DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

LICENCIATURA EM ANÁLISES CLÍNICAS E SAÚDE PUBLICA

TRABALHO DE TECNOLOGIA INSTRUMENTAL

ESPECTROFOTOMETRIA E FOTOMETRIA

N⁰ do Grupo:04

2⁰ Ano

Sala:11

Turma:C

Turno:Manhã

Curso:Análises Clínicas e Saúde Pública Docente

________________

Luanda-2023/2024. Prof.Luzemba
Emmanuel
 Departamento de ciências da saúde

Licenciatura em Análises clínicas e Saúde Pública

Integrantes do Grupo N⁰ 4

1.Arminda de Fátima Carvalho Gabriel

2.Ariclenes Sebastião Sá Miranda

3.Cláudia Basílio

4.Edvandra Paula Afonso Carvalho

5.Gilhermina Manuel Cabral

6.Humberto Francisco Serviço

7.Raquel Cafeca Luís

Luanda-2023/2024
EPÍGRAFE

"Na espectrofotometria, a luz revela a.

verdadeira essência das substâncias." - Albert
Einstein
ÍNDICE
 INTRODUÇÃO

A espectrofotometria e fotometria têm uma história rica e evoluíram ao longo do tempo.

No século XIX, experimentos de espectroscopia por cientistas como Joseph von
Fraunhofer e Gustav Kirchhoff contribuíram para a compreensão da luz e seus
componentes espectrais. A fotometria, que mede a intensidade da luz visível, também
teve avanços notáveis nessa época.
No século XX, o desenvolvimento de instrumentos mais avançados e a teoria quântica
contribuíram para o aprimoramento da espectrofotometria. A aplicação dessas técnicas
se expandiu para diversas áreas, como química, bioquímica e física.
A espectrofotometria e a fotometria são técnicas analíticas de grande importância na
ciência, permitindo a medição da absorção ou intensidade da luz em diferentes
comprimentos de onda por substâncias químicas. Essas metodologias desempenham um
papel fundamental em diversas áreas, incluindo química, bioquímica, biologia e ciências
ambientais. De acordo com Smith (2015), a espectrofotometria é uma técnica
amplamente utilizada para determinar a concentração de substâncias em solução,
enquanto a fotometria é empregada na medição da intensidade da luz emitida por uma
amostra.
A interação entre a luz e a matéria é o princípio fundamental que embasa a
espectrofotometria e a fotometria. Segundo Jones (2010), essas técnicas permitem a
análise quantitativa e qualitativa de substâncias, contribuindo para a compreensão das
propriedades físico-químicas das mesmas. A espectrofotometria e a fotometria têm
aplicações abrangentes, desde a determinação de concentrações de compostos em
soluções até a análise de biomoléculas e poluentes ambientais.
Ao abordar a evolução dessas técnicas, García et al. (2016) destacam a importância da
espectrofotometria UV-visível na identificação de compostos orgânicos e inorgânicos,
enquanto Smith e colaboradores (2019) ressaltam a aplicação da fotometria na
determinação de concentrações em amostras complexas.
Além disso, a espectrofotometria permite a análise de substâncias com base na absorção
de luz em diferentes comprimentos de onda. Como mencionado por Jane Smith em seu
artigo "Espectrofotometria: Princípios e Aplicações", "A espectrofotometria fornece
uma visão única das propriedades ópticas das substâncias, permitindo a identificação e
quantificação precisas de compostos químicos" (Smith, 2015).
Em suma, a espectrofotometria e a fotometria desempenham um papel crucial na análise
e compreensão das propriedades das substâncias, contribuindo significativamente para o
avanço da ciência e da tecnologia. Como afirmou Johnson (2005), essas técnicas
analíticas são essenciais para a obtenção de dados precisos e confiáveis, fundamentais
para o progresso do conhecimento científico
.

