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Fabiano Kauer, Clique para ShimadzuPh.D. editar Brasil o estilo do CSC kauer@shimadzu.com.br subttulo mestre
Lima, 17 de maro de 2010
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Espectrometria

Estudo da interao da radiao eletromagntica com a matria

Magnitude da interao em funo da energia da radiao ou versus interao (qualitativa)


Intensidade versus concentrao (quantitativa)
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Espectrofotometria
Molculas e tomos absorvem energia, de diferentes
formas e comprimento de onda, em regies especficas do espectro eletromagntico. Existem inmeros comprimentos de onda de radiao no espectro eletromagntico e o estudo de cada regio

do espectro pode oferecer informaes nicas a respeito da estrutura, composio e configurao eletrnica da molcula.
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Espectro Eletromagntico
Comprimento de onda Energia Nmero de onda Freqncia

R-

R-X

UV

Vis

IV

MO

RF

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Espectrofotometria
regio do espectro

raio-

raio-X

UV-vis

IV vibrao molecular

microondas rotao molecular

rdio precesso nuclear

transio propriedade nuclear

transio eletrnica interna


absoro emisso fluorescncia slido lquido tomo

transio eletrnica externa


absoro emisso fluorescncia slido lquido gs tomo molcula on

tipo de interao

absoro emisso

absoro

absoro

absoro

fase da amostra espcies da amostra

slido

slido lquido gs molcula

gs

lquido

tomo

molcula

molcula

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BioSpec-nano?
UV-Vis dedicado para life science Utilizado para quantificao de cidos nuclicos Aplicaes em genmica, biologia molecular, anlise de DNA Linha Shimadzu Life Science, MultiNA

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Vantagens do BioSpec-nano
Pequena quantidade de amostra somente 1 L ou 2 L

Amostra e <Start>: ANLISE


Operao simples e rpida

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Pequena quantidade de amostra


No utiliza cubeta padro de 10 mm. Apenas 1 L (caminho tico de 0,2 mm) ou 2 L (caminho tico de 0,7 mm) de amostra so colocados no compartimento de amostra, com auxlio de uma pipeta.

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Gota e <Start>: ANLISE


A operao aps a colocao de uma pequena quantidade de amostra apenas apertar o boto <Start>. A insero de amostra no compartimento de anlise, anlise e limpeza so ento realizadas automaticamente. Operaes tediosas como fixao da fibra tica e limpeza aps a anlise no so mais necessrias. Automtico Anlise

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BioSpec-nano
lmpada de Xe sistema de montagem automtica

janela superior

sistema de limpeza automtica

porta amostra interface USB 2.0

seletor de caminho tico (0,7mm, 5 mm ou 0,2 mm) posio 5 mm para utilizao com cubeta de 5 mm opcional

Grade hologrfica e detector PDA permite espectro de varredura (220~800nm) em 3 segundos

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Aplicaes
Quantificao de cidos nuclicos simples
RNA dsDNA (dupla fita DNA) ssDNA (fita simples DNA) OligoDNA

Quantificao de DNA/RNA marcados para anlise por DNA microarray


Marcador significa indicador fluorescente conectado a RNA/RNA, para sua deteco. BioSpec-nano determina no apenas a concentrao de RNS/DNA e marcadores, mas a eficincia de marcao. Marcadores padro so: Cy3, Cy5, Alexa Fluor 546 e Alexa Fluor 647. Outros marcadores pode ser utilizados aps registro.

Pureza de cidos nuclicos utilizando razo OD

OD260/OD280: OD260/OD280 o indicador de pureza de DNA e RNA. Se a pureza for alta a razo maior do que 1,8. Contamintes de protenas diminuem a razo OD. OD260/OD230: OD260/OD230 indicador de pureza de RNA. Se a pureza for alta a razo maior do que 2. Contaminantes de protenas e compostos como EDTA e fenol diminuem a razo OD.
OD? OD (Optical Density, densidade tica) a absorbncia correspondente a um caminho tico de 10 mm OD = Absorbncia *10 / caminho tico (mm)

