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Célula-tronco celular

Comentário
Células-tronco mesenquimais:
Revisitando história, conceitos e ensaios
Paolo Bianco, 1,2,5, * Pamela Gehron Robey, 3,5 e Paul J. Simmons 4,5
1Departamento de Medicina Experimental e Patologia, Universidade La Sapienza, 00161 Roma, Itália
2Parque de Ciências Biomédicas San Raffaele, 00128 Roma, Itália
3 Seção de Doenças Craniofaciais e Esqueléticas, Departamento de Saúde e Serviços Humanos, Instituto Nacional de Odontologia
e Pesquisa Craniofacial, Institutos Nacionais de Saúde, Bethesda, MD 20892, EUA
4Brown Foundation Institute of Molecular Medicine, University of Texas Health Science Center em Houston, Houston, TX 77030, EUA
5Esses autores contribuíram igualmente para este trabalho.
*Correspondência: paolo.bianco@uniroma1.it
DOI 10.1016/j.stem.2008.03.002

O conceito de células-tronco mesenquimais ganhou grande popularidade. Apesar do rápido crescimento do campo,
permanecem incertezas com relação às características definidoras dessas células, incluindo sua potência e
auto-renovável. Estas incertezas reflectem-se numa tendência crescente para questionar a própria utilização do termo.
Este comentário revisita a origem experimental do conceito de população(ões) referida(s) como células-tronco
mesenquimais e a estrutura experimental necessária para avaliar seu caráter e função.

O conceito de células-tronco originou-se no final do século XIX como um postulado
teórico para explicar a capacidade de certas
tecidos (sangue, pele, etc.) se auto-renovem durante a vida de um organismo,
mesmo que sejam compostos de células de vida curta.
Muitos anos depois, a identificação de células-tronco como células
entidades acompanharam o desenvolvimento de métodos para isolamento
prospectivo de células-tronco candidatas, em paralelo com o projeto
de bioensaios rigorosos para testar sua potência após o transplante
na Vivo.
O conceito atualmente popular de células-tronco mesenquimais
(MSCs, um termo cunhado pela primeira vez em Caplan [1991]) pode ser atribuído a
experimentos clássicos demonstrando que o transplante de osso
medula (BM) para locais anatômicos heterotópicos resulta em de novo
geração de osso e medula ectópica. Considerando que exemplos de
tais estudos remontam ao século XIX (Goujon, 1869), o
o trabalho de Tavassoli e Crosby estabeleceu claramente a prova de um potencial
osteogênico inerente associado ao BM (Tavassoli e
Crosby, 1968). Como esses experimentos foram conduzidos com
fragmentos inteiros de BM sem osso, a identidade precisa de qualquer célula
funcionando como progenitor de células ósseas diferenciadas (e
portanto, de células mesenquimais não hematopoiéticas) não poderia
ser delineado. Foram Friedenstein e colegas de trabalho, em uma série de
estudos seminais nas décadas de 1960 e 1970 (revisados em Friedenstein, 1990),
que demonstraram que o potencial osteogênico,
conforme revelado pelo transplante heterotópico de células BM, foi associado a
uma subpopulação menor de células BM. Essas células
eram distinguíveis da maioria das células hematopoiéticas por
sua rápida adesão aos vasos de cultura de tecidos e pela aparência semelhante a
fibroblastos de sua progênie em cultura, apontando para sua
origem do compartimento estromal do BM. Além de estabelecer o estroma de BM
como o palheiro onde se procura a agulha proverbial, o trabalho de Friedenstein e
colegas de trabalho proporcionou
um segundo grande avanço ao mostrar que a semeadura de células BM
suspensões em densidade clonal resultam no estabelecimento de colônias discretas
iniciadas por células únicas (a unidade formadora de colônia
fibroblástico, UFC-Fs [Friedenstein et al., 1970]). A natureza clonal
de cada colônia foi demonstrada pela dependência linear de
formação de colônias no número de células explantadas, o uso
3
de marcadores cromossômicos, Marcação de H-timidina, através do tempo
fotografia de lapso e por estatísticas de distribuição de Poisson (Frie-denstein,
1976; Friedenstein et al., 1970, 1974; Gronthos et al.,
2003). O transplante in vivo levou ao reconhecimento de que múltiplos
tecidos esqueléticos (osso, cartilagem, tecido adiposo e tecido fibroso) poderiam
ser gerados experimentalmente, in vivo, pela progênie
de uma única célula estromal BM (revisado em Friedenstein, 1990). Frie-denstein
e Owen chamaram esta célula de célula-tronco osteogênica
(Friedenstein et al., 1987) ou uma célula-tronco estromal BM (Owen e
Friedenstein, 1988).
As implicações dessas descobertas foram inicialmente apreciadas
somente em hematologia experimental e somente mais tarde por sua relevância
para a biologia e doenças ósseas. Conforme conceituado pelo
hipótese de nicho de células-tronco proposta por Schofield (1978), a
noção de que as células-tronco hematopoiéticas (HSCs) são reguladas por
sua associação física com um microambiente celular discreto dentro do BM foi
substanciada pelas observações seminais
de Dexter, Allen e colegas (Allen, 1978; Dexter et al.,
1977; Dexter e Testa, 1976). Decorrente de uma longa data
busca para elucidar a relação funcional entre HSCs
e algum componente físico do órgão ósseo/BM, o trabalho pioneiro de Tavassoli e
de Friedenstein e Owen revelou que um segundo tipo de célula-tronco poderia
estar presente no
BM e, especificamente, no estroma de suporte à hematopoiese.
Embora a hipótese tenha sido firmemente estabelecida e as evidências
experimentais de apoio tenham sido publicadas e amplamente reproduzidas, o
conceito de uma célula-tronco não hematopoiética no BM não
não teve repercussão mundial até que um trabalho semelhante adicional foi
publicado em 1999 (Pittenger et al. [1999], de uma entidade comercial,
Osiris Terapêutica, Inc). Combinado com o momento do isolamento das células-
tronco embrionárias humanas (ES), o termo mesenquimal
célula-tronco (MSC), proposta anteriormente como uma alternativa às células-
tronco '' estro-mal '' ou '' osteogênica '' (Caplan, 1991; aplicada a células
ex vivo), ganhou grande popularidade. Na mente de muitos, as MSCs tornaram-se
um tipo de célula-tronco humana pós-natal com uma diferenciação
potencial que seria mais amplo do que o originalmente previsto ou talvez até tão
amplo quanto o das células ES. Essa suposição, ecoada
em estudos posteriores reivindicando potencial transgermal (''plasticidade'') de

