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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DO SUL

DE MINAS GERAIS
CAMPUS MUZAMBINHO
Curso Superior de Tecnologia em Cafeicultura

VANDELINO DIAS JUNIOR

USO DE N-ACETILCISTENA NO CONTROLE DA MANCHA AUREOLADA EM


MUDAS DE CAFEEIRO

Trabalho de Concluso de Curso


apresentado ao Curso Superior de
Tecnologia em Cafeicultura, do Instituto
Federal de Educao, Cincia e Tecnologia
do Sul de Minas Gerais, Campus
Muzambinho, como requisito para a
obteno do ttulo de Tecnlogo em
Cafeicultura. Elaborado conforme as
normas da Revista Coffee Science.
Orientador: Prof. D.Sc. Roseli dos Reis
Goulart

MUZAMBINHO
2014

COMISSO EXAMINADORA

_________________________________
Prof. D.Sc Roseli dos Reis Goulart (Orientadora)

__________________________________
Prof.a D.Sc Anna Lygia de Rezende Maciel

___________________________________
Prof. D.Sc Felipe Campos Figueiredo

Muzambinho, 15 de agosto de 2014.

USO DE N-ACETILCISTENA NO CONTROLE DA MANCHA AUREOLADA EM


MUDAS DE CAFEEIRO
Vandelino Dias Junior1, Roseli dos Reis Goulart1, Lenidas Leoni Belan2, Helvcio D.
Coletta Filho3, Alessandra A. de Souza3
1

Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Sul de Minas Gerais - IFSULDEMINAS Campus
Muzambinho (MG). vandelinodias@hotmail.com; goulartrr@yahoo.com.br
2
Universidade Federal de Lavras - UFLA, Departamento de Fitopatologia. Lavras (MG).
leonidas_agronomia@yahoo.com.br
3
Centro de Citricultura Sylvio Moreira, Instituto Agronmico, Cordeirpolis (SP).
helvecio@centrodecitricultura.br; alessandra@centrodecitricultura.br

RESUMO: A mancha aureolada do cafeeiro uma doena causada pela bactria


Pseudomonas syringae pv garcae. O controle desta doena tem se mostrado ineficaz e
invivel, por isso o estudo de novas alternativas que efetivamente reduzam a severidade da
doena e sejam menos txicos se faz necessrio. Objetivou-se neste trabalho avaliar o
efeito de diferentes concentraes de N-Acetilcistena (NAC) na incidncia da mancha
aureolada em mudas de cafeeiro da variedade Catua Vermelho IAC 144. Antes das mudas
serem inoculadas com a bactria, as plantas foram acondicionadas em cmara mida, a
qual foi confeccionada com saco plstico transparente, para abertura dos estmatos e
melhor penetrao da bactria. Aps dez dias da inoculao quando as plantas
apresentavam os sintomas tpicos da doena, distribudos de maneira uniforme, foi
realizada a primeira pulverizao e aps 20 dias foi realizada a segunda pulverizao. O
uso do N-Acetilcistena para o controle da mancha aureolada do cafeeiro, de maneira
curativa e via foliar no se apresentou eficiente. As doses de NAC 160, 320, 480 e 540 mg
L agua-1, assim como a casugamicina 2% na dose de 3 ml L agua-1 no foram capazes de
diminuir a progresso da doena.
Termos para indexao: Pseudomonas syringae pv garcae, bactria, NAC

USE OF N-ACETYLCYSTEINE IN CONTROLLING THE BACTERIAL BLIGHT


OF COFFEE SEEDLINGS
ABSTRACT: The bacterial blight of coffee is a disease caused by the bacterium
Pseudomonas syringae pv garcae. Control of this disease is inefficient and impractical, so
the study of new alternatives that effectively reduce the severity of the disease and are less
toxic if necessary. The aim of this study was to evaluate the effect of different
concentrations of N-Acetylcysteine on the incidence of bacterial blight of coffee seedlings
Catua Vermelho IAC 144. Before the seedlings were inoculated with the bacteria, the
plants were placed in a moist chamber, which was made with transparent plastic bag, for
opening the stomata and better penetration of bacteria. Ten days after inoculation when
plants showed typical symptoms of the disease, spread evenly, the first spraying was
performed and 20 days after the second spraying was performed. The use of Nacetylcysteine to control the bacterial blight of coffee seedlings, curative foliar way and
did not appear efficient. NAC doses of 160, 320, 480 and 540 mg L water-1, as well as
casugamicina 2% at a dose of 3 ml L water-1 were not able to slow the progression of the
disease.
Index terms: Pseudomonas syringae pv garcae, bacterium, NAC

1.