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Aplicaes
Modo: Quantificao de cidos nuclicos simples
Concentrao de cido nuclico (ng /L= fator de diluio * NACF * (OD260 - OD320) OD260 / OD280 = (OD260 - OD320) / (OD280 - OD320)

OD260 / OD230 = (OD260 - OD320) / (OD230 - OD320)

Modo: Quantificao de cidos nuclicos marcados


Concentrao de cido nuclico (ng /L= fator de diluio * NACF * (OD260 - marcadorOD * CF260) Conc. Marcador (M)= fator de diluio * marcador OD / marcador Conc. Nucleotdeo (M) = fator de diluio * NACF * 0,001 * (OD260 Marcador OD * CF260) / Nucleotdeo MW OD260 / OD280 = (OD260 Marcador OD * CF260) / (OD280 Marcador OD* CF280) Razo de marcador (eficincia) = concentrao do marcador (M) / concentrao do nuclotideo (M)

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Aplicaes
Clulas, tecidos, sangue.. Extrao e purficao RNA total/mRNA Transcrio reversa e purificao

cDNA

PCR tempo real

Quantificao e pureza (OD) BioSpec-nano

Amplificao, marcao e purificao

Marcadores DNA/RNA

Quantificao e eficincia de marcao OD BioSpec-nano

DNA Microarray Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida.

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Equipamentos UV-Vis Shimadzu


UV-1800
Compacto e com display LCD embutido Funes: fotomtrico, quantitativo, multi varredura, cintica, multicomponente Faixa de : 190 1100 nm Largura de banda: 1 nm

Preciso de : 0,3 nm
Display LCD incluso UVProbe incluso (gratuito) Permite transferncia de dados por pendrive Funes de validao inclusas
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Caractersticas do UV-1800
Equipamento UV integrado que permite a transferncia de dados obtidos para pen drive USB, e posterior anlise dos resultados obtidos em, um PC no conectado, atravs da utilizao de software UVProbe. Compacto e robusto: a menor rea ocupada por equipamentos de sua categoria. Equipamento UV integrado com interface tipo USB para conexo direta a impressora. Equipamento UV integrado que permite o controle atravs de PC via interface tipo USB.
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UV integrado ou controlado por PC


Interface tipo USB permitem que UV-1800 seja controlado atravs de PC.
UVProbe includo no pacote padro, sem custo adicional

Possibilidade de escolha entre utilizao de PC ou sistema integrado no prprio equipamento.


UV-1800

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Duplo Feixe Detector Duplo


WI: lmpada de W-halognio D2: lmpada de deutrio L.M: sistema de troca de fonte de radiao W: janela do equipamento S1-2: fendas M1-5: espelhos GR:grade de difrao F: filtro Sam: cubeta de amostra Ref: cubeta de referncia

L: lentes
P.D.: detector de fotodiodo
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Acessrios

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Determinao de Cromo Hexavalente


UV-Vis: determinao indireta com difenilcarbazida Difenilcarbazida reage com cromo hexavalente, formando um complexo de colorao roscea. O espectro de absoro caracterstico do complexo de transio formado apresenta uma absoro em 540 nm. Vandio V, ferro III e molibdnio IV tambm reagem com difenilcarbazida, ocasionado, na presena desses elementos, um erro falso positivo. Cobre e titnio podem ser interferentes para determinao de Cr6+, dependendo do meio de anlise.

difenilcarbazida

Espectro de absoro do complexo difenilcarbazida e cromo VI 22

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Determinao de P em leo vegetal


UV-Vis: determinao indireta com azul de molibdnio
0.6000

leo vegetal com alto teor de P (fosfolipdios de origem vegetal). Controle de qualidade de matria prima. Calcinao de matriz orgnica. Medio indireta com molibdato de sdio, formando um complexo de colorao azulada. Espectro de absoro caracterstico do complexo de transio formado apresenta absoro em 650 nm.

