Parte 04

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382 Capítulo 17: O Ciclo Celular
TABELA 17–2 Efeitos dos fatores de crescimento extracelular no tempo de entrada na fase S
(Problema 17–117).
ordem de adição
Experimentar 1 2 3 entrada na fase S
1 EGF PDF IGF1 12 horas
2 EGF IGF1 PDF 12 horas
3 PDF EGF IGF1 1 hora
4 PDF IGF1 EGF 6 horas
5 IGF1 EGF PDF 12 horas
6 IGF1 PDF EGF 6 horas
As células foram tratadas por 6 horas com os fatores de crescimento indicados na ordem listada.
Eles foram cuidadosamente lavados para remover um fator antes que o próximo fosse adicionado.
Após o regime de pré-tratamento com fator, adicionou-se meio completo com 3H-timidina e
determinou-se o tempo de aparecimento dos núcleos marcados.
TRATAMENTO DE DADOS
17–117 As células vertebradas fazem uma pausa na fase G1 do ciclo celular até que as condições
sejam apropriadas para sua entrada na fase S. Alguns dos requisitos para a passagem por
G1 foram definidos usando células 3T3 de camundongo. Na ausência de soro, essas células
não entram na fase S. Quando o soro é adicionado a uma cultura dessas células paradas,
elas progridem para G1 e começam a entrar na fase S 12 horas depois. A necessidade de
soro pode ser atendida pelo fornecimento de três fatores de crescimento extracelulares:
PDGF (fator de crescimento derivado de plaquetas), EGF (fator de crescimento epidérmico)
e IGF1 (fator de crescimento semelhante à insulina 1). Quando esses fatores são misturados
com nutrientes apropriados e adicionados às células quiescentes, as células começam a
entrar na fase S 12 horas depois. Se algum dos fatores for deixado de fora, as células não
controle + anticiclina D
entram na fase S. 100
Os três fatores de crescimento precisam estar presentes ao mesmo tempo? A
estimulação das células é independente uma da outra? Ou eles estimulam as células em
uma sequência ordenada? Para resolver essas questões, você pré-trata as células com os
fatores de crescimento em uma ordem definida e, em seguida, adiciona meio completo
50
positivos
Núcleos
BrdU
para
(%)
(contendo soro e nutrientes) na presença de 3H-timidina. Em vários momentos depois disso,

você x células e as submete a autorradiografia. Você define o tempo de aparecimento dos
primeiros núcleos rotulados como o tempo de entrada na fase S. Os resultados desses
experimentos são apresentados na Tabela 17–2.
0
10 12 14 16
As células requerem esses fatores de crescimento simultaneamente, independentemente tempo após a adição de fatores de crescimento (h)
ou em uma sequência ordenada? Explique sua resposta.
Figura 17–26 Porcentagem de células de controle
17–118 Quando as células em G0 são expostas a fatores de crescimento mitogênicos, elas entram na e células injetadas com anticorpos ciclina D que
fase S cerca de 20 horas após a estimulação, como pode ser detectado pela incorporação entraram na fase S conforme detectado pela
incorporação de BrdU (Problema 17–118).
do análogo de nucleosídeo BrdU. Se os anticorpos contra a ciclina D forem microinjetados
Após a adição de fatores de crescimento
nas células até 12 horas após a adição de fatores de crescimento mitogênico, muito poucas
mitogênicos, as células foram injetadas com
das células injetadas incorporam o BrdU. Em contraste, os anticorpos específicos da ciclina anticorpos ciclina D (ou não) nos tempos
D têm pouco efeito na incorporação de BrdU quando injetados mais de 14 horas após a indicados,
seguida, Problema
incorporação
foram testadas
de BrdUp17.41/17.26
para26 horas apóse, em
a
exposição a fatores de crescimento (Figura 17-26). Qual evento crítico em G1 os anticorpos adição do mitogênico, momento em que as
células desinibidas deveriam foram bem na
contra a ciclina D bloqueiam? Por que os anticorpos contra a ciclina D não têm efeito após
fase S.
14 horas? As barras laranja indicam resultados com células
de controle que não foram injetadas com
17–119 Você descobriu uma nova maneira de estudar leveduras mutantes sensíveis à radiação. anticorpos ciclina D. As barras azuis indicam
Ao cultivar células em uma fina camada de ágar em uma lâmina de microscópio, você pode resultados com células que foram injetadas com
registrar o destino de células individuais. Quando você irradia células do tipo selvagem com anticorpos ciclina D.
CONTROLE DA DIVISÃO CELULAR E CRESCIMENTO CELULAR 383
CÉLULAS DE TIPO SELVAGEM

TABELA 17–3 Frações de células paradas e inviáveis após tratamento
com raios X (Problema 17–119).
Variedade Preso às 10 horas (%) Inviável (%)
Tipo selvagem 50 50
Rad52 90 95
Rad9 20 70
tempo = 0 tempo = 10 horas
raios-x, que causam quebras cromossômicas e acompanham seu crescimento pelas

Rad 9 CÉLULAS
próximas 10 horas, você descobre que a maioria das células para temporariamente no
estágio de broto grande (haltere), mas cerca de metade das células eventualmente se
recupera e forma pequenas colônias viáveis após 10 horas (Figura 17-27). A fração que
ainda está parada no estágio de halteres após 10 horas é igual à fração de células inviáveis
(Tabela 17-3).
Você repete esses experimentos com sete diferentes mutantes sensíveis à radiação
(Rad) . Para seis dos mutantes, você observa uma igualdade semelhante de células
paradas por 10 horas e células inviáveis, conforme mostrado na Tabela 17-3 para o
mutante Rad52 . Em relação às células do tipo selvagem, no entanto, uma fração maior de
células Rad é inviável (Tabela 17-3). tempo = 0 tempo = 10 horas
Um dos sete mutantes Rad tem um fenótipo surpreendentemente diferente.

Muito menos células Rad9 param mesmo temporariamente no estágio de haltere e, após Figura 17–27 Imagens de lapso de tempo
de células do tipo selvagem e Rad9 em zero
10 horas, apenas 20% ainda são paradas (Tabela 17-3). Embora muitas das células se
e 10 horas após a irradiação de raios X
dividam uma ou duas vezes, elas formam principalmente microcolônias inviáveis (Figura
17-27, Tabela 17-3).
A. Para as células do tipo selvagem, decida quais células na população parecem ter maior
probabilidade de permanecer paradas no estágio de halteres após 10 horas (Figura 17-27). Problemas p17.42/17.27
Dado que as células usadas nesses experimentos são haplóides e que as quebras
induzidas por raios-x são reparadas por recombinação homóloga, decida em qual estágio MESMO
CAMINHADA
do ciclo celular as células sensíveis estão.
B. Pela coloração com reagentes de ligação ao DNA e anticorpos específicos para a tubulina, DNA danificado DNA
você mostra que as células no estágio de haltere têm um único núcleo e nenhum fuso não replicado
visível. Dado o que você sabe sobre os pontos de verificação do ciclo celular, em que
estágio do ciclo celular você acha que as células são paradas?
C. Por que metade das células do tipo selvagem param temporariamente no estágio de halteres,
ponto de verificação
mas depois formam colônias viáveis após 10 horas? de entrada mitótica
D. Por que você acha que muito mais células mutantes Rad52 (em relação às células do tipo
selvagem) são paradas no estágio de halteres após 10 horas?
E. Por que você acha que tão poucas células mutantes Rad9 param mesmo temporariamente INDEPENDENTE
CAMINHOS
no estágio de haltere? Por que tantas células Rad9 são inviáveis?
F. Você esperaria que a fração de células Rad9 inviáveis aumentasse, diminuísse ou danificado não replicado
DNA DNA
permanecesse a mesma, se as células fossem artificialmente atrasadas por algumas
horas, usando um inibidor de microtúbulos que evita reversivelmente a formação de
fusos? Explique seu raciocínio.
ponto de verificação
17–120 A levedura de fissão responde ao DNA danificado e ao DNA não replicado retardando a de entrada mitótica
entrada na mitose. Você quer saber como os sinais do DNA danificado e não replicado
interagem com o ponto de verificação de entrada mitótica. Você rastreia um grande número
de cepas mutantes de levedura e encontra seis que não atrasam a mitose em resposta a RAMIFICADA
CAMINHADA
danos no DNA, DNA não replicado ou ambos, conforme mostrado na Tabela 17-4. Qual
das vias de sinalização mostradas na Figura 17-28 é suportada por seus dados? Na via danificado não replicado
DNA DNA
escolhida, indique onde cada um dos genes mutantes atua.
Figura 17-28 Possíveis vias pelas quais os sinais do DNA danificado e do DNA não
replicado podem interagir com o checkpoint de entrada mitótica (Problema 17-120). ponto de verificação
de entrada mitótica
TABELA 17–4 Cepas mutantes que afetam o checkpoint de entrada mitótica

Atraso mitótico em resposta a
cepas mutantes DNA danificado DNA não replicado
Rad24 Não Sim
Cdc2-3w Sim Não
Hus1 Não Não
Hus2 Não Não
Rad1 Não Não
Cdc2-F15 Sim Não
17–121 No ciclo celular da levedura de ssão S. pombe, G1 é muito curto e G2 é muito longo
(exatamente o oposto da situação na levedura de brotamento). Quando um mutante
Wee1 sensível à temperatura (ts) cresce continuamente a 25°C, ele tem um ciclo
celular normal e um tamanho normal (Figura 17-29A). Quando deslocadas para
37°C, as células mutantes passam por um primeiro ciclo celular encurtado porque
a inativação da Wee1 quinase reduz o tamanho do limiar para a mitose, gerando
células menores que o normal (Figura 17-29B) . Surpreendentemente, quando
essas células ts Wee1 crescem continuamente a 37°C, o ciclo celular é de duração
normal, mas agora com um G1 longo e um G2 curto; no entanto, pequenas células
ainda são geradas (Figura 17-29C). O que você acha que aconteceria com as
células ts Wee1 cultivadas continuamente a 37°C se a fase G1 não aumentasse
de comprimento? Proponha uma explicação de como G1 pode ser alongado em
células ts Wee1 cultivadas a 37°C.
17–122 Para tentar decidir se o efeito da superexpressão de células ciclina D e Cdk4 resulta
principalmente de um efeito na taxa de crescimento ou, alternativamente,
principalmente de um efeito no ciclo celular, você examina células terminalmente
diferenciadas que não estão mais se dividindo . Você encontra isso nos olhos da Drosophila ,
(A) ESTADO ESTACIONÁRIO A 25°C tamanho limite para

mitose
G1 S G2
tamanho normal
para divisão
(B) MUDANÇA ATÉ 37°C tamanho

limiar reduzido para
mitose
G1 S G2
(C) ESTADO ESTACIONÁRIO A 37°C tamanho

limiar reduzido para
mitose Figura 17–29 Comprimentos do ciclo celular
e tamanhos de células ts Wee1 cultivadas a
G1 S G2 25°C e a 37°C (Problema 17–121). (A) O ciclo
celular em células ts Wee1 cultivadas
continuamente a 25°C. (B) O ciclo celular em
células ts Wee1 imediatamente após a
Tamanho mudança de 25°C para 37°C. (C) O ciclo
Wee1 para divisão celular em células ts Wee1 cultivadas continuamente a 37°C.
CONTROLE DA DIVISÃO CELULAR E CRESCIMENTO CELULAR 385
(A) OLHO NORMAL (B) OLHO COM SUPEREXPRESSÃO Figura 17–30 Efeitos da superexpressão de
CICLIN D E Cdk4 ciclina D e Cdk4 (Problema 17–122).
(A) Um olho normal. (B) Um olho com um
remendo de células superexpressando
ciclina D e Cdk4.
a superexpressão de ciclina D e Cdk4 causa aumento celular em células pós-

mitóticas (sem divisão) (Figura 17-30).
Esses resultados suportam um papel primário da ciclina D e Cdk4 no
crescimento, ou eles suportam um efeito primário no ciclo celular? Explique seu
raciocínio.
ESTILO MCAT
Passagem 1 (Perguntas 17–123 a 17–126)
Na via de rastreamento de membrana, as vesículas ligadas à membrana brotam do
aparelho de Golgi e são transportadas para a superfície celular, onde se fundem com a
membrana plasmática. Imagine que você descobriu um novo composto que bloqueia a
fusão de vesículas com a membrana plasmática. Você trata as células no início da fase G2
com o composto e descobre que elas não conseguem entrar na mitose. Você hipotetiza
que identificou um novo ponto de verificação do ciclo celular que monitora o crescimento
da membrana para garantir que as células só entrem em mitose quando ocorrer um
Problemas p17.46/17.30
crescimento suficiente da membrana.
17–123 Como você pode testar se as células entraram em mitose?

I. Determine se ocorreu condensação cromossômica II. Medir os níveis
de atividade M-Cdk III. Testar se as células
replicaram seu DNA
A. eu
B. I e II C. I
e III D. II e III
17–124 Você supõe que o bloqueio do crescimento da membrana desencadeia uma

cascata de sinalização de checkpoint que bloqueia a entrada na mitose. Dado o
papel fundamental da M-Cdk na condução da entrada na mitose, qual você acha
que é a maneira mais eficaz de um sinal de checkpoint bloquear a entrada na
mitose? O esquema para ativação de M-Cdk é mostrado na Figura 17–31.
Cdc25
ciclina Quinase ativadora

de CDK
PP
CAK
Cdc25
P
P P
Wee1
Figura 17–31 Esquema para ativação
de M-Cdk (Problema 17–124). O fosfato
inativo Quinase inibidora inativo ativo inibitório é mostrado em vermelho; fosfatos
M-Cdk de Cdk M-Cdk M-Cdk
ativadores são mostrados em amarelo.
A. Ativar CAK B.
Aumentar a síntese de ciclina C.
Inibir Cdc25 D. Inibir
Wee1
17–125 Para explicar como um sinal de checkpoint é gerado, você levanta a hipótese de que o
bloqueio da fusão das vesículas com a membrana plasmática causa o acúmulo de
vesículas no citoplasma. As vesículas não fundidas enviam um sinal repressivo que
bloqueia a entrada na mitose. A qual mecanismo conhecido de sinalização de ponto de
verificação isso seria análogo?
A. O bloqueio da coesão cromossômica leva a cromossomos livres que bloqueiam S
Estágio.
B. Os cromossomos duplicados enviam um sinal que desencadeia a entrada na mitose.
C. Cinetocoros não ligados aos microtúbulos enviam um sinal que bloqueia ana
Estágio.
D. Os cromossomos não condensados enviam um sinal que bloqueia a entrada na fase S.
17–126 Ao tratar células com o composto no início de G1, você descobre que elas param antes
da fase S. Você hipotetiza que um ponto de verificação semelhante atua durante a
fase G1 para garantir que o crescimento suficiente tenha ocorrido antes que as células
entrem na fase S. Qual das alternativas a seguir seria o mecanismo mais plausível
dessa prisão?
A. Inibição da DNA polimerase B. Inibição
da transcrição da ciclina G1 C. Inibição da
atividade Rb D. Superprodução
de E2F
Capítulo 18 387
CAPÍTULO
Morte celular 18
TERMOS PARA APRENDER
proteína anti-apoptótica Bcl2 anti- complexo de sinalização indutora de morte (DISC)

IAP receptor de morte
Apaf1 efetor Bcl2 proteína
apoptose executora caspase via
apoptossomo extrínseca
Atrás fas
Olhar Fas ligante
Bcl2 IAP (inibidor de apoptose) iniciador
BclXL caspase via intrínseca
família bcl (via mitocondrial) p53 morte celular programada fator
BH3 somente proteína de
caspase sobrevivência
citocromo c
DEFINIÇÕES
Combine a definição abaixo com seu termo na lista acima.
18–1 Protease que possui uma cisteína em seu sítio ativo e cliva suas proteínas-alvo em ácidos
aspárticos específicos.
18–2 Conjunto em forma de roda composto por sete cópias do complexo Apaf1/citocromo c .
18–3 Forma de morte celular que leva à fragmentação do DNA, encolhimento do citoplasma, alterações
da membrana e morte celular, sem lise ou danos às células vizinhas.
18–4 Um conjunto de várias proteínas, incluindo caspases iniciadoras, na porção citosólica do receptor
de morte Fas.
18–5 Programa apoptótico desencadeado pela ligação de um sinal extracelular

proteína.
18–6 Molécula sinalizadora extracelular que inibe a apoptose.
18–7 Programa apoptótico que depende da liberação no citosol de proteínas do espaço intermembranar
mitocondrial.
18–8 Molécula da superfície celular que desencadeia a apoptose quando ligada por uma proteína
sinalizadora extracelular.
18–9 Quando clivada por uma caspase iniciadora, essa protease é ativada e
participa dos eventos de clivagem generalizados que matam a célula.
VERDADEIRO/
FALSO Decida se cada uma dessas afirmações é verdadeira ou falsa e explique por quê.
18–10 Em tecidos adultos normais, a morte celular geralmente equilibra a divisão celular.
388 Capítulo 18: Morte Celular
18–11 Células de mamíferos que não possuem citocromo c devem ser resistentes a (A)
apoptose induzida por danos no DNA.
PROBLEMAS DE PENSAMENTO
18–12 Na apoptose, a célula se destrói por dentro e evita o vazamento do conteúdo celular para o
espaço extracelular. Quais seriam as consequências se a apoptose não fosse alcançada
de maneira tão clara e ordenada?
18–13 Compare as regras de proliferação celular e apoptose em um animal com as regras que
governam o comportamento humano na sociedade. O que aconteceria com um animal se
suas células se comportassem como as pessoas normalmente se comportam em nossa sociedade?
As regras que governam a proliferação celular poderiam ser aplicadas às sociedades
humanas? (B)
18–14 Observe atentamente as micrografias eletrônicas na Figura 18–1. Descreva as diferenças entre
a célula que morreu por necrose e a que morreu por apoptose. Como as imagens confirmam
as diferenças entre os dois processos? Explique sua resposta.
18–15 O desenvolvimento do nematóide Caenorhabditis elegans gera exatamente 959 células

somáticas; também produz 131 células adicionais que são posteriormente eliminadas por
apoptose. Experimentos genéticos clássicos em C. elegans isolaram mutantes que levaram
à identificação dos primeiros genes envolvidos na apoptose. Das muitas mutações que
Figura 18–1 Morte celular (Problema 18–14).
afetam a apoptose no nematóide, nenhuma foi encontrada no gene do citocromo c. Por que
(A) Por necrose. (B) Por apoptose.
você supõe que tal molécula eector central na apoptose não foi encontrada nas muitas telas
genéticas para genes de “morte” que foram realizadas em C. elegans?
18–16 Imagine que você poderia microinjetar citocromo c no citosol de células de mamíferos do tipo
selvagem e de células duplamente defeituosas para Bax e Bak. Você esperaria que um,
ambos ou nenhum tipo de célula sofresse apoptose? Explique seu raciocínio.
18–17 Camundongos com defeito para Apaf1 (Apaf1–/–) ou para caspase-9 (Casp9–/–)
morrem na época do nascimento e exibem um conjunto característico de anormalidades,
incluindo supercrescimento cerebral e protuberâncias cranianas. Por que você acha que
tais anormalidades surgem nesses camundongos deficientes?
18–18 Em contraste com suas anormalidades cerebrais semelhantes, camundongos recém-nascidos

deficientes em Apaf1 ou caspase-9 apresentam anormalidades distintas em suas patas.
Camundongos deficientes em apaf1 falham em eliminar as teias entre seus dedos em
desenvolvimento, enquanto camundongos deficientes em caspase-9 têm dedos formados
normalmente (Figura 18-2). Se Apaf1 e caspase-9 funcionam na mesma via apoptótica,
como é possível que esses camundongos deficientes morram na apoptose das células da teia?
CÁLCULOS
18-19 O ligante Fas é uma proteína trimérica extracelular que se liga ao seu receptor, Fas, que é
+/– –/–
composto de três subunidades transmembranares idênticas (Figura 18-3). A ligação do
Apaf1
ligante Fas altera a conformação do Fas para que ele se ligue a uma proteína adaptadora,
que então recruta e ativa a caspase-8, desencadeando uma cascata de caspases que leva
à morte celular. Em humanos, a síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS) está associada
a mutações dominantes em Fas que incluem mutações pontuais e truncamentos C-terminal.
Em indivíduos que são heterozigotos para tais mutações, os linfócitos não morrem em sua +/+ –/–
taxa normal e se acumulam em números anormalmente grandes, causando uma variedade Casp9
de problemas clínicos. Em contraste com esses pacientes, indivíduos heterozigotos para

Figura 18–2 Aparência das patas em
mutações que eliminam totalmente a expressão de Fas não apresentam sintomas clínicos.
Apaf1–/– e Casp9–/– camundongos recém-nascidos
em relação a camundongos recém-nascidos normais
Problemas p18.02/18.02 (Problema 18–18).
MORTE CELULAR 389
receptores ligando (A)
ATIVAÇÃO
10:09 10:15
(B)
CITOSOL
Figura 18–3 A ligação do ligante trimérico Fas ao Fas (Problema 18–19).

17:10 17:18
A. Supondo que as formas normal e dominante de Fas são expressas no mesmo nível e se Figura 18–4 Análise microscópica
de uorescência de vídeo com lapso de
ligam ao ligante Fas igualmente, que fração de complexos Fas-Fas ligante em um linfócito
tempo da liberação de citocromo c–GFP
de um paciente ALPS heterozigoto seria composta inteiramente de subunidades normais de das mitocôndrias de células individuais
Fas ? (Problema 18–20). (A) Células observadas por
B. Em um indivíduo heterozigoto para uma mutação que elimina a expressão do Fas, que 6 minutos, 10 horas após a irradiação UV.
(B) Células observadas por 8 minutos, 17 horas
fração dos complexos Fas-Fas ligante seria esperado ser composta inteiramente de
subunidades Fas normais? após irradiação UV Problems p18.04/18.04 .
Uma célula em (A) e uma em (B), cada uma
C. Por que as mutações do Fas associadas ao ALPS são dominantes, enquanto aquelas que destacada em branco, liberou seu citocromo c–
eliminam a expressão do Fas são recessivas? GFP durante o período de observação, que
é mostrado como horas:minutos abaixo de cada painel.
TRATAMENTO DE DADOS
18–20 Quando as células cancerígenas humanas são expostas à luz ultravioleta (UV) a 90 mJ/ cm2, a
maioria das células sofre apoptose em 24 horas. A liberação de citocromo c da mitocôndria
pode ser detectada até 6 horas após a exposição de uma população de células à luz
ultravioleta e continua a aumentar por mais de 10 horas depois disso. Isso significa que as
células individuais liberam lentamente seu citocromo c durante esse período de tempo? Ou,
alternativamente, as células individuais liberam seu citocromo c rapidamente, mas com
células diferentes sendo acionadas durante um período de tempo mais longo?
Para responder a essa pergunta fundamental, você fundiu o gene da proteína

fluorescente verde (GFP) com o gene do citocromo c, de modo que possa observar o
comportamento de células individuais por microscopia de fluorescência confocal. Nas
células que expressam a fusão citocromo c-GFP, a uorescência mostra o padrão pontilhado
típico das proteínas mitocondriais. Em seguida, você irradia essas células com luz TRATAMENTO
ultravioleta e observa as células individuais quanto a alterações no padrão pontilhado. Duas actinomicina D ++
dessas células (descritas em branco) são mostradas na Figura 18-4A e B. A liberação de estaurosporina ++
luz UV + +
citocromo c-GFP é detectada como uma mudança de um padrão de uorescência pontilhado
para diuso. 10
Os tempos após a exposição aos raios UV são indicados como horas:minutos abaixo dos 8
painéis individuais.
6
Qual modelo para a liberação do citocromo c essas observações suportam citocromo
liberação
Duração
(min)
GFP
do
de
da
c
porta? Explique seu raciocínio. 4
2
18–21 Uma estratégia celular comum para gerar uma resposta rápida é usar um loop de feedback
positivo. A liberação rápida de citocromo c da mitocôndria em resposta ao dano celular pode 0 – + –+– +
resultar desse feedback positivo. Por exemplo, as caspases ativadas pelo citocromo c zVAD
poderiam atuar nas mitocôndrias para liberar citocromo c adicional. Para testar essa
possibilidade, as células que expressam uma fusão citocromo c-GFP foram incubadas na Figura 18–5 Duração da liberação do
citocromo c–GFP das mitocôndrias em
presença ou ausência do inibidor de caspase de amplo espectro zVAD antes da exposição
células tratadas com vários agentes indutores
a uma variedade de agentes indutores de apoptose. O tempo médio para liberação do
de apoptose na presença e ausência de um
citocromo c-GFP das mitocôndrias em células individuais foi então comparado, conforme inibidor de caspase Problema p18.05/18.05
mostrado na Figura 18-5. (Problema 18–21). As barras representam a
média das medições em várias células individuais.
390 Capítulo 18: Morte celular
ativado Figura 18–6 Ativação desencadeada pelo

fas Fas da via intrínseca da apoptose em MEFs
(Problema 18–22). Bax e Bak estão sombreados
caspase-8
para indicar que a oligomerização de ambos
inativa caspase-8 ativa
depende de tBid.
Oferta lance
Olhar Bax oligomérico
Atrás Bak oligomérica
citocromo c citocromo c
mitocondrial citosólico
CÉLULA
MORTE
Problemas p18.06/18.06 Se um
loop de feedback positivo mediado por caspase estivesse envolvido na liberação
rápida de citocromo c-GFP das mitocôndrias, quais resultados você esperaria para
células que foram incubadas na presença do inibidor de caspase? Suas expectativas
correspondem aos resultados observados?
Um loop de feedback positivo mediado por caspase está envolvido na liberação do
citocromo c ?
18-22 A ativação do Fas ativa a caspase-8, que desencadeia a via extrínseca da apoptose. Em
algumas células, a ativação do Fas também envolve a via intrínseca da apoptose.
Nessas células, a caspase-8 cliva a proteína Bid para produzir um fragmento ativo,
tBid, que se liga à membrana mitocondrial. tBid promove a oligomerização de Bax e
de Bak, que estimula a liberação de citocromo c no citosol para desencadear eventos
que levam à apoptose (Figura 18-6). Para estudar essa via com mais detalhes, você
gerou broblastos de embriões de camundongos (MEFs) que são Bax–/–, Bak–/– ou
Bax–/–Bak–/–. Você também construiu um vetor que expressa tBid para poder estudar
o processo independentemente de Fas.
Em MEFs não tratados e em MEFs tratados com o vetor vazio, que não carrega
tBid, muito poucas células sofrem apoptose (Figura 18-7). Em contraste, quando MEFs
são tratados com o vetor que expressa tBid, as células do tipo selvagem e as células
30
individualmente defeituosas para Bax ou Bak mostram um aumento dramático nas
não tratado
células apoptóticas. MEFs que são defeituosos para Bax e Bak, no entanto, não
vetor vazio tBid
mostram aumento no número de células apoptóticas (Figura 18-7). Entre as várias
células mutantes, o citocromo c é retido na mitocôndria apenas nos MEFs Bax–/– 20
Bak–/– tratados com tBid.

apoptóticas
células
(%)
O que esses resultados dizem sobre os requisitos de Bax e Bak na apoptose induzida
pelo citocromo c? Explique seu raciocínio.
10
18–23 Uma variedade de tratamentos pode fazer com que as células sofram apoptose. Você
deseja saber quais desses tratamentos induzem sinais que são processados por meio
de Bid, Bax e Bak (consulte a Figura 18–6). Você gera broblastos de embrião de
0
–/– –/–
camundongo Bid–/– e Bax–/–Bak–/– (MEFs) e os testa para apoptose em resposta a tipo Olhar Ver+/+ Ver
–/– –/–
vários tratamentos, com os resultados mostrados na Tabela 18–1. selvagem Traseira+/+ Atrás Atrás
genótipos
A. Com base nesses resultados, indique onde cada um dos sinais entra na via apoptótica
Figura 18–7 Apoptose induzida pela expressão
em relação a Bid, Bax e Bak.
de tBid em MEFs de tipo selvagem, deficiente
B. Como você acha que o ligante Fas, que se liga ao Fas, consegue causar apoptose em em Bax, deficiente em Bak e duplamente deficiente
células deficientes em Bid e em células deficientes em Bax e Bak? (Problema 18–22).
MORTE CELULAR 391
TABELA 18–1 Resultados em Bid–/– e Bax–/–Bak–/– MEFs de vários tratamentos que causam
apoptose em células do tipo selvagem (Problema 18–23).
Apoptose
Tratamento Efeito Oferta-/- Olhe olhe-/-
Fas ligante Ativa Fas Sim Sim
estaurosporina Inibe proteínas quinases Sim Não
luz UV Danifica o DNA Sim Não
Etoposídeo Inibe a topoisomerase II Sim Não
tunicamicina Bloqueia a glicosilação ligada a N Sim Não
tapsigargina Inibe a bomba de Ca2+ Sim Não
no retículo endoplasmático
LINKS MÉDICOS
18–24 Um papel importante do Fas e do ligante Fas é mediar a eliminação de células

tumorais por linfócitos assassinos. Em um estudo de 35 tumores primários de
pulmão e cólon, descobriu-se que metade dos tumores tinha amplificado e
superexpressado um gene para uma proteína secretada que se liga ao ligante
Fas. Como você supõe que a superexpressão dessa proteína pode contribuir
para a sobrevivência dessas células tumorais? Explique seu raciocínio.
18–25 Agentes alquilantes são comumente usados para a quimioterapia do câncer porque
são altamente citotóxicos, induzindo a morte por apoptose. Agentes como N-metil-
Neg-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) alquilam uma variedade de alvos celulares,
incluindo DNA, RNA, proteínas e lipídios. Qual desses alvos gera o sinal para
apoptose? A lesão mutagênica mais comum no DNA, a O6-metilguanina, pode
ser removida pela enzima O6-metilguanina metiltransferase (MGMT). Para testar
a possibilidade de que a alquilação do DNA seja responsável pelo sinal apoptótico,
você compara a apoptose induzida por MNNG em células que são deficientes
para MGMT com apoptose em células que superexpressam MGMT (Figura
18-8A). Como controle, você compara a apoptose mediada por -irradiação
(Figura 18-8B). Esses resultados suportam a ideia de que a alquilação do DNA
leva ao sinal apoptótico? Por que ou por que não?
(A) (B)
60
– MGMT
– MGMT
ESTILO MCAT
40
Passagem 1 (Perguntas 18–26 a 18–28) células
mortas
(%)
Estudos iniciais de apoptose descobriram que a adição de dATP a um extrato de proteína 20 +MGMT
feito de células humanas desencadeia os eventos iniciais de apoptose, incluindo a ativação
+MGMT
de uma caspase chave. Para determinar como os eventos apoptóticos foram iniciados, os
cientistas fracionaram o extrato em uma coluna de troca iônica, que separava as proteínas 2
0 0 3 dias1 após MNNG 0 1 2 3 dias após raios
que se ligavam à coluna daquelas que passavam por ela. Nem a fração ligada nem a fração ÿ
livre isoladamente foram capazes de ativar a caspase em resposta ao dATP; porém,
quando as frações foram combinadas na presença de dATP, iniciaram eventos apoptóticos. Figura 18–8 Apoptose induzida em células
A purificação da atividade na fração ligada produziu uma única proteína que se descobriu deficientes em MGMT e células
superexpressas de MGMT (Problema
ser o citocromo c, fornecendo a primeira evidência de que o citocromo c controla a
18–25). (A) Apoptose induzida por
apoptose. A purificação da atividade na fração não ligada também rendeu uma única MNNG. (B) Apoptose induzida por
proteína. As duas proteínas purificadas na presença de dATP foram suficientes para iniciar -irradiação.
indicam
deficientes
problemasCírculos
para vermelhos
deMGMT;
células os
p18.09/18.09
círculos
eventos apoptóticos. azuis indicam células que superexpressam MGMT.
392 Capítulo 18: Morte Celular
18–26 Qual das seguintes hipóteses explica melhor o papel do profissional

teína na fração não ligada?
A. Ativa caspases executoras, que desencadeiam eventos apoptóticos.
B. Forma um complexo com o citocromo c que inicia eventos apoptóticos.
C. Inibe a apoptose e o citocromo c a inativa para iniciar a apoptose
eventos.
D. Promove a liberação de citocromo c da mitocôndria para iniciar o apop
tose.
18–27 A descoberta de que o citocromo c promove a apoptose concentrou a atenção em

como o citocromo c é liberado no citosol. Inicialmente não estava claro se o citocromo c
que causa a apoptose vem da mitocôndria ou, em vez disso, era expresso a partir de um
gene nuclear e sintetizado no citosol. Qual das seguintes observações forneceria a melhor
evidência de que é o citocromo c liberado da mitocôndria que causa a apoptose?
A. Receptores ativos de morte do Fas desencadeiam a liberação do citocromo c do mito

chondria.
B. Bcl2 bloqueia a liberação de citocromo c das mitocôndrias e também inibe
apoptose.
C. Os inibidores de caspases bloqueiam a liberação do citocromo c das mitocôndrias.
D. Os sinais extracelulares que bloqueiam a apoptose não produzem citosol
cromo C.
18–28 Qual das seguintes opções bloquearia a liberação de citocromo c das mitocôndrias?
I. Proteína Bcl2 II.

