Safesui

ourofinosaudeanimal.com

Circovírus
A definição de vacina contra
a circovirose foi atualizada.
Alinhada ao propósito de reimaginar a saúde animal e com o
objetivo de proporcionar uma inovação integrada à realidade da
suinocultura nacional, a Ourofino desenvolveu a primeira vacina
PCV2b do país. Elaborada a partir de isolado brasileiro e com
adjuvante aquoso de dupla fase, características que promovem
eficácia, segurança e menor risco de falha vacinal em comparação
às demais vacinas PCV2a, Safesui Circovírus apresenta uma
forma avançada de combater e controlar a circovirose.
Atualização
Circovírus
Introdução e Características
da Circovirose suína
 Capítulo 1
Introdução e
Características da
Circovirose suína
Especialista Técnica Biológicos - Ourofino Saúde Animal
Introdução
A primeira descoberta do circovírus (PCV)
ocorreu através de um contaminante la-
boratorial de células renais suínas (PK-15)
(Tischer 1974) o qual mesmo isolado em perfis
sorológicos não foi atribuído doença, sendo
denominado PCV não patogênico.
Dezessete anos mais tarde (1991) uma nova
enfermidade foi diagnosticada em suínos
denominada de Síndrome Multissistêmica
do Definhamento Suíno (SMDS), caracteriza-
da por perda progressiva de peso, descon-
forto respiratório e palidez de pele (Harding,
1997). Um ano depois foi diagnosticado este
mesmo vírus tanto na América do Norte
quanto na Europa. Quando comparado ao
primeiro isolado (PCV não patogênico), foi
verificado que esses dois isolados diferiram
geneticamente e antigenicamente. Por este
Características da doença
A doença, caracterizada por definha-
mento e lesões severas no tecido linfóide foi
diagnosticada no Brasil em 1999 (CIACCI-
-ZANELLA; MORES, 2003) e rapidamente foi
observada em todas as áreas de produção
intensiva de suínos, sendo a infecção por
PCV2 hoje endêmica na suinocultura tec-
nificada. No entanto, estudo retrospectivo
demonstrou que a Circovirose está presente
no Brasil desde 1988 (Zanella et al, 2006).
3
Andrea Panzardi
motivo, este agente foi subdividido em dois
diferentes tipos: PCV1 (vírus não patogênico)
e PCV2 (vírus patogênico) (Hamel et al., 1998;
Meehan et al,.1998).
Apesar da circovirose (PCV) não ser uma
enfermidade recente, ela continua sendo
um grande desafio para a produção de suí-
nos, estando entre as três (3) enfermidades
de maior impacto econômico, uma vez que
ele abre portas para doenças secundárias
em decorrência da imunossupressão causa-
da pela infecção do circovírus tipo 2 (PCV2),
o que agrava o quadro. O PCV2 está asso-
ciado a enfermidades conhecidas como,
Síndrome da dermatite e nefropatia suína
(PDNS), falhas reprodutivas e complexo de
doenças respiratórias dos suínos (PRDC),
sendo, então, proposto o termo de doenças
do circovírus suíno (PCVD) e doenças asso-
ciadas ao circovírus suíno (PCVAD), respecti-
vamente na Europa e EUA (Puig, 2009).
A SMDS é considerada atualmente uma
doença multifatorial e vários co-fatores in-
fecciosos e não-infecciosos ou fatores de
risco causadores de estresse como densi-
dade elevada, variações térmicas acen-
tuadas, frio, baixa qualidade do ar, mistura
de leitões com idades e leitegadas diferen-
tes podem exacerbar os sinais e a gravida-
de da doença (SEGALES, 2012).
A excreção viral e transmissão pode se dar
por várias rotas (nasal, oral e fecal), sendo a
via oronasal a rota mais frequente de trans-
missão (ROSE; OPRIESSNIG, et al. 2011).
 Atualização circovírus
Um animal infectado pelo PCV2 elimina o
vírus pelas fezes em torno de 13 dias após
a infecção, sendo uma fonte importante de
disseminação. O PCV2 é muito resistente às
condições ambientais e aos desinfetantes.
Portanto, o contato direto ou indireto com
suínos infectados, instalações, equipamen-
tos, pessoal contaminado e fômites tam-
bém podem transmitir o agente.
Dentre os diversos sinais clínicos observa-
dos nos leitões de rebanhos infectados com
o PCV2, o emagrecimento rápido e pro-
gressivo é o sinal mais típico (GRAU-ROMA;
HJULSAGER, et al. 2009). Evidencia-se tam-
bém, apatia, anorexia, pelo opaco, disp-
neia, conjuntivite, palidez e icterícia da pele
e mucosas, sinais de pneumonia, diarreia e
finalmente caquexia. Entretanto, a forma
subclínica pode ocorrer em muitos reba-
nhos afetados, onde nestes leitões obser-
va-se apenas desempenho insuficiente e
maior ocorrência de outros problemas sani-
tários, especialmente diarreia e pneumonia
(SEGALES, 2011).
Os primeiros anos após o diagnóstico do
circovírus a campo foram muito comple-
xos, pois não havia vacinas paro o auxílio
no controle da doença, e, por esse motivo a
quantidade de leitões refugos na fase final
de creche e início de recria era muito gran-
de, por volta de 60 – 80% e uma mortalida-
de de 3 a 40% (Ciacci-Zanella, 2017). Entre-
tanto, por volta de 2002/2003 foi iniciada a
produção de vacinas “autógenas” confec-
cionadas à base de homogeneizados de
4
tecidos linfoides de animais clinicamente
doentes, permitindo uma boa redução do
percentual de mortalidade para em torno
de 4%. No ano de 2007 a primeira vacina
comercial de PCV2 foi introduzida no Brasil,
com foco em matrizes e leitões e contribuiu
ainda mais com a redução da mortalidade,
para um patamar em torno de 2%.
Em função da excelente eficácia das va-
cinas comerciais, praticamente 100% das
granjas utilizam a vacina para circovirose
atualmente, o que fez com que os qua-
dros clínicos reduzissem significativamen-
te, permanecendo somente alguns poucos
casos subclínicos, com redução de ganho
de peso diário (GPD) e aumento da conver-
são alimentar (CA). Entretanto, nos últimos
anos, a partir de 2015, houve um aumento
