Técnicas de

Microbiologia
Aula 2

Tshilombo Edmond
A Objectivo geral
da Aula
 Descrever um microscópio composto a luz.
 mencionar e explicar a função de cada parte.

B Objetivos específicos
da Aula
 Diferenciar poder de ampliação, poder de resolução e
limite de resolução.

 Usar as unidades de medições como o mm, micrometro,

nanometro e Angtron.

Explicar qual a diferença entre a microscopia eletrônica e a

microscopia óptica.
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 Biosegurança num Laboratorio de
Microbiologia
 É indispensável o uso de avental no laboratório. O avental
deve ser comprido, de mangas compridas e estar
abotoado;

 Os calçados devem ser fechados (protegendo toda a

extensão do “peito do pé”), os cabelos compridos devem
estar presos e é proibido o uso de bijuterias.

 Atenção ao uso dos EPIs indicados para cada

procedimento.

 O Material pessoal (bolsas cadernos, mochilas, agasalhos,

etc.) deve ser mantido longe das bancadas de trabalho.

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 Biosegurança num Laboratorio de
Microbiologia

 Utilizar na bancada somente o material necessário ao

trabalho prático, como: roteiro de aula, papel e lápis ou
caneta para anotações;

 Não comer (inclusive balas e chicletes), beber e fumar no

laboratório;

 Em caso de qualquer acidente (derramamento de culturas,

quebra de placas, ferimentos, aspiração de culturas, etc)
comunicar imediatamente o professor ou o técnico
responsável pela aula prática;

 Lavar as mãos sempre antes de entrar e ao sair do

laboratório.
 Não utilizar aparelho celular.

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Os microrganismos são pequenos demais para serem vistos a olho nu,
devendo ser observados ao microscópio.

A palavra latina micro (pequeno) e

da palavra grega skopos (observar).

Microscópio

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Microscopia.

História da microscopia
Teoria celular
Tipos de microscópios
Microscópio óptico (MO):
•Partes constituintes
•Funcionamento
•Manejo.
Microscópio electrónico (ME)

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História da microscopia

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1953- Fritz Zernike: Prêmio Nobel de Física pelo
desenvolvimento do microscópio de contraste de
fase.
1986- Ernst Ruska: Prêmio Nóbel de Física pelo
desenvolvimento do microscópio eletrônico de
transmissão. (o desenvolvimento do projeto foi
em 1930). Foi o maior intervalo entre descoberta
e prêmio. Tshilombo Edmond
Tipos de microscópios

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 Microscopio óptico: resolução de 0,2 µ
 Microscópio de polarização: usa filtro polaróide e um
analisador é utilizado para moléculas orientadas e
alongadas que são birrefringentes ou anisotrópicas
 Microscópio de fluorescência: utiliza a excitação da
radiação ultravioleta que aparecem como estruturas
brilhantes num fundo escuro
 Microscopio confocal: microscópio óptico que utiliza
raios lazer gerando imagens de planos ópticos do tecido
em exame.
 Microscópio de contraste de fase: facilita a
visualização de células e tecidos.
 Microscopio eletrônico: 1000 vezes mais potente
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Tshilombo Edmond
Microscopia a Luz (ML)

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Aplicações da Microscopia de Fluorescência

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Aplicações da Microscopia de Contraste de Fase

Análise do
material sem
coloração prévia

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Microscopia Eletrônica de
Transmissão (MET)

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Microscopia Eletrônica de
Varredura(MEV)

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Partes constituintes (ML)

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M
I
C
R
O
C
Ó
P
I
O

D
E

L
U
Z

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M
I
C
R
O
C
Ó
P
I
O

D
E

L
U
Z

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 Parte Mecânica

 Base ou pé  suporte
 Coluna ou braço  apoio paras as estruturas
 Tubo  peça de ligação entre a ocular e o
revólver
 Revólver  peça giratória que contém as
lentes objetivas
 Platina  suporta a preparação
 Parafuso Macrométrico de passo largo  é
para movimento de grande amplitude
 Parafuso Micrométrico de pequeno passo 
é destinado a focar o material

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 Parte Óptica (1)
 Condensador: concentra os raios
luminosos  objeto
 possui um diafragma de diâmetro
modificável, proporciona uma maior ou
menor intensidade luminosa
 Lentes objetivas: próximas do
objeto, projetam a imagem ampliada
do objeto em direção a ocular
 Lente ocular: funciona como uma
lupa, amplia a imagem fornecida pela
objetiva
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 Parte Óptica (2)

 Condensador - geralmente é
negligenciado - não interfere no
aumento da imagem, mas ele influencia
em sua nitidez e riqueza de detalhes.