Fatores de sobrevivência
III. Fas ligante
A. eu
B. II
C. I e II D. I,
II e III
Capítulo 19 393
CAPÍTULO
Junções celulares e
Matriz extracelular 19
JUNÇÕES CÉLULA-CÉLULA NESTE CAPÍTULO
TERMOS PARA APRENDER JUNÇÕES CÉLULA-CÉLULA
junção aderente junção comunicante A MATRIZ EXTRACELULAR

cinturão de do tecido
DOS ANIMAIS
adesão junção de epitelial
imunoglobulina homofílica (Ig) JUNÇÕES CÉLULA-MATRIZ
ancoragem superfamília integrina caderina não clássica A PAREDE DA CÉLULA DA PLANTA
apical basal caderina Proteína

caderina superfamília andaime polarizada
caderina clássica
tecido conjuntivo conexina plasmodesmata
conexão domínio
epitélio PDZ selectina
desmossoma proteína de adesão transmembrana de junção apertada
DEFINIÇÕES
Combine cada definição abaixo com seu termo na lista acima.
19–1 Membro de uma família de proteínas de ligação a carboidratos da superfície celular que medeiam
a adesão célula-célula transitória dependente de Ca2+ na corrente sanguínea, por exemplo,
entre os glóbulos brancos e o endotélio da parede do vaso sanguíneo.
19–2 Interações protéicas like-to-like nas quais uma molécula em uma célula se liga a
uma molécula idêntica ou intimamente relacionada em uma célula adjacente.
19–3 Tipo de junção de ancoragem que liga os lamentos intermediários em duas células adjacentes.
19–4 Descreve uma propriedade estrutural das folhas epiteliais e suas células individuais, que têm uma
superfície ligada à lâmina basal abaixo e a superfície oposta exposta ao meio acima.
19–5 Estrutura proteica que cria canais diretos do citoplasma de uma célula para o citoplasma de uma
célula adjacente.
19-6 Junção de ancoragem que conecta os lamentos de actina em uma célula aos da célula seguinte.
19–7 Membro de uma família de proteínas que medeiam célula-célula dependente de Ca2+
adesão em tecidos animais.
19–8 Junções célula-célula comunicantes em plantas nas quais um canal de citoplasma revestido por
membrana plasmática conecta duas células adjacentes através de um pequeno poro em
suas paredes celulares.
19–9 Junção de ancoragem em forma de cinturão que circunda a extremidade apical de um epitélio
célula e a anexa às células adjacentes.
394 Capítulo 19: Junções celulares e a matriz extracelular
19–10 Tipo principal de junção oclusiva em vertebrados; ele sela as células epiteliais adjacentes, impedindo
a passagem da maioria das moléculas dissolvidas de um lado da folha epitelial para o outro.
19–11 Descreve a ponta de uma célula; para uma célula epitelial, é a superfície livre exposta
face oposta à superfície aderida à lâmina basal.
19–12 Poro cheio de água na membrana plasmática formado por um anel de seis subunidades de
proteínas, que se ligam a um conjunto idêntico em uma célula adjacente para formar um canal
contínuo entre as duas células.
VERDADEIRO FALSO
Decida se cada uma dessas afirmações é verdadeira ou falsa e explique por quê.
19–13 Dados os numerosos processos dentro das células que são regulados por mudanças na
concentração de Ca2+ , parece provável que as adesões célula-célula dependentes de Ca2+
também sejam reguladas por mudanças na concentração de Ca2+ .
19–14 As caderinas promovem interações célula-célula ligando-se a moléculas de caderinas do mesmo

subtipo ou subtipos intimamente relacionados em células adjacentes.
19–15 As selectinas em uma célula promovem interações célula-célula transitórias por ligação
a porções de carboidratos na superfície de outra célula.
19–16 Embora as caderinas e os membros da família Ig sejam frequentemente expressos nas mesmas
células, as adesões mediadas pelas moléculas de Ig são muito mais fortes e, portanto, são
amplamente responsáveis por manter as células unidas.
19–17 Praticamente todos os epitélios estão ancorados a outros tecidos em seu lado basal e livres dessa
ligação em seu lado apical.
19-18 As junções apertadas desempenham duas funções distintas: elas selam o espaço entre as células
para restringir o fluxo paracelular e cercam os domínios da membrana plasmática para evitar a
mistura de proteínas da membrana apical e basolateral.
19–19 Como os processos de transporte correspondentes através da membrana plasmática, o transporte

paracelular pode ser ativo ou passivo.
19–20 Ao contrário dos canais iônicos convencionais, os canais individuais de junções comunicantes
permanecem abertos continuamente depois de formados.
19–21 As células em uma planta podem ser vistas como formando um sincício, no qual muitos
núcleos celulares compartilham um citoplasma comum.
19–22 Comente a seguinte citação (1922) de Warren Lewis, que foi um dos pioneiros da biologia celular.
“Se os vários tipos de células perdessem sua aderência umas às outras e à matriz extracelular
de suporte, nossos corpos se desintegrariam imediatamente e fluiriam para o solo em um
fluxo misto de células.”
locais de locais de
clivagem ligação do antígeno

da papaína
19–23 As moléculas de adesão celular foram originalmente identificadas usando anticorpos criados contra
componentes da superfície celular para bloquear a agregação celular. Nos ensaios de bloqueio PAPAINHA
de adesão, os pesquisadores acharam necessário usar fragmentos de anticorpos, cada um

com um único local de ligação (os chamados fragmentos Fab), em vez de anticorpos IgG
intactos, que são moléculas em forma de Y com dois locais de ligação idênticos. Os fragmentos
Fab foram gerados digerindo os anticorpos IgG com papaína – uma protease – para separar os anticorpo IgG fragmentos fabulosos
dois sítios de ligação (Figura 19-1). Por que você acha que foi necessário usar fragmentos Fab
Figura 19–1 Produção de fragmentos Fab a
para bloquear a agregação celular? partir de anticorpos IgG por digestão com
papaína (Problema 19–23).
JUNÇÕES CÉLULA-CÉLULA 395
(A) E-caderina Figura 19–2 Separação de células dependentes

de caderina (Problema 19–24). (A) Classificação
ORDENAÇÃO
de uma mistura de células que expressam duas
FORA
caderinas diferentes. (B) Classificação de uma
mistura de células que expressam dois níveis
diferentes da mesma caderina.
P-caderina
(B) baixo P-caderina
ORDENAÇÃO
FORA
alta P-caderina
19–24 As células L de camundongos provaram ser um sistema modelo extremamente útil

para investigar as propriedades das caderinas porque normalmente não
expressam nenhuma caderina. Se populações diferentes de células L forem
transfectadas com vetores que expressam uma ou outra de duas caderinas
diferentes, e então dissociadas e misturadas, elas se segregam em duas bolas
de células separadas, cada uma unida por uma caderina diferente . Se duas
populações de células que expressam níveis diferentes da mesma caderina
forem misturadas, elas se segregam em uma única bola de células, com a
população de baixa expressão do lado de fora (Figura 19-2) .
A. Por que você supõe que populações de células que expressam níveis diferentes
da mesma caderina segregam com essa estrutura em camadas característica?
Por que eles não se separam em duas bolas separadas? Ou uma bola mista?
Ou uma bola com a população de baixa expressão no interior?
B. Que tipo de arquitetura final você poderia esperar se misturasse duas populações
de células que expressam a P-caderina em comum, mas, além disso, uma
população expressa a E-caderina e a outra expressa a N-caderina?
19–25 Embora tenhamos acumulado uma grande quantidade de informações sobre os

componentes e a aparência morfológica das junções apertadas, ainda sabemos
relativamente pouco sobre como as moléculas passam por elas. Um estudo
elegante usou uma série graduada de moléculas de polietileno glicol (PEG)
com raios variando de 0,35 nm a 0,74 nm. Colocando as moléculas de PEG em
um lado de uma folha epitelial de células intestinais e medindo sua taxa de
aparecimento no outro lado, os pesquisadores determinaram a permeabilidade
da junção apertada em função do raio do PEG (Figura 19-3) . . Eles interpretam
esses resultados em termos de um poro restritivo comum com um raio de cerca
de 0,43 nm e uma passagem não restritiva muito mais rara. O tamanho do poro
restritivo é
A. definido pelo corte agudo da parte inicial da curva. Por que você supõe que a
permeabilidade das moléculas de PEG que são menores do que o poro - as
três menores moléculas - diminui acentuadamente com o aumento do tamanho?
Por que todas as moléculas de PEG que não conseguem passar pelo poro não
o permeiam na mesma taxa?
tamanho
dos poros
1
permeabilidade
cortar
0
Figura 19–3 Permeabilidade paracelular de uma
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 série graduada de moléculas de PEG (Problema 19–
raio de moléculas de PEG (nm) 25).
(A) eu
EM (B)
G C toxina de
C Clostridium + – –+ –
Claudin-2 SWRTSSYVGASIVTAVGFSKGLWMECATHSTGITQCDIYSTLLGLPADIQAAQ
EM EXTRACELULAR
ESPAÇO
++ –+ + +– +
Claudin-14 HWRRTAHVGTNILTAVSYLKGLWMECVWHSTGIYQCQIYRSLLALPRDLQAAR
CITOSOL – ––– + – + –––– ++ –

N C Claudin-16 TWTDCWMVNADDSLEVSTKCRGLWWECVTNAFDGIRTCDEYDSILAEHPLKLVVTR
Motivo de
reconhecimento PDZ
B. A identidade da passagem paracelular maior, mas muito mais rara, não é Figura 19–4 Estrutura de Claudin (Problema
19–26). (A) Modelo representando
conhecido. Você pode sugerir algumas possibilidades?
as características estruturais e funcionais
conservadas das claudinas.
19–26 As moléculas de claudina em uma célula ligam-se àquelas em uma célula adjacente para
Aminoácidos destacados no primeiro
formar uma junção compacta. As interações entre os domínios extracelulares nas moléculas
de claudina pareadas dos Problemas loop extracelular indicam os resíduos de
p19.06/19.04 formam os poros que restringem o transporte paracelular de pequenas assinatura característicos de todas as
moléculas e íons. Acredita-se que a primeira alça extracelular de moléculas de claudina claudinas. Embora não tenha havido
(Figura 19-4A) forme o próprio poro. A Figura 19-4B mostra as sequências do primeiro demonstração direta de uma ligação
loop extracelular em três moléculas de claudina. Com base nessas sequências, qual das dissulfeto entre as cisteínas conservadas,
parece provável dado o ambiente extracelular
claudinas você acha que pode formar um poro catiônico? Explique seu raciocínio. oxidante e sua conservação entre as claudinas.
O motivo de reconhecimento PDZ indica
o local de ligação para proteínas que contêm
19–27 A permeabilidade das junções comunicantes é regulada pelo Ca2+. Você esperaria que domínios PDZ, que podem ligar as caudas C-
as junções comunicantes se abrissem ou fechassem quando a concentração intracelular terminal de moléculas transmembrana
de Ca2+ aumentasse acima de seus níveis normais? Por que essa resposta é vantajosa? específicas. O local de ligação da toxina
Clostridium também é indicado
19–28 Se as células de uma planta estão todas conectadas umas às outras por plasmodesmas, por (consulte o Problema 19-39). (B)
que o citoplasma de toda a planta não vaza para o chão quando você corta o caule? Sequências de aminoácidos da primeira alça
extracelular em três diferentes claudinas.
Os resíduos destacados indicam os
19–29 É necessária uma força de cerca de 20 piconewtons (pN) para puxar uma proteína aminoácidos de assinatura. Os resíduos
carregados são indicados com os sinais + e –.
transmembranar como a P-selectina de uma bicamada lipídica pura. Puxar uma molécula
de P-selectina para fora da membrana plasmática requer mais de 110 pN. Por que você
acha que é preciso muito mais força para puxar a P-selectina para fora da membrana
plasmática do que para fora de uma bicamada lipídica?
CÁLCULOS
19–30 A microscopia de força atômica pode ser usada para medir a força de interações individuais.
Esta técnica mostrou que a força de ligação entre as moléculas de adesão individuais em
uma esponja marinha foi em média de 125 piconewtons (pN) sob condições fisiológicas.
Quão forte é essa interação? Como o objetivo dessas ligações é manter as células juntas,
essa questão pode ser reformulada em termos do número de células que uma interação
poderia suportar contra a força da gravidade na água do mar; ou seja, que número de
células pesa 125 pN? O peso (W) de uma célula na água do mar é dado pela equação de
Arquimedes W = gV(célula – água do mar)
onde
g é a constante gravitacional (9,81 N/kg)
V é o volume da célula [(4/3)r3] célula é a
densidade da célula (1100 kg/m3)
água do mar é a densidade da água do mar (1018 kg/m3)
Supondo que as células sejam esferas com um raio de 5 ÿm, calcule o peso de uma célula
na água do mar. Quantas células poderiam ser suportadas por uma ligação com força de
125 pN?
(A) ANEXO (B) INJEÇÃO
cabeça
fibras da cauda
OmpC
LPS
placa de base
Espaço
local de adesão O DNA do fago
periplásmico
entre as membranas entra na
interna e externa bactéria
19–31 A ligação do bacteriófago T4 à E. coli K ilustra o valor de múltiplas interações Figura 19–5 Infecção pelo bacteriófago
T4 (Problema 19–31). (A) Fixação à
fracas, que permitem o movimento relativo até que as conexões fixas sejam
superfície bacteriana. (B) Injeção de seu DNA.
feitas (Figura 19-5). Durante a infecção, o T4 primeiro se liga à superfície da E.
coli pelas pontas de suas seis caudas. Em seguida, ele vagueia pela superfície
até encontrar um local apropriado para a fixação de sua placa de base. Quando
a placa de base está firmemente presa, a bainha da cauda se move, injetando
o DNA doos
infecção: fago
(Figura 19-5). A interação inicial da célula caudal-superfície é na
fagos bactéria
crítica
quepara
não a
possuem caudas são totalmente não infecciosos.
A análise da fixação de T4 é bastante simplificada pela facilidade com que

bactérias resistentes e fagos defeituosos podem ser obtidos. Os mutantes
bacterianos resistentes à infecção por T4 dividem-se em duas classes: uma
carece de uma importante proteína da membrana externa chamada OmpC
(proteína C da membrana externa); o outro contém alterações na longa cadeia
polissacarídica normalmente associada ao lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano.
A infecciosidade de T4 em células do tipo selvagem e mutantes é indicada na
Tabela 19-1. Esses resultados sugerem que cada cauda de T4 possui dois sítios
de ligação: um para LPS e outro para OmpC. Micrografias eletrônicas mostrando
a interação entre caudas isoladas e LPS sugerem que as associações individuais
não são muito fortes, uma vez que apenas cerca de 50% das fibras parecem estar ligadas ao LPS.
A. Suponha que, em qualquer instante, cada uma das seis caudas tenha uma
probabilidade de 0,5 de estar ligada ao LPS e a mesma probabilidade de estar
ligada ao OmpC. Com essa suposição, a fração da população de fagos na
superfície bacteriana que não terá nenhuma de suas seis caudas ligadas em um
determinado instante é (0,5)12 (que é a probabilidade de um determinado sítio
de ligação não estar ligado, 0,5, elevado a o número de sítios de ligação, dois
em cada uma das seis caudas). À luz dessas considerações, que fração da
população de fagos será anexada em qualquer instante por pelo menos uma cauda?
TABELA 19–1 Infecciosidade do fago T4 em vários mutantes bacterianos (Problema

19–31).
Cepa bacteriana Infecciosidade do fago T4

em relação ao não mutante
ompC+ LPS+ 1
ompC– LPS+ 10–3
ompC+ LPS– 10–3
ompC– LPS– 10–7

entre Figura 19-6 Duas vistas de uma junção estreita

células que liga as células em um epitélio (Problema
19-32).
caminho
superfície apical entre as células
junção
apertado
vista lateral da vista de rosto

junção apertada de junção apertada
ber? (A fração aderida é igual a um menos a fração não aderida.) Suponha

que faltasse OmpC às bactérias. Que fração da população de fagos estaria
agora ligada por pelo menos uma cauda em qualquer instante?
Problemas p19.07/19.06 B.
Surpreendentemente, a comparação acima do tipo selvagem e bactérias ompC-
sugere apenas uma diferença muito pequena na fração ligada da população de
fagos em qualquer instante. Conforme mostrado na Tabela 19-1, a infectividade
dos fagos nessas duas linhagens morre por um fator de 1.000. Você pode
sugerir uma explicação que possa resolver esse aparente paradoxo?
19–32 Você e seu orientador observaram há algum tempo que existe uma correlação
aproximada entre a resistência elétrica de um epitélio e o número de filamentos
de vedação nas junções apertadas. Isso faz sentido intuitivamente porque a
corrente através de um epitélio é transportada por pequenos íons que devem
penetrar na junção estreita (Figura 19-6). Você pode imaginar duas maneiras
pelas quais a resistência pode depender do número de fios de vedação. Se cada
fio de vedação fornecesse uma determinada resistência, então a resistência
geral de uma junção estanque seria linearmente relacionada ao número de fios
de vedação (como resistores elétricos em série). Por outro lado, se cada fio de
vedação pudesse existir em dois estados - um estado fechado de alta resistência
e um estado aberto de baixa resistência - a resistência da junção apertada
estaria relacionada à probabilidade de que todos os fios em um determinado
caminho através da junção seria aberto ao mesmo tempo. Nesse caso, a
resistência total seria logaritmicamente relacionada ao número de fios de vedação.
Para colocar a ideia em uma base quantitativa para que você possa distinguir
entre essas duas possibilidades, você mede a resistência de quatro epitélios
diferentes de um coelho: o túbulo proximal muito permeável do rim, a vesícula
biliar menos permeável, o túbulo distal apertado do o rim, e o epitélio da bexiga
muito apertado. Além disso, você prepara micrografias eletrônicas de fratura
por congelamento, a partir das quais determina o número médio de fios de
vedação nas junções apertadas que cercam cada célula nesses epitélios. Os
resultados são mostrados na Tabela 19–2. Qual dos dois
TABELA 19–2 Correlação entre a resistência elétrica e o número de fios de vedação nas
junções apertadas de vários epitélios (Problema 19–32).
epitélio de coelho Vertentes em junção apertada Resistência elétrica

(número médio) (relativa)
Túbulo proximal 1.2 1,0
Vesícula biliar 3.3 4.7
túbulo distal 5.3 52
Bexiga urinária 8,0 470

interpretações propostas da correlação entre a resistência elétrica do epitélio e o

número de fios de vedação em uma junção apertada são suportadas por suas
medições?
19–33 Os plasmodesmos desempenham funções críticas nas células vegetais, mas os

componentes proteicos que presumivelmente conferem essas funções têm se
mostrado muito difíceis de caracterizar. Parte do problema surge porque os
plasmodos mata são apenas uma pequena fração do citoplasma total da célula;
portanto, são difíceis de purificar. Que fração do citoplasma de uma célula vegetal
está contida em seus plasmodesmas? Como base para uma estimativa aproximada,
suponha que uma célula vegetal com 1000 ÿm3 de citoplasma tenha 100
plasmodesmas, cada um dos quais é um cilindro de 30 nm de diâmetro e 100 nm de comprimento.
TRATAMENTO DE DADOS
19–34 Você suspeita que a caderina que você clonou está ligada ao citoesqueleto,
presumivelmente por sua cauda citoplasmática. Para identificar as proteínas às
quais ela se liga, você expressa sua caderina em uma linha celular de camundongo
que não expressa nenhuma outra caderina. Você marca as células com metionina
35S por 16 horas, homogeneíza-as em detergente e precipita a caderina e quaisquer
proteínas associadas usando anticorpos contra o domínio extracelular da caderina.
Em seguida, você analisa os precipitados imunológicos por eletroforese em géis de
poliacrilamida SDS, seguido de autorradiografia para tornar visíveis as proteínas
marcadas. Como mostrado na pista 1 na Figura 19-7A, o anticorpo precipita três
proteínas principais em células transfectadas com um plasmídeo que expressa a
caderina intacta de comprimento total. Essas proteínas não são precipitadas de
células de controle não tratadas (Figura 19–7A, faixa 7), verificando a especificidade
do seu anticorpo.
Para identificar a porção da molécula de caderina necessária para ligar as outras
duas proteínas, você faz uma série de construções com deleções na cauda
citoplasmática e realiza o mesmo tipo de análise (Figura 19-7A e B).
A. Na autorradiografia da Figura 19-7A, identifique as bandas correspondentes à sua

caderina e as bandas correspondentes às proteínas que se ligam à sua caderina.
Dê seu raciocínio.
B. Qual segmento da caderina é necessário para ligação ao outro pro
tein?
C. Como você pode verificar se o segmento que você identificou é todo
que é necessário para se ligar às outras proteínas?
19–35 As micrografias eletrônicas de fratura por congelamento fornecem belas imagens de

junções apertadas. Você está curioso para ver se os fios juncionais são realmente
tão estáticos quanto as imagens sugerem. Ao fundir o gene da proteína fluorescente
verde (GFP) com o gene da claudina-1 , você pode expressar uma proteína de
fusão na qual a cauda citoplasmática da claudina-1 é marcada com GFP. Quando
você transfecta esse gene de fusão em células L de camundongo, que não
expressam nenhuma de suas próprias claudinas, filamentos fluorescentes aparecem
na superfície das células onde estão em contato umas com as outras. É difícil manter Figura 19–7 Análise das interações
da caderina com proteínas celulares
(Problema 19–34). (A) Experimentos de
(A) (B) imunoprecipitação usando anticorpos
MT extracelular anti-caderina. (B) Ilustração esquemática
citoplasmático
kd intacto ÿC10 ÿC5 ÿC7 ÿC8 ÿC9controle das várias construções de cDNA transfectadas
553 24 151 em células. Os números de aminoácidos
200 intacto
37 nos domínios extracelular, transmembranar
ÿC5 (TM) e citoplasmático são indicados.
97 8 Os segmentos deletados são mostrados
ÿC7
31 como linhas únicas com o número de
67 ÿC8 aminoácidos deletados indicado. A extremidade
70 esquerda da deleção em C5 e a extremidade
ÿC9
45 105
direita da deleção em C10 estão no mesmo
123456 7 ÿC10 local na proteína.
(A) Clipe de filme 1 Figura 19–8 Comportamento dinâmico de cadeias

pareadas de claudina dentro de membranas
plasmáticas opostas (Problema 19–35). (A)
Quadros do clipe de filme 1. (B) Quadros do clipe
de filme 2.
00 55 10 10 15 15 20 20 25 25
30 35 40 45 50 55
(B) Clipe de filme 2
0 5 10 15 20
25 30 35 40 45
minutos 1 µm
concentre-se nessas células em movimento por longos períodos, mas ocasionalmente você
pode obter de 40 a 50 minutos de observação clara (Figura 19-8).
A. Pelo que você pode ver na Figura 19-8, parece que os fios individuais se alongam rapidamente?
Ou encurtar rapidamente? Se sua resposta for sim, mostre exemplos na figura.
B. Os filamentos individuais se juntam de ponta a ponta? Ou separar? Se sua resposta for sim,
mostre exemplos na figura.
C. A extremidade de uma fita individual se une à lateral de outra fita, formando uma junção em
T? Em caso afirmativo, indique esses locais na figura.
D. Um revisor de seu manuscrito contesta que a plasticidade dos fios que você observa pode ser
artificial. O revisor sugere que a presença de GFP no C-terminal impede que a claudina-1 se
ligue a proteínas escaldantes por meio de seus domínios PDZ. Como você responderia?
19–36 As células em um embrião em desenvolvimento fazem e quebram conexões de junções
comunicantes em padrões específicos e interessantes, sugerindo que as junções comunicantes
desempenham um papel importante nos processos de sinalização que ocorrem entre essas células.
No estágio de oito células, os embriões de camundongos sofrem compactação, passando de
um amontoado de células frouxamente associadas a uma bola hermeticamente fechada
(Figura 19-9). Você deseja saber se as junções comunicantes estão presentes antes ou
depois dessa mudança na adesão.
Usando micropipetas de vidro muito finas, você pode medir eventos elétricos e ao mesmo
tempo microinjetar a enzima peroxidase de raiz forte (HRP), 40.000 daltons, ou o corante
fluorescente uoresceína, 330 daltons.
A fluoresceína brilha em verde brilhante sob iluminação ultravioleta, e o HRP pode ser
detectado fixando as células e incubando-as com substratos apropriados. Você obtém
resultados diferentes tanto no modo de duas como no de oito células.
COMPACTAÇÃO
Figura 19–9 Compactação do embrião de

estágio de 4 células estágio inicial de 8 células eu comi estágio de 8 células estágio de 16 células camundongo de oito células (Problema 19–36).
embrião tardio de
Figura 19-10 Microinjeção de HRP e
embrião inicial de embrião de oito células embrião de oito células
duas células duas células antes da compactação após a compactação
uoresceína em embriões de
camundongos de duas e oito células (Problema 19-36).
HRP fluoresceína HRP fluoresceína HRP fluoresceína HRP fluoresceína
esquema de esquema de
injeção injeção
mancha mancha
enzimática enzimática
fluorescência fluorescência
estágios, dependendo se as injeções são feitas imediatamente após a divisão celular ou

posteriormente (Figura 19-10). Imediatamente após a divisão celular, as pontes citoplasmáticas
permanecem por algum tempo antes que a citocinese seja concluída.
A. Por que tanto o HRP quanto a uoresceína entram nas células vizinhas mais cedo, mas não
tarde, no estágio de duas células?
B. Em que estágio do desenvolvimento do embrião se formam as junções comunicantes? Explique
seu raciocínio.
C. Em qual dos quatro estágios de desenvolvimento diagramados na Figura 19-10 você detectaria o
acoplamento elétrico se injetasse corrente do eletrodo de injeção HRP e registrasse as mudanças
de voltagem no trode elétrico de uoresceína p19.13/19.10?
19–37 O vírus do mosaico do tabaco (TMV), como muitos outros vírus de plantas, se espalha através de
seu hospedeiro movendo-se de célula para célula via plasmodesmata. Por muitos anos, essa
observação apresentou um enigma. O limite normal de exclusão de tamanho para a difusão
através dos plasmodesmas é de cerca de 800 daltons – suficiente para moléculas pequenas –
mas a partícula TMV, em comparação, é enorme: uma haste rígida de 18 nm de diâmetro e 300
nm de comprimento, formada por muitos cop estruturas de uma proteína de revestimento
dispostas helicoidalmente em torno de um genoma central de RNA de fita simples. Duas pistas
iniciais para a solução desse quebra-cabeça foram: (1) a proteína da capa não é necessária para
a disseminação da infecção célula a célula; e (2)
O TMV codifica uma “proteína de movimento” (MP) de 30 kd que é essencial para a propagação
da infecção.
Para investigar os efeitos da MP, as propriedades dos plasmodesmos em células normais
de tabaco (MP–) foram comparadas com as de células transgênicas que expressavam a MP
(MP+). Sondas de fluorescência de tamanho conhecido foram injetadas em uma célula e o
aparecimento de uorescência foi monitorado em uma célula adjacente, conforme mostrado na (A) + (B) MP ÿ
Figura 19–11. Os resultados de todas as sondas estão resumidos na Tabela 19–3. Com base célula de tabaco MP célula de tabaco
nesses resultados, você pode sugerir um mecanismo de como uma infecção por TMV se espalha 5 120
de uma célula para outra?
15
TABELA 19–3 Movimento de sondas fluorescentes de uma célula para outra
(Problema 19–37).
60
Sonda fluorescente células de tabaco
Tamanho (daltons) Raio (nm) MP– PM+ 1200
457 0,6 100% 100%
749 0,7 50% 100% Figura 19-11 Movimento da sonda

fluorescente após a injeção em uma
3900 1.6 14% 100% célula de tabaco (Problema 19-37). (A)
Injeção da sonda 9400-dalton em uma
9400 2.4 0% 93%
célula de tabaco MP+. A fluorescência
3.1 0% 0% aparece na célula adjacente durante o
17.200
período de 60 segundos. (B) Injeção da
sonda 9400-dalton em uma célula de
aA porcentagem de injeções em que a sonda se moveu da célula injetada para a célula
tabaco MP. Nenhuma uorescência aparece
adjacente.
na célula adjacente em 20 minutos (1200 segundos).
19–38 Você deseja entender como a densidade da P-selectina nas paredes dos vasos
sanguíneos afeta as interações de rolagem dos neutrófilos quando eles são
submetidos a forças de arrasto hidrodinâmicas no sangue. Você introduz estanho
P-seleccionado em uma bicamada lipídica sintética e a anexa a uma lâmina de
vidro montada em uma câmara de fluxo. Esse arranjo permite medir a fixação de
neutrófilos em diferentes densidades de P-selectina e em diferentes taxas de fluxo.
Em altas densidades de P-selectina, de 40 a 400 moléculas por ÿm2, os
neutrófilos se ligavam à membrana e rolavam bruscamente na direção do fluxo. Em
densidades de 1 a 15 moléculas por ÿm2, as células se comportaram de maneira
diferente: elas se moveram na taxa de fluxo do meio ou foram amarradas
temporariamente antes de se moverem novamente. Quando a superfície da
bicamada foi tratada com um anticorpo contra P-selectina, ou quando EDTA foi
adicionado ao meio, não ocorreu amarração.
Nas densidades mais baixas de P-selectina, o número de eventos de tethering
foi diretamente proporcional à densidade de P-selectina. Ao registrar os resultados
em um microscópio de vídeo, você mediu quanto tempo cada célula permaneceu
ligada durante um evento de tethering. Um gráfico do logaritmo do número de
células permanecendo ligadas em tempos crescentes mostra que a taxa de
dissociação das células seguiu uma curva de decaimento exponencial simples (e–
kt) com uma “taxa de o celular” (ko) de cerca de 1 por segundo . Além disso, a taxa
de o não foi afetada pela densidade de P-selectina na faixa de 1 a 15 moléculas
por ÿm2.
A. Qual é o objetivo de fazer experimentos com anticorpo ou EDTA?
B. Uma única interação entre a P-selectina e o ligante de glicoproteína na superfície do
neutrófilo é suficiente para amarrar a célula à superfície temporariamente? Explique
seu raciocínio.
C. Se você aumentar a taxa de fluxo (portanto, a força de cisalhamento exercida nas
células) por um fator de três - equivalente a cerca de 112 piconewtons - a taxa de
fluxo celular aumenta para cerca de 3,5 por segundo. Como você imagina que a
força pode alterar a taxa de dissociação?
LINKS MÉDICOS
19–39 A bactéria de intoxicação alimentar Clostridium perfringens produz uma toxina

que se liga a várias claudinas. Quando o terminal C da toxina está ligado a uma
claudina, o terminal N pode se inserir na membrana celular adjacente, formando
orifícios que matam a célula. A porção da toxina que se liga às claudinas provou
ser um reagente valioso para investigar as propriedades das junções apertadas.
As células MDCK são uma escolha comum para estudos de junções apertadas
porque podem formar uma folha epitelial intacta com alta resistência transepitelial.
As células MDCK expressam duas claudinas: claudina-1, que não é ligada pela
toxina, e claudina-4, que é.
Quando uma folha epitelial MDCK intacta é incubada com o fragmento de
toxina C-terminal, a claudina-4 desaparece, tornando-se indetectável em 24 horas.
Na ausência de claudina-4, as células permanecem saudáveis e a camada epitelial
parece intacta. O número médio de filamentos nas junções apertadas que ligam as
células também diminui ao longo de 24 horas, de cerca de quatro para cerca de
dois, e são menos ramificados. Um ensaio funcional para a integridade das junções
estreitas mostra que a resistência transepitelial diminui drasticamente na presença
da toxina, mas a resistência pode ser restaurada pela lavagem da toxina (Figura
19-12A). Curiosamente, a toxina produz esses efeitos apenas quando é adicionada
à face basolateral da lâmina; não tem efeito quando adicionado à superfície apical
(Figura 19-12B).
A. Como pode ser que duas fitas de junções firmes permaneçam, mesmo que toda a
claudina-4 tenha desaparecido?
B. Por que você acha que a toxina funciona quando é adicionada ao lado basolateral
da lâmina epitelial, mas não quando adicionada ao lado apical?
A MATRIZ EXTRACELULAR DOS ANIMAIS 403
(A) BASOLATERAL (B) APICAL Figura 19-12 Efeitos da toxina de

Clostridium na função de barreira das
junções apertadas em células MDCK (Problema 19-39).
10.000 - toxina
(A) Adição de toxina do lado basolateral da
8000 folha epitelial. (B) Adição de toxina do lado
apical da folha epitelial. Maior resistência
transepitelial
resistência
elétrica
(ohms
cm2) 6000 lavar (ohms cm2) dá menos corrente paracelular.
+ toxina
4000
lavar
2000
0
08 16 24 32 40 48 horas 0 8 16 24 32 40 48
horas
A MATRIZ EXTRACELULAR DOS ANIMAIS

TERMOS PARA APRENDER Problemas p19.08/19.12
lâmina basal (membrana glicosaminoglicano (GAG)

basal) hialuronano
colágeno laminina
fibrila de matriz metaloprotease
colágeno proteoglicano
fibra Sequência RGD
elástica elastina colágeno serina protease
fibrilar associado tipo III fibronectina repetição
a fibrilas colágeno tipo IV
fibroblasto fibronectina
DEFINIÇÕES
19–40 Proteína fibrosa rica em glicina e prolina que, em suas diversas formas, é o principal componente
da matriz extracelular e dos tecidos conjuntivos.
19–41 Enzima proteolítica extracelular que degrada proteínas como colágeno, laminina e bronectina em
uma reação dependente de Ca2+ ou Zn2+.
19–42 Proteína da matriz extracelular encontrada nas lâminas basais, onde forma uma
rede em forma de folha.
19–43 Nome geral para um polissacarídeo longo, linear e altamente carregado — composto por um par
repetido de açúcares, um dos quais é sempre um aminoaçúcar — que se encontra
covalentemente ligado a um núcleo protéico na matriz extracelular.
19–44 Proteína da matriz extracelular que se liga às integrinas da superfície celular para promover a
adesão das células à matriz e fornecer orientação para a migração das células nos tecidos
em desenvolvimento.
19-45 Proteína hidrofóbica que forma fibras extensíveis extracelulares que conferem aos tecidos sua
elasticidade e resiliência.
19–46 Tipo de célula comum no tecido conjuntivo que secreta uma matriz extracelular rica em colágeno
e outras macromoléculas da matriz extracelular.
19–47 na camada de matriz extracelular que separa as folhas epiteliais e muitos outros tipos de
células, como células musculares ou adiposas, do tecido conjuntivo.
VERDADEIRO FALSO
19–48 A matriz extracelular é um escaldante relativamente inerte que estabiliza a estrutura dos
tecidos.
19–49 A elasticidade da elastina deriva de seu alto teor de hélices, que atuam como molas
moleculares.
19–50 Em humanos, todas as formas de bronectina são produzidas a partir de um grande gene por
splicing alternativo.
19–51 Uma folha de lâmina basal está subjacente a todos os epitélios.
19–52 Um proteoglicano na lâmina basal do glomérulo renal desempenha um papel crítico na filtragem
das moléculas que passam do sangue para a urina.
19–53 Várias formas de distrofia muscular (doenças de perda de massa muscular) surgem de
componentes defeituosos na lâmina basal que envolve as fibras musculares.
19–54 Carboximetil Sephadex, que é comumente usado para purificar proteínas, é um dextrano
reticulado carregado negativamente com propriedades semelhantes aos glicosaminoglicanos.
Sephadex vem na forma de grânulos secos que incham tremendamente quando adicionados
à água. Você encheu uma coluna de cromatografia com o gel inchado. Quando você começa
a equilibrar a coluna com um tampão que contém NaCl 50 mM em pH neutro, você fica
alarmado ao ver um encolhimento maciço no volume do gel. Por que o Sephadex seco incha
tão dramaticamente quando é colocado na água? Por que o gel inchado encolhe tanto
quando uma solução salina é adicionada?
19–55 À temperatura corporal, o L-aspartato nas proteínas racemiza a D-aspartato a uma taxa
apreciável. A maioria das proteínas do corpo tem níveis muito baixos de D-aspartato, se é
que pode ser detectado. A elastina, no entanto, tem um nível razoavelmente alto de D-
aspartato. Além disso, a quantidade de D-aspartato aumenta em proporção direta com a
idade da pessoa de quem a amostra foi retirada. Por que você acha que a maioria das
proteínas tem pouco ou nenhum D-aspartato, enquanto a elastina tem níveis de D-aspartato
que aumentam constantemente com a idade?
19–56 Alguns especularam que Abraham Lincoln tinha a síndrome de Marfan, principalmente devido à
sua altura (6'4" quando a média era 5'6") e seu físico magro. Que proteína é mutada em
pacientes que sofrem da síndrome de Marfan?
19–57 As cadeias polissacarídicas de glicosaminoglicanos que estão ligadas a proteínas centrais

específicas para formar os componentes proteoglicanos da matriz extracelular são altamente
carregadas negativamente. Como você acha que essas cadeias polissacarídicas carregadas
negativamente ajudam a estabelecer um ambiente semelhante a um gel hidratado ao redor
da célula? Como as propriedades dessas moléculas mudariam se as cadeias de
polissacarídeos fossem descarregadas?
19–58 A lâmina basal incomumente espessa do glomérulo renal é um componente chave do

complexo filtro molecular que controla a passagem de solutos para a urina. Normalmente,
180 L de líquido são filtrados pelos rins a cada dia, mas a maior parte é reabsorvida, com
apenas cerca de 1,5 L sendo liberado como urina. A filtragem inicial é seletiva em tamanho,
forma e carga.
A. O tamanho efetivo do poro é menor para solutos carregados negativamente do que para
solutos carregados positivamente do mesmo tamanho. Quais características da base
A lâmina que você supõe pode contribuir para essa diferença na filtragem de moléculas
carregadas?
B. Para solutos neutros de mesmo peso molecular, o tamanho efetivo do poro é menor para
moléculas esféricas do que para moléculas alongadas. O que você acha que é a base
para essa seletividade de forma?
19–59 Discuta a seguinte afirmação: “a lâmina basal das fibras musculares serve como um quadro
de avisos molecular, no qual as células adjacentes podem enviar mensagens que
direcionam a diferenciação e a função das células subjacentes”.
19-60 Certas bactérias secretam enzimas que podem digerir componentes de proteínas ou
carboidratos da lâmina basal. Por que você acha que eles fazem isso?
TRATAMENTO DE DADOS
19–61 O hialuronano, um polissacarídeo composto por resíduos estritamente alternados de N-

acetilglicosamina (GlcNAc) e ácido glucurônico (GlcUA), é produzido diretamente da
superfície celular pela hialuronano sintase, uma enzima embutida na membrana
plasmática. Estudos com diferentes hialuronanos sintases falharam em chegar a um
acordo sobre questões básicas como se novos açúcares são adicionados um de cada
vez ou como unidades de dissacarídeos, e se eles são adicionados à extremidade
redutora ou não redutora da cadeia polissacarídica.
Você está estudando a enzima da Pasteurella multocida. Quando esta enzima é

expressa em E. coli, a bactéria produz uma cápsula de hialuro nan. Para estudar o
mecanismo da reação, você usa fragmentos de membrana purificados contendo a
hialuronana sintase recombinante e adiciona um aceptor de tetrassacarídeo radiomarcado
(Figura 19-13A), junto com as formas ativadas das subunidades de açúcar: UDP-N-
acetilglucosamina e UDP-glicurônico ácido. Em incubações curtas com a mistura
completa, o iniciador tetrassacarídeo se alonga em várias unidades, embora pareça que
apenas cadeias ímpares são produzidas (Figura 19-13B, pista 2). Se você deixar de fora
um ou ambos os açúcares ativados, obterá os resultados mostrados na Figura 19–13B,
pistas 3–5.
A. Com base nesses dados, você diria que a enzima normalmente adiciona resíduos um de
cada vez ou como unidades de dissacarídeos? Explique seu raciocínio.
B. Por que você acha que apenas cadeias de números ímpares são visíveis em seu
ensaio?
C. A enzima adiciona unidades de açúcar à extremidade redutora ou à extremidade não redutora?
final do aceptor de tetrassacarídeo?
(A) ACEITANTE (B) BIOSSÍNTESE
OH
extremidade redutora
CH2 marcadores + GlcUA + GlcNAc
+ GlcNAc + GlcUA nenhum
CH3 O
PARA
extremidade não redutora
CO COO_ O
O OH
OH NH
PARA NH 5
O OH
PARA O
PARA CO 7
O O 9
COO_ PARA
11
CH2 CH3 13
Ácido glucurónico
OH origem
(GlcUA)
N-acetilglucosamina 1 2 3 4 5
(GlcNAc)
Figura 19–13 Síntese de hialuronana pela hialuronana sintase (Problema 19–61). (A) Aceitador de tetrassacarídeos. As extremidades
redutora e não redutora do oligossacarídeo são indicadas. (B) Síntese de cadeias polissacarídicas pela hialuronano sintase. Após
incubação do iniciador de tetrassacarídeo marcado com 3H com hialuronano sintase e um ou ambos os monômeros de açúcar ativados, os
produtos de diferentes comprimentos foram separados por cromatografia em camada fina e visualizados por uorografia. Os números à
esquerda indicam o comprimento, em resíduos de açúcar, dos polissacarídeos na pista marcadora. GlcNAc é N-acetilglucosamina, GlcUA é ácido glucurônic
TABELA 19–4 Peptídeos relacionados à fibronectina testados quanto à sua capacidade de promover a
adesão celular (Problema 19–62).
Peptídeo Seqüência Concentração

necessária para 50% de
fixação celular (nM)
Fibronectina 0,10
Peptídeo 1 YAVTGRGDSPASSKPISINYRTEIDKPSQM(C)* 0,25
Peptídeo 2 VTGRGDSPASSKPI(C) 1.6
Peptídeo 3 SINYRTEIDKPSQM(C) >100
Peptídeo 4 VTGRGDSPA(C) 2.5
Peptídeo 5 SPASSKPIS(C) >100
Peptídeo 6 VTGRGD(C) 10
Peptídeo 7 GRGDS(C) 3.0
Peptídeo 8 RGDSPA(C) 6.0
Peptídeo 9 RVDSPA(C) >100
*O (C) no terminal C indica a ligação da cisteína à proteína transportadora.
19–62 A ligação de fragmentos e a competição pela ligação podem ser usadas para
identificar a porção de um ligante maior que é crítica para a ligação. A fibronectina,
que é um grande componente glicoproteico da matriz extracelular, liga-se aos
receptores de bronectina nas superfícies celulares. A fibronectina pode aderir as
células à superfície de um prato de plástico, ao qual elas não se ligariam,
formando a base de um simples ensaio de ligação. Ao anexar pequenos
fragmentos de bronectina a placas, os pesquisadores identificaram o domínio de
ligação celular como um segmento de 108 aminoácidos a cerca de três quartos
do N-terminal.
Peptídeos sintéticos correspondentes a porções diferentes do segmento de
108 aminoácidos foram então testados no ensaio de ligação celular para localizar
a região ativa com precisão. Dois experimentos foram conduzidos. No primeiro,
os peptídeos foram ligados covalentemente a pratos de plástico por meio de uma
ligação dissulfeto a uma proteína carreadora anexada e, em seguida, testados
quanto à sua capacidade de promover a adesão celular (Tabela 19-4). No
segundo experimento, placas de plástico foram revestidas com bronectina nativa
e as células que aderiram às placas na presença dos peptídeos sintéticos foram TABELA 19–5 Peptídeos relacionados à
contadas (Tabela 19-5). fibronectina testados quanto à sua

