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Manual Do PNCEBT - Original PDF
Manual Do PNCEBT - Original PDF
1
PRESIDENTE DA REPBLICA
Luiz Incio Lula da Silva
SECRETRIO EXECUTIVO
Lus Carlos Guedes Pinto
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Manual Tcnico
Braslia - 2006
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AUTORES
Andrey Pereira Lage
Eliana Roxo
Ernst Eckehardt Muller
Fernando Padilla Poester
Joo Crisostomo Mauad Cavallro
Jos Soares Ferreira Neto
Pedro Moacyr Pinto Coelho Mota
Vitor Salvador Pico Gonalves
ORGANIZAO
Vera Cecilia Ferreira de Figueiredo
Jos Ricardo Lbo
Vitor Salvador Pico Gonalves
REVISO BIBLIOGRFICA
Neuza Arantes Silva
REVISO DE TEXTO
Attilio Brunacci
AGRADECIMENTOS
Carlos Eduardo Tedesco Silva SFA-MS/MAPA
Maria Carmen de Rezende Costa SFA-MG/MAPA
Maria do Carmo Pessa Silva SEAB/PR
Orasil Romeu Bandini SFA-MS/MAPA
Catalogao na Fonte
Biblioteca Nacional de Agricultura - BINAGRI
permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte.
4
Apresentao
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Para envolver as grandes propriedades de produo de carne
existentes no Brasil, elaboraram-se medidas adaptadas s condies
de manejo e ao tamanho desses rebanhos, as quais justificam a
criao do programa de propriedades monitoradas. Esses rebanhos
estaro sujeitos a um sistema de monitoramento permanente que
visa prevenir a introduo do agente infeccioso e garantir baixos
nveis de risco de manuteno de situaes endmicas.
A vacinao de bezerras contra a brucelose foi considerada
prioritria em razo de a prevalncia ser alta em quase todo o pas.
Com essa medida espera-se reduzir significativamente a prevalncia
e a incidncia da brucelose em um prazo de 10 anos. Os exemplos
de sucesso em Minas Gerais e no Rio Grande do Sul so motivo
para acreditar no acerto dessa estratgia. O PNCEBT tambm um
programa aberto a inovaes, como a introduo de novas vacinas
ou testes de diagnstico. Essa caracterstica importante para
garantir que os produtores e os mdicos veterinrios tenham acesso
constante a mtodos de boa eficcia e de custo baixo.
Finalmente, o PNCEBT envolve os mdicos veterinrios, as
universidades e centros de pesquisa como parte ativa de todo o
processo. Esta uma soluo nova no Brasil, baseada na idia de
que a grande capacidade tcnica instalada das instituies de ensino
e pesquisa e a disponibilidade de servios veterinrios existentes
no Pas podem e devem dar uma contribuio importante a todas
as fases de um programa de sade animal.
Acreditamos que as estratgias e normas seguidas pelo PNCEBT
so adequadas e podem transformar o combate brucelose e
tuberculose em um esforo organizado de todos os setores ligados
produo pecuria e promoo da sade pblica. A partir de
agora ser necessrio monitorar o andamento e o impacto das
medidas propostas. S o tempo mostrar os erros e os acertos e
tornar mais evidentes as necessidades de corrigir ou de reforar o
rumo seguido.
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Sumrio
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Equipamentos para os Testes de Tuberculinizao ..................... 63
Mtodos de Turberculinizao ................................................ 64
Cuidados na Tuberculinizao de Rebanhos .............................. 64
Novos Mtodos de Diagnstico da Tuberculose Bovina ...................... 65
Controle da Tuberculose ...................................................................... 66
Tuberculose Humana de Origem Bovina .................................................. 68
Bibliografia ........................................................................................ 68
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PROTOCOLO PARA DIAGNSTICO DA TUBERCULOSE ...................... 103
Diagnstico Alrgico ......................................................................... 103
Tuberculinas .............................................................................. 103
Equipamentos ........................................................................... 103
Identificao dos Animais ........................................................... 103
Testes ....................................................................................... 104
Teste Cervical Simples (TCS) ................................................... 104
Teste Cervical Comparativo (TCC) ........................................... 106
Teste da Prega Caudal (TPC) .................................................. 109
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Apresentao do Programa
Estratgias
Propostas Tcnicas
Tuberculose
1) o teste cervical simples a prova de rotina em gado de
leite devido sua boa sensibilidade;
2) o teste da prega ano-caudal pode ser utilizado como prova
de triagem, porm, exclusivamente em gado de corte;
3) o teste cervical comparativo a prova confirmatria para
animais reagentes ao teste da prega ano-caudal ou ao teste cervical
simples; todavia, tambm pode ser empregado como nica prova
diagnstica em rebanhos com histrico de reaes inespecficas.
Os testes acima mencionados colocam o diagnstico de
brucelose e de tuberculose no Brasil em sintonia com os padres
internacionais, e, em particular, com as recomendaes do Cdigo
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Zoossanitrio Internacional da OIE. Entretanto, o MAPA pretende
atualizar os mtodos de diagnstico medida que novos e melhores
testes forem surgindo.
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Definio
Etiologia
Epidemiologia
Situao no Brasil
Estudos mostram que a brucelose bovina parece estar
disseminada por todo o territrio brasileiro, com maior ou menor
prevalncia dependendo da regio estudada. Em 1975, foram
verificadas as seguintes prevalncias em animais, por regies:
Sul, 4%; Sudeste, 7,5%; Centro-Oeste, 6,8%; Nordeste, 2,5% e
Norte, 4,1%.
Posteriormente, alguns Estados realizaram estudos sorol-
gicos por amostragem, os quais no evidenciaram grandes
alteraes em relao aos ndices nacionais verificados em 1975.
No Rio Grande do Sul, a prevalncia decresceu de 2%, em
1975, para 0,3%, em 1986. Em Santa Catarina, passou de 0,2%,
em 1975, para 0,6%, em 1996. No Mato Grosso do Sul, a
prevalncia estimada em 1998 foi de 6,3%, semelhante de 1975
no antigo Estado do Mato Grosso. Em Minas Gerais, passou de
7,6%, em 1975, para 6,7%, em 1980. No Paran, a prevalncia
estimada em 1975 foi de 9,6%, passando para 4,6% em 1989.
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Os dados oficiais, publicados no Boletim de Defesa Sanitria
Animal, mostram que a prevalncia de animais positivos no Brasil
manteve-se entre 4% e 5% no perodo entre 1988 e 1998.
Apesar dos poucos estudos realizados visando identificao
das biovariedades de Brucella isoladas de bovdeos no Brasil, j
foram identificadas B. abortus biovares 1, 2 e 3 e B. suis biovar 1.
Alm dessas espcies, de igual modo j foram identificadas B. canis
e B. ovis infectando animais domsticos. At o presente momento,
a B. melitensis, principal agente etiolgico da brucelose caprina,
no foi identificada no Brasil.
Perdas Econmicas
Nos bovinos e bubalinos, a brucelose acomete, de modo
especial, o trato reprodutivo, gerando perdas diretas devido,
principalmente, a abortos, baixos ndices reprodutivos, aumento
do intervalo entre partos, diminuio da produo de leite, morte
de bezerros e interrupo de linhagens genticas. As propriedades
onde a doena est presente tm o valor comercial de seus animais
depreciado; as regies onde a doena endmica encontram-se
em posio desvantajosa na disputa de novos mercados.
Estimativas mostram ser a brucelose responsvel pela
diminuio de 25% na produo de leite e de carne e pela reduo
de 15% na produo de bezerros. Mostram ainda que, em cada
cinco vacas infectadas, uma aborta ou torna-se permanentemente
estril.
Dentro das perdas indiretas, deve-se salientar as que resultam
em infeces humanas. Na maioria das vezes, quando a enfermidade
no tratada na fase aguda, o curso crnico da doena no homem
produz perdas econmicas de vulto. Essas perdas esto relacionadas
com os custos do diagnstico e tratamento, muitas vezes requerendo
internaes prolongadas. Alm disso, no deve ser esquecido o custo
do perodo decorrente da ausncia ao trabalho.
No Brasil, no existem estudos concretos sobre os prejuzos
econmicos ocasionados pela brucelose bovina ou bubalina.
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Nos Estados Unidos, estimou-se, em 1983, que as perdas por
brucelose bovina foram da ordem de 32 milhes de dlares, apesar
do programa americano ter-se iniciado h mais de 40 anos.
Resistncia
As bactrias do gnero Brucella, apesar de permanecerem
no ambiente, no se multiplicam nele; elas so medianamente
sensveis aos fatores ambientais. Entretanto, a resistncia diminui
quando aumentam a temperatura e a luz solar direta ou diminui a
umidade.
A pasteurizao um mtodo eficiente de destruio de
Brucella sp, assim como as radiaes ionizantes.
A sobrevivncia de Brucella sp em esterco lquido
inversamente proporcional temperatura dele, pois pode sobreviver
nesse material por 8 meses a 15C, enquanto que s resiste por 4
horas se a temperatura do material for de 45 50C.
