USP 1116 - Monitoramento Ambiental

10/06/2021 USP-NF 〈1116〉 Microbiological Control and Monitoring of Aseptic Processing Environments
Printed on: Thu Jun 10 2021, 11:09:02 am

Printed by: Renato Camargo
Status oficial: atualmente oficial em 10 de junho de 2021
Data oficial: oficial antes de 2013
Tipo de Documento: CAPÍTULO GERAL
DocId: 1_GUID-B9A1739F-E171-4E11-A0C7-E43A318EA17F_1_en-US
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〈 1116 〉 CONTROLE MICROBIOLÓGICO E MONITORAMENTO DE

AMBIENTES DE PROCESSAMENTO ASSÉPTICO
Ambientes controlados microbiologicamente são usados para uma variedade de finalidades no setor de saúde. Este capítulo de
informações gerais fornece informações e recomendações para ambientes onde o risco de contaminação microbiana é controlado
por meio de processamento asséptico. Os produtos fabricados em tais ambientes incluem produtos farmacêuticos estéreis,
fármacos estéreis a granel, intermediários estéreis, excipientes e, em certos casos, dispositivos médicos. Ambientes de
processamento asséptico são muito mais críticos em termos de risco do paciente do que ambientes controlados usados para outras
operações de fabricação -por exemplo, equipamento e preparação de componentes, controle limitado de biocarga de produtos não
estéreis e processamento de produtos esterilizados terminalmente. Neste capítulo, o tipo de processamento asséptico é
diferenciado pela presença ou ausência de operadores humanos. Um processo asséptico avançado é aquele em que a intervenção
direta com recipientes de produto abertos ou superfícies de contato com o produto expostas por operadores vestindo roupas
convencionais de sala limpa não é necessária e nunca permitida. [ Nota - Uma descrição dos termos usados neste capítulo pode ser
encontrada no Glossário no final do capítulo. ]
A orientação fornecida neste capítulo e os parâmetros de monitoramento fornecidos para avaliação microbiológica devem ser
aplicados apenas a salas limpas, sistemas de barreira de acesso restrito (RABS) e isoladores usados para processamento asséptico.
Os ambientes classificados pela ISO usados para outros fins não precisam atender aos níveis de controle de contaminação exigidos
para produtos estéreis produzidos assepticamente. Os ambientes usados para aplicações não estéreis requerem diferentes
estratégias de controle microbiano.
AL
Uma grande proporção dos produtos rotulados como estéreis são fabricados por processamento asséptico, em vez de
esterilização terminal. Como o processamento asséptico depende da exclusão de microrganismos do fluxo de processo e da
prevenção de microrganismos de entrar em recipientes abertos durante o processamento, a biocarga do produto, bem como a
biocarga do ambiente de fabricação, são fatores importantes que regem o risco de contaminação microbiana inaceitável. Os termos
asséptico e estéril não são sinônimos. Estérilsignifica ter uma ausência completa de microorganismos viáveis ou organismos com
CI
potencial para se reproduzir. No sentido microbiológico mais puro, um processo asséptico é aquele que evita a contaminação por
exclusão de microrganismos. Na fabricação contemporânea de produtos assépticos para a saúde, o asséptico descreve o processo
de manuseio de materiais esterilizados em um ambiente controlado projetado para manter a contaminação microbiana em níveis
conhecidos por apresentarem risco mínimo.
Em qualquer ambiente onde haja operadores humanos, a contaminação microbiana em algum nível é inevitável. Mesmo o projeto e
FI
a operação mais cautelosos do ambiente de sala limpa não eliminarão o derramamento de microorganismos na presença de
operadores humanos. Assim, uma expectativa de contaminação zero em todos os locais durante todas as operações de
processamento asséptico não é tecnicamente possível e, portanto, não é realista. Não há meios de demonstrar que um ambiente de
processamento asséptico e as superfícies de contato com o produto dentro desse ambiente são estéreis. Os locais de
O
monitoramento devem ser determinados com base em uma avaliação de risco. Embora os fabricantes devam revisar os resultados
do monitoramento ambiental frequentemente para garantir que a instalação opere em um estado de controle validado, os resultados
do monitoramento não podem provar nem refutar a esterilidade. Devido às limitações do monitoramento, os fabricantes não podem
confiar diretamente no monitoramento, nas estatísticas ou em simulações periódicas de processamento asséptico para garantir um
nível de garantia de esterilidade.
O monitoramento ambiental é geralmente realizado por pessoal e, portanto, requer a intervenção do operador. Como resultado, o
monitoramento ambiental pode aumentar o risco de contaminação e também fornecer resultados falso-positivos. Portanto, o
monitoramento intensivo é injustificado, especialmente nos ambientes ISO 5 que são usados nas zonas mais críticas de
processamento asséptico.
Vários métodos de amostragem podem ser usados para avaliar e controlar o estado microbiológico de ambientes controlados
para processamento asséptico. Atualmente, quase todos esses métodos dependem do crescimento e da recuperação de
microrganismos, muitos dos quais podem estar em um estado danificado devido ao estresse ambiental e, portanto, podem ser
difíceis de recuperar. Os valores numéricos para monitoramento de ar, superfície e pessoal incluídos neste capítulo não pretendem
representar limites ou especificações, mas são estritamente informativos. Devido à variedade de equipamentos e métodos de
amostragem microbiológica, não é cientificamente razoável sugerir que a obtenção desses valores garante o controle microbiano ou
que excursões além dos valores neste capítulo indicam uma perda de controle. A avaliação dos riscos associados aos ambientes de
fabricação deve ser feita ao longo de um período significativo; e, em cada caso, a métrica da taxa de recuperação de contaminação
deve ser estabelecida com base em uma revisão das descobertas reais dentro da instalação. O objetivo de cada usuário deve ser
usar as taxas de recuperação de contaminação para rastrear o desempenho contínuo e refinar o programa de controle
microbiológico para promover melhorias. Quando as condições operacionais ideais são alcançadas dentro de uma instalação,
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Não existem métodos padrão para amostragem de ar e a literatura disponível indica que os métodos de amostragem de ar são
altamente variáveis. Não se deve presumir que volumes de amostra semelhantes obtidos por métodos diferentes produzirão taxas
semelhantes de recuperação. Muitos fatores podem afetar a recuperação e sobrevivência microbiana, e diferentes fornecedores de
amostradores de ar podem ter projetado seus sistemas para atender a diferentes requisitos. Além disso, a variação de amostra para
amostra na amostragem microbiana pode ser extensa. Dados limitados estão disponíveis em relação à exatidão, precisão,
sensibilidade e limites de detecção de métodos de monitoramento usados no processamento asséptico de produtos de saúde.
Os métodos de amostragem de superfície também não são padronizados. Diferentes meios são empregados e, no caso de
esfregaços, resultados diferentes foram relatados para métodos de esfregaço úmido e seco e placas de contato. Deve-se esperar
que as placas de contato de amostra duplicadas forneçam resultados semelhantes em condições idênticas, mas as taxas de
recuperação foram relatadas como sendo menores do que o esperado e altamente variáveis. Em geral, constatou-se que o
monitoramento de superfície recupera <50%, mesmo quando usado com níveis de inóculo relativamente altos em cupons
padronizados. Em ambientes reais de produção, onde os organismos são estressados em vários graus, as taxas de recuperação
podem ser menores.
TECNOLOGIAS ASSÉPTICAS AVANÇADAS

As tecnologias assépticas avançadas podem ser definidas como aquelas que não dependem da intervenção direta de operadores
humanos durante o processamento. No momento, tecnologias como isoladores, sopro / enchimento / vedação e RABS fechados
(projetos que nunca são abertos durante a configuração ou operação) podem ser consideradas tecnologias assépticas avançadas,
desde que a intervenção direta por pessoal autorizado seja proibida durante o processamento. Nos últimos anos, a tecnologia de
isoladores encontrou ampla aceitação na fabricação de produtos de saúde. Isoladores e RABS fechados separam efetivamente o
operador do ambiente crítico de processamento asséptico. Como esses sistemas reduzem substancialmente o risco de
contaminação,
CLASSIFICAÇÃO DE SALA LIMPA PARA AMBIENTES DE PROCESSAMENTO ASSÉPTICO

O projeto e a construção de salas limpas e ambientes controlados são cobertos pela série ISO 14644. Este padrão define o
desempenho de um ambiente limpo em relação à concentração de partículas totais por unidade de volume. A ISO 14644-1 estipula a
contagem total de partículas permitidas para um ambiente limpo para atender às classificações de qualidade do ar definidas. O leitor
AL
é encaminhado a este padrão em relação às características de design e certificação de ambientes limpos.
Os fabricantes de produtos farmacêuticos estão preocupados com a contaminação por partículas inviável em produtos injetáveis
(consulte Material Particulado em Injeções 〈 788 〉) Ao contrário da contaminação microbiana, em que os dados experimentais
sugerem que os humanos são a única fonte significativa, as partículas inviáveis podem surgir tanto de humanos quanto de
equipamentos de processamento. Estudos indicam que humanos com avidez eliminam a contaminação por partículas e micróbios a
CI
uma taxa bastante consistente. No entanto, a relação entre a contaminação microbiana (viável) e a não viável não é válida para as
partículas eliminadas pelo equipamento de processamento. Onde o equipamento é a fonte primária de material particulado, os
particulados resultantes são essencialmente todos inviáveis.
O argumento de que, se menos partículas totais estiverem presentes em uma sala limpa, é menos provável que microorganismos
aerotransportados estejam presentes só é verdadeiro se os operadores humanos forem a fonte do material particulado. Não é
FI
possível distinguir claramente entre a contaminação total de partículas de fundo gerada em grande parte por operações mecânicas e
as partículas totais contribuídas pelo pessoal. Portanto, é comum e adequado que os programas de monitoramento ambiental de
sala limpa consistam em um componente particulado total e um componente microbiológico. tabela 1descreve as classificações de
sala limpa comumente usadas na indústria farmacêutica. No processamento asséptico, ambientes limpos de ISO 14644-1 Classes
O
5–8 são normalmente usados.
Tabela 1. Classes de Limpeza de Partículas Totais Aerotransportadas a
ISO Classe b Partículas ≥0,5 µm / m 3
ISO 5 3520
ISO 6 35,200
ISO 7 352,000
ISO 8 3,520,000
a Retirado do ISO International Standard 14644 Parte 1, publicado pela International Organization for Standardization, maio de
1999.
b As quatro classes ISO 14644-1 correspondem estreitamente às antigas classificações do US Federal Standard 209E. As
relações são ISO 5 / Classe 100, ISO 6 / Classe 1000, ISO 7 / Classe 10.000 e ISO 8 / Classe 100.000.
Isoladores e RABS fechados apresentam um quadro diferente, porque o pessoal é excluído do ambiente de processamento
asséptico e as manipulações são feitas com conjuntos de luva e manga e meias-roupas de plástico espesso e flexível (como cloreto
de polivinila ou borracha sintética). O pessoal tem muito menos efeito na qualidade microbiana do ambiente dentro de um invólucro

