ATUALIDADES EM QUMICA

Ana Luiza G. Degani

Quezia B. Cass
Paulo C. Vieira

A seo "Atualidades em qumica" procura apresentar assuntos que compostos, separando-se as subs-
mostrem como a qumica uma cincia viva, seja com relao a tncias indesejveis e para a separa-
novas descobertas, seja no que diz respeito sempre necessria o dos componentes de uma mistura.
redefinio de conceitos. As diferentes formas de cromato-
Este artigo apresenta os conceitos bsicos da cromatografia. Os grafia podem ser classificadas consi-
derando-se diversos critrios, sendo
diferentes tipos de cromatografia so descritos e classificados
alguns deles listados abaixo:
considerando-se a forma fsica do sistema cromatogrfico
empregado, a fase mvel/estacionria utilizada ou o modo de 1. Classificao pela forma fsica do
separao. Especial nfase dada cromatografia em camada sistema cromatogrfico
delgada, cromatografia lquida clssica e de alta eficincia e Em relao forma fsica do siste-
cromatografia gasosa de alta resoluo. ma, a cromatografia pode ser subdivi-
dida em cromatografia em coluna e
cromatografia, slica, fase mvel, fase estacionria 21
cromatografia planar. Enquanto a cro-
matografia planar resume-se croma-
tografia em papel (CP), cromatogra-

A
cromatografia um mtodo em faixas coloridas. Este provavel- fia por centrifugao (Chromatotron) e
fsico-qumico de separao. mente o motivo pelo qual a tcnica cromatografia em camada delgada
Ela est fundamentada na mi- conhecida como cromatografia (chrom (CCD), so diversos os tipos de cro-
grao diferencial dos componentes = cor e graphie = escrita), podendo matografia em coluna, os quais sero
de uma mistura, que ocorre devido a levar errnea idia de que o processo mais bem compreendidos quando
diferentes interaes, entre duas fases seja dependente da cor. classificados por outro critrio.
imiscveis, a fase mvel e a fase Apesar deste estudo e de outros
estacionria. A grande variedade de 2. Classificao pela fase mvel
anteriores, que tambm poderiam ser
combinaes entre fases mveis e considerados precursores do uso empregada
estacionrias a torna dessa tcnica, a cro- Em se tratando da fase mvel, so
uma tcnica extrema- A cromatografia um matografia foi pratica- trs os tipos de cromatografia: a cro-
mente verstil e de mtodo fsico-qumico mente ignorada at a matografia gasosa, a cromatografia l-
grande aplicao. de separao. dcada de 30, quan- quida e a cromatografia supercrtica
O termo cromato- Ela est fundamentada do foi redescoberta. A (CSC), usando-se na ltima um vapor
grafia foi primeira- na migrao diferencial partir da, diversos pressurizado, acima de sua tempera-
mente empregado em dos componentes de trabalhos na rea tura crtica. A cromatografia lquida
1906 e sua utilizao uma mistura, que possibilitaram seu apresenta uma importante subdiviso:
atribuda a um bot- ocorre devido a dife- aperfeioamento e, a cromatografia lquida clssica (CLC),
nico russo ao descre- rentes interaes, em conjunto com os na qual a fase mvel arrastada
ver suas experincias entre duas fases avanos tecnolgi- atravs da coluna apenas pela fora
na separao dos imiscveis, a fase cos, levaram-na a um da gravidade, e a cromatografia lquida
componentes de ex- mvel e a fase elevado grau de sofis- de alta eficincia (CLAE), na qual se
tratos de folhas. Nesse estacionria ticao, o qual resul- utilizam fases estacionrias de part-
estudo, a passagem tou no seu grande po- culas menores, sendo necessrio o
de ter de petrleo (fase mvel) atravs tencial de aplicao em muitas reas. uso de uma bomba de alta presso
de uma coluna de vidro preenchida A cromatografia pode ser utilizada para a eluio da fase mvel. A CLAE
com carbonato de clcio (fase esta- para a identificao de compostos, por foi inicialmente denominada cromato-
cionria), qual se adicionou o extrato, comparao com padres previa- grafia lquida de alta presso, mas sua
levou separao dos componentes mente existentes, para a purificao de atual designao mostra-se mais

QUMICA NOVA NA ESCOLA Cromatografia N 7, MAIO 1998

 adequada. No caso de fases mveis
gasosas, separaes podem ser
obtidas por cromatografia gasosa (CG)
e por cromatografia gasosa de alta
resoluo (CGAR). A diferena entre os
dois tipos est na coluna. Enquanto na
CGAR so utilizadas colunas capilares,
nas quais a fase estacionria um
filme depositado na mesma, a CG
utiliza colunas de maior dimetro
empacotadas com a fase estacionria.
