HPLC

Curso de qualificação para iniciantes

APOSTILA DE exercícios

GRACE KELLI PEREIRA

23 a 25 de setembro de 2020

Av. barão do bananal, 2381

Ribeirão preto – SP
www.insolution.com.br
contato@insolution.com.br

1. Qual a definição de cromatografia?

a) Grafia da cor
b) método físico-químico de separação
c) ato de cromatografar
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2. Qual o princípio da cromatografia?

a) Migração diferencial do analito entre duas fases (fase móvel e fase estacionária)
b) Separação de substâncias coloridas
c) Reação química entre o analito e duas fases (fase móvel e fase estacionária)

3. As fases estacionárias em HPLC podem ser:

a. Sólidas
b. Líquidas
c. Sólidas ou líquidas

4. Quais dos tampões abaixo é o mais comumente usado para resolver rabeamento de pico
com detector UV?

a. Acetato de amônio
b. Formiato de amônio
c. Tampão fosfato

5. Quem elui primeiro no modo reverso?

( ) compostos de maior polaridade

( ) compostos de menor polaridade

6. Qual o solvente mais forte no modo reverso?

( ) metanol
( ) água

7. Quando deve-se usar eluição gradiente?

a. Sempre
b. Para amostras com ampla faixa de retenção (k)
c. Em separações no modo reverso

8. Dado o cromatograma de UV e gradiente abaixo. Você deseja quantificar o pico em 13,22

min. Como você mudaria o gradiente para obter resolução de linha de base?
 3

________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
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9. Para cromatografia no modo reverso, escreva (S) se é possível ou (N) se não é possível
utilizar as seguintes fases móveis:

( ) metanol/água
( ) clorofórmio/água
( ) acetato de etila/metanol/água
( ) isopropanol/água

10. Qual a fase estacionária mais amplamente utilizada em HPLC?

a. Sílica gel
b. C18
c. Ciano
d. Fenil

11. Dado os espectros de UV abaixo, qual o comprimento de onda você usaria para realizar a
análise em cada caso?
 4

a.

b.

12. Qual o modo de separação mais amplamente utilizado em HPLC?

a. Troca iônica
b. Modo normal
c. Modo reverso
d. Exclusão

13. O analista injetou uma mistura de 5 compostos na condição inicial mostrada abaixo e
obteve o respectivo cromatograma, onde vários picos co-eluem. Desejando obter uma
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melhor resolução o analista ajusta o fator de retenção (k) alterando somente a proporção da
fase móvel, mantendo eluiçao isocrática, a mesma coluna, o mesmo fluxo. Quais as novas
proporções da fase móvel você acha que ele testou para obter a resolução desejada?

14. Porque é importante fazer a purga das linhas de solventes do HPLC?

____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________

15. Qual a área esperada para o pico dos cromatogramas abaixo?

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17. Porque é importante retirar o tampão da coluna e do sistema após a análise?

____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
 7

18. Qual dos espectros de massas abaixo (obtido com ionização positiva) corresponde a
cumarina Ostol?
O

O O O O O O O O O
O

fase movel CH3CN/H2O

230.3
100
Ostol Coumurrayina Febalosina
258.7
MM = 244 Da MM = 274 Da MM = 258 Da

%
260.7

a. 69.9 304.8
188.6 306.8
242.6
271.7
204.7 276.8
82.6 218.6
0

230.2 258.7
100

260.7

188.6
271.7
242.7
204.6 299.8
218.8
0
murta isolamento, F4f8f2 p8 preparativa m/z
60 80 52 (1.678)
gMURF4f8f2p8MS 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
2: Daughters of 275AP+
219.3 7.00e5
100

219.6

%
(c)
275.6
161.1 275.5

b. 161.5 275.8

0
gMURF4f8f2p8MS 56 (1.795) 1: Daughters of 245AP+
189.3 5.05e6
100

%
(b)

131.4 203.3 245.5

0
gMURF4f8f2p8 131 (2.542) Scan AP+
245.3 6.75e7
100

(a)
%

246.4
243.3 275.5
286.4
189.4 219.1 261.3
0 m/z
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360