A. Os dois experimentos usaram diferentes ensaios para detectar o segmento de capacidade de bloquear a adesão celular
(Problema 19–62).
ligação celular da bronectina. A colagem das células às placas significa a mesma
coisa em ambos os ensaios? Explique a diferença entre os ensaios. Peptídeo Porcentagem
B. A partir dos resultados das Tabelas 19-4 e 19-5, deduza a sequência de de células de
aminoácidos na bronectina que é reconhecida pelo receptor de bronectina. entrada coladas
C. Como você pode usar esses resultados para projetar um método para isolar
GRGDSPC 2.0
o receptor de bronectina?
GRGDAPC 1.9
19–63 Não é fácil atribuir funções específicas a componentes específicos da lâmina basal,
uma vez que a estrutura geral é um material composto complicado com GKGDSPC 48
propriedades mecânicas e de sinalização.
GRADSPC 49
O nidogênio, por exemplo, reticula dois componentes centrais da lâmina basal
ligando-se à cadeia da laminina -1 e ao colágeno tipo IV. Dado um papel tão GRGESPC 44
importante, foi surpreendente que camundongos com um nocaute homozigoto do
Nenhum 47
gene para nidogênio-1 fossem totalmente saudáveis, sem
TABELA 19–6 Fenótipos de camundongos com defeitos genéticos nos componentes da lâmina
basal (Problema 19–63).
Proteína defeito genético fenótipo
Nidógeno-1 Nocaute genético (–/–) Nenhum
Nidógeno-2 Nocaute genético (–/–) Nenhum
Laminina -1 Deleção do sítio de ligação de nidogênio (+/–) Nenhum
Laminina -1 Deleção do sítio de ligação de nidogênio (–/–) Morto ao nascer
+/– significa heterozigoto, –/– significa homozigoto.
fenótipo. Da mesma forma, camundongos homozigotos para um nocaute do gene

nidogênio-2 também pareciam completamente normais. Por outro lado,
camundongos homozigotos para uma mutação definida no gene da laminina -1,
que eliminou apenas o local de ligação do nidogênio, morreram ao nascer com
graves defeitos na formação dos pulmões e rins. Acredita-se que a porção
mutante da cadeia da laminina -1 não tenha outra função além de se ligar ao
nidogênio e não afete a estrutura da laminina ou sua capacidade de se agrupar
na lâmina basal. Como você explicaria essas observações genéticas, que estão
resumidas na Tabela 19-6? Qual seria o fenótipo de um camundongo que seria
homozigoto para nocautes de ambos os genes de nidógeno?
19–64 A lâmina basal normalmente fornece uma barreira impenetrável para as

células, mas células como linfócitos e macrófagos são capazes de atravessar a
barreira digerindo os componentes da lâmina usando matriz metaloproteases
(MMPs). Esta família de proteases está envolvida em funções corporais normais,
bem como em muitas doenças. Por exemplo, para que as células cancerígenas
metastatizem, elas precisam penetrar na lâmina basal. Devido à sua importância
fundamental para a ciência básica e para a medicina clínica, as MMPs foram
estudadas extensivamente, e muitos nocautes em camundongos foram feitos. até
agora,
esses estudos destacaram principalmente a complexidade das funções do
MMP. Veja o caso do MT1-MMP, que está ancorado na membrana celular.
Camundongos nulos para MT1-MMP apresentam anormalidades esqueléticas,
crescem lentamente ao nascer e geralmente morrem em algumas semanas. As
células derivadas desses animais não podem penetrar nos géis de colágeno (ao
contrário de suas contrapartes normais). Uma consequência é a completa falta
de tecido adiposo branco (Figura 19-14). Os adipócitos nos camundongos
mutantes são muito pequenos em comparação com os dos camundongos
selvagens e parecem estar presos em um emaranhado de fibras de colágeno.
Além disso, a análise de microarranjo de DNA de seus mRNAs mostra que eles
não se diferenciaram completamente. A ligação entre a deficiência de MT1-MMP
e a falha na diferenciação dos adipócitos não é compreendida. Sugira algumas
possíveis explicações de como a falta de MT1-MMP pode bloquear a diferenciação dos adipócitos.
(A) camundongos selvagens (B) camundongos nocaute MT1-MMP
a a Figura 19-14 Adipócitos em camundongos

normais e knockout para MT1-MMP
a (Problema 19-64). (A) Camundongos selvagens.
(B) camundongos nocaute MT1-MMP. Alguns
adipócitos são marcados com “a”. Setas brancas
a apontam para fibras de colágeno. A barra de escala é de 10 ÿm.
Ambas as micrografias são mostradas na mesma
ampliação.
LINKS MÉDICOS
19–65 Defeitos nos genes do colágeno são responsáveis por várias doenças hereditárias,
incluindo a osteogênese imperfeita, uma doença caracterizada por ossos quebradiços,
e a síndrome de Ehlers-Danlos, que pode levar à morte súbita devido à ruptura de
órgãos internos ou vasos sanguíneos. Em ambas as doenças, os problemas médicos
surgem porque o gene defeituoso de alguma forma compromete a função dos brils
de colágeno. Por exemplo, deleções homozigóticas do gene do colágeno tipo I 1(I)
eliminam o colágeno 1(I) inteiramente, evitando assim a formação de qualquer bril de
colágeno tipo I. Tais mutações homozigóticas são geralmente letais no
desenvolvimento inicial. A situação mais comum é o indivíduo ser heterozigoto para
o gene mutante, tendo um gene normal e outro defeituoso. Aqui as consequências
são menos severas.
A. As moléculas de colágeno tipo I são compostas de duas cópias da cadeia 1(I) e uma
cópia da cadeia 2(I). Calcule a fração de moléculas de colágeno tipo I, [1(I)]22(I), que
será normal em um indivíduo que é heterozigoto para uma deleção de todo o gene
1(I) . Repita o cálculo para um indivíduo heterozigoto para uma mutação pontual no
gene 1(I) .
B. As moléculas de colágeno tipo III são compostas por três cópias da cadeia 1(III).
Calcule a fração de moléculas de colágeno tipo III, [1(III)]3, que será normal em um
indivíduo heterozigoto para uma deleção de todo o gene 1(III) . Repita o cálculo para
um indivíduo heterozigoto para uma mutação pontual no gene 1(III) .
C. Que tipo de defeito no gene do colágeno — deleção ou mutação pontual — tem maior
probabilidade de ser dominante (isto é, fazer com que o heterozigoto exiba um
fenótipo mutante)?
JUNÇÕES CÉLULA-MATRIZ
dependência de ancoragem
quinase de adesão focal (FAK)
DEFINIÇÕES
19-66 Proteína tirosina quinase citoplasmática presente nas junções célula-matriz em associação
com as caudas citoplasmáticas das integrinas.
19–67 Dependência do crescimento, proliferação e sobrevivência celular da ligação a

do substrato
VERDADEIRO FALSO
19–68 As integrinas podem converter sinais mecânicos em moléculas intracelulares

sinais.
19–69 Vários tipos de integrinas conectam sítios de ligação extracelular a todos os diferentes
tipos de elementos do citoesqueleto, incluindo actina, microtúbulos e lamentos
intermediários.
19–70 As integrinas são consideradas hastes rígidas que atravessam a membrana e ligam os
locais de ligação fora da célula aos que estão dentro da célula.
JUNÇÕES CÉLULA-MATRIZ 409
extracelular citoplasma Figura 19–15 Representação esquemática

espaço membrana de plasma
723
da integrina IIb3 (Problema 19–71). o D723
e resíduos R995 são indicados.
b3 WKLLITIHDRKEF COOH
ÿIIb WKVGFFKRNRP COOH
995
19–71 A anidade das integrinas para os componentes da matriz pode ser modulada por
alterações em seus domínios citoplasmáticos: um processo conhecido como sinalização
de dentro para fora. Você identificou uma região chave nos domínios citoplasmáticos
da integrina IIb3 que parece ser necessária para a sinalização de dentro para fora
(Figura Problemas p19.16/19.15 19–15). A substituição de alanina por D723 na cadeia
ou R995 na cadeia leva a um alto nível de ativação espontânea, sob condições em
que as cadeias de tipo selvagem são inativas. Seu consultor sugere que você converta
o aspartato na cadeia em arginina (D723R) e a arginina na cadeia em aspartato
(R995D). Você compara todas as três cadeias (R995, R995A e R995D) com todas as
três cadeias (D723, D723A e D723R). Você descobre que todos os pares têm um
alto nível de ativação espontânea, exceto D723 vs R995 (o tipo selvagem) e D723R
vs R995D, que têm níveis baixos. Com base nesses resultados, como você acha que
a integrina IIb3 é mantida em seu estado inativo?
CÁLCULOS
19–72 As plaquetas são células semelhantes a discos com cerca de 2 ÿm de diâmetro. As

estimativas do número de moléculas de integrina em sua superfície variam em torno
de uma média de cerca de 80.000. Se as próprias integrinas tiverem cerca de 10 nm
de diâmetro, qual o grau de compactação delas? (Suponha que a área total da
membrana seja 2r2.)
TRATAMENTO DE DADOS
19–73 A capacidade de uma célula para controlar as interações integrina-ligando de dentro

é denominada sinalização de dentro para fora. A principal proteína de superfície das
plaquetas sanguíneas, a integrina IIb3 , liga-se ao brinogênio quando as plaquetas
são estimuladas com fatores de coagulação como a trombina. Ao ligar-se a um
receptor na superfície celular, a trombina desencadeia uma via de sinalização
intracelular que ativa a integrina IIb3 , permitindo que as plaquetas se agreguem
para formar coágulos sanguíneos. A placa não liga o brinogênio ou agrega até ser
estimulada, embora a integrina IIb3 esteja sempre presente em sua superfície. O que
regula a atividade dessa importante integrina?
Se os genes para as subunidades de IIb3 forem expressos em células de ovário
de hamster chinês (CHO), as células falham na agregação quando incubadas com
brinogênio na presença ou ausência de trombina. Se as células forem primeiro
incubadas com anticorpos MAb 62, que se ligam à integrina IIb3 e a ativam, as células
se agregam minutos após a adição do brinogênio. As células CHO sem IIb3 não se
agregam quando tratadas desta forma.
Ao deletar os domínios citoplasmáticos curtos de IIb e 3, várias
combinações de IIb truncado e tipo selvagem e em células cadeias podem ser testadas
CHO. Todas as combinações de IIb e agregado na 3 cadeias
células 3 permitem que as
presença de brinogênio e MAb 62; no entanto, a cadeia IIb truncada permite
agregação mesmo na ausência de MAb 62 (Tabela 19-7).
A. Por que você supõe que o truncamento do domínio citoplasmático da subunidade IIb
aumenta a anidade da integrina para o brinogênio e permite que as células se
agreguem?
TABELA 19–7 Agregação dependente de fibrinogênio de células CHO

expressando várias subunidades de tipo selvagem e mutante ÿIIb e 3 (Problema
19–73).
Agregação
cadeia IIb 3 correntes Sem MAb 62 Com MAb 62
Normal Normal – +++
Truncado Normal +++ +++
Normal Truncado – +++
Truncado Truncado +++ +++
B. A integrina IIb3 é acessível na superfície das células CHO, conforme revelado pelos
vários estudos de agregação. Por que, então, a trombina não estimula a agregação das
células?
C. Existem dois genes para IIb em células humanas diplóides. Se um dos dois genes
sofresse um truncamento do tipo descrito neste problema, você acha que o indivíduo
apresentaria algum problema de coagulação do sangue?
A PAREDE DA CÉLULA DA PLANTA

celulose pectina
celulose microfibrilas parede celular
reticulação glicina lignina primária parede celular
secundária pressão de turgor
DEFINIÇÕES
19–74 em uma cobertura celular extensível em novas células vegetais que podem acomodar
data de seu crescimento.
19–75 Feixe de cerca de 40 longas cadeias lineares de resíduos de glicose ligados covalentemente,
todos com a mesma polaridade, organizados em um arranjo paralelo sobreposto.
19–76 A grande pressão hidrostática interna que se desenvolve nas células vegetais devido
ao desequilíbrio osmótico entre o interior da célula e o líquido na parede celular vegetal.
19–77 Uma rede complexa de compostos fenólicos que é um polímero abundante nas paredes
celulares secundárias.
19–78 Cobertura celular rígida disposta em camadas dentro da cobertura inicial, uma vez que o
crescimento celular tenha parado.
VERDADEIRO FALSO
19–79 Cada parede celular consiste em uma parede celular primária fina e semirrígida adjacente à
membrana celular e uma parede celular secundária mais espessa e rígida fora da parede
primária.
19-80 A pressão de turgor é a principal força motriz para a expansão celular durante o crescimento e
fornece grande parte da rigidez mecânica dos tecidos vegetais vivos.
A PAREDE DA CÉLULA DA PLANTA 411
19–81 Ao contrário da matriz extracelular das células animais, que contém uma grande quantidade células tratadas com células
ácido giberélico tratadas com etileno
de proteínas, as paredes celulares das plantas são compostas inteiramente por
polissacos.
19-82 Se toda a matriz cortical de microtúbulos fosse desmontada por tratamento medicamentoso,
novos microbrilhos de celulose seriam depositados em orientações aleatórias.
PROBLEMAS DE PENSAMENTO Figura 19-16 Efeitos do ácido giberélico

e do etileno na orientação dos arranjos
19–83 Seu chefe vem jantar! Tudo o que você tem para uma salada é um pouco de alface murcha corticais de microtúbulos (Problema 19-84).
de um dia. Você se lembra vagamente de que existe um truque para rejuvenescer a
alface murcha, mas não consegue se lembrar qual é. Você deve mergulhar a alface
em água salgada, mergulhá-la em água da torneira ou mergulhá-la em água com Problemas p19.21/19.16
açúcar, ou talvez apenas iluminar com uma luz forte e esperar que a fotossíntese a recupere?
19–84 Nas células vegetais, o arranjo cortical de microtúbulos determina a orientação dos
microbrilhos de celulose, que por sua vez determina a direção da expansão celular. As
células alongam-se perpendicularmente à orientação da célula e perdem microbrilhos.
Os fatores de crescimento vegetal etileno e ácido giberélico têm efeitos opostos na
orientação dos arranjos de microtúbulos nas células epidérmicas de brotos jovens de
ervilha. O ácido giberélico promove uma orientação do arranjo de microtúbulos corticais
que é perpendicular ao longo eixo da célula, enquanto o tratamento com etileno faz
com que os arranjos de microtúbulos se orientem paralelamente ao longo eixo da
célula (Figura 19-16) .
Qual tratamento você acha que produziria brotos curtos e grossos e qual produziria
brotos longos e finos?
CÁLCULOS
19–85 Uma planta deve ser capaz de responder às mudanças no estado da água de seus
arredores. Ele faz isso pelo fluxo de moléculas de água através de canais de água
chamados aquaporinas. A condutividade hidráulica de uma única aquaporina é de 4,4
× 10–22 m3 por segundo por MPa (megapascal) de pressão. A que isso corresponde
em termos de moléculas de água por segundo à pressão atmosférica? [A pressão
atmosférica é de 0,1 MPa (1 bar) e a concentração de água é de 55,5 M.]
TRATAMENTO DE DADOS
19–86 A síntese da celulose é simples do ponto de vista químico: UDP glicose polimeriza
para formar celulose, com liberação de UDP, que é reciclado para formar mais UDP-
glicose. Embora a celulose seja a macromolécula mais abundante na Terra, a
purificação da celulose sintase das plantas provou ser impossível por muitos anos. O
sucesso veio do estudo de bactérias como Acetobacter xylinum , que produz grandes
quantidades de celulose pura nas condições certas. Curiosamente, essa bactéria
requer o dinucleotídeo sinalizador, di-GMP cíclico, para a ativação completa da síntese
de celulose (Figura 19-17A). A celulose sintase ativa pode ser isolada das paredes
celulares bacterianas extraídas com detergente e prontamente purificada, uma vez que
fica presa em seu próprio produto de celulose insolúvel, como um bicho-da-seda em
seu casulo. Para identificar a celulose sintase, você usa o marcador de identidade 32P-
azido-UDP-glicose. Quando exposta à luz ultravioleta (UV), a porção azido forma uma
ligação cruzada com qualquer proteína que se liga ao marcador de anidade.
Você testa o marcador de anidade com as paredes celulares solubilizadas com

detergente e com a enzima purificada, com os resultados mostrados na Figura 19-17B.
Duas bandas principais mostram marcação: uma banda de 57 kd na fração solúvel e
uma banda de 83 kd na fração purificada. Ambos correspondem a bandas visíveis em
)A( )B( Figura 19–17 Celulose sintase (Problema 19–

86). (A) A estrutura do di GMP cíclico, o
solúvel di-GMP cíclico purificado ativador da celulose sintase.
–+–+ (B) Marcação de fotoafinidade da celulose
_O O
kd sintase usando 32P-azido-UDP-glicose
P
ativada por luz UV. As pistas 1 e 2 são
PARA OO G
paredes celulares solubilizadas com
OO
97 detergente; as pistas 3 e 4 são uma fração
purificada do produto de celulose. As
O 66
G OH_
_ posições dos marcadores de massa molecular
O
conhecida são indicadas à esquerda em
P 45
kilodaltons. A presença ou ausência de di-
_O O GMP cíclico adicionado é indicada na parte
31
superior por símbolos de mais e menos.
1234
o gel corado. Se você omitir a luz UV, a banda de 57 kd ainda será marcada, mas a
banda de 83 kd não. A adição de grandes quantidades do substrato natural não
marcado, UDP-glicose, bloqueou a marcação da banda de 83 kd, mas não a marcação
da banda de 57 kd.
Qual banda provavelmente corresponde à celulose sintase? Na explicação da sua
p19.22/19.17,
efeitos do excesso resposta
incluadea UDP-glicose.
resposta
ausência nos Problemas
ao di-GMP
de luz ultravioleta
cíclico, os resultados
e os na presença e
ESTILO MCAT
A metástase ocorre quando as células de um tumor primário invadem e colonizam outros tecidos.
A metástase é um processo complexo de várias etapas. As células tumorais devem perder a
adesão com outras células tumorais, invadir tecidos e vasos locais, mover-se pela circulação,
deixar os vasos e estabelecer novas colônias em locais distantes. As células tumorais ganham a
capacidade de atravessar camadas epiteliais e migrar através dos tecidos por meio de mutações,
embora a natureza das mutações que conduzem à metástase seja pouco compreendida.
As mutações que bloqueiam a expressão do gene da E-caderina são consideradas um passo
importante na metástase. Para entender melhor como a perda de E-caderina contribui para a
metástase, os cientistas criaram duas linhagens de células que diferiam em sua expressão de E-
caderina. Uma linha celular expressou E-caderina normal, mas em 10% dos níveis usuais. A
outra linha celular expressava E-caderina normal nos níveis usuais, e também, em níveis
elevados, uma forma mutante que incluía o domínio citoplasmático, mas não tinha o restante da
proteína. Ambas as linhas celulares exibiram adesão celular fortemente reduzida em cultura. No
entanto, apenas a linha celular com expressão reduzida de E-caderina normal metastatizou
quando introduzida em camundongos.
19–87 Qual das seguintes hipóteses é mais consistente com a observação

sobre adesão celular e metástase nestas linhagens celulares?
A. A perda de E-caderina libera proteínas sinalizadoras que normalmente se ligam ao seu
domínio citoplasmático, mas promovem metástase quando livres.
B. O domínio citoplasmático da E-caderina se liga às proteínas necessárias para a célula
adesão, mas essas proteínas não estão envolvidas na metástase.
C. O domínio transmembranar da E-caderina por si só é suficiente para promover
a adesão célula-célula que previne a metástase.
D. A perda de adesão causada pela inativação da E-caderina é suciente para explicar
como as mutações da E-caderina promovem a metástase.
19–88 A promoção da metástase pela perda da E-caderina sugere que a E-caderina inibe
a metástase. Qual dos seguintes tipos de proteínas está mais provavelmente envolvido
na inibição da metástase pela E-cad herina?
A. Catenins
B. Lamininas
ESTILO MCAT 413
C. Metaloproteases D.
Talins

A metástase requer que as células cancerígenas ganhem a capacidade de colonizar e sobreviver em
um ambiente de tecido completamente novo. Para entender melhor a metástase, um estudo
caracterizou três diferentes linhagens de células de carcinoma mamário de camundongos, que foram
projetadas para expressar um marcador fluorescente. Os investigadores injetaram as linhas celulares
na veia da cauda do camundongo e acompanharam sua capacidade de colonizar o pulmão. Quando
as células das linhagens A e B foram injetadas, elas foram encontradas nos tecidos pulmonares –
indicando que eram capazes de invadir o tecido – mas não proliferaram. Em contraste, as células da
linha C foram capazes de invadir o tecido pulmonar e proliferar, e formaram metástases de forma
eficiente.
Para investigar a base das diferentes habilidades metastáticas das linhagens celulares, os
pesquisadores cultivaram as três linhagens celulares de duas maneiras: em placas de cultura de
tecidos padrão, que fornecem uma superfície que pode se ligar às proteínas de adesão de uma célula;
e em Matrigel®, que é uma preparação de matriz extracelular comumente usada. As placas são muitas
vezes referidas como uma condição de cultura bidimensional ou 2D, enquanto o gel Matri, que
fornece uma matriz semelhante à dos tecidos, é referida como uma condição de cultura tridimensional
ou 3D.
Em culturas 2D, todas as três linhas celulares proliferaram. Em condições de cultura 3D, no
entanto, apenas a linha celular C proliferou. Além disso, as três linhagens celulares mostraram
morfologias diferentes quando cultivadas em condições de cultura 3D (Figura 19-18). e As células A
eram arredondadas e pouco adesivas. As células B eram atenadas e alongadas. As células C eram
mais alongadas e atenuadas, e faziam múltiplas ligações à matriz 3D por meio de extensões da
membrana plasmática chamadas lopódios.
19–89 Qual das seguintes moléculas você esperaria estar presente no Matrigel, mas não no meio
padrão de cultura de tecidos?
I. Colágeno II.
Integrina III.
laminina
A. I e II B. I e
III C. II e III D.
I, II e III
19–90 Qual das seguintes hipóteses é mais consistente com os dados?

A. Todas as três linhagens celulares secretam um componente da matriz extracelular que é
necessário para a metástase.
B. Somente a linha celular C secreta um componente da matriz extracelular que é necessário
para a metástase.
C. A metástase da linha celular C se deve a uma diferença nas interações com a matriz
extracelular.
D. A metástase da linha celular C é devida a uma incapacidade de interagir com o extracel
matriz celular
(A) (B) (C)
Figura 19–18 Morfologias de três linhas

celulares cultivadas em Matrigel (Problemas
19–89 a 19–91). As linhas de células A, B e
C são exibidas nos painéis (A), (B) e (C),
50 µm respectivamente.
19–91 Os pesquisadores buscaram moléculas de adesão que pudessem gerar

os sinais que controlam os diferentes comportamentos das células. Qual
das seguintes proteínas você acha que seria a melhor candidata para a
molécula de adesão relevante?
A. Colágeno
B. Fibronectina
C. Integrina
D. Laminina
Capítulo 20 415
CAPÍTULO
Câncer 20
NESTE CAPÍTULO
O CÂNCER COMO UM PROCESSO MICROEVOLUCIONÁRIO
TERMOS PARA APRENDER CÂNCER COMO UM
linfoma sarcoma MICROEVOLUCIONÁRIO

carcinogênese metástases mutação somática PROCESSO
benigna malignas estroma
tumor primário transformado célula replicativa
GENES CRÍTICOS DO CÂNCER:
carcinoma carcinógeno
químico geneticamente senescência progressão tumoral COMO SÃO ENCONTRADOS E
instável leucemia O QUE ELES FAZEM
PREVENÇÃO DO CÂNCER E
DEFINIÇÕES
TRATAMENTO: PRESENTE E
Combine cada definição abaixo com seu termo na lista acima. FUTURO
20–1 e geração de um câncer.
20–2 Descreve um tumor ou célula tumoral que pode invadir o tecido circundante ou
formar tumores em outros locais do corpo.
20–3 Um câncer que surge de tecido conjuntivo ou células musculares.
20–4 A neoplasia da qual as metástases foram originalmente derivadas.
20–5 processo pelo qual um distúrbio inicialmente leve do comportamento celular gradualmente
evolui para um câncer desenvolvido.
20-6 Descreve as células que acumulam alterações genéticas em um ritmo anormalmente rápido
avaliar.
20–7 Descreve um tumor autolimitado em seu crescimento e não invasivo.
20–8 Fenômeno observado em culturas de células primárias à medida que envelhecem, no qual a
proliferação celular diminui e finalmente para.
20–9 Um câncer que surge de células epiteliais.
20–10 Alteração na sequência do DNA que distingue uma célula de suas vizinhas normais em um tecido.
VERDADEIRO FALSO
20-11 Todos os vários tipos de células em um carcinoma típico, incluindo broblastos, células
inflamatórias e vasos sanguíneos, evoluem a partir da população de células cancerígenas.
20–12 A instabilidade genética na forma de mutações pontuais, rearranjos cromossômicos e alterações

epigenéticas precisa ser máxima para permitir o desenvolvimento do câncer.
416 Capítulo 20: Câncer
20–13 As células cancerígenas consomem glicose mais rapidamente do que seus vizinhos normais 500
gravando
porque precisam de muito mais energia (ATP) para impulsionar suas altas taxas de
proliferação. 400
PROBLEMAS DE PENSAMENTO 300
20–14 A incidência de câncer de cólon aumenta com a idade, conforme mostrado na Figura
20-1, onde o número de novos casos diagnosticados em mulheres em 1 ano é plotado em 200
função da idade no momento do diagnóstico. Estudos de muitos outros tipos de câncer

mostram o mesmo tipo de dependência de idade. Assumindo que a taxa de mutação é ecnedicni
noillim
sesac
emow
wen(
noloc
)raey
rep
nnac
rep
fo
100
constante ao longo da vida, por que você acha que a incidência de câncer aumenta tão
dramaticamente com a idade?
0 100806040200
20–15 Em contraste com o câncer de cólon, cuja incidência aumenta dramaticamente com a idade, a Anos de idade)
incidência de osteossarcoma – um tumor que ocorre mais comumente nos ossos longos –
atinge o pico durante a adolescência. Os osteossarcomas são relativamente raros em Figura 20-1 Incidência de câncer de cólon em função
crianças pequenas (até 9 anos de idade) e em adultos (acima de 20 anos). Por que você da idade (Problema 20-14).
supõe que a incidência de osteossarcoma não mostra o mesmo tipo de dependência da

idade que o câncer de cólon?
20–16 Conforme mostrado na Figura 20–2, gráficos de mortes devido a câncer de mama e câncer Problemas p20.01/20.01
cervical em mulheres diferem dramaticamente do mesmo gráfico para câncer de cólon. Por
volta dos 50 anos, o aumento dependente da idade nas taxas de mortalidade por câncer de
mama e cervical diminui acentuadamente, enquanto as taxas de mortalidade por câncer de
cólon (e a maioria dos outros cânceres) continuam a aumentar. Por que você acha que os
aumentos dependentes da idade nas taxas de mortalidade por câncer de mama e cervical
diminuem após os 50 anos?
CÁLCULOS
20–17 O encurtamento progressivo dos telômeros nas células somáticas humanas em

proliferação limita o número de divisões celulares a cerca de 50. Tem sido sugerido que essa
limitação restringe o tamanho máximo dos tumores, conferindo assim alguma proteção contra
o câncer. Supondo que 108 células tenham uma massa de 1 grama, calcule a massa de um
tumor que se originou de 50 duplicações de uma única célula cancerígena.
20–18 A progressão tumoral – o acúmulo gradual de mutações em cinco ou seis genes diferentes –
fornece uma explicação natural para o rápido aumento da incidência de câncer com o
aumento da idade. Embora essa ideia seja bem aceita, não é a única explicação possível.
Há mais de 50 anos, uma ideia totalmente diferente foi proposta. A hipótese central era que
cinco ou seis células cancerígenas precisavam estar em contato umas com as outras antes
de começarem a se proliferar. (Enquadrado em termos modernos, você pode imaginar que
um fator de crescimento autócrino produzido pelas células tumorais era necessário para seu
crescimento. As células individuais produziam muito pouco para serem eficazes, enquanto
um pequeno aglomerado de células secretava o suficiente para desencadear sua própria
proliferação.)
Se a probabilidade de qualquer célula sofrer mutação para uma célula cancerígena é
x, a probabilidade de ela estar cercada por n células com mutação semelhante é xn. Em
Figura 20–2 Taxas de mortalidade por câncer
um tecido de células N , a probabilidade de ter um agrupamento crítico de células cancerígenas é em função da idade (Problema 20–16).
(A) Taxas de mortalidade por câncer de
(A) (B) (C) cólon em mulheres. (B) Taxas de mortalidade por
câncer de mama em mulheres. (C) Taxas de
cólon seios colo do útero mortalidade por câncer cervical. Os dados em
3 3 3
todos os casos são plotados como logaritmo da taxa
de mortalidade versus a idade do paciente (em uma
mortalidade
milhão
(log)
taxa
por
de
2 2 2
escala logarítmica) no momento da morte. Os dados
1 para câncer de cólon, exibidos em um gráfico linear-

1 1
linear, dariam a mesma forma de curva mostrada
na Figura 20-1. As linhas retas em (B) e (C) são t
0 25 32 40 50 63 79 idade (anos) 0 25 32 40 50 63 79 idade (anos) 0 25 32 40 50 63 79 idade (anos) para os dados das faixas etárias anteriores, enquanto
a linha em (A) é t para todos os pontos de dados.
O CÂNCER COMO UM PROCESSO MICROEVOLUCIONÁRIO 417
Figura 20-3 Risco cumulativo de mortalidade por câncer de pulmão para não
fumantes, fumantes e ex-fumantes (Problema 20-19). O risco cumulativo é o total
nunca
acumulado de mortes, como uma porcentagem, para cada grupo. Assim, para fumantes
15 parou
continuados, 1% morreu de câncer de pulmão entre as idades de 45 e 55 anos; um
adicional de 4% morreu entre 55 e 65 anos (dando um risco cumulativo de 5%); e 11% a
mais morreram entre 65 e 75 anos (para um risco cumulativo de 16%).
10
Nxn. Suponha, para fins de argumentação, que 1% das células em um tecido esteja mortalidade
cumulativo
pulmão,
câncer
risco
(%)
por
de
mutado, que cinco dessas células devem estar em contato para iniciar um câncer e parou aos
que existem 109 células no tecido . Dados esses parâmetros, haveria 0,1 colônia de 50 anos
5
câncer de tamanho crítico [109 × (10–2)5 = 0,1]. Depois de dobrar a idade (dobrando,
parou aos
portanto, o número de mutações), haveria 3,2 colônias de câncer [109 × (2 × 10–2)5 = 30 anos
3,2]. Essa equação prevê que a incidência de um câncer aumentará rapidamente com 0 nunca
defumado
a idade, da mesma forma que ocorreria no modelo de progressão do tumor.
45 55 65 75 85
Em sua forma mais simples, essa hipótese é descartada pela seguinte observação Anos de idade)
experimental: um carcinógeno químico aplicado induz cânceres em proporção direta

à sua concentração. Isso significa que aumentar a concentração de carcinógeno por
um fator de dois dobra o número de cânceres; aumentá-lo por um fator de quatro
quadruplica o número de latas
cers.
A. Como a dependência linear do câncer na concentração do carcinógeno químico descarta Problemas p20.04/20.04 cigarros
por dia
o modelo de aglomerado de células para a formação do câncer? 0 1–14 15–24 25+
2.0 13/7.3
câncer de pulmão
B. Como é explicada a relação linear entre o câncer e a concentração química de
1,5
carcinógenos no modelo de progressão do tumor? 14/12
11/11
1,0
0,5
TRATAMENTO DE DADOS
0/3,8
0
20–19 A mortalidade por câncer de pulmão foi acompanhada em grupos de homens no Reino
2.0 outros cânceres
Unido por 50 anos. A Figura 20-3 mostra o risco cumulativo de morrer de câncer de
15/10
pulmão em função da idade e do hábito de fumar para quatro grupos de homens: os 1,5 18/15
35/41 24/26
que nunca fumaram, os que pararam aos 30 anos, os que pararam aos 50 e os que 1,0
continuaram fumar. Esses dados mostram claramente que os indivíduos podem reduzir 0,5
substancialmente seu risco cumulativo de morrer de câncer de pulmão parando de
0
fumar. O que você acha que é a base biológica para esta observação?
2.0 doença respiratória
(não câncer de pulmão)
1,5
6/6.2 27/28 14/13 7/6.6
LINKS MÉDICOS observadas
esperadas
mortes
razão
entre
e
1,0
0,5
20–20 Em 1950, ficou claro que os pacientes com câncer de pulmão incluíam mais fumantes
pesados do que não fumantes, uma associação que não era aparente em outras 0
doenças. Na época, alguns consideraram que a única interpretação razoável era que
2.0 ataques cardíacos
fumar é um fator da doença; outros não estavam preparados para deduzir a causalidade
1,5 51/41
da associação. Para resolver a questão da causalidade, foi realizado um estudo 73/67
20/25 91/101
prospectivo para determinar a frequência com que o câncer de pulmão apareceria, no 1,0
futuro, entre pessoas cujo hábito de fumar já era conhecido. 0,5
0
Um questionário simples foi enviado a cerca de 60.000 médicos no Reino Unido;
2.0
cerca de 40.000 responderam. Cerca de 16.000 não foram usados porque eram de todas as outras doenças
mulheres ou homens com menos de 35 anos, raramente afetados por câncer de 1,5
49/41
25/28 117/110 56/68
pulmão. Um relatório preliminar foi publicado em 1954, 29 meses após o envio do 1,0
questionário. Durante esse tempo, 789 mortes ocorreram entre o grupo de teste, com 0,5
36 mortes atribuíveis a um diagnóstico certificado de câncer de pulmão. As mortes em
0
cada uma das várias doenças foram analisadas em quatro grupos: (1) não fumantes; 0 1–14 15–24 25+
(2) fumantes de 1 a 14 cigarros por dia; (3) fumantes de 15 a 24 cigarros por dia; e (4) cigarros por dia
fumantes de mais de 25 cigarros por dia. O número de mortes em cada grupo foi
Figura 20-4 Variação na mortalidade com a
comparado com o número esperado com base na porcentagem de todos os quantidade fumada (Problema 20-20).
entrevistados naquele grupo (Figura 20-4). Os números acima das barras indicam
as mortes observadas/esperadas.
Entre as doenças examinadas neste estudo preliminar, qual(is) parece(m)

correlacionar-se com a quantidade de tabaco fumado?
GENES CRÍTICOS PARA O CÂNCER: COMO SÃO ENCONTRADOS

E O QUE ELES FAZEM
driver de câncer colorretal proto- retrovírus do

de células-tronco de oncogene p53 retinoblastoma
câncer de gene crítico Ras gene supressor de tumor
para câncer gene rb tumor vírus v-
passageiro proteína Rb Ras
oncogênico
DEFINIÇÕES
20–21 Termo geral para um gene mutante cuja forma hiperativa causa câncer.
20-22 Termo geral para um gene normal no qual uma mutação de ganho de função
pode levar uma célula ao câncer.
20–23 Gene supressor de tumor – encontrado mutado em cerca de metade dos cânceres
humanos – que codifica um regulador de transcrição que é ativado por danos no DNA.
20–24 Célula rara associada a um câncer que é capaz de auto-renovação indefinida e é

responsável pela manutenção do câncer.
20–25 Tipo raro de câncer humano no qual as células da retina são convertidas em
estado canceroso por um número incomumente pequeno de mutações.
20–26 Carcinoma comum do epitélio que reveste o cólon e o reto.
20–27 Qualquer um de vários genes, nos quais a mutação frequentemente contribui

à causa ou evolução do câncer.
20–28 Termo geral para um gene normal no qual uma mutação de perda de função pode
contribuir para o câncer.
20–29 Uma mutação que ocorre em células que se tornam cancerosas

células, mas é irrelevante para o desenvolvimento da doença.
VERDADEIRO FALSO
20–30 Oncogenes e genes supressores de tumor podem ser detectados pela introdução de
DNA fragmentado de células cancerígenas em linhas celulares adequadas e
isolamento de colônias que exibem propriedades cancerígenas.
20–31 O carcinógeno químico dimetilbenz[a]antraceno (DMBA) deve ser um mutagênico

extraordinariamente específico, já que 90% dos tumores de pele que ele causa têm
uma alteração de A para T exatamente no mesmo local no gene mutante Ras .
20–32 Indivíduos que herdam uma cópia normal e uma cópia inativa de um gene supressor de
tumor têm maior probabilidade de desenvolver câncer do que indivíduos com duas
cópias normais.
20–33 Nas vias regulatórias celulares que controlam o crescimento e a proliferação celular, os
produtos dos oncogenes são componentes estimuladores e os produtos dos genes
supressores de tumor são componentes inibitórios.
GENES CRÍTICOS PARA O CÂNCER: COMO SÃO ENCONTRADOS E O QUE FAZEM 419
20–34 Quando as células cancerígenas de pacientes individuais são analisadas, muitas vezes são
encontradas mutações em vários componentes da via Rb ( o próprio Rb, junto com genes que
regulam diretamente o Rb), que governa o início do ciclo de divisão celular.
20–35 A perda da proteína p53 torna algumas células cancerígenas muito menos sensíveis à
irradiação e a muitas drogas anticancerígenas, que de outra forma destruiriam os tumores
induzindo as células em proliferação a parar de se dividir ou sofrer apoptose.
20–36 Os cânceres geralmente exibem instabilidade do genoma; no entanto, a instabilidade pode aparecer
como quebras cromossômicas, translocações e deleções em cânceres de um tecido, mas
principalmente como mutações pontuais em cânceres de outro tecido.
20-37 Está claro a partir de estudos em camundongos que a ativação mutagênica de um único onco
gene é suficiente para converter uma célula normal em uma célula cancerosa.
20-38 As terapias contra o câncer dirigidas apenas para matar as células que se dividem rapidamente e
constituem a maior parte do tumor provavelmente não eliminarão o câncer de muitos pacientes.
20-39 Por analogia com os automóveis, os defeitos nos genes críticos do câncer foram comparados a
freios quebrados e aceleradores emperrados, que são causados, em alguns casos, por serviço
defeituoso por mecânicos ruins. Usando essa analogia, decida como oncogenes, genes
supressores de tumor e genes de manutenção do genoma se relacionam com freios quebrados,
aceleradores emperrados e mecânica ruim. Explique a base para cada uma de suas escolhas.
20–40 O gene Rb é um exemplo de uma categoria de genes antiproliferativos em humanos.

