Microarray

Microarray
TÓPICOS

Raissa Ribeiro Rodrigues Meneguzzi Definição

RA 158237
Histórico
Bacharelado em Ciência e Tecnologia
Técnica
Bioquímica Analítica

Artigo
Definição

Método empregado para testar e avaliar a expressão de

uma grande quantidade de genes de uma vez só.
Conjunto ordenado contendo milhares de moléculas de
DNA cujo sequenciamento é conhecido.
Propulsor para esse método: necessidade de analisar a
vasta quantidade de dados oriunda do sequenciamento
de genomas .
Definição

Empregados para avaliar simultaneamente a

expressão gênica de variada gama de organismos.
Tem como base a hibridização de ácidos nucleicos .
Fragmento de DNA previamente conhecido é
empregado como sonda cujo objetivo é localizar
sequências complementares.
 Histórico

1975: Advento do Southern Blott, Edwin Southern;

1995: Emprego como ferramenta para estudar a expressão
gênica . Schena et al. usaram um microarranjo de cDNA na
análise quantitativa do transcriptoma de linhagens e órgãos
de Arabidopsis thaliana.
Vantagem sobre outras metodologias vigentes: permitiu
a análise de grande quantidade de transcritos
simultaneamente >> Possibilitou considerável aumento
da capacidade analítica dos processos moleculares.
Histórico

1997: 1ª análise do genoma de um

organismo eucariótico (Saccharomyces
cerevisiae).
1999: técnica de microarranjo passa a ser
usada na análise de expressão gênica.
Técnica

Técnica de Biologia Molecular

Análise da expressão gênica
Empregada na diferenciação de células tumorais x
células não tumorais
Capacidade de avaliar diferentes genes de uma
mesma célula simultaneamente
Técnica
- primer faz o reconhecimento da
cauda poly-A
Extração e Conversão do RNA em cDNA - transcriptase provê a ligação dos
-enzima transcriptase reversa nucleotídeos marcados com
isolamento do
- primers fluoróforo ao RNAm
RNAm das - nucleotídeos marcados com - cDNA formados nesse processo
amostras fluoróforo estarão marcados com fluorescência

células analisadas
devem ser
marcadas com
fluorescências
distintas
 Técnica
Hibridização
- Amostra é aplicada a As amostras de cDNA dos
uma placa (chip de diferentes tecidos competem
DNA) entre si para efetuar ligação por
- Sondas sensibilizadas complementaridade com as
com fragmentos de mesmas bases de nucleotídeos
DNA previamente das sondas.
conhecidos sequência é previamente
conhecida
- sondas emitem fluorescência
conforme a cor dos genes ligados a
elas em maior quantidade.
- Intensidade da luz emitida permite
identificar os genes expressos e a qual
amostra pertencem.
- Chip de DNA é inserido em um scanner
de microarranjo
- Indica quais genes foram expressos
segundo as fluorescências
empregadas
- Emprego de softwares de
bioinformática
Artigo
Artigo
- miofibroblastos: principais células efetoras responsáveis ​pela
exagerada fibrose tecidual na Esclerose;
- Transcriptoma específico desses miobroblastos ainda não foi descrita;
- Objetivo do artigo: identificar diferenças no transcriptoma dos
miofibroblastos da esclerose sistêmica e células não miofibroblásticas;
Artigo
"A esclerose sistêmica (ES) é uma doença difusa do tecido conjuntivo, de
etiopatogenia complexa, marcada pela presença de autoanticorpos e
caracterizada por graus variáveis de fibrose tecidual e vasculopatia de
pequenos vasos. Diversos órgãos podem ser acometidos, com destaque
para a pele, pulmão, coração, rins e trato gastrointestinal (...)."
Artigo
- α-SMA, uma actina expressa nos miofbroblastos, e células negativas α-
SMA foram isoladas da pele de quatro pacientes diagnosticados com
esclerose sistêmica em estágio inicial.
- O RNAm foi extraído de ambas as populações de células, amplificado e
analisado empregando microarranjos. Os resultados para genes
específcos foram validados por Western blot e por imuno-histoquímica.
Artigo
- Foram identificados 97 transcritos diferencialmente expressos nos
miofibroblastos relacionados com a esclerose sistêmica em comparação
com as células não miofibroblásticas;
- As transcrições mais representadas foram de diferentes genes NBPF;
- Estudos in vitro usando culturas de miofibroblastos de esclerose
sistêmica confirmaram aumento da expressão de NBPF nos casos dessa
patologia;
Artigo
- Esses resultados indicam que miofibroblastos de esclerose sistêmica
representam uma linhagem celular única expressando um transcriptoma
específico que inclui níveis muito altos de transcritos correspondentes a
vários genes NBPF;
- Elevada expressão de genes NBPF em miofibroblastos de esclerose
sistêmica sugere que esses genes (NBPF ) podem desempenhar um papel
na patogênese da esclerose sistêmica e pode representar um novo alvo
terapêutico.
Referências Bibliográficas

SCHENA, M. SHALON, D. DAVIS, R. W. BROWN, P. O. Quantitative monitoring of gene

expression patterns with a complementary DNA microarray. Science, 1995.
BUHLER, J. IDEKER, T. HAYNOR, D. Dapple: Improved Techniques for Finding Spots on
DNA Microarrays, 2000.
ABIGNANO, G. HERMES, H. PIERA-VELAZQUEZ, S. et al. Global gene expression
analysis of systemic sclerosis myofibroblasts demonstrates a marked increase in the
expression of multiple NBPF genes. Sci Rep 11, 20435 (2021).
https://doi.org/10.1038/s41598-021-99292-y.
PORTARIA CONJUNTA Nº 09, DE 28 DE AGOSTO DE 2017. Ministério da Saúde, Brasil.
Agradeço!

Recursos

Use estes recursos de design na sua

apresentação do Canva. Bom design!

Não se esqueça de excluir este slide

antes de fazer sua apresentação.