UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE QUÍMICA

DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS

QUÍMICOS

LABORATÓRIO DE BIOTECNOLOGIA
EXPERIMENAL

EXPERIMENTO: ANÁLISE DE PROTEÍNAS PELO

MÉTODO DE BIURETO

PROFESSORA: TAMIRES CARVALHO

ALUNA: KAREN DE SÁ GOMES
TURMA: 2
  MATERIAIS E REAGENTES

- Solução de Biureto;
- Água destilada;
- Solução de Caseína;
- Solução de Gelatina;
- Solução de Whey Protein;
- 4 pipetas graduadas de 5 mL;
- Béquer;
- Espectrofotômetro;
- 8 tubos de ensaio;
- Perâs.

 METODOLOGIA

Inicialmente, os 8 tubos foram identificados como B, 1, 2, 3, 4, 5, G e W e

adicionou-se a eles os volumes das soluções conforme o quadro abaixo. Após isso, os
tubos foram homogeneizados e deixados em incubação por 30 minutos em quarto escuro.
Posteriormente, as absorbâncias das soluções foram determinadas em
espectrofotômetro a 550 nm, zerando o aparelho com o branco.

Tubo B 1 2 3 4 5 G W
Água (mL) 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 - - -

Solução de Biureto (mL) 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

Solução de caseína (mL) - 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 - -

Solução de Gelatina (mL) - - - - - - 1,0 -

Solução de Whey Protein (mL) - - - - - - - 1,0

Quadro 1. Volumes dos reagentes

  RESULTADOS E DISCUSSÕES

Abaixo estão os cálculos para as concentrações dos tubos.

No quadro 2, estão as concentrações e as absorbâncias dos tubos após a leitura no

espectrofotômetro.

Tubos Concentração de caseína Absorbância

1 1,84 0,104
2 3,68 0,182
3 5,52 0,276
4 7,36 0,362
5 9,20 0,452
Quadro 2. Valores das Concentrações e Absorbâncias
 A partir do quadro 2, conseguimos obter a curva padrão da Caseína.

Curva padrão da Caseína

0.5
0.45
f(x) = 0.0476086956521739 x + 0.0124
0.4 R² = 0.999333236096931
0.35
0.3
Absorbância

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Concentração da Caseína

Gráfico 1. Curva padrão da caseína utilizada

O gráfico nos proporciona o R2, assim como a equação da reta a qual conseguimos
calcular as concentrações da Gelatina (G) e Whey Protein (W).
 A conclusão da prática de análise de proteínas pelo método de Biureto é a
determinação da concentração de proteínas nas amostras analisadas. Após realizar as
etapas do método, incluindo a preparação das amostras, a adição do reagente de Biureto, a
incubação e a leitura da absorbância, é possível obter dados quantitativos sobre a
concentração de proteínas nas amostras desconhecidas.
Durante a incubação, o reagente de Biureto, que é uma solução contendo cobre (II)
em meio alcalino, entra em contato com as proteínas na presença de grupos peptídicos.
Essa reação resulta na formação de um complexo colorido estável entre o cobre e os
grupos peptídicos das proteínas com uma duração aproximada entre 10 a 30 minutos.
Podemos também confirmar a confiabilidade das concentrações da gelatina e do Whey
Protein devido ao R2 estar aproximadamente igual a 1.