MICROSCOPIA

Prof. Dr. Wellington Nascimento

 Dimensões das estruturas biológicas
Macroscópicas:

Alvéolos da laranja Gema do ovo Óvulo humano = cerca de 0,01 mm

Microscópicas:

Bactérias Protozoários Alguns Fungos

 MICROSCOPIA: Conjunto de técnicas que permite obter imagens ampliadas de
estruturas, a partir da utilização do microscópio.

1m
1 m/100 (0,01) = 10-2 m = 1 cm
1 m/1.000 (0,001) = 10-3 m = 1 mm
1/1.000.000 m = (0,000001 m) = 10-6 m = 1 µm (Micrômetro)
1/1.000.000.000 m (0,000000001 m) = 10-9 m = 1 nm (Nanômetro)
1/10.000.000.000 m (0,0000000001 m) = 10-10 m = 1 Ǻ (Ǻngström)
1/1.000.000.000.000 m (0,000000000001 m) = 10-12 m = 1 p (Picômetro)

átomos
.
ponto formiga
 Microscópio
Os microscópios dividem-se em duas categorias:

➢ Microscópio óptico: Feixe de luz;

Aumenta até 1000 vezes;
Limite resolutivo de até 0,2 µm.

➢ Microscópio eletrônico: Feixes de elétrons;

Aumenta 1 milhão de vezes;
Limite resolutivo de cerca de 2 nm.
 Microscópio óptico

Pinça

Base
Compõe-se de uma parte mecânica, que serve de suporte, e uma parte óptica,
constituída por três sistemas de lentes: o condensador, a objetiva e a ocular.
 Células, tecidos etc.

Três sistemas de lentes: o condensador projeta um cone de luz sobre as células que
estão sendo examinadas. Após atravessar as células, esse feixe luminoso penetra na
objetiva, a qual projeta uma imagem aumentada no plano focal da ocular, que,
novamente a amplia. A imagem fornecida pela ocular é percebida pela retina.
 Poder de Resolução
Poder de resolução – É a capacidade de separar detalhes.
Na prática, o poder de resolução é expresso pelo Limite de resolução, que é a
menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam
individualizados no microscópio.
O limite de resolução (LR) da objetiva é fornecido pela fórmula:
 Pra pensar!!!

Duas estruturas biológicas separadas por 0,3 µm aparecem individualizadas quando

examinadas em um microscópio óptico com limite resolutivo de 0,5 µm?

NÃO!!! LR = 0,5 µm

0,3 µm
 Pra pensar!!!

Duas estruturas biológicas separadas por 0,3 µm aparecem individualizadas quando

examinadas em um microscópio óptico com limite resolutivo de 0,2 µm?

SIM!!! LR = 0,2 µm

0,3 µm
 Preparação das lâminas
• Lâminas na qual as células ficam preservadas, isto é fixadas e coradas,
para melhor demonstração dos seus componentes.
 FIXAÇÃO

O formaldeído e o glutaraldeído são os fixadores mais utilizados.

É a primeira etapa e apresenta as seguintes finalidades:

• Impedir a atividade e a proliferação de bactérias;

• Evitar a autólise (destruição da célula por suas próprias enzimas);

Formaldeído
 Microtomia
• Em sua maioria, as células fazem parte de tecidos que precisam ser
cortados em fatias finas para exame no microscópio. Esses cortes são feitos
em um micrótomo. Para ser cortado no micrótomo, o fragmento de tecido
fixado é geralmente imerso em parafina ou em resinas plásticas
especiais.
 COLORAÇÃO
• Os corantes básicos combinam-se com os grupamentos ácidos das
moléculas celulares (DNA e RNA). Ex: hematoxilina.

• Os corantes ácidos tendem a se combinarem com os componentes

celulares básicos (proteínas citoplasmáticas). Ex: eosina, orange G e
fucsina.
 MICROSCÓPIO DE CONTRASTE DE FASE

Imagem de fibroblasto em microscopia de contraste de fase.

É dotado de um sistema óptico que transforma diferenças de fase dos raios

luminosos em diferenças de intensidade. Aqui as estruturas celulares aparecem
escuras (fase positiva) ou claras (fase negativa).
As diversas estruturas celulares apresentam quantidades diversas de matéria e
causam atrasos diferentes na luz que as atravessa. Isso provoca diferenças de
fase na luz emergente que são transformadas em diferenças de intensidade
luminosa. É empregado, em especial, para o estudo de células vivas.
 MICROSCÓPIO CONFOCAL

Células de embrião de inseto

A iluminação é feita por um feixe de raios laser, que varre o corte iluminando
ponto por ponto, em um determinado plano da célula.
Geralmente, as células são submetidas a um composto fluorescente.
Aqui pode se construir a imagem tridimensional ou calcular o
comprimento, área e volume do material biológico.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO

Emprega feixes de elétrons, que acelerados por uma diferença de potencial de

60 000 volts, apresentam um comprimento de onda de 0,005 nm, dando um
maior poder resolutivo a este microscópio.
Pode-se observar vírus e organelas isoladas.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE VARREDURA

Também usa feixe de elétrons, mas fornece imagens tridimensionais, pelo exame
da superfície das estruturas.
Pode resolver detalhes entre 3nm e 20 nm.
 Atividade 1:

Quais são os seres representados em escala microscópica?

Atividade 2: Identifique as partes do microscópio óptico

1
10
2 11

4 12

5
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6

7
 Atividade 3: Discussão

1. Discuta as vantagens e desvantagens da microscopia óptica e

eletrônica.

2. Como você poderia visualizar melhor (a) uma célula viva da

pele, (b) uma mitocôndria de levedura, (c) uma bactéria e (d)
um microtúbulo?
 RESPOSTAS
Questão 1:
• A microscopia óptica é muito mais fácil de ser utilizada e requer instrumentos muito
mais simples. Objetos que têm 1 um de tamanho podem ser facilmente visualizados; o
menor limite de resolução é de 0,2 um, que é um limite teórico imposto pelo
comprimento de onda da luz visível. A luz visível não é destrutiva e passa prontamente
através da água, tornando possível observar células vivas.
• A microscopia eletrônica, por outro lado, é muito mais complicada, tanto na natureza
do instrumento como na preparação da amostra (que necessita ser cortada muito fina,
corada com metal pesado elétron-denso e completamente desidratada).

Questão 2:
• As células vivas não podem ser observadas em um microscópio eletrônico. No entanto,
a resolução da microscopia eletrônica é muito mais alta, e objetos tão pequenos quanto
10 nm podem ser facilmente resolvidos. Para observar qualquer detalhe estrutural,
microtúbulos, mitocôndrias e bactérias deveriam ser analisadas por microscopia
eletrônica. No entanto, é possível corá-los com corantes específicos e então determinar
a sua localização por microscopia óptica.
Atividade 4: Pesquisar sobre a história do microscópio.