Traduzido do Inglês para o Português - www.onlinedoctranslator.

com

Jornal de Análise Farmacêutica e Biomédica 147 (2018) 323-340

Listas de conteúdos disponíveis emScienceDirect

Jornal de Análise Farmacêutica e Biomédica

Página inicial do jornal :www. sempre. com/ l oc ate / j pba

Análise

O mercado de drogas quirais: interruptores quirais versusde novo

compostos enantiomericamente puros
Andrea Calcaterra, Ilaria D'Acquarica∗
Dipartimento di Chimica e Tecnologie del Farmaco, Sapienza Università di Roma, P.le Aldo Moro 5, 00185 Roma, Itália

informações do artigo abstrato

Historia do artigo: Este artigo de revisão visa fornecer uma visão geral do mercado atual de medicamentos quirais, explorando qual é a
Recebido em 9 de junho de 2017 tendência atual, para a indústria farmacêutica, de explorar a prática de comutação quiral de racematos já
Recebido em formulário revisado em 6 de julho de 2017
comercializados ou desenvolverde novocompostos enantiomericamente puros. Uma ilustração concisa das
Aceito em 8 de julho de 2017
principais técnicas desenvolvidas para avaliar a configuração absoluta (AC) e pureza enantiomérica de drogas
Disponível on-line em 10 de julho de 2017
quirais foi dada, onde maior ênfase foi dada à contribuição da cromatografia enantiosseletiva (HPLC, SFC e UHPC).

Palavras-chave:
Em seguida, focamos nosso estudo na coorte de 45 novos medicamentos que foram aprovados pela Food and
Drogas quirais
Interruptor quiral
Drug Administration (FDA) dos EUA em 2015. Extraímos a estrutura química dos novos medicamentos das revisões
Cromatografia enantiosseletiva de química de aprovação do FDA disponíveis no banco de dados de o Centro de Avaliação e Pesquisa de
Drogas de enantiômero único Medicamentos (CDER) da agência e selecionamos um subgrupo (ou seja, 44% da coorte) de ingredientes
Racemates farmacêuticos ativos de pequenas moléculas (APIs) contendo um ou mais centros de quiralidade.
Determinação do excesso enantiomérico Com base nos dossiês da FDA examinados, verificou-se que todos os medicamentos quirais aprovados pela FDA
em 2015 são compostos enantiomericamente puros com um CA bem definido, com exceção de um, o lesinurad, que
foi licenciado como racemato de dois atropoisômeros enantioméricos, surgindo devido à rotação impedida em
torno da ligação C-N simples no anel de naftaleno. Finalmente, nenhum dos racematos desenvolvidos
anteriormente foi trocado para a versão de enantiômero único em 2015.
© 2017 Elsevier BV Todos os direitos reservados.

Conteúdo

1. Introduzindo quiralidade em um candidato a droga. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323

2. Métodos de avaliação da configuração absoluta (AC) e pureza enantiomérica de fármacos quirais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 324
2.1. Cristalografia de raio-x . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 327
2.2. Técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 327
2.2.1. O método de Mosher. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 328
2.2.2. Cristais líquidos quirais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 328
2.3. Dicroísmo circular vibracional (VCD) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 329
2.4. Cromatografia enantiosseletiva (HPLC, SFC e UHPC). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 330
3. O processo de desenvolvimento de drogas quirais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 331
3.1. Um foco nos medicamentos quirais aprovados pela FDA em 2015. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 332
4. Conclusões . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 337
Agradecimentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338
Referências . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338

1. Introduzindo a quiralidade em um candidato a medicamento

Era 1997 (ou seja, vinte anos atrás) quando, na Conferência de

Ingredientes Farmacêuticos realizada em Londres, o campo das drogas
quirais provou ter sofrido uma mudança fundamental, ou seja, passou
∗Autor correspondente. da infância e adolescência para uma forma adulta precoce[1]. O
Endereço de email:ilaria.dacquarica@uniroma1.it (I. D'Aquarica). conceito de comutação quiral remonta exatamente àqueles

https://doi.org/10.1016/j.jpba.2017.07.008 0731-7085/©
2017 Elsevier BV Todos os direitos reservados.
324 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
anos: a definição do termo “interruptor quiral” foi introduzida por Agranat e Caner
em 1999[2]e depois refinado[3]em referência ao desenvolvimento de um único
enantiômero a partir de uma droga quiral que foi desenvolvida (e muitas vezes
aprovada e comercializada) anteriormente como um racemato, ou como uma
mistura de diastereoisômeros. Notavelmente, uma troca quiral para um
determinado medicamento não implica necessariamente que o racemato tenha
sido comercializado anteriormente[3]; o critério essencial de um interruptor quiral
é uma mudança no estado dequiralidade[4].
O anti-inflamatório não esteroidal (AINE) ibuprofeno (vertabela 1) foi
a primeira droga quiral da classe dos AINEs a ser trocada para a versão
de enantiômero único em 1994[4]. A razão para tal mudança veio da
evidência de que o (S)-enantiômero foi mais de 100 vezes mais potente
como um inibidor da enzima ciclooxigenase 1 (COX-1) do que (R)-
ibuprofeno[5]. Além disso, o ibuprofeno, quando administrado como
racemato, provou sofrer inversão quiral unidirecional a partir do (R)-
enantiômero para o (S)-enantiômero, o primeiro se comportando como
uma pró-droga para o último[6,7]. Portanto, o uso do único (S)-
pensava-se que o ibuprofeno daria início de ação mais rápido em uma
dosagem mais baixa e reduziria a fonte de variabilidade individual de
configuração.
Após o ibuprofeno, outro medicamento “profeno” (a saber, cetoprofeno,
ver tabela 1) foi submetido à comutação quiral e comercializado como o
(S)-(+)-enantiômero em 1998[4], e desta vez a mudança foi mais direta,
uma vez que o metabolismo (R) - (S)a inversão quiral para o
cetoprofeno mostrou-se insignificante em humanos[8].
Ao mesclar os dados retirados de um artigo revisando os
interruptores quirais lançados de 1994 a 2002[4]com os de uma revisão
mais recente com foco no período de 2001 a 2011
[9], verifica-se que a Food and Drug Administration (FDA) dos EUA aprovou
15 versões de enantiômero único de drogas racêmicas,ou seja,15
interruptores quirais foram lançados no período de 1994 a 2011 (vertabela 1
). As vantagens potenciais da comutação quiral incluem: (1) um índice
terapêutico melhorado através do aumento da potência e seletividade e
diminuição dos efeitos colaterais; (2) um início de ação mais rápido; (3) uma
propensão reduzida para interações medicamentosas e (4) a exposição do
paciente a uma dosagem mais baixa. Deve-se notar, no entanto, que a
prática de comutação quiral provou ser às vezes controversa[10]. Em alguns
casos, de fato, os medicamentos de enantiômero único têm oferecido
benefícios aos pacientes, principalmente quando a atividade farmacológica
reside principalmente em um dos dois enantiômeros: é o caso da ofloxacina,
por exemplo, um agente antibacteriano fluoroquinolona cuja (S)-
enantiômero (ou seja, levofloxacina, vejatabela 1) mostrou-se mais solúvel
em água do que o racemato[11], e assim exibiu uma atividade
antibacteriana aumentada de cerca de duas vezes em relação ao racemato
contra bactérias gram-positivas e gram-negativas, o (R)-forma sendo
farmacologicamente inerte[12].
Ainda mais esclarecedor é o caso do anestésico local bupivacaína,
onde o (S)-(−)-enantiômero provou ser significativamente menos
cardiotóxico do que o (R)-enantiômero e o racemato[13,14]. Assim, a
mudança quiral para o enantiômero levógiro (ou seja, levobupivacaína,
vejatabela 1), lançado em 2000 nos Estados Unidos, resultou no
desenvolvimento de um anestésico local com perfil clínico semelhante
ao do racemato anteriormente comercializado, mas com diminuição da
toxicidade cardiovascular.
Houve, no entanto, alguns casos em que drogas de enantiômero
único desenvolvidas a partir de racematos de grande sucesso
ofereceram pouca vantagem clínica sobre o racemato, e sua introdução
no mercado foi explorada pelas empresas farmacêuticas como uma
estratégia de proteção de patentes contra concorrentes genéricos. O
caso do omeprazol, inibidor da bomba de prótons (IBP) anti-secretor
gástrico que alcançou o status de blockbuster nos Estados Unidos, é
reconhecido como exemplo de estratégia comercial que visa proteger
uma parcela do mercado contra outros IBPs (nomeadamente,
lansoprazol, pantoprazol e rabeprazol)[10].
Esomeprazol (vertabela 1) é a versão de um enantiômero lançada
em 2000 na Europa pelo mesmo proprietário do racemato
[15]. De fato, uma determinada dose de esomeprazol resultou em uma
área sob a curva (AUC) aproximadamente duas vezes maior do que a
alcançada após a mesma dose de omeprazol (o racemato)[16], mas a
versão de enantiômero único não foi estatisticamente superior ao
omeprazol ou, pelo menos, há uma evidência mista em doses não
comparáveis[9]. Além disso, nenhum estudo demonstrou uma
vantagem terapêutica intrínseca do esomeprazol sobre os outros IBPs
em doses equivalentes[17]. Após o omeprazol, outro IBP, a saber,
lansoprazol (vertabela 1) também passou pela “troca quiral”: em 2009, a
Takeda lançou no mercado norte-americano o enantiômero destruidor
único, a saber (R)-(+)-lansoprazol ou dexlansoprazol, que, como no caso
anterior, não se mostrou superior ao racemato em termos de eficácia
nos estudos de pré-aprovação[9].
É objetivo deste artigo de revisão analisar qual é a tendência do
mercado atual de drogas quirais, seja para explorar a prática de troca
quiral de racematos já comercializados ou para desenvolverde novo
compostos enantiomericamente puros. Em ambos os casos, a
caracterização analítica rigorosa das substâncias medicamentosas,
incluindo uma documentação completa dos perfis farmacológicos e
farmacocinéticos separados dos enantiômeros individuais, bem como
sua combinação, são exigidas pelas agências reguladoras. Como
resultado, especial ênfase é dada ao papel fundamental
desempenhado pela cromatografia enantiosseletiva no isolamento de
compostos enantiomericamente puros e na avaliação da pureza
enantiomérica de drogas quirais.
2. Métodos para avaliar a configuração absoluta (AC) e
pureza enantiomérica de drogas quirais
No ano de 1992, a FDA emitiu sua tão esperada declaração de
política relativa ao desenvolvimento de drogas estereoisoméricas[18].
Foi a primeira vez que oquiralidadedo ingrediente ativo foi colocado em
primeiro plano de todo o processo que leva a um novo medicamento,
ou seja, o teste do medicamento a granel, a fabricação do produto
acabado, o projeto de protocolos de teste de estabilidade e a
rotulagem do medicamento[19]. Esta declaração teve implicações
significativas para toda a comunidade científica que trabalha no
desenvolvimento e validação de métodos analíticos para substâncias e
produtos medicamentosos quirais. De fato, embora o FDA não tenha
exigido o desenvolvimento de enantiômeros únicos (racematos podem
ser apropriados em certos casos), os medicamentos de enantiômero
único tornaram-se o padrão nas empresas farmacêuticas ao trabalhar
com compostos que apresentam centros estereogênicos em sua
estrutura. Portanto, a necessidade de enantiômeros puros exigiu uma
avaliação crítica da maneira mais econômica de realizar sua análise e
preparação[20].
A redução dos prazos para a descoberta e desenvolvimento de
drogas quirais geralmente depende da eficiência da determinação da
configuração absoluta (AC) e da pureza enantiomérica da droga a ser
descoberta. Para o efeito, com base na experiência de uma empresa
farmacêutica (nomeadamente, Wyeth), foi proposta em 2007 a
construção de uma caixa de ferramentas de “Tecnologia Quiral”,
concebida – ao contrário do uso anterior – como o conjunto de técnicas
ou ferramentas para (1) a determinação da estereoquímica absoluta, (2)
a enantiosseparação de pequenas moléculas (tanto em nível analítico
quanto preparativo), e (3) a facilitação de transformações assimétricas
[21]. Os 30 autores do artigo (que contém 400 referências à literatura)
incentivaram fortemente pesquisadores acadêmicos e empresas
farmacêuticas para o refinamento dessa caixa de ferramentas recém-
criada, com o design, desenvolvimento e implementação de novas
ferramentas. A abordagem “Tecnologia Quiral” foi aplicada por alguns
dos autores do artigo de revisão acima mencionado para a separação
enantiomérica e avaliação espectroscópica de fenilglicidois[22]. Um
endereço recente para a proposta de contribuir para o refinamento da
caixa de ferramentas “Tecnologia Quiral” foi dado
tabela 1
Drogas racemato que foram trocadas para a versão de enantiômero único nos anos 1994–2011 (por ordem de lançamento no mercado).

