Isolamento e caraterização bioquímica e espetroscópica da mioglobina de músculo cardíaco

Prof. Cláudio M. Gomes

03/03/2020

Bruno Fonseca Nº 52711

Joana José Nº 52682
Vasco Neto
José
Introdução

A mioglobina (Mb) é uma proteína monomérica (17078 Da) com um único grupo hemo que
está ligado através do resíduo de histidina 93. Esta proteína liga-se ao O 2 e armazena-o até
que seja necessário no tecido. In vitro a forma Oxi (Fe2+-O2-Mb, vermelha) é lentamente
convertida na forma Met (Fe3+-H2O-Mb, castanha). A primeira é funcionalmente relevante,
uma vez que tem o ião Fe na forma reduzida (Fe 2+) o que possibilita a ligação ao O 2, ao
contrário do ião Fe3+ (oxidado) presente na forma Met. Estas formas são interconvertíveis
através de agentes redutores/ oxidantes como o ditionito de sódio e o ferrocianeto de
potássio, respetivamente. O grupo hemo no estado reduzido reage com a piridina para
formar um complexo corado. O complexo formado com a forma b do grupo hemo tem um
máximo de absorção caraterístico a 557 nm, que permite a sua quantificação através de
métodos espetroscópicos. Pelo método de Lowry é possível quantificar
espetrofotometricamente a proteína total, uma vez que as ligações peptidicas reagem com
Cu2+, formando Cu+ que reage com o Reagente de Folin que produz um composto azul.

Tratamento de Resultados

Espetro de absorção da forma Met-Mb e Oxi-Mb

1.200
1.100
1.000
0.900
0.800
Absorvência

0.700
0.600 Oxi-Mb
0.500 Met-Mb
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
350 400 450 500 550 600 650 700
Comprimento de onda (nm)

Massa músculo (g) 11.6133

V total Mb extraída (mL) 24.5
[oxi-Mb] microM 5.56
[Mb] total mg/mL 9.5E-02
quantidade Mb total (mg) 2.33
conteúdo Mb mg Mb/g tecido 0.2
[hemo b] microM 25.13
[proteína] na fração mg/mL 5.03
Quantidade proteína total na fração mg 123.3
% Mb vs proteína total 1.89
[hemo b]/[oxi-mb] 4.51736

1
 Anexos

[BSA] ensaio ensaio Desvio

Tubo de ensaio V BSA (mL) mg/mL 1 ensaio 2 2 Média padrão
1 0 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
2 0.016 0.007 0.232 0.068 0.097 0.132 0.088
3 0.032 0.013 0.214 0.261 0.195 0.223 0.034
4 0.064 0.027 0.360 0.292 0.269 0.307 0.047
5 0.096 0.040 0.430 0.455 0.378 0.421 0.039
6 0.128 0.053 0.470 0.328 0.320 0.373 0.084
7 0.16 0.067 0.472 0.436 0.633 0.514 0.105

Curva de calibração
0.600

0.500
f(x) = 5.60383561643837 x + 0.135312328767123
R² = 0.895642652797126
Absorvência a 550 nm

0.400

0.300

0.200

0.100

0.000
0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08
[BSA] mg/mL

Réplica
Réplica 1 Réplica 2 3
Amostra 0.228 0.17 0.149

0.017 0.006 0.002

0.040 0.015 0.006
0.198 0.074 0.029
9.92 3.71 1.47 5.03 4.38

Coefficien Standar
ts d Error
0.03869
Intercept 0.135312 7
X Variable 5.603836 0.95642

2
 1 2

Ponto 10/11/12/14/17