O Quadro 1 mostra o tempo de resistncia de Brucella sp em
algumas condies ambientais.
28
Mecanismos de Transmisso
Patogenia
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Figura 2 Resposta a longo termo dos principais isotipos de
anticorpos em bovinos infectados com amostra
patognica de Brucella abortus
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Diagnstico
Mtodos Diretos
Os mtodos diretos incluem o isolamento e a identificao
do agente, imunohistoqumica, e mtodos de deteco de cidos
nucleicos, principalmente a reao da polimerase em cadeia (PCR).
O isolamento e a identificao da B. abortus a partir de
material de aborto (feto, contedo estomacal de feto, placenta)
ou de secrees apresentam resultados muito bons se a colheita e
o transporte da amostra forem bem realizados e se a amostra for
processada em laboratrios capacitados e com experincia.
Entretanto, devido ao risco de contaminao humana durante o
processamento da amostra, poucos so os laboratrios que realizam
o exame.
A imunohistoqumica pode ser procedida em material de
aborto aps a fixao em formol e permite tanto a identificao
do agente como a visualizao de aspectos microscpicos do tecido
examinado.
A PCR detecta um segmento de DNA especfico da B. abortus
em material de aborto, em secrees e excrees. uma tcnica
bastante sensvel e especfica, mas requer equipamentos sofisticados
e pessoal treinado.
Testes de Triagem
Teste de Soroaglutinao
com Antgeno Acidificado Tamponado (AAT)
preparado com o antgeno na concentrao de 8%,
tamponado em pH cido (3,65) e corado com o Rosa de Bengala.
o teste de triagem do rebanho. A maioria dos soros de animais
bacteriologicamente positivos apresenta reao a essa prova. Como
podem ocorrer alguns poucos casos de reaes falso-positivas em
decorrncia da utilizao da vacina B19, sugere-se a confirmao
por meio de testes de maior especificidade para se evitar o sacrifcio
de animais no infectados. uma prova qualitativa, pois no indica
o ttulo de anticorpos do soro testado. A leitura revela a presena
ou a ausncia de IgG1. Nas provas clssicas de aglutinao, reagem
tanto anticorpos IgM como IgG, enquanto que, nessa prova, reagem
somente os isotipos da classe IgG1. O pH acidificado da mistura
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soro-antgeno inibe a aglutinao do antgeno pelas IgM. O AAT
detecta com maior precocidade as infeces recentes, sendo, nesse
aspecto, superior prova lenta em tubos.
Testes Confirmatrios
Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME)
uma prova quantitativa seletiva que detecta somente a
presena de IgG no soro, que a imunoglobulina indicativa de
infeco crnica. Deve ser executada sempre em paralelo com a
prova lenta em tubos. Baseia-se no fato de os anticorpos da classe
IgM, com configurao pentamrica, degradarem-se em
subunidades pela ao de compostos que contenham radicais tiol.
Essas subunidades no do origem a complexos suficientemente
grandes para provocar aglutinao. Desse modo, soros com
predomnio de IgM apresentam reaes negativas nessa prova e
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reaes positivas na prova lenta. A interpretao dos resultados
dada pela diferena entre os ttulos dos soros sem tratamento (prova
lenta), frente ao soro tratado com 2-ME.
Os resultados positivos na prova lenta e negativos no 2-ME
devem ser interpretados como reaes inespecficas ou como devido
a anticorpos residuais de vacinao com B19.
Resultados positivos em ambas as provas indicam a presena
de IgG, que so as aglutininas relacionadas com infeco, devendo
os animais ser considerados infectados.
Controle da Brucelose
42
populao estiverem vacinadas , a freqncia de animais infectados
ser bastante baixa. Portanto, uma reduo importante da
prevalncia pode ser obtida utilizando apenas um bom programa
de vacinao. Por essa razo, a vacinao deve ser priorizada nas
fases iniciais do programa, quando as prevalncias so elevadas.
A eliminao das fontes de infeco, feita por meio de uma
rotina de testes diagnsticos com sacrifcio dos positivos, a base
das aes que visam criar propriedades livres da doena.
Em resumo, inicialmente deve-se baixar a prevalncia com
um bom programa de vacinao e, paulatinamente, ir aumentando
as aes de diagnstico para a obteno de propriedades livres.
Em regies onde a freqncia da doena muito baixa, a
implantao de eficientes sistemas de vigilncia, adaptados
realidade local, pode ser de grande valia na descoberta de focos
de brucelose.
Assim sendo, os mtodos de controle da brucelose so
bastante simples. O mais importante conhecer muito bem tanto
a epidemiologia da doena, quanto a populao em que as aes
devero ser desenvolvidas, e escolher a melhor estratgia para
implement-las.
43
brucelose. Duas delas, recomendadas pela Organizao Mundial
de Sade Animal (OIE), so as mais empregadas: a B19 e a vacina
no indutora de anticorpos aglutinantes (amostra RB51). Ambas
so boas indutoras de imunidade celular.
Vacina B19
A vacina B19 uma amostra de B. abortus lisa, que foi isolada
do leite de uma vaca Jersey em 1923. Depois de acidentalmente
esquecida por mais de um ano temperatura ambiente, a amostra
perdeu a virulncia e desde a dcada de 1930 tem sido utilizada
como vacina. Essa vacina foi empregada em vrios pases que
erradicaram a doena como, por exemplo, Austrlia, Canad,
Dinamarca, Inglaterra, Holanda, Sucia, entre outros. Foi tambm
a vacina utilizada no programa de controle nos EUA at a primeira
metade da dcada de 1990. No Brasil, a vacina obrigatria para
bezerras com idade entre 3 e 8 meses.
A B19 atenuada para fmeas jovens; pode, entretanto,
causar orquite nos machos e provocar aborto se administrada
durante a gestao. Pode ainda infectar o homem, e dar origem
doena. Portanto, no se recomenda a vacinao de machos ou
fmeas gestantes com a amostra B19. Durante a vacinao, devem
ser adotadas certas precaues quanto proteo individual (uso
de culos de proteo, luvas, etc.) e quanto ao descarte de seringas
e frascos de vacinas.
Por ser uma amostra lisa de B. abortus, a B19 induz a
formao de anticorpos especficos contra o LPS liso e pode interferir
no diagnstico sorolgico da brucelose. A persistncia desses
anticorpos est relacionada com a idade de vacinao. Se as fmeas
forem vacinadas com idade superior a 8 meses, h grande
probabilidade de produo de anticorpos que perdurem e interfiram
no diagnstico da doena aps os 24 meses de idade. Quando a
vacinao ocorre at os 8 meses de idade, tais anticorpos
desaparecem rapidamente, e os animais acima de 24 meses so
totalmente negativos nas provas sorolgicas.
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Vacina no Indutora de Anticorpos Aglutinantes
(amostra RB51)
A vacina elaborada com uma amostra de B. abortus rugosa
atenuada, originada da amostra lisa virulenta 2308 que sofreu
passagens sucessivas em meio contendo concentraes
subinibitrias de rifampicina. Ela possui caractersticas de proteo
semelhantes s da B19, porm, por ser uma amostra rugosa, no
induz a formao de anticorpos anti-LPS liso e no interfere no
diagnstico sorolgico da doena.
Atualmente, a vacina no indutora de anticorpos aglutinantes
(amostra RB51) a vacina oficial do programa de controle de
brucelose dos EUA, do Mxico e do Chile. Tambm est aprovada
em outros pases onde vem sendo utilizada. No Brasil, ser
empregada para a vacinao estratgica de fmeas adultas.
Por ser uma vacina viva, o seu manuseio exige as mesmas
precaues da B19, j referidas.
46
Em geral, o tratamento feito pela administrao de uma
associao de antibiticos por seis semanas. As drogas mais
utilizadas so tetraciclinas, doxiciclina e rifampicina. Convm
salientar que em caso de infeco acidental com a amostra RB51,
o uso da rifampicina no indicado.
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49
50
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Definio
Etiologia
Epidemiologia
Distribuio
Os pases que implantaram programas de controle da
tuberculose animal ao longo do sculo passado, com bases em
tuberculinizao e sacrifcio dos animais reagentes, conseguiram
reduzir consideravelmente a freqncia de animais infectados.
Nos dias atuais, a prevalncia da doena maior nos pases
em desenvolvimento, e menor nos pases desenvolvidos, onde o
controle e a erradicao encontram-se em fase avanada. Alguns
pases da Europa j erradicaram a doena; outros esto na etapa
final de erradicao, com prevalncias baixas. Na Amrica Latina e
Caribe existem reas com prevalncia que ultrapassa 1%. No Brasil,
52
dados de notificaes oficiais indicam uma prevalncia mdia
nacional de 1,3% de animais reagentes tuberculina no perodo
de 1989 a 1998. Em Minas Gerais, um estudo realizado pelo
Instituto Mineiro de Agropecuria (IMA) em 1999, envolvendo
aproximadamente 1.600 propriedades e 23.000 animais, estimou
uma prevalncia de 0,85% de animais reagentes ao teste de
tuberculinizao. No mesmo estudo, foram detectados 5% de
propriedades com animais reagentes.