Entrada API Estrutura química Atividade ou indicações Enantiômero único Ano de lançamento (país) Companhia
farmacológicas

1 Ibuprofeno Anti-inflamatório (S)-(+)-ibuprofeno 1994 (Áustria) Spirig AG

A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
(dexibuprofeno)

2 Ofloxacina Antibacteriano (S)-(−)-ofloxacina 1995 (Japão) Aventis

(levofloxacina)

3 Fenfluramina* Antiobesidade (S)-(+)-fenfluramina 1996 (EUA) Interneurônio

(dexfenfluramina) Produtos farmacêuticos

4 Cetoprofeno Anti-inflamatório (S)-(+)-cetoprofeno 1998 (Europa) Menarini

(dexcetoprofeno)

5 Salbutamol Antiasmático (R)-(−)-albuterol 1999 (EUA) Sepracor

(Albuterol) (levalbuterol)

6 Bupivacaína Anestesia local (S)-(−)-bupivacaína 2000 (EUA) Purdue Pharma

(levobupivacaína)

7 Omeprazol Redutor de ácido, inibidor da (S)-(−)-omeprazol 2000 (Europa) AstraZeneca

bomba de prótons (PPI) (esomeprazol)

2001 (EUA)

8 Cetirizina Anti-histamínico (R)-(−)-cetirizina 2001 (Europa) Sepracor/Sanofi-Aventis

(levocetirizina)

2007 (EUA)

9 Citalopram Antidepressivo (S)-(+)-citalopram 2001 (Europa) Floresta

(escitalopram)

2002 (EUA)

325
 326
Tabela 1 (Contínuo)

Entrada API Estrutura química Atividade ou indicações Enantiômero único Ano de lançamento (país) Companhia
farmacológicas

A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
10 Metilfenidato Déficit de atenção, transtorno de (R,R)-(+)-metilfenidato 2001 (Europa) Novartis/
hiperatividade (dexmetilfenidato) Celgene

11 Zopiclona** Ansiedade e insônia (S)-(+)-zopiclona 2004 (Europa) Sunovion/

(eszopiclona) Sepracor

12 Formoterol Doença de obstrução pulmonar (R,R)-(−)-formoterol 2006 (EUA) Sunovion/

crônica (arformoterol) Sepracor

13 Modanafil Narcolepsia (R)-(−)-modanafil 2007 (EUA) Cephalon

(armodanafil)

14 Leucovorina Resgate após alta dose (S)-(−)-leucovorina 2008 (EUA) Espectro

(ácido folínico) terapia com metotrexato; (levoleucovorina)
tratamento de carcinoma
colorretal em combinação com 5-
FU; tratamento de folato
deficiência

15 Lansoprazol Redutor de ácido, inibidor da (R)-(+)-lansoprazol 2009 (EUA) Takeda

bomba de prótons (PPI) (dexlansoprazol)

*
Retirado do mercado em 1997 por evidência de doença cardíaca valvular.
**
Não disponível comercialmente nos Estados Unidos (somente na Europa).
 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
por um artigo publicado em 2016 e intitulado – talvez com propósito de
continuidade – “Expandindo a caixa de ferramentas quiral”[23].
As técnicas que são validadas tanto na academia quanto na
indústria farmacêutica para a determinação da CA de moléculas quirais
incluem cristalografia de raios X (consulte a Seção2.1), técnicas de RMN
(ver Seção2.2), dicroísmo circular vibracional (VCD, consulte a Seção
2.3) e cromatografia enantiosseletiva (consulte a Seção2.4). A
contribuição fundamental dada por este último combinado com outros
métodos físico-químicos e como ferramenta única (por comparação dos
dados de retenção) foi abordada em um artigo de revisão abrangente
[24].
2.1. Cristalografia de raio-x
A cristalografia de raios X ainda é considerada a técnica mais confiável
para a determinação da CA, mas requer um grande cristal único do
enantiômero puro[25]e tipicamente pelo menos um átomo relativamente
pesado (ou seja, enxofre, selênio, telúrio e halogênios pesados), de acordo
com o protocolo de espalhamento ressonante desenvolvido por Bijvoet
[26,27]e ao chamado parâmetro Flack, introduzido por Flack[25]. O conceito
é reagir um composto enantiomericamente puro com um agente de
derivatização quiral (CDA) cuja CA é conhecida por métodos alternativos para
obter um diastereoisômero cristalino adequado para análise de raios-X. O
agente quiral atua assim como uma referência interna. Notavelmente, a
exatidão da determinação de AC usando uma referência quiral interna
depende fortemente do conhecimento da pureza enantiomérica do material
de referência, o que significa que é necessária uma etapa de purificação por
HPLC enantiosseletiva. Por exemplo, a CA dos enantiômeros do ácido
indol-3-succínico (uma auxina sintética capaz de promover o crescimento de
algumas mudas) foi determinada pelo isolamento dos dois enantiômeros
por meio de HPLC de fase reversa em uma coluna Cyclobond I-RSP, seguido
por recristalização dos enantiômeros puros como sais de (–)-cinchonidina
[28]. Isso produziu produtos cristalinos que eram adequados para análise de
difração de raios X.
Um protocolo elegante foi desenvolvido por Harada em 1997, onde
uma ferramenta molecular quiral, o ácido canforsultam dicloroftálico
(CSDP) obtido pela conexão (1S,2R,4R)-2,10- canforsultam com 4
proposto para simultâneo
HPLC de fase normal sep
Figura 1.Preparação (a) e separação por HPLC (b) dos ésteres diastereoisoméricos de CSDP de um álcool racêmico e determinação de AC (c) por análise de raios-X. Reimpresso de N.
Harada, Molecules 21, 1328 (©2016 por MDPI AG, Basel, Suíça).
327
Normalmente, os álcoois racêmicos são esterificados com ácido (–)-CSDP
produzindo ésteres diastereoisoméricos de CSDP ligados covalentemente, que são
bem separados por HPLC em sílica gel. Em seguida, o éster de CSDP eluído em
segundo lugar é obtido como prismas incolores por recristalização de acetato de
etila e, portanto, a CA do éster de CSDP pode ser determinada por cristalografia de
raios X usando os efeitos do átomo pesado de S e os dois átomos de Cl[31].
Com compostos contendo apenas átomos leves, uma diferença
significativa entre os dois modelos de estrutura cristalina de
quiralidade oposta nem sempre é garantida[25]. Nesse caso, o
parâmetro Flack pode refinar para um valor fisicamente irreal (menor
que 0 ou maior que 1) e não tem significado.
2.2. Técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN)
A espectroscopia de RMN tem um enorme potencial no campo da
elucidação de estruturas, mas, para o estudo de enantiômeros, é
necessário um ambiente diastereoisomérico, para tornar seus núcleos
diastereotópicos e, portanto, distinguíveis por RMN.[32]. Os benefícios
da técnica, entretanto, na determinação da CA são muitos, incluindo a
pequena quantidade de amostra necessária (que também pode ser
recuperada) e a aplicabilidade tanto para amostras sólidas quanto
líquidas. [33,34].
Duas abordagens gerais são conhecidas para a determinação do AC
por RMN, a saber (1) a adição de um agente de solvatação quiral (CSA) a
um solvente de NMR padrão não quiral[35], e (2) a reação do
enantiômero puro cujo AC é desconhecido com um enantiómero CDA,
produzindo dois derivados diasteroisoméricos[36]. Na primeira
abordagem, são estabelecidas interações não covalentes entre o
substrato e o auxiliar quiral, e assim o ambiente quiral produz
diferenças muito pequenas nos deslocamentos químicos para os dois
enantiômeros; por esta razão, tal abordagem é praticamente restrita à
determinação da pureza enantiomérica, ao invés da do AC[37–39].
No segundo caso, o substrato e o reagente auxiliar são montados
covalentemente, o que leva a diferenças muito maiores nos
deslocamentos químicos do que as obtidas pela primeira abordagem,
tornando essa abordagem o método de escolha para a atribuição de
Como
les
328 A. Calcaterra,

Figura 2.Abordagem de RMN para a determinação de AC de uma amostra quiral (A) por derivatização com os dois enantiômeros de um agente auxiliar quiral (B). Reimpresso com
permissão de JM Seco, E. Quiñoá, R. Riguera, Chem. Rev. 104, 17 (©2004 pela American Chemical Society).

[40], o chamado “método de Mosher” (ver Seção2.2.1), que utiliza o
ácido metoxitrifluorometilfenilacético (MTPA) como reagente, tem sido
o mais bem sucedido, desde sua implementação em 1973[41,42],
abrindo caminho para muitos reagentes novos e mais eficientes que
são úteis para diferentes substratos e são baseados no mesmo
raciocínio. Uma técnica mais recente que procede através do uso de
cristais líquidos quirais como solvente de RMN (ver Seção
2.2.2) foi descrito e proposto como uma ferramenta para análise
enantiomérica, embora não completamente livre de ambiguidade[43].
2.2.1. O método de Mosher
- - Ácido metoxi---trifluorometilfenilacético (MTPA; ver
Fig. 3) tem sido o reagente de derivatização mais comumente usado
para a determinação da CA de álcoois secundários por RMN desde seu
primeiro relato por Mosher e colaboradores[41,42]em 1973. De fato, o
artigo de Dale e Mosher recebeu 2.411 citações até agora (fonte:
Scopus), e o método desenvolvido por eles passou a ser conhecido
como “análise de Mosher éster”, uma vez que a conjugação dos
carbinóis com MTPA produz os ésteres correspondentes.
Embora Mosher originalmente usasse19Espectroscopia de F NMR,
em particular os deslocamentos químicos do CF3grupos (verFig. 3), para
a atribuição do AC, em estudos posteriores1Mão13C RMN foram
utilizados, e os deslocamentos químicos dos prótons e átomos de
carbono do álcool quiral sob exame foram usados, respectivamente.
O método de Mosher baseia-se no fato de que os prótons em
ésteres de MTPA diastereoisoméricos d
deslocamentos (-s) em seus1O protocolo de
espectro H NMR consiste no seguinte
o diastereoisomérico (R)-e (S)-ésteres de MTPA e (ii) comparativo (--SR) análise
do1Dados espectrais de H NMR destes dois ésteres. Ao analisar o sinal da
diferença em deslocamentos químicos para um número de pares análogos
de prótons (o conjunto de --SRvalores) nos ésteres diastereoisoméricos, o AC
do estereocentro de carbinol original pode ser deduzido com segurança.
Uma análise típica de Mosher requer aproximadamente 4 a 6 horas de
esforço ativo durante um período de 1 a 2 dias.
2.2.2. Cristais líquidos quirais
A análise configuracional e conformacional de moléculas orgânicas
em cristais líquidos foi iniciada por Emsley e Lindon[45]que introduziu
um método de RMN baseado no uso de acoplamentos dipolares
residuais (RDCs)[46]medido em tais solventes. Mais recentemente, um
tipo de solvente de cristal líquido quiral (ou seja, polipeptídeos
sintéticos dissolvidos em clorofórmio deuterado) foi proposto como
uma ferramenta de RMN para distinguir enantiômeros e analisar
excesso enantiomérico (ee) em compostos quirais[47–49]. A distinção
se origina do fato de que, em tal meio quiral anisotrópico, os
parâmetros médios de ordenação molecular são diferentes para cada
enantiômero (o chamado “efeito de ordenação diferencial de
enantiômeros”)[47].
Uma vantagem principal da utilização de solventes de cristais líquidos de
polipéptidos quirais como meio de alinhamento é que tanto a molécula orgânica
como o polipéptido são facilmente solúveis em solventes orgânicos comuns de
baixa viscosidade. Assim, também pequenas moléculas que são pouco solúveis
yzed com
diferencial-
cristal líquido

Fig. 3.Esquema para a síntese de (R)-e (S)-Ésteres de Mosher4do genérico carbinol1. Tanto os ácidos de Mosher livres2(CO2H) e os cloretos de ácido3(COCl) podem ser usados como
agentes de acilação. Reimpresso com permissão de TR Hoye, CS Jeffrey, F. Shao, Nat. Protocolo 2, 2451 (©2007 pelo Nature Publishing Group).

