UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS

ESCOLA SUPERIOR DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

ATIVIDADE AVALIATIVA

AULA PRÁTICA 03 –Espectrometria de absorção (Espectrofotometria) Disciplina:

Bioquímica (ESA-0222)
Turma: T01 (2022/02)
Prof. Dr. Hugo Valério Corrêa de Oliveira

Alunos Matrícula
1. Giovanna Maia Oliveira 2212020069
2. Marco Antonio Moleiro Baima Júnior 2212020038
3. Gabriela de Lima Galúcio 2212020021
4. Natanael Lopes de Castro Filho 2212030023
5. Henry Daniel Castro de Oliveira 2212030063
6. Xayane da Silva Rebouças 2212020054
7. Samira Cordovil Silva 2212020083
Data:12/02/2023
 QUESTÃO 1. (1,0 pt) Baseado nos resultados obtidos na aula prática, preencha a tabela 1!

Tabela 1. Análise do comprimento de onda com melhor faixa de absorção para o azul
de metileno – “experimento de varredura espectral”.
Comprimento de onda Absorbância Transmitância
λ (nm) (Abs) (T)
400 0,001 99,7%
500 0,002 99,8%
600 0,028 93,9%

640 0,054 88,7%

660 0,084 82%
680 0,056 88,1%

700 0,008 98,7%

*Para esta varredura, utilizar a solução de azul de metileno na concentração 0,0005
mg/mL.

QUESTÃO 2. (2,0 pts) A partir dos valores apresentados na tabela 1, construa os seguintes
gráficos e explique o que aconteceu!

2.1 Gráfico do comprimento de onda λ (para a solução 0,0005mg/mL) em função da

absorbância (Abs) – “varredura espectral”:

X Y
Comprimento de Absorbância
onda (λ) (Abs)
400 0,001
500 0,002
600 0,028
640 0,054
660 0,084
680 0,056
700 0,008

2.2 Gráfico do comprimento de onda λ (para a solução 0,0005mg/mL) em

função da transmitância (T%) – “varredura espectral”:
 X Y
Comprimento de Transmitânci
onda (λ) a (T)
400 99,7%
500 99,8%
600 93,9%
640 88,7%
660 82%
680 88,1%
700 98,7%

EXPLICAÇÃO
R: A absorbância é uma característica específica dos materiais em absorver determinadas radiações em
frequências específicas. Desse modo, quanto maior a absorbância, maior a capacidade de absorção
daquela radiação. Por isso, no gráfico 2.1, está evidenciado que nas ondas com comprimento de 660
nm (grandeza inversamente proporcional à frequência da onda), a absorbância atingiu um platô, que é o
ponto de maior absorção de radiação. Isso fica evidente pois, partindo-se de um comprimento de onda
baixo (400nm) e aumentando-se paulatinamente o comprimento há um aumento progressivo da
absorbância da onda pelo material até atingir um platô na onda com comprimento 660nm, a partir do
qual, a absorbância passa a reduzir. Em razão da modulação das frequências/comprimentos de onda,
ficou evidente que a absorbância foi variando conforme a mudança das características da onda
disparada, obtendo seu maior grau no platô - a onda de 660 nm - evidenciando que esse é o
comprimento cuja frequência implica em maior absorbância para o material presente no frasco (azul de
metileno).
A transmitância, por sua vez, é a característica associada à capacidade de uma onda em
comprimento específico ultrapassar uma amostra de matéria. Absorbância e transmitância são
grandezas inversamente proporcionais. Se no gráfico 2.1 ficou evidente que na onda com comprimento
de 660nm havia maior absorbância da onda, o gráfico 2.2 evidenciou que é o comprimento de onda
com menor transmitância. A modulação dos comprimentos das ondas demonstrou que, a partir da onda
com menor comprimento do experimento (400nm) e aumentando o comprimento houve uma redução
paulatina na transmitância da onda até o alcance de uma depressão (ponto no gráfico indicativo da
menor transmitância do experimento), justamente na onda de comprimento 660nm. Após a depressão e
com contínuo aumento do comprimento da onda disparada, a transmitância tornou a crescer,
evidenciando que o ponto de menor transmitância já havia sido superado.
Por todo o exposto, ficou evidente que o azul de metileno possui absorbância máxima e
transmitância mínima a ondas com comprimento de 660nm.
 QUESTÃO 3. (1,0 pt) Baseado nos resultados obtidos na aula prática, preencha a tabela 2!