Importncia Econmica
No Brasil, no decorrer dos ltimos anos, verificou-se que o
controle da tuberculose bovina no motivou os mdicos veterinrios,
os criadores, as autoridades sanitrias e os consumidores de
produtos de origem animal. Em parte, isso se deve ao fato de ser
uma doena crnica que no apresenta sinais clnicos alarmantes
aborto, febre alta, queda abrupta de produo como o caso
das doenas de carter agudo.
Quando, por alguma razo, o criador alertado para o
problema da tuberculose e procura auxlio profissional, a prevalncia
no rebanho revela-se alta, de maneira geral.
A importncia econmica atribuda doena bovina est
baseada nas perdas diretas resultantes da morte de animais, da
queda no ganho de peso e diminuio da produo de leite, do
descarte precoce e eliminao de animais de alto valor zootcnico
e condenao de carcaas no abate. Estima-se que os animais
infectados percam de 10% a 25% de sua eficincia produtiva. Existe
ainda a perda de prestgio e credibilidade da unidade de criao
onde a doena constatada.
Mecanismos de Transmisso
Patogenia
Diagnstico
Diagnstico Clnico
Possui valor relativo, porque o animal pode estar infectado
com um foco localizado e apresentar-se aparentemente sadio. O
diagnstico clnico torna-se importante para os animais com
tuberculose avanada, para os quais o teste tuberculnico perde
seu valor pela possibilidade do fenmeno da anergia tuberculina.
Os sinais clnicos mais freqentes so a caquexia progressiva e a
tosse seca, curta e repetitiva. Animais tuberculosos, quando
submetidos marcha forada, tendem a posicionar-se atrs dos
demais, demonstrando cansao e baixa capacidade respiratria.
Pode ocorrer linfadenomegalia localizada ou generalizada.
Diagnstico Anatomopatolgico
A inspeo de carcaa ou a necropsia detalhada constituem
importantes ferramentas no diagnstico da tuberculose bovina.
As leses provocadas pelo M. bovis no so patognomnicas
da tuberculose bovina. Apresentam colorao amarelada em
bovinos, e ligeiramente esbranquiadas em bfalos. So ndulos
de 1 a 3 cm de dimetro ou mais, que podem ser confluentes, de
58
aspecto purulento ou caseoso, com presena de cpsula fibrosa,
podendo apresentar necrose de caseificao no centro da leso,
ou, ainda, calcificao nos casos mais avanados. Em 70% a 90%
dos casos, as leses encontram-se em linfonodos de cabea e trax,
e 66% dos animais necropsiados apresentam apenas uma nica
leso visvel. Em 95% dos casos, as leses esto localizadas em
linfonodos (mediastnicos, retrofarngeos, bronquiais, parotdeos,
cervicais, inguinais superficiais e mesentricos), pulmo e fgado.
Com menor freqncia, podem estar presentes em intestino e tecido
mamrio, ou em qualquer outro rgo ou tecido do animal.
Animais reagentes ao teste tuberculnico podem no
apresentar leses visveis a olho nu; isso no significa, porm, que
se trata de reao falso-positiva. As leses podem estar em estgios
iniciais de evoluo, ou simplesmente no terem sido encontradas
pela necropsia.
Fragmentos de tecido com leses sugestivas de tuberculose
(ndulos caseosos em linfonodos, pulmo, fgado, etc.) podem ser
enviados para exame histopatolgico em frasco de boca larga
(plstico ou vidro), hermeticamente fechado, imersos em soluo
de formaldedo a 10%, observando-se a proporo de uma parte
de amostra para 10 de formaldedo.
Diagnstico Bacteriolgico
O diagnstico definitivo da tuberculose realizado mediante
o isolamento e a identificao do agente por mtodos bacteriolgicos.
Amostras frescas podem ser fixadas em lmina e coradas pelo
mtodo de Ziehl-Neelsen para a pesquisa de bacilos lcool cido
resistentes (BAAR), contudo, a sensibilidade do mtodo baixa, e
um resultado positivo sugere fortemente tratar-se de micobactria,
mas no informa a espcie. Essa mesma colorao pode ser
empregada para colnias isoladas em meios de cultura. Muitas
caractersticas, inclusive a propriedade tintorial, superpem-se nos
gneros Mycobacterium e Nocardia, tornando difcil, em alguns
casos, a diferenciao entre ambos.
59
O diagnstico bacteriolgico por isolamento requer um longo
perodo de incubao (30 a 90 dias), pois o M. bovis cresce
lentamente em meios de cultura artificiais. Para permitir o
isolamento de qualquer bactria do gnero Mycobacterium sp,
recomenda-se a semeadura concomitante nos meios de cultura
Lwenstein-Jensen e Stonebrink-Lesslie.
As anlises bacteriolgicas completas s sero necessrias
nas seguintes situaes:
confirmao da presena de infeco tuberculosa em
bovinos de um pas ou regio onde no foi comprovada
anteriormente;
estudo de animais positivos ao teste tuberculnico, nos
quais no se observaram leses macroscpicas sugestivas
de tuberculose. Nesses casos, a pesquisa bacteriolgica
ser feita especialmente em amostras de linfonodos do
trato respiratrio e intestinal;
confirmao da presena de infeco em animais positivos
ao teste tuberculnico, com ou sem leses macroscpicas,
de uma propriedade considerada livre de tuberculose;
pesquisa de micobactrias em leses sugestivas de
tuberculose, encontradas durante a inspeo sanitria
post-mortem de animais provenientes de unidades de
criao monitoradas para tuberculose;
pesquisa de micobactrias em amostras de leite e de outros
produtos de origem animal;
necropsias de animais com reaes inespecficas, nos quais
so encontradas leses sugestivas de tuberculose.
Diagnstico Alrgico-cutneo
O diagnstico alrgico-cutneo com tuberculina o
instrumento bsico para programas de controle e erradicao da
tuberculose bovina em todo o mundo. Pode revelar infeces
incipientes a partir de 3 a 8 semanas da exposio ao
Mycobacterium, alcanando boa sensibilidade e especificidade e
60
sendo considerado pela OIE como tcnica de referncia. Para que
realmente funcione como ferramenta diagnstica em um programa
de controle, indispensvel que o procedimento seja padronizado
quanto produo das tuberculinas, equipamentos para realizao
das provas, tipos de provas e critrios de leitura.
Tuberculinas
A tuberculina pode ser definida como um extrato obtido de
filtrados de cultivos de Mycobacterium sp previamente esterilizados
pelo calor, para ser utilizado com o propsito de medir a hipersen-
sibilidade retardada causada pela infeco por micobactrias. A
tuberculina preparada pela primeira vez por Robert Koch, em
1890 atualmente denominada tuberculina velha (OT-Old
tuberculin).
Em 1934, Seibert desenvolveu a tuberculina conhecida como
PPD (Purified Protein Derivative), em que as protenas so separadas
do meio de cultura por precipitao, purificadas por lavagens com
cidos e fosfatos e diludas na concentrao adequada para uso.
No Brasil, a prova tuberculnica realizada com o PPD bovino,
produzido a partir da amostra AN5 de M. bovis, contendo 1 mg
de protena por mL (32.500 UI). No teste cervical comparativo,
utiliza-se tambm o PPD avirio, produzido a partir da amostra D4
de M. avium, contendo 0,5 mg de protena por mL (25.000 UI).
As tuberculinas devem ser mantidas sob a temperatura de 2 a 8 C
(no congelar) e tm validade de um ano aps a data de fabricao.
Os frascos precisam ser protegidos da luz solar direta durante os
trabalhos de campo. Uma vez aberto um frasco de tuberculina, seu
contedo deve ser utilizado num nico dia, descartando-se eventuais
sobras. O PPD bovino apresenta-se sob a forma lquida incolor e o
PPD avirio, sob a forma lquida com colorao vermelho claro.
62
H bovinos que, embora infectados, no reagem
tuberculinizao devido a uma deficincia temporria do sistema
imunitrio, induzida por inoculaes sucessivas de tuberculina ou
aplicao de altas concentraes do antgeno, denominada
dessensibilizao. um fenmeno de curta durao e cessa quando
a populao de linfcitos T restabelecida. Reaes falso-negativas
tambm podem ocorrer em tuberculinizaes prximas ao parto
ou em animais com alimentao deficiente. Em animais com
tuberculose generalizada, ou em estgios finais da doena, h um
excesso de antgeno circulante que induz uma imunossupresso
especfica e, por conseqncia, uma inibio da produo de
citocinas necessrias ativao de macrfagos participantes da
reao de hipersensibilidade retardada. Trata-se do fenmeno de
anergia referido em pginas anteriores.