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células-tronco pós-natais, incluindo MSCs (Beltrami et al., 2007; Jiang
e outros, 2002; Lakshmipatia e Verfaillie, 2005; Poulsom e outros,
2002), despertou atenção e também gerou confusão, e permanece altamente
controverso (Bianco, 2007; Wagers et al., 2002).
A noção de MSC evoluiu a partir das raízes históricas do
células-tronco não hematopoiéticas conceituadas presentes no BM. Desconhecido
para a grande maioria dos atuais trabalhadores na área do MSC,
essas raízes, juntamente com os princípios básicos gerais da biologia das células-
tronco, estabelecem limites precisos sobre como a biologia das MSCs deve
ser avaliado, como o conceito de células-tronco pode ser aplicado,
quais poderiam ser suas aplicações clínicas previstas e quais
a nomenclatura seria a mais apropriada.
“Célula-tronco mesenquimal” é um termo adequado?
Questões foram levantadas sobre o uso do termo “células-tronco
mesenquimais” (Dominici et al., 2006; Horwitz et al., 2005),
mas há vários motivos que indicam que é inadequado.
Primeiro, a denominação original desta classe de células-tronco como
mesenquimais foi baseada na hipótese de que múltiplos tecidos além
linhagens esqueléticas poderiam ser geradas por MSCs pós-natais, incluindo
músculo esquelético, miocárdio, músculo liso, tendão, etc.
(revisado em Caplan, 2005). No entanto, o potencial não esquelético
de MSCs únicas não foi formalmente comprovada in vivo, e a
ponto permanece controverso. Em segundo lugar, durante a organogênese pré-
natal, a série de tecidos considerados por muitos como relacionados por linhagem
de idade às MSCs pós-natais são gerados por um sistema de processos distintos.
progenitores, e não de um ancestral comum. Osso e
o músculo esquelético surge de progenitores distintos. Na verdade, o osso como
um tecido se desenvolve a partir de progenitores neuroectodérmicos (ossos
craniofaciais) ou de especificações axiais e laterais da mesoderme (revisado em
Olsen et al., 2000). Além disso, embora o neuroectoderma dê origem a uma
população embrionária transitória de células
com propriedades das MSCs (Takashima et al., 2007), os progenitores pós-natais
(e MSCs) têm uma origem distinta, que ainda precisa ser
definiram.
No entanto, o termo ganhou um uso tão global que
talvez fosse inútil sugerir substituí-lo por outro
isso aderiria melhor à biologia conhecida do sistema. Discutir a nomenclatura
sempre transmite um toque de pedantismo. Contudo, debater os equívocos que
acompanham o uso popular
de qualquer termo pode corrigir abordagens experimentais falhas baseadas
em suposições erradas, pode desencadear avanços experimentais,
e pode, em última análise, promover uma melhor compreensão. O termo
O MSC é de fato questionado, e questionável, porque transmite suposições que
não foram incluídas no conceito original de células-tronco não hematopoiéticas
no BM nem apoiadas.
por evidência experimental direta. Essas suposições giram
em torno da multipotência e da auto-renovação, as duas características definidoras
de uma célula-tronco, e também em torno dos ensaios experimentais
relevantes para ambas as propriedades, bem como para critérios adicionais (como
como, por exemplo, clonogenicidade). Além disso, enquanto a noção original de
MSCs se referia especificamente a células em BM (osso
células estromais da medula óssea, BMSCs), a noção atual tem sido
estendido para incluir células de fontes adicionais (como membrana sinovial,
tecido adiposo, polpa dentária, etc.) e, de fato, de quase
todo tecido conjuntivo pós-natal. No geral, a incerteza
sobre o uso do termo MSC reflete, e surge de, imprecisão no uso de um sistema
de termos e ensaios experimentais
(Tabela 1).
314 Cell Stem Cell 2, abril de 2008 ª2008 Elsevier Inc.
Célula-tronco celular
Comentário
Como devem ser avaliadas as MSCs e suas propriedades?
O ensaio mais avançado atual para estabelecer células-tronco