Fig. 4.Discriminação dos enantiômeros de ibuprofeno por um método baseado em NMR
que utiliza poli-benzil-eu-glutamato (PBLG) dissolvido em CDCl3como cristal líquido quiral.
Um mínimo de cinco RDCs independentes foram medidos a partir do estereocentro do
ibuprofeno (que é C10). Os potenciais RDCs carbono-carbono e carbono-próton são
destacados por setas sólidas e tracejadas, respectivamente. Reimpresso com permissão
de VM Marathias, GJ Tawa, I. Goljer, AC Bach II, Chirality 19, 741 (© 2007 por Wiley-Liss,
Inc.).
solventes trabalham com uma ampla gama de compostos, ou seja, álcoois,
aminas, éteres, cetonas, ácidos[48], aminoácidos[47], complexos
organometálicos, alcinos, alcenos e mesmo com alcanos[50].
Como exemplo de aplicação da técnica para drogas quirais, destaca-
se a discriminação do (R)-e (S)-enantiômeros do ibuprofeno (verFig. 4)
obtido usando o sistema de orientação composto por poli-benzil-eu-
glutamato (PBLG) dissolvido em CDCl3
[51]. O método provou ser adequado para uma variedade de pequenas
moléculas com um máximo de um ou dois estereocentros, que não podem
ser derivatizados com reagente de Mosher (ver Seção2.2.1) e/ou para os
quais nenhum cristal único grande é facilmente formado (consulte a Seção
2.1). Além disso, uma quantidade limitada de amostra (ou seja, 15
miligramas para cada enantiômero) é necessária na preparação das
amostras de RMN.
2.3. Dicroísmo circular vibracional (VCD)
Circular vibracional
para muitos tipos de análises
de moléculas quirais
Fig. 5.As etapas essenciais na atribuição de VCD de uma única amostra de enantiômero de estereoquímica absoluta desconhecida. Reproduzido de SS Wesolowski, DE Pivonka, Bioorg.
Med. Química Lett. 23, 4019 (©2013 por Elsevier Ltd.).
e Análise Biomédica 147 (2018) 323-340 329
(1) a estereoquímica absoluta[52]; (2) a pureza enantiomérica de uma
amostra em relação a um padrão conhecido[53,54]; (3) a conformação
em solução de moléculas biológicas grandes e pequenas[55].
A determinação AC de uma molécula quiral é feita comparando os
espectros experimentais de infravermelho (IR) e VCD da amostra
desconhecida com os dos espectros VCD calculados por DFT
correspondentes da molécula usando uma configuração escolhida (Fig.
5)[56]. Os programas de cálculo normalmente empregam a teoria de
perturbação do campo magnético de intensidades VCD concebida e
implementada por Stephens[57,58]. Se o sinal e a intensidade relativa
das bandas observadas no espectro VCD da amostra forem iguais ao do
espectro calculado, a CA da amostra é igual à CA escolhida como
referência. Se as bandas dos espectros de VCD observados
apresentarem o sinal oposto ao calculado, então a amostra tem o AC
oposto ao utilizado para o cálculo. Além disso, quando os cálculos de
DFT (em um nível relativamente alto) são aplicados a todos os
confôrmeros possíveis da molécula de enantiômero em estudo, as
energias relativas resultantes desses confórmeros fornecerão as
populações relativas, que serão então usadas para obter as
intensidades de VCD[59].
Os princípios básicos da aplicação do VCD para a determinação de
AC de moléculas quirais foram bem descritos em um artigo de revisão
[52], onde também foi revisto um conjunto de aplicações a produtos
orgânicos, farmacêuticos e naturais.
Além disso, em 2012 foi publicado um livro dedicado aos químicos
orgânicos[60], onde os autores, responsáveis por grande parte da
literatura existente neste campo, discutem as aplicações da
espectroscopia VCD na caracterização estrutural de moléculas
orgânicas quirais e avaliam as vantagens e limitações da técnica na
determinação da estrutura molecular.
Notavelmente, um grande número de ACs foi determinado por VCD nos
últimos vinte anos cobrindo uma ampla variedade de compostos[60], mas uma
descrição detalhada deles está além do escopo deste artigo. De qualquer forma, o
número de aplicações está aumentando rapidamente a cada ano, também graças
aos avanços feitos em instru- mentos de última geração.
e
-
n
330 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
de espectros VCD ainda mais precisos e confiáveis para determinar
inequivocamente a CA de compostos quirais.
Em 2013, o VCD foi proposto na revista Pharmacopeial Forum como uma
tecnologia emergente para determinar não apenas o AC, mas também a
pureza enantiomérica de ingredientes farmacêuticos quirais em todas as
fases do processo de descoberta[61]. Mais importante, esteestímulosO
artigo forneceu uma base para o desenvolvimento de um capítulo geral a
ser incluído na Farmacopeia dos EUA para a medição espectroscópica de AC
por VCD em substâncias e produtos medicamentosos.
Como resultado, em dezembro de 2016, a Farmacopeia dos EUA
lançou um suplemento contendo dois capítulos (a saber, 782 e 1782)
em VCD. O primeiro capítulo trata de vários recursos da prática de VCD,
como qualificação de espectrômetros de VCD, medições de amostras,
validação e verificação dos espectros medidos. O segundo explica ainda
mais a instrumentação usada, fornece detalhes sobre análises
qualitativas e quantitativas, comparação entre espectros medidos e
calculados, determinação de ee e uso simultâneo de VCD para
determinação de AC e ee[62].
O crescimento impressionante de aplicações de espectroscopia VCD
para a atribuição do AC tornou a prática uma alternativa rápida à
cristalografia de raios X (não requer o crescimento de cristais únicos)
em projetos avançados de descoberta de medicamentos pela
AstraZeneca Pharmaceuticals[56]. No artigo, são ilustrados estudos de
caso selecionados (ou seja, antagonistas da neuroquinina-3,
reatribuição do AC do cipralisant eN-Metilo-d-antagonistas do ácido
aspártico) com ênfase em fornecer utilidade e impacto aos programas
de descoberta farmacêutica.
Finalmente, o VCD provou ser o método mais discriminatório
também para moléculas com múltiplos elementos estereogênicos (ou
seja, diastereoisômeros), particularmente quando usado em
combinação com espectroscopia de RMN[63]. É o caso do tadalafil, um
inibidor da fosfodiesterase tipo 5 que foi aprovado em 2013 pelo FDA
para o tratamento da disfunção erétil masculina, hipertensão arterial
pulmonar e hiperplasia benigna da próstata. O protocolo desenvolvido,
feito por uma combinação de VCD, dicroísmo circular eletrônico (ECD) e
dispersão rotatória óptica (ORD), mostrou-se capaz de atribuir a
estereoquímica de todos os quatro estereoisômeros do tadalafil.
A força e a confiabilidade da espectroscopia óptica vibracional no
campo da descoberta de drogas são ainda certificadas pelo fato de que
o FDA aprovou a atividade óptica vibracional como uma técnica para
determinar a CA de compostos quirais[56].
2.4. Cromatografia enantiosseletiva (HPLC, SFC e UHPC)
A cromatografia enantiosseletiva tornou-se ao longo dos anos uma
ferramenta essencial na área de descoberta de medicamentos[24,64-69],
tanto pelos modos de separação indireta quanto direta. Métodos de
separação indireta baseados no uso de CDAs enantiomericamente puros são
frequentemente usados, especialmente em larga escala, embora a natureza,
pureza enantiomérica, disponibilidade, custos e facilidade de clivagem dos
CDAs sejam algumas vezes questões limitantes para esta estratégia[70].
Alternativamente, metodologias diretas baseadas no uso de fases
estacionárias quirais (CSPs) são mais convenientemente empregadas[67,71],
onde ambos os blocos de construção sintéticos[72,73]e moléculas de
ocorrência natural (ou seja, polissacarídeos, proteínas e antibióticos
macrocíclicos) [74–76]estão ligados covalentemente à superfície da sílica
como seletores quirais. Uma descrição detalhada do grande número de CSPs
para HPLC relatados na literatura e/ou comercializados pelos diferentes
fabricantes de instrumentos cromatográficos está além do escopo deste
artigo de revisão; o leitor pode consultar[77,78]para uma descrição das
contribuições mais importantes publicadas na área, com ênfase nos CSPs
emergentes que parecem possuir todos os requisitos necessários para obter
desempenhos ainda superiores em relação aos CSPs atualmente disponíveis.
Dependendo do estágio na descoberta do medicamento quiral, os
objetivos e as necessidades são diferentes. Nos estágios iniciais do processo,
é necessária uma triagem rápida de grandes bibliotecas de moléculas
quirais[79]. Métodos de alto rendimento necessitam de sistemas
enantiosseletivos capazes de analisar o maior número de moléculas com
alterações mínimas das condições experimentais. Por outro lado, uma vez
selecionado um candidato racêmico para as etapas seguintes do
desenvolvimento do fármaco, a otimização da separação é fortemente
facilitada pela possibilidade de transferir as informações coletadas na fase
de triagem com grandes vantagens práticas e econômicas.
A cromatografia de fluido supercrítico (SFC) testemunhou recentemente um
avanço notável na enantiosseparação de produtos farmacêuticos[80,81]
particularmente na fase de triagem inicial do processo de descoberta de
medicamentos[82]. Na verdade, CO supercrítico ou subcrítico2- as fases móveis à
base possuem uma viscosidade reduzida e, portanto, permitem uma transferência
de massa mais rápida em relação aos eluentes de LC típicos. Como resultado, altas
vazões podem ser empregadas com grande ganho nos tempos de análise,
concomitante com eficiências cromatográficas tão altas quanto as obtidas pela
cromatografia gasosa. Além disso, os sistemas preparativos para purificação SFC
em grande escala permitem purificar uma grande quantidade de substância
medicamentosa[83,84]. Portanto, SFC, em seu novo significado metamorfoseado
[85], não pode mais ser considerada uma técnica com algum escopo de aplicação
especial, mas sim uma ferramenta complementar às técnicas analíticas
amplamente aceitas[86,87].
Quase todos os seletores quirais usados em HPLC foram aplicados
com sucesso em cromatografia sub/supercrítica[88], e eles são
caracterizados por uma alta variedade. Entre eles, os derivados de
polissacarídeos têm sido usados em maior[89–91], devido à sua fácil
acessibilidade e ampla enantiosseletividade, seguido por seletores do
tipo Pirkle[92,93], ciclodextrinas[94,95]e antibióticos macrocíclicos
[89,96,97]. Em uma revisão recente, é relatada uma lista de separações
enantiosseletivas obtidas pelo uso de fluidos supercríticos para uma
variedade de drogas e compostos semelhantes a drogas[98].
O ressurgimento do interesse em SFC nos últimos anos tem sido
predominantemente o resultado da introdução de novos instrumentos
de última geração.[99.100]. Em segundo lugar, o desenvolvimento de
CSPs no formato sub-2,0 m abriu novas fronteiras no campo do SFC
enantiosseletivo “e” Ultra-High Performance (eUHPSFC)[101,102],
permitindo realizar separações muito rápidas (na ordem de segundos,
ou algo assim) e simultaneamente manter muito alta a eficiência do
sistema. Deve-se notar, no entanto, que o extraordinário avanço no
desenvolvimento de partículas sub-2-m para aplicações de ultra-alta
performance (Fig. 6) tem sido limitado até agora a CSPs do tipo escova
(ou seja, DACH-DNB-CSP, Whelk O1 e CSPs baseados em antibióticos
macrocíclicos)[103–105], considerando que, do ponto de vista prático,
haveria uma necessidade premente de outros tipos de CSPs sub-2 m,
além do tipo escova[106,107].
No que diz respeito à determinação de AC por cromatografia
enantiosseletiva, deve-se dizer que ela foi tipicamente obtida por
comparação da ordem de eluição por HPLC da amostra desconhecida com a
de padrões enantioméricos de análogos intimamente relacionados, o que
significa que a ordem de eluição do analito é assumido como correlacionado
com o de um enantiômero conhecido do análogo. Obviamente, esta
