Microbiologia

Monitoramento e
controle microbiolgico
Indispensvel para controlar a qualidade dos
ambientes de fabricao e manipulao de
produtos farmacuticos (e de outros segmentos),
o monitoramento microbiolgico de salas limpas
est em discusso internacional. No Brasil, os
critrios de contagem microbiana e as medidas
de controle esto previstos em resoluo tcnica
estabelecida pela ANVISA
Marcelo Couto

monitoramento e o controle microbiolgico em salas limpas e

b)

Sedimentao

(amostragem

limites estabelecidos pelas orientaes normativas.

demais reas crticas do pro-

passiva): coleta realizada por exposi-

A deteco da carga microbiana

cesso de produo de medicamentos

o de placas de Petri contendo uma

presente no ambiente fundamental

fazem parte da rotina de garantia da

formulao padro de meio de cultura

para a manuteno de um plano de

qualidade nas indstrias farmacuticas

suplementado com gar (tcnica de

controle

de todo o mundo. O objetivo medir e

sedimentao).

documentos e acompanhamento do

eficiente,

elaborao

dos

avaliar sistematicamente a quantidade

c) Tcnica de contato: amostragem

histrico de contaminao. Estas in-

de micro-organismos vivos presentes

realizada diretamente sobre a superf-

formaes so essenciais para a obe-

nesses ambientes e orientar medidas

cie do local desejado, principalmente

dincia s Boas Prticas de Produo

preventivas e corretivas para eliminar

nos pontos crticos, utilizando peque-

(BPF), como a adoo de medidas

possveis

contaminao.

nas placas contendo meios de cultura

preventivas e corretivas relacionadas

Embora saibamos que a maior parte

slidos apropriados, tambm conheci-

aos procedimentos operacionais, va-

dos contaminantes seja proveniente

das como Placas RODAC Replicated

lidao dos processos de limpeza e

de matrias-primas, o controle am-

Organisms Detection and Counting.

sanitizao das instalaes e treina-

focos

de

biental uma importante varivel do

d) Coletas com hastes flexveis

processo e merece ateno, destaca

com pontas de algodo produzidas

Os profissionais responsveis pelo

a farmacutica Da de Aguirra, da

para esta finalidade (swabs). O mate-

monitoramento e controle microbiolgi-

Yugue Assessores, especializada em

rial semeado diretamente ou aps

co, no entanto, esbarram em uma srie

consultoria e treinamento.

submet-lo a suspenso e/ou dilui-

de desafios cotidianos, a comear pelo

o em placas de Petri ou caldos-

manejo dos mtodos e equipamentos

-padro.

existentes para realizar as medies.

As tcnicas comumente empregadas para medir a carga microbiana

envolvem:

10

centrfuga e impinger, entre outros.

mento do pessoal.

A anlise dos resultados obtidos a

Uma situao: diferentes equipamen-

a) Coleta por meio de amostrado-

partir dessas tcnicas serve de par-

tos e mtodos adotados nos testes

res de ar (amostragem ativa): utiliza

metro bsico para avaliar se a carga

podem apresentar resultados diversos

equipamentos como os de impactao,

microbiana total se mantm dentro dos

para amostras realizadas ao mesmo

tempo, em funo das limitaes tc-

de cultura, mas sim na anlise da ati-

nicas. Algumas vezes no possvel

vidade ou do contedo das clulas, de-

sequer relacionar o resultado dos cha-

monstrando dessa maneira resultados

mados mtodos rpidos (alternativos)

em termos de unidades viveis e no

com os obtidos pelo mtodo conven-

unidades formadoras de colnias.

cional, no qual os micro-organismos

Embora os mtodos rpidos este-

so desenvolvidos em meio de cultura.

jam conquistando cada vez mais acei-

Pelo mtodo convencional, que

tao, ainda h certa resistncia dos

utiliza meios de cultura e requer tempo

microbiologistas, em funo do dom-

de incubao (em geral de cinco dias),

nio das prticas tradicionais, de algu-

o resultado no reflete o momento atu-

mas limitaes dos prprios mtodos e

al e sim aquele em que a amostra foi

da falta de reconhecimento mais amplo

colhida. O monitoramento neste caso

deles pelos rgos reguladores, mas a

ajuda a compor um histrico e avaliar

tendncias que a tecnologia ganhe

se o ambiente est em tendncia de

espao, comenta Ana Lucia Gonella,

melhora, de piora ou de estabilizao

mestre em microbiologia e doutoranda

dos resultados. Na prtica, o que se

em biotecnologia pela Unicamp Uni-

faz obter a situao do passado e

versidade de Campinas.

extrapol-la para o presente, mas isso

implica em considervel grau de incerteza, aponta a consultora.

