Certificado de Análise e Instruções de uso de Controle Interno de Microbiologia

I) Informações Gerais

Cepa: Klebsiella pneumoniae - ESBL

Origem: ATCC 700603
Linhagem da Bactéria: 2ª geração
Embalagem: Frascos de vidro vedados com tampa de borracha e lacre de alumínio azul, com 1 ml de suspensão
bacteriana liofilizada
Estocagem: Enquanto liofilizadas, em freezer a -20ºC. Após reconstituição ver item V deste certificado
Validade: 07/2025
Lote: MICB 3162020

II) Estudo Bioquímico:

ADONITOL + ORNITINA -
ARABINOSE + ONPG +
ARGININA - OXIDASE -
CITRATO + RAFINOSE -
GLICOSE + RAMNOSE +
H2S - REDUÇÃO DE NITRATO +
HIDRÓLISE DA ESCULINA + SACAROSE +
INDOL - SORBITOL +
INOSITOL + TRIPTOFANO DESAMINASE -
LISINA + URÉIA +
MALONATO + VP -
MELOBIOSE + PESQUISA DE ESBL +

Validado em equipamento MicroScan® com probabilidade de identificação final de 99,99%

III) Sugestões para utilização desta cepa:

- Controle de meios bioquímicos/triagem.
- Controle de meios primários.
- Controle de GRAM
IV) Preparação Preliminar da Amostra
1. A amostra é cepa única e pura. Deverá ser manuseada de acordo com os procedimentos técnicos e as normas de
biossegurança;
2. Retire apenas a parte de cima destacável do lacre de alumínio do frasco, sem a retirada total do lacre, expondo a parte
superior da tampa de borracha;
3. Desinfecte, com algodão embebido em álcool 70%, a tampa de borracha exposta;
4. Com auxílio de seringa e agulha estéreis, aspire 01 ml de meio de cultura rico estéril (TSB, BHI, Tioglicolato, Eugon
Broth, Caldo Nutriente ou outro semelhante) e injete no frasco para suspensão da bactéria;
5. Sem retirar a agulha, aspire em seguida 0,5ml da suspensão para inocular em um tubo de cultura com o mesmo tipo do
meio rico e incube na estufa a 35ºC por 24-48 horas;
6. Após crescimento da bactéria, repique para um Agar Sangue para isolamento de colônias puras e prepare uma lâmina
para realizar a coloração pelo método de GRAM. Utilize somente colônias isoladas na placa de ágar
7. Observar a pureza, a morfologia e a característica tintorial da bactéria
8. Realizar procedimento de manutenção e conservação da cepa (item V)
9. As cepas de controle da qualidade devem ser testadas usando os mesmos materiais e métodos empregados para testes
de isolados clínicos

V) Procedimentos utilizados para manutenção e estocagem de microrganismos

Métodos de estocagem Conservação por congelamento Temperatura de Estocagem Viabilidade

Subcultivo ------- ambiente 1 a 3 meses
Óleo mineral ------- 4ºC 1 ano
Congelador Glicerol* - 20ºC 1 a 2 anos
Freezer Skim milk, glicerol* - 70ºC a -196ºC 2 a 30 anos

* Caldo de soja tríptica a 10 - 20% de glicerol (v/v), autoclavar 121ºC por 20 minutos
Os criotubos com selo de proteção interna são os mais utilizados para o processo de armazenamento dessas amostras. Os
criotubos são preparados com antecedência, em volumes que em geral estão em torno de 0,5mL por tubo, e previamente
testados quanto à esterilidade.

VI) Partindo da cepa congelada:

1. Retirar o criotubo com a cepa (ex.: janeiro) do freezer e com o auxílio de uma alça bacteriológica, semear a amostra
ainda congelada em caldo rico (vide item IV.4).
2. Incubar a placa por 18 a 24 horas em temperatura e atmosfera recomendadas.
3. Fazer um segundo repique utilizando duas placas.
4. Numa das placas, fazer os testes de sensibilidade a antimicrobianos (para a 1ª semana).
5. Na outra placa, semear a cepa em três tubos de Ágar Müeller Hinton inclinado.
6. Incubar por 18 a 20 horas em temperatura e atmosfera recomendadas.
7. Colocar esses tubos na geladeira (2 a 8ºC) para serem utilizados nos testes de sensibilidade aos antimicrobianos para a
2ª, 3ª e 4ª semanas do mês, repicar apenas uma vez.
8. Esse procedimento deve ser realizado para todas as cepas envolvidas no CIQ.