Normalmente, quando ambas as cópias de tais genes são perdidas, os cânceres se
desenvolvem. Você acha que o câncer poderia ser erradicado se os genes supressores de
tumor, como o Rb , pudessem ser expressos em níveis elevados em todas as células humanas?
Qual seria o efeito sobre o ser humano? Explique suas respostas.
20–41 A superexpressão da proteína Myc é uma característica comum de muitos tipos de células
cancerígenas, contribuindo para o crescimento e proliferação celulares excessivos.
Por outro lado, quando Myc é superexpresso na maioria das células normais, o resultado não é
proliferação excessiva, mas parada do ciclo celular ou apoptose. Como você supõe que a
superexpressão de Myc pode ter resultados tão diferentes em células normais e em células
cancerígenas?
20–42 Cerca de 20% dos cânceres colorretais têm mutações no gene B-Raf . B-Raf é uma proteína quinase
serina/treonina que funciona na cascata Ras–Raf–Mek–Erk–MAP-quinase, que medeia as
respostas celulares aos sinais de crescimento. Quando a via é estimulada, Ras ativa B-Raf
fazendo com que uma proteína quinase adicione fosfatos à treonina 598 e à serina 601.
O B-Raf ativado adiciona fosfatos aos principais resíduos em Mek para ativar o restante da via
e estimular o crescimento celular. As mutações de B-Raf encontradas em células cancerígenas
dão origem a uma forma constantemente ativa de B-Raf que não precisa ser fosforilada por
Ras. Em uma amostra de câncer colorretal, 95% dos genes B-Raf mutantes tinham glutamato
no lugar de valina na posição 599. Por que você supõe que B-Raf com glutamato na posição
599 é ativo?
20–43 Mouse mammary tumor virus (MMTV) é um retrovírus oncogênico que causa câncer de mama em
camundongos quando se integra ao genoma. Você quer saber se ele carrega seu próprio
oncogene para dentro da célula ou gera um oncogene na integração. Você isola 26 cânceres
de mama diferentes de camundongos que foram expostos a MMTV e determina os locais em
TABELA 20–1 Genótipos de camundongos descendentes de cruzamentos entre

camundongos p53+/– Mdm2+/– duplamente heterozigotos (Problema 20–44).
Genótipo Camundongos descendentes (número) Camundongos descendentes (esperado)
p53+/+ Mdm2+/+ 3
p53+/+ Mdm2+/– 5
p53+/+ Mdm2–/– 0
p53+/– Mdm2+/+ 7
p53+/– Mdm2+/– 11
p53+/– Mdm2–/– 0
p53–/– Mdm2+/+ 1
p53–/– Mdm2+/– 7
p53–/– Mdm2–/– 2
quais os retrovírus estão integrados. Em 18 dos 26 tumores, os vírus são encontrados em

vários locais, todos localizados em um segmento de 20 kb do genoma do camundongo. Após
um exame mais detalhado desses 18 tumores, você descobre que um RNA é expresso da
região do genoma do camundongo perto do vírus integrado, mas não da região correspondente
nas células mamárias normais do camundongo. Essas observações defendem que o MMTV
carrega um gene onco ou gera um oncogene após a integração? Explique seu raciocínio.
CÁLCULOS
20–44 O gene p53 codifica uma proteína regulatória chave que pode interromper o crescimento
celular, induzir a morte celular ou promover a senescência celular em resposta a danos no
DNA ou outros tipos de estresse celular. Seu papel central em governar a resposta de uma
célula ao estresse é destacado pela descoberta de que ela é inativada por mutação em metade
de todos os cânceres humanos. Surpreendentemente, camundongos que não possuem p53
são bons em todos os aspectos - exceto que desenvolvem tumores aos 10 meses de idade. O
produto de um segundo gene, Mdm2, regula negativamente o p53, direcionando-o para
destruição ao anexar ubiquitina a ele. Seu laboratório está investigando esses genes usando
nocautes em camundongos. Você pode gerar camundongos Mdm2+/– perfeitamente bem,
mas quando esses camundongos são acasalados, não nascem filhotes Mdm2–/– viáveis. Para
investigar as interações genéticas entre p53 e Mdm2, você gera camundongos p53+/–
Mdm2+/– duplamente heterozigotos e os cruza. e genótipos da progênie
os ratos são mostrados na Tabela 20-1.

A. Os genes p53 e Mdm2 estão em cromossomos diferentes e, portanto, se distribuem
independentemente durante a meiose. Assumindo que os gametas haploides p53+Mdm2+,
p53+Mdm2–, p53–Mdm2+ e p53–Mdm2– são produzidos em frequências iguais pelos pais
masculino e feminino, calcule a frequência com que cada um dos genótipos descendentes
seria gerado por sortimento aleatório.
Qual dos genótipos, se houver algum, parece estar significativamente sub-representado entre
a progênie?
B. Como você interpretaria as diferenças no número de descendentes esperados
e realmente gerados para camundongos p53+/+ Mdm2–/–, p53+/– Mdm2–/– e
p53–/– Mdm2–/– ?
TRATAMENTO DE DADOS
20–45 Agora que o sequenciamento de DNA é tão barato, confiável e rápido, seu mentor montou um
consórcio de investigadores para perseguir o ambicioso
objetivo de rastrear todas as mutações em um conjunto de tumores humanos. Ele (A)

decidiu se concentrar no câncer de mama e no câncer colorretal porque eles
Ink4A
causam 14% de todas as mortes por câncer. Para cada um dos 11 cânceres de promotor ARF promotor
mama e 11 cânceres colorretais, você projeta primers para amplificar 120.839 ATG ATG parar
éxons em 14.661 transcrições de 13.023 genes. Como controles, você amplifica as
mesmas regiões de amostras de DNA retiradas de dois indivíduos normais. Você
parar
sequencia os produtos de PCR e usa software analítico para comparar os 456 Mb
da sequência do tumor com a sequência publicada do genoma humano. Você está
(B) apoptose
surpreso ao encontrar 816.986 mutações putativas. Isso representa mais de 37.000
mutações por tumor! Certamente isso não pode estar certo.
ARF Mdm2 p53
Depois de pensar um pouco sobre isso, você percebe que o computador às
vezes comete erros ao chamar as bases. Para testar essa fonte de erro, você ciclo de célula
inspeciona visualmente cada leitura de sequenciamento e descobre que pode prender prisão
excluir 353.738 alterações, deixando-o com 463.248, ou cerca de 21.000 mutações

(C)
por tumor. Ainda muito!
100
A. Você pode sugerir pelo menos três outras fontes de mutações aparentes que ARF +/ +
realmente não contribuem para o tumor? 80
B. Depois de aplicar vários critérios para filtrar alterações de sequência irrelevantes, sobrevivência
(%)
60
você encontra um total de 1.307 mutações nos 22 cânceres de mama e colorretal,
ou cerca de 59 mutações por tumor. Como você poderia decidir quais dessas 40
mudanças de sequência provavelmente são mutações condutoras e quais são 20

ARF +/–
provavelmente mutações passageiras que ocorreram em genes sem nada a ver
0
com câncer (mas foram encontradas nos tumores porque ocorreram nas mesmas 0 5 10 15 20
células? com verdadeiras mutações de câncer)? tempo (semanas)
C. Sua estratégia de sequenciamento abrangente detectará todas as alterações
genéticas possíveis que afetam os genes-alvo nas células cancerígenas?
Figura 20–5 Estrutura do gene e
função do ARF (Problema 20–46).
20-46 Notavelmente, o locus Ink4A-ARF codifica duas proteínas supressoras de tumor
(A) Estruturas gênicas de ARF e Ink4A.
diferentes, Ink4A e ARF, que compartilham um éxon comum, mas são traduzidas O ATG no éxon inicial de cada gene indica o
em diferentes quadros de leitura (Figura 20-5A). Mutações em tumores humanos sítio de início da tradução, que corresponde
que inicialmente se pensava afetar Ink4A foram mais tarde mostradas como ao AUG no transcrito do RNA. O quadro de
afetando uma nova proteína codificada em um quadro de leitura diferente; daí o leitura do Ink4A é mostrado em vermelho e
o do ARFProblemas
é mostrado em azul. Observe
p20.09/20.05
nome do gene: ARF, para quadro de leitura alternativo. Uma das principais funções que as sequências de aminoácidos de
do ARF é inibir o Mdm2, que por sua vez inibe o p53 (consulte o Problema 20-44). Ink4A e ARF são completamente diferentes.
A relação entre ARF, Mdm2 e p53 é comumente representada conforme mostrado (B) Relação funcional entre ARF, Mdm2
na Figura 20–5B. O tipo de “duplo negativo” implícito nessa relação pode ser e p53. O símbolo T no lado indica inibição;
por exemplo, ARF inibe Mdm2. (C)
confuso: ARF é um inibidor de um inibidor de p53.
Sobrevivência de camundongos
expressando o oncogene Myc em um fundo
A. Você esperaria que camundongos knockout para ARF fossem mais propensos, ou menos genético que é ARF +/+ ARF +/–.
propensos, a desenvolver tumores do que um camundongo selvagem? Explique seu raciocínio. Os camundongos que sobreviveram ou
por um determinado período de tempo são
B. Você supõe que um camundongo p53+/+ Mdm2–/– , que morrerá no início da
expressos como uma porcentagem da
embriogênese, seria resgatado por nocaute do gene ARF ? Ou seja, você esperaria
população inicial. Todos os ratos mortos
que um mouse p53+/+ Mdm2–/– ARF–/– fosse viável ou morto? morreram de câncer.
Explique seu raciocínio.
C. O Myc oncogene, além de estimular as vias de proliferação celular, também
ativa a IRA, influenciando indiretamente a atividade da p53. Como você explicaria a
observação de que camundongos expressando o oncogene Myc desenvolvem
tumores mais rapidamente em camundongos ARF+/– do que em camundongos
ARF+/+ (Figura 20-5C)?
20–47 A formação de tumores é um processo de várias etapas que envolve a ativação

de vários oncogenes, a inativação de vários supressores de tumor ou uma
combinação de ambos. Essa noção é fortemente apoiada por experimentos em
camundongos transgênicos. Os oncogenes Ras e Myc , ambos sob controle do
promotor MMTV (mouse mammary tumor virus), foram introduzidos separadamente
na linhagem germinativa do camundongo, e os camundongos resultantes foram
criados para gerar camundongos que carregavam ambos os oncogenes.
Camundongos com Ras, Myc ou ambos os oncogenes desenvolveram tumores em uma
frequência maior do que os animais normais. Camundongos fêmeas foram afetados mais rapidamente
porque o promotor MMTV, que responde aos hormônios esteróides, ativa os

Myc sozinho
oncogenes transferidos em resposta às alterações hormonais na puberdade. Na 100
Figura 20-6, a taxa de aparecimento de tumores é plotada como a porcentagem
de mulheres sem tumor em diferentes momentos após a puberdade. Ras sozinho
A. Assuma que as linhas desenhadas através dos pontos de dados são uma
representação precisa dos dados. Quantos eventos além da expressão dos selamef
(herda
%)
oncogenes são necessários para gerar um tumor em cada um dos três tipos de 10
camundongos? (Você pode querer ler o Problema 20–51.) romut
B. A ativação do gene Ras celular é o evento necessário para desencadear a

Myc + Ras
formação de tumores em camundongos que já expressam o gene Myc regulado
por MMTV (ou vice-versa)?
1
C. Por que você acha que a taxa de produção de tumor é tão alta nos camundongos 100 150
0 50
contendo ambos os oncogenes? tempo após a puberdade (dias)
20-48 Em um conjunto clássico de experimentos, Barbara McClintock descreveu alguns Figura 20-6 Fração de camundongos fêmeas livres
rearranjos cromossômicos no milho que se assemelham a rearranjos similares de tumor em função do tempo após a puberdade
presentes em muitas células cancerígenas. Em estudos da genética da variação (Problema 20-47).
de cores no milho, ela gerou grãos salpicados cruzando uma linhagem que
contém um rearranjo do cromossomo 9 induzido por raios X (Figura 20-7). Esse
cromossomo carrega um marcador de cor (C, colorido; forma recessiva c, incolor),
que lhe permitiu seguir sua herança em núcleos individuais. Quando cepas Problemas p20.10/20.06
portadoras do cromossomo 9 rearranjado portador do alelo C dominante foram
cruzadas com milho selvagem portador do alelo c recessivo , um pequeno número
de grãos nas espigas descendentes de milho tinha uma aparência salpicada.
Essa variação
de cores surge por um mecanismo complexo. Na meiose, a recombinação
dentro do segmento rearranjado gera um cromossomo com dois centrômeros,
conforme mostrado na Figura 20-8. Em uma fração desses meios, o cromossomo
recombinado com dois centrômeros se estende entre os dois pólos na primeira
anáfase meiótica, formando uma ponte entre os dois pólos meióticos. Em algum
momento da anáfase para a telófase, o cromossomo tenso se quebra em uma
posição aleatória entre os centrômeros duplicados. As extremidades quebradas
do cromossomo tendem a se fundir após a próxima fase S, o que gera um novo
cromossomo dicêntrico, cuja estrutura depende de onde ocorreu a quebra
anterior (Figura 20-8). As forças que atuam durante a mitose subsequente, por
sua vez, quebrarão esse cromossomo, e o ciclo ponte-quebra-fusão se repetirá
no próximo ciclo celular, a menos que um mecanismo de reparo adicione um
telômero à extremidade quebrada.
A Figura 20-8 mostra a localização cromossômica de outro marcador genético

no cromossomo 9, que pode causar uma alteração “cerosa” no amido depositado
nos grãos. O alelo ceroso pode ser detectado pela coloração com iodo. Ceroso
(wx) é recessivo para o alelo normal, não ceroso (Wx) . Seguindo a herança dos
marcadores C e Wx nos núcleos, McClintock obteve uma compreensão do
comportamento dos cromossomos quebrados. Ela observou três tipos de manchas
dentro dos núcleos coloridos não cerosos (C-Wx) : manchas incolores e não
cerosas (c-Wx) ;
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
cromossomo 9 normal
Centrômero
Figura 20–7 Cromossomos 9 normais e

rearranjados no milho (Problema 20–48).
678910 1 2 3 4 5 11 As setas acima do cromossomo normal indicam
cromossomo
9 rearranjado os locais de quebra que deram origem ao
Centrômero cromossomo rearranjado.
C Lx Figura 20-8 Recombinação entre um

cromossomo normal e um rearranjado 9
c wx para dar um cromossomo dicêntrico
(Problema 20-48). A recombinação
HOMÓLOGO homóloga ocorre no X. Somente o
RECOMBINAÇÃO
produto com dois centrômeros é
C Lx mostrado; o outro produto, que não tem
centrômero, será perdido porque não
consegue se prender ao fuso. A quebra do
cromossomo quebra dentro cromossomo dicêntrico original seguida de
desta região após a anáfase
replicação e fusão das extremidades dá
meiótica
origem a um segundo cromossomo dicêntrico.
C Lx
REPLICAÇÃO,
FUSÃO
C Lx
pontas quebradas
C Lx
juntam-se
manchas incolores e não cerosas (c-Wx) contendo uma ou mais manchas

cerosas incolores (c-wx) ; e manchas intensamente coloridas, não cerosas (?-
Wx) (Figura 20-9).
A. As manchas surgem porque as células com uma constituição genética diferente
se dividem para dar origem a vizinhos idênticos que permanecem juntos em
um aglomerado. Começando com o cromossomo dicêntrico mostrado na parte
inferior da Figura 20-8, mostre como os ciclos de ponte-quebra-fusão podem
explicar os três tipos de manchas mostrados na Figura 20-9. Qual é a
constituição genética das manchas intensamente coloridas? (Nesses
cruzamentos, os alelos
dominantes — Problemas p20.12/20.08 C e Wx — são transportados no
cromossomo dicêntrico rearranjado na parte inferior da Figura 20-8, e os alelos
recessivos — c e wx — são transportados no normal, cromossomo 9 não rearranjado.)
B. Você esperaria ver manchas coloridas dentro de manchas incolores?
Por que ou por que não?
C. Você esperaria ver manchas incolores dentro das cores intensamente
remendos? Por que ou por que não?
20–49 Uma pequena fração – 2–3% – de todos os cânceres, em muitos subtipos, exibe
um fenômeno bastante notável: dezenas a centenas de rearranjos que
envolvem principalmente um único cromossomo ou região cromossômica. Os
pontos de interrupção podem ser fortemente agrupados, com vários em
algumas kilobases; as junções dos rearranjos geralmente envolvem segmentos
de DNA que originalmente não estavam próximos no cromossomo. Verificou-
se que o número de cópias de vários segmentos dentro do cromossomo
rearranjado era zero, indicando deleção, ou um, indicando retenção.
Você pode imaginar duas maneiras pelas quais esses rearranjos múltiplos
e localizados podem acontecer: um modelo de rearranjos progressivos com
inversões, deleções e duplicações contínuas envolvendo uma área localizada,
ou um modelo catastrófico no qual o cromossomo é quebrado em fragmentos
que são costurados juntos novamente. em ordem aleatória por junção de
extremidade não homóloga (Figura 20-10).
C-Wx C-Wx C-Wx
c-Wx Figura 20–9 Três tipos de manchas

observadas em grãos salpicados
c-Wx c-wx ?-Wx (Problema 20–48).
Modelo de Rearranjos Progressivos Modelo de Catástrofe Cromossômica
linhagem germinativa
AB CD E FGHI J ABCDE FGHI J
duplicação em tandem CDEF

ABCDE F C DE FG OI J quebra cromossômica catastrófica
E D
inversões EFGH C
ABCDE F CD
HGF E
EU J H
J
A
G
F
B EU
eliminação NÃO
ABCDE F CD
HG
F J
duplicação tandem BC junção final não homóloga

ABCBCD E F CD
HGF J EU F C B D H
A
(perdido para celular)
J E
G
A. Qual dos dois modelos na Figura 20-10 explica mais prontamente as características Figura 20-10 Dois modelos para explicar
os múltiplos rearranjos cromossômicos
desses cromossomos altamente rearranjados? Explique seu raciocínio. localizados encontrados em alguns tipos de
câncer (Problema 20-49). O modelo
B. Para qualquer modelo que você escolher, sugira como esses múltiplos reorganizam de rearranjos progressivos mostra uma
podem surgir. (O verdadeiro mecanismo não é conhecido.) sequência de rearranjos que desorganiza
Problemas
C. Você acha que tais rearranjos provavelmente são n20.201/20.10
eventos causadores nos cânceres o cromossomo, gerando configurações
cromossômicas cada vez mais complexas.
em que são encontrados, ou são provavelmente apenas eventos passageiros não O modelo de catástrofe cromossômica
relacionados ao câncer? Se você acha que podem ser eventos condutores, sugira mostra o cromossomo sendo
como tais rearranjos podem ativar um oncogene ou inativar um gene supressor de fragmentado e depois remontado
tumor. aleatoriamente, com alguns pedaços deixados de fora.
LINKS MÉDICOS
20–50 O ensaio clínico de um protocolo de terapia gênica para curar a doença genética
humana, a síndrome de imunodeficiência combinada grave (SCID), usou retrovírus
para transportar o gene Il2rg ausente. O julgamento terminou em desastre. Quase
3 anos após a conclusão da terapia genética retroviral, duas das crianças tratadas
desenvolveram leucemia de células T. Em ambos os casos, o retrovírus terapêutico
integrou-se próximo ao gene Lmo2 , um conhecido proto-oncogene de células T
humanas, causando sua expressão aberrante. Em geral, assumiu-se que a
mutagênese insercional por retrovírus defeituosos na replicação (o tipo usado no
estudo) seria tão rara que teria consequências insignificantes. Encontrar duas
dessas inserções entre 10 crianças tratadas levantou sérias preocupações sobre o
futuro da terapia genética retroviral.
Para reunir informações com base nesse efeito, outro grupo examinou sua
coleção de tumores de células sanguíneas induzidos por retrovírus em
camundongos. Em uma pesquisa de 600 tumores, eles encontraram duas leucemias
com integrações no gene Lmo2 e duas com integrações no gene Il2rg .
Surpreendentemente, uma dessas leucemias tinha um retrovírus integrado em
Lmo2 e um segundo integrado em Il2rg. Esta observação levantou a possibilidade
de que as duas integrações foram co-selecionadas porque cooperam para induzir
leucemia. A implicação é que o teste de terapia genética levou a cânceres por
causa da combinação promotora de leucemia de expressão retroviral de Il2rg e
integração retroviral próxima a Lmo2. A expressão retroviral de outros tipos de
genes pode não causar problemas. Essa
explicação intrigante para os resultados da terapia genética baseia-se na
suposição de que encontrar uma leucemia com integrações em Lmo2 e Il2rg por
acaso é extremamente pequeno. Qual é a probabilidade de encontrar tal integração
dupla por acaso em uma pesquisa de 600 tumores? Uma maneira de abordar
essa questão é começar calculando a chance de encontrar uma integração aleatória
em Il2rg em 600 tumores que todos
têm uma integração retroviral em Lmo2. Suponha que a integração em um alvo de 100 kb ao
redor do gene Il2rg seja necessária para alterar a expressão do gene Il2rg . Além disso, suponha
que haja exatamente dois eventos de integração em cada um dos 600 tumores: um em Lmo2 e
outro aleatório.
A. Dado que o genoma do camundongo é 2 × 106 kb, que fração de eventos de integração aleatória
(fi) estará dentro do alvo de 100 kb? Que fração (fo) ficará fora do alvo?
B. Qual é a probabilidade (PN) de que em 600 tumores você não verá um segundo
integração no alvo? [PN = (fo)600]
C. Qual é a probabilidade (PY) de que em 600 tumores você encontrará um segundo inte
evento de gração no alvo? (PY = 1 – PN)
D. Dado que apenas 2 de 600 tumores realmente tiveram uma integração retroviral em Lmo2, qual
é a chance de obter uma integração retroviral dupla em Lmo2 e Il2rg?
E. Indique de forma geral como cada suposição específica afeta seus cálculos. Se o alvo Il2rg
fosse 10 kb em vez de 100 kb, a probabilidade calculada na parte D seria aumentada ou
diminuída? Se houvesse, em média, menos de dois eventos de integração retroviral por tumor,
a probabilidade na parte D seria aumentada ou diminuída? Se houvesse mais de dois eventos
de integração por tumor, como a probabilidade na parte D seria afetada? Se a integração
retroviral não fosse aleatória, como o cálculo da parte D seria afetado?
20–51 O retinoblastoma é um câncer extremamente raro da retina no olho. A doença afeta principalmente
crianças até os 5 anos de idade porque só pode ocorrer enquanto as células precursoras
nervosas ainda estão em divisão. Em alguns casos, os tumores ocorrem em apenas um olho,
mas em outros casos, os tumores se desenvolvem em ambos os olhos. Todos os casos
bilaterais apresentam história familiar da doença; a maioria dos casos que afetam apenas um
olho surge em famílias sem história prévia de doença.
Uma diferença informativa entre casos unilaterais e bilaterais

torna-se aparente quando a fração de casos ainda não diagnosticados é plotada em relação à
idade em que o diagnóstico é feito (Figura 20-11). A diminuição regular com o tempo
apresentada pelos casos bilaterais sugere que um único evento fortuito é suficiente para
desencadear o aparecimento de retinoblastoma bilateral.
Por outro lado, a presença de um “ombro” na curva unilateral sugere que múltiplos eventos em
uma célula são necessários para desencadear o retinoblastoma unilateral. (Um ombro surge
porque os eventos se acumulam com o tempo.
Por exemplo, se forem necessários dois eventos, a maioria das células afetadas no início terá
sofrido apenas um único evento e não gerará um tumor. Com o tempo, aumenta a probabilidade 100
unilateral
de que um segundo evento ocorra em uma célula já afetada e, portanto, cause um tumor.) casos
50
Uma explicação possível para essas observações é que os tumores se desenvolvem

quando ambas as cópias do gene crítico (o retinoblastoma, Rb, gene) são perdidas ou sofrem
amotsalboniter
nerdlihc
eerf-
(%)
mutação. Na forma hereditária (bilateral) da doença, uma criança recebe um gene Rb defeituoso
de um dos pais: os tumores se desenvolvem em um olho quando a outra cópia do gene é 10 bilateral
perdida por meio de mutação somática. casos
Na verdade, a perda de uma cópia do gene é frequente o suficiente para que os tumores 5
geralmente ocorram em ambos os olhos. Se uma pessoa começa com duas cópias boas do
gene Rb , os tumores surgem em um olho apenas se ambas as cópias forem perdidas na mesma célula. 0 10 20 30 40 50 60
Como essa perda dupla é muito rara, geralmente é limitada a um olho. idade (meses)
Para testar essa hipótese, você usa um clone de cDNA do gene Rb para sondar a estrutura
do gene em células de indivíduos normais e de pacientes com retinoblastoma unilateral ou Figura 20-11 Tempo de início dos
bilateral. Conforme ilustrado na Figura 20-12, os indivíduos normais têm quatro fragmentos de casos unilaterais e bilaterais de
restrição que hibridam com a sonda de cDNA (o que significa que cada um desses fragmentos retinoblastoma (Problema 20-51). Uma
população de crianças, todas
de restrição contém pelo menos um éxon). Os fibroblastos (células não tumorais) dos dois
as quais desenvolveram
pacientes também mostram os mesmos quatro fragmentos, embora três dos fragmentos da retinoblastoma, é representada neste
criança com retinoblastoma bilateral estejam presentes gráfico.
que aindaAestá
fração
livredadepopulação
tumor é
plotada contra o tempo após o nascimento.
Figura 20-12 Padrões de

(A) MANCHA DO SUL
hibridação de blot de fragmentos de restrição
paciente com paciente com
do gene do retinoblastoma (Problema 20-51).
retinoblastoma bilateral retinoblastoma unilateral (A) Southern blot para indivíduos normais
e para pacientes com retinoblastoma
células fibroblastos células fibroblastos unilateral e bilateral. O sombreamento mais
fibroblastos normais tumorais tumorais claro de algumas bandas indica metade do
kb número normal de cópias. (B) A ordem
9.8 dos fragmentos de restrição no gene Rb.
Os fragmentos que contêm exons (retângulos)
7.5 hibridam com o clone de cDNA que foi
usado como sonda nesses experimentos.
6.2
5.3
(B) MAPA DE RESTRIÇÃO
5.7 5.3 9.8 2.6
em apenas metade da quantidade normal. As células tumorais dos dois pacientes

não possuem alguns dos fragmentos de restrição.
A. Explique por que broblastos e células tumorais do mesmo paciente apresentam
padrões de bandas diferentes.
B. Quais são as estruturas dos genes Rb nos broblastos dos dois pacientes? Quais são
suas estruturas nas células tumorais dos dois pacientes Problems p20.08/20.12?
C. Esses resultados são consistentes com a hipótese de que o retinoblastoma se deve à

perda do gene Rb ?
PREVENÇÃO E TRATAMENTO DO CÂNCER: PRESENTE

E FUTURO
Resistência multidroga papilomavírus (HPV)

do vírus do tumor de DNA
DEFINIÇÕES
20–52 Causa de verrugas humanas e fator causador de carcinomas do

colo uterino.
20–53 Fenômeno no qual uma célula se torna insensível não apenas a uma droga com a qual
foi tratada, mas também a outras às quais nunca foi exposta.
VERDADEIRO FALSO
20–54 Muitos dos carcinógenos mais potentes são quimicamente inertes até serem modificados
pelas oxidases do citocromo P-450 no fígado.
20–55 Vírus e outros agentes infecciosos não desempenham nenhum papel nos cânceres humanos.
20–56 As principais causas ambientais de câncer são produtos de nossa

modo de vida industrializado, como poluição e aditivos alimentares.
20-57 As terapias anticancerígenas tiram proveito de alguma anormalidade molecular de

células cancerígenas que as distingue das células normais.
PREVENÇÃO E TRATAMENTO DO CÂNCER: PRESENTE E FUTURO 427
20-58 A dependência de oncogenes descreve o fenômeno no qual uma célula cancerosa sofre
mutações adicionais ou alterações epigenéticas que a tornam dependente da
hiperatividade de um oncogene, assim como os viciados se tornam dependentes de
altas doses de suas drogas.
20–59 A natureza hipermutável das células tumorais significa que é improvável que os
tratamentos com drogas anticâncer únicas ou mesmo combinações de tais drogas
erradiquem todas as células cancerígenas.
20–60 Estudos epidemiológicos podem fornecer ligações sugestivas entre fatores ambientais e
câncer. Por exemplo, conforme mostrado na Figura 20-13, a curva de mortes por
câncer de pulmão nos Estados Unidos é paralela à curva de consumo per capita de
cigarros. No entanto, a curva do câncer de pulmão está deslocada em cerca de 25 anos
em relação ao tabagismo.
O que você acha que é a base para esse atraso? O que você diria a seu tio, que insiste
que as pessoas que fumam são inerentemente mais propensas ao câncer e que o
câncer de pulmão realmente não tem nada a ver com cigarros?
20-61 Praticamente todos os tratamentos contra o câncer são projetados para matar células
cancerígenas, geralmente induzindo a apoptose. No entanto, um câncer em particular
- leucemia promye locytic aguda (APL) - foi tratado com sucesso com ácido retinóico
all-trans , que faz com que os promielócitos se diferenciem em neutrófilos. Como uma
mudança no estado de diferenciação das células cancerígenas APL pode ajudar o
paciente?
20-62 Um dos principais objetivos da terapia moderna do câncer é identificar pequenas moléculas
- drogas anticancerígenas - que podem ser usadas para inibir os produtos de genes
específicos críticos para o câncer. Se você estivesse procurando por tais moléculas,
você projetaria inibidores para produtos de oncogenes ou produtos de genes supressores
de tumor? Explique por que você selecionaria (ou não) cada tipo de gene.
20–63 Você acabou de ler sobre esta técnica realmente interessante para telas de alto rendimento
de inibidores de proteína quinase. O problema é que você não entende. É claramente
importante uma vez que permite rastrear rapidamente um grande número de potenciais
inibidores de quinases contra um grande número de proteínas quinases. Existem cerca
de 500 proteínas quinases, incluindo cerca de 100 tirosinas quinases, codificadas no
genoma humano. Muitos deles são componentes críticos nas vias de transdução de
sinal que se tornam mal reguladas no câncer. Substâncias químicas que inibem
proteínas quinases individuais podem servir como importantes compostos principais
para o desenvolvimento de drogas úteis na luta contra o câncer (e outras doenças).
Então você quer entender como essa técnica funciona.
5000 150
4000
fumar
100
cigarros/
pessoa/
ano
3000
100.000
pulmão/
câncer
mortes
ano/
por
de
2000
50
1000 câncer de pulmão
Figura 20-13 Mortes por câncer de

pulmão e consumo per capita de cigarros
0 0 1900 1920 1940 1960 1980 2000 2020 nos Estados Unidos de 1930 a
ano 2000 (Problema 20-60).
Figura 20-14 Ensaio quantitativo para

triagem de potenciais inibidores de proteínas
quinases (Problema 20-63). Fagos T7
transportando uma fusão quinase-capsídeo são
misturados com grânulos magnéticos revestidos
composto de teste
de análogo de ATP na presença de um composto
de teste. Depois de lavar os fagos não ligados,
os fagos ligados são eluídos e testados quanto
à formação de placas.
fago de ensaio
ligado a grânulos
Fago T7 com fusão capsídeo-quinase esferas magnéticas com análogo de ATP ensaio de placa
Existem vários elementos (Figura 20–14). Primeiro, os genes individuais da

proteína quinase são fundidos à principal proteína do capsídeo (cabeça) do
bacteriófago T7. Quando expressas em bactérias, as proteínas de fusão são montadas
no capsídeo do fago, com as quinases exibidas na superfície externa.
Em segundo lugar, um análogo do ATP, que pode se ligar ao bolsão de ligação do ATP dos
Problemas p20.14/20.14, as quinases, é anexado a esferas magnéticas. Em terceiro lugar, um
banco de libras de teste é preparado.
Para medir a capacidade de um composto de teste para inibir a quinase, os fagos
que apresentam uma quinase específica são misturados com as esferas magnéticas
em vários poços de uma placa de 96 poços. Então, o composto de teste é adicionado
a poços individuais em uma faixa de concentrações diferentes. As misturas são
incubadas com agitação suave por 1 hora a 25°C, as esferas são puxadas para o
fundo com um ímã forte e todos os componentes livres (não ligados) são lavados.
Finalmente, os fagos remanescentes aderidos são dissociados dos grânulos usando
um excesso do mesmo análogo de ATP que está anexado aos grânulos e contados
medindo o número de placas que eles formam em uma camada bacteriana em uma
placa de Petri (Figura 20-14 ).
Embora o ensaio esteja bem descrito e a figura seja clara, existem
várias coisas que você simplesmente não entende.
Por exemplo: A. Qual é o objetivo da incubação de uma hora?
B. Como a contagem de placas se relaciona com a eficiência de ligação do composto de
teste? Um composto de teste que se liga fortemente a uma proteína quinase dará mais
placas ou menos placas do que um que se liga fracamente à quinase?
C. Os compostos de teste competem pela ligação do análogo de ATP? Ou um composto

de teste que se liga fortemente à quinase em algum outro lugar também será registrado
neste ensaio?
D. Supondo que os compostos de teste se liguem ao sítio de ligação do ATP, como é
possível que eles se liguem a uma proteína quinase, mas não a outra? Afinal, toda
proteína quinase tem um sítio de ligação ao ATP; é assim que eles se ligam ao análogo
de ATP nas esferas magnéticas.
CÁLCULOS
20-64 No ensaio de inibidor de quinase de alto rendimento descrito no Problema 20-63, a

constante de dissociação, Kd, para um composto de teste pode ser calculada
facilmente a partir da curva de contagem de placa versus concentração do
Figura 20–15 Gráfico de ligação do fago versus

1,0 concentração do composto de teste (Problema 20–64).
Todos os gráficos foram normalizados para que o
número máximo de fagos ligados (maior contagem
de placas) seja 1,0 e o mínimo seja 0,0. Para a curva
BIRB-796 VX-745 SB203580 normalizada, a resposta semi-máxima ocorre em
0,5
(normalizado)
fago
0,5, que é mostrada pela linha branca.
BIRB-796, VX-745 e SB203580 são os nomes dos

compostos de teste.
0,0
0,01 0,1 1,0 10 100 1000
composto de teste (nM)
composto de teste (Figura 20-15). A expressão para Kd para o composto de teste é
Problemas p20.15/20.15 × [teste]½

Kd(teste) = Kd(analógico)
Kd(analógico) + [analógico]
onde Kd(análogo) é a constante de dissociação para ligação do análogo de ATP ao sítio

de ligação de ATP da proteína quinase, [análogo] é a concentração do análogo ligado aos
grânulos magnéticos e [teste]½ é a concentração do teste livre composto que produz uma
resposta meio-máxima.
Se a concentração analógica for mantida bem abaixo de Kd(analógico), então a
expressão se torna
Kd(teste) ÿ [teste]½
A. Usando esta aproximação, determine os valores de Kd para o teste com

libras a partir dos dados da Figura 20-15. As
B. equações acima assumem que a concentração de fagos está bem abaixo de Kd(teste).
Nestas experiências, os fagos foram incubados com as esferas magnéticas e o composto
de teste a 1010 fagos/mL. Esta é uma concentração baixa o suficiente para que os valores
calculados na parte A sejam válidos?
TRATAMENTO DE DADOS
Figura 20–16 Cariótipos de células de demônios
20–65 O diabo da Tasmânia, um carnívoro marsupial australiano, está ameaçado de extinção da Tasmânia (Problema 20–65).
(A) Um demônio da Tasmânia. (B) Cariótipo
pela disseminação de uma doença fatal na qual um tumor oral-facial maligno interfere na
normal para um demônio da Tasmânia masculino.
capacidade de alimentação do animal. Você foi chamado para analisar a origem desse
O cariótipo tem 14 cromossomos, incluindo XY.
câncer incomum. Parece claro para você que o câncer de alguma forma se espalha de (C) Cariótipo das células cancerígenas
demônio para demônio, muito provavelmente por suas brigas frequentes, que são encontradas em cada um dos 11 tumores
acompanhadas por mordidas no rosto e na boca. Para descobrir a origem do câncer, você faciais estudados. O cariótipo tem 13 cromossomos,
nenhum cromossomo sexual, nenhum par de
isola tumores de 11 demônios capturados em regiões amplamente separadas e os examina.
cromossomo 2, um cromossomo 6, dois
cromossomos 1 com braços longos deletados
Como seria de se esperar, os cariótipos das células tumorais são altamente retrógrados e quatro cromossomos altamente rearranjados
em relação aos do demônio do tipo selvagem (Figura 20-16). Surpreendentemente, (M1-M4).
(A) (B)
1 2 3 4 5 6 XY
(C)
Diabo da Tasmânia (Sarcophilus harrisii) 1 3 4 5 6 M1 M2 M3 M4

TABELA 20-2 Cruzamentos entre cepas tumorais de camundongos de alta e baixa

incidência (Problema 20-66).
Experimentar progenitor feminino pai masculino Tumores em

F1 feminino
1. D (alto) C57 (baixo) 36,1%
2. C57 (baixo) D (alto) 5,5%
3. Um alto) CBA (baixo) 86,3%
4. CBA (baixo) Um alto) 0,0%
5. Z (alto) eu (baixo) 90,0%
6. eu (baixo) Z (alto) 0,0%
você descobre que os cariótipos de todas as 11 amostras de tumor são muito semelhantes.
Além disso, um dos demônios da Tasmânia tem uma inversão no cromossomo 5 que não está
presente em seu tumor facial. Como você acha que esse câncer é transmitido de demônio para
demônio? É provável que surja como consequência de uma infecção por um vírus? Explique seu
raciocínio.
20-66 Certas linhagens endogâmicas de camundongos sofrem de tumores de mama com uma frequência
relativamente alta, enquanto outras linhagens endogâmicas raramente, ou nunca, formam
tumores de mama. Para investigar a base dessa diferença hereditária, você estabelece uma
série de cruzamentos genéticos entre as cepas de camundongos “alto” e “baixo” formadores de
tumores, conforme mostrado na Tabela 20-2. Você fica surpreso ao descobrir que altas
frequências de tumores aparecem em camundongos fêmeas F1 apenas quando suas mães eram
das cepas de “alta frequência”. Ao cruzar a progênie F1 gerada em um experimento para produzir
camundongos F2, você encontra o mesmo resultado: altas frequências de tumores aparecem
em camundongos F2 fêmeas apenas quando suas avós eram da linhagem de “alta frequência”.
A. Você pode explicar esses resultados com base na herança de um cromossomo

mutação somal: recessiva, dominante ou ligada ao cromossomo X?
B. No Experimento 4, uma de suas mães CBA (baixa) morreu e você colocou seus filhotes com uma
mãe A (alta) para adoção. Para sua surpresa, as filhotes adotadas desenvolveram tumores de
mama. Além disso, os filhotes dessas fêmeas adotadas transmitiram a tendência de formar
tumores de mama para suas filhas. O que você acha que pode ser a base para esses resultados?
20–67 Um grande desafio no desenvolvimento de medicamentos é prever as respostas clínicas de pesquisas

em laboratório ou em animais. O desenvolvimento de medicamentos para o tratamento do
câncer, assim como para outras doenças, depende de dois objetivos interligados.
Primeiro, um fármaco deve se ligar à sua proteína-alvo com um Kd baixo (na faixa nM) para que
a quantidade de fármaco que deve ser administrada ao paciente seja mantida em uma faixa
razoável. Em segundo lugar, a concentração na qual um fármaco afeta sua proteína-alvo
pretendida deve ser 10 a 100 vezes menor do que a concentração na qual ele afeta outras
proteínas (o-alvo).
Como as proteínas quinases são componentes-chave nas vias de sinalização que controlam
o comportamento celular, elas têm sido alvos intensos para o desenvolvimento de drogas anti-
câncer. A tela de alto rendimento descrita no Problema 20-64 tem o potencial para medir os
valores de Kd e determinar os efeitos do alvo no mesmo ensaio. Os resultados de uma triagem
para quatro inibidores de quinase são mostrados na Figura 20–17. Os resultados são
apresentados esquematicamente em uma árvore evolutiva das quinases humanas (o chamado
quinoma humano). Apenas 113 das cerca de 500 quinases representadas no kinome foram
testadas na tela de alto rendimento. Círculos sobrepostos
RTK RTK RTK RTK

TK TK TK TK 1 nM
TKL TKL TKL TKL
CLK CLK CLK CLK 10 nM

MAPK CK MAPK CK MAPK CK MAPK CK
100 nM
CDK CDK CDK CDK
PKA PKA PKA PKA
1 µM
CAMK CAMK CAMK CAMK
Gleevec BIRB-796 Iressa estaurosporina
na posição da quinase alvo no kinoma representam anidades de ligação, com círculos Figura 20–17 Perfis de especificidade para
inibidores de proteína quinase (Problema 20–67).
maiores indicando ligação mais forte ( valores de Kd mais baixos ).
A estrutura altamente ramificada é a árvore
A. Supondo que o círculo maior representa o alvo principal de um inibidor, classifique os
evolucionária para o kinome humano.
inibidores do mais específico para o menos específico. Círculos de tamanhos diferentes
representam constantes de ligação
B. Como é verdade para muitos dos inibidores testados neste ensaio, a ligação por BIRB aproximadas, conforme indicado à direita. TK,
tirosina quinase não receptora; RTK, tirosina
Problemas p20.16/20.17 796 parece estar agrupada em algumas regiões do quinoma. Por
quinase receptora; TKL, quinases tipo
que você acha que é isso? tirosina quinase; CK, família da caseína
C. Gleevec®, que inibe a proteína quinase Abl (seu principal alvo no cinema), vem sendo quinase; PKA, família de proteína quinase
utilizado com grande sucesso no tratamento da leucemia mielóide crônica. Muitos pacientes, A; CAMK, quinases dependentes de cálcio/
no entanto, acabam desenvolvendo cânceres que expressam uma forma mutante de Abl calmodulina; CDK, quinases
dependentes de ciclina; MAPK, proteínas
que é resistente ao Gleevec. Uma das formas mutantes mais comuns de Abl carrega uma
quinases ativadas por mitogênio; CLK, quinases tipo CDK.
isoleucina no lugar de treonina na posição 315. Abl(T315I) é um alvo ruim para Gleevec,
mas é inibido por BIRB-796. Você acha que seria possível prever que BIRB-796 inibiria
Abl(T315I) a partir dos dados da Figura 20-17?
D. Como você pode adaptar essa triagem de alto rendimento para encontrar inibidores de
versões resistentes clinicamente importantes de proteínas quinases?
LINKS MÉDICOS
20–68 O progresso na terapia do câncer geralmente é medido em termos da fração de pacientes que
estão vivos 5 anos após o diagnóstico inicial. Por exemplo, nos Estados Unidos, em 1970,
7% dos pacientes com câncer de pulmão estavam vivos após 5 anos, enquanto em 2000,
14% sobreviviam por 5 anos. Embora essa melhora modesta possa sugerir uma melhora
correspondente na terapia do câncer de pulmão, muitos oncologistas não acreditam que a
terapia para essa forma de câncer tenha melhorado. Na ausência de uma mudança
significativa no tratamento, como pode ser que uma porcentagem maior de pacientes com
câncer de pulmão agora viva 5 anos após o diagnóstico inicial?
20–69 A poliADP-ribose polimerase (PARP) desempenha um papel fundamental no reparo de quebras

de fita simples do DNA. Na presença do inibidor de PARP, olaparib, acumulam-se quebras
de cadeia simples. Quando uma forquilha de replicação encontra uma quebra de fita
simples, ela a converte em uma quebra de fita dupla, que em células normais é então
reparada por recombinação homóloga. Em células defeituosas para recombinação
homóloga, no entanto, a inibição de PARP desencadeia a morte celular.
Os pacientes que têm apenas uma cópia funcional do gene Brca1 , que é necessário
para a recombinação homóloga, correm um risco muito maior de câncer de mama e ovário.
Os cânceres que surgem nesses tecidos nesses pacientes podem ser tratados com sucesso
com olaparibe. Explique como é que o tratamento com olaparibe mata as células
cancerígenas nesses pacientes, mas não prejudica suas células normais.
ESTILO MCAT
Passagem 1 (Questões 20–70 a 20–72)
Em casos raros, gêmeos idênticos desenvolvem leucemias quase idênticas, uma forma de câncer na
qual glóbulos brancos imaturos proliferam descontroladamente. Em cada caso, a análise de células
cancerígenas de pares de gêmeos demonstrou que eles compartilham um rearranjo cromossômico
idêntico, um rearranjo não encontrado nas células normais dos gêmeos. Na maioria dos casos, os
gêmeos desenvolveram leucemia em momentos diferentes de suas vidas.
20–70 Como um rearranjo cromossômico pode contribuir para o desenvolvimento de leucemia?
A. Criando uma mutação pontual em Ras, aumentando sua atividade GTPase.