abordagem é limitada a analitos para os quais estão disponíveis padrões
enantioméricos de análogos estruturalmente relacionados.[108]. A
introdução de sistemas de detecção quiro-óptica adequados (ou seja,
rotação óptica (OR) e dicroísmo circular (CD)) no campo de separações por
HPLC enantiosseletivas representou de fato uma grande inovação analítica,
devido ao monitoramento seletivo de componentes opticamente ativos.
moléculas em misturas complexas de compostos orgânicos quimicamente
diversos[109]. No entanto, os detectores quiro-ópticos não permitem obter
informações diretamente sobre a AC de uma determinada molécula quiral, a
menos que sejam acoplados a cálculos quânticos de CD para ambos os
enantiômeros sob investigação.[110]. Em qualquer caso, a informação
estereoquímica contida na resposta do bissignato em um comprimento de
onda adequado pode ser explorada para estabelecer a eluição
Fig. 6.Separação ultrarrápida de naproxeno e seu enantiômero no UHPLC 1,7 m (R,R)-Búzio-O1 (5 cm×4,6 mm ID) em diferentes taxas de fluxo. Reimpresso com permissão de D. Kotoni,
A. Ciogli, C. Molinaro, I. D'Acquarica, J. Kocergin, T. Szczerba, H. Ritchie, C. Villani, F. Gasparrini, Anal. Química 84 (©2012 pela American Chemical Society).
pedido para os compostos não disponíveis como enantiômeros únicos de
configuração conhecida[76].
A combinação de HPLC enantiosseletiva com o método de
correlação química provou fornecer a CA para uma ampla variedade de
compostos quirais, e os resultados obtidos foram coletados em um
artigo de revisão dedicado[24]. Resumidamente, a técnica baseia-se na
comparação do tempo de retenção do enantiômero isolado resultante
de uma série de transformações químicas não racemizantes com os
tempos de retenção dos enantiômeros do respectivo racemato, cuja CA
é conhecida[111].
A pureza enantiomérica de compostos quirais (tipicamente expressa
pelo excesso enantiomérico) é convenientemente alcançada por
cromatografia enantiosseletiva desde que o racemato ou os dois
enantiômeros estejam disponíveis como referência. Embora tais
padrões possam ser facilmente obtidos no caso de moléculas derivadas
de uma rota sintética, o mundo dos produtos naturais está repleto de
exemplos de formatos de enantiômeros únicos, e uma grande parte
dos medicamentos é totalmente extraída dos produtos naturais. Para
superar tal limitação foi desenvolvida, há dez anos, uma nova
abordagem denominada “Inverted Chirality Columns Approach (ICCA)”,
que tem se mostrado muito útil na análise de traços enantioméricos,
quando o enantiômero menor segue o maior e é parcialmente
escondido pela cauda do enantiômero principal: no CSP com
configuração oposta,[112.113].
Uma menção final deve ser feita nesta Seção sobre os procedimentos e
critérios de aceitação a serem seguidos nos pedidos de aprovação
de novas substâncias de drogas quirais: quando uma nova substância de
droga é feita predominantemente por um enantiômero, o enantiômero
oposto é excluído dos limites de qualificação e identificação fornecidos nas
Diretrizes ICH sobre Impurezas em Novas Substâncias de Drogas e
Impurezas em Novos Medicamentos[114.115], devido a dificuldades práticas
em quantificá-lo nesses níveis (limitações técnicas podem impedir a
aplicação dos mesmos limites de quantificação ou qualificação). No entanto,
essa impureza na nova substância medicamentosa quiral e no(s) novo(s)
medicamento(s) resultante(s) deve(m) ser tratada(s) de acordo com os
princípios estabelecidos nessas Diretrizes.
3. O processo de desenvolvimento de drogas quirais
Um dos atrativos benefícios da introdução da quiralidade em um
candidato a fármaco é que ela leva ao aumento da complexidade para um
alvo específico, ou seja, dá acesso a uma maior diversidade de compostos a
serem explorados[116]. Existem dois cenários principais, para uma empresa
farmacêutica, no processo de desenvolvimento de medicamentos quirais: (1)
a mudança acima mencionada de um medicamento racêmico existente para
um dos dois enantiômeros desse medicamento[2,4], normalmente o
chamado eutômero[117], e (2) ode novodesenvolvimento de um fármaco
enantiomericamente puro.
Por uma questão de clareza, quando falamos de uma nova molécula
ou uma nova entidade que é aprovada pelas autoridades reguladoras
ou é introduzida no mercado, devemos nos referir a uma designação
inequívoca; infelizmente, cada país e sua agência reguladora de drogas
têm suas próprias definições. Portanto, termos como novo
332 A. Calcaterra,
Fig. 7.Designações de novos medicamentos para todos os cientistas envolvidos no campo da descoberta de medicamentos e nas agências reguladoras. Reimpresso com permissão de SK Branch, I.
Agranat, J. Med. Química 57, 8729 (©2014 pela American Chemical Society).
entidade molecular (NME), nova entidade química (NCE), nova entidade
biológica (NBE) e nova substância ativa (NAS) são frequentemente usados
com alguma ambiguidade, tanto por químicos medicinais quanto por outros
cientistas envolvidos na descoberta e desenvolvimento de medicamentos.
Com o objetivo de esclarecer a ambiguidade e inconsistência em torno dos
termos acima mencionados, foi publicado um artigo de perspectiva[118],
onde os autores também recomendaram, para o futuro, referir o termo nova
entidade terapêutica (NTE), que é um termo geral e abrangente para uma
nova designação de medicamento, para um NME ou um NBE (Fig. 7).
Com relação ao primeiro cenário, deve-se notar que a prática de
comutação quiral (ver Seção1) tem sido uma característica importante
dos portfólios de desenvolvimento de medicamentos, particularmente
no período de 1994 a 2011 (vertabela 1). No entanto, foi demonstrado
que apenas alguns ensaios clínicos randomizados (ECRs) de pré-
aprovação incluíram o precursor racêmico como comparador direto, ou
seja, para um terço dos interruptores quirais aprovados de 2001 a 2011
(ou seja, para esomeprazol, levocetirizina e dexlansoprazol)[9]. Por
outro lado, deve-se reconhecer que a FDA não possui autoridade legal
para exigir testes comparativos de eficácia dos enantiômeros
individuais versus o racemato anteriormente desenvolvido antes da
aprovação.[9].
Para ode novodesenvolvimento de um fármaco
enantiomericamente puro, três vias principais estão disponíveis para a
indústria farmacêutica acessar o produto quiral: (1) partir de um
enantiômero puro de um produto natural (pool quiral); (2) empregar
uma síntese estereosseletiva (incluindo procedimentos enzimáticos e
biológicos); e (3) separar um racemato obtido por um protocolo
sintético não estereosseletivo (resolução quiral). Em todos os casos, a
empresa deve fornecer especificações detalhadas do produto final que
assegurem identidade, resistência, qualidade e pureza do ponto de
vista estereoquímico[18]. No estágio de descoberta do
desenvolvimento de drogas, quando um grande número de moléculas
em miligramas é necessário para o teste inicial, as sínteses
estereosseletivas não são eficientes em termos de tempo ou custo.
Além disso, uma vez que ambos os enantiômeros do novo candidato a
medicamento são necessários para testes biológicos (conforme exigido
pela declaração de política da FDA), o desenvolvimento de um
ingrediente farmacêutico ativo quiral como o racemato pode ser mais
adequado, para a indústria farmacêutica, de um e do ponto de vista
estratégico: de fato, o custo para reações não estereosseletivas em
larga escala é bastante reduzido em relação ao que fornece um único
enantiômero; depois, a resolução quiral do racemato pode ser
alcançada em qualquer nível do processo de desenvolvimento (ou seja,
em materiais de partida, intermediários ou produtos finais),2.4)
[119]. Este último tornou-se a abordagem mais econômica e em termos de
tempo e custo para fins preparativos no estágio de descoberta na indústria
farmacêutica, onde também provou acelerar o desenvolvimento de
medicamentos[119.120]e, portanto, facilitar uma aprovação regulatória
antecipada[121].
Nos estágios posteriores da descoberta do medicamento, quando a
empresa farmacêutica decide se concentrar apenas em um dos dois
componentes do racemato, a produção direta do enantiômero desejado por
uma rota sintética estereosseletiva continua sendo o alvo principal. Diversos
transformações com potencial significativo para uso na fabricação de
APIs foram publicadas em 2015, e algumas delas foram destacadas em
um artigo dedicado[23].
Por fim, refira-se que as NMEs racémicas continuam a ser
aprovadas, fruto de dois inquéritos recentes[121], particularmente
quando a diferença nas propriedades terapêuticas entre um único
enantiômero de uma NME racêmica e o racemato é suficientemente
substancial para justificar o desenvolvimento e patenteamento
subsequentes do enantiômero.
3.1. Um foco nos medicamentos quirais aprovados pela FDA em 2015
O grupo de Agranat da Universidade Hebraica de Jerusalém (Israel)
vem dando uma contribuição fundamental na elaboração estatística e
crítica de todos os dados relativos à propriedade intelectual[2]e as
tendências no desenvolvimento de drogas quirais [3,4,122]desde 1999.
Basta dizer que o artigo de revisão intitulado “Colocando a quiralidade
para funcionar: a estratégia dos interruptores quirais”
[4]recebeu 291 citações até agora (fonte: Scopus). Para seus estudos, os
autores pesquisaram tanto o banco de dadosAo mercado, ao mercadoem
Relatórios Anuais em Química Medicinal, que lista todos os novos
medicamentos lançados a cada ano nos mercados mundiais, e o banco de
dados de aprovações de medicamentos da FDA, para identificar e classificar
todos os novos produtos (divididos em aquiral, enantiômero único e
racemato) aprovados para uso em um intervalo de anos desejado.
Um levantamento estatístico semelhante foi realizado em 2007,
onde o campo das drogas quirais, focado nas novas drogas lançadas
nos anos 1983-2004, foi observado principalmente do ponto de vista
sintético[123].
A imagem que emerge dos estudos acima mencionados é que os
medicamentos de enantiômero único são uma proporção em rápido
crescimento dos medicamentos NME que são introduzidos no mercado a
cada ano, e sua porcentagem variou, por exemplo, de cerca de 40% dos
novos medicamentos drogas aprovadas mundialmente em 1992 para quase
70% em 2010. No entanto, deve-se ter em mente que as novas drogas
racêmicas não estão mortas[121].
Com o objetivo de obter um panorama rápido do mercado atual de
medicamentos quirais, examinamos o banco de dados do Centro de
Avaliação e Pesquisa de Medicamentos (CDER) da agência no FDA, com foco
nas aprovações de medicamentos do FDA em 2015[124]. Em 2015, uma
coorte de 45 novos medicamentos (exatamente o dobro do número médio
de aprovação nos anos 2006-2009) foi aprovado pelo FDA, incluindo 33
novas entidades moleculares (NMEs) e 12 pedidos de licença biológica
(BLAs).
Por área terapêutica, os medicamentos anticancerígenos (31% da coorte)
mostraram-se dominantes na lista de aprovações do CDER, como já ocorreu em
2011, 2012 e 2013 (a exceção foi 2014, quando a oncologia representou apenas
22% das aprovações). A cardiologia e as doenças infecciosas seguem a oncologia
com a mesma abundância (9%).
Extraímos a estrutura química dos 45 novos medicamentos das revisões
de química de aprovação da FDA no site do CDER e selecionamos um
subgrupo (ou seja, 44% da coorte) de ingredientes farmacêuticos ativos de
pequenas moléculas (APIs) contendo um ou mais centros de quiralidade
(Vejomesa 2). A porcentagem de medicamentos quirais na lista de aprovação
de 2015 foi calculada considerando como medicamentos individuais
mesa 2
Medicamentos de pequenas moléculas quirais selecionados dos 45 novos medicamentos aprovados pela FDA em 2015.