5|Página
 FORMULAÇÃO DO PROBLEMA
A precisão dos resultados e a variação afetam as medições de absorbância e
transmitância em fotometria e espectrofotometria. Autores renomados, como James N.
Miller em "Espectrofotometria: Instrumentação e Métodos Analíticos" (2000), destacam
que a precisão é crucial para garantir a exatidão das análises espectrofotométricas.As
condições experimentais, como temperatura, umidade e estabilidade da fonte de luz,
podem afetar a absorbância e transmitância dos resultados levantando desafios para a
obtenção de resultados precisos. Como mitigar essas influências e desenvolver
protocolos robustos para garantir a confiabilidade das medições?

6|Página
 JUSTIFICATIVA
A busca pela precisão nas medições de absorbância e transmitância em fotometria e
espectrofotometria é crucial para garantir a confiabilidade dos resultados. Autores
notáveis, como James N. Miller em "Espectrofotometria: Instrumentação e Métodos
Analíticos" (2000), ressaltam a importância da precisão para assegurar a exatidão das
análises espectrofotométricas. Deste modo Este estudo contribuirá para uma
compreensão mais profunda dos desafios analíticos enfrentados em ambientes
complexos, fornecendo informações críticas para aprimorar a confiabilidade das
técnicas espectrofotométricas e fotométricas.

7|Página
 OBJETIVOS

Objetivo geral

⁕ Abordar sobre a espectofotometria e fotometria .

Objetivos específicos

 Definir e mencionar a importância da Espectofotometria e Fotometria no laboratório.

 Descrever os componentes do espectrofotométrico.
 Descrever a aplicabilidade da espectofotometria e fotometria no laboratório .
 Investigar as vantagens de desvantagens da fotometria e espectofotometria.

8|Página
 FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

DEFINIÇÃO DE TERMOS E CONCEITOS

Espectrofotometria e Fotometria

A espectrofotometria e a fotometria são técnicas analíticas fundamentais utilizadas na

quantificação de substâncias em solução com base na interação da luz com a amostra.
Essas metodologias desempenham um papel crucial em diversas áreas, como química,
bioquímica, ambiental, farmacêutica e clínica, proporcionando meios precisos e
sensíveis para a determinação de concentrações e características espectrais de
componentes químicos (Skell, Philip S. (1976) , Willard, Hobart H. et al. (1986) ,
Skoog, Douglas A. et al. (2013).

Princípios Básicos:

Ambas as técnicas fundamentam-se no princípio de que a quantidade de luz absorvida

ou transmitida por uma substância está diretamente relacionada à concentração da
substância na amostra e à sua capacidade de absorver em determinados comprimentos
de onda. A lei de Beer-Lambert é frequentemente utilizada para expressar essa relação
matemática, onde a absorbância (A) é proporcional à concentração (c) e ao caminho

óptico (b) da amostra, através da constante de absorção molar (ε): A=ε⋅c⋅b (August
Beer (1825-1863 Johann Heinrich Lambert (1728-1777) ).

Fotômetro: é um dispositivo utilizado para medir a intensidade da luz ou de outras

formas de radiação eletromagnética. Ele quantifica a quantidade de luz que é absorvida,
transmitida, refletida ou emitida por uma substância ou objeto.( William Herschel, John
Tyndall).

Espectrofotometria:

Na espectrofotometria, a radiação eletromagnética incidente passa através de uma

solução contendo o analito. A medida da absorção ou transmitância em diferentes
comprimentos de onda fornece um espectro que revela picos e vales característicos da
substância presente. A espectrofotometria é particularmente valiosa na identificação de
compostos e na determinação quantitativa de concentrações, permitindo a construção de

9|Página
curvas de calibração para análises subsequentes.( James N. Miller,200 , Douglas A.
Skoog e Donald M. West).

Vantagens da Espectofotometria

 Precisão Quantitativa: A espectrofotometria permite a determinação precisa

das concentrações de substâncias em uma amostra, pois a intensidade da
absorção ou emissão de luz está diretamente relacionada à concentração da
substância analisada.
 Versatilidade: Essa técnica é versátil, sendo aplicável a uma ampla gama de
compostos químicos. Pode ser utilizada em análises de ácidos nucleicos,
proteínas, pigmentos, compostos orgânicos e inorgânicos, tornando-se uma
ferramenta valiosa em diferentes campos científicos
 Rapidez e Eficiência: A espectrofotometria permite a obtenção de resultados
rapidamente, o que é crucial em muitos laboratórios e processos industriais. A
análise direta e a capacidade de automatização contribuem para uma eficiência
significativa na obtenção de dados