B. Pela exclusão de éxons que codificam um domínio que inibe a atividade da quinase.
C. Pela deleção do promotor que controla a expressão de um oncogene.
D. Pela fusão de um promotor altamente ativo a um gene supressor de tumor.
20–71 Qual é a melhor explicação para a origem do rearranjo cromossômico?
A. Cada um dos pais contribuiu com uma cópia do rearranjo para o
B. gêmeos. O rearranjo surgiu de um evento somático raro que ocorreu no útero.
C. O rearranjo foi causado pela instabilidade genômica das células cancerígenas. O

D. rearranjo foi herdado de um ou outro dos pais.
20–72 O que o momento diferente do aparecimento do câncer nos gêmeos diz sobre como o câncer
se desenvolve?
A. As células cancerígenas são geneticamente instáveis.
B. O câncer é causado por mutações somáticas.
C. O câncer requer perda de supressores de tumor.
D. O câncer requer múltiplos eventos de mutação.
Passagem 2 (Questões 20–73 a 20–75)

Drogas anticancerígenas projetadas racionalmente mostram promessas e perigos. Essa dualidade é
evidente em ensaios clínicos de drogas projetadas para atingir o oncogene B-Raf . Em células
normais, o B-Raf funciona na cascata da MAP quinase. A ativação de um receptor de tirosina quinase
leva à ativação de Ras, que por sua vez ativa B-Raf promovendo sua dimerização.
Formas mutantes de B-Raf são encontradas em uma alta porcentagem de cânceres, mas são
particularmente prevalentes no melanoma. Das mutações B-Raf associadas ao câncer, 90% carregam
ácido glutâmico na posição 600, em vez de valina. Esta mutação V600E ativa constitutivamente B-Raf
de uma forma que é independente de Ras e a forma mutante não requer dimerização.
A droga vemurafenibe inibe o B-Raf ligando-se à sua fenda de ligação ao ATP.

Vemurafenib causa redução espetacular de tumores em ensaios clínicos; no entanto, na maioria dos
casos, os tumores acabam recorrendo (Figura 20-18). Paradoxalmente, vemu rafenib causa outras
formas de câncer, como carcinomas de células escamosas em cerca de
(A) antes do tratamento (B) Vemurafenibe, 15 semanas (C) Vemurafenibe, 23 semanas
Figura 20–18 Um paciente com mieloma

múltiplo tratado com vemurafenibe
(Problemas 20–73 a 20–75).
(A) Tumores evidentes antes do
tratamento com vemurafenib. (B) Ausência
quase completa de tumores após 15
semanas de tratamento. (C) Reaparecimento
de tumores em 23 semanas de tratamento.
ESTILO MCAT 433
25% dos indivíduos tratados. Além disso, vemurafenibe é eficaz apenas contra tumores que
expressam o mutante B-Raf V600E; não encolhe tumores que expressam Ras hiperativo em vez de
B-Raf hiperativo. Isso é estranho porque se poderia esperar que a inibição de B-Raf, que é
imediatamente a jusante de Ras, bloquearia a sinalização constitutiva de Ras em células
cancerígenas.
20–73 Qual dos seguintes é um mecanismo provável pelo qual as células cancerígenas B-Raf
(V600E) morrem quando expostas ao vemurafenibe?
A. Morte induzida por anticorpos
B. Divisão com danos no DNA C.
Estimulação da apoptose D. Efeito
de Warburg
20–74 Qual das opções a seguir poderia ser uma razão pela qual os tumores reaparecem após o
maioria das células tumorais foram mortas por vemurafenib?
I. Algumas células tumorais adquirem mutações adicionais que inativam Mek ou Erk, que são
componentes a jusante da cascata da MAP quinase.
II. Algumas células tumorais adquirem mutações adicionais em outros genes que pro
sobrevivência celular mote.
III. Vemurafenib mata a maioria das células tumorais, mas poupa uma pequena população
ção de células-tronco cancerígenas.
A. eu
B. I e II C. II
e III D. I, II e III
20–75 A análise dos efeitos do vemurafenibe em células normais resolveu o mistério de por que ele
causa câncer em alguns indivíduos. Qual das opções a seguir poderia explicar como o
vemurafenibe causa câncer?
A. A ligação de vemurafenib a um B-Raf ativa o parceiro B-Raf no
dimer.
B. Em células normais, a ligação de vemurafenib a B-Raf inibe o associado
Ras.
C. Vemurafenib muta uma cópia do B-Raf, convertendo-o em um tumor sup
pressor.
D. Vemurafenibe impede que B-Raf normal ative um inibidor de apop
tose.
Respostas
Uma gravura do século XIX do peixe-lua,

Mola mola.
Suspeita-se que este enorme peixe
(até 1000 kg de peso) seja o que o artista
da criatura marinha avistou entre
Antibes e Nice realmente viu. Imagem
da Wikipedia, originalmente carregada
por Citron.
437 437
Respostas para Problemas Livro Capítulo 1
CAPÍTULO
Células e Genomas 1
NESTE CAPÍTULO
AS CARACTERÍSTICAS UNIVERSAIS DAS CÉLULAS NA TERRA
AS CARACTERÍSTICAS UNIVERSAIS DE
DEFINIÇÕES
CÉLULAS NA TERRA
1–1 Membrana de plasma
A DIVERSIDADE DOS GENOMAS
1–2 Enzima E A ÁRVORE DA VIDA
1–3 Transcrição INFORMAÇÕES GENÉTICAS EM
1–4 Tradução EUCARIONTES
1–5 Gene
1–6 RNA mensageiro (mRNA)
1–7 Aminoácido
1–8 Genoma
VERDADEIRO FALSO
1–9 Verdadeiro. Mesmo em eucariotos, onde as regiões codificantes de um gene são

frequentemente interrompidas por segmentos não codificantes, a ordem dos códons no DNA
ainda é a mesma que a ordem dos aminoácidos na proteína.
1–10 Falso. As subunidades de nucleotídeos de RNA e DNA diferem de duas maneiras principais.
Primeiro, a espinha dorsal do RNA usa o açúcar ribose em vez da desoxirribose, que é
usada no DNA. Em segundo lugar, o RNA usa a base uracil no lugar da base timina, que é
usada no DNA. Três das quatro bases - A, C e G - são as mesmas no RNA e no DNA.
1–11 Tentar definir a vida em termos de propriedades é um negócio evasivo, conforme sugerido
por este exercício de pontuação (Tabela 1-2). Os carros são objetos altamente organizados,
retiram energia do ambiente e transformam a gasolina em movimento, respondendo aos
estímulos do motorista enquanto o fazem. No entanto, eles não podem se reproduzir ou
crescer e se desenvolver - mas os animais velhos também não. Os cactos não respondem
particularmente a estímulos, mas exibem outros atributos de “vida”. É curioso que as
definições padrão de vida geralmente não mencionem que os organismos vivos na Terra
são em grande parte feitos de moléculas orgânicas, que a vida é baseada em carbono. As
primeiras páginas do MBoC enfatizam esse ponto e discutem as propriedades das células
vivas principalmente em termos de suas “macromoléculas informativas” — DNA, RNA e
proteína.
Referência: Pace NR (2001) e natureza universal da bioquímica. Proc.

Natl Acad. Saber EUA 98, 805–808.
438 Capítulo 1: Células e Genomas
TABELA 1–2 Pontuações plausíveis de “vida” para carros, cactos e humanos

(Resposta 1–11).
Característica Carro Cacto Humano
1. Organização Sim Sim Sim
2. Homeostase Sim Sim Sim
3. Reprodução Não Sim Sim
4. Desenvolvimento Não Sim Sim
5. Energia Sim Sim Sim
6. Capacidade de resposta Sim Não Sim
7. Adaptação Não Sim Sim
1–12 Esses módulos são geralmente projetados para procurar moléculas orgânicas características
da vida. A primeira sonda de Marte analisou amostras de solo em busca de compostos
orgânicos, mas não encontrou nenhum. Sondas subseqüentes descobriram uma camada
superficial altamente oxidativa que teria destruído orgânicos. Sinais esperançosos de
possível vida marciana são uma antiga abundância de água e traços atuais de metano na
atmosfera. A questão da vida em Marte permanece em aberto, assim como o projeto
adequado de um módulo para detectá-la.
1–13 É extremamente improvável que você tenha criado um novo organismo neste experimento.
Muito mais provavelmente, um esporo do ar pousou em seu caldo, germinou e deu origem
às células que você observou. Em meados do século XIX, Louis Pasteur inventou um
engenhoso aparato para refutar a então amplamente aceita crença de que a vida poderia
surgir espontaneamente. Ele mostrou que as sementes seladas nunca cresciam se
fossem devidamente esterilizadas pelo calor primeiro. Ele superou as objeções daqueles
que apontavam a falta de oxigênio ou que sugeriam que sua esterilização por calor matava
o princípio de geração de vida, usando uma peça especial com um fino “pescoço de
cisne”, que foi projetado para permitir a entrada de oxigênio, mas para evitar esporos.
transportados pelo ar de contaminar a cultura (Figura 1-4). As culturas nessas áreas nunca
deram sinais de vida; no entanto, eles eram capazes de sustentar a vida, como pode ser
demonstrado lavando um pouco da “poeira” do pescoço para a cultura.
1–14 Superficialmente, a extraordinária resistência à mutação do código genético argumenta que ele
foi submetido às forças da seleção natural. Uma suposição subjacente, que parece
razoável, é que a resistência à mutação é uma característica valiosa de um código
genético, que permitiria aos organismos manter informações suficientes para especificar
fenótipos complexos. Esse raciocínio sugere que teria sido um acidente de sorte -
aproximadamente uma chance em um milhão - tropeçar em um código à prova de erros
como nosso.
Mas nem tudo é tão simples. Se a resistência à mutação é uma característica essencial frasco original
de qualquer código que possa suportar a complexidade de organismos como os humanos,

então os únicos códigos que podemos observar são aqueles que são resistentes a erros.
Um acidente congelado menos favorável, dando origem a um código mais sujeito a erros,
poderia limitar a complexidade da vida a organismos que nunca seriam capazes de
contemplar seu código genético. Isso se assemelha ao princípio antrópico da cosmologia:
muitos universos podem ser possíveis, mas poucos são compatíveis com a vida que pode
refletir sobre a natureza do universo.
Além dessas considerações, há ampla evidência de que o código não é estático e,
portanto, poderia responder às forças da seleção natural. garrafa pescoço de cisne
Versões divergentes do código genético padrão foram identificadas nos genomas
mitocondrial e nuclear de vários organismos. Em cada caso, um ou alguns códons Figura 1–4 Frascos usados nos testes de
assumiram um novo significado. Pasteur de geração espontânea (Resposta 1–13).
Figura 01-04
AS CARACTERÍSTICAS UNIVERSAIS DAS CÉLULAS NA TERRA 439
Referência: Freeland SJ & Hurst LD (1998) O código genético é um em um milhão. J. Mol.

Evolução 47, 238–248.
1–15 Existem várias abordagens que você pode tentar.

1. A análise dos aminoácidos nas proteínas indicaria se o conjunto de aminoácidos usados
em seu organismo difere do conjunto usado nos organismos terrestres. Mas mesmo os
organismos terrestres contêm mais aminoácidos do que o conjunto padrão de 20; por
exemplo, hidroxiprolina, fosfoserina e fosfotirosina resultam de modificações após a
síntese de uma proteína. A ausência de um ou mais do conjunto comum pode ser um
resultado mais significativo.
2. O sequenciamento do DNA do organismo “europeu” permitiria uma comparação direta

com o banco de dados de sequências já conhecidas de organismos terrestres.
Correspondências com o banco de dados indicam contaminação. A ausência de
fósforos constituiria um argumento menos forte para um novo organismo; é uma
observação típica que cerca de 15% a 20% dos genes identificados em sequências
genômicas completas de microrganismos não parecem ser homólogos a genes no
banco de dados.
Uma comparação de sequência suficientemente extensa deve resolver o problema.
3. Outra abordagem pode ser a análise do código genético do organismo.
Não temos motivos para esperar que um novo organismo baseado em DNA, RNA e
proteína tenha um código genético idêntico ao código genético universal da Terra.
1–16 No DNA de fita dupla, que forma os genomas em toda a vida celular, G pareia com C e A pareia
com T. É esse requisito para o pareamento de bases que exige que o número de Gs seja
igual ao número de Cs , e que os números de As e Ts serão os mesmos. Em amostras a
granel de DNA, isso se traduz em porcentagens molares equivalentes de G e C e de A e T.
O vírus X174 não obedece às “regras” porque seu genoma é DNA de fita simples.
Na ausência de um requisito para emparelhamento sistemático de bases, não há restrição
nas quantidades relativas de G e C ou de A e T.
“
1–17 Schr Ödinger respondeu à sua pergunta retórica da seguinte forma: a óbvia incapacidade
da física e da química atuais de explicar tais eventos não é motivo para duvidar que eles
possam ser explicados por essas ciências. É notável quanto progresso foi feito desde 1944,
quando a estrutura do DNA era completamente desconhecida (seu papel estava apenas
começando a entrar em foco), nenhuma proteína ainda havia sido sequenciada e o segredo
do poder catalítico das enzimas era muito conhecido. misterioso. Testes simples já haviam
mostrado que plantas e animais obedeciam às leis da termodinâmica; nem células nem
organismos podem criar energia do nada. Todos os organismos requerem uma entrada de
energia do ambiente para crescer e se reproduzir – até mesmo para se manterem vivos.
Os físicos melhoraram a cristalografia de raios-x ao ponto em que as estruturas de grandes
proteínas podem ser determinadas em semanas, e os químicos podem sequenciar genomas
bacterianos inteiros ainda mais rapidamente. Os químicos orgânicos agora entendem as
reações catalisadas por enzimas tão bem quanto qualquer outra que estudem. Os detalhes
do metabolismo de bactérias obscuras que vivem em profundidades oceânicas extremas
com uma dieta de enxofre e monóxido de carbono são bem compreendidos. Os genes
que controlam os complexos planos corporais dos insetos são mapeados e sequenciados.
No entanto, muitos mistérios permanecem, dos quais um dos mais profundos é refletido
pela verdade duradoura do famoso aforismo de Rudolph Virchow (1859), “Omnis cellula e
cellula” (Todas as células vêm de células). Ainda não se pode misturar uma mistura definida
de DNA, RNA e proteínas com alguns lipídios e esperar gerar uma célula a partir de seus
constituintes. Será que nos próximos 50 anos isso será revertido?
1–18
A. Durante a replicação, o DNA parental serve como modelo para a síntese de
novo ADN.
B. Durante a transcrição, o DNA serve como modelo para a síntese do RNA.

F. Durante a tradução, o RNA (mRNA) serve como modelo para a síntese de
proteína.
Dois outros processos, D. RNA DNA, chamado de transcrição reversa, e E. RNA RNA, chamado
de replicação de RNA, ocorrem nos ciclos de vida de vírus de RNA, como HIV e poliovírus.
CÁLCULOS
1–19
A. e número (n) de gerações de divisões celulares necessárias para produzir 1013
células é
2n = 1013
É útil lembrar que 210 ÿ 103 (2n produz a série: 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024; assim,
210 = 1024 ÿ 103). Se 103 células resultarem de dez gerações de divisão, 1012 células resultarão
de 4 × 10 = 40 gerações. Podemos estimar rapidamente que serão necessárias pouco mais de
40 gerações para chegar a 1013 células. Você pode obter uma resposta mais precisa, 43,2,
inserindo diferentes valores de n em sua calculadora. Alternativamente, você pode resolver a
equação para n, que testa sua familiaridade com logaritmos.
Lembre-se disso
2 = 10log2 e 2n = 10nlog2
Substituindo,
10nlog2 = 1013
Tomando o log de ambos os lados,
nlog2 = 13 n
= 13/log2 = 13/0,301
n = 43,2
B. Se as células se dividissem uma vez por dia e todas as células continuassem a se dividir, levaria
43,2 dias para gerar o número de células em um ser humano adulto.
C. Obviamente não nos tornamos adultos em 43 dias. A resposta simples é que todas as células não
continuam a se dividir uma vez por dia e algumas células são programadas para morrer. À
medida que as células se diferenciam, elas geralmente diminuem sua taxa de divisão, em última
análise, no adulto, dividindo-se apenas o suficiente para substituir as células perdidas ou mortas.
É claro que a resposta real é muito mais complexa, envolvendo tempo para os movimentos
celulares, para o estabelecimento de ambientes locais, para a formação de matrizes extracelulares,
para a diferenciação das células, para o desenvolvimento de padrões globais e assim por diante.
1–20 Para cálculos como esses, é útil para fins de estimativa lembrar que 45 ÿ 103 (4n produz a série: 4, 16,
64, 256, 1024; portanto, 45 = 1024 ÿ 103) e que (1 /4)5 ÿ (1/10)3. Portanto, 4 nucleotídeos
diferentes podem gerar 1.024 sequências de DNA diferentes, cada uma com 5 nucleotídeos de
comprimento.
Da mesma forma, uma sequência de DNA de 8 nucleotídeos pode fornecer diversidade suficiente
para marcar 21.000 genes codificadores de proteínas, havendo 48 ou 65.536 possíveis sequências
de 8 nucleotídeos. No entanto, seria de se esperar que a maioria dessas sequências estivesse
presente mais de uma vez nos 3,2 × 109 nucleotídeos do genoma humano. De fato, para que um
marcador de sequência seja raro o suficiente para ser esperado que esteja presente apenas uma
vez, ele teria que ter pelo menos 16 núcleos de comprimento. Espera-se que uma sequência de
16 nucleotídeos esteja presente cerca de 0,7 vezes no genoma humano haploide [(1/4)16 × (3,2
× 109) = 0,75].
Um cálculo de probabilidade deve ser usado adequadamente para avaliar a probabilidade

de uma marca ser suficientemente longa para ser única no genoma. por um
A DIVERSIDADE DOS GENOMAS E A ÁRVORE DA VIDA 441
sequência que está presente em um gene, qual é a probabilidade de que também esteja
presente em outras partes do genoma? A probabilidade de correspondência (PM) em
qualquer comparação é a chance de correspondência em cada nucleotídeo, (1/4)n. nós,
para uma comparação
PM = (1/4)n
Como a probabilidade de todos os eventos é 1, a probabilidade de não corresponder

(PN) em uma comparação é
PN = 1 - PM = 1 - (1/4)n
E a probabilidade de não corresponder em qualquer número de comparações (c) é PN
= {1 – (1/4)n} c Para
uma sequência de 16 nucleotídeos e 3,2 × 109 comparações (imagine deslizar o

segmento de 16 nucleotídeos um nucleotídeo em um tempo ao longo da sequência do
genoma humano), a probabilidade de não corresponder em outro lugar é
PN = 0,53
Ou, como PN + PM = 1,
PM = 0,47
Assim, para uma sequência de 16 nucleotídeos, há uma chance de 1 em 2 de que

ela esteja presente em outra parte do genoma humano. Como você pode calcular, uma
sequência de 19 nucleotídeos, por exemplo, reduz a probabilidade de correspondência
para 1 em 100.
Como a sequência do genoma humano é conhecida, não é necessário confiar em
tais cálculos, mesmo que eles forneçam boas estimativas médias de comprimento
versus singularidade. É importante perceber, no entanto, que é possível encontrar
sequências mais curtas que estão presentes apenas uma vez no genoma, bem como
sequências maiores que estão presentes várias vezes.
1–21 A razão superfície-volume para uma esfera é 4r2/[(4/3)r3] = 3/ r; assim, a razão é

inversamente proporcional ao raio. Consequentemente, em relação a uma célula
humana, uma bactéria tem 10 vezes mais superfície por volume de citoplasma para
permitir a passagem de nutrientes e a saída de produtos residuais. As bactérias, porém,
crescem 72 vezes mais rápido que as células humanas, sugerindo que algo além da
superfície disponível limita a taxa de crescimento.
A DIVERSIDADE DOS GENOMAS E A ÁRVORE DA VIDA
DEFINIÇÕES
1–22 Vírus
1–23 Organismo modelo
1–24 Archaea
1–25 Homólogo
1–26 Eucarionte
1–27 procariontes
VERDADEIRO FALSO
1–28 Verdadeiro. Os fototróficos fornecem a principal via pela qual o carbono no CO2 é incorporado
à biosfera; no entanto, não é o único mecanismo.
A maioria dos litotróficos também pode fixar carbono, mas as quantidades são minúsculas
em comparação com o carbono fixado pelos fototróficos.
1–29 Falso. Os agrupamentos de genes da hemoglobina humana surgiram durante a

evolução pela duplicação de um antigo gene ancestral da globina; assim, são
exemplos de genes parálogos. O gene da hemoglobina humana é ortólogo ao
gene da hemoglobina do chimpanzé, assim como os genes da hemoglobina
humana e do chimpanzé, e assim por diante. Todos os genes da globina, incluindo
o gene da mioglobina relacionado mais distantemente, são homólogos entre si.
1–30 Quer se trate de luz solar ou produtos químicos inorgânicos, “alimentar” significa “obter
energia gratuita e materiais de construção de”. No caso da fotossíntese, os fótons
da luz solar são usados para elevar os elétrons de certas moléculas a um estado
instável e de alta energia. Quando eles retornam ao seu estado fundamental
normal, a energia liberada é capturada por mecanismos que a utilizam para
conduzir a síntese de ATP. Da mesma forma, os litotróficos em uma fonte
hidrotérmica obtêm energia livre oxidando um ou mais dos componentes reduzidos
da fonte (por exemplo, H2S S + 2 H+), usando alguma molécula comum no
ambiente para aceitar os elétrons (por exemplo, 2 H+ + ½ O2 H2O). Os
litotróficos coletam a energia liberada em tais reações de oxidação-redução
(transferência de elétrons) para conduzir a síntese de ATP. Tanto para litotróficos
quanto para fototróficos, a chave do sucesso é a evolução de um mecanismo
molecular para capturar a energia disponível e acoplá-la à síntese de ATP.
Para todos os organismos, sejam eles fototróficos, organotróficos ou litotróficos,

sua capacidade de obter a energia livre necessária para sustentar a vida depende
da exploração de alguma condição de não equilíbrio. Os fototróficos dependem do
fluxo contínuo de radiação do sol; os organotróficos dependem de um suprimento
de moléculas orgânicas, fornecido em última instância pelos fototróficos, que
podem ser oxidados para obter energia; e os litotróficos dependem de um
suprimento de moléculas inorgânicas reduzidas, fornecidas, por exemplo, por
fontes hidrotermais, que podem ser oxidadas para produzir energia livre.
1–31 A hemoglobina dos vermes tubulares gigantes liga O2 e H2S e os transporta
para as bactérias simbióticas, que usam o H2S como doador de elétrons e o O2
como aceptor de elétrons para gerar ATP e energia redutora para atender às suas
necessidades energéticas. O crescimento resultante da bactéria beneficia os
vermes, fornecendo mais resíduos e cadáveres para viver. Além disso, no
processo, o H2S tóxico torna-se inofensivo pela oxidação a enxofre elementar,
impedindo-o de envenenar o
vermes.
1–32 A equação balanceada para a fotossíntese oxigênica, derivada de experimentos

usando água com oxigênio marcado isotopicamente, é
6 CO2 + 12 H2O + luz C6H12O6 + 6 H2O + 6 O2
Nesta forma de equação, e por analogia com a equação 2, é evidente que o O2

deriva de H2O, e que todo o oxigênio na glicose deriva de CO2.
1–33 Quatro (Figura 1–5). Todos poderiam ter se separado do ancestral comum ao mesmo
tempo. Bacteria-archaea poderia ter se separado de eucariotos, seguido pela
separação de bactérias de archaea. Bactérias-eucariotos podem ter se separado
de archaea, seguido pela separação de bactérias de
AB E AB E AB E QUERIDO
Figura 1–5 As quatro relações possíveis

para a evolução de archaea (A), bactéria
(B) e eucariotos (E) (Resposta 1–33).
A DIVERSIDADE DOS GENOMAS E A ÁRVORE DA VIDA 443
eucariotos. Archaea-eucariotos podem ter se separado de bactérias, seguido pela

separação de archaea de eucariotos. Embora as transferências horizontais entre essas
divisões tornem as interpretações problemáticas, acredita-se que as arqueias-eucariotos
primeiro se separaram das bactérias e, em seguida, as arqueias e os eucariotos se
separaram.
1–34 É improvável que qualquer gene tenha surgido perfeitamente otimizado para sua função.
Acredita-se que genes altamente conservados, como os genes de RNA ribossômico,
foram otimizados por mudanças evolutivas mais rápidas durante a evolução do ancestral
comum para archaea, bactérias e eucariotos. Como os RNAs ribossomais (e os
produtos da maioria dos genes altamente conservados) participam de processos
fundamentais que foram otimizados precocemente, não houve pressão evolutiva (e
pouca margem de manobra) para mudanças. Por outro lado, genes menos conservados
- evoluindo mais rapidamente - têm sido continuamente apresentados com oportunidades
para preencher novos nichos funcionais. Considere, por exemplo, a evolução de genes
de globina distintos, cujos produtos são otimizados para entrega de oxigênio a embriões,
fetos e tecidos adultos em mamíferos placentários.
1–35 Seria impossível identificar genes codificadores de proteínas em uma vasta extensão de Ts,
As, Cs e Gs se eles não tivessem algumas características de identificação.
Na ausência de qualquer conhecimento da estrutura do gene em procariotos, você pode
imaginar que os locais onde a transcrição do gene começa e termina podem ser
especiais e, portanto, reconhecíveis. Da mesma forma, você pode imaginar que as
sequências em que a síntese de proteínas começa e termina podem ser distintas e,
portanto, reconhecíveis. Na realidade, são os sinais para a síntese de proteínas que se
mostraram mais valiosos para a identificação de genes procarióticos.
Os genes que codificam proteínas começam com ATG (correspondente ao códon
de início AUG no mRNA) e terminam com TAA, TAG ou TGA (correspondendo aos três
códons de parada UAA, UAG e UGA no mRNA).
Procura-se um ATG e, em seguida, prossegue três nucleotídeos de cada vez (códon
por códon) até que um códon de parada seja alcançado. Este procedimento define um
quadro de leitura aberto, ou ORF. Quase todos os ORFs maiores que 100 códons
correspondem a genes. Algumas ORFs menores também codificam proteínas e são,
portanto, genes; no entanto, muitas ORFs pequenas ocorrem por acaso e não
correspondem a genes. Em alguns casos, genes reais podem ser identificados entre as
ORFs menores em virtude de outras sequências de sinal típicas que caracterizam
genes em procariotos. No entanto, em contagens de genes derivados de sequências
genômicas, um cuto arbitrário é usado para que as menores ORFs não sejam incluídas
na contagem.
A identificação do gene nas sequências do genoma eucariótico é muito mais
problemática. As regiões codificadoras de proteínas de genes eucarióticos são
frequentemente divididas em segmentos que não estão finalmente unidos até que a
transcrição inicial do RNA seja processada para remover o RNA não-codificante. Assim,
o procedimento usado para contar genes em procariotos não é útil para eucariotos.
Algoritmos de computador para identificar genes eucarióticos ainda não são totalmente confiáveis.
1–36
B. Não se acredita que a formação de genes de novo a partir da vasta quantidade de DNA
não-codificante não utilizado, típico de genomas eucarióticos, seja um processo
significativo na evolução. A mutação para gerar uma sequência de codificação completa
com elementos reguladores é um processo muito lento para explicar as taxas observadas
de mudança evolutiva.
1–37
A. Como parece que os genes envolvidos em processos informacionais estão menos
sujeitos à transferência horizontal, as árvores evolutivas derivadas de tais genes devem
fornecer uma estimativa mais confiável das relações evolutivas. Assim, archaea
provavelmente se separou de eucariotos depois que a linhagem archaea-eucarionte
se separou de bactérias.
B. A complexidade é uma explicação lógica para a diferença nas taxas de transferência

horizontal de genes (e pode até estar certa, embora existam outras possibilidades).
A transferência bem-sucedida de um gene “informativo” exigiria que o novo produto
gênico se encaixasse em um complexo funcional preexistente, talvez suplantando a
proteína relacionada original. Para uma nova proteína se encaixar em um complexo
com outras proteínas, ela precisaria ter superfícies de ligação que lhe permitissem
interagir com as proteínas certas na geometria apropriada. Se uma nova proteína
tivesse uma boa superfície de ligação, mas não outras, ela provavelmente
interromperia o complexo e colocaria o receptor em desvantagem seletiva. Por outro
lado, um produto gênico que realiza uma reação metabólica por conta própria seria
capaz de funcionar em qualquer organismo. Contanto que a reação metabólica
conferisse alguma vantagem ao receptor (ou pelo menos nenhuma desvantagem),
a transferência de genes poderia ser acomodada.
Referência: Jain R, Rivera MC & Lake JA (1999) Transferência horizontal de genes

entre genomas: hipótese da complexidade. Proc. Natl Acad. ciência EUA 96, 3801–
3806.
1–38 Em organismos unicelulares, o genoma é a linhagem germinativa e qualquer modificação