isolador do que em ambientes de sala limpa. Alguns usuários optaram por operar o RABS de uma maneira que permite a intervenção
humana direta e aberta. Em um estado operacional aberto, esses sistemas são mais semelhantes em operação a salas limpas
convencionais e, portanto, não podem ser considerados sistemas avançados de processamento asséptico. Em um RABS aberto,
As especificações para mudanças de ar por hora e velocidades do ar não estão incluídas na ISO 14644, nem foram incluídas no
Padrão Federal 209E. Normalmente, as salas ISO Classe 8 / Classe 100.000 são projetadas para fornecer um mínimo de 20
renovações de ar por hora; As salas ISO Classe 7 / Classe 10.000 são projetadas para fornecer mais de 50 renovações de ar por hora;
e salas limpas ISO Classe 5 / Classe 100 fornecem mais de 100 renovações de ar por hora. O desenho de alguns critérios de
instalação pode ser diferente. Ao diluir e remover contaminantes, grandes volumes de ar podem reduzir a contaminação
transportada pelo ar na produção asséptica. As condições ideais variam consideravelmente, dependendo das características do
processo, particularmente a quantidade de contaminação derivada de pessoal. Essas especificações devem ser usadas apenas
como um guia no projeto e operação de salas limpas, porque as correlações precisas entre as mudanças de ar por hora, velocidade
do ar e controle microbiano não foram satisfatoriamente estabelecidas experimentalmente.
Os fabricantes devem manter um fluxo de ar predominantemente unidirecional (vertical ou horizontal) em um ambiente de sala
limpa Classe 5 com pessoal, particularmente quando produtos, recipientes de produtos e fechos estão expostos. Na avaliação do
movimento do ar em uma sala limpa, estudar o fluxo de ar visualmente por meio de estudos de fumaça ou outros meios adequados
é provavelmente mais útil do que usar medidas absolutas de velocidade do fluxo de ar e taxas de alteração. Os modelos de avaliação
de risco são outra forma útil de reduzir o risco de contaminação e devem ser considerados.
A velocidade do ar e as taxas de alteração são muito menos importantes em isoladores ou RABS fechados do que em salas limpas
porque o pessoal é separado com mais cuidado do produto, dos recipientes do produto e dos fechos. Velocidades do ar
substancialmente mais baixas do que aquelas usadas em salas limpas em escala humana provaram ser adequadas em sistemas
isoladores e podem ser apropriadas também em RABS. Em zonas dentro de isoladores onde as partículas representam um risco
para a qualidade do produto, o fluxo de ar unidirecional predominantemente vertical ou horizontal pode ser mantido. A experiência
mostrou que uma mistura bem controlada ou fluxo de ar turbulento é satisfatório para muitos processos assépticos e para teste de
esterilidade dentro de isoladores (consulte Teste de esterilidade- Validação de sistemas isoladores 〈 1208 〉 ).
IMPORTÂNCIA DE UM PROGRAMA DE AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA PARA AMBIENTES CONTROLADOS

O monitoramento da contagem total de particulados em ambientes controlados, mesmo com o uso de instrumentação eletrônica
AL
de forma contínua, não fornece informações sobre o conteúdo microbiológico do ambiente. A limitação básica dos contadores de
partículas é que eles medem partículas de 0,5 µm ou maiores. Embora os microrganismos transportados pelo ar não sejam de
flutuação livre ou células únicas, eles frequentemente se associam a partículas de 10–20 µm. As contagens de partículas, bem como
as contagens microbianas em ambientes controlados, variam com o local de amostragem e as atividades que estão sendo
conduzidas durante a amostragem. Monitorar o ambiente quanto a partículas e microrganismos não viáveis é uma função de
CI
controle importante porque ambos são importantes para alcançar os requisitos de compêndio do produto para matéria estranha e
particulada eEsterilidade em injeções e medicamentos implantados 〈 1 〉 .
O monitoramento de partículas totais pode fornecer um meio melhor de avaliar a qualidade geral do ambiente em isoladores e
RABS fechados do que na maioria das salas limpas convencionais. A exclusão superior de contaminação de origem humana
fornecida por um isolador resulta em uma proporção aumentada de partículas não viáveis. A contagem total de partículas em um
FI
isolador provavelmente fornecerá um indicador imediato de mudanças no nível de contaminação. Os programas de monitoramento
microbiano devem avaliar a eficácia das práticas de limpeza e sanitização por e de pessoal que pode ter um impacto sobre a carga
biológica. Como os isoladores são normalmente descontaminados usando um sistema automático de geração de vapor ou gás, o
monitoramento microbiano é muito menos importante para estabelecer sua eficiência na eliminação da carga biológica. Esses
O
sistemas de descontaminação automática são validados diretamente, usando um desafio de indicador biológico apropriado, e são
controlados para parâmetros de exposição definidos durante o uso de rotina para garantir uma descontaminação consistente.
O monitoramento microbiano não pode e não precisa identificar e quantificar todos os contaminantes microbianos nesses
ambientes controlados. O monitoramento microbiológico de uma sala limpa é tecnicamente um exercício semiquantitativo, pois uma
avaliação verdadeiramente quantitativa do ambiente não é possível, dadas as limitações do equipamento de amostragem. Tanto a
falta de precisão dos métodos de enumeração quanto os volumes restritos de amostra que podem ser efetivamente analisados
sugerem que o monitoramento ambiental é incapaz de fornecer informações quantitativas diretas sobre a garantia da esterilidade.
Os analistas devem lembrar que nenhum plano de amostragem microbiológica pode provar a ausência de contaminação microbiana,
mesmo quando nenhuma contaminação viável é recuperada. A ausência de crescimento em uma amostra microbiológica significa
apenas que o crescimento não foi descoberto; isso não significa que o meio ambiente esteja livre de contaminação.
O monitoramento microbiano de rotina deve fornecer informações suficientes para demonstrar que o ambiente de processamento
asséptico está operando em um estado adequado de controle. O valor real de um programa de monitoramento microbiológico está
em sua capacidade de confirmar condições ambientais consistentes e de alta qualidade em todos os momentos. Os programas de
monitoramento podem detectar mudanças na taxa de recuperação de contaminação que podem ser indicativas de mudanças no
estado de controle dentro do ambiente.
O monitoramento microbiano ambiental e a análise de dados por pessoal qualificado podem ajudar a garantir que um estado
adequado de controle seja mantido. O ambiente deve ser amostrado durante as operações normais para permitir a coleta de dados
significativos relacionados ao processo. A amostragem microbiana deve ocorrer quando os materiais estão na área, as atividades de
processamento estão em andamento e uma equipe completa está trabalhando no ambiente de processamento asséptico.
O monitoramento microbiano de salas limpas de fabricação, RABS e isoladores deve incluir gases comprimidos, superfícies, ar da
sala ou gabinete e quaisquer outros materiais e equipamentos que possam produzir um risco de contaminação. A análise das

tendências de contaminação em um ambiente asséptico há muito é um componente do programa de controle ambiental. Em

ambientes de processamento asséptico e particularmente em ambientes ISO Classe 5, contaminação é raramente observada. Em
invólucros de isolador, a contaminação é ainda mais rara devido à exclusão superior de contaminação de origem humana. Devido à
criticidade desses ambientes, mesmo pequenas alterações nas taxas de incidentes de contaminação podem ser significativas, e os
fabricantes devem revisar freqüentemente e cuidadosamente os dados de monitoramento. Em ambientes menos críticos, a
contaminação microbiana pode ser maior, mas as mudanças nas taxas de recuperação devem ser observadas, investigadas e
corrigidas. As recuperações isoladas de microrganismos devem ser consideradas um fenômeno normal em salas limpas
convencionais, e esses incidentes geralmente não requerem ação corretiva específica, porque é quase certo que as investigações
falharão em produzir uma causa cientificamente verificável. Como a própria amostragem requer uma intervenção asséptica em salas
limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo. Em ambientes menos
críticos, a contaminação microbiana pode ser maior, mas as mudanças nas taxas de recuperação devem ser observadas,
investigadas e corrigidas. As recuperações isoladas de microrganismos devem ser consideradas um fenômeno normal em salas
limpas convencionais, e esses incidentes geralmente não requerem ação corretiva específica, porque é quase certo que as
investigações falharão em produzir uma causa cientificamente verificável. Como a própria amostragem requer uma intervenção
asséptica em salas limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo.
Em ambientes menos críticos, a contaminação microbiana pode ser maior, mas as mudanças nas taxas de recuperação devem ser
observadas, investigadas e corrigidas. As recuperações isoladas de microrganismos devem ser consideradas um fenômeno normal
em salas limpas convencionais, e esses incidentes geralmente não requerem ação corretiva específica, porque é quase certo que as
investigações falharão em produzir uma causa cientificamente verificável. Como a própria amostragem requer uma intervenção
asséptica em salas limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo. e
corrigido. As recuperações isoladas de microrganismos devem ser consideradas um fenômeno normal em salas limpas
convencionais, e esses incidentes geralmente não requerem ação corretiva específica, porque é quase certo que as investigações
limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo. e corrigido. As
recuperações isoladas de microrganismos devem ser consideradas um fenômeno normal em salas limpas convencionais, e esses
incidentes geralmente não requerem ação corretiva específica, porque é quase certo que as investigações falharão em produzir uma
AL
causa cientificamente verificável. Como a própria amostragem requer uma intervenção asséptica em salas limpas convencionais,
qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo. porque é quase certo que as investigações
limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um falso positivo. porque é quase certo
que as investigações falharão em produzir uma causa cientificamente verificável. Como a própria amostragem requer uma
intervenção asséptica em salas limpas convencionais, qualquer evento único de contaminação não correlacionado pode ser um
CI
falso positivo.
Quando as taxas de recuperação de contaminação aumentam de uma norma estabelecida, o processo e a investigação
operacional devem ocorrer. As investigações serão diferentes dependendo do tipo e processamento do produto fabricado na sala
limpa, RABS ou isolador. A investigação deve incluir uma revisão da documentação de manutenção da área; documentação de
sanitização / descontaminação; a ocorrência de eventos não rotineiros; os parâmetros físicos ou operacionais inerentes, como
FI
mudanças na temperatura ambiente e umidade relativa; e o status de treinamento do pessoal.