de quadros clínicos de circovirose mesmo
em granjas que utilizavam vacina há alguns
anos. Este aumento, mesmo que em menor
proporção, foi atribuído à falha vacinal. En-
tretanto, ao isolar o PCV2 e realizar o se-
quenciamento, observou-se a presença de
novos genótipos do PCV2, o que se acre-
dita que este aumento de quadros clínicos,
possa ser decorrente de uma pressão de
seleção em decorrência do uso da vacina.
Essas subpopulações de leitões formadas
passam a ser um ponto de alerta, uma vez
que albergam o vírus em média a alta car-
ga viral, sendo então fontes de recombina-
ção, replicação e disseminação da doença
na granja.
 Referências Literárias
CIACCI-ZANELLA, J.; N. MORES (2003). "Diagnosis of
post-weaning multisystemic wasting syndrome in pigs
in Brazil caused by porcine circovirus type 2." Arquivo
Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia 55(5):
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CIACCI - ZANELLA, J.R.C, MORÉS, N. 2017. Situação
atual da circovirose no Brasil. Anais Congresso
ABRAVES – Associação Brasileira de Veterinários
Especialistas em Suínos. Goiânia, GO.
GRAU-ROMA, L., CRISCI, E., SIBILA, M., LOPEZ-SORIA,
S., NOFRARIAS, M., CORTEY, M., FRAILE, L., OLVERA,
A., SEGALÉS, J. A proposal on porcine circovirus
type 2 (PCV2) genotype definition and their relation
with postweaning multisystemic wasting syndrome
(PMWS) occurrence. Veterinary Microbiology 128, 23–
35, 2008.
HARDING, J. C. S. Post-weaning multisystemic wasting
syndrome: preliminary epidemiology and clinical
findings. In: WESTERN CANADIAN ASSOCIATION OF
SWINE PRACTITIONERS, Proceedings Am. Assoc.
Swine Practit Quebec, Western Canadian Association
of Swine Practitioners, p.21, 1996.
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HAMEL, A. L.; LIN, L. L.; NAYAR,G. P. S. Nucleotide
Sequence of Porcine Circovirus Associated with Post
weaning Multisystemic Wasting Syndrome in Pigs.
Journal of Virology, v.72, n.6, p.5262-5267, 1998.
MEEHAN, B.; MCNEILLY, F.; TODD, D.; KENNEDY, S.;
JEWHURST, V.A.; ELLIS, J.A.; HASSARD, L.E.; CLARK,
E.G.; HAINES, D.M.; ALLAN, G.M. Characterization
of novel circovirus DNAs associated with wasting
syndromes in pigs. Journal of General Virology, v.79,
p.2171-2179, 1998
Puig, 2009. Characterization of imune responses
to porcine circovirus type 2 (PCV2) infection and
vaccination in pigs. Facultat de Veterinária de
Barcelona.
ROSE, N. T. Opriessnig, B. Grasland and A. Jestin (2011).
"Epidemiology and transmission of porcine circovirus
type 2 (PCV2)." Virus Res.
SEGALES, J. (2012). "Porcine circovirus type 2 (PCV2)
infections: clinical signs, pathology and laboratory
diagnosis." Virus Res 164(1-2): 10-19.
Zanella et al. – Identificação do circovírus suíno
tipo 2 por reação em cadeia de polimerase e por
imunohistoquímica em tecidos suínos arquivados
desde 1988 no Brasil, 2006.
Atualização
Circovírus
Características do Circovírus
suíno e a evolução dos diferentes
genótipos de PCV2 circulantes
 Capítulo 2
Características do Circovírus
suíno e a evolução dos diferentes
genótipos de PCV2 circulantes
Especialista Técnica Biológicos - Ourofino Saúde Animal
Características do Circovírus
O circovírus é um dos menores vírus co-
nhecido, de formato icosaédrico, DNA não
envelopado de fita simples (ssDNA), com
partícula viral de 17 ± 1,3 nm de diâmetro. O
gene do PCV2 é composto por 11 regiões de
cadeia aberta de leitura de aminoácidos,
ou seja, regiões de codificação de proteínas
(ORFs). Destas 11 regiões a mais importante é
a ORF2 (ou gene Cap), pois é a responsável
por codificação de proteínas do capsídeo
viral, que tem como principal função a de in-
duzir a formação de anticorpos (Ac) proteto-
res, estando também associada à diferentes
graus de virulência. Diversos autores adota-
ram a região ORF2 como a de eleição para
determinar os diferentes genótipos de PCV2,
pelo fato de ser uma região que gera resul-
tados muito similares à análise do genoma
como um todo, e corresponde a uma região
de menor tendência de recombinação, sen-
do mais conservada.
A ORF1 (ou gene Rep), por sua vez, é a res-
ponsável pela replicação viral, localiza-se
no filamento positivo, orientado no sentido
horário; ele codifica as proteínas replicases
não estruturais Rep e Rep’, de 314 e 178 ami-
noácidos (aa) de comprimento, respectiva-
mente.
A ORF3 está completamente sobreposta ao
7
Andrea Panzardi
gene ORF1 e localiza-se no filamento com-
plementar, orientado no sentido anti-horá-
rio, e codifica uma proteína não estrutural de
105 aa de comprimento. In vitro, a proteína
ORF3 parece estar implicada na apoptose
das células PK15, induzida por vírus. Muito
recentemente foi demonstrado que leitões
inoculados com um PCV2 mutante ORF3 de-
ficiente manifestavam viremia decrescente
e menos lesões patológicas associadas ao
PCV2, em comparação a suínos inoculados
com o PCV2 do tipo selvagem. Por essa ra-
zão foi sugerido que a proteína ORF3 pode
ter um papel essencial na replicação e na
patogenicidade viral (Liu et al., 2006).
Evolução dos diferentes
genótipos de PCV2
Apesar do circovírus ser um vírus DNA, ele
é considerado um dos vírus com maior ca-
pacidade de mutação (Figura 1). Em função
disso, atualmente há a presença de cinco (5)
diferentes genótipos de PVC2, sendo esses
representados por: PCV2a, PCV2b, PCV2c,
PCV2d (antigo mPCV2b) e PCV2e, os quais
podem infectar leitões de maneira simultâ-
nea, ou seja, podendo este albergar mais
de um genótipo de PCV2. Há indícios de um
sexto genótipo de circovírus já sequenciado,
sendo este representado pelo PCV2f.
 Atualização circovírus