função é exemplificada pela capacidade de um único prospectivamente
HSC isolado para reconstituir, em série e a longo prazo, multilinhagens
hematopoiese em camundongos receptores letalmente irradiados. O crucial
lições gerais de ensaios tão rigorosos e rigorosos são
que (1) o stemness é investigado através de experimentos de transplante in vivo,
(2) a multipotência só pode ser investigada no nível de célula única e (3) auto-
renovação significa reconstituição de um caule
população de células idêntica em fenótipo e função àquela
originalmente explantado. A relativa facilidade e eficácia do ensaio
HSCs deriva em parte da capacidade de isolar prospectivamente
HSCs circulem e se alojem em seu nicho permissivo, a renovação contínua e
rápida de HSCs e sua progênie, e a distribuição sistêmica, em vez de localizada,
da hematopoiese através
o corpo. Algumas dessas propriedades biológicas inerentes ao
O sistema HSC não é necessariamente duplicado no BMSC
sistema ou em outros sistemas em que as definições de stemness são
procurado. Por exemplo, HSCs individuais podem ser transplantadas in vivo
através da circulação e distribuído com alta eficiência sem
cultura ex vivo. Por outro lado, um número suficiente de BMSCs
necessários para regenerar um defeito esquelético normalmente precisam ser
transplantados localmente, e mesmo progenitores esqueléticos isolados
prospectivamente precisam ser cultivados para gerar um número suficiente de
células antes do transplante. Além disso, a capacidade
a auto-renovação está indubitavelmente relacionada com a taxa de renovação
dos tecidos. Considerando que a pele na sua totalidade muda a cada 30 dias,
todo o esqueleto gira de três a cinco vezes durante a idade adulta.
Consequentemente, não se esperaria que a auto-renovação de células-tronco
capazes de reformar tecidos esqueléticos, na natureza, envolvesse o mesmo
número de divisões celulares que para HSCs ou células epidérmicas.
células-tronco. Avaliar a auto-renovação e a multipotência (as características
definidoras de todas as células-tronco pós-natais) de células-tronco não
hematopoiéticas requer, portanto, o desenvolvimento e o uso de
ensaios in vivo baseados nos mesmos princípios rigorosos do HSC
bioensaios, mas adaptados à biologia específica do sistema
em estudo. Como essas considerações se relacionam com os MSCs?
Identificação e Expansão na Cultura
Classicamente, um subconjunto de BMSCs é designado como clonogênico se for
capaz de gerar colônias de células semelhantes a fibroblastos a partir de células únicas
quando plaqueado em cultura. É importante ressaltar que o crescimento das colônias
pode ser observado quando as células são plaqueadas em densidade não clonal mais alta, mas
neste caso, as colônias não podem ser consideradas clonais, e a enumeração
ou análise de colônias formadas sob condições não clonais é experimentalmente
sem sentido. Conforme avaliado pela atual
Ensaios CFU-F, a clonogenicidade das BMSCs reflete a capacidade de
uma célula cresça de maneira insensível à densidade. É digno de nota que
qualquer célula-tronco genuína dentro do estroma da BM seria clonogênica, mas a
a declaração reversa não é válida, pois apenas uma fração dos CFU-Fs são
multipotente baseado em transplante in vivo (Bianco e Robey,
2004; Grontos et al., 2003). Não há marcadores disponíveis para distinguir UFC-
Fs multipotentes dos mais comprometidos, mas o
a frequência de UFC-Fs se correlaciona com a incidência de pró-genitores em
uma determinada amostra de BM. BMSCs clonogênicas podem ser enriquecidas
usando marcadores de superfície como STRO-1 (Simmons
e Torok-Storb, 1991) ou MCAM (Sacchetti et al., 2007). Contudo, enquanto a
experimentação exigir o uso de culturas
células, classificando progenitores clonogênicos por fenótipo de superfície ou
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Célula-tronco celular