Em sistemas RABS e isoladores fechados, a perda de integridade das luvas ou a introdução acidental de material que não foi
descontaminado estão entre as causas mais prováveis de contaminação microbiana detectável. Após a investigação, ações devem
ser tomadas para corrigir ou eliminar as causas mais prováveis de contaminação. Devido à relativa raridade de eventos de
O
contaminação em instalações modernas, a investigação freqüentemente se mostra inconclusiva. Quando as ações corretivas são
realizadas, elas podem incluir o reforço do treinamento do pessoal para enfatizar técnicas aceitáveis de vestimenta e asséptica e
controle microbiano do ambiente. Algumas amostragens microbiológicas adicionais em uma frequência aumentada podem ser
implementadas, mas isso pode não ser apropriado durante o processamento asséptico porque a amostragem intrusiva ou
excessivamente intensiva pode acarretar um risco aumentado de contaminação. Quando o monitoramento adicional é desejável,
pode ser mais apropriado durante os estudos de simulação de processo. Outras medidas que podem ser consideradas para
controlar melhor a contaminação microbiana incluem higienização adicional, uso de diferentes agentes saneantes e identificação do
contaminante microbiano e sua possível origem. mas isso pode não ser apropriado durante o processamento asséptico porque a
amostragem intrusiva ou excessivamente intensiva pode acarretar um risco aumentado de contaminação. Quando o monitoramento
adicional é desejável, pode ser mais apropriado durante os estudos de simulação de processo. Outras medidas que podem ser
consideradas para controlar melhor a contaminação microbiana incluem higienização adicional, uso de diferentes agentes saneantes
e identificação do contaminante microbiano e sua possível origem. mas isso pode não ser apropriado durante o processamento
asséptico porque a amostragem intrusiva ou excessivamente intensiva pode acarretar um risco aumentado de contaminação.
Quando o monitoramento adicional é desejável, pode ser mais apropriado durante os estudos de simulação de processo. Outras
medidas que podem ser consideradas para controlar melhor a contaminação microbiana incluem higienização adicional, uso de
diferentes agentes saneantes e identificação do contaminante microbiano e sua possível origem.
Em qualquer ambiente asséptico, convencional ou avançado, a investigação e a justificativa para o curso de ação escolhido como
resultado da investigação devem ser cuidadosa e exaustivamente documentados.
AVALIAÇÃO FÍSICA DA EFICÁCIA DO CONTROLE DE CONTAMINAÇÃO

Ambientes limpos devem ser certificados conforme descrito na série ISO 14644 para atender aos requisitos de classificação de
projeto. O projeto, a construção e a operação de salas limpas variam muito, por isso é difícil generalizar os requisitos para
parâmetros como integridade do filtro, velocidade do ar, padrões de ar, trocas de ar e diferencial de pressão. Em aplicações
particularmente críticas, como processamento asséptico, uma abordagem estruturada para avaliação de risco físico pode ser
apropriada.
Um desses métodos foi desenvolvido por Ljundqvist e Reinmüller. Este método, conhecido como método LR, desafia o sistema de
ventilação de ar, avaliando o fluxo de ar e a capacidade de um ambiente de diluir e remover partículas transportadas pelo ar. No
método LR, um gerador de fumaça permite que os analistas visualizem os movimentos do ar em uma sala limpa ou um ambiente
controlado, incluindo vórtices ou zonas turbulentas, e o padrão de fluxo de ar pode ser ajustado para minimizar esses efeitos
indesejáveis. Após a otimização visual do fluxo de ar, o material particulado é gerado próximo à zona crítica e ao campo estéril. Esta
avaliação é feita em condições de produção simuladas, mas com equipamentos e pessoal instalados. Este tipo de teste também
pode ser usado para avaliar a capacidade de RABS e sistemas isoladores,
A avaliação visual do movimento do ar em salas limpas é um processo subjetivo. A eliminação completa de turbulência ou vórtices
não é possível na operação de salas limpas que contenham pessoal e equipamentos. A visualização do ar é simplesmente uma
etapa no esforço de otimizar as operações de sala limpa e não é um teste definitivo de aprovação / reprovação, porque as condições
aceitáveis ou inaceitáveis não são prontamente definíveis.
O teste adequado e a otimização das características físicas da sala limpa, RABS ou isolador são essenciais antes da
implementação do programa de monitoramento microbiológico. A garantia de que a sala limpa, RABS ou isolador está em
conformidade com suas especificações de engenharia predeterminadas fornece a confiança de que a capacidade dos sistemas da
instalação e das práticas operacionais de controlar a carga biológica e as partículas não viáveis são adequadas para o uso
pretendido. Esses testes devem ser repetidos durante a certificação de rotina da sala limpa ou sistemas de processamento
asséptico avançado, e sempre que mudanças significativas são feitas na operação, como fluxo de pessoal, operação de
equipamento, fluxo de material,
TREINAMENTO DE PESSOAL
O bom desempenho do pessoal desempenha um papel essencial no controle da contaminação; o treinamento e a supervisão
adequados são fundamentais para o controle da contaminação. O processamento asséptico é a atividade mais crítica conduzida em
AL
ambientes microbiológicos controlados, e os fabricantes devem prestar muita atenção aos detalhes em todos os aspectos desse
empreendimento. A disciplina rigorosa e a supervisão estrita do pessoal são essenciais para garantir um nível de qualidade
ambiental adequado para o processamento asséptico.
O treinamento de todo o pessoal que trabalha em ambientes controlados é fundamental. Este treinamento é igualmente
importante para o pessoal responsável pelo programa de monitoramento microbiano, porque a contaminação da área de trabalho
CI
limpa pode ocorrer inadvertidamente durante a amostragem microbiana. Em operações altamente automatizadas, o pessoal de
monitoramento pode ser os funcionários que têm o contato mais direto com as superfícies e zonas críticas dentro da área de
processamento. A amostragem microbiológica tem o potencial de contribuir para a contaminação microbiana causada por técnicas
de amostragem inadequadas ou pela colocação de pessoal na zona crítica ou próximo a ela. É necessário um programa de
treinamento formal para minimizar esse risco. Este treinamento deve ser documentado para todo o pessoal que entra em ambientes
FI
controlados. As intervenções devem ser sempre minimizadas, incluindo aquelas necessárias para atividades de monitoramento; mas
quando as intervenções não podem ser evitadas, elas devem ser conduzidas com técnica asséptica que se aproxime da perfeição o
mais próximo possível.
O gerenciamento da instalação deve garantir que o pessoal envolvido nas operações em salas limpas e ambientes de
O
processamento asséptico avançado seja bem versado nos princípios microbiológicos relevantes. O treinamento deve incluir
instruções sobre os princípios básicos da técnica asséptica e enfatizar a relação dos procedimentos de fabricação e manuseio com
as fontes potenciais de contaminação do produto. Aqueles que supervisionam, auditam ou inspecionam o controle microbiológico e
as atividades de monitoramento devem ter conhecimento sobre os princípios básicos da microbiologia, fisiologia microbiana,
desinfecção e saneamento, seleção e preparação de mídia, taxonomia e esterilização. A equipe responsável pela supervisão e testes
deve ter formação acadêmica em microbiologia médica ou ambiental. O pessoal de amostragem, bem como os indivíduos que
trabalham em salas limpas, devem estar cientes de suas responsabilidades em minimizar a liberação de contaminação microbiana.
O pessoal envolvido na identificação microbiana requer treinamento especializado sobre os métodos laboratoriais exigidos. Deve ser
fornecido treinamento adicional sobre o gerenciamento dos dados coletados. O conhecimento e a compreensão dos procedimentos
operacionais padrão aplicáveis são essenciais, especialmente os procedimentos relacionados às medidas corretivas tomadas
quando as condições ambientais exigem.
As únicas fontes significativas de contaminação microbiana em ambientes assépticos são o pessoal. Como os operadores
dispersam a contaminação e o objetivo final do processamento asséptico é reduzir o risco para o usuário final, apenas indivíduos
saudáveis devem ter acesso a ambientes controlados. Indivíduos doentes não devem ser autorizados a entrar em um ambiente de
processamento asséptico, mesmo aquele que emprega tecnologias assépticas avançadas, como isoladores, sopro / enchimento /
vedação ou RABS fechado.
A importância de uma boa higiene pessoal e de uma atenção cuidadosa aos detalhes em roupas assépticas não pode ser
subestimada. Os requisitos de bata diferem dependendo do uso do ambiente controlado e das especificações do próprio sistema de
bata. Ambientes de processamento asséptico requerem o uso de aventais esterilizados com as melhores propriedades de filtração
disponíveis. A maior cobertura possível da pele é desejável, e tampas de manga ou fita adesiva devem ser consideradas para
minimizar vazamentos na junção crítica da luva com a manga. A pele exposta nunca deve ser visível em salas limpas convencionais

sob quaisquer condições. As considerações pessoais e de vestimenta para o RABS são essencialmente idênticas às das salas
limpas convencionais.
Depois que os funcionários estiverem vestidos de maneira adequada, eles devem ter o cuidado de manter a integridade de suas
luvas, máscaras e outros materiais de bata o tempo todo. Os operadores que trabalham com sistemas isoladores não são obrigados
a usar aventais esterilizados de sala limpa, mas a técnica asséptica inadequada e contaminação por funcionários são os principais
riscos para operações assépticas seguras em isoladores, bem como RABS e em salas limpas convencionais. Conjuntos de luva e
manga podem desenvolver vazamentos que podem permitir a transferência mecânica de microrganismos para o produto. Uma
segunda luva, usada sob ou sobre o isolador primário / luva RABS, pode fornecer um nível adicional de segurança contra vazamentos
da luva ou pode atuar como uma medida higiênica.
O programa de monitoramento ambiental, por si só, não consegue detectar todos os eventos no processamento asséptico que
possam comprometer a qualidade microbiológica do meio ambiente. Portanto, estudos periódicos de preenchimento de mídia ou
simulação de processo são necessários, assim como supervisão contínua completa, para garantir que os controles operacionais
apropriados e o treinamento sejam mantidos com eficácia.
FATORES CRÍTICOS NO PROJETO E IMPLEMENTAÇÃO DE UM PROGRAMA DE MONITORAMENTO AMBIENTAL