é passada para a próxima geração. Em contraste, em organismos multicelulares,
a maioria das células são células somáticas e não contribuem para a próxima
geração; assim, a modificação dessas células por transferência horizontal de genes
não teria consequências para a próxima geração. As células da linhagem germinativa
são geralmente sequestradas no interior de organismos multicelulares, minimizando
seu contato com células estranhas, vírus e DNA, isolando assim as espécies dos
efeitos da transferência horizontal de genes.
1–39 Não é uma questão simples determinar a função de um gene a partir do zero, nem existe
uma receita universal de como fazê-lo. No entanto, há uma variedade de perguntas
padrão que ajudam a reduzir as possibilidades.
Abaixo listamos algumas dessas questões.
Em quais tecidos o gene é expresso? Se o gene for expresso em todos os
tecidos, é provável que tenha uma função geral. Se for expresso em um ou poucos
tecidos, é provável que sua função seja mais especializada, talvez relacionada às
funções especializadas dos tecidos. Se o gene for expresso no embrião, mas não
no adulto, ele pode funcionar no desenvolvimento.
Em que compartimento da célula o gene é expresso? Conhecer a localização
subcelular da proteína — núcleo, membrana plasmática, mitocôndrias, etc. —
também pode ajudar a sugerir categorias de função potencial. Por exemplo, uma
proteína localizada na membrana plasmática provavelmente é um transportador, um
receptor ou outro componente de uma via de sinalização, uma molécula de adesão
celular, etc.
Quais são os efeitos das mutações no gene? Mutações que eliminam ou
modificam a função do produto gênico também podem fornecer pistas para a função.
Por exemplo, se o produto do gene for crítico em um determinado momento durante
o desenvolvimento, o embrião geralmente morrerá nesse estágio ou desenvolverá
anormalidades óbvias. A menos que a anormalidade seja muito específica,
geralmente é difícil deduzir a função ou categoria de função. E muitas vezes as
ligações são muito indiretas, tornando-se aparentes somente depois que a função
do gene é conhecida.
Com que outras proteínas a proteína codificada interage? Ao realizar sua
função, as proteínas geralmente interagem com outras proteínas envolvidas nos
mesmos processos ou processos intimamente relacionados. Se uma proteína
interagente puder ser identificada e se sua função já for conhecida (através de
pesquisas anteriores ou busca em bancos de dados), a gama de funções possíveis
pode ser drasticamente reduzida.
Mutações em que outros genes podem suprimir os efeitos da mutação no gene
desconhecido? Procurar genes supressores pode ser uma abordagem muito
poderosa para investigar a função gênica em organismos como bactérias e leveduras,
que possuem sistemas genéticos bem desenvolvidos, mas essa abordagem não é
prontamente aplicável a camundongos ou à maioria dos eucariotos superiores no momento.
INFORMAÇÕES GENÉTICAS EM EUCARIOTAS 445
A justificativa para essa abordagem é análoga àquela de procurar proteínas que interagem:
os genes que interagem geneticamente geralmente estão envolvidos no mesmo processo ou em
um processo intimamente relacionado. A identificação de tal gene interativo (e o conhecimento
de sua função) forneceria uma pista importante para a função do gene desconhecido.
Abordar cada uma dessas questões requer experiência experimental especializada e um

compromisso de tempo substancial do investigador. Não é de admirar que o progresso seja feito
muito mais rapidamente quando uma pista para a função de um gene pode ser encontrada
simplesmente identificando um gene semelhante de função conhecida no banco de dados.
CÁLCULOS
1–40 Leva apenas 20 horas – menos de um dia – para que as células mutantes se tornem mais abundantes
na cultura. A partir da equação fornecida na questão, o número de células bacterianas originais
(“tipo selvagem”) no tempo t minutos após a ocorrência da mutação é 106 × 2t/20. O número de
células mutantes no tempo t é 1 × 2t/15. No momento em que as células mutantes “ultrapassam”
as células do tipo selvagem, esses dois números são iguais. 106 × 2t/20 = 2t/15
Convertendo para a base 10 (consulte a Resposta 1–
19), 106 × 10(t/20) log2 = 10(t/15) log2
Tomando o log de ambos os lados e substituindo por log2 (0,301),
6 + (t/20)(0,301) = (t/15)(0,301)
Resolvendo para t,
6 + 0,015t = 0,020t
0,005t = 6
t = 1200 minutos, ou 20 horas
Observe que também é possível resolver esse problema rapidamente, usando a relação útil 210
ÿ 103, percebendo que após 1 hora as células mutantes dobraram mais uma vez do que as
células do tipo selvagem. Assim, as células mutantes dobram em relação às células do tipo
selvagem uma vez por hora. Após 10 horas (210), as células mutantes teriam ganho um fator de
mil (103), e após 20 horas (220), um fator de um milhão (106), momento em que seriam iguais
em número ao selvagem -tipo de células.
Aliás, quando as duas populações de células são iguais, a cultura contém 2 × 1024 células
[(106 × 260) + (1 × 280) = (106 × 1018) + 1024 = 2 × 1024], que em 10–12 g por célula, pesaria
2 × 1012 g, ou dois milhões de toneladas! Isso só pode ter sido um experimento mental.
INFORMAÇÕES GENÉTICAS EM EUCARIOTAS
VERDADEIRO FALSO
1–41 Falso. As células vegetais contêm mitocôndrias e cloroplastos.
1–42 Verdadeiro. Os genomas bacterianos parecem ser reduzidos ao essencial: a maioria das sequências
de DNA codifica proteínas, algumas codificam RNAs funcionais, uma pequena quantidade de
DNA é dedicada à regulação da expressão gênica e há muito poucas sequências estranhas e
não funcionais. Em contraste, acredita-se que apenas cerca de 1,5% das sequências de DNA no
genoma humano codificam proteínas. Mesmo permitindo grandes quantidades de DNA regulador,
grande parte do genoma humano é composto de DNA sem função aparente.
1–43 Falso. Além das transferências do genoma mitocondrial, existem muitos exemplos
de transferências de genomas virais; por exemplo, cerca de 1% do genoma do
camundongo surgiu de cópias de uma sequência que se originou como o
genoma do vírus do tumor mamário do camundongo. O que é raro é a
transferência de genes de outras espécies.
1–44 Como a maioria das questões sobre relações evolucionárias, esta foi decidida
comparando sequências de genes como as do RNA ribossômico. Essas
comparações mostraram que os fungos são mais semelhantes em sequência gênica
aos animais do que às plantas, e provavelmente se separaram da linhagem animal-
planta depois que as plantas se separaram dos animais. Assim, pensa-se que os
fungos nunca tiveram cloroplastos, e pensa-se que os fungos e as plantas
inventaram as paredes celulares independentemente, como é sugerido pelo uso de
celulose nas paredes celulares das plantas e quitina nas paredes celulares dos fungos.
1–45 As comparações da sequência de nucleotídeos com outras espécies permitiriam

que você decidisse se Giardia representava uma linhagem antiga ou mais
recente. Essas comparações de sequência foram feitas; eles mostram que a
Giardia representa uma linhagem antiga (ou uma linhagem que evoluiu muito
rapidamente) que é quase tão intimamente relacionada às bactérias quanto a
outros eucariotos. Se Giardia fosse um eucarioto simplificado, as comparações
de sequências teriam revelado um parentesco mais próximo com as espécies
eucarióticas das quais ele divergiu. Tipos padrão de comparações de
sequência, de genes de RNA ribossômico, por exemplo, não podem decidir a
questão mais fundamental - e mais interessante - se a linhagem de Giardia
remonta a um tempo anterior às mitocôndrias e membranas internas se
tornarem estruturas permanentes na organização celular eucariótica.
Comparações de sequências adicionais podem ser usadas para abordar
essa questão fundamental. A hipótese de que Giardia perdeu suas mitocôndrias
como uma adaptação ao seu atual estilo de vida anaeróbico no trato intestinal
implica que seus ancestrais viveram em ambientes aeróbicos e dependiam
das mitocôndrias para obter energia. Se assim fosse, então os genes
mitocondriais poderiam ter sido transferidos para o genoma nuclear, e a
sequência do genoma da Giardia poderia revelar genes originários das mitocôndrias.
O sequenciamento direcionado a genes que são prováveis marcadores
mitocondriais sugere que a Giardia de fato possuía mitocôndrias ou algum
endossimbionte relacionado.
Referência: Roger AJ, Svärd SG, Tovar J, Clark CG, Smith MW , Gillin FD &
Sogin ML (1998) . Proc. Natl Acad. ciência EUA 95, 229–234.
1–46 Três hipóteses gerais foram propostas para explicar as diferenças na taxa
de mudança evolutiva em diferentes linhagens. As hipóteses individuais
discutidas abaixo não são mutuamente exclusivas e podem todas contribuir
até certo ponto. A
hipótese do tempo de geração propõe que as diferenças de taxa são
consequência de diferentes tempos de geração. Espécies como ratos com
tempos de geração curtos passarão por mais gerações e mais rodadas de
divisão de células germinativas e, portanto, mais rodadas de replicação de
DNA. Essa hipótese assume que os erros durante a replicação do DNA são a
principal fonte de mutações. Testes dessa hipótese em ratos versus humanos
tendem a apoiar sua
validade. A hipótese da taxa metabólica postula uma taxa mais alta de
evolução para espécies com uma taxa metabólica mais alta. Espécies com
altas taxas metabólicas usam mais oxigênio; portanto, eles geram mais radicais livres de oxigênio,
INFORMAÇÕES GENÉTICAS EM EUCARIOTAS 447
uma importante fonte de dano ao DNA. Isso é especialmente relevante para

genomas mitocondriais, porque as mitocôndrias são o principal local celular para
utilização de oxigênio e produção de radicais livres. A
hipótese da eficiência do reparo propõe que a eficiência do reparo de danos
ao DNA difere em diferentes linhagens. Espécies com reparo altamente eficiente de
danos ao DNA teriam uma fração reduzida de eventos de danos que levam à
mutação. Existem evidências em culturas de células humanas e de ratos de que tais
diferenças no reparo existem, na direção esperada, mas não está claro se tais
diferenças existem nas linhagens germinativas desses organismos.
Referência: Li WH (1997) Molecular Evolution, pp. 228–230. Sunderland, MA:

Sinauer Associates, Inc.
TRATAMENTO DE DADOS
1–47
A. A hipótese mais simples é que a transferência de genes ocorreu no ponto
indicado na Figura 1-6. Os gêneros em muitas das linhagens além desse ponto têm
um gene nuclear Cox2 , enquanto as linhagens que se ramificaram antes desse ponto
não.
B. Cinco gêneros (Lespedeza, Dumasia, Pseudeminia, Neonotonia e Amphi carpa)
aparentemente têm cópias funcionais dos genes mitocondrial e nuclear, conforme
indicado pelas caixas amarelas na Figura 1-6.
C. Dez gêneros (Eriosema, Atylosia, Erythrina, Ramirezella, Vigna, Phaseo lus,
Ortholobium, Psoralea, Cullen e Glycine) não possuem mais um gene mitocondrial
funcional. O número mínimo de eventos de inativação que poderiam explicar os
dados observados é quatro, conforme mostrado pelos quadrados verdes na árvore
da Figura 1–6.
D. Seis gêneros não possuem mais um gene nuclear funcional. O número mínimo de
eventos de inativação que podem ser responsáveis por isso é cinco, conforme
mostrado pelos círculos vermelhos na árvore da Figura 1–6.
GENE ARN
mt nuc mt nuc
pisum + +
clitoria + +
Tephrosia + +
Galáxia + +
Canavalia + +
Lespedeza +++ +
Eriosema + +
atilosia + +
Eritrina + +
Ramirezella + +
transferência e + +
Vigna
ativação de genes Phaseolus + +
Amanhã +++ +
Calopogônio + + +
Pachyrizus + + +
colônia + +
puerária + Figura 1–6 Resumo da distribuição do
Pseudeminia + +++ + gene Cox2 e dados de transcrição em
pseudovigna +++ um contexto filogenético, mostrando
Ortholobium + + o ponto mais provável de transferência
Psoralea + + do gene e o número mínimo de pontos
Cullen + + para inativação do gene mitocondrial
glicina ++ + (quadrados verdes) e nuclear (círculos
Neonotônia + +++ vermelhos) (Resposta 1–47 ). As caixas
Teramno + + amarelas indicam gêneros com cópias
Anficarpa + +++ aparentemente funcionais dos genes mitocondrial e nuclea
E. Esses dados argumentam fortemente que a transferência de genes da

mitocôndria para o núcleo não é um processo de uma etapa; ou seja, perda
simultânea do gene da mitocôndria e seu aparecimento no núcleo. Esse é um
cenário improvável a priori , uma vez que as versões nucleares dos genes
mitocondriais devem adquirir uma sequência de direcionamento especial que
permite que as proteínas codificadas sejam entregues às mitocôndrias (consulte
MBoC Capítulo 12). Os dados da Figura 1-6 argumentam que o processo de
transferência começa com o aparecimento do gene no núcleo (presumivelmente
seguido em algum ponto por sua ativação por meio da aquisição de uma
sequência de direcionamento). Essa primeira etapa não é acompanhada pela
perda do gene da mitocôndria. Uma vez que o gene nuclear é ativado, parece
haver um estágio intermediário no qual ambos os genes funcionam. Posteriormente,
um ou outro gene é inativado. Se o gene nuclear for inativado, o processo de
transferência é efetivamente abortado. Se o gene mitocondrial estiver inativado
(geralmente inicialmente por mutações pontuais), a transferência pode prosseguir.
O estágio final da transferência é a deleção do gene mitocondrial defeituoso, um
processo favorecido pela economia da replicação do genoma.
Referência: Adams KL, Song K, Roessler PG, Nugent JM, Doyle JL, Doyle JJ &
Palmer JD (1999) Transferência intracelular de genes em ação: transcrição dupla
e silenciamentos múltiplos de genes cox2 nucleares e mitocondriais em
leguminosas . Proc. Natl Acad. ciência EUA 96, 13863–13868.
1–48 Se o intermediário na transferência fosse o DNA, você esperaria que a cópia nuclear
do gene tivesse Cs nos locais de edição do RNA. Se o intermediário fosse o RNA,
você esperaria Ts nos locais de edição do RNA.
Quando as sequências de genes nucleares Cox2 foram examinadas, descobriu-
se que elas se assemelhavam mais ao transcrito de RNA editado. Esta observação
sugere que o RNA foi um intermediário no processo de transferência. Em algum
momento, o RNA foi presumivelmente copiado de volta ao DNA por transcrição
reversa. Não está claro se essa é uma característica geral da transferência, mas é
compatível com a transferência em vários estágios descrita no problema anterior.
Referência: Nugent JM & Palmer JD (1991) Transferência mediada por RNA do

gene coxII da mitocôndria para o núcleo durante a evolução da planta florescente.
Cela 66, 473–481.
1–49
A. Como as alterações sinônimas não alteram a sequência de aminoácidos da proteína,
elas não estão sujeitas a pressões de seleção, que operam no nível da função da
proteína (e como ela afeta a aptidão geral do organismo ). Em contraste,
alterações não sinônimas, que substituem o original por um novo aminoácido,
têm o potencial de alterar a função da proteína codificada (e alterar a consistência
do organismo). Como a maioria das substituições de aminoácidos é deletéria para
a função da proteína, elas são selecionadas contra. O gene da histona H3 deve
estar tão bem ajustado para sua função que virtualmente
B. todas as substituições de aminoácidos são deletérias e, portanto, são
selecionadas contra. A extrema conservação da histona H3 argumenta que sua
função é fortemente restrita, provavelmente por causa de extensas interações com
outras proteínas e com seu substrato imutável, o DNA.
C. Histona H3 claramente não está em um local “privilegiado” no genoma porque sofre

alterações de nucleotídeos sinônimos aproximadamente na mesma taxa que
outros genes.
Referência: Li WH (1997) Molecular Evolution. Sunderland, MA: Sinauer

Associates, Inc.
1–50
A. Os dados da árvore filogenética (ver Figura 1-3) refutam a hipótese de que os genes
da hemoglobina vegetal surgiram por transferência horizontal. Olhando para
INFORMAÇÕES GENÉTICAS EM EU KAR YOTES 449
Nas partes mais familiares da árvore, vemos que os vertebrados (de peixes a
humanos) agrupam-se como um conjunto de espécies estreitamente relacionadas.
Além disso, as relações na árvore não enraizada mostrada na Figura 1-3 são
compatíveis com a ordem de ramificação que conhecemos a partir das relações
evolutivas entre essas espécies: os peixes se dividiram antes dos anfíbios, os
répteis antes das aves e os mamíferos, por último, em uma união estreita. grupo.
As plantas também formam um grupo distinto que exibe relações evolutivas
aceitas, com a cevada, uma monocotiledônea, divergindo antes do feijão, alfafa e
lótus, que são todos dicotiledôneas (e leguminosas). As sequências das
hemoglobinas das plantas parecem ter divergido há muito tempo na evolução, na
época ou antes do surgimento dos moluscos, insetos e nematóides. As relações
na árvore indicam que os genes da hemoglobina surgiram por descendência de algum ancestral comum.
B. Se os genes da hemoglobina da planta tivessem surgido por transferência
horizontal de um nematoide parasita, então as sequências da planta teriam se
agrupado com as sequências do nematoide na árvore filogenética da Figura 1-3.
ESTILO MCAT
1–51
A. Todos os organismos têm genes que codificam o RNA ribossômico. Além disso,
as sequências de genes de RNA ribossômico sofreram evolução divergente entre
e dentro de cada uma das três principais divisões da vida. Assim, determinando a
sequência de genes de RNA ribossômico, pode-se determinar de forma rápida e
abrangente quantos organismos diferentes estão na amostra e se eles estão mais
intimamente relacionados a bactérias, archaea ou eucariotos. A alternativa B não
está correta porque não distinguiria as muitas bactérias que são suscetíveis ao
mesmo antibiótico. A alternativa C está incorreta porque há uma diversidade
extraordinária na bioquímica e nas necessidades nutricionais. Assim, espécies
intimamente relacionadas não podem ser distinguidas, e bactérias e archaea
podem parecer semelhantes. Finalmente, muitos microorganismos não podem
ser cultivados. A opção D não está correta porque bactérias e archaea podem
parecer idênticas quando vistas por microscopia.
1–52
B. A transferência horizontal de genes entre bactérias é comum. Em muitos casos,
genes que codificam toxinas ou resistência a antibióticos são encontrados em
plasmídeos circulares facilmente transferidos. Assim, o composto de interesse
pode ser uma toxina que permite que a bactéria e/ou esponja sobreviva em seu
ambiente. A escolha A é improvável porque a transferência horizontal de genes
entre eucariotos e bactérias ou archaea é extremamente rara. A escolha C é
improvável porque todos os genes em organismos divergentes estão sujeitos às
mudanças introduzidas pela evolução. Espera-se que mesmo os genes que são
altamente restritos em sua função - portanto fortemente selecionados - incorporem
mudanças nas terceiras posições dos códons, que geralmente não alteram o
aminoácido codificado. A alternativa D não está correta porque a evolução
convergente produziria genes semelhantes, mas não genes quase idênticos.
1–53
R. Comparar novos genes com genes conhecidos geralmente é a maneira mais
rápida de obter informações sobre suas funções. Se o gene bacteriano é
homólogo a uma família de genes com função bioquímica conhecida, é provável
que a proteína codificada pelo novo gene exerça função idêntica ou similar. As
opções B e D seriam trabalhosas e, sem pistas para começar, os experimentos
envolveriam muita adivinhação. A opção C não forneceria nenhuma pista sobre a
atividade bioquímica específica da proteína codificada pelo gene.
451 451
Respostas para Problemas Livro Capítulo 2
CAPÍTULO
Química Celular e
Bioenergética 2
OS COMPONENTES QUÍMICOS DE UMA CÉLULA NESTE CAPÍTULO
OS COMPONENTES QUÍMICOS
DEFINIÇÕES
DE UMA CÉLULA
2–1 Força hidrofóbica

CATÁLISE E USO DE
2–2 Ligação de hidrogênio ENERGIA POR CÉLULAS
2–3 Ácido
COMO AS CÉLULAS OBTEM ENERGIA
2–4 Van der Waals atração DE COMIDA
VERDADEIRO FALSO
2–5 Falso. O pH da solução será quase neutro, essencialmente pH 7, porque os poucos íons H+
fornecidos pelo HCl serão superados em número pelos íons H+ da dissociação da água. Não
importa o quanto um ácido forte seja diluído, ele nunca pode dar origem a uma solução
básica. De fato, cálculos que levam em consideração ambas as fontes de íons H+ e também
os efeitos na dissociação da água fornecem um pH de 6,98 para uma solução de HCl 10–8
M.
2–6 Falso. Ácidos fortes se ligam fracamente aos prótons e os abandonam prontamente em um
ambiente aquático.
2–7 Falso. Muitas das funções que as macromoléculas desempenham dependem de sua
capacidade de associar e dissociar prontamente, o que não seria possível se estivessem
ligadas por ligações covalentes. Ao ligar suas macromoléculas de forma não covalente, as
células podem, por exemplo, remodelar rapidamente seu interior quando se movem ou se
dividem e transportam facilmente componentes de uma organela para outra. Deve-se notar
que algumas macromoléculas estão ligadas por ligações covalentes. Isso ocorre
principalmente em situações em que é necessária estabilidade estrutural extrema, como nas
paredes celulares de muitas bactérias, fungos e plantas, e na matriz extracelular que fornece
o suporte estrutural para a maioria das células animais.
2–8 Os pesos atômicos dos elementos representam a média do elemento isolado da natureza.
Elementos na natureza incluem uma mistura de isótopos.
Para a maioria dos elementos, um isótopo representa a grande maioria; esses elementos
têm pesos atômicos que são quase inteiros. O cloro, no entanto, tem dois isótopos
abundantes (75% 35Cl e 25% 37Cl), cuja média é de peso atômico de 35,5.
2–9 Não. É uma coincidência que a proporção de C, H e O nos organismos vivos seja a mesma
dos açúcares. Grande parte do H e O (70%) é devido à água, e o restante é uma mistura de
açúcares, aminoácidos, nucleotídeos e
452 Capítulo 2: Química Celular e Bioenergética
lipídios - toda a variedade de moléculas pequenas e grandes que compõem os

organismos vivos.
2–10 B (menos de 4 kJ/mol), E (4–12 kJ/mol), A (50 kJ/mol), C (350 kJ/

mol) e D (2800 kJ/mol).
2–11 Devido ao seu tamanho maior, os elétrons mais externos em um átomo de enxofre
não são tão fortemente atraídos para o núcleo quanto em um átomo de oxigênio.
Conseqüentemente, a ligação hidrogênio-enxofre é muito menos polar do que a
ligação hidrogênio-oxigênio. Devido à polaridade reduzida, o enxofre no H2S não é
fortemente atraído pelos átomos de hidrogênio nas moléculas de H2S adjacentes , e
as pontes de hidrogênio não se formam. É a falta de ligações de hidrogênio no H2S
que permite que ele seja um gás, e a presença de fortes ligações de hidrogênio na
água que o torna um líquido.
2–12 Embora o símbolo “p” no uso comum denota o “ritmo logarítmico negativo de”, o que ele
representa não está claro. No artigo original de 1909 em que o conceito de pH foi
desenvolvido, o autor, o químico dinamarquês Soren PL
Sorensen - não foi explícito. Nos livros didáticos em que é comentado, é mais
comumente considerado como as palavras francesas ou alemãs para poder ou
potencial. Um exame minucioso do artigo original revela que o “p” no pH é
provavelmente uma consequência da escolha arbitrária do autor de chamar duas
soluções pelas letras “p” e “q”. solução eq tinha a concentração de H+ conhecida de
1, a solução p tinha a concentração de H+ desconhecida .
Se as soluções tivessem sido trocadas, você acha que qH teria pegado?
Referência: NØrby JG (2000) e origem e significado do p minúsculo no pH.

Tendências Bioquímica. ciência 25, 36–37.
2–13 Uma solução de cloreto de sódio será neutra. Nem o íon sódio nem
o íon cloreto se liga a H+ ou OH– e, portanto, nenhum dos dois influencia a dissociação da
água.
Uma solução de acetato de potássio (o sal de um ácido fraco) será básica porque
o íon acetato roubará um número suficiente de prótons da água para satisfazer o
equilíbrio
CH3COO– + H2O CH3COOH + OH–
O aumento dos íons hidroxila fará com que o número de prótons diminua,
satisfazendo o equilíbrio de ionização da água ([OH–][H+] = 10–14) e tornando a
solução básica.
Uma solução de cloreto de amônio (o sal de uma base fraca) será ácida porque 12
o íon amônio se dissociará suficientemente para satisfazer o equilíbrio 11h30 NH2CH2COO– ( 5)
10
9,60
+
NH4 + H2ONH3 + H3O + (4)
+ NH3CH2COO– _
O aumento dos íons hidrônio diminui o pH e torna a solução mais ácida. 8 & NH2 CH2 COO–
5,97
pH 6
2–14 (3) +NH3 CH2 COO–
A. A expressão de dissociação para um grupo carboxilato é –COOH H+ +

–COO–. A expressão de dissociação para um grupo amina é –NH3 + –NH2.
+ H+ 4
O grupo 2.34
B. carboxila ácido cede seu próton muito mais prontamente do que o grupo amina 2 ( 2) + NH3CH2COOH
protonado (é por isso que o grupo amina é básico - ele tende a captar um próton da & +NH3 CH2 COO–
água). Assim, conforme mostrado na Figura 2–23, o pKa para o grupo carboxila 0
( 1) + NH3CH2COOH
0 0,5 1,0 1,5 2.0
corresponde ao ponto em que 0,5 equivalentes de OH– foram adicionados, que é pH
NaOH adicionado (equivalentes)
2,3. O pKa para o grupo amina cor responde ao ponto em que 1,5 equivalentes de
OH– foram adicionados, que é pH 9,6. Figura 2–23 Titulação de uma solução
de glicina (Resposta 2–14).
OS COMPONENTES QUÍMICOS DE UMA CÉLULA 453
C. As espécies iônicas predominantes de glicina são mostradas na Figura 2–23.

No ponto (2), o pKa para o grupo carboxila, duas espécies +H3NCH2COOH e
+H3NCH2COO– estão presentes em concentrações iguais. Da mesma forma, no
ponto (4), o pKa para o grupo amina, duas espécies estão presentes em
concentrações iguais.
D. O ponto isoelétrico ocorre quando 1,0 equivalente de OH– foi adicionado (Figura
2–23). Nesse ponto – ponto (3) na curva – a espécie iônica predominante é
+H3NCH2COO–, que não possui carga líquida. O ponto isoelétrico da glicina
ocorre em pH 5,97, exatamente a meio caminho entre os valores de pKa do grupo
carboxila (2,34) e do grupo amina (9,60). Nesse pH, todas as outras espécies
iônicas menores de glicina estão presentes em quantidades exatamente
balanceadas, de modo que não haja carga líquida no soluto.
2–15 As estruturas dessas três formas de glicina são mostradas na Figura 2-24.
COO– COOH COO– Na+

Figura 2–24 Três formas de glicina
(Resposta 2–15).
+ H3NCH Cl- +H3N CH H2N CH
H H H
glicina livre cloridrato de glicina sal de sódio de glicina
2–16 A titulação da histidina é mostrada na Figura 2–4A e a do glutamato é mostrada

na Figura 2–4B. A exigência de três equivalentes de OH– em ambos os casos
indica que três grupos ionizáveis estão envolvidos.
p2.40/2.23 Calcular Problemas de estimativa
os valores de pKa dos pontos nas curvas em que 0,5, 1,5 e 2,5 equivalentes de
OH– foram adicionados permite que uma correspondência seja feita com os
aminoácidos listados na Tabela 2–1. O
anidrido de
–O P O–
2–17 Você deve aconselhar o corredor a respirar rapidamente antes da corrida. ácido fosfórico
O carboxílico
Uma vez que um sprint causará uma redução no sangue e no pH celular, o
objetivo da rotina pré-corrida seria aumentar o pH com a ideia de que o corredor C O
poderia correr mais tempo antes de sentir fadiga. Prender a respiração ou respirar hidroxila PARA CH
rapidamente afeta temporariamente a quantidade de CO2 dissolvido na corrente
CH2
sanguínea. Prender a respiração aumentará a quantidade de CO2 e empurrará o
O
equilíbrio para a direita, levando a um aumento na [H+] e a um pH mais baixo.
Por outro lado, respirar rapidamente reduz a concentração de CO2 e puxa o –O SOBRE fosforil
equilíbrio para a esquerda, levando a uma diminuição da [H+] e a um pH mais O–

alto.
1,3-bifosfoglicerato
2–18 A maioria da aspirina é absorvida pela corrente sanguínea através do
revestimento do estômago. No baixo pH do estômago, que está abaixo do pKa da
aspirina, a maior parte da aspirina será descarregada e, portanto, difundirá através
O O– carboxilato
das membranas plasmáticas das células que revestem o estômago.
C
2–19 A afirmação está correta. A ligação hidrogênio-oxigênio nas moléculas de água C O carbonil
é polar; assim, o átomo de oxigênio carrega uma carga negativa parcial e os
CH3
átomos de hidrogênio carregam cargas positivas parciais. As cargas parciais
piruvato
negativas dos átomos de oxigênio são atraídas pelas cargas positivas dos íons
sódio, mas são repelidas pelas cargas negativas dos íons cloreto.
SH sulfidrila
2–20 Embora individualmente fracas, várias dessas interações não covalentes podem, em CH2
O
conjunto, fornecer estabilidade suficiente para manter um par de moléculas juntas.
CH C carboxilato
A situação é análoga a objetos mantidos juntos com Vel croTM: um pedaço O–
amino
pequeno os mantém juntos fracamente, enquanto um pedaço grande os mantém NH3 +
juntos firmemente. Essas fixações são fáceis de separar porque os elos podem
cisteína
ser quebrados alguns de cada vez, em vez de todos de uma vez.
Figura 2–25 Os grupos funcionais em
2–21 Os grupos funcionais nas três moléculas são indicados e nomeados na Figura 1,3-bifosfoglicerato, piruvato e cisteína
2-25. (Resposta 2–21).
Problemas p2.41/2.25/A2.1
2–22 Uma grande vantagem das reações de condensação é que elas são prontamente
reversível por hidrólise (e a água está prontamente disponível na célula). permite que as
células decomponham suas macromoléculas (ou macromoléculas de outros organismos ingeridos
como alimento) e recuperem as subunidades intactas para que possam ser “recicladas” para construir
novas macromoléculas.
CÁLCULOS
2–23
A. Embora não saibamos o peso molecular da celulose (porque as moléculas contêm números variáveis
de subunidades C6H12O6 ), sabemos que é 40% de carbono {(6 × 12)/[(6 × 12) + (12 × 1) + (6 ×
16)]}. 2 g de átomos de carbono, que correspondem a 1023 átomos de carbono, estão contidos na
celulose que compõe uma página. 6 × 1023 d C átomo 12 d
átomos de C = 2 g × ×
g
= 1023 átomos de C
B. O produto do número de átomos de carbono em cada dimensão é igual a 1023 (X × Y × Z = 1023).

O número de átomos de carbono em cada dimensão estará na mesma proporção que os
comprimentos. Ou seja, se Z é o número de átomos de carbono na espessura da página e X é o
número na largura, a razão de X/Z é [(21 × 10–2 m)/(0,07 × 10–3 m) ], e X = [(21 × 10–2)/(0,07 × 10–
3)] Z. Da mesma forma, a razão de Y/Z é [(27,5 × 10–2 m)/(0,07 × 10–3 m )], e Y = [(27,5 × 10–2)/
(0,07 × 10–3)] Z. Substituindo por X e Y,
de 21 × 10–2 27,5 × 10–2 Z

× × Z = 1023
0,07 × 10–3 0,07 × 10–3
1023 × (0,07 × 10–3)2 (21
de 3 =
× 10–2) × (27,5 × 10–2)
Z3 = 8,48 × 1015
Z = 2,04 × 105
O atalho sugerido torna o cálculo um pouco mais direto. O volume da página é 4 × 10–6 m3 [(21
× 10–2 m) × (27,5 × 10–2 m) × (0,07 × 10–3 m)], o que equivale a um cubo com um lado de 1,6 × 10–
2 m. A presença de 1023 átomos de carbono neste volume corresponde a 4,6 × 107 átomos de
carbono por lado (1023)0,33. Isso corresponde a cerca de 200.000 átomos de carbono para abranger
a espessura da página [(4,6 × 107 átomos/1,6 × 10–2 m) × (0,07 × 10–3 m)].
C. Com um diâmetro de 0,4 nm cada, seriam necessários 175.000 átomos de carbono para abranger a
espessura da página [(0,07 × 106 nm)/0,4 nm], se eles fossem colocados de ponta a ponta em sua
distância de contato van der Waals.
D. À primeira vista, pode parecer estranho que sejam necessários mais átomos de carbono na celulose,
onde representam apenas 40% da massa, do que átomos de carbono livres e puros para abranger a
espessura da página. A chave é que os átomos da celulose estão ligados covalentemente uns aos
outros e, portanto, estão muito mais próximos do que seus raios de van der Waals. Os núcleos de
átomos de carbono ligados covalentemente estão separados por 0,15 nm, enquanto aqueles em
contato de van der Waals estão separados por 0,4 nm.
A 2–24 glicose (C6H12O6) tem um peso molecular de 180 [(6 × 12) + (12 × 1) + (6 × 16)] e, portanto, uma massa
de 180 g/mol. Uma concentração de 90 mg/dL corresponde a 5 × 10–3 M ou 5 mM. 90 mg [glicose] =
dL
verruga 10 dL g
× × ×
180g eu 103 mg
= 5 × 10–3 moles/L, que é 5 × 10–3 M, ou 5 mM

2–25
A. Os íons hidrônio (H3O+) resultam da dissociação da água em prótons e
íons hidroxila, cada próton ligando-se a uma molécula de água para formar um íon hidrônio (2
H2O H2O + H+ + OH– H3O+ + OH–). Em pH neutro, as concentrações de íons H3O+ e íons
OH– são iguais. Sabemos que na neutralidade o pH é 7,0 e, portanto, a concentração de H+
(H3O+) é 10–7 M. O peso molecular da água é 18 e, portanto, tem uma massa de 18 g/mol. A
massa
B. de 1 litro de água é 1000 g. Assim, a água pura é 55,6 M [(1000 g/L) × (mol/18 g)]. (Como a
massa de água é na verdade 18,015 g/mol, a água pura é 55,5 M.) A proporção de íons H3O+
(10–7 M) para moléculas de H2O (55,5 M) é 1,8 × 10–9. Assim, em pH neutro, apenas cerca
de 2 moléculas de
C. água em um bilhão são dissociadas.
2–26
A. Uma solução é dita neutra quando as concentrações de H+ e OH– são exatamente iguais. Isso
ocorre quando a concentração de cada íon é 10-7 M, de modo que seu produto é 10-14 M2.
B. Em uma solução de 1 mM de NaOH, a concentração de OH– é 10–3 M. us,

a concentração de H+ é 10-11 M, que é pH 11.
Kw
[H+] =
[OH-]
10–14 m2
= = 10–11M _
10–3M _
C. Um pH de 5,0 corresponde a uma concentração de H+ de 10–5 M. us, o OH–

a concentração é de 10–9 M (10–14 M2/10–5 M).
2–27
A. Os valores para log [A–]/[HA], [A–]/[HA] e a porcentagem do ácido que se dissociou são
mostrados na Tabela 2–6. Incluído na tabela está um conjunto de valores de “regra de ouro”
que podem ser mais fáceis de lembrar e são úteis para ter disponível mentalmente para estimar
respostas.
B. Um gráfico de pH versus percentual de dissociação do ácido fraco, HA, é mostrado na Figura 2–
26. Todos os ácidos fracos, independentemente do pKa, produzem curvas de titulação idênticas
a esta. As curvas para diferentes ácidos fracos são deslocadas ao longo da escala de pH,
dependendo de seus valores de pKa .
Essa curva de titulação é fundamentalmente semelhante às curvas de ligação proteína-
ligante e às curvas de atividade enzimática. Como apontado em
TABELA 2–6 Dissociação de um ácido fraco em valores de pH acima e abaixo do pKa (Resposta
2–27).
pH registro [A-] [A-] % dissociação “Regra de ouro” %

[HA] [HA] dissociação
pK +4 4 104 99,99 99,99
pK +3 3 103 99,9 99,9
pK +2 2 102 99 99
pK +1 1 101 91 90
pK 0 100 50 50
pK-1 –1 10–1 9.1 10
pK-2 –2 10–2 0,99 1
pK-3 –3 10–3 0,099 0,1
pK-4 –4 10–4 0,0099 0,01

+4 Figura 2–26 Porcentagem de dissociação

de um ácido fraco em função do pH
(Resposta 2–27).
+3
+2
+1
pH pK
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
tudo HA por cento dissociado tudo A–
No Problema 3-86, todos os três fenômenos — titulação de ácidos fracos, ligação proteína-
ligante e atividade enzimática — geram curvas idênticas. Mais importante ainda, os valores
de “regra de ouro” pertencem a cada um, permitindo estimativas rápidas em todas as três
situações.
2–28
A. Estimar as porcentagens das quatro formas de fosfato em pH 7 é direto dos valores da regra
de ouro derivados do Problema 2–27 (consulte a Tabela 2–6). Como o citosol está cerca de
5 unidades de pH acima do pKa para dissociação do H3PO4, ele estará cerca de 99,999%
ionizado; assim, o H3PO4 representará apenas cerca de 0,001% do total. Como o citosol
está um pouco acima do pKa para dissociação de H2PO4 –, H2PO4 – seria um pouco
menor que 2– seria um pouco maior que 50% do total. de 50% e HPO4 Como o citosol está
HPO4 2–, ele estará mais de 5 unidades de pH abaixo do pKa para dissociação de
menos de 0,001% ionizado; assim, PO4 3– representará menos de 0,001% do total.
B. A proporção de [HPO4 2–] para [H2PO4 –] ([A–]/[HA]) no citosol em pH 7 pode ser

calculada usando a equação de Henderson–Hasselbalch
[A–]
pH = pK + log
[HA]
Substituindo,
[HPO4 2–]
7,0 = 6,9 + log
[H2PO4 –]
[HPO4 2–]
0,1 = log
[H2PO4 –]
[HPO4 2–] = 1,26
[H2PO4 –]
Como essas duas formas de fosfato somam 100% (as outras duas formas são
insignificantes), a razão pode ser usada para calcular a porcentagem de cada forma
presente (44% para H2PO4 – e 56 % para HPO4 2–). Ou seja, se a concentração citosólica
de fosfato é 1 mM, então a concentração de
H2PO4 – é de 0,44 mM e o de HPO4 2– é 0,56 mM.
2–29 Como os valores de pKa dos dois sistemas de tamponamento não são muito diferentes, a
principal consideração é a concentração geral dos tampões. A concentração de cadeias
de globina nas hemácias é de 6,7 mM.
100 mg verruga 1000 mL

[globina] = × × ×
ml 15.000 g g 1000 mg eu
= 6,7 × 10–3 mol/L = 6,7 mM
Se todas as dez histidinas puderem interagir com o citosol (ou seja, não estiverem ligadas
em ligações iônicas, por exemplo), então a concentração total de histidinas na globina é de
67 mM (10 × 6,7 mM). Assim, a potencial capacidade tampão das histidinas na globina, 67
mM, é muito maior que a do fosfato a 1 mM.
2–30
A. A proporção de [HCO3 –] para [CO2(dis)] em pH 7,4 é 20.
ÿ [HCO3 –]
pH = pKa + log
[CO2(dis)]
[HCO3 –]
7,4 = 6,1 + log
[CO2(dis)]
[HCO3- ] [HCO3 –]
log = 1,3 e = 20 [CO2(dis)]
[CO2(dis)]
Como o carbonato total é 25 mM, HCO3 – é 23,8 mM [(20/21) × 25 mM] e CO2(dis) é 1,2
mM [(1/21) × 25 mM].
B. A adição de 5 mM de H+ conduziria 5 mM de HCO3 – a CO2(dis), mantendo assim o equilíbrio
para hidratação e dissociação de CO2. Assim, a adição de 5 mM de H+ reduziria [HCO3 –]
para 18,8 mM e aumentaria [CO2(dis)] para 6,2 mM. Nessas concentrações, o pH seria de
6,6.
ÿ [HCO3 –]
pH = pKa + log
[CO2(dis)] 18,8
=
6,1 + log 6,2
pH = 6,1 + 0,48 = 6,6
Em um sistema fechado, bicarbonato/CO2 forneceria um sistema de enchimento muito

fraco com uma capacidade de enchimento muito pequena.
C. Em um sistema aberto, a adição de 5 mM de H+ causaria as mesmas alterações acima,
exceto que o excesso de CO2 seria removido pela expiração, mantendo sua concentração
em 1,2 mM. Nessas condições o pH seria 7,3.
ÿ [HCO3- ]
pH = pKa + registro
[CO2(dis)]
18,8
= 6,1 + log 1,2
pH = 6,1 + 1,19 = 7,3
Assim, em um sistema aberto, o pH diminui apenas cerca de 0,1 unidade de pH. A

beleza deste sistema de enchimento é que o HCO3 – é constantemente adicionado de volta
ao sistema através do metabolismo, que gera CO2 que é então hidratado em HCO3 –. Além
disso, os dois componentes do sistema são regulados independentemente: a exalação de
CO2 pelos pulmões pode ser controlada pela taxa de respiração e HCO3 – pode ser
excretada ou retida pelos rins.
2–31 A concentração de proteína é de cerca de 200 mg/mL (0,18 × 1,1 g/mL = 198 mg/mL).
Observe que, se você tiver a densidade da célula, não precisará saber seu volume para
calcular a concentração de proteína.
TRATAMENTO DE DADOS
2–32 Os efeitos nos valores de pK são devidos a interações eletrostáticas entre

os grupos carboxila e amino. Na alanina, uma grande atração eletrostática
entre o –NH3 + e o –COO– está presente em pH 7. Sua interação favorável
torna mais difícil remover um próton do –NH3 +, aumentando seu pKa, e mais
difícil adicionar um próton para –COO–, diminuindo seu pKa. A atração
eletrostática diminui à medida que os grupos amino e carboxila são movidos
cada vez mais longe um do outro nos oligômeros da alanina, praticamente
desaparecendo pela Ala4, conforme refletido nas mudanças nos valores de
pKa .
Referência: Cantor CR & Schimmel PR (1980) Biophysical Chemistry, Parte 1:

e Conformação de Macromoléculas Biológicas, pp. 42–46. Nova York: WH
Freeman and Company.
2–33 Assumindo que a mudança na atividade enzimática se deve à mudança no estado

de protonação da histidina, a enzima deve requerer a histidina no estado
carregado e protonado. A enzima é ativa apenas abaixo do pKa da histidina
(que é tipicamente em torno de 6,5 a 7,0 em proteínas), onde se espera que a
histidina seja protonada.
LINKS MÉDICOS
2–34 As estruturas do sedativo (R)-talidomida e do teratogênico (S)-talidomida

diferem em um único centro quiral (Figura 2-27). Depois que o teratogênico
foi identificado, presumiu-se que se a talidomida tivesse sido sintetizada como
o isômero óptico correto e puro, não teria causado problemas. Experimentos
recentes, no entanto, mostraram que a talidomida é rapidamente racemizada
(convertida em uma mistura de isômeros ópticos) em animais. Assim, um
protocolo projetado para sintetizar o isômero correto não teria feito diferença
no final.
2–
35 A. Etanol em 5% de cerveja é 0,86 M. Etanol puro é 17,2 M [(789 g/L) × (mol/46
g)], e, portanto, 5% de cerveja seria 0,86 M de etanol (17,2 M × 0,05 ).
B. Em um limite legal de 80 mg/100 mL, o etanol será 17,4 mM no sangue [(80 mg/
0,1 L) × (mmol/46 mg)].
(A) (R)-TALIDOMIDA (B) (S)-TALIDOMIDA
O
O O
O O
N N
H H
sedativo teratogênico
Figura 2–27 As estruturas das

formas sedativa (R) e teratogênica (S)
da talidomida (Resposta 2–34).
CATÁLISE E USO DE ENERGIA PELAS CÉLULAS 459
C. No limite legal (17,4 mM), o etanol em 5% de cerveja (0,86 M) foi diluído 49,4 vezes (860
mM/17,4 mM). Essa diluição representa 809 mL em 40 L de água corporal (40 L/49,4).
Com 355 mL por cerveja, isso equivale a 2,3 cervejas (809 mL/355 mL).
D. Levaria quase 4 horas. Com o dobro do limite legal, a pessoa conteria 64 g de etanol
[(0,16 g/0,1 L) × (40 L)]. A pessoa metabolizaria 8,4 g/hr [(0,12 g/hr kg) × (70 kg)].
Assim, para metabolizar 32 g de etanol (a quantidade que excede o limite legal) seriam
necessárias 3,8 horas [(32 g) × (h/8,4 g)].
CATÁLISE E USO DE ENERGIA PELAS CÉLULAS

