Doping na Medicina

Veterinria

FARMACOLOGIA II
ALINE ROCHA
ISABELLA FINAMORI
M A R I A N A B A R BO S A
N A DY N E S O UZ A

Definies
Doping a administrao de qualquer substncia
qumica em pessoas ou animais que possa modificar o
seu comportamento durante uma prova desportiva.
Verbo em ingls to dope, oriundo do termo
holands doop.
Estado de euforia.

Introduo
Uso da palavra- a partir da dcada de 50.
Incio da utilizao em animais- Pouco antes de Cristo.
Hidromel administrado em cavalos na Roma Antiga,
para melhorar o seu desempenho em corridas.
Utilizao de sementes de anis, mel e outros
ingredientes, no sculo XVII.

Histrico
Uso de ch, caf, champanhe e usque antes
das corridas esquestres.
Utilizao de alcaloides de origem vegetal
(1890, na Amrica do Norte)
Em Viena, 1910, realizaram-se as primeiras
anlises em saliva de cavalo e ,no Brasil, na
dcada de 40.

Usos
O doping geralmente usado para melhorar a
performance atltica de equinos e ces, porm
tambm pode ser utilizado em exposies de
cinofilia

Medicamentos ligados ao doping

Substncia que interferem nas funes dos sistemas
respiratrio, cardiovascular e musculoesqueltico
Estimulantes e depressores do sistema nervoso
central
Anti-inflamatrios e analgsicos
Capisaicina

Meio fsico
Ondas de choque
Efeito analgsico local
Permitido somente at 5 dias antes da primeira
inspeo veterinria

Tratamento de cavalos atletas

O cavalo atleta pode receber tratamento com
medicamentos que contenham substncias proibidas
para as competies
Perodo de depurao
Perodo de deteco
Tempo de espera

Drogas
Os frmacos usados como doping podem ser
divididos em grupos de acordo com seu local de
ao.
Nmero de drogas consideradas como doping
ultrapassa 5000.
Tipos: anabolizantes, estimulantes (anfetaminas,
cafenas),
anestsicos
para
bloqueios,
antiinflamatrios.

Controle antidopagem
1. Colaborar com a manuteno da sade e
bem-estar
do
animal
e
das
pessoas
participantes;
2.Preservar a tica e confiabilidade dos
esportes, garantindo a clareza e igualdade de
condies entre os competidores;
3. Garantir o aprimoramento da raa;

Controle antidopagem
Doping positivo: uso de substncias qumicas
que elevam o desempenho do animal, com
efeito altamente estimulante, administradas
horas antes da corrida.
Doping negativo: diminui o potencial
desempenho do animal deprimindo o SNC.

de

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Substncias qumicas que elevam o potencial de
desempenho do animal:

Substncias qumicas de rpido feito estimulante: Administradas

cerca de 2h antes da corrida. So estimulantes do SNC.
Estimulantes de ao predominante no crtex: cafena, anfetamina,
metanfetamina, metilfenidato e cocana. Agem diminuindo a
sensao de fadiga, aumentam a atividade motora e levam
excitao.
Estimulantes bulbares: teofilina, niquetamina e doxopram (so
anlpticos respiratrios). So mais seletivas e aumentam a ventilao
pulmonar e exercem efeito estimulante em outras reas do SNC.

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Substncias qumicas que elevam o potencial de
desempenho do animal:
Estimulantes medulares: estrictina.
Hipnoanalgsicos (opioides): morfina, codena, butorfenol e
fentalina. Em equinos, quando administrados cerca de 10vx abaixo
da dose teraputica, provocam aumento da atividade motora.

Substncias qumicas administradas

terapeuticamente:
Esteroides e anabolizantes: objetivo de fortalecer o
animal, em algumas situaes, para auxiliar na
recuperao de enfermidades debilitantes.

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Substncias qumicas que diminuem o potencial do
animal.

Deprimem o SNC, so denominados doping negativo.

Relaxantes musculares de ao central: guaifenesina,
xilzina e detomidina.
Tranquilizantes maiores: acepromazina.
Tranquilizantes menores: benzodiazepnicos.

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Substncias que restituem o potencial de desempenho de
um animal temporariamente afetado por acidente ou doena:

Medicamentos anti-inflamatrios esteroidais, como a

dexametasona,
e
no
esteroidais,
como
a
fenilbutazona e a flunixino meglumina;
Analgsicos: dipirona;
Furosemida, um diurtico de ala;
Anestsicos locais: lidocana e procana, e agentes
neurolticos, como o lcool etlico e o fenol.