Limites de aceitao

O desenvolvimento dos mtodos

rpidos em microbiologia (tambm

Um dos maiores desafios, no en-

conhecidos pela sigla em ingls RMM)

tanto, a dificuldade de se estabelecer

uma tentativa de se obter um retra-

limites de aceitao microbiana para os

to do ambiente a partir de resultados

diferentes tipos de ambientes de produ-

imediatos e mais precisos, tornando

o. Tambm devemos considerar que

o controle mais efetivo. Em geral, o

a identificao dos micro-organismos

princpio adotado nestes casos no

to importante quanto os limites de

baseado na capacidade de os micro-

aceitao deles. Por exemplo, na rea

-organismos crescerem em um meio

de produtos injetveis, submetidos

11

Microbiologia
a esterilizao terminal, no segu-

No ano passado, a ANVISA Agn-

cas, o monitoramento seja frequente e

ra a presena de micro-organismos

cia Nacional de Vigilncia Sanitria

se utilize mtodos apropriados, entre

gram-negativos ou termorresistentes,

publicou a sua resoluo RDC 17/2010,

os quais esto includos aqueles que

enquanto na manufatura de produtos

em substituio RDC 210, que dispe

envolvem placas de sedimentao,

com filtrao esterilizante devemos nos

sobre as Boas Prticas de Fabricao

amostragens volumtrica de ar e de

preocupar com a presena de bact-

de Medicamentos e na qual esto

superfcies, destaca a representante

rias com tamanho 0,2m, destaca a

previstos, entre diversos critrios, os

do TECPAR. As reas, obviamente,

microbiologista Ana Lucia. Os debates

parmetros de monitoramento e con-

no devem ser contaminadas pelos

so ainda mais intensos em relao

trole microbiolgico. Os critrios de

mtodos de amostragem e os resulta-

aos limites para reas controladas de

contagem microbiana e os limites de

dos de monitoramento devem ser revi-

produtos no-estreis.

contaminao microbiolgica apresen-

sados para fins de liberao do produto

O IEST Instituto de Cincias

tados foram baseados nas referncias

terminado. Alm disso, a resoluo diz

Ambientais e Tecnologia, sediado nos

da Organizao Mundial da Sade e

que as superfcies e o pessoal deve ser

Estados Unidos, desenvolveu uma re-

na regulamentao dos medicamentos

monitorados aps operaes crticas.

comendao sobre Micro-organismos

adotada na diretiva europeia, a GMP

Ainda de acordo com a resoluo

em Salas Limpas, a IEST-RP-CC023,

EU, comenta Andra Muggiati de

da ANVISA, as indstrias devem esta-

que uma das importantes referncias

Abreu, gerente de Garantia da Quali-

belecer limites de alerta e de ao para

sobre o assunto. O documento, que

dade do Instituto de Tecnologia do Pa-

a deteco de contaminao micro-

aborda reas estreis e no-estreis,

ran - TECPAR. Ela refora que essas

biolgica, e para o monitoramento de

fornece diretrizes para o controle e a

orientaes, ao serem incorporadas na

tendncia da qualidade do ar nas suas

medio da contaminao no ar e nas

resoluo brasileira, tornaram-se com-

instalaes. Os limites neste caso, ex-

superfcies, descrevendo procedimen-

pulsrias no Pas.

pressos em unidades formadoras de

tos e tcnicas para alcanar o nvel

A RDC 17, assim como j previa

colnia (UFC), so os que constam na

de controle microbiano desejado. Ele

a RDC 210, determina que as reas

tabela abaixo, adotados em consonn-

apresenta ainda uma introduo aos

de produo onde estiverem sendo

cia com o citado padro europeu.

mtodos aceitos para controle e mo-

processados produtos suscetveis a

Os limites adotados levam em con-

nitoramento e os recursos disponveis

contaminao por micro-organismos

siderao o grau de limpeza da sala.

para a realizao dessa atividade, alm

sejam

periodicamente,

Para aquelas classificadas como A,

de orientaes sobre desinfetantes,

considerando as diferentes classes das

onde esto localizadas zonas de alto

seu espectro de letalidade e tcnicas

reas limpas. Entre outros aspectos,

risco operacional e so realizados en-

de aplicao.