 Age no Limite da resolução do

sistema óptico, embora esta propriedade
dependa principalmente das lentes
objetivas. LR: Olho ~ 0.1 mm;
ML ~ 0.2 μm;
MEV ~1-3 nm;
MET ~ 0.2–0.4nm Tshilombo Edmond
 Códigos de cores das lentes objetivas
 Aumentos
 Multiplicação da lente ocular (10X ou 12X) pela objetiva :
40/100/400/1000
- +Concentração da imagem pela regulagem de altura do
condensador.
Aumento Cores
2X ou 2,5X Marrom
4X ou 5X Vermelho *
10X Amarelo *
16X ou 20X Verde
40 ou 50X Azul claro*
60X Azul cobalto
100X Branco*
Imersão – óleo Preto
Imersão – glicerina Laranja
Imersão – água Branco Tshilombo Edmond
 Abertura Numérica (AN):
 Indica a resolução de uma
lente objetiva
 Capacidade de captar a luz
 Fornecer detalhes da amostra
Aumento
 AN = n. sen  Abertura Numérica

 Vem gravado na lente objetiva

e sua determinação cabe ao
fabricante da lente.
Distância de trabalho
Extensão do tubo

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 As objetivas trazem outras informações:
 160 ou 170: indica em milímetros o comprimento do
tubo do microscópio, onde devem ser usadas as
objetivas para que dêem melhores resultados.
 0,17: distância de trabalho, que significa o tamanho
da lamínula, para a qual as aberrações são corrigidas.

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  Poder de ampliação é a capacidade de um aparelho
de aumentar n vezes uma imagem.
 Poder de resolução é a capacidade de um
aparelho de
 separar detalhes.

 produzir imagens separadas de partículas

muito próximas.
 Limite de resolução é a menor distância
que deve existir entre dois pontos para que eles
apareçam separados.

LR: Olho ~ 0.1 mm;

ML ~ 0.2 μm;
MEV ~1-3 nm;
MET ~ 0.2–0.4nm Tshilombo Edmond
 Limite de Resolução (LR) LR : Olho ~ 0.1 mm;
ML ~ 0.2 μm;
 LR = K .  MEV ~1-3 nm;
MET ~ 0.2–0.4nm
AN
 K é uma constante 0,612
  é o comprimento de onda luz, luz branca (verde-
amarelo) = 0,55 m
 AN é a abertura numérica da lente objetiva...
 LR = 0,612 . 0,55

AN
 O limite de resolução é diretamente proporcional ao
comprimento de onda e inversamente proporcional a
abertura numérica.

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Tshilombo Edmond
 Manejo e cuidados

Gire o revólver do microscópio Coloque a lâmina

de modo que a objetiva de sobre a platina com a
menor aumento fique em lamínula voltada para
posição de uso cima

Focalize o material
Melhore o foco com a objetiva de Utilizando o
com o parafuso menor (4x) aumento, charriot,
micrométrico utilizando o parafuso centralize o
(ajuste fino) macrométrico ((foco material no meio
grosseiro) do campo

Gire o revólver e
mude para a
objetiva de aumento
médio (10x) e acerte
o foco com o
micrométrico.
Verifique se o
condensador está
alto e o diafragma
está aberto.
Com a objetiva de 10x,
olhar toda a lâmina e Ao mudar de lâmina ou,
quando houver alguma guardar o microscópio,
célula que queira examinar volte para a objetiva de
melhor, gire o revólver menor aumento. Desligue
para mudar para objetiva a luz e retire o fio da
de maior aumento (40x). tomada.
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Tshilombo Edmond
 Microscópio óptico
ocular
Binicular

revólver
objetivas
plataforma

condensador

Parafusos de controle
Macro e micrométrico

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Oculares
Revólver

Reostato e interruptor
Parafusos macro e micrométrico
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 O
B
J
E
T
I
AN V
A
S

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Microscópio monocular

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Tshilombo Edmond
LÂMINAS

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 Trabalho
Prático:

Desenhar e
indicar o
nome de
cada
componente

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