Entrada API Estrutura química Molecular Tratamento ou indicações Número de estereocentros ee determinação Companhia
peso
(Da)

1 Cangrelor 776,36 Infarto do miocárdio 4 Óptica específica Medicamentos

(NDA 204958) rotação Companhia

A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
2 Edoxabano 548,06 AVC isquêmico agudo, 3 HPLC Quiral Daiichi Sankyo
(NDA 206316) embolia sistêmica e trombose
venosa profunda

3 Avibactam + ceftazidima 256,24 Infecções complicadas intra- 3 (avibactam) HPLC Quiral (para Allergan
(NDA 206494) 546,58 abdominais e do trato urinário 2 (ceftazidima) avibactam)

4 Sulfato de isavuconazônio 800,81 Antifúngico 3 HPLC Quiral Astellas

(NDA 207500)

5 ácido cólico 408,57 Síntese de ácidos biliares e 11 Óptica específica Retrofina

(NDA 205750) distúrbios peroxissomais rotação

6 Ivabradina 468,59 Falha crônica do coração 1 HPLC Quiral Amgen

(NDA 206143)

333
 334
Mesa 2 (Contínuo)

Entrada API Estrutura química Molecular Tratamento ou indicações Número de estereocentros ee determinação Companhia
peso
(Da)

7 Ácido desoxicólico 392,57 Reduzindo a gordura moderada a 11 não divulgado Kythera

(NDA 206333) grave abaixo do queixo

A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
8 Eluxadolina 569,65 Síndrome do intestino irritável com 2 HPLC Quiral Allergan
(NDA 206940) diarreia

9 Sacubitril + valsartana 411,49 Falha crônica do coração 2 (sacubitril) HPLC Quiral Novartis
(NDA 207620) 435,52 1 (valsartana)

10 Daclatasvir 738,88 Infecções crônicas por HCV 4 HPLC Quiral Bristol-Myers

(NDA 206843) Squibb

11 Rolapitante 438,41 Náuseas e vômitos induzidos por 3 HPLC Quiral Tesaro

(NDA 206500) quimioterapia

12 Triacetato de uridina 370,31 Acidúria orótica hereditária 2 não divulgado Wellstat

(NDA 208169)
13 Tipiracil + trifluridina 242,66 Câncer colorretal avançado 3 (trifluridina) Óptica específica Taiho

A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
(NDA 207981) 296,20 ou recorrente irressecável rotação (para
trifluridina)

14 Trabectedina 760,85 Lipossarcoma irressecável ou 7 Óptica específica Johnson & Johnson

(NDA 207953) metastático e rotação
leiomiossarcoma

15 Elvitegravir + cobicistate VerCaixa 1 VerCaixa 1 HIV 1 (elvitegravir) HPLC Quiral Gileade

+ emtricitabina + tenofovir 3 (cobicistate)
alafenamida (NDA 207561) 2 (emtricitabina)
3 (tenofovir alafenamida)

16 Cobimetinibe 531,31 Melanoma com BRAFV600E/K 1 HPLC Quiral Genentech

(NDA 206192) mutações

17 Ixazomibe 514.16 Mieloma múltiplo 1 HPLC Quiral Takeda

(NDA 208462)

18 Lesinurad 404,28 Hiperuricemia/Gota 1 eixo quiral Quiral SFC AstraZeneca

(NDA 207988)

335
336
Caixa 1: Che
na forma
aqueles que fazem parte de uma combinação (ou seja, entrada 3, entrada 9
e entrada 15, Genvoya, sendo esta última uma associação de quatro
moléculas quirais, verCaixa 1).
O número de centros de quiralidade variou de um (entrada 6, entrada
9, e entradas 15-17) a sete (entrada 14), com exceção dos ácidos cólico
(entrada 5) e deoxicólico (entrada 7), que, sendo compostos de
ocorrência natural, apresentam uma arquitetura estereoquímica mais
complexa (ou seja, onze quiralidade). centros estão presentes).
Os pesos moleculares (PM) dos itens selecionados variaram de
aproximadamente 250 a 800 Dalton; notavelmente, mais da metade
deles não atende a um dos limites da regra de cinco de Lipinski
[125], nomeadamente o relativo ao MW que deve ser inferior a 500 Da
para a “droga-likeness”[126]de um composto.
Com base nos dossiês do FDA examinados, verificou-se que todos
os medicamentos quirais aprovados pelo FDA em 2015 são compostos
enantiomericamente puros com um CA bem definido, com exceção de
um, o lesinurad (entrada 18), que foi licenciado como o racemato de
dois atroposômeros enantioméricos, surgindo devido à rotação
impedida em torno da ligação C-N simples no anel de naftaleno. Além
disso, nenhum dos racematos desenvolvidos anteriormente foi
alterado para a versão de enantiômero único em 2015, embora o
medicamento de enantiômero único recém-aprovado desenvolvido
pela aplicação da estratégia de troca quiral não tenha sido incluído nas
aprovações da FDA (NMEs e BLAs) para 2015.
Interessou-nos pesquisar os métodos propostos pelos
patrocinadores de medicamentos para a determinação da ee dos novos
medicamentos acima mencionados e/ou para sua enantiosseparação.
Geralmente, não encontramos tais informações nos dossiês da FDA
(não foram divulgadas por serem comercialmente confidenciais) e,
portanto, consultamos o banco de dados da Agência Europeia de
Medicamentos (EMA), que nos forneceu os dados que procurávamos.
Com exceção do cangrelor (entrada 1), ácido cólico (entrada 5),
trifluridina (entrada 13) e trabectedina (entrada 14), para os quais a
pureza enantiomérica foi rotineiramente verificada por rotação óptica
específica, para quase todas as outras drogas o ee foi medido por
"HPLC quiral".
Em alguns casos (nomeadamente, entradas 3, 6, 10 e 11) encontramos
também a informação relativa às colunas enantiosseletivas utilizadas
(principalmente a família à base de polissacarídeos), enquanto para os
outros APIs tal informação ainda não está disponível na literatura.
Avibactam (entrada 3) é um inibidor de beta-lactamase aprovado
em combinação com a cefalosporina semi-sintética ceftazidimina
Análise Biomédica 147 (2018) 323-340
para o tratamento de infecções complicadas intra-abdominais e do
trato urinário. Para separar os dois enantiômeros (ou seja, 1R,2S,5Re 1
S,2R,5S)de um precursor imediato de avibactam, cuja preparação é
descrita em um aplicativo PCT dedicado[127], o Chiralpak ADH (250×4,6
mm ID) foi usada, a fase móvel consistindo emn-heptano/etanol/
dietilamina (65:35:0,005, v/v/v).
A ivabradina (entrada 6) contém apenas um centro de quiralidade
no anel benzociclobutano, sendo o enantiômero reivindicado o (S).O ee
foi medido em uma coluna Chiralpak 1A, usando uma fase móvel
composta porn-heptano/2-propanol (95:5, v/v) e detecção de PDA a 220
nm[128].
Para o daclatasvir (DCV, entrada 10), que foi aprovado para o
tratamento de infecções crônicas pelo vírus da hepatite C (HCV)
genótipo 3, um método de HPLC enantiosseletivo acaba de ser
publicado[129], onde uma excelente resolução foi alcançada na coluna
Chiralpak ID-3, usando um gradiente binário contendo acetonitrila/
dietilamina e metanol/dietilamina como fases móveis, e detecção por
UV em 315 nm. otodos-(S)enantiômero (ou seja, o eutômero) foi
separado de seuTudo está)enantiômero e as impurezas
diastereoisoméricas correspondentes sob a mesma corrida
cromatográfica, com valores de resolução (Rs) variando de 5,27 e 6,21
(escolhido como o ideal nas condições acima mencionadas) e de 1,79 e
2,56, respectivamente (Fig. 8). Notavelmente, o daclatasvir representa
um “arco de triunfo” para a química medicinal[130], uma vez que é o
primeiro agente antiviral de ação direta que demonstra que uma
infecção crônica pelo HCV pode ser curada na ausência de terapia com
interferon.
Rolapitant (entrada 11) é um antagonista da taquicinina neurocinina
1 (NK1) aprovado para a prevenção de náuseas e vômitos induzidos por
quimioterapia. Apresenta estereoisomerismo devido à presença de três
centros de quiralidade, todos originários de matérias-primas. A pureza
enantiomérica é controlada usando o Chiralcel OD-H (25 cm×coluna de
4,6 mm ID), com uma fase móvel feita porn- hexano/2-propanol (95:5,
v/v) + 1% DEA a uma taxa de fluxo de 1,3 ml/min e detecção de UV a
215/240 nm[131].
Durante a redação deste artigo de revisão, foi publicado o primeiro
estudo abordando a síntese e o isolamento dos dois atropisômeros do
lesinurad por SFC enantiosseletivo[132]. Resumidamente, o precursor
de éster etílico racêmico da droga (Fig. 9) foi submetido a SFC
semipreparativo, que proporcionou os dois atroposômeros como
ésteres etílicos com ee variando de 94% (para o segundo enantiômero
eluente) a 100% (para o primeiro eluente). A coluna utilizada foi uma
Chiralpak AS (250 mm×30 mm, 5 m), sendo o eluente uma mistura de
CO supercrítico2/etanol (0,05% DEA) = 70/30, lavado a um caudal de 60
ml/min. Em seguida, os dois enantiômeros foram hidrolisados
individualmente com LiOH aquoso para os ácidos carboxílicos livres
enantiomericamente puros.
Notavelmente, os autores não observaram qualquer enantiomerização
por aquecimento em solução e em estudos farmacocinéticos in vivo. Além
disso, considerando a diferença significativa encontrada para os dois
atroposômeros, foi especulado por eles que o (+)-lesinurad poderia oferecer
uma melhor atividade de hiperuricemia/gota do que (−)-lesinurad ou o
racemato. Acreditamos que, muito provavelmente, em um futuro muito
próximo, o lesinurad será um dos candidatos a uma mudança quiral que
levará ao lançamento de uma patente que reivindica o único (+)-
enantiômero.
A bem da verdade, o National Institute for Health and Care
Excellence (NICE) acaba de publicar um documento de consulta de
avaliação que recusa o uso do lesinurad dentro de sua autorização de
comercialização, ou seja, para o tratamento de hiperuricemia em
pacientes cujo nível de ácido úrico no sangue não era suficientemente
controlado com alopurinol, um inibidor da xantina oxidase. A decisão
final sobre a avaliação está prevista para setembro de 2017[133].

