ANÁLISE QUÍMICA I: FÍSICO-QUÍMICA

LISTA DE EXERCÍCIOS SOBRE CROMATOGRAFIA (Prof. Jonas Paschoal)

1. A Cromatografia em Papel (CP) é considerada a modalidade de cromatografia planar mais

simples. Na aula prática realizada sobre esse tema, a CP foi empregada para a separação e
identificação de corantes empregados na indústria alimentícia utilizado celulose como suporte
da fase estacionária. Sobre essa aula, responda:
a) Qual a fase estacionária empregada? Explique.
b) Qual o mecanismo e o modo de separação cromatográfica envolvidos? Explique.
c) Ao final da corrida cromatográfica, quais foram as informações obtidas na cromatoplaca
que auxiliaram na identificação dos componentes da amostra?

2. Um pesquisador avaliou a separação cromatográfica de três substâncias diferentes,

empregando uma placa de Cromatografia de Camada Delgada com FE de sílica (previamente
ativada) e, como FM, uma mistura composta por tolueno e acetato de etila (90:10, v/v). Após
o término da corrida cromatográfica, procedeu-se a revelação da placa com aplicação de
vanilina sulfúrica, obtendo-se a seguinte cromatoplaca:

Responda:
a) O que vem a ser Fator de Retardamento (RF) e porque este é o parâmetro mais importante
de identificação dos analitos em análises por cromatografia planar?
b) Qual a importância de se promover a saturação da cuba cromatográfica com a fase móvel
antes de se iniciar a corrida cromatográfica?
c) O que vem a ser ativação da sílica? Qual sua importância
d) Qual é o mecanismo de separação cromatográfica envolvido nesta análise? Explique.
e) Correlacione (e explique) os analitos A, B e C com os compostos Limoneo, Mentol e
Mentona.
f) O que esperar de acontecer com os RF dos analitos se o experimento for repetido com fase
móvel composta por tolueno e acetato de etila (1:1, v/v)? Explique.
g) Faça uma comparação entre Cromatografia em Papel (CP) e Cromatografia em Camada
Delgada (CCD), citando e explicando as vantagens e as desvantagens para cada uma
dessas modalidades de cromatografia planar.
 3. O cromatograma abaixo mostra a separação de dois compostos (A e B) empregando-se placa
com FE de sílica C-18 (sílica ligada a uma cadeia com 18 átomos de carbono) e FM composta
de metanol e água (2:3, v/v).

Pergunta-se:
a. Qual dos dois analitos é o mais polar? Explique.
b. Quais seriam as suas sugestões de modificação das condições cromatográficas visando
melhorar a resolução da separação apresentada acima? Explique.

4. As separações descritas abaixo consistem em diferentes frações coletadas a partir da separação

de uma amostra contendo 3 analitos (A, B e C) empregando cromatografia em coluna clássica
(CCC) com FE de sílica e fase móvel sob vazão de 2 mL/min composta por hexano e
isopropanol em três diferentes proporções: 9:1 (v/v); 8:2 (v/v) e 6:4 (v/v). Correlacione as
diferentes proporções com as Condição I, II e III. Explique.

Condição I Condição II Condição III

Fração 1: Fração 1: A Fração 1: A
Fração 2: A Fração 2: A Fração 2: A
Fração 3: A Fração 3: A+B Fração 3: A+B
Fração 4: Fração 4: B Fração 4: B
Fração 5: Fração 5: B Fração 5:
Fração 6: Fração 6: C Fração 6:
Fração 7: Fração 7: C Fração 7:
Fração 8: Fração 8: ----------
Fração 9: B Fração 15: C
Fração 10: B Fração 16: C

5. Explique os mecanismos de separação por Par Iônico e de exclusão.

6. Sobre o mecanismo de separação por Troca Iônica, pede-se:

a) Explique o que vem a ser Trocador Aniônico Forte.
b) Explique o que vem a ser Trocador Catiônico Fraco.
 7. A separação de mioglobina (massa molar = 16.900 e PI = 7) e dinitrofenil glutamato (massa
molar = 310 e pKa < 3) foi realizada empregando-se uma coluna (1 x 10 cm) contendo
carboximetilcelulose (trocador catiônico fraco) como fase estacionária e uma fase móvel
constituída de tampão MES 0,1 M (pH 6) contendo 3 M de KCl. Considerar que no pH
empregado, o trocador iônico da fase estacionária possui carga (está carregado). Qual o
resultado obtido? Explicar.