Comentário
Tabela 1. Glossário de Termos

Prazo Definição Prazo Definição

Medula óssea -Células extravasculares de linhagens não hematopoiéticas Célula estromal -Um nome alternativo para MSCs.
células estromais e não endoteliais. mesenquimal -Destaque seu potencial de multilinhagem.
(no local) multipotente
-Fisicamente associado a células hematopoiéticas no BM. -Ressalta sua rigidez questionável devido à falta de evidências de auto-
(MSCs)
renovação.
-Fornecer pistas para o retorno, retenção, proliferação e diferenciação de
células-tronco/progenitoras hematopoiéticas.

-Inclui células reticulares adventícias, adipócitos da medula, células

osteogênicas em desenvolvimento e maduras e pericitos/
células murais.

Células estromais -Cepas de células cultivadas derivadas da explantação de células Pericito, -Célula subendotelial e não endotelial na parede
da medula óssea BM aderentes, não hematopoiéticas e não endoteliais. célula mural microvascular.

(in vitro, -Pode ser iniciado por uma ou mais UFC-Fs, por células estromais -Express MCAM, BG5, a-actina de músculo liso, de outra forma
BMSC) semeadas em densidade não clonal ou por células classificadas por definida histologicamente.
fenótipo. -Pode ser derivado do mesoderma ou do ectomesênquima.

-Alguns BMSCs são CFU-Fs. -Um suposto progenitor dos tecidos conjuntivos.

Colônia -A progênie clonal in vitro de uma UFC-F. Auto-renovável -A capacidade de gerar células idênticas em fenótipo e potência à
(fibroblástica) -Aparece como uma colônia discreta de 50 ou mais células população celular inicial.

semelhantes a fibroblastos. -Ocorre quando uma célula se divide para gerar uma célula-tronco e

-Não é CFU-F. uma célula não-tronco.

-Só pode ser analisado através de transplante in vivo de populações

homogêneas.

-Para tecidos conjuntivos, foi demonstrado para células reticulares

adventícias e alguns CFU-Fs na medula óssea humana e células
satélites no músculo esquelético murino.

-Não implica divisão celular infinita ou contínua in vivo ou in vitro.

-Uma propriedade definidora das células-tronco pós-natais.

Unidade -Uma única célula, recentemente isolada de um tecido intacto. Células-tronco esqueléticas, -O progenitor pós-natal multipotente e auto-renovador dos
formadora de células-tronco estromais, tecidos esqueléticos (osso, cartilagem, adipócitos da medula óssea,
-Capaz de iniciar o crescimento clonal de células fibroblásticas em baixa
colônia-fibroblástica células-tronco fibroblastos e células estromais da medula óssea).
densidade.
(UFC-F) osteogênicas
-Designado de acordo com o tecido de origem: BM-CFU-F, [qualquer
-Encontrado no estroma da medula óssea.
tecido]- CFU-F.
-Foi testado in vivo em nível clonal.

Expansão (de -O aumento absoluto no número de células-tronco dentro de uma Estroma -Termo anatômico que se refere ao tecido de suporte (geralmente
células-tronco) população de células. conjuntivo) de qualquer órgão.

-Ocorre quando uma célula se divide para gerar duas células- -Desempenha uma função trófica e mecânica para os tipos de
tronco idênticas. células especializadas desse órgão (parênquima).

-A expansão de uma cultura inteira de BMSCs não é equivalente

à expansão das células-tronco nela contidas.

Célula-tronco -Um progenitor pós-natal conceitual da maioria, senão de todos os [Qualquer tecido] -Populações fibroblásticas estabelecidas em cultura a partir de qualquer
mesenquimal derivados do mesoderma. Células estromais tecido.
(MSCs) -O potencial de linhagem inclui tecidos esqueléticos (ossos, cartilagens, -Provavelmente derivado do estroma/tecido conjuntivo do órgão de
gordura, tendões) e não esqueléticos (músculo liso, músculo esquelético origem.
e possivelmente miocárdio e células endoteliais).

-Postulado para existir na medula óssea, fígado, sinóvia, tecido

adiposo, coração e outros tecidos conjuntivos pós-natais.

-Sugerido incluir um subconjunto de células pluripotentes.

-Frequentemente usado para denotar células cultivadas de quase

qualquer tecido conjuntivo.

Mesênquima – Tecido conjuntivo frouxo embrionário primitivo.

-Um subconjunto embrionário de células derivadas da mesoderme.

-Também um subconjunto de células derivadas da

neuroectoderme (ectomésquima).

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''separá-los'' por aderência plástica tem a mesma prática
significado (Sacchetti et al., 2007). Consequentemente, a investigação
o valor dos procedimentos de isolamento baseados no fenótipo da superfície
só se desdobra depois que ensaios in vivo são desenvolvidos para o uso de
progenitores clonogênicos não cultivados.
Células aderentes capazes de crescimento independente da densidade são
encontrado em vários tecidos não hematopoiéticos, como periósteo e polpa
dentária, e provavelmente em todos os tecidos conjuntivos, e
também são chamados de CFU-Fs na literatura. Além disso, tem sido
relataram que alguns tecidos não hematopoiéticos apresentam frequências mais
altas de UFC-Fs em comparação com BM. No entanto, porque tal
os tecidos contêm muito poucas células hematopoiéticas contra as quais o BM
As frequências CFU-F são calculadas, elas podem não abrigar relativamente
mais células clonogênicas sobre BM.
É importante ressaltar que uma cultura primária de BMSCs pode ser estabelecida em
densidade clonal ou não clonal (na maior parte da literatura atual, o
último é o caso). No primeiro caso, toda a cultura representa a progênie de UFC-
Fs. Na segunda instância, o
a cultura primária inclui células derivadas de células aderentes não clonogênicas
com potencial de crescimento limitado, mas demonstrável.
Assim, culturas primárias estabelecidas em densidade clonal ou não clonal
são notavelmente diferentes, mas nenhum tipo de cultura deve ser
chamada de cultura de células-tronco, mesenquimais ou de outra forma qualificada.
Expansão de culturas primárias monoclonais ou multiclonais
pode produzir populações que são homogêneas na expressão
de certos marcadores, mas não de outros. Funcionalmente, em culturas clonais,
as células inicialmente multipotentes se auto-renovam (Sacchetti et al.,
2007), podendo até expandir-se estocasticamente, até certo ponto.
No entanto, simultaneamente e dentro da mesma cultura, alguns dos
a progênie das células iniciadoras da cultura se diferencia ou mesmo
senescência. Assim, qualquer cultura de células de mamíferos não transformadas
é heterogêneo devido à cinética inerente, como a expansão de
células-tronco dentro da cultura não é o único nem o evento predominante. A
frequência estocástica deste evento em relação a
o compromisso ou a senescência na cultura ainda são indefinidos;
consequentemente, a expansão das células-tronco não pode ser medida ou
simplesmente inferido do crescimento de toda a cultura.
Uma implicação desta característica é que, embora se possa comprar
culturas comerciais de MSCs, elas são descritas com mais precisão como culturas
de BMSCs e podem ou não incluir uma
proporção de células multipotentes e auto-renováveis. Além disso,
muitas modificações das condições originais de cultura simples
foi proposto para melhorar a expansão dos MSCs na cultura.
No entanto, medir a expansão in vitro de células-tronco requer
ensaios in vivo em nível unicelular, pelo menos até o momento
que seja identificado um marcador fenotípico que defina a célula-tronco
piscina. Portanto, para reivindicar verdadeiramente a expansão ex vivo, a progênie
de CFU-Fs originais isolados após a expansão precisariam
ser transplantado in vivo e avaliado comparativamente quanto à
formação de diferentes tecidos. Isto é reconhecidamente exigente,
e nunca foi feito, por isso ainda não está claro se qualquer coquetel proposto para
a expansão do BMSC realmente promove a expansão
de células-tronco na população, em vez de simplesmente promover o crescimento
de toda a população de BMSC como um todo e
possivelmente até esgotando o subconjunto de células-tronco contido nele.
Potencial de Diferenciação
Está solidamente estabelecido pelo trabalho de Friedenstein e outros
que um subconjunto de BMSCs únicos é multipotente e, portanto,
316 Cell Stem Cell 2, abril de 2008 ª2008 Elsevier Inc.
Célula-tronco celular
Comentário
exibe uma propriedade comumente encontrada em células-tronco. No entanto,
os mesmos estudos indicam que este subconjunto é limitado a diferenciar
divisão em tipos de células esqueléticas encontradas em diferentes fases do desenvolvimento
estágios, bem como em locais anatômicos específicos. Esses incluem
osteoblastos (osso), condrócitos (cartilagem), adipócitos (BM
estroma), fibroblastos (periósteo) e células reticulares adventícias
(estroma BM). Embora a alegação de que as BMSCs também possam dar origem
a tipos celulares adicionais de origem mesodérmica (músculo esquelético,
músculo liso, músculo cardíaco, células endoteliais, etc.) é comum, esta afirmação
não está enraizada em dados experimentais igualmente sólidos.
evidência com transplante heterotópico da progênie de uma única célula e,
portanto, permanece controversa. Controvérsia ainda maior
existe sobre as alegações de potencial transgermal de BMSCs
ou subconjuntos destes (Beltrami et al., 2007; Jiang et al., 2002). Isso é
por estas razões, seria apropriado usar o termo
''células-tronco esqueléticas'' para células estromais multipotentes derivadas de BM
capaz de gerar tipos de células esqueléticas in vivo (Bianco e
Robey, 2004).
Além do BM, células aderentes capazes de crescimento independente da
densidade são encontradas em vários tecidos conjuntivos não hematopoiéticos,
como periósteo e polpa dentária, e também são
chamados de UFC-Fs na literatura. No entanto, a potência das UFC-Fs de tecidos
não hematopoiéticos e BM não foi comparada sistematicamente por ensaios in
vivo, e as evidências prevalecentes
sugere que as UFC-F de diferentes tecidos não são iguais.
Por exemplo, quando cultivadas e transplantadas in vivo sob condições idênticas
às utilizadas para BMSCs, as UFC-Fs de
a polpa forma dentina em vez de osso (Gronthos et al., 2002). Por isso,
em vez de uma classe única e uniforme de MSCs onipresentes, as evidências
apontam para uma classe variada de progenitores clonogênicos encontrados
em diferentes tecidos, mas dotado de potência específica do tecido.
Não importa qual seja a origem da população estromal
examinada, acredita-se que a multipotência das MSCs seja
avaliável por ensaios de diferenciação in vitro. No entanto, estes ensaios
correlacionam-se fracamente com os resultados dos ensaios de diferenciação in vivo,
mesmo quando conduzido em paralelo na mesma cepa celular
(revisado em Bianco et al., 2006). Além disso, a multipotência
(uma propriedade de uma única célula) não pode ser determinada com base em
ensaios realizados em cepas de células não clonais em cultura. Geração in vitro
de depósitos de vermelho de alizarina (osteogênese), óleo vermelho O-corável
células (adipogênese) e matriz corável com azul alcian (condrogênese) em culturas
paralelas de cepas não clonais de BM estromal
células, ou qualquer cepa de células, não prevê multipotência (Bianco
e outros, 2006; Gronthos et al., 2002), como comumente assumido em
uma literatura abundante e, portanto, não identifica nenhuma cultura celular como
uma cultura de células-tronco, não importa quão qualificada seja
qualquer nome de sua preferência.
Ensaio de Auto-Renovação
Além dos equívocos significativos sobre multipotência e
de ensaios in vitro para sondá-lo, persistem ambiguidades ainda maiores
sobre a auto-renovação geralmente assumida das células-tronco
dentro do estroma BM ou dentro de qualquer outro tecido conjuntivo. Em
Na maioria dos estudos, a auto-renovação é equiparada ao crescimento sustentado
da cultura ou, em alguns cenários, é assumida com base na retenção de
diferenciação in vitro após múltiplas duplicações populacionais. No entanto, o
único sistema para o qual a auto-renovação de células-tronco é considerada
solidamente comprovada é o sistema hematopoiético, baseado em
a capacidade de HSCs fenotipicamente definidos para reconstituir em série
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Célula-tronco celular
Comentário
hematopoiese durante a vida de camundongos letalmente irradiados (Osawa
et al., 1996; Spangrude et al., 1988; Weissmann, 2000). Notavelmente,
esta propriedade não está associada a nenhuma proliferação ex vivo. A demonstração
de auto-renovação postula a reconstituição in vivo de
um compartimento de células-tronco com fenótipo e propriedades idênticas à
população inicial. As evidências de auto-renovação de progenitores na população
BMSC só muito recentemente
começou a surgir (Sacchetti et al., 2007) e de fato apóia o conceito de que tais células
incluem uma célula-tronco genuína,
e também aborda a falta anterior de experiência experimental direta
evidências da capacidade das células do estroma de se auto-renovarem (Dominici
e outros, 2006; Horwitz e outros, 2005). Se esta característica é compartilhada
por populações formadoras de UFC-F isoladas de outros conectivos
tecidos ainda precisam ser vistos.
Um marcador putativo
Supõe-se muitas vezes que a expressão de um certo conjunto amplo de
marcadores define vários tipos de culturas celulares como MSCs, mas na realidade,
a maioria desses marcadores é expressa por culturas de células fibroblásticas de
qualquer tecido. Além disso, a maioria, se não todos, desses
marcadores são altamente modulados em cultura, o que ressalta
a futilidade dos esforços para caracterizar as culturas de células estromais per se.
Em contraste, a busca original por marcadores da suposta célula-tronco não-
hematopoiética do BM concentrou-se naqueles que poderiam identificar
o CFU-F entre células BM não cultivadas. Junto com o clássico
Epítopo STRO-1, vários outros marcadores podem auxiliar no enriquecimento de CFU-
Fs (por exemplo, MCAM, CD105). Porém, além de
marcadores de CFU-Fs não cultivados, marcadores de células in situ são
particularmente necessários (1) ao procurar a contraparte in situ de CFU-Fs
e (2) acompanhar o destino das células transplantadas in vivo, particularmente
ao buscar evidências de auto-renovação. MCAM parece ser
um desses marcadores.
Na BM humana, o MCAM marca células reticulares adventícias (Sac-chetti et al.,
2007), um tipo de célula estromal classicamente conhecido que reside
em posição subendotelial sobre a superfície abluminal do BM
sinusóides (Westen e Bainton, 1979). Em outros tecidos, MCAM é
expresso por pericitos (Li et al., 2003), um tipo de célula indescritível reconhecido por
sua anatomia e posição, e não por qualquer precisão precisa.
fenótipo definido. Assim como as células reticulares adventícias da BM, os pericitos
residem na superfície abluminal das células endoteliais na microvasculatura de cada
tecido conjuntivo. Dada esta ampla distribuição, e que os pericitos podem representar
a contraparte in situ de
BM CFU-Fs, pode-se concluir apressadamente que os pericitos são os
MSCs encontradas em diferentes tecidos. Usando MCAM para identificar o
população de pericitos ajudará a determinar se UFC-Fs
de tecidos não hematopoiéticos são de fato pericitos. Se assim for, será
possível testar a hipótese de que as CTM existem em todos os tecidos conjuntivos e
determinar se a sua capacidade de funcionamento
em ensaios clonogênicos e in vivo é consistente, independentemente de sua
tecido de origem. A este respeito, pericitos isolados do esqueleto
músculo são espontaneamente miogênicos in vitro (Dellavalle et al.,
2007) e não osteogênico in vivo, em nítido contraste com BM
UFC-Fs e com células subendoteliais BM, apesar de suas coincidências
identidade anatômica. Assim, tal como acontece com a potência dos CFU-Fs derivados
de diferentes tecidos, as evidências atuais sobre pericitos em diferentes tecidos
parecem refletir um sistema de progenitores específicos de órgãos com potência
específica de órgão. Apesar disso, estudos de
a biologia dos pericitos pode fornecer pistas sobre a origem do desenvolvimento
de células progenitoras/tronco pós-natais em tecidos não hematopoiéticos.
Compondo a diversidade em um modelo unificador
A suposta existência de uma célula-tronco estromal homogênea
A população presente em múltiplos tecidos derivados do mesênquima permanece em
aberto. Usando o exemplo dos pericitos como
um modelo, uma hipótese pode ser gerada tal que a semeadura
de progenitores pós-natais definitivos dentro dos tecidos conjuntivos
pode estar enraizado nos mecanismos gerais pelos quais os pericitos
são recrutados para a parede microvascular nascente durante o desenvolvimento e
crescimento pós-natal (Figura 1). Nesta visão, stemness de
essas células poderiam ser interpretadas como um subproduto de um mecanismo de
desenvolvimento geral, pelo qual células locais comprometidas com um
destino específico do órgão (por exemplo, miogênico no músculo, esqueletogênico no
BM) são recrutados para paredes microvasculares nascentes durante o
desenvolvimento e crescimento pós-natal (Jain, 2003). Como resultado, essas células
seria retido em um estado de interrupção do crescimento até ser desencadeado para
retomar a proliferação e a diferenciação, seja em resposta a sinais fisiológicos, como
na renovação ou reparo de tecidos, ou experimentalmente,
quando explantados in vitro como UFC-Fs. Os osteoprogenitores subendoteliais são
recrutados para se tornarem células-tronco de uma forma um tanto acidental e,
incidentalmente, desempenham funções específicas características dos pericitos em
diferentes tecidos pós-natais. Ou, como um
alternativa à diferenciação, as células-tronco específicas do tecido podem funcionar
para apoiar a regeneração de outros tipos de células locais, como visto
em BM.
No BM, os BMSCs desempenham duas funções. Uma delas é a função
classicamente reconhecida de fornecer um microambiente de suporte para
hematopoiese. A outra está relacionada ao desenvolvimento, estabilização e
manutenção da rede senoidal (Sacchetti
et al., 2007), consistente com sua localização subendotelial. Em
o órgão ósseo/BM, as duas funções estão intimamente interligadas.
A hematopoiese requer o estabelecimento de uma rede sinusoidal,
e HSCs localizam-se em paredes sinusoidais (Kiel e Morrison,
2006), além de superfícies endosteais (Haylock et al., 2007).
As BMSCs também se localizam nas paredes sinusoidais e, quando o desenvolvimento
hematopoiético é modelado in vivo, elas o fazem antes do estabelecimento da
hematopoiese (Sacchetti et al., 2007). Além disso,
BMSCs são classificadas como osteogênicas comprometidas, mas não diferenciadas
progenitores. Tendo em vista o papel emergente das células osteogênicas na
proporcionando um nicho para HSCs (Arai et al., 2004; Calvi et al., 2003;
Zhang et al., 2003), esses dados retratam um caminho atraente para
pesquisa em um sistema duplo único de células-tronco/progenitoras
que interagem funcionalmente na regulação da hematopoiese e
fisiologia óssea. Além disso, além do BM, estudos sobre
últimos 10 anos tentaram demonstrar que o transplante de BMSCs em locais não
esqueléticos (pouco ortodoxos) resultaria
no reparo do miocárdio, cérebro e muito mais (revisado em Barry,
2003). No entanto, embora haja evidências da capacidade dos transplantados
BMSCs para gerar tipos diferenciados de células de tecido não esquelético
(por exemplo, cardiomiócitos, neurônios, etc.) tem sido controverso,
um efeito benéfico sobre a função dos órgãos-alvo tem frequentemente
observado (revisado em Phinney e Prockop, 2007; Picinich
e outros, 2007). Pode ser que o transplante de BMSC consista em exportar a(s)