63
Mtodos de Turberculinizao
Para o diagnstico de rotina da tuberculose bovina, a
tuberculinizao um mtodo rpido, seguro e econmico e serve
para pesquisar a sensibilidade dos animais s tubrculo-protenas
especficas. O mtodo preconizado o intradrmico nas suas trs
modalidades, ou seja, prega caudal, cervical simples e comparativo.
O teste da prega caudal o mtodo de execuo mais simples
e prtico e, portanto, quando h necessidade da realizao de um
teste de triagem, a escolha natural. importante lembrar que,
pela legislao, esse teste admitido para utilizao de rotina,
exclusivamente em estabelecimentos de criao especializados na
pecuria de corte.
Considera-se que a sensibilidade do teste cervical simples
maior do que a do teste da prega da cauda. Alm disso, menos
subjetivo, pois o resultado advm da tomada de medidas com o
cutmetro.
O teste cervical comparativo, com PPD bovino e avirio
aplicados simultaneamente, deve ser utilizado como teste
confirmatrio, por sua maior especificidade em relao aos testes
simples. Esse teste permite eliminar a maior causa de reaes falso-
positivas, que so as infeces por micobactrias ambientais. Esse
deve ser o teste de eleio para rebanhos com alta freqncia de
reaes inespecficas, evitando-se os prejuzos decorrentes da
eliminao de animais falso-positivos.
Controle da Tuberculose
Bibliografia
68
BERRADA, J.; BARAJAS-ROJAS, J.A. Control of bovine tuberculosis in
developing countries. In: THOEN, C. O.; STEELE, J. H. (Eds.). Mycobacterium
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M. bovis and pregnancy on immune responses and distribution of lesions.
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DOHERTY, M.L.; BASSET, H.F.; QUINN, P.J.; DAVIS, W.C.; KELLY, A.P.;
MONAGHAM, M.L. A sequential study of the bovine tuberculin reaction.
Immunology, v. 87, p. 9-14, 1996a.
69
DOHERTY, M.L.; MONAGHAM, M.L.; BASSET, H.F.; QUINN, P.J.; DAVIS,
W.C. Effect of dietary restriction on cell-mediated immune responses in
cattle infected with Mycobacterium bovis. Veterinary Immunology and
Immunopathology, v. 49, p. 307-320, 1996b.
PLACKETT, P.; RIPPER, J.; CORNER, L.A; SMALL, K.; WITTE, K.; MELVILLE,
L.; HIDES, S.; WOOD, P.R. An ELISA for the detection in anergic tuberculous
cattle. Australian Veterinary Journal, v. 66, p. 15-19, 1989.
73
O quadro abaixo mostra um exemplo hipottico de aplicao
de um teste diagnstico.
INFECO
Infectado No Infectado Total
Positivo (+) 45 (a) 38 (b) 83
TESTE
Negativo () 5 (c) 912 (d) 917
Total 50 950 1000 (N)
75
Quando a prevalncia da enfermidade inferior a 10%, o
VPN de um teste de sensibilidade apenas moderada (80%) muito
alto e tende a aumentar medida que a prevalncia da doena
diminui. O VPP segue trajetria inversa, sendo muito baixo quando
a prevalncia inferior a 10%, diminuindo ainda mais medida
que a prevalncia da doena tambm diminui. Em conseqncia,
num programa de erradicao baseado em teste e sacrifcio de
animais, a proporo de animais com reaes falso-positivas que
so sacrificados aumenta medida que a campanha avana e a
prevalncia da enfermidade diminui. Portanto, quando a prevalncia
da doena diminui, cresce a necessidade de diminuir a proporo
de reaes falso-positivas, o que conseguido por meio de ganhos
em especificidade dos mtodos diagnsticos. A interao da
especificidade do teste com a prevalncia da doena na
determinao do VPP ilustrada na Figura 2.
76
A proporo de falso-positivos bastante influenciada pela
especificidade do teste utilizado, qualquer que seja a prevalncia
da doena (Figura 2). Para valores de prevalncia muito baixos,
mesmo um teste de boa especificidade (99%) resulta em alta
proporo de falso-positivos. Assim sendo, quando o diagnstico
feito em populaes de baixa prevalncia, deve ser utilizado um teste
de especificidade prxima a 100%. Se no houver um nico teste
com essa caracterstica, podero ser empregados dois testes em
seqncia; o primeiro teste, ou de triagem, serve para detectar
animais reagentes, os quais so submetidos a novo teste para
diagnstico confirmatrio. O teste de triagem precisa ter boa
sensibilidade, ser barato e de fcil execuo. O teste confirmatrio
deve ter especificidade muito alta e tambm boa sensibilidade.
A realizao de testes em seqncia, quando se faz o teste
confirmatrio nos indivduos reagentes ao teste de triagem,
aumenta a especificidade do procedimento diagnstico e diminui
o nmero de falso-positivos.
Com esse objetivo, no controle da brucelose, utiliza-se o teste
do Antgeno Acidificado Tamponado como teste de triagem,
seguido de teste confirmatrio (2-Mercaptoetanol ou Fixao de
Complemento) nos animais reagentes. No controle da tuberculose,
o Teste na Prega Ano-caudal, com PPD bovina, pode ser utilizado
para triagem, seguido de Tuberculinizao Comparativa, com PPD
bovino e avirio, nos animais reagentes.
Uma vez confirmada a condio de foco de um rebanho,
necessrio eliminar todos os animais infectados. A experincia
mostra que esse processo mais difcil em rebanhos grandes do
que em rebanhos pequenos, dado que, quanto maior for o nmero
de animais infectados, maior ser o risco de no detectar todos
eles com apenas um teste. Por exemplo: com uma SEN individual
de 95% (muito boa), esse risco ser de 5% se houver apenas um
animal infectado; de 10% se houver dois animais infectados e de
40% se houver 10 animais infectados. Tal evidncia fundamentou
a deciso de alguns pases, como os EUA, de sacrificar todos os
77
animais quando uma grande parte do rebanho estivesse infectada.
Uma alternativa menos radical consiste em realizar testes
sistemticos em todo o rebanho, com intervalos peridicos, at
que no exista mais nenhum animal positivo. O saneamento ser
mais rpido e eficaz se forem utilizados testes de boa sensibilidade,
repetidos ao longo do tempo.
Em programas de erradicao da tuberculose bovina, quando
a prevalncia da enfermidade e o VPP so muito baixos, a vigilncia
epidemiolgica em locais de abate assume papel mais importante
do que o teste sistemtico de animais na propriedade. Em alguns
pases que atingiram prevalncia muito baixa (EUA, Austrlia e
Uruguai), a vigilncia nos matadouros foi o principal meio de
deteco de novos casos de tuberculose. Quando se descobre um
caso de tuberculose na inspeo de carnes, o servio de defesa
sanitria animal realiza uma investigao na propriedade de origem
do animal afetado. Trata-se de uma estratgia que tem sido bem
sucedida. Todavia, alguns aspectos devem ser realados:
1) quando a prevalncia baixa, o VPP da inspeo visual
igualmente baixo (muitas leses no so tuberculosas) e, portanto,
as leses devem ser enviadas para exame histopatolgico e/ou
microbiolgico;
2) a SEN da inspeo de rotina baixa (de acordo com alguns
autores, varia entre 33% e 67%), uma vez que muitos animais tm
apenas uma nica leso, de difcil deteco;
3) a vigilncia epidemiolgica em matadouros s pode
substituir o teste de tuberculinizao sistemtica quando todos os
animais da populao sob vigilncia so abatidos em
estabelecimentos com inspeo veterinria.
78
Concluso
Bibliografia
79
CORNER, L.A. Post mortem diagnosis of Mycobacterium bovis infection
in cattle. Veterinary Microbiology, v. 40, p. 53-63, 1994.
80
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
COLHEITA DE MATERIAL
PARA EXAME LABORATORIAL
Tuberculose
Em geral, as amostras de origem animal remetidas ao
laboratrio para diagnstico de tuberculose so linfonodos ou
partes de rgos/tecidos procedentes de matadouro sob inspeo
sanitria. So tambm provenientes de necropsias realizadas no
estabelecimento de criao por um mdico veterinrio.
Para avaliar melhor as leses dos rgos e/ou dos tecidos,
devem ser efetuados cortes durante a inspeo ou necropsia. Devem
ser colhidos preferencialmente linfonodos do trato respiratrio:
mediastinais (anteriores, posteriores e ventrais), bronquiais
(esquerdo, direito, dorsal ou mdio) e pulmonares. Observar a pleura
e o tecido pulmonar por palpao, a fim de constatar reas com
leses nodulares. Observar presena de leses tuberculosas nos
linfonodos mesentricos e leses hepticas. Deve-se inspecionar
ainda os linfonodos da cabea e os cervicais.
82
De preferncia, colher os fragmentos logo aps a morte do
animal. Retirar somente a leso de aspecto caseoso, evitando
resduos como, por exemplo, sangue e outros lquidos. importante
colher parte do tecido lesado e parte do tecido normal de uma
mesma pea, perfazendo um total de at 200 gramas. Enviar
tambm parte do material em soluo de formol a 10% para exames
histopatolgicos.