o documento estabelece que, quando

vases e conexes asspticas, o limite

forem realizadas operaes asspti-

de UFC por metro cbico nas amostras

No Brasil, a SBCC tambm deu

monitoradas

uma valiosa contribuio para o tema

ao publicar a recomendao normativa

Classificao RDC 17 e GMP UE

RN-007-05, adaptada realidade nacional, lembra Jean-Pierre Herlin, diretor da Anlise Engenharia e Consultoria, um dos membros do comit tcnico

Grau
da
sala

Amostra de ar
UFC/m3

Placa de
sedimentao
90mm UFC/4h

Placa de
contato 55mm
UFC/placa

Amostra de
luva (5 dedos)
UFC/luva

<1

<1

<1

<1

Metodologia e Limites Microbiolgicos

10

em reas Limpas continua em vigor e

100

50

25

200

100

50

responsvel pelo desenvolvimento da

RN. Publicado em 2005, como resultado das atividades de um grupo de
especialistas, o documento, intitulado

uma importante referncia para os

interessados nessa questo.

12

Limites recomendados de contaminao microbiolgica

(valores mdios)

de ar deve ser menor que 1; em am-

Classificao cGMP - FDA

bientes com grau B, que circundam

s de grau A, para preparaes e envases asspticos, esse nmero pode
chegar a 10; e nas reas limpas onde
so realizadas etapas menos crticas
da fabricao de produtos estreis os

Clean Area
Classification
(0.5 m
particles/ft3)

ISO
Designation

0.5 m
particles/m3

Microbiological
Active Air
Action Levelsc
(cfu/m3)

Microbiological
Settling Plates
Action Levelsc,d
(diam. 90mm;
cfu/4hours)

100

3,520

1e

1e

C) e 200 UFC/m3 (grau D). Padres

1000

35,200

tambm so estabelecidos para amos-

10,000

352,000

10

100,000

3,520,000

100

50

limites podem atingir 100 UFC/m3 (grau

tragens de superfcies por meio das

anlises de placas de sedimentao
para um perodo de quatro horas, de
placa de contato, alm de amostras de

Critical area

Produto e embalagem
estreis expostos

ISO Classe 5 para

partculas 0,5 m

Supporting clean area

rea imediatamente
adjacente linha de
processo assptico

ISO Classe 7 em
operao ou Classe 6
ou Classe 5

luva dos trabalhadores envolvidos.

O FDA, rgo norte-americano responsvel pela regulao de alimentos
e medicamentos, tambm adota limites
de contaminao microbiolgica para
as diferentes classes de reas limpas,

Less critical activities

ISO Classe 8

conforme demonstra a tabela ao lado.

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Microbiologia
Os nmeros integram as orientaes
de Boas Prticas de Fabricao do
rgo, o cGMP (current Good Manufacturing Practices), e so igualmente
levados em conta pelas indstrias
farmacuticas de todo o mundo, seja
em observncia aos padres e procedimentos corporativos adotados pelas
suas matrizes ou para que estejam cre-

Expectativa de que a
norma ISO 14698, que
est sendo revisada,
passe a oferecer
limites de aceitao
baseados em consenso
internacional

expectativa que, ao final, os especialistas cheguem a nmeros e critrios

globalmente aceitos.
O estabelecimento de padres internacionais por meio da norma ISO
esbarra no apenas na dificuldade tcnica de se estabelecer nmeros exatos
nem sempre facilmente aplicveis na
rea de microbiologia , mas tambm

denciadas a exportar e comercializar

na resistncia regional: adotar critrios

seus produtos nos Estados Unidos.

mais rgidos que os atuais implica em

rever procedimentos e realizar investiconsidera Silvia Eguchi, diretora de

mentos para se adaptar. Representan-

Microbiologia da Dosage Pesquisas

tes de alguns pases participantes das

Laboratoriais e coordenadora do GT 2

discusses temem que a introduo

da SBCC, grupo de trabalho criado no

de nmeros na norma se sobreponha

Na sua mais recente edio, a

mbito do ABNT CB-46 para tratar de

a regulamentaes, legislao e guias

USP United States Pharmacopeia

questes ligadas biocontaminao

locais seguidos atualmente.

acrescentou novos elementos para

em reas limpas.