DEFINIÇÕES
2–36 Energia de ativação
2–37 Mudança de energia livre padrão (G°)
2–38 Oxidação
2–39 Substrato
2–40 Difusão
2–41 Enzima
2–42 Reação acoplada
2–43 Equilíbrio
2–44 Energia livre (G)
VERDADEIRO FALSO
2–45 Verdadeiro. A diferença entre plantas e animais está em como eles obtêm suas moléculas
de alimento. As plantas produzem sua própria energia usando a energia da luz solar,
mais CO2 e H2O, enquanto os animais precisam procurar comida.
2–46 Verdadeiro. As reações de oxidação-redução referem-se àquelas nas quais os elétrons são
removidos de um átomo e transferidos para outro. Como o número de elétrons é
conservado (sem perda ou ganho) em uma reação química, a oxidação – remoção de
elétrons – deve ser acompanhada pela redução – adição de elétrons.
2–47 Falso. A constante de equilíbrio para a reação A B permanece inalterada; é uma constante.
Ligar as reações pode converter uma reação desfavorável em uma favorável, mas não
alterando a constante de equilíbrio, mas sim alterando a proporção de concentração de
produtos para reagentes.
2–48 A química orgânica em laboratórios - mesmo os melhores - raramente é realizada em

um ambiente aquático devido à baixa solubilidade de alguns componentes e porque a
água é reativa e geralmente compete com a reação pretendida. A diferença mais
dramática, no entanto, é a complexidade. É crítico em química orgânica de laboratório
usar componentes puros para garantir um alto rendimento do produto pretendido. Em
contraste, as células vivas realizam milhares de reações diferentes simultaneamente
com bom rendimento e praticamente sem interferência entre as reações. A chave, é
claro, é que as células usam catalisadores enzimáticos, que ligam moléculas de
substrato em um sítio ativo, onde são isoladas do restante do ambiente. onde a
reatividade de átomos individuais pode ser manipulada para encorajar a
reação correta. É a capacidade das enzimas de fornecer tais ambientes especiais

— câmaras de reação em miniatura — que permite à célula realizar um número
enorme de reações simultaneamente sem interferência entre elas.
2–49 As vias catabólicas quebram moléculas maiores (muitas vezes derivadas de alimentos)
em moléculas menores e abstraem energia de uma forma útil no processo. As vias
anabólicas (ou vias biossintéticas) constroem moléculas maiores a partir das
menores. As pequenas moléculas geradas pelas vias catabólicas são usadas como
pontos de partida e intermediários nas vias anabólicas, e a energia das vias
catabólicas, aproveitada na forma de carreadores ativados, é usada para conduzir o
processo energeticamente desfavorável da biossíntese.
2–50 A segunda lei da termodinâmica se aplica a sistemas fechados, que podem ser
uma câmara do laboratório de um cientista, por exemplo, ou o universo inteiro.
Sistemas fechados não trocam matéria ou energia com o ambiente. Os organismos
vivos, como as células e os seres humanos, não são sistemas fechados; eles
continuamente trocam matéria e energia com seus arredores. É perfeitamente
admissível que uma parte de um sistema fechado - um ser humano no universo -
aumente sua ordem, desde que o resto do sistema (o resto do universo) fique
desordenado em maior grau. É isso que os organismos vivos fazem: eles ingerem
comida e usam a energia para aumentar sua ordem. Mas, para fazer isso, eles
liberam resíduos que são menos complexos (menos ordenados) do que os alimentos
que ingeriram, e grande parte da energia dos alimentos é liberada em sua forma
mais desordenada - como calor. Qualquer ordem criada dentro de uma célula ou
organismo é mais do que paga pela desordem introduzida em seu ambiente.
2–51 Se a reação for reescrita como suas duas semi-reações, fica claro que o Na é
oxidado e o Cl é reduzido.
2 Na 2 Na+ + 2 e–
2 e– + Cl2 2 Cl–
LÍQUIDO: 2 Na + Cl2 2 Na+ + 2 Cl–1.
Os elétrons são removidos do sódio; portanto, é oxidado. Os elétrons são adicionados

ao cloro; por isso é reduzido.
2–52
A. Para que a polimerização seja favorecida em alta temperatura e a despolimerização
seja favorecida em baixa temperatura, H e S devem ser ambos positivos. Em alta
temperatura, onde a polimerização é favorecida, o termo –TS torna-se grande o
suficiente para superar o termo H positivo , produzindo um G negativo e favorável
para a polimerização. Em baixa temperatura, onde a despolimerização é favorecida,
o –TS torna-se pequeno o suficiente para ser superado pelo termo H positivo, dando
origem a um G positivo e desfavorável para a polimerização.
B. Parece contra-intuitivo que a polimerização de subunidades de tubulina livre em

microtúbulos altamente ordenados deva ocorrer com um aumento geral na entropia
(diminuição na ordem). Mas é contra-intuitivo apenas se considerarmos as
subunidades isoladamente. Lembre-se de que a termodinâmica se refere a todo o
sistema, que inclui as moléculas de água. O aumento da entropia deve-se em grande
parte aos efeitos da polimerização nas moléculas de água. As superfícies das
subunidades de tubulina que se unem para formar microtúbulos são razoavelmente
hidrofóbicas e restringem (ordem) as moléculas de água em sua vizinhança imediata.
Após a polimerização, essas moléculas de água restritas são liberadas para interagir
com outras moléculas de água. A desordem recém-descoberta excede em muito a
ordem aumentada das subunidades de proteína e, portanto, o aumento líquido na
entropia (desordem) favorece a polimerização.
CATÁLISE E USO DE ENERGIA PELAS CÉLULAS 461
2–53 A afirmação está correta. Uma reação com G° negativo, por exemplo, não
ocorreria espontaneamente em condições onde já houvesse excesso de produtos
sobre aqueles que estariam presentes no equilíbrio. Por outro lado, uma reação
com um G° positivo ocorreria espontaneamente sob condições em que houvesse
excesso de substratos em relação aos presentes no equilíbrio.
2–54 Nas mesmas concentrações, os valores de G para as reações direta e inversa terão a
mesma magnitude, mas sinais diferentes. Assim, o G para C + DA + B é 20 kJ/mol.
2–55 Absolutamente nenhum. Esses valores fornecem informações sobre quão

energeticamente favorável é uma reação sob condições padrão (G°) e sob
condições reais (G). Eles não fornecem informações sobre a taxa na qual uma
reação favorável ocorrerá. As taxas dependem de outros fatores: na célula, mais
comumente da existência de enzimas e suas propriedades.
2–56 A célula liga essas duas reações fornecendo uma enzima que catalisa a reação
líquida diretamente. Assim, na célula, a fosforilação da glicose não ocorre como a
soma de duas reações, mas como uma única reação. A enzima hexoquinase, por
exemplo, liga-se à glicose e ao ATP e catalisa a transferência de um fosfato
diretamente do ATP para a glicose.
2–57 A energia livre G (–45 a –55 kJ/mol) derivada da hidrólise do ATP depende
tanto de G° (–30,5 kJ/mol) quanto das concentrações dos substratos e produtos.
[ADP][Pi ]
ÿG = ÿG° + 5,9 kJ/mol log
[ATP]
Dado que G° é –30,5 kJ/mol, a proporção de [ADP][Pi]/[ATP] nas células deve

variar de pouco mais de 10–3 (G = –48 kJ/mol) a um pouco menos de 10–4 (G = –
54 kJ/mol), como fazem em diferentes condições celulares.
2–58 A enzima A é benéfica. Ele permite a interconversão de duas moléculas transportadoras

de energia, ambas necessárias na forma de trifosfato para muitas reações
metabólicas. Qualquer ADP formado é rapidamente convertido em ATP pela
fosforilação oxidativa e, assim, a célula mantém uma alta relação [ATP]/[ADP]. Por
causa da enzima A, chamada fosfoquinase de nucleotídeo, parte do ATP é usada
para manter a relação [GTP]/[GDP] igualmente alta.
A enzima B seria altamente prejudicial para a célula. As células usam NAD+
como um aceptor de elétrons em reações catabólicas e devem manter uma alta
relação [NAD+]/[NADH] para suportar a quebra de glicose e gorduras para produzir
ATP. Em contraste, o NADPH é usado como um doador de elétrons em reações
biossintéticas; as células, portanto, mantêm uma alta proporção [NADPH]/[NADP+]
para conduzir a síntese de várias biomoléculas. Como a enzima B traria ambas as
proporções para 1, ela reduziria as taxas das reações catabólicas e anabólicas.
2–59 As duas listas combinam da seguinte forma: A com 1; B com 5; C com 6; D com
2; E com 3; e F com 4.
2–60 As reações B, D e E requerem o acoplamento com outras reações energeticamente

favoráveis. Em cada caso, são feitas moléculas com ligações de alta energia. Em
contraste, nas reações A e C, moléculas mais simples (A) ou ligações de energia
mais baixa (C) são feitas.
CÁLCULOS
2–61 A enzima catalisa eventos na taxa de 1 evento/3,2 × 10–5 seg, ou 1 evento/32
ÿs [(1014 eventos/100 anos) × (ano/365 dias) × (dias/24 horas) × (horas/ 60 min)
× (min/60 seg)].
2–62 As velocidades instantâneas são H2O = 3,8 × 104 cm/seg, glicose = 1,2 × 104 cm/seg
e mioglobina = 1,3 × 103 cm/seg. O cálculo para uma molécula de água, que tem uma
massa de 3 × 10–23 g [(18 g/mol) × (mol/6 × 1023 moléculas)], é mostrado abaixo.
v = (kT/ m)½
( ½
em =
1,38 × 10–16 g cm2 × 310 K × 1
( K seg2 3 × 10–23 g
v = 3,78 × 104 cm/s
Quando esses números são convertidos em km/h, os resultados são surpreendentes. A

água move-se a 1360 km/h, a glicose a 428 km/h e a mioglobina a 47 km/h. nós, mesmo
a maior (mais lenta) dessas moléculas está se movendo mais rápido do que o velocista
humano mais rápido! E as moléculas de água estão viajando a Mach 1,1! Ao contrário de
um velocista humano ou de um avião a jato, essas moléculas avançam lentamente porque
estão constantemente colidindo com outras moléculas em solução.
Referência: Berg HC (1993) Random Walks in Biology, edição expandida, pp. 5–6.
Princeton, NJ: Princeton University Press.
2–63 Levaria uma média de 0,13 segundos para a glicose e uma média de 1,3 segundos para a
mioglobina para difundir 20 ÿm. O cálculo da glicose é
t = x 2/6D
(cm)2 ×
segundo
t = (20 µm)2 ×
(104 µm)2 6 × (5 × 10–6 cm2)
t = 0,13 seg
Referência: Berg HC (1993) Random Walks in Biology, edição expandida, pp. 5–6.
Princeton, NJ: Princeton University Press.
2–64
A. No equilíbrio, G é zero (para qualquer reação); não há tendência para a reação prosseguir
em uma direção sobre a outra. Substituir K por [F6P]/[G6P] dá 0 = G° + 2,3 RT log K G°
= –2,3 RT log K, ou –5,9 kJ/mol
log K B. No equilíbrio, G é
zero e G° é 1,78 kJ/mol.
[F6P]
ÿG° = –2,3 RT log
[G6P]
Substituindo 5,9 kJ/mol por 2,3 RT, -5,9 kJ

log (0,5)
= mol
= 1,78 kJ/mol
C. Como G° se relaciona com o equilíbrio, ele permanece inalterado; ou seja, G° = 1,78 kJ/
mol. Em G = –2,5 kJ/mol, a proporção de [F6P] para [G6P] é 0,19.
[F6P]
ÿG = ÿG ° + 2,3 RT log
[G6P]
–2,5 kJ 1,78 kJ 5,9 kJ [F6P] log

= + mol
mol mol [G6P]
registro –4,28 kJ/mol 5,9

[F6P] = = –0,73
[G6P] kJ/mol
[F6P]
= 0,19
[G6P]
2–65 toda a população de moléculas de ATP no corpo se transformaria

COMO AS CÉLULAS OBTEM ENERGIA DOS ALIMENTOS 463
(ciclo) 1800 vezes por dia, ou um pouco mais de uma vez por minuto. A conversão
de 3 moles de glicose em CO2 geraria 90 moles de ATP [(3 moles de glicose) ×
(30 moles de ATP/mole de glicose)]. O corpo inteiro contém 5 × 10–2 moles de
ATP [(2 × 10–3 moles/L) × 25 L]. Como a concentração de ATP não muda, cada
ATP deve circular 1.800 vezes por dia [(90 moles de ATP/dia)/(5 × 10–2 moles de
ATP)].
Figura 2–28 Fechamento do anel
TRATAMENTO DE DADOS pentamérico com duas ligações (Resposta 2–66).
2–66 A adição da subunidade final ao anel envolve dois conjuntos de ligações, um para cada
um de seus vizinhos (Figura 2–28). Se as ligações fossem igualmente fortes,
então você poderia esperar um quadrado da constante de equilíbrio (uma Problemas p2.50/2.27
duplicação de G). Na realidade, a situação é um pouco mais complexa e pode dar
origem a constantes de equilíbrio várias ordens de grandeza superiores ao
quadrado. Este tratamento bastante simples, no entanto, serve para ilustrar a
estabilidade que pode ser obtida pelo fechamento. Os vírus icosaédricos, por
exemplo, são muito estáveis devido ao fechamento em três dimensões.
Referência: Howard J (2001) Mechanics of Motor Proteins and the Cytoskeleton,

pp. 151–163. Sunderland, MA: Sinauer Associates, Inc.
2–67 Os fundamentos teóricos da afirmação de que todos os valores de G devem ser

negativos são tão fortes que o erro deve residir no experimento. Uma fonte
potencial de erro é que as concentrações dos intermediários não foram medidas
com precisão suficiente. Esta é a explicação mais provável, dados os formidáveis
desafios experimentais para tais medições precisas e instantâneas de concentração.
A outra possibilidade é que os valores de G° (valores de equilíbrio) sejam
ligeiramente o relativos aos seus valores verdadeiros em condições fisiológicas.
Referências: Berg JM, Tymoczko JL & Stryer L (2002) Bioquímica, Quinta Edição,
pp. 436–437. Nova York: WH Freeman and Co.
Minakami S, Suzuki C, Saito T & Yoshikawa H (1965) Estudos sobre glicólise

eritrocítica. I. Determinação dos intermediários glicolíticos em eritrócitos humanos.
J. Biochem. (Tóquio) 58, 543–550.
COMO AS CÉLULAS OBTEM ENERGIA DOS ALIMENTOS
DEFINIÇÕES
2–68 Ciclo do ácido cítrico
2–69 gordura
2–70 Glicogênio
2–71 Fosforilação oxidativa
2–72 Cadeia de transporte de elétrons
2–73 Glicolise
VERDADEIRO FALSO
2–74 Falso. A glicólise é a única via metabólica que pode gerar ATP na ausência de oxigênio.
Existem muitas circunstâncias em que as células são temporariamente expostas a
condições anóxicas, durante as quais sobrevivem por glicólise. Por exemplo, em
um sprint total, a circulação não pode fornecer oxigênio adequado para os músculos
das pernas, que continuam a forçar a contração muscular ao passar grandes
quantidades de glicose (do glicogênio) pela via glicolítica. Da mesma forma,
existem vários tipos de células humanas que
não realizam metabolismo oxidativo; por exemplo, os glóbulos vermelhos, que

não possuem mitocôndrias, produzem ATP por meio da glicólise. Para nós, a
glicólise é extremamente importante, mas é como um seguro: não é tão importante
até que você precise, e então é difícil ficar sem.
2–75 Verdadeiro. O oxigênio não é um substrato (ou um produto) para qualquer reação no
ciclo do ácido cítrico. Assim, as reações podem ocorrer na ausência de oxigênio.
Nas células, no entanto, as reações não podem prosseguir por muito tempo na
ausência de oxigênio porque NADH e FADH2 não podem ser convertidos de volta
a NAD+ e FAD por fosforilação oxidativa (que depende de oxigênio).
Na ausência de NAD+ e FAD, quatro reações separadas do ciclo (ver Figura
2-21) deixarão de operar.
2–76 As duas listas combinam da seguinte forma: A com 2 e 3, B com 4 e C com 1.
2–77
A. Uma maneira de balancear a equação para uma via é anotar cada reação e somar
todas, como feito abaixo para as duas primeiras reações da glicólise.
(1) Glicose + ATP G6P + ADP + H+

(2) G6P F6P
SOMA: Glicose + ATP + G6P G6P + F6P + ADP + H+
Observe que na soma, o G6P intermediário aparece em ambos os lados e,

portanto, se anula. Como os intermediários da via sempre saem dessa equação
balanceada, há uma maneira menos tediosa de equilibrar a equação: todas as
moléculas nas extremidades cegas das setas são reagentes e todas as moléculas
nas extremidades pontiagudas são produtos. Ignore os intermediários, mas preste
muita atenção à estequiometria, pois geralmente é apenas o fluxo que é indicado.
Usando este método, a equação para o primeiro estágio da glicólise é
Glicose + 2 ATP 2 G3P + 2 ADP + 2 H+
B. A equação para o segundo estágio da glicólise é
G3P + Pi + NAD+ + 2 ADP piruvato + NADH + 2 ATP + H2O

C. A equação geral é apenas a soma dessas duas equações, depois de dobrar
os números na segunda equação para acertar a estequiometria.
Glicose + 2 ATP 2 G3P + 2 ADP + 2 H+
2 G3P + 2 Pi + 2 NAD+ + 4 ADP 2 piruvato + 2 NADH + 4 ATP + 2 H2O
SOMA: Glicose + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+ 2 piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 H2O + 2 H+
2–78 Sob condições anaeróbicas, as células são incapazes de utilizar piruvato – o produto
final da via glicolítica – e NADH. Os elétrons transportados no NADH são
normalmente entregues à cadeia de transporte de elétrons para fosforilação
oxidativa, mas na ausência de oxigênio os elétrons transportados são um produto
residual, assim como o piruvato. Assim, na ausência de oxigênio, acumulam-se
piruvato e NADH. A fermentação combina esses produtos residuais em uma única
molécula, lactato ou etanol, que é enviada para fora da célula. O fluxo de material
através da via glicolítica
não poderia continuar na ausência de oxigênio em células que não podem
realizar a fermentação.
Como o NAD+ + NADH está presente nas células em quantidades limitadas, a
glicólise anaeróbica na ausência de fermentação converteria rapidamente o pool
em grande parte em NADH. A mudança na razão NAD+/NADH interromperia a
glicólise na etapa em que o gliceraldeído 3-fosfato (G3P) é convertido
para 1,3-bifosfoglicerato (1,3BPG), uma etapa com apenas um pequeno G negativo normalmente 1-arseno-3-fosfoglicerato
(consulte a Tabela 2–3). O objetivo da fermentação é regenerar o NAD+ transferindo o par de O
elétrons carregados no NADH para o piruvato e excretando o produto. Assim, a fermentação OO Como O–
permite que a glicólise continue.
C O–
ALTO
2–79 Na ausência de oxigênio, as necessidades de energia da célula devem ser atendidas pela fermentação
CH2
em lactato, que requer uma alta taxa de fluxo através da glicólise para gerar ATP suficiente.
O
Quando o oxigênio é adicionado, a célula pode gerar ATP por fosforilação oxidativa, que gera
ATP de forma muito mais eficiente do que a glicólise. Assim, menos glicose é necessária para –O SOBRE
fornecer ATP no O–
Mesma taxa.
H2O
espontâneo
2–80 Na presença de arsenato, forma-se 1-arseno-3-fosfoglicerato em vez de 1,3-bifosfoglicerato (Figura 2–
29). Por ser sensível à hidrólise em água, a ligação de alta energia do arsenato é destruída antes
O O–
que a molécula que a contém possa se difundir para a próxima enzima. O produto da hidrólise, 3-
C
fosfoglicerato, é o mesmo produto normalmente formado, mas como é formado não
enzimaticamente, a reação não está acoplada à formação de ATP. O arsenato desperdiça ALTO
energia metabólica ao desacoplar muitas reações de fosfotransferência pelo mesmo mecanismo, + 2– + H+

CH2 HAsO4
e é por isso que é tão venenoso.
O
–O SOBRE
O–
2–81 O reverso da reação direta simplesmente não é uma possibilidade em condições fisiológicas.
Lembre-se do Problema 2–67 de que o fluxo de material através de um caminho requer que os 3-fosfoglicerato
valores de G para cada etapa sejam negativos. Assim, para um fluxo do glicogênio hepático para
a glicose sérica, a etapa da glicose 6-fosfato para a glicose deve ter um G negativo. Para Figura 2–29 Hidrólise do
1-arseno-3-fosfoglicerato
simplesmente inverter a reação direta (isto é, G6P + ADP GLC + ATP, G° = 16,7 kJ/ mol) exigiria
(Resposta 2–80).
que a razão de concentração [GLC]
[ATP]/ [G6P][ADP] seja menor que 10–2,84 (0,0015) para trazer a reação ao equilíbrio (G = 0).
[GLC][ATP] ÿG
= ÿG° + 5,9 kJ/mol log [G6P][ADP]
[GLC][ATP] 0
= 16,7 kJ/mol + 5,9 kJ/mol log [G6P][ADP]
[GLC][ATP] = –16,7 kJ/mol = –2,83 5,9 kJ/

registro [G6P][ADP] mol
[GLC][ATP] = 0,0015 [G6P]

[ADP]
Dentro de uma célula funcional, como uma célula do fígado que exporta glicose, a concentração
de ATP sempre excede a de ADP, mas apenas para fins ilustrativos, vamos supor que a razão
seja 1. Nessas condições, a razão [GLC]/ [G6P] deve ser 0,00145; ou seja, a concentração de
G6P deve ser quase 700 vezes maior que a de GLC. Uma vez que a concentração circulante de
glicose é mantida entre 4 e 5 mM, isso corresponde a cerca de 3 M G6P, uma concentração
impossível dado que a concentração total de fosfato celular é inferior a cerca de 25 mM.
2–82 A afirmação está incorreta. Os átomos de oxigênio que fazem parte do CO2 não vêm dos
átomos de oxigênio que são consumidos como parte da oxidação da glicose (ou de qualquer
outra molécula alimentar). Os elétrons que são abstraídos da glicose em vários estágios de sua
oxidação são finalmente transferidos para o oxigênio para produzir água durante a fosforilação
oxidativa. Assim, o oxigênio utilizado durante a oxidação dos alimentos nos animais acaba sendo
átomos de oxigênio em H2O.

Pode-se mostrar isso diretamente incubando células vivas em uma atmosfera que contém
oxigênio molecular enriquecido para o isótopo 18O, em vez de
o isótopo que ocorre naturalmente, 16O. Nesse experimento, descobre-se que todo o CO2
liberado pelas células contém apenas 16O. Portanto, os átomos de oxigênio nas moléculas de
CO2 liberadas não vêm diretamente da atmosfera, mas sim das próprias moléculas orgânicas
e da H2O.
CÁLCULOS
2–83 Nessa taxa de regeneração de ATP, a célula consumirá oxigênio a 6,7 × 10–15 L/min [(0,9 × 109 ATP/
min) × (1 O2/5 ATP) × (22,4 L/6 × 1023 O2 ) = 6,72 × 10–15 L/min]. O volume da célula é de
10–12 L [(1000 ÿm3) × (cm/104 ÿm)3 × (mL/cm3) × (L/1000 mL)]. A divisão do volume da célula
pela taxa de consumo de O2 [(10–12 L)/(6,7 × 10–15 L/min)] indica que a célula consumirá
seu próprio volume de oxigênio em 149 minutos, ou cerca de 2,5 horas .
(Como o ar contém apenas 20% de oxigênio, uma célula consumiria seu próprio volume de ar
em cerca de 30 minutos.)
2–84 O corpo humano opera a cerca de 70 watts - quase o mesmo que uma lâmpada.
watts 109 ATP corpo de 5 × 1013 mole 50 kJ 103

= × × × ×
corpo 60 seg célula células 6 × 1023 ATP mol J kJ
69,4 J/s 69,4 watts
= =
corpo corpo
2–85 Você precisaria gastar 2.070 kJ para subir de Zermatt até o topo do Matterhorn, uma distância vertical
de 2.818 m. Substituindo na equação por trabalho
9,8 m kJ
Emork = 75 kg × J × 2818 m × ×
seg2 2 103J _
kg m2/seg
= 2070 kJ
é igual a cerca de 1,5 Snickers™ (2070 kJ/1360 kJ), então você seria
é aconselhável planejar uma parada em Hörnli Hut para comer outro.
Na realidade, o corpo humano não converte energia química em trabalho externo com
100% de eficiência, como presumido nesta resposta, mas sim com uma eficiência de cerca de
25%. Além disso, você estará andando lateralmente e subindo. nós, você precisaria de mais de
6 Snickers para fazer todo o caminho.
Referência: Frayn KN (1996) Metabolic Regulation: A Human Perspective, p. 179. Londres:

Portland Press.
2–86
A. e G no músculo em repouso é –0,8 kJ/mol.
[C][ATP]
ÿG = ÿG° + 5,9 kJ/mol log [CP]
[ADP] (13 × 10–3)
(4 × 10–3) = –13,8 kJ/mol +
5,9 kJ/mol log (25 × 10–3)(0,013 × 10–3)
= –13,8 kJ/mol + 5,9 kJ/mol log 160 = –13,8 kJ/

mol + 13,0 kJ/mol
ÿG = –0,8 kJ/mol
é um valor negativo muito pequeno não deve surpreendê-lo; ele diz que este sistema de
abastecimento de energia está quase em equilíbrio, o que você deve esperar na ausência de
uso pesado de ATP.
B. Se a concentração de ATP diminuir para 3 mM e a de ADP aumentar para 1 mM, então o G para
a reação será –12,7 kJ/mol.
[C][ATP] +
ÿ G = ÿ G ° 5,9 kJ/mol log [CP]
[ADP] (13 × 10–
3)(3 × 10–3 ) = –13,8 kJ/
mol + 5,9 kJ/mol log (25 × 10–3 )(1 × 10–
3 ) = –13,8 kJ/mol + 5,9 kJ/
mol log 1,56
= –13,8 kJ/mol + 1,14 kJ/mol
ÿG = –12,7 kJ/mol
Assim, assim que o exercício começar, a reação se tornará altamente favorecida e o

fosfato de creatina conduzirá a conversão de ADP em ATP. Na realidade, a enzima que
catalisa essa reação é eficiente o suficiente para manter a reação quase em equilíbrio ( G =
0) de modo que os níveis de ATP permaneçam altos enquanto os níveis de fosfato de creatina
caem, cumprindo seu papel de tampão de energia.
C. Se o ATP (4 mM) pudesse sustentar um sprint por 1 segundo, então o fosfato de creatina (25
mM) poderia sustentar um sprint por mais 6 segundos regenerando uma quantidade igual de
ATP. não é longo o suficiente para permitir que um velocista termine 200 metros; assim, deve
haver outra fonte de energia. A energia adicional vem da quebra do glicogênio muscular, que
é processado pela glicólise anaeróbica, produzindo lactato e ATP.
Os estoques típicos de glicogênio muscular são suficientes para cerca de 80 segundos de

corrida.
TRATAMENTO DE DADOS
2–87 O resultado de Knoop foi surpreendente na época. Alguém poderia imaginar que a maneira óbvia
de metabolizar ácidos graxos em CO 2 seria remover o grupo carboxilato da extremidade
como CO 2 e então oxidar o átomo de carbono recém-exposto até que ele também pudesse
ser removido como CO 2. No entanto, a remoção de unidades de carbono único não é
consistente com os resultados de Knoop, uma vez que prevê que os ácidos graxos ímpares e
pares gerariam o mesmo produto final. Inconsistências semelhantes surgem com a remoção
de fragmentos contendo mais de dois átomos de carbono. Por exemplo, a remoção de
fragmentos de três carbonos funcionaria para os ácidos graxos de oito e sete carbonos
mostrados na Figura 2-20, mas não funcionaria para os ácidos graxos de seis e cinco carbonos.
A remoção de fragmentos de dois carbonos da extremidade do ácido carboxílico é o único

esquema que explica a diferença consistente no metabolismo dos ácidos graxos ímpares e
pares. Pode-se perguntar por que o último fragmento de dois carbonos não é removido do
fenilacetato. Acontece que o anel benzênico interfere no processo de fragmentação, que
envolve a modificação do terceiro carbono da extremidade do ácido carboxílico.
Uma vez que esse carbono faz parte do anel de benzeno no fenilacetato, ele é protegido da
modificação e o metabolismo posterior do fenilacetato é bloqueado.
Os resultados de Knoop também especificam a direção da degradação. Se a extremidade

não ácida da cadeia fosse atacada primeiro, ou o anel de benzeno tornaria os ácidos graxos
resistentes ao metabolismo, ou o mesmo composto de benzeno sempre seria excretado,
independentemente do comprimento do ácido graxo fornecido aos cães .
Referência: Knoop F (1905) A quebra de ácidos graxos aromáticos no corpo animal.

Contribuição Chem. Physiol. 6, 150-162.
2–88
A. Se o citrato fosse um intermediário em uma via linear de oxidação, seria esperado que sua
adição levasse a um aumento no consumo de oxigênio que corresponderia aos requisitos
para a oxidação dos átomos de carbono no citrato. A equação química balanceada mostra
que cada mmol de citrato exigiria 4,5 mmol de oxigênio.
A percepção de B. Krebs foi reconhecer que, se o citrato fosse um intermediário em uma

via cíclica, então uma pequena quantidade poderia levar a aumentos substanciais na
oxidação de outras moléculas (acetil CoA) que alimentam a via. Em essência, o
citrato se comportaria cataliticamente.
A lógica de Krebs é claramente apresentada no artigo: “Como o ácido cítrico
reage cataliticamente no tecido, é provável que seja removido por uma reação
primária, mas regenerado por uma reação subsequente. No balanço nenhum citrato
desaparece e nenhum produto intermediário se acumula.”
C. E. coli e levedura realmente usam o ciclo do ácido cítrico. Krebs errou neste ponto
porque não percebeu (nem ninguém por muito tempo) que o citrato não pode entrar
nessas células. Portanto, quando ele adicionou citrato a E. coli intacta e levedura, ele
não encontrou nenhuma estimulação do consumo de oxigênio.
A passagem do citrato através de uma membrana requer um sistema de transporte,
que está presente nas mitocôndrias, mas ausente nas membranas plasmáticas de
leveduras e E. coli .
Referências: Krebs HA & Johnson WA (1973) e papel do ácido cítrico no metabolismo

intermediário em tecidos animais. Enzymologia 4, 148-156.
Veja também a Palestra Nobel de Albert Szent-Györgyi (1937) em www.nobel.se/

medicine/laureates/1937/szent-gyorgyi-lecture.pdf
2–89
A. Os experimentos de alimentação cruzada indicam que as três etapas controladas pelos
produtos dos genes TrpB, TrpD e TrpE são arranjadas na ordem
TrpE TrpD TrpB

XYZ triptofano
onde X, Y e Z são intermediários não definidos na via.

A capacidade da cepa TrpE– de ser alimentada de forma cruzada pelas outras
duas cepas indica que as cepas TrpD– e TrpB– acumulam intermediários que estão
mais distantes ao longo da via do que a etapa controlada pelo gene TrpE . A
capacidade da cepa TrpD– de ser alimentada de forma cruzada pela cepa TrpB– ,
mas não da cepa TrpE– , coloca-a no meio. A incapacidade da cepa TrpB– de ser
alimentada de forma cruzada por qualquer uma das outras cepas é consistente com
o controle da etapa mais próxima do triptofano.
B. Os padrões de crescimento em meio mínimo suplementado com intermediários
conhecidos na via biossintética do triptofano são consistentes com a ordem deduzida
da alimentação cruzada:
Sofrer TrpD TrpB

corismato antranilato indol triptofano
Na realidade, é claro, os intermediários da via eram desconhecidos (ou não

totalmente conhecidos) na época em que os experimentos de alimentação cruzada
foram feitos. Os intermediários foram elaborados por uma combinação de suposições
educadas sobre os prováveis intermediários, que poderiam então ser testados em
cepas mutantes, e de análise dos compostos que se acumularam nos mutantes.
Referência: Yanofsky C (2001) Avançando nosso conhecimento em bioquímica,

genética e microbiologia por meio de estudos sobre o metabolismo do triptofano.
Annu. Rev. Biochem. 70, 1–37.
ESTILO MCAT
2–90
C. Nas células que dependem da glicólise para a produção de ATP, o piruvato, o produto
final da glicólise, é convertido em lactato, que é então liberado da célula como
subproduto. A produção de CO2 e a oxidação de piruvato dependem da respiração
aeróbica e, portanto, não teriam fornecido
evidência para o efeito Warburg. O CO 2 é liberado como produto final da oxidação do

piruvato, e o piruvato é oxidado no ciclo do ácido cítrico como um prelúdio para a fosforilação
oxidativa na mitocôndria.
2–91
C. A piruvato quinase catalisa a etapa final de geração de ATP na glicólise e seria uma boa enzima
para atingir se alguém quisesse inibir a glicólise. Atualmente, vários compostos que visam a
glicólise estão em desenvolvimento como drogas anticancerígenas. As outras escolhas estão
incorretas porque todas estão envolvidas na respiração aeróbica: a acetil CoA e a isocitrato
desidrogenase atuam no ciclo do ácido cítrico e a cadeia de transporte de elétrons é central
para a fosforilação oxidativa.
2–92
B. As células que proliferam rapidamente têm requisitos aumentados para a síntese das
macromoléculas necessárias para o crescimento celular, e os intermediários na glicólise
podem ser prontamente desviados para vias de síntese macromolecular. A respiração
aeróbica, ao contrário, converte os átomos de carbono da glicose em CO 2, que não pode ser
usado para a síntese macromolecular. A alternativa A está incorreta, pois o NADH gerado na
glicólise é utilizado para produção de energia, não como fonte de elétrons para as reações
anabólicas utilizadas na produção de macromoléculas; o poder redutor necessário para a
síntese macromolecular é fornecido pelo NADPH. A alternativa C não está correta porque a
glicólise produz muito menos NADH do que a respiração aeróbica. A alternativa D não está
correta porque a glicólise não produz ácidos graxos. Os ácidos graxos também não são uma
importante fonte de energia para as células cancerígenas, uma vez que o metabolismo dos
ácidos graxos requer respiração aeróbica.
2–93
B. As células submetidas a taxas aumentadas de glicólise devem importar grandes quantidades
de glicose. Normalmente, os pacientes recebem uorodesoxiglicose, um derivado da glicose
que as células cancerígenas absorvem da mesma forma que a glicose. As outras escolhas
estão incorretas porque cada uma dessas moléculas é um produto da glicólise e não seria
captada pelas células que sofrem aumento da glicólise.
2–94
A. No mínimo, uma reação útil para produzir elétrons para redução de CO 2 e produção de energia
deve ocorrer com uma diminuição da energia livre, que é a definição de uma reação
energeticamente favorável. Além disso, deve liberar elétrons, o que a oxidação faz, não
consumi-los, como a redução faz.
2–95
B. Oxidação de H 2S a S e 2 H +
ocorre com diminuição da energia livre e libera
elétrons que podem ser utilizados para produção de energia ou redução de CO 2.
A opção A não está correta porque as células podem sobreviver com CO 2 como
sua única fonte de carbono, então elas devem ser capazes de gerar energia independentemente
da glicose. As opções C e D estão incorretas porque as reações de redução consomem
elétrons.
Respostas para Problemas Livro Capítulo 3 471
CAPÍTULO
Proteínas 3
NESTE CAPÍTULO
A FORMA E A ESTRUTURA DAS PROTEÍNAS
A FORMA E A ESTRUTURA
DEFINIÇÕES
DE PROTEÍNAS
3–1 Estrutura quaternária
FUNÇÃO DE PROTEÍNA
3–2 Hélice
3–3 Estrutura primária
3–4 Site de ligação
3–5 lente amiloide
3–6 espinha dorsal polipeptídica
3–7 Folha
3–8 domínio de proteína
3–9 estrutura secundária
VERDADEIRO FALSO
3–10 Verdadeiro. Em uma folha, as cadeias laterais de aminoácidos em cada fita são posicionadas
alternadamente acima e abaixo da folha. Essa relação pode ser vista na Figura 3–33
(consulte a Resposta 3–19), que mostra que os oxigênios da carbonila se alternam de um
lado da fita para o outro. Assim, cada fita em uma folha pode ser vista como uma hélice
na qual cada aminoácido sucessivo é girado 180°.
3–11 Falso. Regiões intrinsecamente desordenadas de proteínas normalmente têm sequências

de aminoácidos com baixa hidrofobicidade e alta carga líquida. A baixa hidrofobicidade
reduz o efeito da força hidrofóbica, que normalmente tende a conduzir a proteína a uma
estrutura mais condensada e ordenada.
Uma alta carga líquida (positiva ou negativa) empurra as regiões carregadas da proteína
para longe umas das outras. Em contraste, uma sequência de aminoácidos com alta
hidrofobicidade e baixa carga líquida tenderia a colapsar em uma estrutura definida.
3–12 Verdadeiro. Grupos químicos em tais alças salientes podem muitas vezes cercar um
molécula, permitindo que a proteína se ligue a ela com muitas ligações fracas.
3–13 Falso. Para que uma doença príon se espalhe de um organismo para outro, o segundo
organismo deve comer um tecido que contém um bril amilóide autopropagante. O gene
que codifica a proteína envolvida na formação do bril amilóide não está envolvido na
transmissão de um organismo para outro.
472 Capítulo 3: Proteínas
PROBLEMAS DE PENSAMENTO O O–
O8
3–14 A síntese de uma macromolécula com uma estrutura única requer que um único
estereoisômero seja usado em cada posição. Mudar um aminoácido de sua forma L para D
resultaria em uma proteína diferente. Assim, se uma mistura aleatória das formas D e L fosse N9
O7
usada para construir uma proteína, sua sequência de aminoácidos não especificaria uma única
estrutura, mas sim muitas estruturas diferentes (2n estruturas diferentes seriam formadas, onde
n é o número de aminoácidos na proteína). N8
O6
Por que os L-aminoácidos foram selecionados na evolução como os blocos de construção

