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b) Solues utilizadas:
c) Metodologia:
d) Curva-padro de Albumina
1000 mg1 g
10 mg x
x=0,01 g de BSA
Em seguida seguir a metodologia descrita acima, transferir 400 L das diluies realizadas
para tubos de ensaio (em triplicata), adicionar 2,0 mL da soluo de reao em cada tubo, deixar
reagir durante 15 minutos a temperatura ambiente, aps esse perodo adicionar 200 L do
reagente de Folin diludo (1:2), deixar reagir por 30 minutos no escuro e a temperatura ambiente.
Ler a absorbncia no comprimento de onda a 750 nm, zerando o aparelho com o branco.
Utilizando o programa Excel, plotar em planilha as absorbncias no eixo Y e os valores da
concentrao de albumina (mg/mL) no eixo X, gerando um grfico de disperso (completar a
tabela a seguir). Para adicionar no grfico a reta, seleciona um dos pontos da reta, clica com o
boto direito do mouse, seleciona Adicionar linha de tendncia, em seguida seleciona as
opes Exibir a equao no grfico, Exibir valor de R quadrado no grfico e opo de linha
de tendncia linear. Utiliza-se a equao da reta para calcular a concentrao de protenas totais,
onde x equivale a concentrao de protenas em mg/mL e y a absorbncia.
2
Concentrao de Absorbncias
Pontos
albumina (mg/mL) (750 nm)
1 0
2 0,01
3 0,04
4 0,06
5 0,08
6 0,1
7 0,3
8 0,5
9 0,7
10 0,9
11 1,0
Tabela 2: Exemplo.
0.200
0.000
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1
Concentrao de albumina (mg/mL)