MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS

 A ESPECTROSCOPIA é o termo geral usado para designar a

ciência que trata das interações entre os diversos tipos de
radiação eletromagnética e a matéria.
MÉTODOS QUE SE BASEIAM NA INTERAÇÃO ENTRE ENERGIA
ELETROMAGNÉTICA E MATÉRIA.

 Os MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS constituem um grande

número de métodos analíticos baseados na espectroscopia
atômica e molecular.

 A ESPECTROMETRIA refere-se à medida da intensidade de

radiação.

 Assim, torna-se importante conhecermos conceitos da

radiação eletromagnética, de suas propriedades e de
interações com a matéria.
 Radiação Eletromagnética –
Propriedades da Luz

 A luz pode ser estudada sob dois aspectos

comportamentais: onda e partícula.

 Energia propagada na forma de ondas A Luz como Onda

 Radiação Eletromagnética – Propriedades da Luz
 Comprimento de onda (): indica a distância entre 2
picos consecutivos de uma onda.
Unidade: m (metro), mas aceita–se seus múltiplos e
submúltiplos, conforme o Sistema Internacional de
Unidades.

 Frequência (): nº de oscilações completas que a onda

faz a cada segundo (s-1).

 Quanto maior a frequência, menor o comprimento de onda.

 Radiação Eletromagnética – Propriedades da Luz
 Velocidade de onda (c) , do latim celeritas (velocidade)

- A velocidade de uma onda eletromagnética no vácuo é de 299.792.458

m/s, isto é aproximadamente 300.000 km/s ou 3X108 m/s.

- No ar, a radiação eletromagnética interage com a matéria presente e

diminui a velocidade em aproximadamente 0,03%. Contudo, considerara-se
que a velocidade da onda eletromagnética no ar é equivalente à no vácuo,
3X108 m/s.
Unidade: m/s ou m.s–1

c = .
c: velocidade;
: comprimento de onda
: frequência.
 O Espectro Eletromagnético
 A radiação eletromagnética é classificada de acordo com a
frequência da onda, que em ordem crescente são:
 Ondas de rádio, micro-ondas, radiação infravermelha, luz
visível, radiação ultravioleta, Raios-X e Radiação Gama.
Violeta: 380 a
450 nm.
Azul: 450 a
494 nm.
Verde: 495 a
570 nm.
Amarelo: 570
a 590 nm.
Laranja: 590
A luz detectada pelo olho humano, a 620 nm.
corresponde à  faixa entre Vermelho:
400 nm a 800 nm 620 a 750 nm.
 A Luz como Partícula – O Fóton
 Em 1905, Albert Einstein, ao explicar o efeito
fotoelétrico, propôs que a luz seria formada por
pacotes de energia chamados de fótons com energias
relacionadas às frequências da radiação.

E = energia do fóton;
E = h. h = constante de Planck de valor 6,626.10–34 J.s
 = frequência.

 A distinção entre o comportamento onda e o

comportamento partícula da radiação eletromagnética está na
propagação e na transferência de energia.
 A propagação é governada pela propriedade ondulatória,
mas a troca de energia entre a radiação eletromagnética e a
matéria é governada pelas propriedades da partícula (fóton).
Já sabemos que: c=. ou c Espectro
 Eletromagnético

e: E = h.

Então:
Efóton = h . c

“A energia de um fóton é inversamente
proporcional ao seu comprimento de
onda (“c” e “h” são constantes).
Ultravioleta:  200 - 380 nm
Visível:  380 - 780 nm
 MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS: incluem as
técnicas baseadas na interação da energia
eletromagnética e matéria.

Interação Substância Química e

Radiação
Absorção Reflexão
Emissão

 Esses fenômenos dependerão das características da

molécula e da energia radiante.
ESPECTROFOTOMETRIA de Absorção Molecular UV-Vis
 Princípio: Baseia-se na absorção da radiação nos
comprimentos de onda entre o ultravioleta e o visível.

