jones, P., Kay, D., Vargha, M. & Miagostovich, M. P. ����
Vigilância de vírus em diferentes cenários sazonais da bacia
do rio Negro, Amazônia, Brasil. Food and Environmental
Virology 8 (1), 57-69.
 457 D. R. de Deus et al. | Norovirus em águas superficiais de quatro praias da região amazônica Jornal da Água e Saúde | 17.3 | 2019
brasileira

Vinjé, J. ���� Avanços em métodos laboratoriais para detecção e
tipagem de norovírus. Journal of Clinical Microbiology 53 (2),
373-381.
Wade, T. J., Augustine, S. A. J., Griffin, S. M., Sams, E. A., Oshima,
K. H., Egorov, A. I., Simmons, K. J., Eason, T. N. & Dufour,
A. P. ���� Infecção assintomática por norovírus associada à
natação em uma praia tropical: um estudo de coorte prospectivo.
PLoS ONE 13 (3), 1-14.
Organização Mundial da Saúde ���� Diretrizes de adendo para
ambientes aquáticos recreativos seguros. 1: Costeira e doce
Waters. Disponível em: http://apps.who.int/iris/bitstream/
10665/70226/1/WHO_HSE_WSH_10.04_eng.pdf (acessado
em 10 de agosto de 2018).
Wyn-Jones, a. P. & Sellwood, J. ���� Enteric viruses in the aquatic
environment. Journal of Applied Microbiology 91 (6), 945-962.
Zhu, H., Yuan, F., Yuan, Z., Liu, R., Xie, F., Huang, L., Liu, X.,
Jiang, X., Wang, J., Xu, Q., Shen, Z., Liu, D., Zhang, R. &
Lu, Y. ���� Monitoramento da água do lago Poyang
quanto à contaminação por esgoto usando vírus entéricos
humanos como indicador. Virology Journal 15 (1), 1-9.

Recebido pela primeira vez em 22 de novembro de 2018; aceito na forma revisada em 19 de fevereiro de 2019. Disponível on-line em
14 de março de 2019

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convidado