MICROBIOLÓGICO
Desde o advento de programas abrangentes de monitoramento ambiental, suas aplicações na captura de tendências ou desvios
adversos têm sido enfatizadas. Em um ambiente moderno de processamento asséptico - seja um isolador, RABS ou sala limpa
convencional -a contaminação tornou-se cada vez mais rara. No entanto, um programa de monitoramento deve ser capaz de detectar
uma mudança do estado de controle validado em uma instalação e fornecer informações para a implementação de contramedidas
apropriadas. Um programa de monitoramento ambiental deve ser adaptado às instalações e condições específicas. Também é útil
ter uma perspectiva ampla na interpretação dos dados. Um único resultado não correlacionado em um determinado dia pode não ser
significativo no contexto das limitações técnicas associadas aos métodos de amostragem asséptica.
Seleção de meios de crescimento

Um meio de crescimento microbiológico geral, como o meio de digestão de soja-caseína (SCDM), é adequado para monitoramento
ambiental na maioria dos casos porque suporta o crescimento de uma ampla variedade de bactérias, leveduras e bolores. Este meio
AL
pode ser complementado com aditivos para superar ou minimizar os efeitos dos agentes saneantes ou dos antibióticos. Os
fabricantes devem considerar a detecção específica de leveduras e bolores. Se necessário, podem ser usados meios micológicos
gerais, como Sabouraud's, Sabouraud's modificado ou ágar de bolor inibitório. Em geral, o monitoramento de anaeróbios estritos não
é realizado, porque esses organismos dificilmente sobrevivem no ar ambiente. No entanto, organismos microaerofílicos podem ser
observados no processamento asséptico. Caso existam condições anóxicas ou se as investigações justificarem (por exemplo,Testes
CI
de esterilidade 〈 71 〉 resultados), o monitoramento de microaerófilos e organismos que crescem sob condições de baixo teor de
oxigênio pode ser garantido. A capacidade de qualquer meio usado no monitoramento ambiental, incluindo aqueles selecionados
para recuperar tipos específicos de organismos, deve ser avaliada quanto à sua capacidade de suportar o crescimento, conforme
indicado no 〈 71 〉 .
Seleção das condições de cultura

FI
O tempo e as temperaturas de incubação são definidos uma vez que o meio apropriado tenha sido selecionado. Normalmente,
para meios de crescimento microbiológico geral, como SCDM, temperaturas de incubação na faixa de aproximadamente 20 ° -35 °
foram usadas com um tempo de incubação de não menos de 72 horas. Tempos de incubação mais longos podem ser considerados
O
quando os contaminantes são conhecidos por seu crescimento lento. As faixas de temperatura fornecidas acima não são de forma
alguma absolutas. Bactérias mesófilas e fungos comuns ao ambiente típico de uma instalação geralmente são capazes de crescer
em uma ampla faixa de temperaturas. Para muitos organismos mesófilos, a recuperação é possível em uma faixa de
aproximadamente 20 °. Na ausência de evidências confirmatórias, os microbiologistas podem incubar uma única placa tanto em
temperatura baixa quanto em alta.
Os processos de esterilização para a preparação de meios de crescimento devem ser validados. Quando meios seletivos são
usados para monitoramento, as condições de incubação devem refletir os requisitos técnicos publicados. A contaminação não deve
ser introduzida em uma sala limpa de fabricação como resultado do uso de meios ou equipamentos de amostragem contaminados.
De particular preocupação é o uso de meios de amostragem preparados assepticamente. Sempre que possível, os meios de
amostragem e suas embalagens devem ser esterilizados terminalmente por calor úmido, radiação ou outro meio adequado. Se a
mídia preparada assepticamente deve ser usada, os analistas devem realizar a pré-incubação e inspeção visual de todos os meios de
amostragem antes da introdução na sala limpa. O leitor é referidoPráticas recomendadas de laboratório microbiológico 〈 1117 〉
para obter mais informações sobre as operações e controle do laboratório de microbiologia.
ESTABELECIMENTO DE PLANO DE AMOSTRAGEM E SITES

Durante a inicialização ou comissionamento de uma sala limpa ou outro ambiente controlado, locais específicos para amostragem
de ar e superfície devem ser determinados. Os locais considerados devem incluir aqueles próximos ao produto exposto, recipientes,
tampas e superfícies de contato com o produto. No processamento asséptico, a área em que os recipientes, tampas e produtos são
expostos ao ambiente é muitas vezes chamada de zona crítica -a zona crítica é sempre ISO 5. Para operações assépticas, toda a
zona crítica deve ser tratada como um campo estéril. Um objeto não estéril, incluindo as mãos enluvadas do pessoal da sala limpa
ou uma RABS / luva isoladora, nunca deve ser colocado em contato com um produto estéril, fechamento de recipiente, estação de

enchimento ou equipamento de transporte antes ou durante as operações de processamento asséptico. Os operadores e o pessoal
de monitoramento ambiental nunca devem tocar nas peças esterilizadas de transportadores, agulhas de enchimento, tremonhas de
peças ou qualquer outro equipamento que esteja no caminho de entrega do produto. Isso significa que o monitoramento de
superfície nessas superfícies é melhor feito no final das operações de produção.
A frequência de amostragem depende do processo de fabricação conduzido dentro de um ambiente. Ambientes classificados que
são usados apenas para fornecer um nível geral mais baixo de carga biológica em áreas de fabricação de produtos não estéreis
requerem monitoramento ambiental relativamente raro. Ambientes classificados nos quais operações de fabricação fechadas são
conduzidas, incluindo fermentação, processamento de API estéril e processos químicos, requerem menos locais de monitoramento e
monitoramento menos frequente porque o risco de contaminação microbiana do ambiente circundante é comparativamente baixo. O
monitoramento microbiológico de ambientes nos quais os produtos são envasados antes da esterilização terminal geralmente é
menos crítico do que o monitoramento de áreas de processamento asséptico. A quantidade de monitoramento necessária nas
operações de enchimento para esterilização terminal depende da susceptibilidade de sobrevivência do produto e do potencial de
proliferação de contaminação microbiana. A identificação e o número estimado de microrganismos resistentes à esterilização
subsequente podem ser mais críticos do que o monitoramento microbiológico dos ambientes de fabricação ao redor. A quantidade
de monitoramento necessária nas operações de enchimento para esterilização terminal depende da susceptibilidade de
sobrevivência do produto e do potencial de proliferação de contaminação microbiana. A identificação e o número estimado de
microrganismos resistentes à esterilização subsequente podem ser mais críticos do que o monitoramento microbiológico dos
ambientes de fabricação ao redor. A quantidade de monitoramento necessária nas operações de enchimento para esterilização
terminal depende da susceptibilidade de sobrevivência do produto e do potencial de proliferação de contaminação microbiana. A
identificação e o número estimado de microrganismos resistentes à esterilização subsequente podem ser mais críticos do que o
monitoramento microbiológico dos ambientes de fabricação ao redor.
Não é possível recomendar níveis de controle microbiano para cada tipo de ambiente de fabricação. Os níveis estabelecidos para
um ambiente ISO Classe 7, por exemplo, podem ser inadequados para outro ambiente ISO Classe 7, dependendo das atividades de
produção realizadas em cada um. O usuário deve conduzir uma análise de risco prospectiva e desenvolver uma justificativa para os
locais de amostragem e frequências para cada ambiente controlado. A classificação de uma sala limpa ajuda a estabelecer os níveis
de controle, mas isso não significa que todas as salas da mesma classificação devam ter os mesmos níveis de controle e a mesma
AL
frequência de monitoramento. O monitoramento deve refletir os requisitos de controle microbiológico das atividades de fabricação
ou processamento. As técnicas formais de avaliação de risco podem resultar em um programa de controle de contaminação
cientificamente válido.
mesa 2sugere frequências de amostragem em ordem decrescente de frequência e em relação à criticidade ou risco do produto da
área a ser amostrada. Esta tabela distingue entre o processamento asséptico onde o pessoal está vestido assepticamente e aqueles
onde um traje mais leve é apropriado. Os planos de amostragem de monitoramento ambiental devem ser flexíveis com relação às
CI
frequências de monitoramento e os locais dos planos de amostragem devem ser ajustados com base na taxa observada de
contaminação e na análise de risco contínua. Com base em observações de longo prazo, os fabricantes podem aumentar ou diminuir
a amostragem em um determinado local ou eliminar totalmente um local de amostragem.
Tabela 2. Frequência de amostragem sugerida para áreas de processamento asséptico a

FI
Área / Localização de Amostragem Frequência de Amostragem
Sala Limpa / RABS

O
Zona crítica (ISO 5 ou melhor)
Amostragem de ar ativa Cada turno operacional
Monitoramento de superfície No final da operação
Zona asséptica adjacente à zona crítica
Todas as amostras Cada turno operacional
Outras áreas assépticas não adjacentes
Todas as amostras Uma vez por dia
Isoladores
Zona crítica (ISO 5 ou melhor)
Amostragem de ar ativa Uma vez por dia
Monitoramento de superfície No final da campanha