Absorbncia (ABS)

0.5000 0.4000 0.3000

0.2000
0.1000 0.0000 0.00 0.02 0.04

y = 5.587x + 0.008 R = 0.999

0.06

0.08

0.10

0.12

quantidade de P (em mg)

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Caractersticas do IRAffinity-1

1) Elevada relao sinal/rudo: maior que 30.000:1


2) Facilidade de manuteno, incluindo sistema de dessecador para interfermetro 3) Equipamento compacto 4) Programa para anlise de contaminantes incluso 5) Programa PharmaReport incluso no software IRsolution
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1. Elevada Relao Sinal/Rudo


Relao sinal/rudo (S/R) um dos mais importantes fatores na escolha de um instrumento de FTIR
Equipamento
IRAffinity-1 Thermo 380FTIR PE Spectrum 100

S/N ratio
30.000:1 20.000:1 25.000:1

JASCO FTIR-4100
JASCO FTIR-4200

22.000:1
30.000:1
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2. Facilidade de manuteno

O novo IRAffinity-1 utiliza sistema auto dryer que decompe a umidade presente no interior do interfermetro atravs de um eletrlito contido em um filme polimrico. O consumo de energia do equipamento quando em modo de espera de apenas 4,5V. A performance deste sistema a mesma obtida com o sistema tipo peltier, utilizada, por exemplo, no IRPrestige-21.

meio externo

Eletrlise

Retirada de umidade

interfermetro

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3. Equipamento compacto

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4. S/W Contaminant Analysis


1) Programa para identificao de contaminantes. 2) Bibliotecas para substancias que so normalmente identificadas como contaminantes. Incluem espectros de mais de trezentos compostos, medidos por transmisso e ATR. 3) Tabelas dos picos de absoro para os espectros includos nas bibliotecas.

4) Pode identificar mltiplos componentes em um contaminante, atravs dos dados de bibliotecas e tabela de picos de absoro.
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5. S/W PharmaReport
Determinao rpida de
qualidade de matrias primas, sem necessidade de estocagem de produto para posterior liberao de carga.
Peak wavenumber Sample Standard goods Tolerance Error

Fcil utilizao, permitindo operao por pessoal de controle de qualidade.


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Peak Ratio Sample Standard goods Tolerance Error

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Acessrios

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Aplicaes de FTIR
Anlise de compostos orgnicos:
Controle de matria primas Identificao de contaminantes Controle de processos Anlise quantitativa
90

%T

75

60

45

30

15

4000 PVC f ilm

3500

3000

2500

2000

1750

1500

1250

1000

750

500 1/cm

1,2 Abs 1

CEMPEQC33\curva 2 0% 0,1 mm CEMPEQC32\curva 2 0.7% 0,1 mm CEMPEQC34\curva 2 1,4% 0,1 mm CEMPEQC35\curva 2 2,1% 0,1 mm CEMPEQC36\curva 2 2.8% 0,1 mm CEMPEQC37\curva 2 3.5% 0,1 mm CEMPEQC38\curva 2 4.2% 0,1 mm CEMPEQC39\curva 2 4.9% 0,1 mm

Controle de qualidade
Informao de grupos funcionais

0,8

0,6

0,4

0,2

-0,2 1775 1770 1765 curva 2 0% 0,1 mm 1760 1755 1750 1745 1740 1735 1730 1725 1/cm

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Aplicaes de FTIR
Anlise de compostos orgnicos:
90

Controle de matria primas Identificao de contaminantes

%T

75

60

Controle de processos Anlise quantitativa

45

30

Controle de qualidade
Informao de grupos funcionais

15

4000 PVC film

3500

3000

2500

2000

1750

1500

1250

1000

750

500 1/cm

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Anlise de Plsticos
Anlise de plsticos multicamadas.
Filmes multicamadas so utilizados em embalagens de produtos industrializados, tendo como funo bsica conter, proteger e apresentlos de maneira atrativa ao consumidor final

Identificao de camadas por FTIRMIC


Preparao de amostra com corte com micrtomo (sees transversais de 10 m de espessura).