Novos conceitos
e discusses

14

Apesar disso, a expectativa de

a discusso da contagem microbia-

Um dos caminhos para se chegar

que as discusses continuem avan-

na e do controle de contaminaes

a padres mundiais deve ser a reviso

ando e, nos prximos anos, os crit-

microbiolgicas.

oficial

da norma ISO 14698 Partes 1 e 2,

rios estabelecidos sejam mais claros e

no-governamental que define pa-

Autoridade

publicada em 2003 com a finalidade

harmonizados em todo o mundo. Para

dres para medicamentos e outros

de oferecer princpios e metodologia

isso, o que se busca estabelecer

produtos para a sade, a USP tem as

bsica para avaliar e controlar a bio-

padres mnimos, aplicveis de forma

suas orientaes acompanhadas de

contaminao. O documento original,

prtica e objetiva em todos os pases

perto. Na verso 2011 (USP 34) do

porm, no foi muito adotado, pela

afiliados ISO, o que representa uma

documento so recomendados novos

falta de parmetros objetivos para a

evoluo do ponto de vista tcnico e

critrios, que levam em conta a taxa de

realizao de contagens e o estabe-

tambm operacional e mercadolgico

incidncia de contaminaes. O limite

lecimento de limites microbiolgicos

para uma indstria cuja produo se

tolervel de 0,1%. Isso significa que a

para as diferentes classes de reas.

d em escala mundial e com atuao

cada 1.000 contagens realizadas seria

Muitos profissionais consideram essa

em mercados globalizados.

permitida apenas a ocorrncia de uma

norma um guia, por apresentar orien-

A busca pelo aperfeioamento das

placa com at 15 unidades formadoras

taes gerais, mas sem fixar critrios

tcnicas de contagem microbiana e a

de colnia (UFC).

de nveis de biocontaminao, obtidos

definio de nmeros consensuais,

O problema que essa contagem

por dados do histrico do controle mi-

que balizem os limites aceitveis nos

leva um tempo considervel para ser

crobiolgico, comenta Silvia Eguchi,

diferentes

obtida. Se uma indstria estabele-

que a delegada brasileira no grupo

so os principais desafios vivencia-

cer, por exemplo, que vai colher um

de trabalho da ISO encarregado de

dos pelos profissionais que atuam na

amostra por dia em determinada rea

discutir a norma. Do jeito que est, ela

indstria farmacutica e tambm em

ou zona controlada, levar quase trs

no exatamente uma norma e, por

outros segmentos como os de alimen-

anos para completar 1.000 placas. Evi-

isso, especialistas de diversos pases

tos e de cosmticos com o objetivo

dentemente, esse tempo diminui me-

foram convocados para a sua refor-

de desenvolver prticas cada vez

dida que mais amostras sejam colhidas

mulao, acrescenta. O processo de

melhores de produo, com adequado

em um mesmo dia, mas ainda assim

reviso, iniciado h quatro anos, deve

controle microbiolgico e segurana

demanda longo perodo de avaliao,

consumir pelo menos mais trs, mas a

dos seus produtos.

ambientes

classificados,

Questo dos nmeros

a partir de estudos e das experin-

Silvia Eguchi, coordenadora do GT

cias prticas. Como se trata de cri-

2 da SBCC mantido pelo comit

trios estabelecidos pelo homem,

ABNT CB-46 para tratar de ques-

os limites fixados esto sujeitos a

tes ligadas biocontaminao

questionamentos decorrentes do

em reas limpas defende o esta-

avano cientfico e do prprio de-

belecimento de critrios interna-

senvolvimento de anlises estats-

cionais e o aperfeioamento dos

ticas aplicadas microbiologia. Por

mtodos de mensurao e con-

isso, natural que sejam continua-

estatsticas e critrios cientficos, a

trole microbiano nos ambientes

mente discutidos, de acordo com o

ser tomado como referncia. Seja

crticos classificados. Ela comenta

avano tcnico-cientfico.

ele qual for, importante que seja

Foto: Glaucia Motta

A especialista em microbiologia

a questo dos nmeros:

acordado por especialistas dos

Mas importante ter nmeros?

diversos pases e tenhamos par-

Como os limites aceitveis so

Sim, em termos. Eles so mais

metros claramente estabelecidos.

definidos?

importantes

limpas,

Caminhamos nesta direo e es-

So

convenes

em

reas

estabelecidas

onde a contaminao microbia-

tou confiante de que a reviso da

pelos pesquisadores do assunto e

na muito baixa. Buscamos um

norma ISO 14698 ser um avano

profissionais que militam na rea,

indicador numrico, baseado em

C

CM

para harmonizar padres.

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CY CMY