Área / Localização de Amostragem Frequência de Amostragem
Áreas não-sépticas ao redor do isolador
Todas as amostras Uma vez por mês
a Todos os operadores são protegidos de forma asséptica nesses ambientes (com exceção de ambientes de fundo para
isoladores). Essas recomendações não se aplicam a áreas de produção de produtos não estéreis ou outros ambientes classificados
nos quais aventais totalmente assépticos não sejam usados.
SELEÇÃO DE SITES DE AMOSTRA EM SALAS LIMPAS E ÁREAS DE PROCESSAMENTO ASSÉPTICO

A ISO 14644 sugere uma abordagem de grade para a classificação do ar particulado total de salas limpas. Esta abordagem é
apropriada para certificar o desempenho total da qualidade do ar particulado em relação ao seu objetivo de projeto. As grades
também podem ter valor na análise do risco de contaminação microbiana, embora, em geral, as grades que não têm atividade de
pessoal provavelmente tenham baixo risco de contaminação. A contaminação microbiana está fortemente associada ao pessoal,
portanto, o monitoramento microbiológico de ambientes sem pessoal é de valor limitado.
Os locais de amostragem microbiológica são mais bem selecionados levando em consideração a atividade humana durante as
operações de fabricação. A observação cuidadosa e o mapeamento da sala limpa durante a fase de qualificação podem fornecer
informações úteis sobre a movimentação e o posicionamento do pessoal. Essa observação também pode fornecer informações
importantes sobre as manipulações e intervenções conduzidas com mais frequência.
A localização e o movimento do pessoal dentro da sala limpa se correlacionam com o risco de contaminação ao meio ambiente e
aos processos conduzidos nesse ambiente. Os locais de amostra devem ser selecionados de forma que avaliem o impacto da
movimentação de pessoal e do trabalho dentro da área, particularmente intervenções e manipulações dentro da zona crítica.
A rota mais provável de contaminação é aerotransportada, portanto as amostras mais críticas para a avaliação de risco são
aquelas relacionadas à contaminação aerotransportada perto de materiais estéreis expostos. Outras áreas de preocupação são os
pontos de entrada onde os equipamentos e materiais se movem de áreas de classificação inferior para áreas de classificação
superior. As áreas dentro e ao redor das portas e eclusas de ar devem ser incluídas no esquema de monitoramento. É comum
AL
amostrar paredes e pisos e, de fato, a amostragem nesses locais pode fornecer informações sobre a eficácia do programa de
sanitização. A amostragem nesses locais pode ocorrer com pouca frequência, porque é improvável que a contaminação afete o
produto.
Os fabricantes normalmente monitoram as superfícies dentro da zona crítica, embora isso deva ser feito apenas no final das
operações. Resíduos de meio ou diluente de esfregaços úmidos devem ser evitados nas superfícies, pois podem levar à proliferação
CI
microbiana. Além disso, a limpeza de superfícies para remover diluente ou meio requer intervenção pessoal e movimentos que
podem resultar na liberação de contaminação microbiana na zona crítica e pode interromper o fluxo de ar.
PARÂMETROS DE CONTROLE MICROBIOLÓGICO EM SALAS LIMPAS, ISOLADORES E RABS

Desde o início da década de 1980, os fabricantes estabeleceram níveis de alerta e ação para monitoramento ambiental. Nos
FI
últimos anos, a diferença numérica entre os níveis de alerta e ação tornou-se muito pequena, especialmente em ambientes ISO 5. O
crescimento e a recuperação em ensaios microbiológicos têm variabilidade normal na faixa de ± 0,5 log . Estudos em
10
amostradores de ar microbiológicos ativos indicam que uma variabilidade de até dez vezes é possível entre os dispositivos de
amostragem comumente usados. Como resultado desta variabilidade inerente e erro de amostragem indeterminado, as supostas
O
diferenças entre, por exemplo, um nível de alerta de 1 cfu e um nível de ação de 3 cfu não são analiticamente significativas. Tratar
diferenças que estão dentro do esperado e, portanto, intervalos normais como numericamente diferentes, não é cientificamente
válido e pode resultar em atividades injustificadas. Em um sentido prático, os valores numéricos que variam de cinco a dez vezes
podem não ser significativamente diferentes.
Devido à exatidão e precisão limitadas do crescimento microbiano e dos ensaios de recuperação, os analistas podem considerar a
frequência com que a contaminação é detectada, em vez de números absolutos de cfu detectados em uma única amostra. Além
disso, uma cfu não é uma enumeração direta dos microrganismos presentes, mas sim uma medida de contaminação que pode ter se
originado de um aglomerado de organismos.
As taxas médias de recuperação de contaminação devem ser determinadas para cada ambiente de sala limpa, e as mudanças na
taxa de recuperação de contaminação em um determinado local ou sala podem indicar a necessidade de ação corretiva. Dentro da
zona crítica ISO 5, taxas de recuperação de contaminação do ar e da superfície de 1% ou menos devem ser atingidas com os
métodos atuais. As taxas de recuperação de contaminação para RABS fechados e sistemas isoladores devem ser significativamente
mais baixas ainda e pode-se esperar que sejam <0,1%, com base nos resultados de monitoramento publicados.
A contaminação observada em vários locais em um ambiente dentro de um único período de amostragem pode indicar risco
aumentado para o produto e deve ser avaliada cuidadosamente. O aparecimento de contaminação quase simultaneamente em
vários locais também pode surgir de uma técnica de amostragem inadequada, portanto, é necessária uma revisão cuidadosa antes
de tirar conclusões sobre a perda potencial de controle. A reamostragem de um ambiente vários dias após a contaminação é de
pouco valor, porque as condições durante uma ocasião de amostragem podem não ser duplicadas com precisão durante outra.
Amostras de superfície também podem ser retiradas de roupas de sala limpa. A amostragem de pessoal deve ser enfatizada
durante a validação e é melhor realizada na conclusão do trabalho de produção, a fim de evitar contaminação acidental das roupas.

Nesse caso, a média também deve ser <1% para esses sites de amostra. Luvas em RABS e isoladores fechados devem atender à
expectativa mais rigorosa de taxas de recuperação de contaminação <0,1%.
Devido à variabilidade inerente dos métodos de amostragem microbiana, as taxas de recuperação de contaminação são uma
medida mais útil dos resultados de tendências do que o foco no número de colônias recuperadas de uma determinada amostra.
Tabela 3fornece taxas de recuperação de contaminação recomendadas para ambientes de processamento asséptico. A taxa de
incidentes é a taxa na qual as amostras ambientais contêm contaminação microbiana. Por exemplo, uma taxa de incidentes de 1%
significaria que apenas 1% das amostras coletadas têm qualquer contaminação, independentemente do número da colônia. Ou seja,
99% das amostras colhidas estão totalmente isentas de contaminação. Taxas de recuperação de contaminação que são maiores do
que as recomendadas na Tabela 3pode ser aceitável em salas de classificação semelhante que são usadas para atividades de baixo
risco. A ação deve ser necessária quando a taxa de recuperação de contaminação tender acima dessas recomendações por um
período significativo.
Tabela 3. Taxas de recuperação de contaminação inicial sugeridas em ambientes assépticos a
Placa de assenta-
Amostra de ar ativo mento (9 cm) Placa de contato ou Luva ou vestimenta
Classificação da sala (%) Exposição 4 h (%) cotonete (%) (%)
Isolador / RABS
fechado (ISO 5 ou
melhor) <0,1 <0,1 <0,1 <0,1
ISO 5 <1 <1 <1 <1
ISO 6 <3 <3 <3 <3
ISO 7 <5 <5 <5 <5
ISO 8 <10
AL <10 <10 <10
a Todos os operadores são protegidos de forma asséptica nesses ambientes (com exceção de ambientes de fundo para
isoladores). Essas recomendações não se aplicam a áreas de produção de produtos não estéreis ou outros ambientes classificados
nos quais aventais totalmente assépticos não sejam usados.
CI
A frequência de detecção deve ser baseada em dados reais de monitoramento e deve ser retabulada mensalmente. Os níveis de
ação devem ser baseados na capacidade empírica do processo. Se as frequências de detecção excederem as recomendações na
Tabela 3 ou forem maiores do que a capacidade do processo estabelecida, ações corretivas devem ser tomadas. As ações corretivas
podem incluir, mas não estão limitadas ao seguinte:
FI
Revisão do programa de sanitização, incluindo seleção de agentes antimicrobianos, métodos de aplicação e frequências
Maior vigilância das práticas de pessoal, possivelmente incluindo críticas escritas de métodos e técnicas assépticas
Revisão dos métodos e técnicas de amostragem microbiológica
Quando níveis de recuperação acima do normal para contaminação de luvas e vestimentas são observados, um treinamento
O
adicional para práticas de vestimenta pode ser indicado.
EXCURSÕES SIGNIFICATIVAS
Excursões além de aproximadamente 15 cfu recuperadas de uma única amostra ISO 5, seja de fontes aéreas, de superfície ou de
pessoal, devem acontecer com pouca frequência. Quando essas excursões ISO 5 ocorrem, elas podem ser indicativas de uma perda
significativa de controle quando ocorrem dentro da zona crítica ISO 5 nas proximidades do produto e componentes. Portanto,
qualquer excursão ISO 5> 15 cfu deve levar a uma investigação cuidadosa e completa.
Uma consideração importante para um número anormalmente alto de colônias recuperadas é se esse incidente está isolado ou
pode ser correlacionado com outras recuperações. Os microbiologistas devem revisar as taxas de recuperação por pelo menos duas
semanas antes do incidente de recuperação anormalmente alta, para que possam estar cientes de outras recuperações que possam
indicar um padrão incomum. Os microbiologistas devem considerar cuidadosamente todas as recuperações, incluindo aquelas que
estão na faixa mais típica de 1–5 ufc. A identidade dos organismos recuperados é um fator importante na condução desta
investigação.
No caso de uma única excursão isolada, provavelmente não será possível estabelecer uma causa definitiva, e apenas medidas
corretivas gerais podem ser consideradas. Nunca é aconselhável sugerir uma causa raiz para a qual não haja evidências científicas
sólidas. Além disso, deve haver consciência da variabilidade da análise microbiana. Realisticamente, não há razão científica para
tratar uma recuperação de 25 cfu como estatisticamente diferente de uma recuperação de 15 cfu. Um valor de 15 cfu não deve ser
considerado significativo em termos de controle de processo, porque realisticamente não há diferença entre uma recuperação de 14
cfu e uma de 15 cfu.
OUTRAS CONSIDERAÇÕES SOBRE A INTERPRETAÇÃO DE DADOS