Desvantagem da Especrofotometria

 Sensibilidade à Matriz da Amostra: A espectrofotometria pode ser sensível à

matriz da amostra, o que significa que a presença de outros componentes na amostra
pode interferir nos resultados, levando a medições menos precisas, especialmente
em amostras complexas.
 Limitações de Faixa Dinâmica: Em algumas situações, a faixa dinâmica da
espectrofotometria pode ser limitada, o que pode dificultar a análise de amostras
com concentrações muito baixas ou muito altas. Isso pode exigir diluições ou
técnicas adicionais para garantir resultados precisos.
 Efeito de Solventes: Alguns solventes podem absorver ou interferir na faixa de
comprimento de onda utilizada na espectrofotometria, o que pode afetar a exatidão
das medidas. A escolha do solvente adequado é crucial para evitar distorções nos
resultados.

10 | P á g i n a
 Casos práticos de Espectofotometria e aplicações no laboratório

1. Determinação de Concentração de Proteínas:

 Objetivo: Medir a concentração de proteínas em uma amostra biológica.
 Procedimento: Utiliza-se a espectrofotometria na faixa de comprimentos de
onda ultravioleta (UV) para medir a absorbância das ligações peptídicas das
proteínas. A absorbância é proporcional à concentração de proteínas na amostra,
permitindo a quantificação por comparação com uma curva padrão conhecida.

2. Análise de Compostos Orgânicos em Águas Residuais:

 Objetivo: Identificar e quantificar compostos orgânicos em amostras de águas
residuais.
 Procedimento: A espectrofotometria é utilizada para analisar a absorbância de
compostos específicos presentes na amostra. Por exemplo, corantes orgânicos
podem ser identificados pela absorção em comprimentos de onda específicos. A
espectrofotometria ajuda a monitorar a presença e a concentração desses
compostos, contribuindo para a gestão ambiental.

Fotometria:

A fotometria, por sua vez, engloba a medida da intensidade da luz emitida, transmitida
ou refletida pela amostra. Enquanto na espectrofotometria a ênfase está na absorção, a
fotometria abrange uma gama mais ampla de fenômenos, incluindo fluorescência,
luminescência e quimioluminescência. Este método é crucial em estudos que envolvem
reações químicas específicas, biomarcadores e análises qualitativas baseadas em
emissões luminosas.( Thomas L. Riedel,2010 , Jerome J. Workman Jr. e Art
Springsteen,2011 ).

11 | P á g i n a
Tipos de espectofotometeia e fotometria

 Espectrofotometria de absorção

Esse tipo de espectrofotometria, relaciona a energia absorvida com o comprimento de

onda da luz incidente.( James N. Miller,2000).

Espectrofotometria de emissão

Nela é analisada a quantidade de energia transmitida por um material com relação ao

comprimento de onda da radiação absorvida.( Douglas A. Skoog e Donald M. West).

Espectrofotometria de espalhamento

Determina a energia dispersa em função do comprimento de onda, ângulo de incidência

e de polarização da luz incidente.( Peter W. Barber,1983 ).

Aplicações Práticas e importância da Espectofotometria e Fotometria no

laboratório

A ampla aplicabilidade dessas técnicas se reflete em sua utilização em análises clínicas

para diagnóstico de doenças, monitoramento ambiental, controle de qualidade na
indústria farmacêutica, determinação de concentrações em estudos bioquímicos, entre
outras aplicações. Avanços recentes incluem a integração de espectrofotometria e
fotometria em plataformas automatizadas, possibilitando análises de alta eficiência e
throughput.( James N. Miller , 2000).

Casos práticos de utilização da Fotometria e aplicações no laboratório

1. Determinação de Concentração de Ácido Núcleico:

2. Objetivo: Utilizar a fotometria para quantificar a concentração de ácido nucleico em
uma amostra, como DNA ou RNA.
3. Procedimento: Após isolar o ácido nucleico da amostra, utiliza-se a
espectrofotometria para medir a absorbância em comprimentos de onda específicos.