Taxa de Mutação
(mutações/local/replicação)

Alta Baixa
evolução Retrovirus evolução
ssRNA
ssDNA dsDNA
Figura 1. Taxa
de mutação e
10° 10-2 10-4 10-6 10-8 10-10
substituição de
ssDNA dsDNA vírus RNA e DNA.
ssRNA
PCV2
Retrovirus

Taxa de substituição (substituições/local/ano) Fonte: Adaptado de Holmes, et al., 2009

Nos EUA a evolução do circovírus se deu
com o passar do tempo, sendo que entre
2000 a 2005 havia um predomínio do PC-
V2a, entretanto, a partir de 2005 houve uma
substituição pelo genótipo b, o qual pas-
sou a ser o mais predominante. A partir de
2012 houve um nova evolução onde o PCV2d
passou a ser o genótipo de maior circulação
na suinocultura americana. A figura abaixo
(Figura 1) demonstra uma evolução dos dife-
rentes genótipos nos últimos cinco (5) anos,
sendo que a partir de 2014 o PCV2d passou
a ser o genótipo mais frequente (~ 70%). Em
2013 o genótipo b atingiu em torno de 50%,
posteriormente havendo uma queda man-
tendo-se próximo a 13%. Já o PCV2a desde
2013 apresentou um percentual bem abaixo
dos demais genótipos (~ 13%), demonstran-
do a perda de sua representatividade.

80%

60%

40% PCV2a

20% PCV2b

PCV2d
0%
2013 2014 2015 2016 2017 PCV2e

Gráfico 1. Prevalencia dos diferentes genótipos de PCV2 isolados

de granjas suínas nos EUA nos anos de 2013 a 2017.

8
 No Brasil, o volume de dados é mais escas-
so, entretanto é possível traçar uma linha de
evolução através de alguns estudos realiza-
dos ao longo dos últimos 15 anos. É possí-
vel verificar que a dinâmica de evolução do
vírus no Brasil acompanhou uma dinâmica
similar à observada nos Estados Unidos. No
gráfico abaixo (Gráfico 2) é possível obser-
var que a partir de 2014 e 2015 o PCV2d co-
meçou a aumentar em ocorrência, e já nos
anos de 2016 e 2017 passou a ser o genótipo
mais prevalente no Brasil. Por outro lado, é
possível observar uma correlação negativa
com a prevalência do PCV2b em relação ao
PCV2d, sendo a circulação do PCV2a em um
percentual extremamente baixo, em torno 2
a 8% nos últimos 3 anos.

100

90 PCV2a
80 PCV2b
70 PCV2d
60
50
40
30
20
10
0

2002 a 2005
(n = 25) 2006 a 2009
(n = 82) 2010 a 2015
(n = 248) 2016 a 2017
(n = 147) 2018 (n = 24)

Fonte: Adaptado de Castro et al., 2005; GenBank (2002 a 2015),

Rodrigues et al., 2018; Gava et al, 2018;
dados internos Ourofino, 2018.