Nos ambientes de alta qualidade necessários para o processamento asséptico, a frequência de detecção normalmente é baixa.
Como pode ser visto a partir das taxas recomendadas na Tabela 3 , a maioria das amostras colhidas em uma área de processamento
asséptico renderá uma recuperação de contaminação zero. Nas áreas mais críticas de uma operação de processamento asséptico,
espera-se que menos de 1% das amostras produzam qualquer contaminação recuperável. Nas mais avançadas operações
assépticas modernas que usam tecnologias separativas, como isoladores ou RABS fechados, a taxa de recuperação se aproximará
de zero em todos os momentos.
O microbiologista responsável pelo controle ambiental ou garantia de esterilidade não deve interpretar isso como significando que
a qualidade ambiental se aproxima da esterilidade. A sensibilidade de qualquer sistema de amostragem microbiana em termos
absolutos não é conhecida. No monitoramento ambiental, um resultado zero significa apenas que o resultado está abaixo do limite
de detecção do sistema analítico. Uma falsa sensação de segurança não deve ser derivada da infrequência de recuperação de
contaminação no processamento asséptico.
A garantia de esterilidade é melhor alcançada por um foco na contaminação de origem humana e nas características do projeto da
instalação que melhor mitigam o risco dessa contaminação. A maior mitigação de risco pode ser alcançada reduzindo ou eliminando
intervenções humanas por meio de um projeto de equipamento adequado e fornecendo trocas de ar suficientes por hora para a
população de pessoal pretendida da instalação. Outros fatores de mitigação de risco incluem pessoal eficaz e movimentação de
materiais e o controle adequado de temperatura e umidade. Os fatores secundários para mitigação de risco incluem limpeza e
sanitização. Os modelos de análise de risco que analisam os processos prospectivamente para reduzir o risco de contaminação de
origem humana, minimizando as intervenções do operador, são ferramentas mais poderosas para garantir a esterilidade do que o
monitoramento. O monitoramento ambiental não pode provar ou refutar em termos absolutos a esterilidade de um lote de produto. O
monitoramento ambiental só pode garantir aos responsáveis por um processo que um sistema de produção está em um estado de
controle consistente e validado. Deve-se ter cuidado para evitar tirar conclusões inadequadas dos resultados do monitoramento. O
monitoramento ambiental não pode provar ou refutar em termos absolutos a esterilidade de um lote de produto. O monitoramento
ambiental só pode garantir aos responsáveis por um processo que um sistema de produção está em um estado de controle
consistente e validado. Deve-se ter cuidado para evitar tirar conclusões inadequadas dos resultados do monitoramento. O
monitoramento ambiental não pode provar ou refutar em termos absolutos a esterilidade de um lote de produto. O monitoramento
ambiental só pode garantir aos responsáveis por um processo que um sistema de produção está em um estado de controle
AL
consistente e validado. Deve-se ter cuidado para evitar tirar conclusões inadequadas dos resultados do monitoramento.
AMOSTRAGEM DE MICRORGANISMOS DE TRANSPORTE AÉREO

Entre as ferramentas mais comumente usadas para monitorar ambientes assépticos estão impactação e amostradores
centrífugos. Uma série de amostradores disponíveis comercialmente são listados para fins informativos. A seleção, adequação e
adequação do uso de qualquer amostrador específico são de responsabilidade do usuário.
CI
Amostrador de ar com fenda para ágar (STA)

A unidade é alimentada por uma fonte conectada de vácuo controlável. A entrada de ar é obtida através de uma fenda padronizada
abaixo da qual é colocada uma placa de Petri girando lentamente que contém um ágar nutriente. Partículas transportadas pelo ar
que têm massa suficiente impactam a superfície do ágar e organismos viáveis podem crescer. Uma entrada de ar remota é
FI
freqüentemente usada para minimizar a perturbação do fluxo de ar unidirecional.
Impactor de peneira
Este aparelho consiste em um recipiente projetado para acomodar uma placa de Petri que contém um ágar nutriente. A tampa da
O
unidade é perfurada com aberturas de tamanho predeterminado. Uma bomba de vácuo puxa um volume conhecido de ar através da
tampa e as partículas transportadas pelo ar que contêm microorganismos impactam o meio de ágar na placa de Petri. Alguns
amostradores apresentam uma série de peneiras em cascata que contêm perfurações de tamanho decrescente. Essas unidades
permitem a determinação da distribuição da faixa de tamanho de partículas que contêm microrganismos viáveis com base no
tamanho das perfurações através das quais as partículas pousaram nas placas de ágar.
Amostrador centrífugo
A unidade consiste em uma hélice ou turbina que puxa um volume conhecido de ar para dentro da unidade e, em seguida,
impulsiona o ar para fora para impactar em uma tira de ágar nutriente colocada tangencialmente sobre uma base de plástico flexível.
Átrio Microbiológico Esterilizável

A unidade é uma variante do impactor de peneira de estágio único. A tampa da unidade contém orifícios uniformemente
espaçados com aproximadamente 0,25 polegada de tamanho. A base da unidade acomoda uma placa de Petri contendo um ágar
nutriente. Uma bomba de vácuo controla o movimento do ar através da unidade, e um centro de controle de várias unidades, bem
como uma sonda de amostragem remota estão disponíveis.
Amostrador de sistema de ar de superfície

Esta unidade integrada consiste em uma seção de entrada que acomoda uma placa de contato de ágar. Imediatamente atrás da
placa de contato está um motor e uma turbina que puxa o ar através da tampa perfurada da unidade sobre a placa de contato de
ágar e além do motor, onde é exaurido. Vários conjuntos montados também estão disponíveis.
Amostrador de filtro de gelatina
https://online.uspnf.com/uspnf/document/1_GUID-B9A1739F-E171-4E11-A0C7-E43A318EA17F_1_en-US?source=Search Results&highlight=… 10/15

A unidade consiste em uma bomba de vácuo com uma mangueira de extensão que termina em um suporte de filtro que pode ser
localizado remotamente no espaço crítico. O filtro consiste em fibras aleatórias de gelatina capazes de reter microorganismos
transportados pelo ar. Após um tempo de exposição especificado, o filtro é removido assepticamente e dissolvido em um diluente
apropriado e então semeado em um meio de ágar apropriado para estimar seu conteúdo microbiano.
Placas de sedimentação
Este método ainda é amplamente utilizado como uma forma simples e econômica de avaliar qualitativamente os ambientes em
tempos de exposição prolongados. Os dados publicados indicam que as placas de decantação, quando expostas por períodos de 4 a
5 horas, podem fornecer um limite de detecção para uma avaliação adequada do ambiente asséptico. As placas de sedimentação
podem ser particularmente úteis em áreas críticas onde a amostragem ativa pode ser intrusiva e um perigo para a operação
asséptica.
Uma das principais desvantagens dos amostradores de ar mecânicos é o tamanho limitado da amostra de ar que está sendo
testada. Quando se espera que o nível microbiano no ar de um ambiente controlado contenha níveis extremamente baixos de
contaminação por unidade de volume, pelo menos 1 metro cúbico de ar deve ser testado para maximizar a sensibilidade.
Normalmente, os dispositivos de corte para ágar têm uma capacidade de amostragem de 80 L / min (a capacidade do sistema de ar
de superfície é um pouco maior). Se 1 metro cúbico de ar fosse testado, seria necessário um tempo de exposição de 15 minutos.
Pode ser necessário usar tempos de amostragem superiores a 15 minutos para obter uma amostra ambiental representativa.
Os técnicos podem desejar usar sistemas de amostragem remota, a fim de minimizar os riscos potenciais resultantes da
intervenção de amostradores ambientais em zonas críticas. Independentemente do tipo de amostrador usado, os analistas devem
determinar que a tubulação extra necessária para uma sonda remota não reduz a sensibilidade do método a tal ponto que a
detecção de baixos níveis de contaminação se torna improvável ou mesmo impossível.
AMOSTRAGEM DE SUPERFÍCIE
Outro componente do programa de controle microbiano em ambientes controlados é a amostragem de superfície de
equipamentos, instalações e pessoal. A padronização de métodos e procedimentos de amostragem de superfície não tem sido tão
amplamente abordada na indústria farmacêutica como a padronização de procedimentos de amostragem de ar. A amostragem da
superfície pode ser realizada pelo uso de placas de contato ou pelo método de esfregaço.
AL
Placas de contato preenchidas com ágar nutriente são usadas para amostragem de superfícies regulares ou planas e são
incubadas diretamente pelo tempo e temperatura apropriados para a recuperação de organismos viáveis. O ágar especializado pode
ser usado para a recuperação de organismos que têm necessidades específicas de crescimento. As estimativas microbianas são
relatadas por placa de contato.
O método de esfregaço pode ser usado para complementar as placas de contato para amostragem de superfícies irregulares,
CI
especialmente superfícies irregulares do equipamento. A área que será esfregada é definida com um gabarito estéril de tamanho
apropriado. Em geral, está na faixa de 24-30 cm 2 . Após a coleta da amostra, a zaragatoa é colocada em um diluente ou meio de
transporte apropriado e é semeada no ágar nutriente desejado. As estimativas microbianas são relatadas por cotonete de área de
amostragem definida.
O monitoramento de superfície é usado como uma ferramenta de avaliação ambiental em todos os tipos de ambientes
FI
classificados. Em ambientes ISO 5 para processamento asséptico, o monitoramento de superfície geralmente é realizado ao lado de
áreas e superfícies críticas. Funis de componentes e rampas de alimentação que entram em contato com superfícies estéreis em
tampas e agulhas de enchimento podem ser testados para contaminação microbiana. Freqüentemente, em salas limpas
convencionais, essas superfícies de contato com o produto são esterilizadas a vapor e montadas assepticamente. A capacidade dos
O
operadores de realizar essas manipulações assépticas é avaliada durante os estímulos do processo ou preenchimento da mídia,
embora a verdadeira validação da técnica do operador dessa maneira não seja possível. O monitoramento de superfície em
superfícies que entram em contato direto com peças ou produtos estéreis deve ser feito somente após a conclusão das operações
de produção. A amostragem da superfície não é um teste de esterilidade e não deve ser um critério para a liberação ou rejeição do
produto. Como essas amostras devem ser coletadas assepticamente pelo pessoal, é difícil estabelecer com certeza se qualquer
contaminação recuperada está relacionada ao produto.
MEIOS DE CULTURA E DILUENTES