Fig. 8.Cromatogramas típicos obtidos para a separação de daclatasvir (tudo-S-DCV), seu
enantiômero (Tudo está),e as outras impurezas diastereoisoméricas na coluna Chiralpak
ID-3. Os resultados coletados no traço inferior foram considerados ótimos pelos autores.
Reimpresso com permissão de G. Srinivasu, K. Nagesh Kumar, cap. Thirupathi, cap.
Lakshmi Narayana, cap. Parameswara Murthy, Chromatographia 79, 1457 (©2016 por
Springer-Verlag Berlin Heidelberg).
Fig. 9.A estratégia para a separação dos dois atroposômeros de lesinurad por SFC semi-preparativo enantiosseletivo.
Análise Biomédica 147 (2018) 323-340 337
4. Conclusões
Interessou-nos olhar – do ponto de vista da academia – para a
tendência atual do mercado de drogas quirais a partir da evidência de
que a maioria das novas drogas introduzidas anualmente no mercado
são enantiômeros únicos[121]. A questão básica era a maneira pela
qual a indústria farmacêutica atinge o objetivo de lançar compostos
enantiomericamente puros, seja recorrendo à prática de comutação
quiral (como aconteceu com frequência para medicamentos de grande
sucesso no período 1994-2011) ou fabricandode novoum fármaco
monoenantiômero.
A partir dos 45 novos medicamentos aprovados pelo FDA em 2015,
extraímos um subgrupo de moléculas pequenas (variando dentro de um
intervalo de peso molecular aproximado de 250-800 Da) apresentando um
ou mais centros de quiralidade (ou seja, 44% da coorte), e fizemos uma
verificação sobre seu perfil estereoquímico. Usamos o banco de dados de
aprovação de medicamentos da FDA (nomeadamente, o site do CDER) para
extrair as propriedades físico-químicas dos medicamentos e o banco de
dados da Agência Europeia de Medicamentos (EMA) para coletar
informações sobre os métodos propostos pelos patrocinadores de
medicamentos para a determinação do ee e/ou sua enantiosseparação.
Descobrimos que todas as drogas NME selecionadas foram
aprovadas como enantiômeros únicos com uma estereoquímica
absoluta bem definida, exceto um (isto é, lesinurad), que foi licenciado
como o racemato de dois atropoisômeros enantioméricos. Além disso,
nenhum dos racematos desenvolvidos anteriormente foi trocado para a
versão de enantiômero único em 2015.
Com relação aos métodos rotineiramente empregados para verificar a
pureza enantiomérica nas diferentes etapas do processo de descoberta, o
termo “HPLC quiral” mostrou-se dominante na lista de itens selecionados,
seguido de “rotação óptica específica”.
Infelizmente, os detalhes cromatográficos para o teste de pureza
enantiomérica tanto do ensaio quanto das impurezas não foram fornecidos
nas revisões químicas examinadas, obviamente, uma vez que são objeto de
confidencialidade comercial. De qualquer forma, para avibactam, ivabradina,
daclatasvir, rolapitant e lesinurad os métodos analíticos para a
enantiosseparação dos diversos estereoisômeros estavam disponíveis na
literatura, ambos incluídos em pedidos de patentes (é o caso
apenas recente
Para lesinu-
338 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
rad, considerando a significativa diferença de atividade encontrada para os dois
enantiômeros (nomeadamente, atropoisômeros), pode-se esperar o lançamento
de uma patente que reivindica o único (+)-enantiômero.
Este artigo de revisão pode representar um convite, tanto para os
pesquisadores que atuam na academia quanto na indústria
farmacêutica, para preencher a lacuna, ou seja, projetar e desenvolver
métodos analíticos enantiosseletivos para esses compostos emmesa 2
para os quais ainda não foram descritos.
Reconhecimentos
Esta pesquisa não recebeu nenhuma bolsa específica de agências de
financiamento nos setores público, comercial ou sem fins lucrativos.
O ID agradece ao Prof. Sergio Pinzauti (Professor Emérito
de Química Analítica, Universidade de Florença, Itália) pelo gentil
convite para escrever este artigo e pela paciência que demonstrou
durante a espera.
Referências
[1]SC Stinson, mercado de drogas Chiral mostra sinais de maturidade, Chem. Eng. Notícias
75 (42) (1997) 38-70.
[2]I. Agranat, H. Caner, propriedade intelectual e quiralidade das drogas, Drug Discov.
Hoje 4 (1999) 313-321.
[3]I. Agranat, SR Wainschtein, A estratégia de patentes de enantiômeros de drogas,
Drug Discov. Hoje 15 (2010) 163-170.
[4]I. Agranat, H. Caner, J. Caldwell, Colocando a quiralidade para funcionar: a estratégia
de interruptores quirais, Nat. Rev. Drug Descov. 1 (2002) 753-768.
[5]JM Mayer, B. Testa, Farmacodinâmica, farmacocinética e toxicologia de
enantiômeros de ibuprofeno, Drugs Future 22 (1997) 1347-1366.
[6]AJ Hutt, J. Caldwell, A inversão quiral metabólica de ácidos 2-arilpropiônicos
– uma nova rota com consequências farmacológicas, J. Pharm. Pharmacol. 35
(1983) 693-704.
[7]H. Hao, G. Wang, J. Sun, farmacocinética enantiosseletiva do ibuprofeno e
mecanismos envolvidos, Drug Metab. Rev. 37 (2005) 215–234.
[8]RT Foster, F. Jamali, AS Russell, SR Alballa, Farmacocinética de enantiômeros de
cetoprofeno em indivíduos saudáveis após doses únicas e múltiplas, J. Pharm.
Sci. 77 (1988) 70-73.
[9]WF Gellad, P. Choi, M. Mizah, CB Good, AS Kesselheim, Avaliando o interruptor
quiral: aprovação e uso de drogas de enantiômero único 2001 a 2011, Am. J.
Gerenciar. Cuidado 20 (2014) e90–e97.
[10]P. Mansfield, D. Henry, A. Tonkin, Drogas de enantiômero único: efeitos
decepcionantes da ciência elegante, Clin. Farmacocineta. 43 (2004) 287-290.
[11]PC Sharma, A. Jain, S. Jain, antibacterianos de Fluoroquinolona: uma revisão
sobre química, microbiologia e perspectivas terapêuticas, Acta Poloniae
Pharm.—Drug Res. 66 (2009) 587-604.
[12]I. Hayakawa, S. Atarashi, S. Yokohama, M. Imamura, K.-I. Sakano, M. Furukawa,
Síntese e atividades antibacterianas de ofloxacina opticamente ativa, Antimicrob.
Agentes Chemother. 29 (1986) 163-164.
[13]H. Bardsley, R. Gristwood, H. Baker, N. Watson, W. Nimmo, Uma comparação dos
efeitos cardiovasculares de levobupivacaína e racbupivacaína após administração
intravenosa a voluntários saudáveis, Br. J. Clin. Pharmacol. 46 (1998) 245-249.
[14]RH Foster, A. Markham, Levobupivacaína: uma revisão de sua farmacologia e uso
como anestésico local, Drugs 59 (2000) 551–579.
[15]L. Olbe, E. Carlsson, P. Lindberg, A expedição de inibidor da bomba de prótons:
as histórias de casos de omeprazol e esomeprazol, Nat. Rev. Droga. Descobrir
2 (2003) 132-139.
[16]T. Andersson, L. Weidolf, Stereosselective disposição de inibidores da bomba de
prótons, Clin. Invista em Drogas. 28 (2008) 263-279.
[17]Iniciativa Terapêutica Os medicamentos estereoisômeros únicos fornecem valor? Ter.
Lett. 45 (2002).
[18]Declaração de política da FDA para o desenvolvimento de novas drogas
estereoisoméricas, Chirality 4 (1992) 338–340.
[19]WH De Camp, drogas quirais: a perspectiva da FDA sobre fabricação e controle,
J. Pharm. Biomédico. Anal. 11 (1993) 1167-1172.
[20]E. Francotte, W. Lindner, Chirality in Drug Research, Wiley-VCH, Weinheim, 2006.
[21]O. McConnell, A. Bach II, C. Balibar, et al., Separação enantiomérica e determinação da
estereoquímica absoluta de moléculas assimétricas na descoberta de drogas – construção
de caixas de ferramentas de tecnologia quiral, Chirality 19 (2007) 658–682.
[22]O. McConnell, Y. Ele, L. Nogle, A. Sarkahian, Aplicação da tecnologia Chiral em uma
empresa farmacêutica. Separação enantiomérica e estudos espectroscópicos de
intermediários assimétricos chave usando uma combinação de técnicas.
Fenilglicidols, Chirality 19 (2007) 716-730.
[23]CA Challener, Expandindo a caixa de ferramentas quiral, Pharm. Tecnol. 40 (2016) 28–
29.
[24]C. Roussel, A. Del Rio, J. Pierrot-Sanders, P. Piras, N. Vanthuyne, contribuição da
cromatografia líquida quiral para a determinação da configuração absoluta de
enantiômeros, J. Chromatogr. A 1037 (2004) 311-328.
[25]HD Flack, G. Bernardinelli, O uso de cristalografia de raios-X para determinar a
configuração absoluta, Chirality 20 (2008) 681-690.
[26]G. McIntyre, Uma previsão de diferenças de intensidade Bijvoet nas estruturas não
centrossimétricas de selênio e telúrio, Acta Crystallogr. A 34 (1978) 936-939.
[27]HD Flack, G. Bernardinelli, Aplicações e propriedades da relação de
intensidade Bijvoet, Acta Crytallogr. A 64 (2008) 484-493.
[28]DW Armstrong, Y.-S. Liu, L. He, KH Ekborg-Ott, CL Barnes, CF Hammer, Potent
enantiosselective auxin: ácido indole-3-succinic, J. Agric. Química de Alimentos.
50 (2002) 473-476.
[29]N. Harada, N. Koumura, M. Robillard, amida de ácido dicloroftálico quiral: um
auxiliar quiral melhorado útil para enantioresolução e raios-X
determinação cristalográfica de estereoquímica absoluta, Enantiomer 2 (1997)
303-309.
[30]N. Harada, Determinação de configurações absolutas por cristalografia de
raios-X e1H anisotropia de RMN, Chirality 20 (2008) 691-723.
[31]N. Harada, separação por HPLC de diastereômeros: ferramentas moleculares
quirais úteis para a preparação de compostos enantiopuros e determinação
simultânea de suas configurações absolutas, Molecules 21 (2016) 1328–1365.
[32]G. Uccello-Barretta, F. Balzano, aditivos solvatantes Chiral NMR para
diferenciação de enantiômeros, Top. atual Química 241 (2013) 69-132.
[33]JM Seco, E. Quiñoá, R. Riguera, A atribuição de configuração absoluta por RMN,
Chem. Rev. 104 (2004) 17-117.
[34]JM Seco, E. Quiñoá, R. Riguera, Atribuição da configuração absoluta de compostos
polifuncionais por RMN usando agentes derivatizantes quirais, Chem.
Rev. 112 (2012) 4603-4641.
[35]GR Weisman, Nuclear Magnetic Resonance Analysis Using Chiral Solvating Agents
in Asymmetric Synthesis, Academic Press, Nova Iorque, 1983, p. 153.
[36]PL Rinaldi, A determinação da configuração absoluta usando técnicas de
ressonância magnética nuclear, Prog. Nucl. Magn. Resson. Spectrosc. 15
(1982) 291-352.
[37]D. Parker, determinação por RMN de pureza enantiomérica, Chem. Rev. 91 (1991)
1441-1457.
[38]R. Rothchild, métodos de RMN para determinação do excesso enantiomérico,
Enantiômero 5 (2000) 457-471.
[39]MG Finn, métodos emergentes para a determinação rápida do excesso
enantiomérico, Chirality 14 (2002) 534-540.
[40]G. Uray, Houben-Weyl: Methods in Organic Chemistry, em: G. Helchen, RW
Hoffmann, J. Mulzer, E. Schaumann (Eds.), Thieme, Stuttgart, Nova Iorque, 1996,
p. 253.
[41]JA Dale, HS Mosher, Reagentes enantiômeros de ressonância magnética nuclear.
Correlações configuracionais por meio de deslocamentos químicos de ressonância
magnética nuclear de mandelato diastereomérico,O-metilmandelato, e
- - ésteres de metoxi---trifluorometilfenilacetato (MTPA), J. Am. Química Soc. 95
(1973) 512-519.
[42]GR Sullivan, JA Dale, HS Mosher, Correlação de configuração e19F deslocamentos
químicos de derivados de --metoxi---trifluorometilfenilacetato, J. Org. Química 38
(1973) 2143-2147.
[43]J. Courtieu, P. Lesot, A. Meddour, D. Merlet, C. Aroulanda, RMN de cristal líquido
quiral: uma ferramenta para análise enantiomérica, em: DM Grant, RK Harris
(Eds.), Encyclopedia of Nuclear Magnetic Resonance, John Wiley & Sons Ltd,
Chichester, 2002, pp. 497-505.
[44]TR Hoye, CS Jeffrey, F. Shao, análise de Mosher éster para a determinação da configuração
absoluta de carbonos carbinol estereogênicos (quirais), Nat. Protocolo
2 (2007) 2451-2458.
[45]W. Emsley, JC Lindon, NMR Spectroscopy Using Liquid Crystal Solvents,
Pergamon, Oxford, 1975.
[46]J. Yan, F. Delgado, A. Kaerner, AD Kline, H. Mo, MJ Shapiro, TA Smitka, GA
Stephenson, ER Zartler, Estereoquímica relativa completa de múltiplos
estereocentros usando apenas acoplamentos dipolares residuais, J. Am. Química
Soc. 126 (2004) 5008-5017.
[47]I. Canet, A. Meddour, J. Courtieu, JL Canet, J. Salaun, Novo e método preciso para
determinar a pureza enantiomérica de aminoácidos com base em deutério
NMR em um cristal líquido liotrópico colestérico, J. Am. Química Soc. 116 (1994)
2155-2156.
[48]I. Canet, J. Courtieu, A. Loewenstein, A. Meddour, JM Pechine, Análise enantiomérica
em um cristal líquido liotrópico de polipeptídeo por RMN de deutério, J. Am.
Química Soc. 117 (1995) 6520-6526.
[49]M. Sarfati, P. Lesot, D. Merlet, J. Courtieu, Aspectos teóricos e experimentais da
diferenciação enantiomérica usando espectroscopia de RMN multinuclear de