INTRODUO

A mancha aureolada do cafeeiro uma doena causada pela bactria Pseudomonas


syringae pv garcae, constatada pela primeira vez em 1955 na regio de Gara, no Estado
de So Paulo (GODOY et al., 1997; MACIEL et al., 2012; PATRICIO et al., 2004). Outras
fitobactrias j foram identificadas causando doenas no caf (Coffea arabica L.), porm a
Pseudomonas syringae pv. garcae a mais comum (DESTFANO et al., 2010; MACIEL
et al., 2011).
A mancha aureolada ataca o cafeeiro tanto nas fases de formao como de
produo, a doena favorecida por ventos frios, temperaturas amenas e umidade alta. Na
planta do cafeeiro esta bacteriose ataca folhas, rosetas, chumbinhos e ramos. Os sintomas
so mais severos nas lavouras novas, com 3 a 4 anos, e nas mudas, podendo resultar em
morte do ponteiro ou das plantas (GODOY et al., 1997; MACIEL et al., 2012; PATRICIO
et al., 2004).
Os sintomas desta doena bacteriana so manchas de cores pardas, circundadas por
um halo amarelado, semelhante a uma aureola, por isso o nome mancha aureolada. Quando
as leses so nas bordas das folhas, estas se desprendem do limbo foliar dando um aspecto
rendilhado (PATRICIO, 2004; POZZA et al., 2010).
A bactria considerada oportunista, pois aproveita de leses presentes nas plantas
para se instalar. Estas leses podem ser oriundas de chuva de granizo, danos causados pela
colheita ou por ventos frios. Em lavouras implantadas nos locais de maior altitude e sem
quebra ventos ela aparece com maior intensidade (GODOY et al., 1997; MACIEL et al.,
2012; PATRICIO et al., 2004).
Em muitas literaturas a mancha aureolada do cafeeiro tratada como uma doena
secundria, j que desde o seu primeiro relato, a doena vem causando danos espordicos e
localizados (CARVALHO et al., 2010). No entanto, nas ultimas safras a mancha aureolada

do cafeeiro ocorreu com grande frequncia nas regies produtoras de caf. As epidemias
da doena foram severas nas lavouras situadas em locais de altitudes elevadas, embora a
doena tambm seja encontrada em locais de menores altitudes (PATRICIO et al., 2012).
Esta maior severidade e danos que vem sendo causados, podem estar relacionadas
reduo do uso de fungicidas cpricos (MATIELLO et al., 2010), j que o cobre tem
ligeira reposta favorvel como bactericida (COSTA & SILVA, 1960). Outro fator pode ser
pela falta de quebra ventos, j que muitos cafeicultores abrem mo desta prtica para
facilitar no manejo mecanizado, tendo em vista que o custo com mo de obra est cada dia
mais elevado.
Costa e Silva (1960) realizaram estudo sobre o controle da mancha aureolada do
cafeeiro, utilizando produtos a base de cobre, mancozeb e agrimicina com intervalos curtos
de pulverizao e com a reaplicao aps as chuvas. Mesmo assim, os autores observaram
que em condies climticas favorveis, pouco sucesso se obteve com os tratamentos.
O hidrxido de cobre proporciona reduo na severidade da mancha aureolada do
cafeeiro, no entanto, no possui efeito curativo, desta forma, o cobre tem sido utilizado em
mistura com alguns fungicidas, fosfitos e acido saliclico, mas tambm sem muito sucesso
(DIAS JUNIOR & GOULART, 2013; PATRICIO et al., 2004, 2012). Para mudas ainda no
viveiro, a casugamicina pode ser utilizada (BRASIL, 2003) e tem sido uma das
ferramentas para o manejo desta bacteriose. Aps as mudas instaladas no campo a melhor
recomendao o uso de quebra ventos e poda das partes contaminadas.
O controle da mancha aureolada do cafeeiro tem se mostrado ineficaz e invivel,
por isso o estudo de novas alternativas que efetivamente reduzam a severidade da doena e
sejam menos txicas se faz necessrio, como por exemplo, o trabalho realizado por Botrel
(2013), onde foi pesquisado o uso de fungos saprbios no controle desta bactria.