Tabela 2 (PARTE 2). Análise de diferentes concentrações de azul de metileno em

comprimento de onda de melhor faixa de absorção.
Concentração Absorbância Transmitância
(mg/mL) (ABS) (T)
0,0005 0,084 82%

0,001 0,176 66,7%

0,002 0,430 36,9%
0,004 0,784 16,6%
0,006 1,337 4,6%

QUESTÃO 4. (2,0 pts) A partir dos valores apresentados na tabela 2, construa os seguintes gráficos
e explique o que aconteceu!

4.1 Gráfico das diferentes concentrações de azul de metileno em função da absorbância

selecionada:

X Y
Concentração Absorbância
(mg/mL) (Abs)
0,0005 0,084

0,001 0,176
0,002 0,430
0,004 0,784
0,006 1,337

4.2 Gráfico das diferentes concentrações de azul de metileno em função da transmitância

selecionada:

X Y
Concentração Transmitânci
(mg/mL) a (T)
0,0005 82%

0,001 66,7%
0,002 36,9%
0,004 16,6%
0,006 4,6%
EXPLICAÇÃO
R: A absorbância exprime a fração da energia luminosa que é absorvida por uma determinada
espessura de um material, ou seja, a capacidade de absorver a luz. Nesse sentido, observa-se no gráfico
4.1 o caráter diretamente proporcional, quanto maior a concentração maior é a absorbância, conforme é
evidenciado pela lei de Lambert-Beer ( lei que demonstra que uma certa solução absorve a luz
proporcionalmente à concentração molecular do soluto que nela encontra).
A transmitância exprime a fração da energia luminosa que consegue atravessar uma determinada
espessura de um material, sem ser absorvida. Nesse sentido, é evidenciado no gráfico 4.2 o caráter
inversamente proporcional da transmitância com a concentração do soluto. Dessa forma, é possível
observar que a medida que a concentração do azul de metileno é aumentada, com mais dificuldade
passará a energia luminosa através da solução, conforme é evidenciado, novamente,pela lei de
Lambert- Beer.
QUESTÃO 5. (4,0 pts) Com auxílio do programa Excel, construir uma curva padrão para as
diferentes concentrações de azul de metileno (0,0005; 0,001; 0,002; 0,004; e 0,006 mg/mL) e, após
isso, obtenha a equação da reta para calcular a concentração desconhecida de sua respectiva
solução (A, B, C ou D).

Tabela 2 (PARTE 2). Análise de diferentes concentrações de azul de metileno em comprimento de

onda de melhor faixa de absorção.
Concentração Absorbância
(mg/mL) (ABS)
0,0005 0,084
0,001 0,176
0,002 0,430
0,004 0,784
0,006 1,337

Absorbância
(ABS)
Amostra desconhecida? 0,160
C

EQUAÇÃO DA RETA
O Excel gerou automaticamente a equação da reta y= 223,38x - 0,0409.
Em cálculo pela aproximação dos valores demonstrados no gráfico, a equação obtida por esta
equipe foi de y= 225x - 0,0375, conforme memorial descrito abaixo.
Aplicando a Absorbância da Amostra Desconhecida na variável Y(Absorbância) da equação da
reta, podemos descobrir a Concentração da Amostra (variável X):

1) Na equação fornecida pelo Excel:

y= 0,160
y= 223x- 0,0409
0,160 = 223x - 0,0409
0,2009 = 223x
x = 0,0009 mg/mL

2) Na equação obtida pela equipe:

y= 0,160
y= 225x- 0,0375
0,160 = 225x - 0,0375
0,1975 = 225x
x = 0,0008778 mg/mL

Em razão disso, o valor aproximado da concentração, confirmado pelas duas equações obtidas,
é de 0,0009 mg/mL.