Brucelose
O material ideal para o isolamento de Brucella sp o
proveniente do aborto. Entre os materiais de eleio destacam-se:
Exsudato vaginal
A eliminao de B. abortus pode durar vrias semanas aps
o parto ou o aborto. O exsudato vaginal deve ser colhido mediante
o uso de suabes especiais ou pipetas de inseminao. Existem suabes
comerciais com meio de transporte que mantm as bactrias viveis
por perodos mais prolongados.
Leite
Antes da colheita, o bere precisa ser cuidadosamente lavado
e feita tambm a assepsia dos tetos. Colher em frascos esterilizados
83
cerca de 20 mL de leite de cada teto, desprezando-se os primeiros
jatos. Enviar o quanto antes ao laboratrio sob refrigerao (2 a
8C) ou congelado (-20C), caso permanea mais de 12 horas em
trnsito at o laboratrio, para evitar a proliferao de
contaminantes. Colher primeiro dos tetos que esto afastados do
operador. Fazer a assepsia das mos antes de realizar a colheita em
outro animal.
Exame Histopatolgico
Sangue
A colheita de sangue para a obteno de soro com o qual
sero realizados os testes para o diagnstico da brucelose, alm de
ser mais simples, oferece menos risco de contgio ao profissional, se
comparada com a colheita de material para o exame bacteriolgico.
84
O material preferencialmente utilizado para colher a amostra
deve ser constitudo de tubos que contm vcuo (sem
anticoagulante) e siliconizados, que facilitam a retrao do cogulo,
com agulhas individuais e descartveis. Tubos e agulhas
convencionais podem tambm ser utilizados; apresentam, porm,
o inconveniente de necessitar de limpeza, de preparao e
distribuio, alm de acrescentarem risco biolgico na manipulao.
As tarefas da colheita exigem o cumprimento de algumas
normas, que podem ser assim resumidas:
a amostra de sangue colhida deve cobrir no mnimo 50%
da capacidade de um tubo de 10 mL;
para se obter um bom soro, os tubos com sangue devem
ser mantidos temperatura ambiente por, no mnimo, 2
ou 3 horas, ao abrigo da luz, at que ocorra a coagulao
sangnea. Aps a separao do cogulo, transferir o soro
para um frasco limpo e seco. No usar frascos ou tubos
midos, porque podem hemolisar o sangue;
os frascos contendo o soro devero ser enviados o quanto
antes ao laboratrio e em horrio de recepo previamente
estabelecido; evita-se, assim, a deteriorao do material.
Caso sejam enviados ao laboratrio em algumas horas,
devero ser refrigerados, ou congelados;
os tubos sero identificados de tal forma que o nmero
corresponda ao especificado na folha de campo;
nas folhas de campo constaro somente os dados
estritamente necessrios, tais como nome do proprietrio,
nmero de animais na propriedade, nmero total de
amostras colhidas, espcie, sexo, situao relativa
vacinao (data da vacinao), e outros dados
considerados de interesse diagnstico.
86
Identificao e Encaminhamento do
Material de Necropsia
Origem:
Lacre:
Material enviado:
87
Modelo de Etiqueta 2 Endereo do laboratrio
Endereo:
Municpio: UF:
CEP:
Telefone: ( ) Fax: ( )
E-mail:
88
Modelo de Formulrio 1 Encaminhamento de amostras para
diagnstico de brucelose
ESPAO RESERVADO PARA O LABORATRIO
I - DADOS DO REMETENTE
1. Local:
2. Registro: (este campo destina-se a peas originrias de matadouros
sob Inspeo Federal, Estadual ou Municipal)
3. Endereo:
Rua, Av.: n
Complemento: Bairro:
Municpio: UF: CEP:
Telefone: Fax:
E-mail:
II - DADOS DA AMOSTRA
1. Origem do animal (propriedade, proprietrio, localizao, Municpio, Estado):
89
Modelo Formulrio 2 Encaminhamento de amostras para
diagnstico de tuberculose
ESPAO RESERVADO PARA O LABORATRIO
I - DADOS DO REMETENTE
1. Local:
2. Registro: (este campo destina-se a peas originrias de matadouros
sob Inspeo Federal, Estadual ou Municipal)
3. Endereo:
Rua, Av.: n
Complemento: Bairro:
Municpio: UF: CEP:
Telefone: Fax:
E-mail:
II - DADOS DA AMOSTRA
1. Origem do animal (propriedade, proprietrio, localizao, Municpio, Estado):
90
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Diagnstico Sorolgico
Antgenos
Devero ser utilizados somente aqueles aprovados e
controlados pelo MAPA. Os antgenos devero ser transportados e
conservados em temperatura de, no mnimo, +2C e de, no
mximo, +8C, bem como protegidos da luz solar direta.
Testes
Teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT)
Material
Antgeno para AAT
Soros a testar
Pipetas de Bang
Micropipetador de 30 L ou de volume ajustvel
Ponteiras
Placas com quadrados de 4 cm delimitados
91
Misturadores de plstico ou de metal
Caixa com luz indireta para leitura
Soro controle positivo
Soro controle negativo
Agitador de placas (opcional)
Tcnica
1) Equilibrar os soros e o antgeno temperatura ambiente,
por, pelo menos, 30 minutos. Caso os soros estejam congelados, o
perodo de equilbrio temperatura ambiente deve ser maior.
Homogeneizar os soros antes de realizar a prova.
92
2) Preencher os protocolos de prova, identificando a
localizao de cada soro.
3) Ao utilizar o micropipetador de 30 L ou a pipeta de Bang
dotada de uma pra de borracha, ou outro dispositivo de pipetagem
que evite o uso da boca, dispensar 30 L (ou da marca de 0,04 at
0,01 na pipeta de Bang) de soro por rea da placa; depositar essa
quantidade sobre a placa de vidro, encostando nela a ponta da
pipeta em ngulo de 45.
4) Agitar suavemente o antgeno e colocar uma gota (30 L)
ao lado do soro, sem ser nele misturado.
5) Misturar, por meio de misturador simples ou mltiplo, o
soro e o antgeno com movimentos circulares, de modo a obter
um crculo aproximado de 2 cm.
6) Agitar a placa com movimentos oscilatrios, numa
freqncia de, aproximadamente, 30 movimentos por minuto, de
modo a permitir que a mistura soro-antgeno flua lentamente dentro
de cada crculo; a placa deve ser agitada continuamente por 4
minutos.
7) Colocar a placa na caixa de leitura com luz indireta e realizar
a leitura.
8) Anotar os resultados.
9) Desconsiderar as reaes de aglutinao que ocorrerem
aps os 4 minutos.
Tcnica
1) Equilibrar as amostras de leite e o antgeno temperatura
ambiente por, pelo menos, 60 minutos.
2) Misturar bem as amostras de leite.
3) Colocar 1 mL de leite em tubos 10 mm x 100 mm. A
coluna de leite deve ter, no mnimo, 2 cm.
Obs.: Em funo do tamanho do rebanho, a quantidade de
leite a ser utilizada no teste (empregando-se a mesma quantidade
de antgeno, 30 L) deve ser aumentada para 2 mL ou 3 mL,
conforme as recomendaes do item 8 das Precaues na execuo
do teste.
4) Adicionar ao leite uma gota (30 L) de antgeno.
5) Tampar o tubo e misturar por inverso vrias vezes.
6) Deixar em repouso por 1 minuto e verificar se a mistura
est homognea. No deve sobrar antgeno nas paredes do tubo.
7) Incubar por 1 hora a 37C.
8) Proceder leitura.
9) Anotar os resultados.
95
Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME)
Material
Antgeno para a soroaglutinao lenta em tubo
2-Mercaptoetanol
Salina 0,85%
Salina 0,85%, fenicada 0,5%
Amostras de soro a testar
Soro controle positivo com ttulo alto
Soro controle positivo com ttulo mdio
Soro controle positivo com ttulo baixo
Soro controle negativo
Tubos de 10 mm x 75 mm ou 10 mm x 100 mm
Grade para tubos
Pipetas de Bang ou micropipetadores de volume ajustvel
Dispensador automtico de 1 mL
Dispensador automtico de 2 mL
Pipetas de 10 mL
Caixa com luz indireta para a leitura
Estufa a 37C
Vidraria para diluio dos reagentes
96
5) O 2-ME txico para o ser humano e deve ser manuseado
em capela de exausto.
6) Em cada jornada de trabalho, deve ser includo pelo menos
um soro selecionado especialmente, com alto contedo de anticorpos
IgM anti-Brucella e que no contenha IgG detectvel pelo teste do
2-ME, bem como outro soro reagente na SAL e 2-ME.
7) Em cada teste sero includos tambm tubos de controle
de antgeno, usando-se soros testados positivos de ttulo conhecido
e soro negativo.
8) Foi estabelecido que a incubao a 37C durante 48 3
horas suficiente para se obter o mximo de aglutinao num
soro de baixo contedo de aglutininas. Esse perodo de incubao
suficiente para o diagnstico de rotina.