O anlogo do aminocido cistena, N-acetilcistena (NAC), produto no txico a


humanos, j utilizado na medicina para destruio de biofilme de bactrias patognicas a
humanos. Estas bactrias formam biofilme provocando doenas no trato respiratrio e
placas bacterianas nos dentes (SOUZA et al., 2012). O NAC atua como agente mucoltico
atravs da quebra das ligaes dissulfeto das mucoprotenas, diminuindo a aderncia das
secrees tendo assim ao antibacteriana (MURANAKA, 2010; NAKAIE, 1983).
O NAC tem apresentado efeito no controle da bactria Xylella fastidiosa causadora
do amarelinho ou clorose variegada dos citros (CVC) na cultura do citros (SOUZA et al.,
2012). No caso do CVC, o mecanismo de patogenicidade est associado a sua capacidade
de colonizar e formar um biofilme no xilema das plantas hospedeiras (MURANAKA,
2010; MURANAKA et al. 2013). O biofilme formado pela multiplicao e crescimento
da bactria de forma agregada (SOUZA et al., 2012), isto ocorre porque as bactrias
produzem ao seu redor uma cpsula composta por exopolissacardeos, que ajuda na adeso
da bactria nas superfcies e a protege contra condies adversas do ambiente (ROMEIRO,
2005).
O uso do NAC em doses acima de 1 mg mL-1, foi capaz de desestruturar o biofilme
feito por Xylella fastidiosa, reduziu a quantidade de exopolissacardeo capsular, alm
disso, apresentou efeito antimicrobiano (MURANAKA et al.,2013).
Em outro trabalho, plantas de laranja pra enxertadas e infectadas pela bactria
Xylella fastidiosa receberam, via soluo hidropnica, diferentes concentraes de NAC.
Aps trs meses as plantas que receberam 120 e 600 mg de NAC apresentaram supresso
dos sintomas (MURANAKA et al. 2013).
Embora o NAC tenha poucos estudos no controle de bacterioses de plantas um
produto que apresenta potencial para o uso na agricultura. Pois, mostrou-se promissor no

controle de bactrias do citros e, alm disso, uma molcula pequena e segura para o
homem e para os animais (MURANAKA et al., 2013; SOUZA et al., 2012).
Neste intuito, possvel que o NAC aplicado atravs de pulverizao, tenha
resultados positivos no controle da mancha aureolada do cafeeiro. Por isso, objetivou neste
trabalho avaliar o efeito de diferentes concentraes de NAC na incidncia da mancha
aureolada em mudas de cafeeiro.
2.

MATERIAIS E MTODOS

O experimento foi conduzido em casa de vegetao no IFSULDEMINAS, Campus


Muzambinho, local com altitude de 1022 metros, latitude 21 21 05,11 e longitude 46
31 16,28. Para tal, mudas de cafeeiro da variedade Catua Vermelho IAC 144 com 6
pares de folhas, foram transplantadas para vasos plsticos com capacidade de 3 L,
contendo substrato padro para produo de mudas de cafeeiro em viveiro conforme
recomendado por Matiello et al. (2010). Aps a emisso do primeiro par de ramos o
experimento foi instalado no delineamento experimental em blocos casualizados (DBC),
contendo 4 blocos e 7 tratamentos (Tabela 1). Cada parcela experimental foi composta por
2 plantas, totalizando 28 parcelas.
TABELA 1 Tratamentos, e doses utilizadas para controle da mancha aureolada do
cafeeiro.
Tratamentos

Dose

Testemunha (sem aplicao de produto).

NAC

160 mg L agua-1

NAC

320 mg L agua-1

NAC

480 mg L agua-1

NAC

540 mg L agua-1

Casugamicina 2%

3 mL L agua-1

Soluo salina (NaCl)

0,85%

O preparo da suspenso bacteriana para a inoculao das mudas foi realizado no


laboratrio de Bacteriologia e Epidemiologia e Controle de Doenas de Plantas, do
Departamento de Fitopatologia (DFP) da UFLA. Foi feito o semeio do patgeno em meio
523 de Kado & Heskett (1970). Aps 48 horas, as clulas bacterianas foram suspendidas
em soluo salina estril (NaCl a 0,85%) e a concentrao bacteriana determinada em
espectrofotmetro a 600 nm (OD600), conforme descrito por Oliveira e Romeiro (1990).
Por meio de diluio em soluo salina estril, foi preparada suspenso de clulas
bacterianas com concentrao de 1,0 107 UFC/mL (absorbncia 0,2).
Antes da inoculao, as plantas foram acondicionadas em cmara mida, a qual foi
confeccionada com saco plstico transparente de dimenses, 40 cm x 60 cm, onde as
mudas foram tutoradas por estacas de madeira, como descrito por Corra et al. (2009),
evitando assim o contato das folhas com o saco plstico. Antes dos vasos serem revestidos
pelo saco plstico as mudas foram bem irrigadas e aspergidas com gua, aps isso o saco
plstico foi colocado e amarrado para manter alta umidade na folha, durante 24 horas. Esta
etapa objetivou promover um ambiente saturado de umidade para que a planta mantivesse
seus estmatos abertos e facilitasse a entrada das bactrias.
Aps este perodo, os sacos plsticos foram retirados, e as mudas foram inoculadas,
por meio da asperso da suspenso bacteriana nas folhas, logo em seguida as plantas
voltaram para a cmara mida, permanecendo por mais 24 horas, conforme realizado por
Mohan et al. (1978) e Zoccoli et al. (2011).
No tratamento com soluo salina, as plantas no foram inoculadas com a bactria,
uma vez, que o objetivo deste tratamento foi verificar a possvel presena de queimaduras
no tecido da folha, uma vez que a soluo salina poderia provocar estas queimaduras, o
que poderia ser confundido com os sintomas da bacteriose.

