Cromatografia

Dr. Agenor Valadares Santos

Faculdade de Biotecnologia
Universidade Federal do Pará
 Cromatografia
• O termo cromatografia foi
cunhado pelo botânico russo
Mikhael Tswett.

• Chrom (cor), graphe (escrever)

• Curiosidade: Tswett significa cor

em Russo
 Definição

• A cromatografia é um método físico-químico

de separação dos componentes de uma
mistura, realizada através da distribuição
desses componentes em duas fases. Uma das
fases permanece estacionária, enquanto a
outra se move através dela.
Classificação – quanto forma física

A forma física do sistema de cromatografia

define a técnica geral:

• A fase estacionária pode ser colocada em um

tubo cilindro (cromatografia em coluna);

• Ou disposta sobre uma superfície planar

(cromatografia planar).
Colunas de baixa e média pressão
 CCD - exemplos

Requerimento da amostra:
detectável no cromatograma
solúvel na FM
estável à luz, oxigênio, solvente, não ser volátil
Classificação – quanto ao estado físico

Quanto ao estado físico da fase móvel (FM) a cromatografia pode ser

dividida em:

• Cromatografia gasosa, na qual a fase móvel é um gás inerte;

• Cromatografia supercrítica, na qual se usa como fase móvel um vapor

pressurizado, em temperatura e pressão acima de seu ponto crítico,
com as vantagens de ter viscosidade menor que um líquido, mas
mantendo as propriedades de interação com os solutos.

• Cromatografia líquida, na qual a fase móvel é um líquido que pode

interagir com os solutos, participando da separação.
Cromatografia Gasosa: Instrumentação

• Gás de arraste (FM)

• H2, N2, He, Ar
• Função: transporte da amostra
• Propriedades: inerte, compatível com o detetor, puro
Cromatografia Gasosa: Instrumentação
 Cromatografia líquida
A cromatografia líquida em coluna pode ser dividida
em dois grupos:
• A clássica que é feita em coluna de vidro, sob
pressão atmosférica, no qual o fluxo da fase móvel é
controlado pela pressão atmosférica.
• A cromatografia líquida conhecida por cromatografia
líquida de alta eficiência (CLAE), normalmente utiliza
colunas metálicas e pressão da fase móvel elevada,
que são obtidas com o auxilio de uma bomba de alta
pressão, permitindo o uso de fluxos mais altos.
Cromatografia Líquida: CLAE (HPLC)
Classificação – cromatografia líquida

Quanto ao mecanismo de separação:

• Físicos (sorção)

• Químicos (TI, IH, AF)

• Mecânicos (gel filtração)

Mecanismos de separação

http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CHROMO/be_types.htm
 Separação de proteínas baseada nas
propriedades físicas e químicas

• Solubilidade

• Binding

• Resíduos hidrofóbicos

• Superfície com resíduos carregados

• Ponto Isoelétrico

• Tamanho e forma
 Outra Classificação – cromatografia líquida

Outra classificação baseia-se na polaridade

relativa das fases:
Em cromatografia gasosa, a fase móvel é inerte e
a separação ocorre devido a interações das moléculas
da amostra com a fase estacionária, enquanto na
cromatografia líquida, tanto planar com em coluna, a
polaridade de ambas as fases é importante.
Chama-se “cromatografia líquida com fase
normal” quando a fase estacionária é mais polar do que
a fase móvel, e a “cromatografia com fase reversa”
quando se tem o inverso, ou seja, a fase móvel é mais
polar e a fase estacionária mais apolar.
Resolução
Resolução
 Para quê Alta Resolução ?

Massa Exata = 146,06859

Massa Medida = 146,0868
Erro = 125 ppm 10 6.ΔM
Erro de Massa =
M