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Substncias qumicas de uso no intencional ou
acidental:
Podem estar presentes na rao do animal ou na medicao e cuja
presena se desconhece, como ex. a teobromina, contaminaes em
baias, cochos, serragem de cama (isoxsuprina) etc.

Substncias que podem mascarar a anlise das

amostras biolgias:

Furosemidas e outros diurticos, dipirona, formulaes

medicamentosas contento polietielenoglicol ou tiamina tanto
de uso tpico como injetvel, sulfas, trimetoprima, etc.

Classificao das substncias qumicas

envolvidas no Doping
Procedimentos ilcitos, que atuam por mecanismos
mistos:

Autotrasnfuso de sangue e uso de bicarbonato de

sdio.
Para auxiliar na distino entre a administrao indevida e a ingesto
natural, foi definido internacionalmente um limite mximo permitido
na urina e no sangue dos animais para algumas substnias.

Sistema de coleta e tcnicas de

deteco de substncias.
A coleta das amostra realizada antes e/ou depois da
competio; A amostra colhida dividida em duas partes:
uma destinada para anlise de prova e a outra para
contraprova;
Coleta de urina/sangue, swab de secrees ou local especfico
do animal e tambm do pelo;
obrigatrio para os vencedores;
O animal ser considerado dopado somente se a anlise da
contraprova confirmar o resultado da prova;

O kit antidopagem adquirido

Sistema de coleta e tcnicas de

deteco de substncias.
Cuidados com a coleta, a identificao do animal e das
amostras, o preenchimento da documentao, com o
armazenamento e a conservao das amostras so
fundamentais para garantir a lisura do procedimento.
O laboratrio que recebe a amostra deve estar capacitado
para realizao de anlises qumicas.
A primeira etapa de anlise denominada triagem, tem
como objetivo a deteco de uma anormalidade na amostra
biolgica, seguida pela identificao qumica desta.

Sistema de coleta e tcnicas de

deteco de substncias.
As tcnicas mais utilizadas internacionalmente
com o propsito de triagem so os testes
imunolgicos como o ELISA e as tcnicas de
cromatografia a gs (CG) com detector
espectromtrico
de
massas
(CG-MS),
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) e
cromatografia
lquida
com
detector
espectromtrico de massa (CL-MS).

matgrafo Lquido de Alta Presso - HPLC

Cromatgrafo a Gs - CG/MSD

Cromatgrafo Lquido Acoplado a

Detector de Massas Triplo

Regulamentos adotados em
provas equestres no Brasil
Medicaes classe A: agentes que podem influenciar a
performance aliviando a dor, sedando, estimulando ou
produzindo/modificando
outros
efeitos
fisiolgicos
ou
comportamentais; inclui:
Anestsicos locais;
Estimulantes cardacos
centrais e respiratrios;

simpaticomimticos;

estimulantes

Clembuterol e outros broncodilatadores e produtos usados no

tratamento de Doenas das Vias respiratrias Recorrente (RAD);

Regulamentos adotados em
provas equestres no Brasil
Anti-inflamatrio no esteroide e/ou seus metablitos;
Corticosteroide;
Sedativos ou tranquilizantes: anti-histamnicos, tiamina,
valeriana;
Relaxantes musculares,
propantelina;

incluindo

metocarbamol

Anticoagulantes, incluindo heparina ou

substncias qumicas semelhantes;

varfarina e

Regulamentos adotados em
provas equestres no Brasil
Medicaes classe B: substncias que tm limitado
potencial de reforo da performance ou s quais os cavalos
podem ter sido acidentalmente expostos, incluindo
determinados contaminantes da dieta. So:
Isoxsuprina; dimetilsulfxido (DMSO) quando acima do limite;
Mucolpiticos e antitussgenos: bromexina e substncias
qumicas semelhantes; terpinas e contaminantes inorgnicos;
Evacuantes: sulfato de magnsio e substncias qumicas
semelhantes.

Substncias permitidas e seus

limites
Os cavalos podem competir com a presena de algumas
substncias no organismo, desde que abaixo dos limites
estabelecidos.
Substncias
endgenas
do
cavalo;
substncias
naturalmente encontradas nas plantas tradicionais
utilizadas nos pastos ou colhidas como alimento;
Substncias encontradas na alimentao do cavalo
proveniente
da
contaminao
durante
o
cultivo,
processamento ou tratamento, estocagem ou transporte.

Penalidades
Vai depender do tipo de substncia, sua classificao,
reincidncia, etc.
O profissional deve conhecer as regras esportivas para
no ceder aos interesses do proprietrio ou presso
do treinador, a fim de no cometer erros involuntrios.

Resumo
Bifosfonatos so usados para o tratamento de desordens esquelticas.
O cido Tiludrnico foi o primeiro bifosfonato licenciado para uso
veterinrio.
So proibidos em esportes equestres.
Divididos em hidrogenados e no-hidrogenados.
Necessrio o uso de um teste efetivo.
Difcil de ser detectado- hidroflico.
Desenvolvimento
bifosfonatos.

de

teste

para

deteco

simultnea

de

Histrico
Bifosfonatos- inibidores de reabsoro ssea.
Diferentes mecanismos
osteoclastos.

de

ao

para

inibir

os

cido Tiludrnico- 2011- tratamento de condies

ortopdicas em equinos.
Falta de conhecimento da farmacocintica em cavalos
impediu o controle efetivo do uso.

Histrico
Tcnicas analticas- difcil- propriedades hidroflicas.
Deteco fotomtrica aps cromatografia- uso de UV
ou reagentes florescentes ativos.
Liquid chromatographymass spectrometry.
1 a detectar simultaneamente 5 bifosfonatos.
Aplicado em amostras de sangue e urina.

Experimento
Bifosfonatos padronizados foram comprados.
Amostras de urina e sangue passaram por diversos
processos incluindo centrifugao, diluies, ajustes
de PH e filtrao.
Para cada amostra de urina ou plasma, um calibrador
contendo as drogas pesquisadas foi processado em
paralelo. Esse calibrador tinha concentrao das
drogas 5X mais alta que o controle de qualidade.

Experimento
Dose nica de cido Tiludrnico intravenoso em PuroSangue-Ingls castrado clinicamente diagnosticado com
artrite.
As amostras foram coletadas antes da administrao e
0,1; 0,5; 1; 2; 4; 8; 12 e 24 horas aps a administrao.
Amostras foram coletadas antes da administrao e 0,2;
0,3; 0,5; 1; 1,1; 1,2; 2; 3; e 7 dias aps a administrao.

Experimento
As concentraes de cido Tiludrnico depois da
administrao foram determinadas por interpolao
das curvas de calibragem.
Amostras de controle de qualidade (urina e plasma
com cido Tiludrnico) foram analisadas em conjunto
para se certificar que anlise estava sob controle.

Resultados e discusso
Antes da tcnica de Liquid chromatographymass
spectrometry- metilao- reduo da polaridade.
Concentraes moderadas de c. Tiludrnico na urina e
de c. Alandrnico no plasma.
Concentraes baixas foram observadas para a maioria
dos outros bisfosfonatos.
Apesar disso, todos foram detectados consistentemente.
0,5 ml de urina ou plasma.

Experimento
A especificidade do mtodo foi determinada utilizando
plasma equino- n=80 e urina- n=80.
Determinou-se que o mtodo tem preciso suficiente
para ser usado em identificao qualitativa.
Titulao urinria- pico= 13 aps administrao.
Titulao plasmtica- pico= 0,1h aps administrao.
Restou por at 7 dias na urina aps adm.
Restou por at 1 dia no plasma aps adm.

Experimento
A excreo do cido na urina se mostrou ser errtica.
O cido Tiludrnico incorporado a matriz ssea de
onde ele pode ser espontaneamente liberado.
Portanto, o plasma considerado melhor para a
deteco de bifosfonatos.

Concluso
Bifosfonatos- drogas hidroflicas.
Difcil extrao de matrizes biolgicas.
Metilao.
Tempo rpido.
Pode ser estendido
bifosfonatos.

para

deteco

de

outros

Introduo
Grupo de compostos no- esteroidais com efeitos
anablicos, como:
Grupo arilo-propionamidas (SMARs S1, S4 e S22)
Importantes para controle de doping pois possuem
propriedades anablicas com poucos efeitos
colaterais quando comparados com anablicos
esteroidais WADA 2008
Disponveis no mercado negro
Metabolismo estudado em microssomas do fgado
(biotrasnformaes) de humanos, cavalos e
bovinos. Alm de incubaes fngicas em bezerros
e humanos.
Conferem resultados qualitativos de quais
metablitos so formados, porm no so
suficientes para substituir estudos in vivo.

Objetivo
Investigar metabolitos urinrios de SARMs S1,
S4 e S22 em cavalos aps administrao intravenosa com o propsito de encontrar alvos
apropriados para controle de doping.