Aps 10 dias da inoculao quando as plantas apresentavam os sintomas tpicos da


doena, distribudos de maneira uniforme, foi realizada a primeira pulverizao (PP) com
os tratamentos descritos na Tabela 1. Aps 20 dias da PP foi realizada a segunda
pulverizao (SP).
As avaliaes foram realizadas nos 3 primeiros pares de folhas do pice para a base
da planta, ou seja, 6 folhas por planta, determinando-se a incidncia da doena nas folhas
(IDF). Todas as avaliaes foram realizadas com intervalos de 4 dias, sendo realizadas 5
avaliaes aps a PP e 5 avaliaes aps a SP, de forma que o experimento foi conduzido e
avaliado durante 40 dias, iniciando as avaliaes em 21/04/2014 at 31/05/2014.
Os dados de IDF foram utilizados no clculo da rea Abaixo da Curva de
Progresso da Incidncia (AACPI). Estes dados foram submetidos ao teste de Tukey (p<
0,05). Os dados de AACPI referente aos tratamentos com NAC foram submetidos ao teste
de regresso no programa estatstico Sisvar (FERREIRA, 2011).
3.

RESULTADOS E DISCUSSES

Aps 11 dias da inoculao das mudas, e antes da aplicao dos tratamentos, todas
as parcelas apresentavam sintomas da doena (Tabela 2), exceto na parcela que recebeu
somente a soluo salina. A IDF variou de 25 a 48% nos trs pares de folhas avaliados.

TABELA 2 - Incidncia de mancha aureolada em mudas de cafeeiro onze dias aps a


inoculao.
Tratamento

IDF (%) *

Testemunha

41,50 (b)

NAC 160 mg L agua-1

48,00 (b)

NAC 320 mg L agua-1

31,50 (b)

NAC 480 mg L agua-1

25,00 (b)

NAC 540 mg L agua-1

27,00 (b)

Casugamicina 2%

31,25 (b)

Soluo salina (NaCl)

0,00 (a)

CV (%)

53,20

As mdias seguidas pela mesma letra minscula na coluna no diferem entre si pelo teste de Scott Knott a
5%. * Mdia das seis folhas avaliadas por planta.

Observando-se os dados mdios de incidncia da doena antes da aplicao dos


tratamentos e aps a aplicao (Tabela 3) observa-se que de 0 para 4 dias aps a
inoculao houve um crescimento significativo da IDF. No entanto, de um modo geral,
verifica-se que a doena aumentou com o passar dos dias at os 40 dias aps a inoculao.
Ou seja, as diferentes concentraes de NAC, assim como a casugamicina 2%, no tiveram
efeito na paralisao da doena. O NAC 160 mg L agua-1 em algumas avaliaes se
destacou dos demais com maior incidncia da doena.

TABELA 3 Incidncia de mancha aureolada em mudas de cafeeiro em 11 avaliaes com intervalos de 4 dias.
Dias aps a inoculao
Tratamento

12

16

20

24

28

32

36

40

IDF (%) *
Testemunha

41,50(b)

45,75(b)

52,00(b)

54,00(b)

56,00(b)

60,25(b)

66,50(b)

68,75(b) 68,75(b) 68,75(b) 73,00(b)

NAC 160 mg L agua-1

48,00(b)

72,75(c)

72,75(c)

75,00(b)

75,00(b)

79,25(b)

83,25(b)

85,25(b) 87,50(b) 89,50(b) 91,75(c)

NAC 320 mg L agua-1

31,50(b)

54,00(b)

58,25(b)

60,50(b)

60,50(b)

64,75(b)

71,00(b)

71,00(b) 73,00(b) 75,00(b) 75,00(b)