O5
exclusivos das proteínas é um mistério; poderíamos facilmente imaginar uma célula na qual
N7
certos (ou mesmo todos) aminoácidos fossem usados nas formas D para construir proteínas,
desde que esses estereoisômeros particulares fossem usados exclusivamente.
3–15 N6
O4
A. O aquecimento das proteínas da clara do ovo as desnatura, permitindo que elas interajam umas
com as outras de maneiras que não seriam possíveis na temperatura mais baixa do oviduto da
galinha. Esse processo forma uma malha emaranhada de cadeias polipeptídicas. Além dessas N5
O3
interações, ligações dissulfeto intercadeias também se formam, de modo que a clara de ovo
cozida torna-se uma macromolécula gigante.
O2
N4
B. Dissolver clara de ovo cozida requer um detergente forte para superar as ligações intercadeias
não covalentes e mercaptoetanol para quebrar as ligações dissulfeto covalentes. Juntos, mas
não separadamente, os dois reagentes eliminam as ligações que mantêm as cadeias de O1 N3
proteínas emaranhadas no lugar.
Experimente você mesmo!
N2
3–16 Em uma hélice, o oxigênio carbonílico do primeiro aminoácido faz pontes de hidrogênio com o
nitrogênio amida do aminoácido 5 (Figura 3–30). Assim, não pode haver nenhuma hélice menor
que cinco aminoácidos. A única ligação de hidrogênio que seria formada com cinco aminoácidos
dá muito pouca estabilidade à estrutura para que qualquer helicidade seja detectada. Apenas N1 H3+
com seis aminoácidos — duas pontes de hidrogênio — você começa a detectar alguma
helicidade. A helicidade torna-se cada vez mais aparente à medida que mais aminoácidos, Figura 3–30 Esquema de uma hélice,
mostrando o padrão de ligações de hidrogênio
portanto, mais ligações de hidrogênio, são adicionados.
entre os oxigênios da carbonila e os
nitrogênios das amida dentro da hélice (Resposta 3–16).
3–17 As extremidades das hélices, como os aminoácidos polares, são quase sempre encontradas
na superfície de uma proteína onde podem interagir com moléculas polares de água. Além de
sua carga parcial, os esqueletos dos quatro aminoácidos em cada extremidade da hélice
carregam grupos de ligações de hidrogênio que são insatisfeitos por ligações de hidrogênio
dentro da hélice (Figura 3-31). Esses grupos também aumentam a polaridade dos terminais das O
hélices. O
O
d–
3–18 As primeiras duas sequências peptídicas, mas não a terceira, dariam origem anfifílica
O
hélices, conforme mostrado na Figura 3–32.
3–19 Conforme ilustrado na Figura 3–33, as três primeiras fitas da folha são antiparalelas a suas vizinhas,
enquanto a quarta fita é paralela à terceira.
3–20
D. Como as cadeias laterais dos aminoácidos se projetam alternadamente acima e abaixo da folha, N
uma sequência que pode formar uma fita em uma folha anfifílica deve ter aminoácidos
hidrofóbicos e hidrofílicos alternados. N
Apenas a opção D satisfaz esta condição. N d+
N
3–21 Nenhuma dessas dobras daria um nó quando esticada. Este é um princípio geral: as proteínas se
dobram sem formar nós. Pode-se imaginar que seria difícil enfiar a ponta de uma proteína por Figura 3–31 Representação de uma hélice
mostrando dipolo e grupos de ligação de
um laço interno para formar um nó. Um caminho de dobramento para uma forma tão nodosa
hidrogênio insatisfeitos em suas extremidades (Resposta 3–17).
pode não ser alcançável por meio de movimentos aleatórios em um tempo razoável. Os e Ns não ligados a hidrogênio são
rotulados.
A FORMA E A ESTRUTURA DAS PROTEÍNAS 473
PEPTÍDEO 1 PEPTÍDEO 2 PEPTÍDEO 3
E S k F eu R
R E EM
F EM
81 81 81
15 12 R 15 12 15 12
K S EM
R S
R
4 5 4 5 4 5
D T A eu
11 16 R 11 16
EU
11 16
eu 18 9 M S 18 9 EM EU
18 9 k
7 2 7 2 7 2
EU
eu R eu EM eu
14 13 14 13 14 13
F 6 EM R
3 T 3 6 eu
3 6
EU
10 17 10 17 10 17
EU
EM
EU
eu F R
EM F F eu EU
eu
3-22 As fitas antiparalelas são comumente formadas por uma cadeia polipeptídica que se dobra Figura 3-32 Disposição dos aminoácidos das
três sequências peptídicas em torno das
sobre si mesma. Assim, apenas alguns aminoácidos são necessários para permitir que
rodas da hélice (Resposta 3-18).
a cadeia polipeptídica faça a curva. Por outro lado, os filamentos paralelos devem ser
conectados por uma cadeia polipeptídica que seja pelo menos tão longa quanto os
filamentos da folha. Para um peptídeo longo, uma solução comum para satisfazer os
requisitos de ligação de hidrogênio do esqueleto é uma hélice (Figura 3-34).
3–23 As proteínas obviamente não podem pesquisar todas as conformações possíveis em seu
caminho para encontrar a correta. Assim, devem ser denidos caminhos que simplifiquem
a busca. Acredita-se agora que as interações fracas rapidamente causam o colapso da
proteína em um glóbulo fundido, no qual as interações de ligação são transitórias e as
cadeias mantêm a fluidez. Dentro do glóbulo fundido, estruturas secundárias muito
fracas se formam e desaparecem, assim como as interações terciárias. A formação de
pequenos elementos de estrutura secundária correta, estabilizada por interações
terciárias apropriadas, parece então nuclear a formação da estrutura final. Essa via
geral de dobramento representa uma luta entre a maximização da entropia, que tende
a manter a proteína o mais aleatória possível, e a minimização da entalpia através da
formação de ligações fracas. Números crescentes de interações fracas puxam a
estrutura através de uma sucessão de estados cada vez mais bem definidos até a
conformação final. Essa conceituação de dobramento foi comparada a um funil e é
comumente chamada de funil de dobramento, com várias rotas de progresso no funil
acompanhadas por um aumento nas estruturas semelhantes a nativas.
Referência: Fersht A (1999) Estrutura e Mecanismo em Ciência de Proteínas, pp 575–

600. Nova York: WH Freeman.
FITAS ANTIPARALÉIS
N N
N
N
N N
N
N N
N de lisozima
N
N FICOS PARALELOS
N N
N
N N
N
N
N
N
da álcool desidrogenase
Figura 3–33 Um segmento de folha Figura 3–34 Conexões entre filamentos

mostrando a polaridade (N a C) dos antiparalelos e paralelos de uma folha
fios individuais (Resposta 3–19). (Resposta 3–22).
3-24 Muitas sequências diferentes de aminoácidos podem dar origem a dobras de proteínas idênticas.
As muitas diferenças de aminoácidos entre as proteínas do homeodomínio da levedura e
da Drosophila estão entre as muitas possíveis que não alteram o dobramento e a função.
Esta questão poderia ter sido formulada de outra forma; ou seja, quantas mudanças de
aminoácidos são necessárias para converter, digamos, uma hélice em uma folha? A
resposta é: surpreendentemente poucos. Essas duas respostas ressaltam a dificuldade em
prever a estrutura da proteína
a partir de sequências de aminoácidos.
3–25
A. A proteína na Figura 3-5 é composta por dois domínios. A proteína pode ser clivada no
segmento peptídico exposto que liga os dois domínios (Figura 3-35). Fragmentos que
correspondem a domínios individuais provavelmente serão dobrados corretamente. É
experiência comum que os domínios isolados são mais fáceis de cristalizar do que a
proteína inteira. A capacidade de formar um cristal
B. depende das características da superfície da proteína porque ela deve ser capaz de
interagir consigo mesma em um padrão repetitivo para formar um cristal. Proteínas
homólogas de espécies diferentes, que se enovelam da mesma maneira (como as proteínas
do homeodomínio no Problema 3-24), diferem sutilmente em suas características de
superfície. Como resultado, a proteína de uma espécie pode cristalizar facilmente, enquanto Figura 3–35 Proteína ativadora de catabólitos
a de outra espécie pode não cristalizar. Às vezes, uma única mudança de aminoácido faz (Resposta 3–25). A seta mostra o local de
clivagem no segmento peptídico exposto que
toda a diferença.
liga os dois domínios.
3-26 De um modo geral, uma identidade de pelo menos 30% é necessária para ter certeza de que
uma correspondência foi encontrada. Correspondências de 20% a 30% são problemáticas
e difíceis de distinguir do “ruído” de fundo. A busca por parentes distantes com toda a
sequência geralmente reduz a identidade geral para menos de 30% porque as porções
menos conservadas da sequência dominam a comparação. Assim, pesquisar com porções
mais curtas e conservadas da sequência oferece a melhor chance de encontrar parentes
distantes.
3–27 A estreita justaposição dos terminais N e C deste domínio kelch o identifica como um
domínio do tipo “plug-in”. Os domínios do tipo “em linha” têm seus terminais N e C em lados
opostos do domínio.
3-28 Conforme mostrado na Figura 3-36, os três monômeros de proteína têm propriedades de
montagem distintamente diferentes por causa do arranjo tridimensional de suas superfícies
de ligação complementares. O monômero A seria montado em uma folha; o monômero B
se reuniria em uma longa cadeia; o monômero C se reuniria em um anel composto de
quatro subunidades.
(A)
3–29 A opção B () é o único arranjo dos sítios de ligação do DNA que corresponde ao arranjo das
subunidades no dímero Cro “cabeça-a-cabeça”. O DNA que corresponde a tal arranjo é
conhecido como palindrome:
ATCG.CGAT
TAGC GCTA
A rotação desta sequência em 180° em torno do ponto central fornece uma sequência
(B)
idêntica, assim como a rotação das setas (). Isso demonstra que o dímero Cro e sua
sequência de reconhecimento têm a mesma simetria, como esperado.
3–30 dímeros “cabeça-cauda” têm sítios de ligação insatisfeitos em cada extremidade, o que (C)
levaria à formação de cadeias (ver Figura 3-36B).
3–31 As proteínas 1, 3, 4 e 5 podem formar dímeros cabeça-a-cabeça, conforme ilustrado para a

proteína 1 na Figura 3-37A. Todas as superfícies de ligação que permitem que as proteínas Figura 3–36 Montagem de monômeros
interajam são complementares. e superfícies de encadernação que permitem duas cópias de proteína (Resposta 3–28).
A FORMA E A ESTRUTURA DAS PROTEÍNAS 475
(A)
de uma proteína para formar um dímero “cabeça-a-cabeça” deve ser + –
autocomplementar porque eles se ligam a si mesmos. Para ser autocomplementar, d
– +
a
metade do sítio de ligação deve ser complementar à outra metade. Isso significa a d
que as duas metades podem ser dobradas uma sobre a outra, com ligação
apropriadamente combinada, através de uma linha traçada através do centro do
sítio de ligação, conforme ilustrado para a superfície de ligação da proteína 1 na
Figura 3-37B . Não há linha através da qual as proteínas 2 e 6 possam ser (B)
+ –
dobradas para fazer com que seus parceiros de ligação correspondam. A inclusão
de saliências e invaginações não teria alterado este princípio geral: as superfícies d a
de ligação complementares podem ser dobradas de modo que uma saliência de

um lado seja inserida em uma invaginação do outro lado.
Figura 3–37 Autocomplementaridade em
3–32 O segmento da bobina 1A da lâmina nuclear C corresponde à repetição do heptad proteínas (Resposta 3–31). (A) Formação de
em 9 das 11 posições (Figura 3-38), o que é muito bom. A correspondência não precisa dímeros cabeça-a-cabeça. (B) Superfície de
encadernação autocomplementar.
ser perfeita para permitir a formação de uma bobina enrolada. As correspondências com
a repetição do heptad nos outros dois segmentos marcados (bobina 1B e bobina 2,
consulte a Figura 3–9) não são tão boas, mas ainda são aceitáveis para a formação de
uma bobina espiralada.
aminoácidos hidrofóbicos Figura 3–38 Motivo de repetição heptal na região
da bobina 1A da lâmina nuclear C (Resposta 3–
* * ***** * * **** **
32). Os aminoácidos hidrofóbicos estão
DLQELNDRLAVYIDRVRSLETENAGLRLRITESEEVV marcados com um asterisco (*). Quando
-A--D---A--D---A--D---A--D---A--D---A um aminoácido hidrofóbico ocorre na posição
++++++-++- + A ou D na repetição heptad, é atribuído a ele um
correspondências com repetição heptal + e destacado em amarelo.
O início da repetição do heptal foi
posicionado para maximizar as correspondências.
Referência: McKeon FD, Kirschner MW & Caput D (1986) Homologias na estrutura
primária e secundária entre envelope nuclear e proteínas intermediárias de lamentação.
Natureza 31, 463–468.
CÁLCULOS
3–33 No equilíbrio haveria 1 proteína não dobrada para cada 107 proteínas dobradas. Essa razão
vem da substituição de valores para G° (41,5 kJ/mol), R e T na equação e resolução
para logK:
logK = (41,5)/[(–2,3) × (8,3 × 10–3) × (310)] = –7
Como K = [U]/[F],
logK = log ([U]/[F]) = –7
Tomando o logaritmo de ambos os lados,
[U]/[F] = 10–7, ou [U] = 10–7 [F]
3–34 Como existem 20 aminoácidos possíveis em cada posição em uma proteína de 300
aminoácidos, existem 20.300 (que são 10.390) proteínas possíveis. A massa de uma
cópia de cada proteína possível seria
110 d 300 aa
massa = × × 10390 proteínas ×
aa proteína g 6 × 1023 d
massa = 5,5 × 10370 g
Assim, a massa da proteína excederia em muito a massa do universo observável

(1080 g); mais precisamente por um fator de cerca de 10290!
TRATAMENTO DE DADOS
3–35 Se o desdobramento da proteína simplesmente refletisse a titulação de uma histidina

enterrada, deveria requerer 2 unidades de pH para ir de 9% a 91% de conclusão. A
curva de desdobramento real leva apenas 0,3 unidades de pH para abranger esse
intervalo. essa transição aguda indica um processo altamente cooperativo; quando a proteína
começa a se desdobrar, ele completa o processo rapidamente. Por exemplo, pode ser
que várias histidinas enterradas possam se ionizar quando a cadeia começa a se
desdobrar, de modo que, quando uma sai, todas vão juntas. Observe também que
assim que uma histidina enterrada (pKa de 4 neste exemplo) torna-se acessível ao
solvente, seu pKa mudará para seu valor normal de 6, aumentando significativamente
sua curva de titulação.
Referência: Creighton TE (1993) Proteins, 2ª ed, pp 288–289. Nova York: WH Freeman.
3–36
Esses dados são consistentes com a hipótese de que o comportamento de mola da titina
é devido ao desdobramento sequencial dos domínios de Ig. Primeiro, o fragmento
continha sete domínios de Ig e há sete picos na curva de força versus extensão. Além
disso, os próprios picos são o que você pode esperar do desdobramento sequencial.
Em segundo lugar, na presença de um desnaturante de proteína, condições em que os
domínios já estarão desdobrados, os picos desaparecem e a extensão por unidade de
força aumenta. ird, quando os domínios são interligados e, portanto, incapazes de
desdobrar, os picos desaparecem e a extensão por unidade de força diminui.

B. O espaçamento entre os picos, cerca de 25 nm, é quase exatamente o que você
calcularia para o desdobramento sequencial dos domínios de Ig. O domínio dobrado
ocupa 4 nm, mas quando desdobrado, seus 89 aminoácidos se estenderiam até cerca
de 30 nm (89 × 0,34 nm), uma variação de 26 nm.
C. A existência de picos separados e discretos significa que cada domínio se desdobra
quando uma força característica é aplicada, implicando que cada domínio tem uma
estabilidade definida. A coleção de domínios se desdobra na ordem do menos estável
ao mais estável. nós, é preciso um pouco mais de força a cada vez para desdobrar o
próximo domínio.
D. O súbito colapso da força em cada evento de desdobramento reflete um princípio
importante do desdobramento de proteínas; ou seja, a sua cooperatividade. As
proteínas tendem a se desdobrar no modo tudo ou nada (veja o Problema 3-35). Um
pequeno número de pontes de hidrogênio é crucial para manter o domínio dobrado
unido (Figura 3-39). A quebra desses vínculos desencadeia o desenvolvimento
cooperativo.
Referência: Rief M, Gutel M, Oesterhelt F, Fernandez JM & Gaub HE (1997)

Dobramento reversível de domínios individuais de imunoglobulina de titina por AFM.
Ciência 276, 1109–1112.
3–37
A. Nenhum é detectado neste experimento. Tratar primeiro com NEM radiomarcado mostra
que muitas proteínas citosólicas têm cisteínas que não estão ligadas por ligações
dissulfeto. O tratamento primeiro com NEM não marcado para bloquear esses locais,
seguido por DTT para quebrar as ligações dissulfeto, deve expor quaisquer grupos –SH
que foram ligados por ligações dissulfeto. Esses grupos SH recém-expostos devem ser
marcados por tratamento subsequente com NEM radiomarcado. A ausência de
marcação indica que nenhuma cisteína estava envolvida nas ligações dissulfeto.
B. A BSA e a insulina são marcadas extensivamente somente após suas ligações dissulfeto
terem sido quebradas pelo tratamento com DTT. Na ausência de tratamento com DTT,
a BSA é fracamente rotulada. Uma vez que a BSA tem um número ímpar de cisteínas,
pelo menos uma não pode estar envolvida nas ligações dissulfeto. A análise estrutural Figura 3–39 Ligações de hidrogênio que prendem
confirma que uma de suas 37 cisteínas não está envolvida em uma ligação dissulfeto. o domínio em sua conformação dobrada (Resposta
3–36). As pontes de hidrogênio indicadas (linhas
verdes), quando quebradas, desencadeiam o
desdobramento do domínio. Se você comparar
C
esse diagrama topológico com a estrutura
tridimensional da Figura 3-11A, poderá identificar
N
os dois
cadeias que estão envolvidas na formação
dessas ligações de hidrogênio.
FUNÇÃO DE PROTEÍNA 477
C. Como o RE é o local onde a formação de ligações dissulfeto é catalisada na

preparação para a exportação de proteínas, espera-se que os lisados de células que
possuem membranas internas tenham muitas proteínas com ligações dissulfeto.
FUNÇÃO DE PROTEÍNA
DEFINIÇÕES
3–38 Proteína Scaold
3–39 Inibição de feedback
3–40 Anticorpo
3–41 Site ativo
3–42 Enzima
3–43 Ubiquitina
3–44 Ligação
3–45 Proteína quinase
3–46 Estado de transição
3–47 Proteína alostérica
3–48 Proteômica
3–49 Coenzima
VERDADEIRO FALSO
3–50 Falso. Os valores de pKa de grupos específicos de cadeias laterais dependem criticamente
do ambiente. Na superfície de uma proteína, na ausência de grupos carregados
circundantes, o pKa de um grupo carboxila é geralmente próximo ao do aminoácido
livre. Na vizinhança de grupos carregados negativamente, o pKa de um grupo
carboxila geralmente é maior; ou seja, o próton se dissocia menos prontamente,
pois o aumento da densidade local de carga negativa não é favorecido. O oposto é
verdadeiro em um ambiente carregado positivamente. Em ambientes hidrofóbicos, a
dissociação de um próton pode ser substancialmente suprimida, uma vez que a
presença de uma carga nua em tal ambiente é altamente desfavorável. É essa
capacidade de alterar as reatividades de grupos individuais que permite que as
proteínas ajustem suas funções biológicas.
3–51 Falso. Supondo que a estrutura tridimensional de pelo menos um membro da família
seja conhecida, seria possível usar o rastreamento evolutivo - ajustando a sequência
primária à estrutura - para determinar onde os aminoácidos conservados se
agrupam nas superfícies das proteínas. Aglomerados de aminoácidos conservados
provavelmente correspondem a regiões importantes, como aquelas envolvidas na
ligação a ligantes específicos ou outras proteínas.
Saber onde esses locais de ligação residem na superfície não identifica a função da
proteína. Você não saberia se a proteína era uma enzima ou uma proteína estrutural,
ou a que ela se ligava. Alguma outra abordagem, geralmente bioquímica, seria
necessária para elucidar a função.
3–52 Falso. O número de renovação é constante, pois é Vmax dividido pela concentração da
enzima. Por exemplo, um aumento de duas vezes na concentração da enzima daria
um Vmáx duas vezes maior, mas daria o mesmo número de renovação: 2 Vmáx/2
[E] = k3.
3–53 Verdadeiro. O termo cooperatividade incorpora a ideia de que mudanças na conformação

de uma subunidade são comunicadas às outras subunidades em qualquer conjunto
multimérico dado, de modo que todas essas subunidades estejam na mesma
conformação. Normalmente, essas subunidades são idênticas; entretanto, na
hemoglobina, por exemplo, existem quatro subunidades de dois tipos um tanto
diferentes.
3–54 Verdadeiro. Cada ciclo de fosforilação-desfosforilação hidrolisa uma molécula de ATP; no

entanto, não é um desperdício no sentido de não ter nenhum benefício. A ciclagem
constante permite que a proteína regulada mude rapidamente de um estado para
outro em resposta a estímulos que requerem ajustes rápidos do metabolismo ou
função celular. Essa é a essência da regulamentação efetiva.
3–55 Falso. Embora muitas das mudanças conformacionais induzidas pela ligação do ligante
sejam relativamente pequenas, em alguns casos essas mudanças locais são
propagadas através de uma molécula para dar origem a mudanças de mais de um
nanômetro. A mudança conformacional desencadeada pela hidrólise do GTP por EF-
Tu, por exemplo, permite que dois domínios da proteína se separem por 4
nm.
3–56 As proteínas anticongelantes funcionam ligando-se a minúsculos cristais de gelo e

interrompendo seu crescimento, evitando assim que o peixe congele. Cristais de gelo
que se formam na presença de proteínas anticongelantes são anormais porque suas
superfícies são curvas em vez de retas. As várias formas de proteínas anticongelantes
nessas células são todas compostas de repetições de um peptídeo de glicotripa
simples (r-Ala/Pro-Ala) com um dissacarídeo ligado a cada treo nove. Os genes
dessas proteínas anticongelantes foram aparentemente derivados da duplicação
repetida de um pequeno segmento de um gene de protease.
Referências: Cheng CHC & Chen L (1999) Evolução de uma proteína anticongelante.
Natureza 401, 443–444.
Jia Z & Davies PL (2002) Proteínas anticongelantes: uma interação incomum receptor-
ligante. Tendências Bioquímica. ciência 27, 101–106.
3–57 Espera -se que a ordem de classificação para a proporção de aspartatos na forma
–COO– seja 4, 1, 2, 3. É conveniente discutir a ordem de classificação começando
com o grupo carboxila da cadeia lateral do aspartato na superfície de um pro teína
sem outros grupos ionizáveis próximos (1). Esperava-se que a cadeia lateral tivesse
um pKa em torno de 4,5, um pouco maior do que o observado no aminoácido livre
devido à ausência da influência do grupo amino carregado positivamente, que está
envolvido na ligação peptídica da proteína. Se a cadeia lateral estivesse enterrada
em um bolso hidrofóbico na proteína (2), seu pKa seria maior, com menos na forma
de –COO–, porque a presença de uma carga em um ambiente hidrofóbico (sem a
fácil ligação à água ) seria desfavorecido. Se houvesse outra carga negativa no
mesmo ambiente hidrofóbico (3), o pKa da cadeia lateral do aspartato seria ainda
mais elevado (ainda mais difícil abrir mão de um próton e ficar carregado) por causa
da repulsão eletrostática. Se houvesse um grupo carregado positivamente no mesmo
ambiente (4), então a atração eletrostática favorável tornaria muito fácil a saída do
próton, diminuindo o pKa mesmo abaixo do da cadeia lateral na superfície (1).
3–58 Para se ligar à valina, a valil-tRNA sintetase usa uma bolsa de ligação com o formato
adequado que é revestida com resíduos hidrofóbicos. Tal sítio de ligação permite que
a valina se ligue bem, mas não exclui totalmente a treonina, que tem o mesmo formato
e um único grupo hidroxila polar (Figura 3-40). e
local 1 local 2 Figura 3–40 Os dois locais de ligação

O
para valina e treonina na valil-tRNA
sintetase (Resposta 3–58).
H3C CH3 H3C OH
CH CH
CH CH
+H3N COO– +H3N CO
tRNA
O segundo sítio de ligação é muito mais específico para a treonina porque contém
um aceptor de ligação de hidrogênio adequadamente posicionado que faz uma
ligação de hidrogênio específica com a treonina, mas não com a valina. Embora a
valina não consiga entrar no local, ela não consegue se ligar fortemente e, portanto,
é um substrato muito ruimProblemas
para a reação
p3.46/3.40de hidrólise.
3–59 O problema é que a taxa de oxigênio para o complexo anticorpo-enzima é muito

lenta. Para que o peptídeo desloque a enzima da coluna, a enzima deve primeiro se
dissociar do anticorpo. Os sítios de ligação do anticorpo seriam então rapidamente
ligados pelo peptídeo, cuja alta concentração impediria que a enzima se ligasse
novamente ao anticorpo (qualquer sítio de ligação do anticorpo recém-exposto seria
ligado pelo peptídeo).
Em princípio, você pode embeber a coluna com peptídeo por vários dias (para várias
meias-tempos de dissociação, consulte o Problema 3-77), mas isso geralmente tem
consequências adversas para a qualidade e atividade da preparação da enzima.
Em geral, anticorpos de alta anidade têm taxas lentas e são inadequados para
cromatografia de anidade.
Procedimentos especiais foram desenvolvidos para preparar ou identificar
anticorpos que funcionam em tais experimentos. Normalmente, são usados
anticorpos de baixa anidade ou a cromatografia é realizada em condições especiais
que reduzem a anidade do anticorpo.
Referência: ompson NE & Burgess RR (1996) Purificação imunológica de RNA

polimerase II e fatores de transcrição usando anticorpos monoclonais responsivos a
poliol. Métodos Enzimol. 274, 513–526.
3–60 A taxa de reação para a enzima alterada seria substancialmente mais lenta do
que para a enzima normal. A taxa de reação está relacionada à energia de ativação,
que é a diferença de energia entre o vale marcado como ES na Figura 3-15 e o
estado de transição: quanto maior a energia de ativação, mais lenta a taxa. Se a
enzima alterada se ligasse ao substrato com maior anidade (um mínimo ES menor),
então a energia de ativação aumentaria e a reação desaceleraria.
3–61
D. Como uma enzima tem um número fixo de sítios ativos, a velocidade da reação não
pode mais ser aumentada uma vez que a concentração do substrato seja suficiente
para se ligar a todos os sítios. É a saturação dos sítios de ligação que leva ao
comportamento de saturação de uma enzima. As outras afirmações são todas
verdadeiras, mas nenhuma é relevante para a questão da saturação.
3–62
A. Como k1 corresponde à taxa on e k–1 corresponde à taxa o,
Kd = [E][S]/[ES] = ko/ kon = k–1/k1
B. Km é aproximadamente igual a Kd quando kcat é muito menor que k–1; ou seja,

quando o complexo ES se dissocia muito mais rapidamente do que o substrato é
convertido em produto. Isso é verdade para muitas enzimas, mas não para todas.
C. Como kcat está no numerador da expressão para Km, Km sempre será um pouco
maior que Kd. Uma vez que valores mais baixos de Kd indicam maior
anidade de ligação, Km sempre subestimará a anidade de ligação. Quando kcat for

muito menor que k–1, a subestimação será pequena e Km será essencialmente igual
a Kd.
3-63 Todas as explicações têm em seu cerne a ideia de que a quantidade de enzima ativa por
proteína total (a atividade específica da enzima) é 10 vezes menor em bactérias. Tal
situação pode surgir por vários motivos: 90% da enzima pode se dobrar incorretamente
nas bactérias; um cofator essencial da enzima, que normalmente está fortemente
ligado, pode ser limitante em bactérias, de modo que apenas 10% das moléculas de
enzima o adquirem. Essas explicações, que propõem que existem 10% de enzimas
normalmente ativas entre moléculas mortas, explicam naturalmente a observação de
que o Km é idêntico (Km é independente da concentração da enzima ativa) enquanto
o Vmax é menor (Vmax é dependente da concentração de enzima ativa).
(Uma sugestão comum é que a enzima nas bactérias se dobra de modo que cada
molécula tenha 10% da atividade normal. Essa possibilidade pode ser descartada
porque a atividade mais baixa de cada molécula apareceria como uma mudança no
Km, bem como no Vmax . )
3–64
A. Espera-se que uma enzima composta inteiramente de aminoácidos espelhados se dobre
de forma estável em uma conformação espelhada; ou seja, ela se pareceria com a
enzima normal quando vista em um espelho.
B. Espera-se que uma enzima com imagem especular reconheça a imagem especular de
seu substrato normal. Assim, seria esperado que a “D” hexoquinase adicionasse um
fosfato à L-glicose e ignorasse a D-glicose.
Esse experimento foi realmente feito para a protease do HIV. e espelho
A protease de imagem reconhece e cliva um substrato de imagem espelhada.
Referência: Milton RC, Milton SC & Kent SB (1992) Síntese química total de uma
enzima D: os enantiômeros da protease do HIV-1 apresentam especificidade de
substrato quiral recíproco. Ciência 256, 1445-1448.
3–65 O fosfoglicolato é um análogo do estado de transição para a reação da triosefosfato

isomerase. Tem as duas características que definem um análogo do estado de
transição: assemelha-se ao intermediário da reação e liga-se com mais força (aqui,
cerca de 15 vezes mais forte) do que os substratos.
Referências: Kyte J (1995) Mechanism in Protein Chemistry, pp 207–208.

Nova York: Garland Publishing.
Pauling L (1948) Realização química e esperança para o futuro. Sou. ciência 36, 50–
58.
3–66
A. As cadeias laterais de aminoácidos em proteínas geralmente têm valores de pKa
bastante diferentes daqueles em solução. Glu35 não tem carga porque seu ambiente
local é apolar, o que torna a ionização menos favorável (aumenta seu pKa). O ambiente
local do Asp52 é mais polar, permitindo a ionização próximo ao seu pKa de solução.
B. À medida que o pH cai abaixo de 5, o Asp52 capta um próton e se torna não ionizado,
interferindo no mecanismo. À medida que o pH sobe acima de 5, o Glu35 começa a
liberar seu próton, interferindo também no mecanismo.
3–67 Esta pergunta simples exigiu décadas de pesquisa para fornecer uma resposta
completa e satisfatória. No nível mais simples, a hemoglobina liga o oxigênio
eficientemente nos pulmões porque a concentração (pressão parcial) de oxigênio é
mais alta lá. Nos tecidos, a concentração de oxigênio é menor porque ele está sendo
constantemente consumido no metabolismo. Assim, a hemoglobina tenderá a liberar
(ligar menos) oxigênio nos tecidos. é
a tendência natural - um efeito no equilíbrio de ligação - é intensificada por

interações alostéricas entre as quatro subunidades da molécula de hemoglobina.
Como consequência, muito mais oxigênio é liberado nos tecidos do que seria
previsto por um simples equilíbrio de ligação.
3–68 Quando [S] >> Km, a enzima estará virtualmente saturada com substrato o tempo todo
e capaz de operar na taxa máxima, independente de pequenas flutuações na
concentração de substrato. Para muitas enzimas que usam ATP e um segundo
substrato, como fazem as proteínas quinases, o Km para ATP é geralmente muito
baixo (alguns ÿM para a maioria das proteínas quinases) em relação à
concentração de ATP na célula (1–2 mM). Esta situação permite que as quinases
operem de forma eficaz independentemente das flutuações típicas na concentração
de ATP. Nessas condições, a taxa de fosforilação depende apenas da concentração
do outro substrato.
Quando [S] ÿ Km, a velocidade da reação catalisada pela enzima irá variar
proporcionalmente às mudanças na concentração do substrato. Esta é a situação
típica para a maioria das enzimas envolvidas nas vias metabólicas, o que lhes
permite acompanhar o fluxo variável ao longo da via.
Quando [S] << Km, a enzima estará praticamente desocupada pelo substrato
e estará operando muito abaixo de sua taxa máxima. Essa é uma estratégia que
pode ser usada, por exemplo, se várias enzimas diferentes extraírem um pool
comum de substrato. Uma enzima com alto Km usaria apenas uma pequena
fração do pool, a menos que a concentração do substrato aumentasse
dramaticamente. Essa estratégia é empregada em animais para direcionar a
glicose para o metabolismo. A maioria das células do corpo usa hexoquinase, que
tem um Km baixo, para adicionar fosfato à glicose para iniciar seu metabolismo.
Por outro lado, as células do fígado usam a glucoquinase, que possui um Km alto,
para realizar essa reação. Entre as refeições, a glicose circulante é direcionada
principalmente para células não hepáticas, que usam a enzima hexoquinase de
baixo Km . Após as refeições, quando a concentração circulante de glicose é muito
maior, o fígado captura uma fração muito maior (porque a atividade da glicoquinase
aumenta muito mais com maior concentração de substrato do que a atividade da
hexoquinase). O fígado utiliza grande parte dessa glicose para produzir glicogênio,
que serve como reserva de glicose para uso entre as refeições.
3–69
C. As células não podem influenciar as taxas de difusão, que são limitadas por
parâmetros físicos além do controle da célula. As células podem diminuir o tempo
que leva para os substratos alcançarem uma enzima, no entanto, aumentando a
concentração da enzima ou ligando enzimas relacionadas em complexos multienzimáticos.
3–70 Uma proposta razoável seria que o excesso de AMP inibisse o feedback da enzima
para converter E em F, e o excesso de GMP para o feedback inibisse a etapa de
E para H. O intermediário E, que então se acumularia, inibiria o feedback da etapa
de R5P para A. Algumas vias ramificadas são reguladas exatamente dessa
maneira. Entretanto, a síntese de nucleotídeos purínicos é regulada de forma
diferente (Figura 3-41). AMP e GMP regulam as etapas de E para F e de E para
H, como acima, mas também regulam a etapa de R5P para A. A regulação por
AMP e GMP nesta etapa pode parecer problemática, pois sugere que um aumento
em AMP, por exemplo, poderia fechar todo o caminho mesmo na ausência de
GMP. A célula usa muito
100% FG AMP
50%
R5P A B CD E
50%
100% OI Figura 3-41 Padrão de inibição na via
GMP
metabólica para a síntese de nucleotídeos
purínicos (Resposta 3-70).
Problemas p3.48/3.41/A3.2

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382 Capítulo 17: O Ciclo Celular

Experimentar 1 2 3 entrada na fase S

1 EGF PDF IGF1 12 horas

2 EGF IGF1 PDF 12 horas

3 PDF EGF IGF1 1 hora

4 PDF IGF1 EGF 6 horas

5 IGF1 EGF PDF 12 horas

6 IGF1 PDF EGF 6 horas

(contendo soro e nutrientes) na presença de 3H-timidina. Em vários momentos depois disso,

CONTROLE DA DIVISÃO CELULAR E CRESCIMENTO CELULAR 383

CÉLULAS DE TIPO SELVAGEM

tempo = 0 tempo = 10 horas

raios-x, que causam quebras cromossômicas e acompanham seu crescimento pelas

Um dos sete mutantes Rad tem um fenótipo surpreendentemente diferente.

384 Capítulo 17: O Ciclo Celular

TABELA 17–4 Cepas mutantes que afetam o checkpoint de entrada mitótica

Atraso mitótico em resposta a

cepas mutantes DNA danificado DNA não replicado

Rad24 Não Sim

Cdc2-3w Sim Não

Hus1 Não Não

Hus2 Não Não

Rad1 Não Não

Cdc2-F15 Sim Não

(A) ESTADO ESTACIONÁRIO A 25°C tamanho limite para

(B) MUDANÇA ATÉ 37°C tamanho

(C) ESTADO ESTACIONÁRIO A 37°C tamanho

CONTROLE DA DIVISÃO CELULAR E CRESCIMENTO CELULAR 385

a superexpressão de ciclina D e Cdk4 causa aumento celular em células pós-

17–123 Como você pode testar se as células entraram em mitose?

17–124 Você supõe que o bloqueio do crescimento da membrana desencadeia uma

ciclina Quinase ativadora

386 Capítulo 17: O Ciclo Celular

proteína anti-apoptótica Bcl2 anti- complexo de sinalização indutora de morte (DISC)

18–5 Programa apoptótico desencadeado pela ligação de um sinal extracelular

18–6 Molécula sinalizadora extracelular que inibe a apoptose.

388 Capítulo 18: Morte Celular

apoptose induzida por danos no DNA.

18–15 O desenvolvimento do nematóide Caenorhabditis elegans gera exatamente 959 células

18–18 Em contraste com suas anormalidades cerebrais semelhantes, camundongos recém-nascidos

de problemas clínicos. Em contraste com esses pacientes, indivíduos heterozigotos para

MORTE CELULAR 389

receptores ligando (A)

Figura 18–3 A ligação do ligante trimérico Fas ao Fas (Problema 18–19).

Para responder a essa pergunta fundamental, você fundiu o gene da proteína

porta? Explique seu raciocínio. 4

390 Capítulo 18: Morte celular

ativado Figura 18–6 Ativação desencadeada pelo

Olhar Bax oligomérico

Atrás Bak oligomérica

Bak–/– tratados com tBid.

MORTE CELULAR 391

Tratamento Efeito Oferta-/- Olhe olhe-/-

Fas ligante Ativa Fas Sim Sim

estaurosporina Inibe proteínas quinases Sim Não

luz UV Danifica o DNA Sim Não

Etoposídeo Inibe a topoisomerase II Sim Não

tunicamicina Bloqueia a glicosilação ligada a N Sim Não

tapsigargina Inibe a bomba de Ca2+ Sim Não

18–24 Um papel importante do Fas e do ligante Fas é mediar a eliminação de células

392 Capítulo 18: Morte Celular

18–26 Qual das seguintes hipóteses explica melhor o papel do profissional

18–27 A descoberta de que o citocromo c promove a apoptose concentrou a atenção em