9
 Atualização circovírus
A homologia entre diferentes isolados de
PCV2 é relativamente alta, embora haja
uma alta diversidade dentre as populações
existentes. Os primeiros estudos relaciona-
dos à análise filogenética demonstraram
que os isolados de diferentes localidades
apresentavam variações em sua sequência
gênica, sendo representadas por mutações
pontuais de nucleotídeos. O PCV1 (apatogê-
nico) e PCV2 (patogênico) possuem em 76%
de similaridade genômica, já o PCV2 e PCV3
possuem em torno de 35 a 53% de similarida-
de. Por outro lado, a análise de sequências
genômicas de vários isolados de PCV2 do
Brasil e de outros países indicou uma grande
similaridade, sendo em média de 96% (KIM
et al., 2001), entretanto, análises de filoge-
nia indicam que o PCV2b está mais próximo
ao PCV2d quando comparado ao PCV2a,
sendo sua homologia respectivamente de
95% e 93%. O ponto de corte utilizado para
10
a diferenciação entre genótipos do PCV2 é
de 3,5% de divergência na sequência de nu-
cleotídeos.
Estudos epidemiológicos avaliando surtos
em casos esporádicos sugerem que o PC-
V2b é mais virulento, e o PCV2a teria sido o
genótipo mais frequente durante muito tem-
po. Atualmente, o responsável pela maioria
dos casos clínicos de SMDS é o PCV2b. Ao
passo que se supõe que o genótipo PCV2a
era responsável por infecções clinicamen-
te inaparentes (GRAU-ROMA et al., 2008;
WIEDERKEHR et al., 2009). Estudos afirmam
que no Brasil os dois genótipos estão pre-
sentes, inclusive o mesmo animal pode estar
infectado com mais de um genótipo con-
comitantemente. Os autores destes estu-
dos sugerem que o surgimento desses novos
genótipos possa ser decorrente de uma re-
combinação gênica em leitões que possuam
coexistência destes diferentes genótipos.
 Referências Literárias
Madson, 2018 – Pig Health Today - PCV2 Future
Liu, J., Chen, I., Du, Q., Chua, H., Kwang, J., 2006. The
considerations for an evolving vírus. https://
ORF3 protein of porcine circovirus type 2 is involved
pighealthtoday.com/pcv2-future-considerations-
in viral pathogenesis in vivo. J. Virol. 80, 5065–5073.
for-an-evolving-virus/

GRAU-ROMA, L., CRISCI, E., SIBILA, M., LOPEZ-SORIA,

WIEDERKEHR, D.D., SYDLER, T., BUERGI, E., HAESSIG,
S., NOFRARIAS, M., CORTEY, M., FRAILE, L., OLVERA,
M., ZIMMERMANN, D., POSPISCHIL, A., BRUGNERA, E.,
A., SEGALÉS, J. A proposal on porcine circovirus
SIDLER, X. A new emerging genotype subgroup within
type 2 (PCV2) genotype definition and their relation
PCV2b dominates the PMWS epizooty in Switzerland.
with postweaning multisystemic wasting syndrome
Veterinary Microbiology 136, 27–35, 2009.
(PMWS) occurrence. Veterinary Microbiology 128, 23–
35, 2008.

11
Atualização
Circovírus
Variações genéticas
e antigênicas dos
genótipos circulantes
 Capítulo 3
Variações genéticas
e antigênicas dos
genótipos circulantes
Especialista Técnica Biológicos - Ourofino Saúde Animal
Anteriormente não se acreditava em va-
riações genéticas e antigênicas entre os
diferentes genótipos e tipos de PCV2. Entre-
tanto, alguns autores ao realizarem estudos
retrospectivos de sequenciamento em teci-
dos armazenados antes mesmo de ter sido
descoberta a circovirose, foi verificada a
presença do vírus da circovirose, mesmo sem
sintomatologia clínica, sendo o PCV2a o mais
predominante. Porém, após o diagnóstico
de quadros clínicos de circovirose e doen-
ças associadas ao circovírus suíno (PCVAD),
o genótipo mais predominante passou a
ser o PCV2b, em detrimento ao PCV2a, de-
monstrando que realmente houve evolução
genética do vírus com alterações antigêni-
cas (Cortey et al., 2011; Ciacci-Zanella et al.,
2006, Gava et al., 2017).
Essas variações antigênicas entre os dife-
rentes genótipos de circovírus foram compro-
vadas por diversos estudos em uma meta-
nálise, demonstrando quadros clínicos mais
severos associados ao aumento dos genó-
tipos b e d, ratificando uma maior virulência
dos genótipos b e d quando comparado ao
PCV2a (Cortey et al., 2011; Cruz et al., 2018).
Além disso, foi verificado que a virulência
das variantes de PCV2 que causam doen-
ça clínica associada à circovirose (PCVAD), é
maior quando comparada às variantes cau-
13
Andrea Panzardi
sadoras de doença subclínica, demonstran-
do uma evolução do vírus com mutações em
pontos importantes e específicos da região
ORF2 relacionados diretamente à resposta
imune (Lefebvre et al., 2008).
Além de ser uma região responsável pela
produção de anticorpos (Ac), a região ORF2,
é a responsável por determinar a diferen-
ça entre os diferentes genótipos do PCV2,
que, consequentemente, poderão continuar
a produzir anticorpos, ou então, não apre-
sentarão resposta específica a uma deter-
minada região/epítopo. Um estudo condu-
zido por Gava et al (2017) demonstrou que
de 11 casos de circovirose clínica em leitões
presentes em oito granjas na região sul do
país, com histórico de falha vacinal, revelou
uma maior circulação do PCV2b e PCV2d,
sem a presença do PCV2a, sendo observa-
das mutações em pontos específicos na re-
gião ORF2. Estas possíveis falhas vacinais, as
quais vêm sendo observadas mais frequen-
temente em planteis vacinados, podem ser
decorrentes de mutações pontuais em lo-
cais próximos a regiões de importância para
a resposta imune ocorrida durante a evolu-
ção do PCV2, as quais podem ter impedido
o desencadeamento de algumas respostas
imunes específicas a esta região de muta-
ção.
 Atualização circovírus
Isto pode ser demonstrado em um
estudo onde de 16 anticorpos monoclonais
produzidos contra o PCV2a, quatro (4) não
apresentam reação alguma sobre o genó-
tipo de PCV2b, o que indica uma importan-
te falha imunológica, uma vez que 25% dos
Ac não se ligaram ao antígeno (Ag) (Lefeb-
vre et al., 2008). Resultados similares foram
demonstrados em um estudo utilizando Ac
policlonais, onde foi observada uma falha
vacinal em 25% dos leitões vacinados com
vacina comercial PCV2a em desafios com
PCV2d (Karuppannan & Opriessnig, 2017).
Outro estudo mais recente também de-
monstrou alteração de patogenicidade do
14
vírus, sendo o PCV2b mais patogênico e al-
teração no processo de reconhecimento de
Ac em isolados PCV2b, comprovando real-
mente haver um escape de imunidade (Cruz
et al., 2018).
Com os dados apresentados acima po-
de-se dizer que apesar das vacinas atuais
baseadas em PCV2a conferirem proteção
aos animais, provavelmente há alguma fa-
lha em termos de proteção frente à doença
em um percentual do plantel, demonstrando
que os genótipos PCV2b ou PCV2d podem
apresentar alguma vantagem em relação
ao PCV2a em se replicar e se manter em lei-
tões de plantéis vacinados.
 Referências Literárias
Gava D, Serrão VHB, Fernandes LT, Cantão ME,
Ciacci-Zanella J R, Morés N, Simon N L, de Oliveira
Ciacci-Zanella JR, Morés N, Schaefer R. Structure
S R, Gava D. Identificação do circovírus suíno
analysis of capsid protein of Porcine circovirus type 2
tipo 2 por reação em cadeia da polimerase e por
from pigs with systemic disease. Brazilian Journal of
imunohistoquimica em tecidos suínos arquivados
Mycrobiology 49 (2018) 351-357.
desde 1988 no Brasil
Karuppannan AK. and Opriessnig T. Porcine Circovirus
Cortey M, Pileri E, Sibila M. Pujols J. Balasch M. Plana
Type 2 (PCV2) Vaccines in the Context of Current
J, Segalés J. Genotypic shift of porcine circovírus
Molecular Epidemiology. Viruses 2017, 9, 99.
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2008. The Veterinary Journal 187 (2011) 363–368.
Lefebvre, D. J., Costers S, Doorsselaere JV, Misinzo
G Delputte PL, Nauwynck HJ. Antigenic differences
Cruz TF, Magrob AJ, de Castro AMMG, Pedraza-
among porcine circovirus type 2 strains, as
Ordoñeze FJ, Tsunemif M, Perahiag D, Araújo Jr JP
demonstrated by the use of monoclonal antibodies
In vitro and in silico studies reveal capsid-mutant
Journal of General Virology (2008), 89, 177–187
Porcine circovirus 2b with novel cytopathogenic and
structural characteristics. Virus Research 251 (2018)
22-33.