NAC 480 mg L agua-1

25,00(b)

52,25(b)

52,25(b)

52,25(b)

52,25(b)

54,25(b)

58,50(b)

58,50(b) 60,50(b) 60,50(b) 66,75(b)

NAC 540 mg L agua-1

27,00(b)

54,00(b)

54,25(b)

60,50(b)

60,50(b)

62,50(b)

64,75(b)

64,75(b) 64,75(b) 64,75(b) 69,00(b)

Casugamicina 2%

31,25(b)

50,00(b)

54,25(b)

64,75(b)

66,75(b)

66,75(b)

66,75(b)

68,75(b) 68,75(b) 75,00(b) 83,25(c)

Soluo salina (NaCl)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

0,00(a)

CV (%)

53,20

24,60

21,10

19,69

20,31

19,42

19,12

19,96

20,68

20,20

16,91

As mdias seguidas pela mesma letra minscula na coluna no diferem entre si pelo teste de Scott Knott a 5%. * Mdia das seis folhas avaliadas por planta.

Quanto taxa de crescimento da incidncia da mancha aureolada ao longo do


tempo (Figura 1) observa-se que a doena cresceu a uma mesma taxa nos diferentes
tratamentos. Somente diferiu das plantas que no foram inoculadas com a bactria.
0,04

Taxa de crescimento da IDF

b
0,035

0,03

0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
a
0
Testemunha

160 mg . L
agua-1

320 mg . L
agua-1

480 mg . L
agua-1

540 mg . L Kasugamicina Soluo


agua-1
2%
salina (NaCl)

FIGURA 1 Taxa de crescimento da incidncia de mancha aureolada em mudas de caf.

Com relao AACPI, calculada a partir da incidncia (Tabela 4), observa-se que
os tratamentos com NAC e casugamicina 2% obtiveram resultados semelhantes, com
exceo do NAC 160 mg L agua-1 que foi o tratamento com pior desempenho, com uma
AACPI superior at mesmo ao NAC 0 mg L agua-1, que foi a testemunha absoluta. A razo
do NAC 160 mg L agua-1 ter este comportamento pode ser pelo fato do mesmo ter
apresentado uma incidncia superior aos demais tratamentos inicialmente, j que o NAC
dose-dependente e est relacionado quantidade do inculo (MURANAK et al., 2010).
Mas esta hiptese carece de mais estudos. Nenhum dos tratamentos se mostrou capaz de
parar a progresso da doena.

TABELA 4 rea abaixo da curva de progresso da incidncia de diferentes tratamentos


com NAC em 11 avaliaes com intervalos de 4 dias.
Tratamento

AACPI *

Testemunha

23.958 (b)

160 mg L agua-1

31.625 (c)

320 mg L agua-1

25.625 (b)

480 mg L agua-1

21.833 (b)

540 mg L agua-1

23.920 (b)

Casugamicina 2%

25.543 (b)

Soluo salina (NaCl)

0,000 (a)

CV (%)

16,40

As mdias seguidas pela mesma letra minscula na coluna no diferem entre si pelo teste de Scott Knott a
5%. * Mdia das seis folhas avaliadas por planta.

Na regresso, analisando somente as diferentes concentraes de NAC, embora


tenha dado efeito significativo para os tratamentos, nenhum modelo se ajustou aos dados.
Muranka et al. (2013) mostrou atravs do mtodo HPLC que o NAC absorvido
pelas razes das plantas atravs de soluo hidropnica, o mesmo no foi observado via
foliar em cafeeiro.
Apesar de este trabalho sugerir que o NAC no apropriado para aplicao curativa
via folha, o uso do NAC via foliar foi testado por Picchi & Souza (2013), no controle do
cancaro ctrico, causado pela bactria Xanthomonas citri subsp. citri, neste trabalho, o
NAC foi associado ao cobre e esta combinao resultou na morte total da bactria e
propiciou uma reduo na concentrao de cobre.
4.

CONCLUSES

O uso do NAC para o controle da mancha aureolada do cafeeiro, de maneira


curativa e via foliar no se apresentou eficiente.
As doses de NAC 160, 320, 480 e 540 mg L agua-1, assim como a casugamicina
2% na dose de 3 ml L agua-1 no foram capazes de curar ou pelo menos diminuir a
progresso da doena.

5. CONSIDERAES FINAIS
Estudos posteriores deveriam ser realizados com NAC no cafeeiro. Seja em
associao com outros produtos, ou mesmo em aplicaes preventivas via foliar, ou ainda
na modalidade de aplicao via solo.
REFERNCIAS

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