Materiais e Mtodos
Administrao da droga e coleta
9 guas adultas pertencentes a universidades, sendo:

1 Standardbred

8 Puro- Sangue Ingls

5-17 anos
504-590 kg
Saudveis
gua e comida
a vontade

Materiais e Mtodos
Trs grupos com 3 guas cada foram designados aleatoriamente, cada
grupo com um SARMs diferente.
41.7mg para SARMs S1 e S4
33.3mg para SARMs S22
Urina foi coletada no tempo 0 (imediatamente aps a administrao), 3h,
6h, 8h, 12h, 24h, 48h, 72h e 96h aps a administrao.

Materiais e Mtodos
Preparao das amostras
Diluio:
100 l de urina com 100 l de gua.

Extrao fase slida:

HLB 60 mg e C18 500 mg
Resduo reconstitudo em 200 l 0.1% de cido frmico

Extrao fase lquida:

Urina + t-butil-metil ter
Resduo reconstitudo em 50 l de 0.1% de cido frmico

Hidrlise com beta-glucorionidade seguida de ES ou ELL

Hidrlise cim beta-glucorionidade/ arilo sulfatase seguida de ELL

Materiais e Mtodos
Anlise
A performance do sistema em termos de preciso de massa e de

reteno deriva do tempo foi avaliada atravs da anlise de uma

mistura de teste conhecido de paracetamol (5 uM), cido
mefenmico (5 uM) e diclofenac (5 uM) antes e depois de cada
corrida.

Resultados e Discusso
SARM S1
8 metablitos encontrados M1-M6b
M3 apresentou maior sinal de intensidade, tendo uma
hidrolise da amida e uma hidroxilizao seguida de
uma sulfonizao do grupo hidroxila
Pode ser detectado aps LLE E SPE e da urina diluda
Detectado em todas as amostras, de 3 a 96 horas usando
a injeo direta de urina diluda e tambm com o
mtodo SPE
Provou-se o melhor metabolito pois teve a maior intensida
de pelo maior perodo de tempo
Resultado consistente com o estudo em microssomas do
fgado humano e incubados fngicos
Resultado repetiu-se para as trs guas pertencentes ao S1

Resultados e Discusso
M4 foi o segundo mais
intenso
Formado pela
dihidroxilao e
sulfonizao do 4-nitro-3trifluoromehylphenilamina
Esta biotransformao
no havia sido descrita
em nenhuma outra
espcie
Detectado 24h aps a
administrao
Apesar da pequena
janela de deteco ele
pode ser considerado no
doping control

Resultados e Discusso
SMAR S4
9 metablitos, M1 a M6b so
identicos ao SMAR S1
O parent compound SAM S4
foi detectado com o mtodo
LLE aps 3h
O M3 foi detectado entre 3 a
48 h atravs de amostras
diludas e do mtodo SPE
Fazendo do M3 o metabolito
de escolha para doping control

Resultados e Discusso

Resultados e Discusso
SARM 22
7 metablitos , M1- M6 igual aos anteriores
M9 detectado apenas neste
M3 detectado em at 48h aps sendo a maior
res
posta com 3h em todos os
mtodos de preparao

Resultados e Discusso

Concluso
Oito biotransformao diferentes foram identificados por SARM S1, nove para SARM S4 e sete para
SARM S22. A amostra recolhida 3 h depois administrao teve a maior resposta para todos os
metabolitos em todos nove cavalos. Isto indica que SARMs so metabolizados rapidamente nesta
espcie.
Sulfato de M3 (4-nitro-3-trifluoro-metil-fenilamina) para SARMs S1 e S4 e sulfato de 4- ciano-3-trifluorometil-fenilamina para SARM S22 tiveram os picos mais intensos e deteco de mais longo para todos
os trs SARMs. Portanto, eles so propostos como possveis alvos em doping eqino controle.
O metaboliteM4 (hidroxilados M3) sugerido como um alvo complementar, uma vez que tem o
segundo
maior tempo de deteco e segundo mais alto pico de intensidade. Para M3 e M4, as respostas
aumentam quando as amostras eram tratados com SPE. No entanto, no prolongou o tempo de
deteco em comparao com o mtodo mais simples 'diludo e disparar ".
O compostos parent no foram detectados em nenhum dos SARM S1 e apenas na amostras
coletadas aps 3 h aps a administrao de SARMs S4 e S22. Assim, eles no tm qualquer valor como
alvos no controle de dopagem, demonstrando a importncia de se realizar estudos metablicos em
conjunto com controle de doping.