abundância natural em cristais líquidos de polipeptídeos quirais, Chem. Comum.
(2000) 2069-2081.
[50]M. Sarfati, J. Courtieu, P. Lesot, Primeira discriminação enantiomérica bem sucedida de
alcanos quirais usando espectroscopia de RMN, Chem. Comum. 111 (2000) 1113-1114.
[51]VM Marathias, GJ Tawa, I. Goljer, AC Bach II, identificação estereoquímica de (
R)-e (S)-ibuprofeno usando acoplamentos dipolares residuais, RMN e
modelagem, Chirality 19 (2007) 741-750.
[52]Y. Ele, B. Wang, RK Dukor, LA Nafie, Determinação da configuração absoluta de
moléculas quirais usando atividade óptica vibracional: uma revisão, Appl.
Spectrosc. 65 (2011) 699-723.
 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340
[53]C. Guo, RD Shah, RK Dukor, X. Cao, TB Freedman, LA Nafie, Determinação do excesso
enantiomérico em amostras de moléculas quirais usando espectroscopia de dicroísmo
circular vibracional de transformada de Fourier: simulação de monitoramento de reação
em tempo real, Anal. Química 76 (2004) 6956-6966.
[54]C. Guo, RD Shah, RK Dukor, X. Cao, TB Freedman, LA Nafie, determinação de excesso
enantiomérico por transformada de Fourier espectroscopia de dicroísmo circular
vibracional no infravermelho próximo: simulação de processo em tempo real
monitoramento, Ap. Spectrosc. 59 (2005) 1114-1124.
[55]LA Nafie, Vibrational Optical Activity: Principles and Applications, Wiley, 2011.
[56]SS Wesolowski, DE Pivonka, Uma alternativa rápida à cristalografia de raios X para
determinação quiral: estudos de caso de dicroísmo circular vibracional (VCD) para
avançar em projetos de descoberta de drogas, Bioorg. Med. Química Lett. 23 (2013)
4019-4025.
[57]PJ Stephens, Teoria do dicroísmo circular vibracional, J. Phys. Química 89 (1985)
748-752.
[58]PJ Stephens, dependência de Gauge de momentos de transição de dipolo magnético
vibracional e forças rotacionais, J. Phys. Química 91 (1987) 1712-1715.
[59]PJ Stephens, FJ Devlin, J.-J. Pan, A determinação das configurações absolutas
de moléculas quirais usando espectroscopia vibracional dicroísmo circular
(VCD), Chirality 20 (2008) 643-663.
[60]PJ Stephens, FJ Devlin, J. Cheeseman, VCD Spectroscopy for Organic
Chemists, CRC Press, Taylor & Francis Group, Boca Raton, FL, 2012.
[61]LA Nafie, O. McConnel, D. Minick, E. Kellenbach, Y. He, B. Wang, RK Dukor,
MD Bartberger, HN Pappa, Dicroísmo circular vibracional como uma nova
tecnologia para determinar a configuração absoluta, conformação e pureza
enantiomérica de ingredientes farmacêuticos quirais, Pharmacopeial Forum 39
(2013).
[62] Convenção da Farmacopeia dos Estados Unidos (http://www.usp.org/usp-nf).
[63]S. Qiu, E. De Gussem, KA Tehrani, S. Sergeyev, P. Bultinck, W. Herrebout,
Estereoquímica dos diastereoisômeros tadalafil: uma avaliação crítica do
dicroísmo circular vibracional, dicroísmo circular eletrônico e dispersão
rotatória óptica, J. Med . Química 56 (2013) 8903-8914.
[64]G. Cancelliere, I. D'Acquarica, F. Gasparrini, D. Misiti, C. Villani, Síntese e aplicações
de novas fases estacionárias quirais de HPLC altamente eficientes: uma dimensão
quiral na análise de pesquisa de drogas, Pharm. Sci. Tecnol. Hoje 2 (1999) 484-492.
[65]E. Francotte, Cromatografia enantiosseletiva como uma alternativa poderosa para
a preparação de enantiômeros de drogas, J. Chromatogr. A 906 (2001) 379-397.
[66]S. Andersson, SG Allenmark, resolução cromatográfica quiral preparativa de
enantiômeros na descoberta de drogas, J. Biochem. Biofis. Métodos 54 (2002) 11–
23.
[67]Y. Zhang, D.-R. Wu, DB Wang-Iverson, AA Tymiak, cromatografia enantiosseletiva
na descoberta de drogas, Drug Discov. Hoje 10 (2005) 571-577.
[68]S. Ahuya, Métodos de separação quiral para produtos farmacêuticos e
biotecnológicos, John Wiley & Sons Inc., Hoboken, EUA, 2011.
[69]TJ Ward, KD Ward, separações quirais: uma revisão de tópicos e tendências
atuais, Anal. Química 84 (2012) 626-635.
[70]NM Maier, P. Franco, W. Lindner, Separações de enantiômeros:
necessidades desafios, perspectivas, J. Chromatogr. A 906 (2001) 3-33.
[71]G. Cancelliere, I. D'Acquarica, F. Gasparrini, M. Maggini, D. Misiti, C. Villani, Vinte
anos de pesquisa sobre fases estacionárias quirais à base de sílica, J. Sep. Sci. 29
(2006) 770-781.
[72]F. Gasparrini, D. Misiti, C. Villani, fases estacionárias quirais de cromatografia líquida de alta
eficiência com base em seletores de baixa massa molecular, J.
Cromatogr. A 906 (2001) 35-50.
[73]F. Gasparrini, I. D'Acquarica, D. Misiti, M. Pierini, C. Villani, Receptores naturais e
totalmente sintéticos no design inovador de fases estacionárias quirais de HPLC,
Pure Appl. Química 75 (2003) 407-412.
[74]E. Yashima, Fases estacionárias quirais à base de polissacarídeos para
enantiosseparação por cromatografia líquida de alta eficiência, J.
Chromatogr. A. 906 (2001) 105-125.
[75]B. Chankvetadze, Desenvolvimentos recentes em fases estacionárias quirais baseadas em
polissacarídeos para separação em fase líquida de enantiômeros, J. Chromatogr. A 1269
(2012) 26-51.
[76]I. D'Acquarica, F. Gasparrini, D. Misiti, M. Pierini, C. Villani, HPLC fases estacionárias
quirais contendo antibióticos macrocíclicos: aspectos práticos e mecanismo de
reconhecimento, em: E. Grushka, N. Grinberg (Eds.), Avanços em Cromatografia,
CRC Press Taylor & Francis Group, Boca Raton, FL, 2008, pp. 108–173.
[77]G. Gübitz, MG Schmid, Separação quiral por técnicas de cromatografia e
eletromigração. Uma revisão, Biopharm. Descarte de Drogas. 22 (2001)
291-336.
[78]A. Cavazzini, L. Pasti, A. Massi, N. Marchetti, F. Dondi, Aplicações recentes em
cromatografia líquida de alta eficiência quiral: uma revisão, Anal. Chim. Ato 706
(2011) 205-222.
[79]D. Mangelings, Y. Vander Heyden, Abordagens de triagem para separações quirais,
em: E. Grushka, N. Grinberg (Eds.), Avanços em Cromatografia, CRC Press, Nova
York, 2007, pp. 175-211.
[80]K. De Klerck, D. Mangelings, Y. Vander Heyden, Cromatografia de fluido
supercrítico para a enantiosseparação de produtos farmacêuticos, J. Pharm.
Biomédico. Anal. 69 (2012) 77-92.
[81]KC De Klerck Tistaert, D. Mangelings, Y. Vander Heyden, Atualizando uma
abordagem de triagem genérica em cromatografia sub ou supercrítica para a
enantioresolução de produtos farmacêuticos, J. Supercrit. Fluidos 80 (2013) 50–59.
339
[82]M. Maftouh, C. Granier-Loyaux, E. Chavana, J. Marini, A. Pradines, Y. Vander
Heyden, C. Picard, Abordagem de triagem para separação quiral de
farmacêuticos. Parte III. Cromatografia de fluido supercrítico para análise e
purificação na descoberta de drogas, J. Chromatogr. A 1088 (2005) 67-81.
[83]CJ Welch, WR Leonard Jr., JO DaSilva, M. Biba, J. Albaneze-Walker, DW Henderson,
B. Laing, DJ Mathre, Preparative quiral SFC as a green technology for quick
access to enantiopurity in Pharmaceutical Process Research, LC- CG 23 (2005)
16–29.
[84]G. Guiochon, A. Tarafder, Revisão Fundamental desafios e oportunidades para
cromatografia de fluido supercrítico preparativa, J. Chromatogr. A 1218 (2011)
1037-1114.
[85]A. Tarafder, Metamorfose de cromatografia de fluido supercrítico para SFC: uma
visão geral, TrAC Trends Anal. Química 81 (2016) 3-10.
[86]LT Taylor, cromatografia de fluido supercrítico para o século 21, J. Supercrit.
Fluidos 47 (2009) 566-573.
[87]M. Saito, História da cromatografia de fluido supercrítico: desenvolvimento
instrumental, J. Biosci. Bioeng. 115 (2013) 590-599.
[88]G. Terfloth, Enantioseparations em cromatografia de fluido super e
subcrítica, J. Chromatogr. A 906 (2001) 301-307.
[89]A. Medvedovici, P. Sandra, L. Toribio, F. David, cromatografia de fluido subcrítico
de coluna empacotada quiral em fases estacionárias quirais de polissacarídeo
e antibiótico macrocíclico, J. Chromatogr. A 785 (1997) 159-171.
[90]K. De Klerck, G. Parewyck, D. Mangelings, Y. Vander Heyden,
Enantiosselectividade da fase estacionária quiral à base de polissacarídeos
em cromatografia de fluido supercrítico usando fases móveis de dióxido de
carbono contendo metanol, J. Chromatogr. A 1269 (2012) 336-345.
[91]K. De Klerck, Y. Vander Heyden, D. Mangelings, resolução de enantiômeros farmacêuticos
usando fases estacionárias quirais à base de polissacarídeo imobilizado em cromatografia
de fluido supercrítico, J. Chromatogr. A 1328 (2014) 85-97.
[92]SH Hoke, JD Pinkston, RE Bailey, SL Tanguay, TH Eichhold, Comparação de
cromatografia de fluido supercrítico de coluna compacta-espectrometria de
massa em tandem com cromatografia líquida-espectrometria de massa em
tandem para determinação bioanalítica de (R)-e (S)-cetoprofeno em plasma
humano após extração automatizada em fase sólida de 96 poços, Anal. Química
72 (2000) 4235-4241.
[93]N. Byrne, E. Hayes-Larson, WW Liao, CM Kraml, Análise e purificação de compostos
quirais sensíveis ao álcool usando 2,2,2-trifluoroetanol como modificador em
cromatografia de fluido supercrítico, J. Chromatogr. B: Anal.
Tecnol. Biomédico. Ciência da Vida. 875 (2008) 237-242.
[94]KL Williams, LC Sander, SA Wise, Uso de uma fase estacionária quiral
naftiletilcarbamoilada-ciclodextrina para a separação de enantiômeros de drogas
e compostos relacionados por cromatografia de fluido sub e supercrítica, Chirality
8 (1996) 325-331.
[95]RQ Wang, TT Ong, SC Ng, Síntese de derivados catiônicos de ciclodextrina e suas
aplicações como fases estacionárias quirais para cromatografia líquida de alta
eficiência e cromatografia de fluido supercrítico, J.
Cromatogr. A 1203 (2008) 185-192.
[96]LA Svensson, PK Owens, cromatografia fluida supercrítica enantiosseletiva
usando fases estacionárias quirais de ristocetina A, Analista 125 (2000)
1037-1039.
[97]Y. Liu, A. Berthod, CR Mitchell, T. Ling Xiao, B. Zhang, DW Armstrong, Separações
quirais de cromatografia de fluido super/subcrítica com fases estacionárias de
glicopeptídeo macrocíclico, J. Chromatogr. A 978 (2002) 185-204.
[98]C. West, Separações enantiosseletivas com fluidos supercríticos – revisão, Curr.
Anal. Química 10 (2014) 99-120.
[99]TA Berger, Instrumentação para cromatografia de fluido supercrítico em
escala analítica, J. Chromatogr. A 1421 (2015) 171-183.
[100]CL Barhate, MF Wahab, DJ Tognarelli, TA Berger, DW Armstrong,
Idiossincrasias instrumentais que afetam o desempenho da cromatografia de
fluido sub/supercrítico quiral ultrarrápido e aquiral, Anal. Química 88 (2016)
8664-8672.
[101]C. Hamman, M. Wong, I. Aliagas, DF Ortwine, J. Pease, DE Schmidt Jr., J. Victorino, A
avaliação de 25 fases estacionárias quirais e a utilização de fases estacionárias
quirais polissacarídicas revestidas sub-2,0 m via supercrítica cromatografia fluida,
J. Chromatogr. A 1305 (2013) 310-319.
[102]L. Sciascera, O. Ismail, A. Ciogli, D. Kotoni, A. Cavazzini, L. Botta, T. Szczerba, J.
Kocergin, C. Villani, F. Gasparrini, Expandindo o potencial da cromatografia quiral
para alto rendimento triagem de grandes bibliotecas de compostos por meio de
sub-2-m Whelk-O 1 fase estacionária em condições de fluido supercrítico, J.
Chromatogr. A 1383 (2015) 160-168.
[103]G. Cancelliere, A. Ciogli, I. D'Acquarica, F. Gasparrini, J. Kocergin, D. Misiti, M. Pierini,
H. Ritchie, P. Simone, C. Villani, Transition from enantiosselective
cromatografia líquida de alta performance a ultra alta performance: um estudo de caso
de uma fase estacionária quiral tipo escova baseada em partículas de sílica sub-5-micron
a sub-2-micron, J. Chromatogr. A 1217 (2010)
990-999.
[104]D. Kotoni, A. Ciogli, C. Molinaro, I. D'Acquarica, J. Kocergin, T. Szczerba, H. Ritchie,
C. Villani, F. Gasparrini, Introducing enantiosselective
cromatografia líquida de ultra-alta pressão (eUHPLC): inspeções teóricas e
separações ultrarrápidas em uma nova fase estacionária sub-2-m Whelk-
O1, Anal. Química 84 (2012) 6805-6813.
[105]D. Kotoni, A. Ciogli, I. D'Acquarica, J. Kocergin, T. Szczerba, H. Ritchie, C. Villani,
F. Gasparrini, Cromatografia líquida enantiosseletiva de ultra-alta e alta
eficiência: um estudo comparativo de colunas baseadas no seletor Whelk-O1,
J. Chromatogr. A 1269 (2012) 226-241.
340 A. Calcaterra, I. D'Acquarica / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 147 (2018) 323-340