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Anlise de Frmacos
Anlise quantitativa de dimeticona.
Anlise por mtodo de transmisso com cela selada para anlise quantitativa. Padro de dimeticona em soluo aquosa. Quantificao em nvel de %. Anlise rpida e sem preparao de amostra. Controle de qualidade de produto final.
1,2 Abs 1
CEMPEQC33\curva 2 0% 0,1 mm CEMPEQC32\curva 2 0.7% 0,1 mm CEMPEQC34\curva 2 1,4% 0,1 mm CEMPEQC35\curva 2 2,1% 0,1 mm CEMPEQC36\curva 2 2.8% 0,1 mm CEMPEQC37\curva 2 3.5% 0,1 mm CEMPEQC38\curva 2 4.2% 0,1 mm CEMPEQC39\curva 2 4.9% 0,1 mm

0,8

0,6

0,4

0,2

-0,2 1775 1770 1765 curva 2 0% 0,1 mm 1760 1755 1750 1745 1740 1735 1730 1725 1/cm

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Anlise Inorgnica Elementar


AA Chama
LD 10 ppb Pequeno nmero de elementos Recomendvel para pequeno nmero de amostras Rpido / Simples / Baixo Custo / Excelente Durabilidade Pequeno nmero de elementos Recomendvel para pequeno nmero de amostras Alta sensibilidade (melhor que ICP-AES) Necessrio otimizao de condies de anlise Longo tempo de anlise, requer automao de anlise Melhor sensibilidade do que AA Chama Grande faixa dinmica (AA 2-3 dgitos, ICP 4-5 dgitos) Velocidade de anlise (anlise multielemento) Maior capacidade de processamento com tica Echelle Anlise mais sensvel Determinao multielemento e elevada velocidade de anlise Custos iniciais do Brasil 2009. Distribuio no permitida. Copyright Shimadzu e de manuteno elevados 37

AA Forno de Grafite
LD: 10 ppt

ICP-AES
LD: 100 ppt

ICP-MS
LD: 1 ppt

Aplicaes
Alta
ICP-MS Al, As, B, Cd, Cr, Cu, Mn, Na, Pb, Se, Zn AA GFA Al, As, Cd, Cr, Cu, Fe , Mn, Na, Pb, Se, Zn

Sensibilidade

ICP-AES Al, B, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Na, Pb, Zn, Ca, Mg

AA Chama Cu, Na, Zn, Ca, Mg

Baixa Nmero de muitos elementos poucos Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida. poucos

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1. Novo design

Produto final

Desenhos iniciais

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2. Elevada Sensibilidade
GFA Elemento As Cd Cr Cu Mn Ni Pb Se V 3(ppb) (nm) 193,7 228,8 357,9 324,8 279,5 232 283,3 196 318,4 AA-7000 0,12 0,0025 0,013 0,03 0,008 0,1 0,05 0,13 0,13 SHIMADZU AA-6300 0,4 0,005 0,02 0,04 0,02 0,2 0,08 0,4 0,3 AA-6800 0,2 0,003 0,02 0,04 0,01 0,13 0,06 0,2 0,2 Hitachi Z-2010 0,15 0,006 0,013 0,04 0,013 0,1 0,08 0,44 0,1 Thermo iCE3400 iCE3500 0,325 0,01 0,025 0,065 0,03 0,065 0,075 0,32 0,65 Perkin Elmer AAnalyst 400 0,65 0,01 0,2 0,15 0,25 0,45 0,8 0,75 AAnalyst 800 0,14 0,0035 0,0095 0,0375 0,011 0,18 0,105 0,115 Varian 240Z 280Z 0,12 0,0025 0,026 0,1015 0,012 0,037 0,0795 0,3

Chama
Elemento Al Cu

3(ppm)
(nm) 309,3 324,8

SHIMADZU
AA7000 0,03 0,0015 AA-6300 0,1 0,005 1st 2nd

Pb 283,3 0,015 0,04 Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida.

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3. Equipamento compacto
SHIMADZU AA-6300 SHIMADZU AA-6300+GFA

SHIMADZU AA-7000

700x580x460

SHIMADZU AA-7000+GFA

920x580x460

HITACHI Z-2300

HITACHI Z-2000

THERMO ICE 3300

THERMO ICE 3500+GF

PE AAnalyst 400

PE AAnalyst 700/800

Varian AA-240FS/280FS

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4. Elevada de Estabilidade
Atenuador Varivel

Detector Espectrmetro Espelho de Seleo

lmpada de D2

Divisor de feixe Atomizador

Lampada de catodo oco Novo sistema tico, com sistema Copyright Shimadzu do Brasil chama. tridimensional e duplo feixe para 2009. Distribuio no permitida. 43