15
Atualização
Circovírus
Homologia/Identidade
dos diferentes
genótipos circulantes
 Capítulo 4
Homologia/Identidade dos
diferentes genótipos circulantes
Especialista Biologia Molecular – Ourofino Saúde Animal
Análises de homologia/identidade são uti-
lizadas para comparação de proteínas ba-
seada em sua sequência de aminoácidos,
isto é, o quanto um determinado antígeno
proteico se assemelha a outro antígeno ou
ao patógeno (proteína do patógeno). Assim,
quanto maior o grau de homologia/identi-
dade entre o antígeno vacinal e os genóti-
pos do patógeno circulante maior é a pro-
babilidade de proteção cruzada da vacina.
O método de análise por homologia foi
empregado para comparação do antígeno
da vacina Safesui Circovírus com amostras
brasileiras dos diferentes genótipos de cir-
culantes de PCV2.
Para análise foi realizada a busca das se-
quências de isolados brasileiros do banco de
dados NCBI [1] do período de 2003 a 2014.
Além dessa busca, foram realizadas amos-
tragens a campo de isolados brasileiros dos
períodos de 2015 a 2017 e do ano de 2018.
As análises de homologia/identidade foram
17
Lívia Faim
feitas utilizando ferramentas de Bioinformá-
tica (2, 3, 4, 5 e 6).
Os resultados apresentados na tabela 1
mostram que a ORF2 da Safesui Circovírus
(antígeno) tem maior identidade sequencial
com as ORF2 de PCV2b e PCV2d do que PC-
V2a em relação a esses genótipos.
Maior identidade sequencial infere em me-
nor risco de falha vacinal quando o animal é
vacinado com a Safesui Circovírus e a granja
tem circulação dos genótipos PCV2b e PC-
V2d (genótipos prevalentes atualmente).
Verificando a evolução dos genótipos em
relação a homologia é visto que PCV2a tem
uma tendência a se distanciar do genótipo
PCV2d a medida que os anos vão evoluin-
do (Tabela 1 – mínima identidade sequen-
cial PCV2d em relação a PCV2a). Como nas
granjas a ocorrência do genótipo PCV2d é
cada vez mais prevalente, granjas vacina-
das com vacinas baseadas em genótipo
PCV2a podem ter riscos de falhas vacinais.
 Atualização circovírus

Tabela 1. Mínima e máxima identidade sequencial entre PCV2b Safesui Circovírus, PCV2a em
relação aos diferentes genótipos (PCV2a; PCV2b e PCV2d).

