Apoptose

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Conceito: morte celular programada, evento fisiológico (processo de eliminação

controlado), sequência de eventos que levam a morte celular em uma variedade de
sistemas.

Funções:

eliminar células danificadas/prejudiciais

renovação de células epiteliais e hematopoéticas

manutenção do número constante de células nos tecidos adultos

-células em excesso são geradas durante o desenvolvimento do sistema nervoso.

Estas células morrem por apoptose
-alta taxa de apoptose no sistema nervoso de vertebrados em desenvolvimento faz
o ajuste do número de células nervosas para o número de células-alvo que se
conectam com o nervo.
excesso de morte celular: doenças neurodegenerativas

papel importante no desenvolvimento embrionário

mecanismo de defesa

Como ocorre: as células apoptóticas se encolhem e condensam, o citoplasma

colapsa, o envelope nuclear se desfaz e a cromatina nuclear se condensa e se
quebra em fragmentos, a superfície celular forma bolhas, e se a célula for
grande, ela quebra em fragmentos envolvidos por membranas chamados de
corpos apoptóticos (vesículas).

Apoptose 1
 A superfície da célula ou dos corpos apoptóticos torna-se quimicamente modificada
para que seja engolfada por células vizinhas ou macrófagos

Fosfolipídeo fosfatidilserina: se desloca para a face externa da membrana, agindo

como marcador de apopotose, sinaliza para as células vizinhas e macrófagos
fagocitarem a célula e bloqueia a inflamação associada à fagocitose, pois inibem a
produção de citocinas que induzem inflamação.
As células perdem suas moléculas como sinla de sobrevivência, assim como o
potencial elétrico
Mitocôndrias na apoptose liberam o citocromo c, do espaço intermembrana para o
citosol

Condensação da cromatina na face

interna

da membrana nuclear formando

crescentes

em uma célula na fase inicial da

apoptose.

Etapa mais avançada, em que a

membrana nuclear forma evaginações
contendo cromatina condensada. Isto
depois dá origem aos corpos
apoptóticos.

Imagens de microscopia de varredura

para mostrar o aspecto de células em
apoptose. À E., célula normal com
microvilosidades. À D., célula em

Apoptose 2
 apoptose, mostrando orifícios (crateras)
na superfície celular. Estas teriam
ligação com o retículo endoplasmático
e levariam à perda de água do interior
da célula para o meio externo.

Células normais (N) e células em

apoptose (setas). Estas se fragmentam
em glóbulos (corpos apoptóticos), que
serão eliminados por outras células
sem causar reação inflamatória

Apoptose 3
 A apoptose é depende das CASPASES, que são proteases intracelulares que
possuem cisteína no sítio ativo e cliva proteínas contendo ácido aspártico. São
sintetizadas na forma de precursores (pró-caspases inativas). Formam tetrâmero
(forma ativa da caspase) quando clivada (cortada) em uma subunidade maior e
menor.

Cascata de caspase:

1. início da cascata → pró-caspases

iniciadoras

2. pró-caspases ativam caspases

executoras que vão clivar proteínas
alvo na célula

Apoptose 4
 a cascata de caspases é
destrutiva, autoamplificadora e
irreversível (após alcançar um
ponto crítico na via de
destruição, ela não pode voltar
atrás)

as caspases requeridas para a

apoptose variam de acordo com o
tipo celular e o estímulo

as duas vias de sinalização melhor

entendidas que podem ativar a
cascata de caspases levando à
apoptose são as vias intrínseca e
via extrínseca

Via Extrínseca

-proteínas de sinalização extracelular ligam-se a receptores de morte na

superfície celular, o qual possuem um domínio de morte intracelular que dispara a
via extrínseca da apoptose
-os receptores de morte: homotrímeros que pertecem à familia de receptores do
fator de necrose tumoral (ex: receptor para TNF e receptor de morte Fas)
-os receptores ativados (c/ domínio de morte) formam o complexo de sinalização
indutor de morte (DISC) (só ocorre apoptose se houver ativação de caspases)
-muitas células produzem proteínas inibidoras capazes de controlar a via
extrínseca. ex: receptores armadilha (não possuem o domínio de morte, logo não há
ativação e nem formação de complexo DISC)
-proteínas FLIPs: proteínas bloqueadoras que parecem caspases iniciadoras mas
não possuem o domínio proteolítico (caspases se associam no complexo DISC mas
não se ativam)

Apoptose 5
 Via Intrínseca
-o programa de apoptose é ativado de dentro da célula, geralmente em resposta
a injúrias ou outros estresses (quebra de dna, falta de oxigênio, nutrientes, sinais
de sobrevivência extracelulares

-ocorre liberação do citosol de proteínas mitocondriais (ex: citocromo c) que

ativam a cascata proteolítica das caspases
-procaspases iniciadoras são ativadas por proximidade ao apoptossomo

-família de proteínas Bcl2 de mamíferos: controla a via intrínseca pelo controle da

liberação do citocromo c e de outras proteínas mitocondriais
-algumas proteínas Bcl2 são proapoptóticas e outras são antiapoptóticas e se
combinam formando heterodímeros, causando inibiçao da atividade de ambas
as proteínas

-o balanço entre as atividades dessas duas classes funcionais de proteínas Bcl2

determinam se as células

Apoptose 6
 Estímulo apoptótico

-proteínas BH123 se agregam e

formam oligâmeros/poros (se ativam)
na membrana externa mitocondrial,
liberando proteínas que culminarão
para apoptose

-citocromo c pode sair para o citosol

-operam no RE e na membrana nuclear

-proteínas antiapoptóticas podem inativar os monômeros das ptns BH123

-proteínas BH3 atuam na inibição de proteínas Bcl2 antiapoptóticas e são o

principal link entre o estímulo apoptótico e a via intrínseca (em algumas células
a via extrínseca ativa a via intrínseca para amplificar o sinal apoptótico)

-faltas de sinal de sobrevivência e danos no DNA levam também a

produção/ativação de BH3

Apoptose 7
 IAPs - Proteínas inibidoras de apoptose

-inibem caspases ativadas devido a domínios que permitem a elas se ligarem

-algumas IAPs marcam caspases por poliubiquitação pra destruição pelos

proteossomos
ou seja, as IAPs inibem ou destroem as caspases, impedindo a apoptose

-AntiIAPs são liberadas do espaço intermembranar mitocondrial para o citosol

quando a via intrínseca é ativada, bloqueando IAPs no citosol e promovendo a
apoptose.

O equilíbrio entre essas proteínas (proapoptóticas, antiapoptóticas, IAPs e AntiIAPs)

que fará ou não com que uma célula sofra apoptose

Apoptose - detecção

-durante a apoptose, uma endonuclease cliva o DNA cromossomal em fragmentos

de diferentes tamanhos, que podem ser observados por gel de eletroforese ou por
TUNEL

-marcação por anexina V (molécula que se liga a fosfatidilserina)

-marcação por imunoflorescência de caspases ativas

-microscopia eletrônica

Doenças associadas à apoptose

câncer (lesão do DNA leva a ativação da p53, que ativa a via intrínseca)

Apoptose 8
Apoptose 9