O tipo de meio, líquido ou sólido, utilizado para amostragem ou plaqueamento de microrganismos depende do procedimento e do
equipamento utilizado. Qualquer meio usado deve ser avaliado quanto à adequação ao propósito pretendido. O meio de crescimento
microbiológico sólido para todos os fins mais comumente usado é o ágar de digestão de soja-caseína. Como observado
anteriormente, este meio pode ser suplementado com produtos químicos que neutralizam o efeito de vários antimicrobianos.
IDENTIFICAÇÃO DE ISOLADOS MICROBIAIS

Um programa de controle ambiental bem-sucedido inclui um nível apropriado de identificação da flora obtida por amostragem. O
conhecimento da flora em ambientes controlados auxilia na determinação da flora microbiana usual prevista para a instalação e na
avaliação da eficácia dos procedimentos de limpeza e higienização, métodos, agentes e métodos de recuperação. As informações
coletadas por um programa de identificação podem ser úteis na investigação da fonte de contaminação, especialmente quando as
frequências de detecção recomendadas são excedidas.
A identificação de isolados de áreas críticas e imediatamente adjacentes deve ter precedência sobre a identificação de
microrganismos de áreas não críticas. Os métodos de identificação devem ser verificados e os kits prontos para uso devem ser

qualificados para a finalidade pretendida.
CONCLUSÃO
O monitoramento ambiental é um dos vários elementos-chave necessários para garantir que uma área de processamento
asséptico seja mantida em um nível adequado de controle. O monitoramento é um exercício qualitativo e, mesmo nas aplicações
mais críticas, como o processamento asséptico, as conclusões sobre a aceitabilidade do lote não devem ser feitas apenas com base
nos resultados da amostragem ambiental. Ambientes que são essencialmente livres de operadores humanos geralmente têm baixas
taxas de contaminação inicial e mantêm baixos níveis de contaminação microbiana. Os quartos limpos em escala humana
apresentam uma imagem muito diferente. Estudos mostram de forma conclusiva que os operadores, mesmo quando cuidadosa e
corretamente vestidos, continuamente despejando microorganismos no meio ambiente. Portanto, não é razoável supor que
amostras que não produzam colônias, mesmo na zona crítica ou em superfícies críticas, serão sempre observadas. As excursões
periódicas são um fato da vida em salas limpas em escala humana, mas a taxa de recuperação de contaminação, particularmente
em ambientes ISO 5 usados para processamento asséptico, deve ser consistentemente baixa.
Os operadores de sala limpa, especialmente aqueles envolvidos no processamento asséptico, devem se esforçar para manter a
qualidade ambiental adequada e devem trabalhar para a melhoria contínua das operações de pessoal e controle ambiental. Em geral,
menos pessoal envolvido no processamento e monitoramento asséptico, junto com a redução nas intervenções, reduz o risco de
contaminação microbiana.
GLOSSÁRIO
Contagem de partículas transportadas pelo ar (também referida como contagem total de partículas ):
O número total de partículas de um determinado tamanho por unidade de volume de ar.
Contagem de partículas viáveis aerotransportadas (também referida como contagem microbiana aeróbia aeróbia total ):
O número recuperado de unidades formadoras de colônias (cfu) por unidade de volume de ar.
Mudanças de ar:
A frequência por unidade de tempo (minutos, horas, etc.) com que o ar em um ambiente controlado é substituído. O ar pode ser
AL
recirculado parcial ou totalmente substituído.
Amostrador de ar:
Dispositivos ou equipamentos usados para amostrar uma quantidade medida de ar em um tempo especificado para quantificar o
estado particulado ou microbiológico do ar no ambiente controlado.
CI
Asséptico:
Tecnicamente, a ausência de microrganismos, mas no processamento asséptico, refere-se a métodos e operações que minimizam a
contaminação microbiana em ambientes onde produtos e componentes esterilizados são envasados e / ou montados.
FI
Processamento Asséptico:
Uma operação em que o produto é montado ou embalado em sua embalagem primária em um ambiente ISO 5 ou melhor e sob
condições que minimizam o risco de contaminação microbiana. O objetivo final é produzir produtos o mais isentos possível de
contaminação microbiana.
O
Sistema de barreira:
Barreiras físicas instaladas dentro de uma sala de processamento asséptico para fornecer separação parcial entre o pessoal com
avental asséptico e as áreas críticas sujeitas a um risco considerável de contaminação. O acesso do pessoal à zona crítica é
amplamente irrestrito. Está sujeito a uma desinfecção de alto nível.
Bioburden:
Número total e identidade dos microrganismos predominantes detectados em ou sobre um artigo.
Quarto limpo:
Uma sala na qual a concentração de partículas transportadas pelo ar é controlada para atender a uma Classe de limpeza de
partículas transportadas pelo ar especificada. Além disso, a concentração de microrganismos no ambiente é monitorada; a cada
classe de limpeza definida também é atribuído um nível microbiano para ar, superfície e equipamento pessoal.
Comissionamento de um Ambiente Controlado:

Certificação pela engenharia e controle de qualidade de que o ambiente foi construído de acordo com as especificações da Classe
de limpeza desejada e que, em condições prováveis de serem encontradas em condições normais de operação (ou condições de pior
caso), é capaz de fornecer um processo asséptico . O comissionamento inclui execuções de preenchimento de mídia e resultados do
programa de monitoramento ambiental.
Taxa de recuperação de contaminação:

A taxa de recuperação de contaminação é a taxa na qual as amostras ambientais contêm qualquer nível de contaminação. Por
exemplo, uma taxa de incidentes de 1% significaria que apenas 1% das amostras coletadas têm qualquer contaminação,
independentemente do número da colônia.
Ambiente Controlado:
Qualquer área em um sistema de processo asséptico para a qual os níveis de partículas e microorganismos transportados pelo ar
são controlados em níveis específicos, apropriados para as atividades conduzidas naquele ambiente.
Ação corretiva:
Ações a serem realizadas de acordo com os procedimentos operacionais padrão e que são acionadas quando certas condições são
excedidas.
Zona Crítica:
Normalmente, toda a área onde o produto e os recipientes e tampas são expostos no processamento asséptico.
Freqüência de detecção:
A frequência com que a contaminação é observada em um ambiente. Normalmente expresso como uma porcentagem de amostras
nas quais a contaminação é observada por unidade de tempo.
Isolados ambientais:
Microrganismos que foram isolados do programa de monitoramento ambiental.
Programa de Monitoramento Ambiental:

Programa documentado implementado por meio de procedimentos operacionais padrão que descrevem em detalhes os métodos e
critérios de aceitação para monitorar partículas e microorganismos em ambientes controlados (ar, superfície, equipamento pessoal). O
programa inclui locais de amostragem, frequência de amostragem e ações investigativas e corretivas.
AL
Layout do equipamento:
Representação gráfica de um sistema de processamento asséptico que denota a relação entre o equipamento e o pessoal. Este
layout é usado na Análise de Avaliação de Risco para determinar o local de amostragem e a frequência de amostragem com base no
potencial de contaminação microbiológica do produto / recipiente / sistema de fechamento. As mudanças devem ser avaliadas pelos
gestores responsáveis, uma vez que mudanças não autorizadas no layout dos equipamentos ou estações de pessoal podem resultar
CI
no aumento do potencial de contaminação do produto / recipiente / sistema de fechamento.
Isolador para processamento asséptico:

Um isolador asséptico é um invólucro superpressurizado com ar filtrado HEPA e descontaminado usando um sistema automatizado.
Quando operado como um sistema fechado, ele usa apenas interfaces descontaminadas ou portas de transferência rápida (RTPs) para
FI
transferência de materiais. Após a descontaminação, eles podem ser operados de forma aberta com a entrada e / ou saída de
materiais por meio de aberturas definidas que foram projetadas e validadas para impedir a transferência de contaminação. Pode ser
usado para atividades de processamento asséptico ou para assepsia e contenção simultaneamente.
O
Fluxo de Material:
O fluxo de material e pessoal que entra em ambientes controlados deve seguir um caminho especificado e documentado que foi
escolhido para reduzir ou minimizar o potencial de contaminação microbiana do produto / sistema de fechamento / recipiente. O
desvio do fluxo prescrito pode resultar no aumento do potencial de contaminação microbiana. O fluxo de material / pessoal pode ser
alterado, mas as consequências das alterações do ponto de vista microbiológico devem ser avaliadas pelos gerentes responsáveis e
devem ser autorizadas e documentadas.
Preenchimento de mídia:
Simulação microbiológica de um processo asséptico pelo uso de meio de cultura processado de forma semelhante ao
processamento do produto e com o mesmo sistema de recipiente / tampa sendo utilizado.
Promoção de crescimento da mídia:

Procedimento que faz referência ao Teste de Promoção de Crescimento de Aeróbios, Aneróbios e Fungos em Testes de Esterilidade 〈
71 〉 para demonstrar que a mídia usada no programa de monitoramento ambiental microbiológico, ou em execuções de
preenchimento de mídia , são capazes de suportar o crescimento de microrganismos indicadores e de isolados ambientais de amostras
obtidas por meio do programa de monitoramento ou de suas cepas ATCC correspondentes.
Áreas de contato do produto:

Áreas e superfícies em um ambiente controlado que estão em contato direto com produtos, recipientes ou tampas e cujo estado
microbiológico pode resultar em contaminação microbiana potencial do produto / recipiente / sistema de tampa.