Anos de 2003 a 2014 Anos de 2015 a 2017 Ano 2018

% identidade PCV2a Mínima e máxima Mínima e máxima Mínima e máxima

em relação: identidade identidade identidade

Safesui Circovírus
89,3% - 94,9% - -
(PCV2b)

PCV2a 91,4% - 100% - -

% identidade PCV2b Mínima e máxima Mínima e máxima Mínima e máxima

em relação: identidade identidade identidade

Safesui Circovírus
96,1% - 100% 98,3% - 99,1% 97,4% - 97,9%
(PCV2b)

PCV2a 88,8% - 92,3% 91,4% - 92,7% 90,6% - 91,0%

% identidade PCV2d Mínima e máxima Mínima e máxima Mínima e máxima

em relação: identidade identidade identidade

Safesui Circovírus
93,1% - 94% 92,7% - 94% 92,7% - 94,4%
(PCV2b)

PCV2a 90,1% - 91% 89,7% - 90,6% 89,3% - 91,0%

Fonte: dados não publicados, Ourofino 2019

Assim, os resultados revelam que para o ro e possui maior grau de conservação aos
cenário atual a vacina Safesui Circovírus é genótipos prevalentes atualmente (PCV2b
a mais indicada, isto é, o antígeno da vaci- e PCV2d).
na Safesui Circovírus é um isolado brasilei-

18
 Referências Literárias
[1] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/.

[2] http://www.clustal.org/clustal2/.

[3] Clamp, M.; Cuff, J.; Searle, S.; M.; Barton, G. J. The Jalview Java
alignment editor. Bioinformatics 20. p. 426-427. 2004.

[4] Kumar, S.; Stecher, G.; Tamura, K. Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version
7.0 for Bigger Datasets. Molecular Biology and Evolution. p. 1870–1874. 2016.

[5] DeLano, W.; L. PyMOL. DeLano Scientific, 2002.

[6] https://www.iedb.org/.

19
Atualização
Circovírus
Implicações práticas e
Considerações finais
 Capítulo 5

Implicações práticas e
Considerações finais

Andrea Panzardi
Especialista em Biológicos – Ourofino Saúde Animal

Implicações práticas vacinadas quando comparadas à granjas

Novos surtos de casos subclínicos e clínicos
vêm sendo relatados, apesar de a vacina-
ção ser amplamente utilizada, em pratica-
mente 100% das granjas durante os últimos
10 anos. Embora a relação desses casos com
o surgimento dos novos genótipos, princi-
palmente o PCV2b e PCV2d, ainda não es-
teja totalmente elucidada, supõe-se que
estes sejam decorrentes de uma pressão de
seleção devido ao uso constante de vaci-
nas, fazendo com que esse genótipo possa
“escapar” da imunidade estimulada pelas
vacinas de PCV2a. Isto pode ser comprova-
do por um estudo realizado por Kekarainen
et al (2014), o qual demonstra claramente
uma maior variação genética em granjas
não vacinadas para PCV2, principalmente
na região de ORF2, responsável pela codifi-
cação de proteínas do capsídeo viral, e di-
retamente relacionada à produção da res-
posta imune (Gráfico 1). Além disso, como já
descrito no capítulo 2, autores sugerem que
a evolução e replicação de novos genótipos
de PCV2 estejam relacionadas à coinfecção
por diferentes genótipos em um mesmo ani-
mal, geralmente dentro das subpopulações
de leitões em que houve alguma falha na
resposta imune, seja ela por falha vacinal e/
ou vacinação, havendo replicação e recom-
binação entre os mesmos ou diferentes ge-
nótipos, e com isso acelerando o processo
de evolução do vírus.

Fonte:
Kekarainen
et al., 2014

Gráfico 1. Diversidade nucleoídica nas sequencias gênicas Rep (ORF1) e

Cap (ORF2) em granjas de suínos vacinadas e não vacinadas para PCV2.

21
 Atualização circovírus
Como já comentado também no capítulo
3, diversos autores comprovaram que o PC-
V2b é mais patogênico que o PCV2a, sendo
o principal causador de lesões. Essa teoria é
sustentada por diversos estudos, dentre eles
o de Grau-Roma et al. (2008), em que foram
analisados diversos animais, com sinais clí-
nicos e lesões mais severas e verificaram que
estes leitões continham sequências perten-
centes ao PCV2b, e os animais sadios con-
tinham sequências pertencentes ao PCV2a.
Além disso, um estudo realizado recente-
mente analisou plantéis vacinados, sendo
observada uma maior carga viral de PCV2b
do que de PCV2a nesses animais, sendo de
65% e 13% respectivamente nos animais com
sinais clínicos de PCVAD. Outra análise reali-
zada também em plantéis vacinados, cons-
tatou que o PCV2b é realmente mais preva-
lente que o PCV2a, e observou, ainda, que
nos animais vacinados a presença de PCV2b
é a mais comum. Sendo assim, a introdução
da vacinação para esse genótipo é um fator
a se considerar (Lyoo, et al., 2010; Darwich &
Mateu, 2011; Beach et al., 2011; Shen, Halbur
& Opriessnig 2012; Madson, 2018).
Os fatores de risco relacionados à evolu-
ção/mutação gênica do PCV2 estão dividi-
dos em dois tipos de falhas:
• Falha de vacinação: relacionada às
falhas de manejo, como por exemplo,
aplicação de meia dose, aplicação so-
mente em parte do lote, aplicação em
momento não adequado e local de
aplicação inadequado.
• Falha vacinal: relacionada às falhas
da vacina propriamente dita, como por
exemplo, vacinação com genótipos de
diferentes dos atuais circulantes, tipo
de adjuvante e massa antigênica ina-
22
dequada. Estudos demonstram que
25% dos leitões que receberam vacina
PCV2a, desafiados com PCV2b apre-
sentam falha vacinal (Karuppannan &
Opriessnig, 2017). O que corrobora com
os resultados de Lefebvre et al. (2008),
que verificaram in vitro que de 16 anti-
corpos monoclonais para PCV2a, qua-
tro (4) não tiveram resposta alguma
quando desafiados com PCV2b, o que
corresponde a 25% de falha de ligação
antígeno (Ag) com o anticorpo (Ac), im-
pedindo a resposta imune neste per-
centual.
Todos esses fatores, sendo relativos à va-
cina ou ao manejo, podem contribuir com a
manutenção de uma alta carga viral circu-
lante na granja, e, aqueles, animais que per-
maneceram sem uma boa proteção, além de
criar subpopulações com baixa ou nenhuma
resposta imune, passam a ser fonte de re-
plicação, de uma possível recombinação e
de transmissão de diferentes genótipos de
PCV2, uma vez que planteis onde há algum
tipo de falha de manejo de vacinação e/ou
vacinal este vírus tem a tendência de apre-
sentar uma maior taxa de mutação.
Considerações finais
Embora seja notável o aumento de quadros
subclínicos e clínicos de circovirose a campo,
ainda há um efeito positivo dos protocolos
de vacinação atualmente utilizados com
vacinas comerciais, mesmo que todas sejam
baseadas no genótipo PCV2a, entretanto já
sendo notada algumas falhas comprovadas
tanto in vitro quanto in vivo. Portanto, uma
dúvida que permanece ainda não elucida-
da é, até quando este efeito será mantido?
 Referências Literárias
GRAU-ROMA, L., CRISCI, E., SIBILA, M., LOPEZ-SORIA, S., NOFRARIAS, M., CORTEY, M., FRAILE, L., OLVERA,
A., SEGALÉS, J. A proposal on porcine circovirus type 2 (PCV2) genotype definition and their relation with
postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) occurrence. Veterinary Microbiology 128, 23–35, 2008.

Karuppannan AK. and Opriessnig T. Porcine Circovirus Type 2 (PCV2) Vaccines in

the Context of Current Molecular Epidemiology. Viruses 2017, 9, 99.

Kekarainen, T, Gonzalez A, Liorens A, Segalés J. Genetic variability of porcine circovirus 2 in

vaccinating and non-vaccinating comercial farms. 2014. Journal of General Virology 95, 1734-1742.

Lefebvre, D. J., Costers S, Doorsselaere JV, Misinzo G Delputte PL, Nauwynck HJ.
Antigenic differences among porcine circovirus type 2 strains, as demonstrated by the
use of monoclonal antibodies. 2008. Journal of General Virology, 89, 177–187

Madson, 2018 – Pig Health Today - PCV2 Future considerations for an evolving vírus.
https://pighealthtoday.com/pcv2-future-considerations-for-an-evolving-virus/

23
Novos desafios pedem
novas soluções
Atualize o combate à circovirose
com Safesui Circovírus.
 De doença emergente a
genótipos emergentes.
Circovírus
A evolução da doença
suíno
Desde o final da década de 1990, o circovírus
suíno tem emergido globalmente como um dos
principais patógenos que acometem os suínos1.
No Brasil, o PCV2 associado à Síndrome
Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS)
foi diagnosticado pela primeira vez em 20002. No
entanto, um estudo retrospectivo demonstrou que
a circovirose está presente no Brasil desde 19883.

Início da
vacinação contra
Registro dos
PCV2 na França
primeiros
1° registro e na Alemanha
casos clínicos
PCV2 em no Brasil 2007
tecido de
suíno no Brasil 2000
1990
1962 2004
2000 Início da
vacinação
1988 Isolamento e contra PCV2
caracterização no Brasil
Relato dos do PCV2
primeiros no Brasil
1° registro
casos clínicos
PCV2 em
na Europa
tecido de suíno
na Alemanha

25
 A evolução do PCV2
O circovírus suíno possui uma alta
capacidade de rearranjos genéticos4.
Como consequência, o PCV2 vem se
modificando ao longo do tempo e,
atualmente, são descritos 6 diferentes
genótipos de PCV2: PCV2a, PCV2b,
PCV2c, PCV2d, PCV2e e PCV2f5,6.
Os genótipos PCV2a, PCV2b e
PCV2d são os mais relevantes.

Ocorrência dos principais genótipos de PCV2 no Brasil ao longo do tempo:

100
90
80
70
60
50
PCV2b PCV2d
40
PCV2a PCV2b
30
20
PCV2b
10 PCV2d
PCV2a PCV2d PCV2a PCV2b
0
2002 a 20047 2009 a 20158 2014 a 20159 2016 a 201710

26
 PCV2 - Quanto maior a homologia, menor o risco
Os animais passaram a ser vacinados em 2004, mas o vírus continuou
evoluindo e se distanciando das vacinas produzidas a partir do PCV2a.