3. Classificao pela fase
estacionria utilizada
Quanto fase estacionria, distin-
gue-se entre fases estacionrias sli-
das, lquidas e quimicamente ligadas.
No caso da fase estacionria ser cons-
tituda por um lquido, este pode estar
simplesmente adsorvido sobre um su-
porte slido ou imobilizado sobre ele.
Suportes modificados so considera-
dos separadamente, como fases qui-
micamente ligadas, por normalmente
diferirem dos outros dois em seus
22
mecanismos de separao.
4. Classificao pelo modo de
separao
Por este critrio, separaes
cromatogrficas se devem adsoro,
partio, troca inica, excluso ou mis-
turas desses mecanismos.
Para se ter uma viso mais ampla
dos diferentes tipos de cromatografia,
os mesmos esto dispostos no diagra-
ma da Figura 1.
Dentre os vrios tipos de cromato-
grafia, especial nfase ser dada
cromatografia em camada delgada
(CCD), cromatografia lquida clssica
e de alta eficincia (CLAE) e croma-
Figura 1: Representao esquemtica dos diferentes tipos
de cromatografia.
QUMICA NOVA NA ESCOLA Cromatografia
tografia gasosa de alta reso-
luo (CGAR).
Cromatografia planar
A cromatografia em papel
(CP) uma tcnica de partio
lquidolquido, estando um
deles fixado a um suporte
slido. Baseia-se na diferena
de solubilidade das substn-
cias em questo entre duas
fases imiscveis, sendo geral-
mente a gua um dos lquidos.
O solvente saturado em gua
e a partio se d devido
presena de gua em celulose
(papel de filtro). Este mtodo,
embora menos eficiente que a
CCD, muito til para a sepa- Figura 2: Esquematizao de um cromatograma
rao de compostos polares, obtido por CCD.
sendo largamente usado em
bioqumica.
A cromatografia em camada delga- pessura de 3 a 4 mm. Placas analticas
da (CCD) uma tcnica de adsoro usualmente tm 10 cm x 2,5 cm e
lquidoslido. Nesse caso, a separa- preparativas 20 cm x 20 cm.
o se d pela diferena de afinidade A slica gel a fase estacionria
dos componentes de uma mistura pela mais utilizada, sendo seguida pela alu-
fase estacionria. mina, pela terra diatomcea e pela
A Fig. 2 mostra um cromatograma celulose. Para a preparao das pla-
obtido por CCD no qual se pode cas, faz-se uma suspenso do adsor-
observar a diferena de afinidade das vente em gua, sendo a mesma depo-
substncias 1 e 2 pela fase estacion- sitada sobre a placa manualmente ou
ria, sendo a substncia 1 mais retida com o auxlio de um espalhador. Aps
que a 2. Por ser um mtodo simples, a deposio, deixa-se a placa secar ao
rpido, visual e econmico, a CCD a ar. A etapa final da preparao da placa
tcnica predominantemente escolhida sua ativao. A slica, por exemplo,
para o acompanhamento de reaes ativada a 105-110 C por 30 a 60
orgnicas, sendo tambm muito utiliza- minutos. A espessura da camada de
da para a purificao de substncias slica a ser depositada de 0,25 mm
e para a identificao de fraes cole- para placas analticas e de 1,0 mm
tadas em cromatografia lquida clssi- para placas preparativas. Na prepara-
ca. o de placas preparativas, costuma-
O parmetro mais importante a ser se adicionar sulfato de clcio para
considerado em CCD o fator de melhorar a adeso placa de vidro.
reteno (Rf), o qual No mercado existem placas analticas
a razo entre a distn- e preparativas pr-fabricadas, as quais
cia percorrida pela apresentam a fase estacionria deposi-
substncia em questo tada sobre uma lmina de material
e a distncia percorrida plstico ou de alumnio, sendo estas
pela fase mvel. Os de maior eficincia.
valores ideais para Rf As amostras a serem analisadas
esto entre 0,4 e 0,6. por CCD devem ser aplicadas a apro-
A CCD pode ser ximadamente 1 cm da base inferior da
usada tanto na escala placa, com a ajuda de um capilar.
analtica quanto na pre- Aps a aplicao da(s) amostra(s)
parativa. Normalmente sobre a placa, a mesma deve ser
as placas utilizadas introduzida numa cuba contendo a
so de vidro, com es- fase mvel adequada. Cubas cromato-
N 7, MAIO 1998
grficas geralmente so de vidro, com
fundo chato, e devem ter suas paredes
laterais internas recobertas com papel
de filtro, para facilitar sua saturao
com os vapores do solvente.
A escolha da fase mvel, que
geralmente constituda por um ou
mais solventes, no tarefa simples.
No entanto, uma vez que as fases
estacionrias mais usadas so extre-
mamente polares, no devem ser
utilizados solventes pouco polares, que
no removeriam os compostos do
ponto de aplicao, nem solventes
muito polares, capazes de arrastar os
componentes da amostra at o topo
da placa. Em vista disso, melhores
resultados so obtidos com misturas
de solventes, de modo a se obter uma
polaridade mdia em relao polari-
dade dos componentes da amostra.
A placa deixada na cuba, onde o
solvente ir subir por capilaridade, at
que ele esteja a aproximadamente 2
cm da extremidade superior. Ao ascen-
der, o solvente ir arrastar mais os com-
postos menos adsorvidos na fase
estacionria, separando-os dos mais
adsorvidos.
A linha de chegada da fase mvel
deve ser marcada e a placa deve estar
seca. Como a maioria dos compostos
orgnicos incolor, faz-se necessria
a utilizao de um processo de revela-
o para que se possa analisar o
resultado.
Para a revelao de placas de CCD,
existem processos destrutivos e no
destrutivos. Os mtodos no destruti-
vos mais utilizados so a utilizao de
1) placas onde a fase estacionria
fluorescente ou 2) iodo. O primeiro
baseia-se na utilizao de substncias
fluorescentes misturadas slica
quando da preparao das placas,
possibilitando a revelao dos com-
postos em cmaras de luz ultravioleta.
O segundo vale-se do fato de que o
iodo complexa-se com compostos
insaturados, de modo que placas que
os contenham, ao serem colocadas
em uma cmara contendo cristais de
iodo, apresentaro pontos amarron-
zados.
Os processos destrutivos consis-
tem na oxidao dos compostos sobre
a placa, pulverizando-os com soluo
aquosa de um oxidante orgnico e/ou
QUMICA NOVA NA ESCOLA Cromatografia
um cido mineral, submetendo-se a
placa a altas temperaturas (~110 C)
por alguns minutos. Os compostos
orgnicos oxidados sero revelados na
forma de pontos escuros.
Cromatografia em coluna
Cromatografia lquida clssica
Esta tcnica muito utilizada para
isolamento de produtos naturais e
purificao de produtos de reaes
qumicas. As fases estacionrias mais
utilizadas so slica e alumina, entre-
tanto estes adsorventes podem servir
simplesmente como suporte para uma
fase estacionria lquida. Fases esta-
cionrias slidas levam separao
por adsoro e fases estacionrias
lquidas por partio. Suportes quimi-
camente modificados tambm tm
sido usados, sendo o processo de se-
parao misto neste caso.
Esses suportes so acondicio-
nados em tubos cilndricos geralmente
de vidro, de dimetros variados, os
quais possuem uma torneira em sua
extremidade inferior. A Fig. 3 uma
ilustrao de uma coluna cromato-
grfica empacotada com slica, sendo
mostrados seus demais constituintes.
Os adsorventes possuem part-
culas na faixa de 60-230 mesh, de
modo a possibilitar um fluxo razovel
do solvente atravs da coluna.
O uso de slica de partcula menor
(230-400 mesh) como adsorvente para
essas colunas requer a utilizao de
um sistema de bombeamento para o
Figura 3: Ilustrao de uma coluna croma-
togrfica.
N 7, MAIO 1998
empacotamento e eluio, sendo
conhecido como Cromatografia Flash.
A principal etapa ao se utilizar essa
tcnica o empacotamento, o qual,
entre outros fatores, definir a eficin-
cia da separao. Enquanto a alumina
empacotada em sua forma original,
a slica deve s-lo na forma de sus-
penso.
coluna adiciona-se uma pequena
quantidade de solvente e deposita-se
na sua extremidade inferior um chu-
mao de algodo com espessura de
aproximadamente 0,5 cm para impedir
a passagem de partculas da fase
estacionria. A adio de slica deve
ser feita com a torneira semi-aberta.
O adsorvente adicionado lentamente
coluna fixada na posio vertical,
batendo-se continuamente ao longo
da mesma para que todo o ar seja
expulso, de modo a se obter uma
compactao uniforme. A existncia
de ar entre as partculas leva forma-
o de canais na coluna, os quais
alargam as bandas eludas. 23
Nunca se deve permitir que o nvel
do solvente desa abaixo do nvel do
adsorvente, o que poderia acarretar
rachaduras, comprometendo a eficin-
cia da coluna.
Aps o empacotamento, conve-
niente que se passe uma certa quan-
tidade do eluente (duas a trs vezes o
volume da coluna) a ser utilizado
atravs da coluna antes da introduo
da amostra. Esta adicionada
coluna com o auxlio de uma pipeta
no momento em que o nvel do eluente
esteja o mais prximo possvel do
adsorvente. Esse procedimento ame-
niza o alargamento das bandas a
serem eludas. Tendo a amostra pene-
trado no adsorvente, o eluente ento
adicionado cuidadosa e continua-
mente.
A escolha do eluente segue os
princpios discutidos em CCD, mas
neste caso ele pode ser mudado du-
rante o processo cromatogrfico. Se,
por exemplo, a amostra constituda
por duas substncias, uma apolar e
outra polar, utiliza-se primeiramente
um eluente apolar e em seguida um
eluente polar.
O volume das fraes a serem
recolhidas funo da quantidade de
amostra e do grau de dificuldade da
 separao. Para anlise das mesmas,
recorre-se a alguma tcnica auxiliar,
usualmente CCD.
Em vista de que geralmente algu-
mas partculas da amostra perma-
necem irreversivelmente adsorvidas
fase estacionria, a cada separao
necessrio um tratamento para a recu-
perao do adsorvente.
Cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE)
O grande avano na cromatografia
em coluna foi o desenvolvimento e a
utilizao de suportes com partculas
diminutas responsveis pela alta
eficincia, as quais tornam necessrio
o uso de bombas de alta presso para
a eluio da fase mvel, devido a sua
baixa permeabilidade. A Fig. 4 mostra
um equipamento tpico de CLAE.
As fases mveis utilizadas em CLAE
devem possuir alto grau de pureza e
estar livres de oxignio ou outros gases
24 dissolvidos, sendo filtradas e desga-
seificadas antes do uso.
A bomba deve proporcionar ao
sistema vazo contnua sem pulsos
com alta reprodutibilidade, possibilitan-
do a eluio da fase mvel a um fluxo
adequado.
As vlvulas de injeo usadas
possuem uma ala de amostragem
para a introduo da amostra com uma
seringa e duas posies, uma para o
Figura 4: Equipamento bsico de CLAE. a) reservatrio da fase mvel; b) bomba de alta
presso; c) vlvula de injeo; d) coluna; e) detector e f) registrador.
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preenchimento da ala e outra para
sua liberao para a coluna. Existem
alas de diversos volumes, sendo
utilizadas geralmente alas na faixa de
5-50 L para injees analticas e 0,5-
2 mL para preparativas.
As colunas utilizadas em CLAE so
geralmente de ao inoxidvel, com
dimetro interno de cerca de 0,45 cm
para separaes analticas e na faixa
de 2,2 cm para preparativas. O com-
primento varivel, sendo comuns
colunas analticas de 10-25 cm e pre-
parativas em torno de 25-30 cm. Essas
colunas so reaproveitveis, sendo
empacotadas com suportes de alta
resoluo, no sendo necessria sua
regenerao aps cada separao.
O detector mais utilizado para
separaes por CLAE o detector de
ultravioleta, sendo tambm empregados
detectores de fluorescncia, de indce
de refrao, e eletroqumicos, entre
outros. Detectores de polarimetria para
CLAE, recentemente desenvolvidos,
diferenciam compostos quirais, atravs
da rotao de seus estereoismeros
frente luz plano-polarizada.
O registro de dados pode ser feito
atravs de um registrador, um integra-
dor ou um microcomputador.
A Fig. 5 ilustra uma separao
enantiomrica por CLAE.
A versatilidade desta tcnica reside
no grande nmero de fases estacio-
Cromatografia N 7, MAIO 1998
Figura 5: Cromatograma mostrando a
separao dos enantimeros do tetramisol,
princpio ativo de vrios medicamentos
usados para ascaridase.
nrias existentes, as quais possibilitam
anlises e separaes de uma ampla
gama de compostos com alta eficin-
cia. Tem sido utilizada em vrias reas
da cincia, no acompanhamento de
snteses, em anlises de pesticidas,
feromnios, no isolamento de produtos
naturais e sintticos e na produo e
controle de qualidade de medica-
mentos, dentre tantas outras apli-
caes.
As separaes em CLAE podem se
dar por adsoro, partio ou ambos.
O suporte mais comumente utilizado
a slica. O uso de fases estacionrias
lquidas adsorvidas a um suporte no
tem grande aplicao devido perda
de fase estacionria, mas o uso de
suportes modificados, os quais foram
desenvolvidos como conseqncia do
problema acima, possibilita a produ-
o de uma imensa variedade de colu-
nas com diferentes propriedades e
tipos de seletividade. As fases assim
obtidas so chamadas de quimica-
mente ligadas.
Essas fases, dependendo da modi-
ficao feita ao suporte, podem atuar
no modo normal, reverso ou ambos.
Na cromatografia em fase normal, a
fase estacionria mais polar que a
fase mvel, e em fase reversa, a fase
mvel mais polar.
Separaes analticas so predo-
minantemente realizadas em fase
reversa, sendo a fase C18 (octadecil-
slica) a mais usada, ao passo que so
preferidas fases que atuem no modo
normal para fins preparativos, em vista 6 mostra os componentes bsicos de do-se melhor separao com picos
de que separaes no modo reverso um cromatgrafo gasoso. mais simtricos em menor tempo.
utilizam fases mveis aquosas. Como dito anteriormente, a diferen- Para o empacotamento de colunas
Entre as fases quimicamente liga- a entre CG e CGAR est na coluna. de CG, geralmente empregam-se
das, merecido destaque deve ser dado Colunas de CGAR so maiores em terras diatomceas como suporte. A
s fases estacionrias quirais, as quais comprimento, menores em dimetro, escolha da fase estacionria de fun-
possibilitam a separao direta de possuem a fase lquida como um filme damental importncia, sendo ela o
enantimeros. Para tanto, necessria aplicado diretamente componente crtico da
a presena de um seletor quiral como s paredes do tubo da A cromatografia coluna. As fases esta-
parte integrante da fase estacionria. coluna e so mais efi- gasosa uma das cionrias podem ser
cientes. tcnicas analticas polares, apolares ou
Cromatografia gasosa de alta mais utilizadas. Alm
Essas colunas so quirais. Fases polares
resoluo (CGAR) de possuir um alto
tubos longos de me- so baseadas em po-
Em contraste CLAE, o principal tais como ao ou co- poder de resoluo, lietileno glicol puro ou
mecanismo de separao da cromato- bre, vidro ou teflon. muito atrativa devido modificado e apolares
grafia gasosa est baseado na parti- Colunas de CG tm possibilidade de em metilsiloxano puro
o dos componentes de uma amostra deteco em escala de
dimetro de cerca de ou modificado. As fa-
entre a fase mvel gasosa e a fase nano a picogramas
3 mm e comprimento ses quirais mais co-
estacionria lquida. A utilizao de fa- em torno de 3 m, ao muns so compostas
ses estacionrias slidas, as quais passo que colunas de CGAR tm de ciclodextrinas.
levariam separao por adsoro, dimetro na faixa de 0,15-0,75 mm e Atualmente, espectrmetros de
apresenta poucas aplicaes. comprimentos variados, usualmente massa tm sido acoplados a equipa-
A cromatografia gasosa uma das entre 10 m e 100 m. mentos de cromatografia gasosa,
tcnicas analticas mais utilizadas. Os gases utilizados como fase possibilitando a identificao imediata
Alm de possuir um alto poder de mvel devem ter alta pureza e ser das substncias presentes na amostra. 25
resoluo, muito atrativa devido inertes em relao fase estacionria.
possibilidade de deteco em escala Hidrognio, nitrognio e hlio so os Ana Luiza G. Degani, mestre em qumica
orgnica, doutoranda na UFSCar. Quezia B.
de nano a picogramas (109-10-12 g). A mais usados. Cass
Cass, bacharel em farmcia pela UFPE e Ph.D. em
grande limitao deste mtodo a A injeo da amostra feita atravs qumica pela City University, Londres, docente do
necessidade de que a amostra seja de microsseringas ou vlvulas seme- Departamento de Qumica da UFSCar, em So Carlos
voltil ou estvel termicamente, embo- lhantes s utilizadas em CLAE. SP. Paulo C. V ieira
Vieira
ieira, licenciado pelo DQ-FFCL-
USP, em Ribeiro Preto, doutor em cincias (qumica
ra amostras no volteis ou instveis Os detectores de maior aplicao orgnica) pela USP, docente do Departamento de
possam ser derivadas quimicamente. so o detector por ionizao em Qumica da UFSCar, em So Carlos SP.
Pode ser utilizada para separaes chama e o detector de condutividade
preparativas apenas na faixa de trmica. Os dados podem ser obtidos
microgramas a miligramas, no sendo atravs de um registrador po- Para saber mais
muito empregada para esse fim. A Fig. tenciomtrico, um integrador ou um mi- COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BO-
crocomputador, sen- NATO, P.S. Introduo a mtodos croma-
do as amostras togrficos. 5 ed. Campinas: Editora da
identificadas por seus Unicamp, 1993.
tempos de reteno. LOUGH, W.J. e WAINER, I.W. High Per-
Nesses equipa- formance liquid chromatography: fun-
damental principles and practice. Blackie
mentos necessrio
Academic and Professional, 1995.
o controle da tempe- CHAVES, M.H.; Anlise de extratos de
ratura do injetor, da plantas por CCD: uma metodologia apli-
coluna e do detector, cada disciplina Qumica Orgnica.
as quais so man- Qumica Nova, v. 20, n. 5, p. 560-562,
tidas por termostatos. 1997.
Como a temperatura ANDRADE, J.B.; PINHEIRO, H.L.C.; LO-
PES, W.A.; MARTINS, S.; AMORIM, A.M.M.
um fator extrema-
e BRANDO, A.M. Determinao de cafe-
mente importante, na em bebidas atravs de cromatografia
grande parte das lquida de alta eficincia (CLAE). Qumica
anlises por croma- Nova, v. 18, n. 4, p. 379-381, 1995.
Figura 6: Componentes bsicos de um cromatgrafo gasoso. tografia gasosa feita NETO, F.R.A.; CGAR em anlise de
a) cilindro do gs de arraste mantido sob alta presso; b) injetor; com programao de resduos. Qumica Nova, v. 18, n. 1, p.
c) coluna; d) detector e e) registrador. temperatura, obten- 65-67, 1995.

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