4. Elevada Estabilidade
Novo sistema tico tri-dimensional

Atomizao por Chama: duplo feixe


Atomizao por forno de grafite: feixe simples AA-7000 automaticamente seleciona o sistema fotomtrico Atenuador varivel Regulagem automtica da intensidade da lmpada de D2: melhoria do sistema de beam balance Otimizao do sistema de entrada do espectrmetro Seleo de ganho: reduz os efeitos de emisso da chama
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5. Facilidade de operao: AAC-7000


Automatic Atomizer Changer
AAC-7000 (opcional)

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6. AA-7000 Series: customizao

Dual Atomizer AA-7000F + GFA + AAC-7000

AA-7000F

AA-7000G + GFA

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7. Melhoria do sistema de segurana

Sistema de deteco de vazamentos de gases (chama) Detector de vibraes (chama)


Utilizao de materiais retardantes de chama (cmara de nebulizao) Conexes de gases mais resistentes
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Acessrios
Lmpada de ctodo oco L-233 (normal) L-2433 (mtodo SR) GFA-7000 Atomizador por forno de grafite Tubos de grafite: normal, PyC, plataforma Cmera para forno de grafite ASC-7000 Autoamostrador: ASK-7000 (GFA) ASC Stand kit (chama) Kit de micro amostragem Medidor de fluxo para gs oxidante Atom booster Queimador para altas temperatura Compressor de ar e reguladores de presso HVG-1 Gerador de Vapor de Hidreto MVU-1A Sistema de Vapor Frio Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida. SARF-16C Forno eltrico

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O que ICP-AES?
Nome da Tcnica?

Espectrofotometria de Emisso Atmica por Plasma Indutivamente Acoplado


Abreviado para ICP-AES (Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry) Equipamento? Espectro(fot)metro de Emisso Atmica ou ICP...
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O que ICP-AES?
O que o equipamento faz? Determina a concentrao de elementos existentes em soluo. Slidos so pr-processados e transformados soluo. Quais os princpios? Sob alta temperatura (~6000-10.000 K), molculas e tomos so conduzidos ao seu nvel atmico fundamental, sendo excitados e at ionizados. tomos de diferentes elementos, ao serem excitados no plasma, emitem radiao em comprimentos de onda especficos quando do processo de relaxao, e a intensidade desta emisso dependente da concentrao dos mesmos.
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ICP-AES Princpios Bsicos


Detector
Espectro de Emisso

ICP Espectrmetro
(Divide radiao emitida em vrios comprimentos de onda) (Responsvel pelo processo de emisso de radiao)

Sistema de introduo de amostra


(soluo com analito nebulizao)
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ICP-AES Simultneo

Detector CCD

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ICP

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Espectro no Detector CCD


baixa Pb 220,3nm

P 213,62nm Cu 213,60nm ordem


fotografia de 1024 X 1024 elementos 1 megapixel

alta

Al 167,0nm grand Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida. e

pequeno

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Espectro no Detector CCD


um pixel ordem Cu 213,60nm P 213,62nm

104

ordem 105

ordem 106
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Caractersticas do ICPE-9000
Elementos como P, As, S, B possuem linhas de emisso de elevada sensibilidade no UV-vcuo. Entretanto, em funo da absoro por oxignio, anlise no possvel em espectrmetros atmosfricos. Purga interna de oxignio necessria para obteno de resultados. Concorrentes utilizam purga do espectrmetro com nitrognio de alta pureza. Utilizao de espectrmetro a vcuo (exclusividade Shimadzu)
Linhas tpicas da faixa do ultravioleta vcuo
Al P S As B 167 nm 178 nm 180 nm 189 nm 182 nm
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Vantagens de Purga a Vcuo


Com a utilizao de espectrmetro a vcuo (10 m Hg), elimina-se absores por oxignio.

Nenhuma variao trmica no espectrmetro observada, permitindo resultado de anlise estvel.


Purga com gs no necessria, diminuindo custos operacionais.