Percentual de homologia entre os diferentes genótipos de PCV25:

PCV2f PCV2a PCV2b PCV2c PCV2d PCV2e

PCV2f 89,5 – 95,4 92,92 – 94,2 89,6 – 90,9 91,5 – 93,9 81,5 – 83,0

PCV2a 90,9 – 94,4 86,3 – 89,2 89,5 – 93,3 81,1 – 84,8

PCV2b 90,4 – 91,6 93,2 – 95,7 82,5 – 85,5

PCV2c 89,1 – 90,4 84,7 – 85,1

PCV2d 83,4 – 84,1

PCV2 – Homologia da Safesui Circovírus com o PCV2d

Percentual de homologia entre os genótipos brasileiros PCV2b (presente na
vacina Safesui Circovírus) e PCV2a em relação ao genótipo PCV2d.

Homologia do PCV2d (%) em relação a:

2003 - 2014 2015 - 2017

Safesui Circovírus
93,13 - 93,99 92,70 - 93,99
(PCV2b)

PCV2a 90,13 - 90,99 89,70 - 90,56

O genótipo PCV2d é o genótipo

de maior circulação no Brasil.

Conclusões O genótipo PCV2b Ourofino

tem maior homologia com o
PCV2d do que o PCV2a utilizado
nas vacinas convencionais.

27
 Safesui
Circovírus
A definição de vacina contra
a circovirose foi atualizada.

A primeira vacina PCV2b recombinante

contra circovírus desenvolvida no Brasil.

Proteínas
imunogênicas
encontram-se ORF2 ORF3
no capsídeo
do PCV2
Gen ORF2
responsável
pela produção
ORF1 do capsídeo

O gen ORF2
é inserido em
Baculovírus

As proteínas do
capsídeo do
PCV2 (VLP) são
combinadas
com adjuvante
aquoso

Antígenos livres
e encapsulados
pelo adjuvante Primeira
Safesui vacina
PCV2b com
Safesui adjuvante
aquoso de
liberação
lenta

Qualidade do antígeno Eficácia e segurança do

recombinante adjuvante Safesui
28
 Eficácia em desafio experimental
13

Estudo realizado na Iowa State University.

Leitões vacinados com 3 semanas de idade e desafiados com PCV2b.

Viremia após o desafio:

74% de
Animais com
viremia (%)

redução na
viremia

30 95
Safesui Controle

Avaliação microscópica de tecido linfoide: Imuno-histoquímica (IHC) de tecido linfoide:

IHC positivo (%)
linfoide (%)
Alteração

10 100 0 65
Safesui Controle Safesui Controle

Eficácia a campo
14

Desempenho de animais vacinados com Safesui Circovírus em granja comercial no Brasil.

Ganho de peso (kg/dia) - Creche: Ganho de peso (kg/dia) - Terminação:

0,402 0,362 1,013 0,929

Safesui Controle Safesui Controle

Desempenho de leitões na fase de creche em granja comercial no Brasil15.

Peso (kg):
Leitões vacinados com Safesui
tiveram melhor desempenho durante
a fase de creche quando comparados
com leitões que receberam
22,60 20,21 vacina de adjuvante reativo.
Safesui Controle

29
 Composição:
Safesui Circovírus é uma vacina inativada
produzida a partir de tecnologia
recombinante contendo proteína ORF2 do
circovírus suíno tipo 2 genótipo b – PCV2b.

Indicação:
Safesui Circovírus destina-se à
imunização de leitões saudáveis a partir
de 3 semanas de idade como medida
auxiliar na prevenção e controle da
circovirose suína e Doenças Associadas
ao Circovírus Suíno (PCVAD).

Apresentação:
Frascos com 100 mL.

Modo de uso:

Intervalo de 2 a 3 semanas

1a dose 2a dose
1 mL via 1 mL via
intramuscular intramuscular

21
dias
28
dias
35
dias
42
dias

30
 Referências bibliográficas.
1. Xiao et al. Global molecular genetic analysis of porcine circovirus type 2 (PCV2) sequences confirm
the presence of four main PCV2 genotypes and reveals a rapid increase of PCVd, 2015.
2. Zanella, J.R.C, Morés, N. Situação atual da circovirose no Brasil, 2017.
3. Zanella et al. Identificação do circovírus suíno tipo 2 por reação em cadeia de polimerase
e por imunohistoquímica em tecidos suínos arquivados desde 1988 no Brasil, 2006.
4. Segalés, J. Porcine Circovirus Diseases: Are still important?, 2015.
5. Madson, D. PCV2: Future considerations for an evolving vírus, 2018.
6. Bao et al. Retrospective study of porcine circovirus type 2 infection reveals a novel genotype PCV2f, 2018.
7. Castro, A.M.M.G. Caracterização genética de amostras brasileiras de Circovírus suíno tipo 2 (PCV-2), 2005.
8. Rodrigues et al. Temporal variation study of the porcine circovirus species and genotypes
prevalences (PCV1, PCV2a, PCV2b e PCV2d) in Brazil from 2009-20015.
9. Gava et al. Structure anlysis of capsid protein of Porcine circovirus
type 2 from pigs with systemic disease, 2018.
10. Estudo interno Ourofino, 2018.
11. Panzardi et al. Estudo interno Ourofino, 2018.
12. Faim, L. Estudo interno Ourofino, 2018.
13. Lima et al. Eficácia de vacinas experimentais baseadas no PCV2 genótipo b (PCV2b) administradas em
leitões convencionais experimentalmente co-infectados com Mycoplasma hyopneumoniae e PCV2b, 2018.
14. Estudo a campo da vacina Safesui Circovírus. Dados em arquivo Ourofino, 2018.
15. Estudo a campo da vacina Safesui Circovírus. Dados em arquivo Ourofino, 2018.

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