9) O Teste do 2-Mercaptoetanol incubado e lido junto com
o Teste de Soroaglutinao (lenta) em Tubos. Ocasionalmente, o
tubo da diluio 1:25 pode estar um pouco opaco na prova do 2-
ME, ainda que os tubos subseqentes estejam claros. Tal fato no
deve ser considerado como resultado negativo do teste.
10) A diferena de ttulos entre ambos os testes (caso ela
ocorra) interpretada como a capacidade aglutinante do soro em
decorrncia de anticorpos da classe IgM. A presena de IgG
geralmente est associada com infeco ativa. Assim sendo, toda
reao positiva no teste do 2-ME (a partir de 1:25) deve ser
considerada como indicativa de infeco. Em animais vacinados,
predominam aqueles anticorpos sensveis ao 2-ME (IgM),
apresentando usualmente resultados negativos.
11) Animais no incio de infeco apresentam a maioria
dos anticorpos da classe IgM, apresentando-se negativos prova
do 2-ME.
Tcnica
1) Diluir o antgeno para soroaglutinao lenta em tubos
100 vezes em soluo salina a 0,85% contendo 0,5% de fenol.
Concentrao final 0,045.
97
2) Diluir o antgeno para soroaglutinao lenta em tubos 50
vezes em soluo salina a 0,85% sem adio de fenol. Concentrao
final 0,090%.
3) Preparar soluo de 2-ME a 0,1 M misturando-se 7,8 mL
de 2-ME a 992,20 mL de soluo salina a 0,85% sem fenol, ou
volumes menores, proporcionalmente.
4) Para cada amostra de soro a testar, colocar, em uma
estante, duas fileiras de quatro tubos.
5) Identificar o primeiro tubo de cada fileira com o nmero
correspondente ao soro a testar.
6) A primeira fileira corresponde s quatro diluies do soro
do teste de soroaglutinao lenta em tubos e deve ser marcada
com uma letra T. A outra fileira, em que se far o teste do 2-ME,
deve ser marcada com a letra M.
7) Com uma pipeta de Bang, dotada de uma pra de
borracha, ou outro dispositivo de pipetagem que evite o uso da
boca, carrega-se o soro at passar um pouco da graduao superior.
Com um papel absorvente, limpa-se o extremo da pipeta;
mantendo-se esta em posio vertical sobre a parede do tubo que
contm a amostra, deixa-se escorrer o soro at que o fundo do
menisco no interior da pipeta esteja nivelado com a sua graduao
superior.
8) Com a pipeta no fundo do primeiro tubo da primeira fileira,
deixa-se fluir 0,08 mL de soro. No segundo tubo, deposita-se 0,04
mL, no terceiro, 0,02 mL e no quarto, 0,01 mL.
9) Repete-se o procedimento descrito para depositar as
mesmas quantidades de soro na segunda fileira de tubos (srie do
2-ME).
10) Para todas as amostras de soro, repete-se o procedimento
de forma similar, pipetando os soros para cada duas fileiras de
tubos adequadamente identificados.
11) Incluir os soros controle positivos com atividade aglu-
tinante conhecida.
12) Incluir o soro controle negativo no teste do 2-ME.
98
13) Com o dispensador automtico de 2 mL ou pipeta de
10mL, agregam-se a cada um dos quatro tubos das fileiras T, 2 mL
do antgeno diludo 1:100 (0,045% de clulas) em salina fenicada
(0,5% de fenol).
14) Com o dispensador automtico de 2 mL (regulado para
1 mL), ou pipeta de 10 mL, agrega-se 1 mL de soluo de 2-ME
0,1 M (diludo em soluo salina sem fenol) a cada um dos tubos
das fileiras M.
15) Mistura-se bem, agitando a estante.
16) Deixar as estantes com as amostras em repouso durante
30 minutos temperatura ambiente.
17) Aps os 30 minutos, empregando-se outro dispensador
automtico, ou outra pipeta de 10mL, agrega-se a cada tubo da
fileira M, 1 mL do antgeno diludo 1:50 (0,09 % de clulas) em
soluo salina fisiolgica (sem fenol). A concentrao final do
antgeno na soluo ser 0,045% e a do 2-ME ser de 0,05M.
18) Mistura-se bem, agitando a estante.
19) Incubar a 37C por 48 3 horas.
20) A leitura do teste feita atravs de uma fonte de luz
indireta contra um fundo escuro e opaco, com uma forte luz que
atravesse os tubos. As fontes de luz estranhas devem ser reduzidas.
As interpretaes baseiam-se no grau de aglutinao do antgeno
e na firmeza dos grumos, aps agitao suave dos tubos.
21) Anotar os resultados. Se houver interesse na determinao
do ttulo final de um soro, poder ser empregado o mtodo de
diluies seriadas (dobradas).
25 I
25 +
50 I + +
50 + + +
100 I + + + +
100
Quadro 2 Interpretao da prova do 2-ME para fmeas no
vacinadas e machos com idade superior a 8 meses
2-ME
NR 25 I 25 50 I 50 100 I 100 200 I 200
SAL
NR
25 I
25 +
50 I + +
50 Inc Inc + + +
101
Teste do Antgeno
Acidificado
Tamponado
Reao Positiva
Tubo da esquerda:
negativo
Tubo da direita:
positivo
Teste do
2-Mercaptoetanol
1o Tubo da esquerda:
positivo
Teste de Fixao de
Complemento
Negativo Positivo
102
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Diagnstico Alrgico
Tuberculinas
Devero ser utilizadas somente as tuberculinas PPD (Purified
Protein Derivative Derivado Protico Purificado) bovina e aviria,
produzidas segundo as normas do Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento (MAPA), sendo as partidas controladas e
aprovadas pelo Ministrio. As tuberculinas devero ser
transportadas e conservadas em temperatura de, no mnimo, +2C
e de, no mximo, +8C, e protegidas da luz solar direta. O contedo
dos frascos, aps sua abertura, dever ser usado no mesmo dia.
Equipamentos
Para a realizao dos testes diagnsticos de tuberculose, ser
obrigatria a utilizao de seringas e cutmetros adequados:
seringas: seringas multidoses calibradas para 0,1 mL, com
agulhas de calibre 22 G x 3 mm ou 4 mm de comprimento;
cutmetro: cutmetros especficos para tuberculinizao
de bovdeos.
Realizao do teste
Para a tuberculinizao simples, a inoculao de tuberculina
PPD bovina ser feita na regio cervical, no tero mdio, e a uma
distncia igual das bordas superior e inferior do pescoo, ou
escapular, na regio da espinha da escpula e a 20 cm da cernelha.
A regio ser demarcada por tricotomia, devendo-se evitar
local com leso ou ndulos de parasitos. A espessura da dobra da
pele ser determinada com o auxlio de cutmetro antes da inoculao,
e as medidas sero anotadas no formulrio para exame de brucelose
e tuberculose, de acordo com as normas para habilitao.
A tuberculina PPD bovina ser inoculada por via intradrmica
na dosagem de 0,1 mL. A formao de uma ppula no local indica
que a inoculao foi correta.
104
Tricotomia
Inoculao
intradrmica de
tuberculina
(PPD bovino)
105
Teste Cervical Comparativo (TCC)
o teste confirmatrio utilizado em animais reagentes ao
Teste Cervical Simples (TCS) e ao Teste da Prega Caudal (TPC).
tambm recomendado como teste de rotina para estabelecimentos
de criao com ocorrncia de reaes inespecficas, estabeleci-
mentos certificados como livres e para estabelecimentos de criao
de bubalinos, visando garantir boa especificidade diagnstica.
Realizao do teste
Para o TCC, as tuberculinas sero inoculadas por via
intradrmica na dosagem de 0,1 mL, sendo o PPD avirio inoculado
cranialmente e o PPD bovino caudalmente. A formao de uma
ppula no local indica que a inoculao foi correta.
A inoculao de tuberculina PPD aviria ser feita na regio
cervical, na juno do tero anterior e do tero mdio e a uma
distncia igual das bordas superior e inferior do pescoo, ou
escapular, frente da espinha da escpula, e a 20 cm da cernelha.
A tuberculina PPD bovina ser inoculada na regio cervical, na
juno do tero mdio e tero posterior e a uma distncia igual
das bordas superior e inferior do pescoo, ou escapular, atrs da
espinha da escpula, e a 20 cm da cernelha, havendo uma distncia
mnima de 15 a 20 cm entre as duas inoculaes. Recomenda-se
que a inoculao seja efetuada de um mesmo lado de todos os
animais do estabelecimento de criao.
Os locais sero demarcados por tricotomia, devendo-se evitar
reas com leso ou ndulos de parasitos. A espessura da dobra da
pele ser determinada com o auxlio de cutmetro antes da
inoculao. As medidas da dobra da pele do local da inoculao
da tuberculina PPD aviria e da tuberculina PPD bovina sero
anotadas nos respectivos campos no formulrio para exame de
brucelose e tuberculose.