Sistema de Barreira de Acesso Restrito (RABS):

Um gabinete que depende do derramamento de ar filtrado HEPA para manter a separação entre o pessoal com avental asséptico e o
ambiente operacional. Ele está sujeito a um alto nível de desinfecção antes do uso em processo asséptico. Ele usa interfaces
descontaminadas (quando necessário) ou RTPs para transferência de materiais. Ele permite a entrada e / ou saída de materiais por
meio de aberturas definidas que foram projetadas e validadas para impedir a transferência de contaminação. Se aberto após a
descontaminação, sua capacidade de desempenho é prejudicada.
Análise de avaliação de risco:

Análise da identificação de potenciais de contaminação em ambientes controlados que estabelecem prioridades em termos de
gravidade e frequência e que irão desenvolver métodos e procedimentos que irão eliminar, reduzir, minimizar ou mitigar seu potencial
de contaminação microbiana do produto / recipiente / sistema de fechamento.
Plano de amostragem:
Um plano documentado que descreve os procedimentos e métodos para amostragem de um ambiente controlado; identifica os
locais de amostragem, a frequência de amostragem e o número de amostras; e descreve o método de análise e como interpretar os
resultados.
Locais de amostragem:
Localização geográfica documentada, em ambiente controlado, onde é feita a amostragem para avaliação microbiológica. Em geral,
os locais de amostragem são selecionados devido ao seu potencial para contatos de produto / fechamento de contêiner.
Procedimentos operacionais padrão:

Procedimentos escritos que descrevem operações, testes, amostragem, interpretação de resultados e ações corretivas relacionadas
às operações que estão ocorrendo em um ambiente controlado e em ambientes auxiliares. Desvios dos procedimentos operacionais
padrão devem ser observados e aprovados pelos gerentes responsáveis.
Campo estéril ou asséptico:

AL
No processamento asséptico ou em outros ambientes controlados, é o espaço no nível ou acima dos recipientes abertos do produto,
tampas ou do próprio produto, onde o potencial de contaminação microbiana é mais alto.
Esterilidade:
Dentro da definição mais estrita de esterilidade, um artigo é considerado estéril quando há ausência completa de microrganismos
CI
viáveis. Viável , para organismos, é definido como tendo a capacidade de se reproduzir. A esterilidade absoluta não pode ser
demonstrada na prática porque é tecnicamente inviável provar um absoluto negativo. Além disso, a esterilidade absoluta não pode ser
demonstrada de forma prática sem testar cada artigo em um lote. A esterilidade é definida em termos probabilísticos, onde a
probabilidade de um artigo contaminado é aceitavelmente remota.
FI
Cotonetes para Amostragem Microbiológica:

Dispositivos usados para remover microorganismos de superfícies irregulares ou regulares para cultivo para identificar a população
microbiana da superfície. Um cotonete é geralmente composto de um pedaço de pau com uma ponta absorvente que é umedecido
antes da amostragem e esfregado em uma área específica da superfície da amostra. A zaragatoa é então lavada com uma solução
O
estéril para suspender os microrganismos e a solução é transferida para meio de crescimento para cultivo da população microbiana.
Análise de tendências:
Dados de um programa de monitoramento ambiental microbiano de rotina que podem estar relacionados ao horário, turno,
instalação, etc. Essas informações são avaliadas periodicamente para estabelecer o status ou padrão desse programa para verificar se
ele está sob controle adequado. Uma análise de tendências é usada para facilitar a tomada de decisão para a requalificação de um
ambiente controlado ou para cronogramas de manutenção e higienização.
APÊNDICE
Recursos adicionais
Agalloco J, Akers J. Análise de risco para processamento asséptico: o método Akers-Agalloco. Pharm Technol. 2005; 29 (11): 74–
88.
Agalloco J, Akers J. O método simplificado de Akers-Agalloco para análise de risco de processamento asséptico. Pharm Technol.
2006; 31 (7) 60–72.
Akers, J. O papel adequado do monitoramento ambiental no processamento asséptico. Am Pharm Rev. 2006; 9 (4): 24–28.
CDC, Comitê Consultivo de Controle de Infecção em Saúde. Diretrizes para controle ambiental em estabelecimentos de saúde.
MMWR 2003; 52 (No. RR-10): 1–42.
Favero MS, Puleo JR, Marshall JH, Oxborrow GS. Amostragem microbiológica de superfícies. J Appl Bacteriol. 1968; 31: 336–346.

Hussong D, Madsen R. Análise de dados de microbiologia ambiental de amostras de sala limpa. Pharm Technol. 2004; Suplemento
de processamento asséptico: 10-15.
Organização Internacional de Normalização (ISO). 14644-1, Salas limpas e ambientes associados, parte 1: classificação da
limpeza do ar. Genebra: ISO; 1999.
Organização Internacional de Normalização (ISO). 14644-2, Salas limpas e ambientes associados, parte 2: especificações para
teste e monitoramento para provar a conformidade contínua com 14644 parte 1. Genebra: ISO; 2000.
Jensen PA, Todd WF, Davis GN, Scarpino PV. Avaliação de oito amostradores de bioaerossol desafiados com aerossol de bactérias
livres. Am Ind Hyg Assoc J. 1992; 53: 660–667.
Ljungqvist B. Amostragem ativa de partículas viáveis no ar em ambientes controlados: um estudo comparativo de instrumentos
comuns. Eur J Parenter Sci. 1998; 3: 59–62.
Ljungqvist B, Reinmüller B. Interação entre movimentos de ar e a dispersão de contaminantes: zonas limpas com fluxo de ar
unidirecional. J Parenter Sci Technol. 1993; 47 (2): 60–69.
Ljungqvist B, Reinmüller B. Partículas viáveis aerotransportadas e número total de partículas aerotransportadas: estudos
comparativos de amostragem de ar ativo. PDA J Sci Technol. 2000; 54: 112–116.
Maruyama M, Matsuoka T, Deguchi M, Akers J. A aplicação da robótica ao monitoramento de superfície asséptica. Pharm Technol .
2007; 32 (7): 40–44.
Teste de simulação de processo para produtos químicos farmacêuticos estéreis a granel. PDA Technical Report No. 28. J Parenter
Sci Technol. 1998; 52 S3.
Reinmüller B. Dispersão e avaliação de risco de contaminantes transportados pelo ar em salas limpas farmacêuticas. Edifício Serv
Eng Bull (Suécia). 2001; Boletim No. 56.
Stewart SL, Grinshpun SA, Willeke K., Terzieva S, Ulevicius V, Donnelly J. Effect of impact stress on microbial recovery on a agar
surface. Appl Environ Micro. 1995; 61: 1232–1239.
Whyte W. Redução da dispersão microbiana pela roupa. J Parenter Sci Technol. 1985; 39 (1): 51–60.
Informações auxiliares - Por favor verifique se a sua pergunta nos FAQs antes de contactar USP.
Tópico / Questão
AL Contato Comitê de Especialistas
< 1116 > AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA Radhakrishna S Tirumalai Capítulos Gerais GCM2020 - Microbiolo-
DE SALAS LIMPAS E OUTROS AMBI- Principal contato científico gia 2020
ENTES CONTROLADOS
CI
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10/06/2021 USP-NF 〈1116〉 Microbiological Control and Monitoring of Aseptic Processing Environments

Printed on: Thu Jun 10 2021, 11:09:02 am

〈 1116 〉 CONTROLE MICROBIOLÓGICO E MONITORAMENTO DE

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TECNOLOGIAS ASSÉPTICAS AVANÇADAS

CLASSIFICAÇÃO DE SALA LIMPA PARA AMBIENTES DE PROCESSAMENTO ASSÉPTICO

5–8 são normalmente usados.

Tabela 1. Classes de Limpeza de Partículas Totais Aerotransportadas a

ISO Classe b Partículas ≥0,5 µm / m 3

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IMPORTÂNCIA DE UM PROGRAMA DE AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA PARA AMBIENTES CONTROLADOS

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tendências de contaminação em um ambiente asséptico há muito é um componente do programa de controle ambiental. Em

mudanças na temperatura ambiente e umidade relativa; e o status de treinamento do pessoal.

AVALIAÇÃO FÍSICA DA EFICÁCIA DO CONTROLE DE CONTAMINAÇÃO

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FATORES CRÍTICOS NO PROJETO E IMPLEMENTAÇÃO DE UM PROGRAMA DE MONITORAMENTO AMBIENTAL

Seleção de meios de crescimento

Seleção das condições de cultura

ESTABELECIMENTO DE PLANO DE AMOSTRAGEM E SITES

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Tabela 2. Frequência de amostragem sugerida para áreas de processamento asséptico a

Área / Localização de Amostragem Frequência de Amostragem

Sala Limpa / RABS

Zona crítica (ISO 5 ou melhor)

Amostragem de ar ativa Cada turno operacional

Monitoramento de superfície No final da operação

Zona asséptica adjacente à zona crítica

Todas as amostras Cada turno operacional

Outras áreas assépticas não adjacentes

Todas as amostras Uma vez por dia

Zona crítica (ISO 5 ou melhor)

Amostragem de ar ativa Uma vez por dia

Monitoramento de superfície No final da campanha

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Área / Localização de Amostragem Frequência de Amostragem

Áreas não-sépticas ao redor do isolador

Todas as amostras Uma vez por mês

SELEÇÃO DE SITES DE AMOSTRA EM SALAS LIMPAS E ÁREAS DE PROCESSAMENTO ASSÉPTICO

PARÂMETROS DE CONTROLE MICROBIOLÓGICO EM SALAS LIMPAS, ISOLADORES E RABS

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Tabela 3. Taxas de recuperação de contaminação inicial sugeridas em ambientes assépticos a

ISO 5 <1 <1 <1 <1

ISO 6 <3 <3 <3 <3

ISO 7 <5 <5 <5 <5

adicional para práticas de vestimenta pode ser indicado.

OUTRAS CONSIDERAÇÕES SOBRE A INTERPRETAÇÃO DE DADOS

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AMOSTRAGEM DE MICRORGANISMOS DE TRANSPORTE AÉREO

Amostrador de ar com fenda para ágar (STA)

freqüentemente usada para minimizar a perturbação do fluxo de ar unidirecional.

Átrio Microbiológico Esterilizável

Amostrador de sistema de ar de superfície

Amostrador de filtro de gelatina

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MEIOS DE CULTURA E DILUENTES

IDENTIFICAÇÃO DE ISOLADOS MICROBIAIS

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qualificados para a finalidade pretendida.

Comissionamento de um Ambiente Controlado:

Taxa de recuperação de contaminação:

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Programa de Monitoramento Ambiental: