FACULDADE DE TECNOLOGIA TERMOMECANICA

BIOQUÍMICA DOS ALIMENTOS – Grupo 1

Professora Doutora Analía Verónica Gómez.
Gabriela Jardim 051180012; Giovanna Placidino 051180014;
Larissa Araujo 052180019; Mônica Macedo 051180028;
Nicole Iyeiri 051180030; Raquel Procópio 051180032.
São Bernardo do Campo, 21 de maio de 2020.

Dosagem de açúcar redutor pelo método ADNS

Durante a análise foi utilizado uma solução de Glicose (concentração

50mols/ml), com base nesta solução foi possível descobrir a concentração da
solução problema. Para isso, diluímos a solução conhecida, adicionamos o
Ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) como agente oxidante comumente recorrido
em açúcares redutores como método colorimétrico. Os cálculos a seguir
demonstram os fundamentos matemáticos para obtenção da concentração da
solução problema.
 Distribuição de quantidades crescentes da solução de glicose a
50mol/ml
 Adicionado a quantidades de água destilada nos tubos de ensaio para
padronizar-los como 1ml em cada tubo. Posteriormente adicionado 1ml
de DNS.

Tubo 01 = 0,2 ml da solução de glicose conhecida + 0,8 de água destilada +

1ml de DNS = 2ml de solução final
Tubo 02 = 0,4 ml da solução de glicose conhecida + 0,6 de água destilada +
1ml de DNS = 2ml de solução final
Tubo 03 = 0,6 ml da solução de glicose conhecida + 0,4 de água destilada +
1ml de DNS= 2ml de solução final
Tubo 04 = 0,8 ml da solução de glicose conhecida + 0,2 de água destilada +
1ml de DNS= 2ml de solução final
Tubo 05 = 1 ml da solução de glicose conhecida + 1ml de DNS= 2ml de
solução final.

Para aferir a absorbância no espectrofotômetro foram adicionados em

todos os tubos 13ml de água destilada. (Quantidade de solução final em cada
tudo é 15ml).
Tubo 01

Tubo 02

Tubo 03

Tubo 04

Tubo 05

Essas concentrações foram colocadas no espectrofotômetro a fim de

descobrir a sua absorbância no comprimento de onda máximo. Os valores de
absorbância obtidos com suas respectivas concentrações se encontram na
Tabela 1. Em seguida, com os dados contidos na tabela, construiu-se um
gráfico (figura 1) para melhor visualização. Ademais, houve também uma
solução incógnita que teve sua absorbância determinada pelo
espectrofotômetro, onde o objetivo era determinar a sua concentração.
 Curva de Calibração y = 0,1938x - 0,1117

0,6 R² = 0,9855 P5

0,5
P4
0,4
Absorvancia

P3
0,3

0,2
P2
0,1 P1

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
Concentração (Mol/ml)

Tabela 1: Valores da Concentração e sua respectiva absorbância

Fonte: própria

Concentração (Mol/ml) Absorbância

P1 0,66 0,047

P2 1,33 0,110

P3 2 0,267

P4 2,66 0,407

P5 3,33 0,545

Incógnita X 0,123

Figura 1 Curva de Calibração da Glicose

Fonte: própria

Para a determinação da concentração da solução incógnita, usou-se a

seguinte equação da reta:
Y = 0,1938x - 0,1117

Em que X é a concentração da amostra, e Y a absorbância da amostra.

Portanto, para descobrir a concentração da amostra, fez-se:
 Absorbância da amostra incógnita y = 0,123, logo, substituindo na equação
da reta, temos:

0,123 = 0.1938x- 0,1117

X = 1,2110mols/ml

A concentração da solução incógnita X é igual a 1,2110 mols/ml.

Além do método analítico para a determinação da concentração de glicose

da amostra incógnita, é possível estimar esta concentração por meio da análise
por colorimetria. A análise por colorimetria consiste na aproximação entre
tonalidades da amostra incógnita e o padrão que apresenta a tonalidade mais
próxima da amostra, permitindo estimar a concentração de glicose da amostra
x.
A partir da reação entre o açúcar redutor (glicose) e o ácido DNS, é
formado o produto cromóforo (apresenta coloração acastanhada), que
apresenta coloração mais intensa à medida que a concentração de glicose for
maior (figura 2).

Figura 1 – Tubos de ensaio com reagente DNS e glicose em concentração em ordem crescente da direita
para esquerda.

Fonte: Biotic-UFG, YouTube, 2013.

Com isso, pode-se analisar que a tonalidade da amostra incógnita possui

semelhança com os padrões 2 e 3, que por sua vez apresentam concentrações
de glicose de 1,33 mols/ml e 2,00 mols/ml, respectivamente. Portanto, pode-se
estimar que a solução incógnita possui concentração de glicose entre 1,33
mols/ml a 2,00 mols/ml.
Como a tonalidade mais semelhante a amostra x é a tonalidade do padrão
2, pode-se afirmar que o padrão 2 representa melhor a amostra x, sendo 1,33
mols/ml a concentração de glicose que está mais próxima da real da solução
incógnita.

Discussão:

Sabe-se que a coloração laranja inicial do DNS pode absorver uma

pequena quantidade do espectro de luz a 545nm, por isso é necessário o uso
de um tubo branco para zerar o espectrofotômetro, garantindo que a leitura das
amostras irá desprezar toda luz absorvida por resíduos de DNS que não
reagiu.
Apenas com a construção de uma curva padrão é possível associar a
absorbância lida com concentrações, o mais recomendado é que as
absorbâncias das amostras estejam dentro da reta traçada pelos padrões
utilizados, porém, como é uma relação linear, só se tornando com um aspecto
parecido com uma parábola.
Como podemos notar no gráfico apresentado obtivemos uma equação da
reta, e substituímos nossas absorbâncias nesta equação para obter a provável
concentração das amostras da concentração desconhecida.
DNS é uma medida rápida e eficaz. A concentração encontrada na amostra
desconhecida foi de 1,2110mols/ml, e pode-se provar que este é um valor
relativamente confiável visto que o coeficiente de correlação linear foi de
0,9855.
O método do DNS é considerado um método barato e conveniente,
entretanto a sua especificidade é baixa, podendo haver muitos interferentes
durante a identificação da reação. Desta forma é necessário para cada análise
construir uma curva padrão para poder minimizar estes possíveis interferentes.
Conclusão:

O método padronizado através do presente trabalho se mostra bem aceito,

revelando-se um protocolo rápido, confiável e de baixo custo para a
quantificação de açúcares redutores, com diversos propósitos. A economia é
percebida também após cada ensaio, uma vez que, em virtude do pequeno
volume de reativo empregado, ele gera pouco resíduo a ser tratado.
Ao medir a absorbância foi possível notar que esses valores são
diretamente proporcionais as concentrações de glicose obtida em cada tubo.
Isto ocorre porque, quanto maior a concentração de glicose, maior será a
formação do DNS, que é o responsável pela cor alaranjada das soluções, e
como consequência pelas medidas de absorbância.
O refratômetro digital aparece como boa escolha para empresas de maior
porte, como grandes fabricantes de refrigerantes, pois a análise da qualidade
dos produtos deve ser frequente, simples e com resultados confiáveis o
suficiente, como os da refratometria, sem a necessidade de aprofundamento
nos diversos açúcares presentes na amostra.
Foi possível comparar métodos que fazem uso da hidrólise com aqueles
que não fazem. O uso de técnicas que necessitam de hidrólise torna a análise
demorada, não sendo adequadas para determinações que necessitam de
frequência, mas surgem como alternativa em casos de falta de equipamentos
ou recursos laboratoriais. Disso tudo se infere que a técnica de dosagem com
DNS é de grande importância para determinação de açúcares em alimentos e
bebidas.