[106]I. D'Acquarica, D. Kotoni, A. Ciogli, M. Pierini, J. Kocergin, H. Ritchie, C. Villani, F.
Gasparrini, A evolução de fases estacionárias quirais de HPLC para UHPLC, LC-GC
Europe 27 (2014) 128-137.
[107]A. Cavazzini, N. Marchetti, R. Guzzinati, M. Pierini, A. Ciogli, D. Kotoni, I.
D'Acquarica, C. Villani, F. Gasparrini, Enantiosseparation by
cromatografia líquida de ultra-alta performance, TrAC-Trends Anal. Química 63
(2014) 95-103.
[108]PA Husain, J. Debnath, SW May, método baseado em HPLC para determinação da
configuração absoluta de -aminas quirais, Anal. Química 65 (1993)
1456-1461.
[109]P. Salvadori, C. Bertucci, C. Rosini, detecção de dicroísmo circular em HPLC,
Chirality 3 (1991) 376-385.
[110]G. Bringmann, TAM Gulder, M. Reichert, T. Gulder, A atribuição on-line da
configuração absoluta de produtos naturais: HPLC-CD em combinação com
cálculos químicos quânticos CD, Chirality 20 (2008) 628-642.
[111]M. Albalat-Serradeil, G. Primazot, D. Wilhelm, J.-C. Vallejos, N. Vanthuyne, C. Roussel,
Resolução e configuração absoluta de alguns --aminoacetais: en route to
enantiopureN-protegido --aminoaldeídos, Aminoácidos 43 (2012) 687-696.
[112]E. Badaloni, W. Cabri, A. Ciogli, R. Deias, F. Gasparrini, F. Giorgi, A. Vigevani,
C. Villani, Combinação de abordagem de colunas de quiralidade invertida HPLC e
detecção de MS/MS para determinação de excesso enantiomérico extremo mesmo na
ausência de amostras de referência. Aplicação a derivados de camptotecina, Anal.
Química 79 (2007) 6013-6019.
[113]E. Badaloni, W. Cabri, A. Ciogli, I. D'Acquarica, R. Deias, F. Gasparrini, F. Giorgi, D. Kotoni, C.
Villani, Estendendo o uso da abordagem de colunas de quiralidade invertida para
determinação do excesso enantiomérico na ausência de amostras de referência:
aplicação a um derivado de camptotecina solúvel em água, J. Chromatogr. A 1217 (2010)
1024-1032.
[114]Especificações Q6A: Procedimentos de Teste e Critérios de Aceitação
for New Drug Substances and New Drug Products: Chemical Substances, 2017
www.fda.gov/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/
ucm134966.htm.
[115]Procedimentos de teste e critérios de aceitação [131] J. Wan, P. Gupta, D. Monteith, S. Bhattacharya, Formulações intravenosas de
para Novas Substâncias Farmacêuticas e Novos Medicamentos: Substâncias Químicas, 2017
www.ema.europa.eu/docs/en GB/document library/Scientific guideline/2009/09/[132]J. Wang, W. Zeng, S. Li, L. Shen, Z. Gu, Y. Zhang, J. Li, S. Chen, X. Jia, Discovery
WC500002823.pdf.
[116]MM Hann, Obesidade molecular, potência e outros vícios na descoberta de
drogas, Med. Química Comum. 2 (2011) 349-355. [133]S. McKee, NICE rejeita zurampic para hiperuricemia em pacientes com gota,
[117]EJ Ariens, Estereoquímica: uma base para um absurdo sofisticado em
farmacocinética e farmacologia clínica, Eur. J. Clin. Pharmacol. 26 (1984)
663-668.
[118]SK Branch, I. Agranat, Novas designações de medicamentos para novas entidades
terapêuticas: nova substância ativa nova entidade química, nova entidade biológica,
nova entidade molecular, J. Med. Química 57 (2014) 8729-8765.
[119]H. Leek, S. Andersson, Resolução em escala preparativa de enantiômeros permite
descoberta e desenvolvimento acelerado de drogas, Molecules 22 (2017) 158–166.
[120]LC Hsu, H. Kim, X. Yang, D. Ross, cromatografia quiral em grande escala para a separação
de um enantiômero para acelerar o desenvolvimento de drogas, Chirality 23 (2011)
361-366.
[121]I. Agranat, SR Wainschtein, EZ Zusman, A morte predicada de novas entidades
moleculares racêmicas é um exagero, Nat. Rev. Drug Descov. 11 (2012) 972-973.
[122]H. Caner, E. Groner, L. Levy, I. Agranat, Tendências no desenvolvimento de drogas
quirais, Drug Discov. Hoje 9 (2004) 105-110.
[123]H. Murakami, De racematos a enantiômeros simples – drogas sintéticas quirais nos
últimos 20 anos, Top. atual Química 269 (2007) 273-299.
[124]A. Mullard, aprovações de medicamentos da FDA em 2015, Nat Rev. Drug Discov. 15 (2016) 73-76.
[125]CA Lipinski, F. Lombardo, BW Dominy, PJ Feeney, abordagens experimentais e
computacionais para estimar a solubilidade e permeabilidade na descoberta de drogas
e configurações de desenvolvimento, Adv. Drug Delivery Rev. 23 (1997) 3-25.
[126]P. Leeson, Descoberta de drogas: concurso de beleza química, Nature 481 (2012)
455-456.
[127] M. Lampilas, J. Aszodi, DA Rowlands, C. Fromentin, compostos azabicíclicos, preparação dos
mesmos e utilização como medicamentos, em particular como agentes antibacterianos,
pedido PCT WO 02/10172.
[128] A. Nardi, B. De Angelis, P. Cerea, JL Rafecas, N. Tesson, Processo para a
fabricação de ivabradina e de seus intermediários de síntese. Aplicação PCT
IB2012/001477.
[129]G. Srinivasu, K. Nagesh Kumar, Ch. Thirupathi, cap. Lakshmi Narayana, cap.
Parameswara Murthy, Desenvolvimento e validação do método de HPLC quiral
para daclatasvir no modo de eluição gradiente na fase estacionária quiral
imobilizada à base de amilase, Chromatographia 79 (2016)
1457-1467.
[130]NA Meanwell, 2015 Philip S. Portoghese conferencista de química medicinal. Curando a
infecção pelo vírus da hepatite C com agentes antivirais de ação direta: o arco de um
triunfo da química medicinal, J. Med. Química 59 (2016) 7311-7351.
antagonistas de neuroquinina-1. Pedido PCT WO/2011/019911.
e avaliação de atropisômeros de (±)-lesinurad, ACS Med. Química Lett. 8 (2017)
299-303.
Pharma Times, 2017, 9 de junho de 2017.