106
Leitura e interpretao dos resultados
Aps 72 6 horas da inoculao, ser realizada nova medida
da dobra da pele no local de inoculao da tuberculina PPD aviria
e da tuberculina PPD bovina, sendo os resultados anotados nos
respectivos campos do formulrio para exame de brucelose e
tuberculose.
O aumento da espessura da dobra da pele ser assim calculado:
da medida da dobra da pele 72 horas aps a inoculao, subtrai-se
a medida da dobra da pele tomada no dia da inoculao para a
tuberculina PPD aviria (A) e a tuberculina PPD bovina (B). Os
resultados sero anotados nos respectivos campos no formulrio
para exame de brucelose e tuberculose. A diferena de aumento da
dobra da pele provocado pela inoculao da tuberculina PPD bovina
(B) e da tuberculina PPD aviria (A) ser calculada subtraindo-se
A de B. Anota-se o valor no campo respectivo do formulrio para
exame de brucelose e tuberculose. Os resultados das diferenas
(B A) sero interpretados de acordo com os critrios definidos
na Tabela 4 do Regulamento Tcnico do PNCEBT (ver pgina 157).
cm
15 a 20
107
Inoculao intradrmica de tuberculina (PPD avirio):
formao de ppula
Inoculao
intradrmica de
de tuberculina
(PPD bovino)
Reao
tuberculnica
positiva
Reao
inespecfica
108
Teste da Prega Caudal (TPC)
Esse teste s poder ser empregado em rebanhos de corte
como prova de triagem ou como monitoramento.
Realizao do teste
A tuberculina PPD bovina ser inoculada por via intradrmica
na dosagem de 0,1 mL, 6 cm a 10 cm da base da cauda, na juno
da pele pilosa e da pele glabra. Antes da inoculao, o local deve
estar limpo. A formao de uma ppula no local indica que a
inoculao foi correta. A inoculao da tuberculina PPD poder ser
feita na prega caudal de quaisquer dos lados; recomenda-se,
todavia, que, para um determinado rebanho, seja utilizado o mesmo
lado para inoculao.
109
110
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
ELIMINAO DE ANIMAIS
MTODOS DE DESINFECO
113
aradura ou revolvimento da terra para que as camadas superficiais
do solo entrem em contato e misturem-se adequadamente cal.
Em seguida, o solo dever ser nivelado e compactado com rolo ou
socador, a fim de criar condies anaerbicas nas suas camadas
mais profundas.
Um detalhe bastante importante a escolha do princpio
ativo. Os Quadros 1, 2 e 3 listam os desinfetantes mais adequados
e orientam quanto melhor forma de aplic-los.
Instalaes m2 1
Esterco lquido L 1
Pisos de terra m2 5
Utenslios kg 2
Roupas de trabalho kg 5
Veculos em geral m 1
114
Quadro 2 Desinfetantes utilizados em casos de brucelose bovina
Tempo de Temperatura
Desinfetante Concentrao Uso indicado
exposio de utilizao
Cal (hidrxido
15% 1 hora Ambiente Instalaes, solo
de clcio)
Cresis 5% 1 hora Ambiente Instalaes
Fenol 1% 1 hora 37C Instalaes
Instalaes,
Formol 5%1 1 hora Ambiente
utenslios e roupas
Hipoclorito Instalaes e
2,5% 1 hora Ambiente
de clcio utenslios
Hipoclorito Instalaes e
2,5% 1 hora Ambiente
de sdio utenslios
Instalaes e
Soda custica 2% 3% 3 horas 60C
utenslios
Fonte: Adaptado de Russel et al. (1984).
1
Equivalente a 2% de formaldedo
Bibliografia
115
116
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
118
10. QUAIS SO OS CUIDADOS NA APLICAO DA VACINA?
Por ser uma vacina viva e patognica para o homem, deve
ser manuseada com cuidado, evitando-se a contaminao. Portanto,
recomenda-se o uso de culos e luvas de proteo. Aps o uso, os
frascos, as aguhas e seringas devem ser esterilizados e descartados
adequadamente.
119
animal poder contatar o mdico veterinrio cadastrado sempre
que houver necessidade de fiscalizar e monitorar as aes, ou para
fornecer informaes oficiais.
121
23. QUAIS SO AS TUBERCULINAS UTILIZADAS?
Para o Teste Cervical Simples (TCS) e o Teste da Prega Caudal
(TPC) o PPD bovino.
Para o Teste Cervical Comparativo (TCC) so os PPD bovino e
PPD avirio.
Diagnstico de Brucelose
124
Diagnstico de Tuberculose
126
Esquema 2
Diagnstico da TTuberculose
uberculose
127
Destino dos Animais Reagentes Positivos
128
Trnsito Interestadual e Aglomeraes de
Bovinos e Bubalinos (Feiras e Exposies)
51. OBRIGATRIA?
No. A certificao voluntria.
Esquema 3
Etapas de saneamento Brucelose
Esquema 4
Etapas de saneamento Tuberculose
61. OBRIGATRIA?
No. A adeso voluntria.
135
de diagnstico para tuberculose em todas as fmeas a partir de 24
meses de idade e em todos os machos reprodutores. Todos os
animais reagentes positivos devem ser destinados ao sacrifcio ou
destruio.
136
aps a chegada no destino, num intervalo mnimo de 60 dias entre
testes. Os animais devem ser mantidos isolados at o segundo
resultado negativo.
Esquema 5
Etapa de testes para obteno do certificado de
monitorado para Brucelose:
137
Esquema 6
Etapa de testes para obteno do certificado de
monitorado para tuberculose:
138
Seleo de Animais a Serem Testados
139
Uma vez separados os animais na faixa etria especfica para
colheita de sangue, necessrio fazer uma seleo aleatria dos
que sero testados. Para tanto, dever ser empregado o mtodo
exemplificado no quadro abaixo, conhecido como amostragem
aleatria sistemtica.
140
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
LEGISLAO PNCEBT
Contedo
Instruo Normativa Ministerial no 02/2001 ................ 141
Institui o PNCEBT
Instruo Normativa SDA no 06/2004 ............................. 142
Regulamento Tcnico do PNCEBT
Captulo I
Das Definies
145
XXVI prevalncia: nmero total de animais infectados em
um determinado momento, dividido pelo nmero total de animais
em risco de adquirir a infeo, no mesmo momento;
XXVII incidncia: nmero de novos casos de animais
infectados em uma determinada populao, durante um perodo
de tempo especificado;
XXVIII sensibilidade de diagnstico: capacidade de um teste
de diagnstico classificar como positivos animais infectados;
XXIX especificidade de diagnstico: capacidade de um teste
de diagnstico classificar como negativos animais no infectados.
Captulo II
Dos Objetivos do Programa e da Estratgia de Atuao
Captulo III
Da Vacinao Contra a Brucelose
Art. 7 obrigatria a vacinao de todas as fmeas das
espcies bovina e bubalina, na faixa etria de trs a oito meses.
1 A marcao das fmeas vacinadas obrigatria,
utilizando-se ferro candente, no lado esquerdo da cara, com um V,
conforme figura a seguir, acompanhado do algarismo final do ano
de vacinao.
Captulo IV
Da Produo, Controle e Comercializao de Vacinas
Contra a Brucelose
Captulo VI
Do Diagnstico Indireto da Brucelose
151
Tabela 1 Interpretao do teste do 2-ME para fmeas com idade
igual ou superior a 24 meses, vacinadas entre trs e oito
meses de idade
152
II utilizado para o trnsito internacional de animais;
III utilizado para teste de animais reagentes ao teste do
AAT ou de animais que apresentaram resultado inconclusivo ao
teste do 2-ME.
Captulo VII
Da Produo, Controle e Distribuio de Tuberculinas
Captulo VIII
Do Diagnstico Indireto da Tuberculose
Caractersticas da reao
Outras
B (mm) Sensibilidade Consistncia Interpretao
alteraes
0 a 1,9 negativo
2,0 a 3,9 pouca dor endurecida delimitada inconclusivo
exsudato,
2,0 a 3,9 muita dor macia positivo
necrose
> 4,0 positivo
B - A (mm) Interpretao
B < 2,0 negativo
B < A <0 negativo
B > A 0,0 a 1,9 negativo
B > A 2,0 a 3,9 inconclusivo
B > A > 4,0 positivo
157
Captulo IX
Dos Animais Reagentes Positivos aos Testes de
Diagnstico para Brucelose ou Tuberculose
Art. 34. Animais reagentes positivos a teste de diagnstico
para brucelose ou tuberculose sero marcados a ferro candente
no lado direito da cara com um P contido num crculo de oito
centmetros de dimetro, conforme figura a seguir.
Captulo X
Da Habilitao e da Capacitao de Mdicos Veterinrios
Captulo XI
Do Reconhecimento de Cursos de Treinamento para
Habilitao e Capacitao de Mdicos Veterinrios
Art. 42. As instituies de ensino ou pesquisa em medicina
veterinria interessadas em oferecer Cursos de Treinamento em
Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose, com
o objetivo de capacitar e permitir a habilitao de mdicos veterinrios
que desejem participar do Programa Nacional de Controle e
Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal devero preencher
todos os requisitos definidos pelo Departamento de Defesa Animal.