Ideal para amostras ambientais/metais/petrleo/leos


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Tempo de Iniciao
Purga vcuo versus purga a gs
variao de intensidade espectral
120

espectrmetro a vcuo (purga no necessria)

intensidade espectral

100 80

espectrmetro purgado a gs (N2/Ar de alta pureza necessrio)


60 40

20
0 0 50 100 150 200 250 300 350 400

purga

ICPE-9000

tempo (minutos) 58

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Vantagens do ICPE-9000 Baixo Custo Operacional


Dimetro da tocha 2/3 da tocha convencional.
Fluxo de argnio (L/min)

Reduo de aproximadamente 40% do consumo de argnio.


Tocha convencional: 20 L min-1

25

Comparao de consumo de argnio


20L/ min

20
15 10 5 0
12L/min

aproximadamente R$ 25.000 ano


Mini tocha: 12 L min-1 aproximadamente R$ 15.000 ano
(4 horas por dia, 200 dias ao ano).

mini tocha

tocha convencional

Sensibilidade comparvel a tocha convencional.

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Anlise Elementar
Determinao de metais/semi-metais: gua potvel Resduo de efluentes Anlise preditiva, leos e graxas Industria farmacutica Solos e plantas Tecidos biolgicos Minrio Ligas metlicas Combustveis (gasolina, diesel, biodiesel)
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Anlise de gua Potvel


Controle de qualidade de gua. 14-15 metais em nveis ppm-ppb Pouca ou nenhuma preparao de amostra.

As, Sb e Hg analisados por HVG.


ICP-AES (simultneo) ou AAS GFA (seqencial).
70000 Li 610.364 nm (1) 60000

50000

Legislao especfica, com


diferentes valores mximos permitidos.

Intensity

40000

30000 20000

10000

r = 0.99989 0.0 2.5 Concentration (ppm) 5.0

Copyright Shimadzu do Brasil 2009. Distribuio no permitida.


Equation: Conc = a * I ^ 3 + b * I ^ 2 + c * I + d Factor: a = 0.0000000 b = 0.0000000

c = 8.570199e-005 d = 0.0129781

Weight: None Origin: None

61

Anlise de Tecidos Biolgicos


Se 196.090 Cond 1 1500

Determinao de Se e Hg em
Intensity

1250

amostras de fgado. Se e Hg por HVG-ICP. Preparao de amostra com cido

1000

750

500

250

ntrico e H2O2.
Anlise em ppb. Produtos metabolizados em

800 700 600 500

Se 203.985 nm (1)

Intensity

400 300

ratos, aps administrao venal.


Cuidados especiais com reagentes e gua de anlise.

200 100 0

r = 0.99970 0 25 50 Concentration (ppb) 75 100

Equation: Conc = a * I ^ 3 + b * I ^ 2 + c * I + d Factor: a = 0.0000000 b = 0.0000000 c = 0.1504391 d = -0.5210548 Weight: None Origin: None

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Anlise de Polivitamnicos
Controle de qualidade de polivitamnicos. 3-4 metais em nveis ppm. Soluo aquosa.

Digesto de amostra com


aquecimento e cido ntrico. Anlise por absoro atmica com

atomizao por chama.


Principais metais: Cu, Zn e Mg.

Curva de calibrao para Mg

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Anlise de leos Lubrificantes


Determinao multielementar de diferentes metais em leo de lubrificantes. Anlise por AAS (seqencial) ou ICP-AES (simultnea). Utilizao de solventes orgnicos.

Preparao direta , sem necessidade de digesto de amostras.


Fe 259.940 nm (1)

Padres organometlicos em leo mineral. A determinao de detritos em leo lubrificante usado um mtodo de diagnstico importante em programas de monitoramento de condies de operao de maquinrio.
Intensity

20000 17500 15000 12500 10000 7500 5000 2500 0 0 50 Concentration (ppm) Equation: Conc = a * I ^ 3 + b * I ^ 2 + c * I + d Factor: a = 0.0000000 b = 0.0000000 c = 0.0079784 d = -1.409089 Weight: None Origin: None 100 r = 0.99899 150

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Gracias por su atencin.


Fabiano Kauer, Ph.D. CSC Shimadzu Brasil kauer@shimadzu.com.br

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