 “Na espectroscopia de absorção mede-se a quantidade

de luz absorvida em função do comprimento de onda”.
 Absorção da radiação – Análise em um
espectrofotômetro
ABSORÇÃO OU TRANSMISSÃO DEPENDE:
 Quantidade de moléculas (concentração do analito)
 Do Caminho Óptico (espessura da cubeta)

I0 It  Estrutura das moléculas (da amostra)

 Comprimento de onda da Radiação

A ESPECTROMETRIA
Faixa de  da
DE ABSORÇÃO:
Radiação
UV Aplicada
VIS
Absorção da radiação – Lei de Beer

 T está entre 0 e 1.
 T percentual: 0 e 100%.
I0 It
 A transmitância (T) é definida como: T It

I 0

 A absorbância (A) é definida como: A  logT

 Absorbância: grandeza adimensional. É algumas vezes, denominada
densidade óptica.
Absorção da radiação – Lei de Beer
Uma forma de linearizar uma exponencial invertida é fazendo o logaritmo
decimal negativo da grandeza (–logT). O sinal negativo é devido ao fato de
que, com o aumento da concentração, a transmitância diminui e ao se fazer
o logaritmo desses valores, todos seriam negativos.
35

Absorbância versus
a concentração
0,9

1; 32
30

resulta numa reta.

0,8
Absorbância (535 nm)

0,7
25
0,6

0,5

Transmitância
20
0,4

0,3

2; 16
15
0,2

0,1

10
0,0005 0,0010 0,0015 0,0020 0,0025
-1
Concentração de metildopa (mol L )

3; 8
A transmitância versus a 5

concentração resulta numa

4; 4

5; 2
exponencial invertida. 0
0 1 2 3 4 5 6

Concentração/ppm
Lei de Beer
PARA UMA RADIAÇÃO MONOCROMÁTICA, A É DIRETAMENTE
PROPORCIONAL AO CAMINHO (B) PERCORRIDO PELA RADIAÇÃO
ATRAVÉS DO MEIO E A CONCENTRAÇÃO (C) DA ESPÉCIE
ABSORVENTE.
ASSIM, TEMOS:

 A absorbância é diretamente
A b.c Lei de Beer proporcional à concentração, c,
da espécie que absorve luz na
amostra.
A = Absorbância
 = constante de absortividade molar (cm-1
mol L-1)*
b = caminho óptico (cm)
c = concentração (mol L-1)
Lei de Beer A b.c
* = é característica de uma substância e indica a
quantidade de luz que é absorvida num determinado
comprimento de onda.

 Se a concentração estiver em mol/L e o caminho óptico

estiver em cm, simbolizaremos essas constante por “” e sua
designação será “constante de absortividade molar”.

 Se a concentração estiver em g/L e o caminho óptico

estiver em cm, simbolizaremos essa constante por “a” e sua
designação será “constante de absortividade específica”.

Lei de Beer  A = a.b.c

Lei de Beer A = a.b.c
A absorção da luz é tanto maior
quanto mais concentrada for a
solução por ela atravessada:
A absorção da luz é tanto maior
quanto maior for a distância
percorrida pelo feixe luminoso
através das amostras:

Io IT Io IT

solução 10 g/l 1 cm

Io IT Io IT
solução 20 g/l
3 cm
 Lei de Beer e a análise química
 Para uma substância ser analisada por espectrofotometria,
ela deve absorver luz e esta absorção deve ser distinguível
daquela decorrente de outras substâncias da amostra.

A absorbância é diretamente proporcional à concentração, c, de

espécies absorventes de luz na amostra
Desvios da Lei de Beer
LIMITAÇÃO REAL
 A Lei é válida somente para baixas concentrações.
 Altas concentrações = Interação entre as moléculas altera o
coeficiente de absortividade molar.

DESVIO QUÍMICO
 Quando o analito se associa, dissocia ou reage com um
solvente para formar um produto com um espectro de
absorção diferente daquele do analito.

DESVIOS INSTRUMENTAIS DEVIDO À RADIAÇÃO POLICROMÁTICA

 São utilizados monocromadores (filtros e grades).

DESVIOS INSTRUMENTAIS DEVIDO À RADIAÇÃO ESPÚRIA

 é a radiação que provém do instrumento (espalhamento e
reflexão da radiação).
Instrumento para medidas espectrais no UV e visível.

Espectrofotômetros
DIAGRAMA ESQUEMÁTICO DE UM ESPECTROFOTÔMETRO DE FEIXE
SIMPLES

Seletor de comprimentos Recipiente Transdutor de radiação

Fonte de onda (monocromador) para (DETECTOR)
Amostra Processador de sina
Registrador
 Componentes Essenciais de um Espectrofotômetro

 Fontes de radiação: lâmpada de deutério ou tungstênio;

 Seletor de Comprimento de Onda (Monocromador):
Prisma, Rede de Difração ou Filtro – Dispersa a radiação nos
comprimentos de onda que a compõem e seleciona uma
estreita faixa de comprimento de onda para passar pela
amostra;
 Compartimento de amostra: Cubetas.
- Vidro: Visível
- Quartzo: UV e Visível

 Detector (fotomultiplicadora): dispositivo sensível,

convertem a energia radiante em um sinal elétrico.

