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cromatografia um mtodo
em faixas coloridas. Este provavelfsico-qumico de separao.
mente o motivo pelo qual a tcnica
Ela est fundamentada na miconhecida como cromatografia (chrom
grao diferencial dos componentes
= cor e graphie = escrita), podendo
de uma mistura, que ocorre devido a
levar errnea idia de que o processo
diferentes interaes, entre duas fases
seja dependente da cor.
imiscveis, a fase mvel e a fase
Apesar deste estudo e de outros
estacionria. A grande variedade de
anteriores, que tambm poderiam ser
combinaes entre fases mveis e
considerados precursores do uso
estacionrias a torna
dessa tcnica, a croA cromatografia um
uma tcnica extremamatografia foi praticamtodo fsico-qumico
mente verstil e de
mente ignorada at a
de separao.
grande aplicao.
dcada de 30, quanEla est fundamentada
O termo cromatodo foi redescoberta. A
na migrao diferencial
grafia foi primeirapartir da, diversos
dos componentes de
mente empregado em
trabalhos na rea
uma mistura, que
1906 e sua utilizao
possibilitaram seu
ocorre devido a difeatribuda a um botaperfeioamento e,
rentes interaes,
nico russo ao descreem conjunto com os
entre duas fases
ver suas experincias
avanos tecnolgiimiscveis, a fase
na separao dos
cos, levaram-na a um
mvel e a fase
componentes de exelevado grau de sofisestacionria
tratos de folhas. Nesse
ticao, o qual resulestudo, a passagem
tou no seu grande pode ter de petrleo (fase mvel) atravs
tencial de aplicao em muitas reas.
de uma coluna de vidro preenchida
A cromatografia pode ser utilizada
com carbonato de clcio (fase estapara a identificao de compostos, por
cionria), qual se adicionou o extrato,
comparao com padres previalevou separao dos componentes
mente existentes, para a purificao de
QUMICA NOVA NA ESCOLA Cromatografia
compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura.
As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios, sendo
alguns deles listados abaixo:
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Cromatografia planar
A cromatografia em papel
(CP) uma tcnica de partio
lquidolquido, estando um
deles fixado a um suporte
slido. Baseia-se na diferena
de solubilidade das substncias em questo entre duas
fases imiscveis, sendo geral3. Classificao pela fase
mente a gua um dos lquidos.
estacionria utilizada
O solvente saturado em gua
e a partio se d devido
Quanto fase estacionria, distinpresena de gua em celulose
gue-se entre fases estacionrias sli(papel de filtro). Este mtodo,
das, lquidas e quimicamente ligadas.
embora menos eficiente que a
No caso da fase estacionria ser consCCD, muito til para a sepa- Figura 2: Esquematizao de um cromatograma
tituda por um lquido, este pode estar
rao de compostos polares, obtido por CCD.
simplesmente adsorvido sobre um susendo largamente usado em
porte slido ou imobilizado sobre ele.
bioqumica.
Suportes modificados so considerapessura de 3 a 4 mm. Placas analticas
A cromatografia em camada delgados separadamente, como fases quiusualmente tm 10 cm x 2,5 cm e
da
(CCD)
uma
tcnica
de
adsoro
micamente ligadas, por normalmente
preparativas 20 cm x 20 cm.
lquidoslido.
Nesse
caso,
a
separadiferirem dos outros dois em seus
A slica gel a fase estacionria
o se d pela diferena de afinidade
mecanismos de separao.
mais utilizada, sendo seguida pela aludos componentes de uma mistura pela
mina, pela terra diatomcea e pela
fase estacionria.
4. Classificao pelo modo de
celulose. Para a preparao das plaA
Fig.
2
mostra
um
cromatograma
separao
cas, faz-se uma suspenso do adsorobtido por CCD no qual se pode
Por este critrio, separaes
vente em gua, sendo a mesma depoobservar a diferena de afinidade das
cromatogrficas se devem adsoro,
sitada sobre a placa manualmente ou
substncias 1 e 2 pela fase estacionpartio, troca inica, excluso ou miscom o auxlio de um espalhador. Aps
ria, sendo a substncia 1 mais retida
turas desses mecanismos.
a deposio, deixa-se a placa secar ao
que a 2. Por ser um mtodo simples,
ar. A etapa final da preparao da placa
rpido, visual e econmico, a CCD a
Para se ter uma viso mais ampla
sua ativao. A slica, por exemplo,
tcnica predominantemente escolhida
dos diferentes tipos de cromatografia,
ativada a 105-110 C por 30 a 60
para o acompanhamento de reaes
os mesmos esto dispostos no diagraminutos. A espessura da camada de
orgnicas, sendo tambm muito utilizama da Figura 1.
slica a ser depositada de 0,25 mm
da para a purificao de substncias
Dentre os vrios tipos de cromatopara placas analticas e de 1,0 mm
e para a identificao de fraes colepara placas preparativas. Na preparagrafia, especial nfase ser dada
tadas em cromatografia lquida clssio de placas preparativas, costumacromatografia em camada delgada
ca.
se adicionar sulfato de clcio para
(CCD), cromatografia lquida clssica
O parmetro mais importante a ser
melhorar a adeso placa de vidro.
e de alta eficincia (CLAE) e cromaconsiderado em CCD o fator de
No mercado existem placas analticas
reteno (Rf), o qual
e preparativas pr-fabricadas, as quais
a razo entre a distnapresentam a fase estacionria deposicia percorrida pela
tada sobre uma lmina de material
substncia em questo
plstico ou de alumnio, sendo estas
e a distncia percorrida
de maior eficincia.
pela fase mvel. Os
As amostras a serem analisadas
valores ideais para Rf
por CCD devem ser aplicadas a aproesto entre 0,4 e 0,6.
ximadamente 1 cm da base inferior da
A CCD pode ser
placa, com a ajuda de um capilar.
usada tanto na escala
Aps a aplicao da(s) amostra(s)
analtica quanto na presobre a placa, a mesma deve ser
parativa. Normalmente
introduzida numa cuba contendo a
as placas utilizadas
Figura 1: Representao esquemtica dos diferentes tipos
fase mvel adequada. Cubas cromatoso de vidro, com esde cromatografia.
QUMICA NOVA NA ESCOLA Cromatografia
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Cromatografia em coluna
Cromatografia lquida clssica
Esta tcnica muito utilizada para
isolamento de produtos naturais e
purificao de produtos de reaes
qumicas. As fases estacionrias mais
utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir
simplesmente como suporte para uma
fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam separao
por adsoro e fases estacionrias
lquidas por partio. Suportes quimicamente modificados tambm tm
sido usados, sendo o processo de separao misto neste caso.
Esses suportes so acondicionados em tubos cilndricos geralmente
de vidro, de dimetros variados, os
quais possuem uma torneira em sua
extremidade inferior. A Fig. 3 uma
ilustrao de uma coluna cromatogrfica empacotada com slica, sendo
mostrados seus demais constituintes.
Os adsorventes possuem partculas na faixa de 60-230 mesh, de
modo a possibilitar um fluxo razovel
do solvente atravs da coluna.
O uso de slica de partcula menor
(230-400 mesh) como adsorvente para
essas colunas requer a utilizao de
um sistema de bombeamento para o
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