Captulo XII
Do Credenciamento de Laboratrios para o Diagnstico
de Brucelose e de Tuberculose
Art. 47. O Departamento de Defesa Animal credenciar
laboratrios privados, aos quais sero delegadas funes de
diagnstico para brucelose ou tuberculose, cabendo-lhe determinar
quais os testes de diagnstico que sero realizados nesses laboratrios
e quais os requisitos necessrios para obter o credenciamento.
Captulo XIII
Dos Laboratrios de Referncia
Art. 49. O Departamento de Defesa Animal designar
laboratrios de referncia para brucelose e tuberculose que devero:
I ser responsveis pela produo de antgenos de brucelose
e tuberculinas de referncia ou para utilizao em programas ou
em situaes excepcionais de interesse do Departamento de Defesa
Animal;
II realizar tcnicas diretas e indiretas de diagnstico para
brucelose e tuberculose em situaes a serem definidas pelo
Departamento de Defesa Animal;
III efetuar o controle oficial das partidas de antgenos de
brucelose e tuberculinas produzidas no pas;
IV controlar a qualidade das vacinas comerciais contra a
brucelose;
V realizar o isolamento e a caracterizao epidemiolgica
de amostras de campo em situaes a serem definidas pelo
Departamento de Defesa Animal;
161
VI executar e colaborar em trabalhos de pesquisa e avaliar
novos mtodos de diagnstico e novas vacinas.
Captulo XIV
Das Disposies Gerais para Estabelecimento de Criao
Certificado, ou em Certificao, para a Condio de Livre
de Brucelose e de Tuberculose
163
Art. 55. O mdico veterinrio oficial poder, em qualquer
momento e sem nus para o proprietrio, colher material biolgico
para testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose e
acompanhar ou realizar testes de diagnstico para tuberculose,
com o objetivo de verificar e validar a condio sanitria do
estabelecimento de criao certificado, ou em certificao.
Captulo XV
Do Saneamento para Certificao de Estabelecimento
de Criao Livre de Brucelose
164
Captulo XVI
Da Certificao de Estabelecimento de
Criao Livre de Brucelose
Captulo XVII
Do Saneamento para Certificao de Estabelecimento
de Criao Livre de Tuberculose
Captulo XVIII
Da Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de
Tuberculose
Captulo XIX
Da Certificao de Estabelecimento de Criao
Monitorado para Brucelose e Tuberculose
169
Art. 75. Aps o primeiro teste por amostragem, especificado
no art. 74, o estabelecimento de criao dever manter rotina de
diagnstico, realizando reteste peridico tambm por amostragem,
nas seguintes condies:
I os testes de diagnstico para brucelose devem ser
realizados num intervalo de 10 a 12 meses;
II os testes de diagnstico para tuberculose devem ser
realizados num intervalo de 10 a 12 meses, at obter-se dois
resultados negativos consecutivos em todos os animais testados,
passando ento a ser realizados num intervalo de 18 a 24 meses;
III o reteste peridico ser realizado de acordo com a
Tabela 6:
172
permanecer isolados desde o ingresso no estabelecimento at o
segundo resultado negativo;
c) os testes sero realizados por mdico veterinrio habilitado.
Captulo XX
Do Controle do Trnsito de Bovinos e Bubalinos
Captulo XXI
Da Participao em Exposies, Feiras, Leiles
e Outras Aglomeraes de Animais
Captulo XXII
Do Papel do Servio de Inspeo Oficial
MAAO TADANO
Publicada no DOU n 48, de 11 de maro de 2003, Seo I p. 8
178
Considerando que o resultado do inqurito soroepidemiol-
gico para brucelose bovina, realizado em 2002 pelas autoridades
sanitrias do Estado de Santa Catarina, revelou prevalncia muito
baixa de propriedades e animais infectados por essa doena;
Considerando que diante da prevalncia encontrada a
vacinao no trar efeitos benficos e ainda que o uso da vacina
elaborada com amostra B19 possa interferir nos resultados dos
testes de diagnstico, recurso sistematicamente utilizado em reas
em processo de erradicao, e o que consta do Processo n
21000.013020/2003-71, resolve:
180
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
SFA/AC
SFA/AC ACRE
RODOVIA AC-40, 793 SEGUNDO DISTRITO
69901-180 RIO BRANCO/AC
TEL: (68) 3212-1300 / 1324 FAX: 3212-1313 / 1318
SFA/AL
SFA/AL ALAGOAS
AVENIDA FERNANDES LIMA, 72
BAIRRO FAROL
57050-000 MACEI/AL
TEL: (82) 3315-7005 / 7000 FAX: 3221-7047 / 3315-7026
SFA/AP
SFA/AP AMAP
RUA TIRADENTES, 469 BAIRRO CENTRAL
68906-380 MACAP/AP
TEL: (96) 3223-3075 FAX: 3222-4467
SFA/AM
SFA/AM AMAZONAS
RUA MACEI, 460 ADRIANPOLIS
69057-010 MANAUS/AM
TEL: (92) 3232-8073 / 6129 FAX: 3232-8073
SFA/BA
SFA/BA BAHIA
LARGO DOS AFLITOS, S/N CENTRO
40060-030 SALVADOR/BA
TEL: (71) 3320-2406 / 7436 FAX: 3320-7403
181
SFA/CE CEAR
AV. DOS EXPEDICIONRIOS, 3.442 BENFICA
60410-410 FORTALEZA/CE
TEL: (85) 3455-9208 / 9248 FAX: 3455-9268
SFA/DF
SFA/DF DISTRITO FEDERAL
SBN QUADRA 01, BLOCO D, 5 ANDAR
ED. PALCIO DO DESENVOLVIMENTO
70057-900 BRASLIA/DF
TEL: (61) 3329-7119 / 7118 FAX: 3326-2565
SFA/ES
SFA/ES ESPRITO SANTO
AV. NOSSA SENHORA DOS NAVEGANTES, 495, 8 ANDAR
EDIFCIO CENTRO EMPRESARIAL ENSEADA
ENSEADA DO SU
29050-420 VITRIA/ES
TEL: (27) 3137-2720 / 2732 FAX: 3137-2747
SFA/GO
SFA/GO GOIS
PRAA CVICA, 100, 6 ANDAR
CX. POSTAL 149
74003-010 GOINIA/GO
TEL: (62) 3221-7282 FAX: 3221-7277
SFA/MA
SFA/MA MARANHO
PRAA DA REPBLICA, 147 BAIRRO DIAMANTE
65020-150 SO LUS/MA
TEL: (98) 2106-1961 / 1965 FAX: 2106-1969
SFA/MG
SFA/MG MINAS GERAIS
AV. RAJA GABAGLIA, 245 CIDADE JARDIM
30380-090 BELO HORIZONTE/MG
TEL: (31) 3250-0416 / 0417 FAX: 3250-0405
SFA/MT
SFA/MT MATO GROSSO
ALAMEDA DR. ANNIBAL MOLINA, S/N PORTO
78115-140 VRZEA GRANDE/MT
TEL: (65) 3685-5598 / 1952 FAX: 3685-1145
182
SFA/MS MATO GROSSO DO SUL
RUA DOM AQUINO, 2.696
79002-970 CAMPO GRANDE/MS
TEL: (67) 3325-7100 / 8866 FAX: 3325-7666
SFA/P
SFA/PA
A/PA PAR
AV. ALMIRANTE BARROSO, 5.384 SOUZA
66610-000 BELM/PA
TEL: (91) 3214-8648 / 8647
SFA/PB
SFA/PB PARABA
BR-230, KM 14, ESTRADA JOO PESSOA/CABEDELO
58310-000 CABEDELO/PB
TEL: (83) 3246-1235 FAX: 3246-2535
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SFA/PE PERNAMBUCO
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50630-260 RECIFE/PE
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SFA/PI
SFA/PI PIAU
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SFA/PR PARAN
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82820-000 CURITIBA/PR
TEL: (41) 3361-4000 / 4082 FAX: 3366-3260
SFA/RJ
SFA/RJ RIO DE JANEIRO
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20081-250 RIO DE JANEIRO/RJ
TEL: (21) 2253-7507 / 2291-4141 FAX: 2253-8182
SFA/RN
SFA/RN RIO GRANDE DO NORTE
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59010-000 NATAL/RN
TEL: (84) 3221-1741 / 1742 FAX: 3221-5698
183
SFA/RO RONDNIA
BR-364, KM 5,5
78913-770 PORTO VELHO/RO
TEL: (69) 3216-5600 / 5610 FAX: 3222-2460
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77015-202 PALMAS/TO
TEL: (63) 3219-4300 / 4330 FAX: 3219-4305
184
ANOTAES
185
ANOTAES
186
ANOTAES
187
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
188
Assessoria de Comunicao Social