 Processadores de sinal: ampliam o sinal elétrico produzido

por um detector.
Tipos de instrumentos: feixe único, feixe
duplo e multicanal.
Feixe Simples

 Os de feixe duplo oferecem a

vantagem de compensar
flutuações no sistema.

Feixe Duplo
Tipos de instrumentos: feixe único, feixe
duplo e multicanal.

 Multicanal (Arranjo de Diodos):

 Permitem obter espectros inteiros em milissegundos.
 Trata-se de uma ferramenta poderosa para determinação
detecção de componentes eluídos de uma coluna
cromatográfica. (Acoplados à cromatógrafos - HPLC)
 Espectro de Absorção
 É um gráfico da Absorbância em função do comprimento de
onda.

Cromóforos
Parte da molécula que contém os elétrons responsáveis pela absorção da
radiação.
 Espectros de absorção de diferentes
substâncias

Espectros de absorção diferentes substâncias

(1: bacterioclorofila; 2: clorofila a; 3: clorofila b; 4: ficoeritrobilina; 5: beta-caroteno)
 Padrões Analíticos
 Padrões analíticos: substâncias com boa estabilidade e que
vão ser usados como referência (comparação) na análise.
 Alto grau de pureza;
 Podem ser adquiridos por fornecedores específicos, ou ainda
podem ser preparados no próprio laboratório.

 São preparadas várias diluições desse padrão com o

solvente adequado, em diferentes concentrações
(Soluções-Padrão)

 Essas soluções são analisadas no instrumento, sob as

mesmas condições utilizadas para a amostra que se
deseja determinar a concentração.
 Curva Analítica

Soluções-padrão de alaranjado de metila para análise

espectrofotométrica a 460nm
 Curva Analítica
Curva Analítica é a relação entre a resposta de um
instrumento e a concentração de um analito.

No mínimo 5 níveis de
concentração e em triplicata. 0,9

0,8

Absorbância (535 nm)

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0,0005 0,0010 0,0015 0,0020 0,0025

-1
Concentração de metildopa (mol L )
 A análise quantitativa
O MÉTODO DE CALIBRAÇÃO – MODELO DE REGRESSÃO LINEAR

A regressão dos mínimos quadrados linear é um dos métodos

estatísticos mais usados em calibração.

Qual a melhor curva para os dados

obtidos experimentalmente que
minimiza a soma dos quadrados dos
resíduos.

 A relação matemática que descreve essa consideração é

denominada modelo de regressão, representada por:
Onde:
y= a.x + b a = coeficiente angular
b = coeficiente linear
r = coeficiente de correlação linear
 REFERÊNCIAS

SKOOG, D. A.; HOLLER, F. J.; NIEMAN, T. A. Princípios de

Análise Instrumental, 6. ed., Bookman: São Paulo, 2009.

SKOOG, WEST, HOLLER,CROUCH. Fundamentos de Química

Analítica, Thomson, 2015.

HARRIS, DANIEL C. Análise Química Quantitativa, 8. ed. ,

LTC: Rio de Janeiro, 2012.

Análise no espectrofotômetro: https://youtu.be/EYRmnC7RdNQ

 Espectro
 Varredura: 200 a 400 nm
 Comprimento de onda de máxima absorção (máx): 257nm
 Curva Analítica – Preparação das Soluções-Padrão
 Curva Analítica

* Considere que o valor de Absorbância da AMOSTRA foi igual a 0,45

Calcule a concentração de sulfametoxazol na amostra.

y =0,0654.x – 0,0015

0,45 = 0,0654.x – 0,0015

0,45+0,0015 = 0,0654.x

0,4515 = 0,0654.x

x = 0,4515/0,0654

x = 6,9 g/mL
 Curva Analítica
Exercício Proposto

 Pesquisar um método para determinação (quali ou

quantativa) de um analito em uma amostra por
espectrofotometria de absorção molecular UV-Vis.

SITES DE BUSCA:
https://www.scielo.br

https://scholar.google.com.br

 Método (técnica) – Comprimento de onda da análise

(UV ou Visível)
 Quantitativo (curva analítica)
 Qualitativo (Comparação de espectro)