função(ões) biológica(s) inerente(s) que as BMSCs exercem em
BM para sites pouco ortodoxos. Isto é, se uma função é nutrir
HSCs e sua progênie, então é possível que as células não hematopoiéticas também
possam se beneficiar de um efeito de “amamentação” transmitido
por interação direta com BMSCs e/ou por estímulos parácrinos
(Caplan e Dennis, 2006). A atividade imunomoduladora do
BMSCs, apoiadas por uma série de estudos (por exemplo, Ren et al.,
Cell Stem Cell 2, abril de 2008 ª2008 Elsevier Inc.
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2008), pode ser visto como parte da influência pleiotrópica das células estromais
do BM nas células da linhagem hematopoiética. Da mesma forma, o efeito
funcional das BMSCs na estrutura vascular, integridade, estabilidade ou
regeneração também pode ser retido no transplante não ortodoxo de BMSCs,
resultando em um benefício fortuito para a função do órgão.
O que há em um nome – ou em muitos?
Embora o conceito de que uma célula-tronco genuína pode ser encontrada no
estroma da medula óssea tenha resistido ao teste do tempo e realmente tenha
ganhado impulso com experiências mais recentes, como deveria ser chamada
essa célula? Existem múltiplas dimensões, como função, ensaios utilizados ou
fenótipo de superfície e anatomia, pelas quais se pode desenvolver a
terminologia apropriada. Usando a dimensão funcional, uma célula-tronco pós-
natal é geralmente definida pelos tipos de células que ela gera. Até que sejam
fornecidas evidências diretas, unicelulares e in vivo, que indiquem que as
BMSCs podem gerar qualquer tecido diferente dos tipos de células esqueléticas,
propomos que a “célula-tronco osteogênica” derivada de BM de Frie-denstein
deveria ser chamada de “célula-tronco esquelética”. ,'' consistente com a
nomenclatura usada pelos hematologistas. Além disso, ''CFU-F'' deve ser usado
para denotar uma célula que é testada como clonogênica em cultura. Este
termo indica claramente a dimensão experimental da qual surge o nome e, uma
vez aplicado, pode ser ampliado para refletir a origem da população em
questão. Isto é, como as UFC-F existem em tecidos além da BM, e
provavelmente em todos os tecidos conjuntivos pós-natais, o isolamento de
UFC-Fs de tecidos específicos poderia ser denotado com pré-fixos como BM-
CFU-F para medula óssea, AT -CFU-F para tecidos adiposos, etc., enquanto
se aguarda uma definição rigorosa e comparativa in vivo da função de
populações residentes e isoladas de outras localizações anatômicas. Usando a
dimensão do fenótipo, marcadores adequados para identificar e enriquecer
CFU-Fs não cultivadas, em vez de células cultivadas, definirão ao longo do
tempo subconjuntos de células a serem sondadas funcionalmente in vivo,
ligando a função, o ensaio e o fenótipo. Em última análise, seria desejável
318 Cell Stem Cell 2, abril de 2008 ª2008 Elsevier Inc.
Célula-tronco celular
Comentário
Figura 1. Modelo que propõe que os pericitos sirvam
como reservatório de progenitores específicos de
tecidos O
recrutamento de progenitores de tecidos locais como
células/pericitos murais em diferentes tecidos, como
medula óssea e músculo esquelético, é representado.
(A) Durante o desenvolvimento, células osteogênicas locais
(osteoblastos, lado esquerdo) no BM associam-se à parede
vascular como células murais subendoteliais/pericitos (células
reticulares adventícias em sinusóides).
No órgão pós-natal, essas células podem ser explantadas e
analisadas como progenitores esqueléticos clonogênicos
(osso, lado direito).
(B) Os vasos sanguíneos associam-se a progenitores
miogênicos locais no músculo em desenvolvimento, que são
recrutados para serem pericitos (miócitos, lado esquerdo).
Consequentemente, os pericitos isolados da microvasculatura
do músculo esquelético exibirão potencial miogênico (músculo,
lado direito). Portanto, este modelo prevê que, embora os
pericitos em diferentes tecidos conjuntivos possam surgir por
uma via de desenvolvimento comum e compartilhar identidade
anatômica, é provável que sua capacidade de diferenciação
seja específica do tecido.
que a função, o ensaio e o fenótipo sejam todos rastreados até um tipo de
célula anatomicamente reconhecível in situ. A este respeito, a população de
pericitos na BM e outros tecidos representa um candidato emergente.
No geral, mais de 40 anos de trabalho em BMSCs e a inevitável oscilação
de expectativas e esperanças não prejudicaram o novo sabor biológico destas
células. Funcionando simultaneamente como células-tronco por direito próprio
e como células que fornecem o microambiente para outras células-tronco, as
BMSCs incorporam propriedades tanto da “semente” quanto do “solo”.
diminuem, essas propriedades únicas das BMSCs voltam a desafiar a biologia
e a medicina, de uma forma bastante notável.
AGRADECIMENTOS
Este trabalho foi apoiado por AIRC, Telethon, MIUR e Genostem (LHSB-CT-2003-503161) da
Itália (para PB), pelo DIR, NIDCR do IRP, NIH e DHHS (para PGR), e pelo Centro Australiano de
Células-Tronco (para PJS).
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