8. Os compostos abaixo foram separados empregando-se coluna de carboximetilcelulose (C-50,

limite de exclusão = 30.000, grupo de troca iônica COOH), usando-se eluição da FM por
gradiente.
Analito Massa Molecular Caráter Iônico
Azul de dextrano 2.000.000 Não iônico
Quimiotripsinogênio 23.240 PI = 9,1
Citocromo C 12.400 PI = 10,7
Dimitrobenzoilfenilglicina 241 Ácido (pKa = 3)
Dois desses compostos foram separados com tampão fosfato de sódio 0,01M, pH 5. Em seguida, a
fase móvel foi alterada para tampão fosfato de sódio 0,01 M, pH 5 + 0,25 M de KCl, havendo a
eluição do terceiro composto. O quarto composto foi eluido da coluna empregando tampão fosfato de
sódio 0,01 M, pH 5 + 1 M de KCl. Explique a separação dos compostos com base nos dados da tabela.

9. Os cromatogramas a seguir foram obtidos empregando-se diferentes proporções de água

(contendo 0,1% de ácido acético) e metanol na composição da fase móvel para se obter a
melhor condição de separação de cinco fármacos ácidos por HPLC associado à detecção por
absorbância na região do UV-Vis. Os testes foram desenvolvidos em coluna do tipo C 18, de
dimensões 250 x 4,6 mm, 5 μm.

(a)
(c)

(b
) (d)

Pede-se:

a) Identifique o mecanismo de separação envolvido. Explique sua resposta.

b) O que vem a ser eluição isocrática? Destaque e justifique duas vantagens e duas
desvantagens em relação à outra forma de eluição da fase móvel empregada em HPLC?
c) Tomando-se como referência o cromatograma “b”, em caso de se desejar substituir o
metanol por acetonitrila, qual seria a nova composição da fase móvel, caso se desejasse
manter a força de polaridade? (dados: força do metanol = 2,6 e da acetonitrila = 3,2).
d) Qual a importância do uso de ácido acético na fase móvel?
e) Qual das condições avaliadas seria de sua escolha para o método pretendido? Por que?
10. Os cromatogramas “a” e “b” foram obtidos de análises por HPLC, empregando coluna com
fase estacionária do tipo reversa e fase móvel composta por metanol e água.

a) Aponte e explique, com base nos fundamentos cromatográficos, três possíveis alterações
nas condições cromatográficas que justificariam as diferenças observadas nos perfis de
separação observados da “a” para “b”.
b) Aponte e explique duas vantagens analíticas oferecidas pelas condições que resultaram
no cromatograma “b” em relação ao “a”.

11. Em cromatografia, a equação de Van Deemter correlaciona a eficiência da separação com três
fatores que contribuem para o alargamento do pico cromatográfico.
a) A partir da Figura 1, explique a influência da velocidade linear da fase móvel (µ) em
cada um dos fatores da equação de Van Deemter (A, B e C ).
b) A partir da Figura 2, qual a importância da escolha do diâmetro das partículas da fase
estacionária?

12. Entre as opções de detectores de absorbância UV-VIS empregados em HPLC, explique a

vantagem do uso do espectrofotômetro de arranjo de diodos em relação ao espectrofotômetro
monocromático.

13. Explique as definições e importâncias dos parâmetros sensibilidade, limite de detecção e

seletividade, empregados na avaliação de detectores a serem empregados em associação ao
HPLC.
14. O que vem a ser precisão e exatidão de um método analítico?

15. Em análises quantitativas, o que vem a ser curva matrizada e o que vem a ser padronização
interna? Explique as vantagens de ambos os procedimentos (curva na matriz e uso de
padronização interna) num método quantitativo em amostras complexas.

16. Explique o procedimento de análise quantitativa por Adição de Padrão.

17. A princípio, para ser passível de análise por cromatografia gasosa, uma substância precisa:
a) se degradar nas temperatura de injetor;
b) se volatilizar nas temperaturas operacionais;
c) não conter nitrogênio na estrutura química;
d) não interagir com a fase estacionária;
e) ser volátil e estável à temperatura ambiente.

18. Sobre Cromatografia Gasosa (CG):

a) Destaque duas vantagens e duas desvantagens para o uso de colunas capilares em relação
às colunas recheadas.
b) Sabendo que N e H são parâmetros relacionados à eficiência de uma coluna, explique, a
partir dos dados de duas colunas empregadas em CG descritas abaixo, por que a coluna
capilar apresenta N mais de 10 vezes maior que a coluna recheada, se a diferença entre
os valores de H para ambas não é tão discrepante?

Comprimento Diâmetro interno

H N
(m) (mm)
Coluna capilar 30 0,53 0,683 43.924
Coluna recheada 2 2,16 0,549 3.643

19. Os compostos abaixo foram separados por Cromatografia Gasosa com fase estacionária polar.

Mirceno (Ponto de Ebulição 167 ⁰C) Linalol (Ponto de Ebulição 167 ⁰C)

a) Explique a ordem de eluição prevista.

b) O detector por captura de elétrons seria uma alternativa viável para uma análise visando
o monitoramento desses compostos? Explique.