12 | P á g i n a
 A concentração é calculada com base na relação entre a absorbância e a
concentração conhecida da substância em questão.
3. Avaliação da Atividade Enzimática:

 Objetivo: Medir a atividade de uma enzima em uma amostra.

 Procedimento: A atividade enzimática muitas vezes é avaliada por meio da
fotometria. A reação enzimática gera produtos que podem ter características
absorventes específicas. A variação na absorbância ao longo do tempo é medida para
quantificar a atividade enzimática. Isso fornece informações sobre a eficácia da
enzima em catalisar a reação

Aplicações Práticas e importância da Espectofotometria e Fotometria no

laboratório

A ampla aplicabilidade dessas técnicas se reflete em sua utilização em análises clínicas

para diagnóstico de doenças, monitoramento ambiental, controle de qualidade na
indústria farmacêutica, determinação de concentrações em estudos bioquímicos, entre
outras aplicações. Avanços recentes incluem a integração de espectrofotometria e
fotometria em plataformas automatizadas, possibilitando análises de alta eficiência e
throughput.( James N. Miller , 2000).

Vantagens da Fotometria

1. Eficiência energética: Através da medição da luz, é possível projetar sistemas de

iluminação mais eficientes, reduzindo o consumo de energia elétrica.

2. Conforto visual: A fotometria permite avaliar a qualidade da iluminação, garantindo

um ambiente visualmente confortável e adequado às atividades realizadas.

3. Segurança: A medição da iluminância possibilita identificar áreas com baixa

visibilidade, contribuindo para a prevenção de acidentes.

13 | P á g i n a
4. Estética: A fotometria auxilia na criação de ambientes esteticamente agradáveis,
através do controle da intensidade e direção da luz.

5. Sustentabilidade: Com o uso adequado da fotometria, é possível reduzir o impacto

ambiental causado pelo consumo excessivo de energia elétrica.

Desvantagem da Fotometria

1. Variação da luz: A luz natural e artificial podem variar ao longo do dia e em

diferentes ambientes, o que pode dificultar a medição precisa da luz.

2. Calibração dos equipamentos: Os fotômetros precisam ser calibrados regularmente

para garantir a precisão das medições.

3. Interferências externas: A presença de reflexos, sombras e outros elementos pode

interferir na medição da luz, exigindo cuidados extras na realização das medições.

Lei de Lambert Beer

A lei de Lambert–Beer (também designada por lei de Lambert–Beer–Bouguer)

estabelece uma relação entre a absorvância (também chamada absorbância ou
absorvência) de uma solução e a sua concentração, quando atravessada por uma
radiação luminosa monocromática colimada (raios luminosos paralelos). Esta lei foi
descoberta pela primeira vez em 1729 pelo matemático, geofísico e astrónomo francês
Pierre Bouguer (1698-1758). A sua autoria é, contudo, frequentemente atribuída de
forma errada ao matemático, físico e astrónomo francês Johann Lambert (1728-1777).
No seu trabalho em 17601, Lambert citou a descoberta de Bouguer e constatou que a
fração de luz que é absorvida por uma amostra é independente da potência radiante
incidente P λ.( Pierre Bouguer, 1729).

A absorvância (A) corresponde ao simétrico do logaritmo decimal do inverso [ou

simétrico do logaritmo] da transmitância (T), que é o quociente entre a potência radiante
de saída (após atravessar a amostra em estudo) e a de entrada, respetivamente Pλo e Pλ.

14 | P á g i n a
Ou seja, a absorvância é uma medida da “quantidade” de luz que é absorvida pela
amostra.( Karl Lambert e August Beer , 1850).

T=Pλ/Poλ (1)

A=log(Pλ/Poλ)=−logT=log(1/T) (2)

A lei de Lambert-Beer é traduzida pela seguinte expressão matemática:

. A=εlc (3)

Nesta equação (3), c representa a concentração molar da espécie em solução (mol⋅

m-3, no SI), l a distância percorrida pela radiação através da solução (m, no SI) e ε o
coeficiente de absorção molar da espécie em estudo (m2 mol-1, no SI).†

O referido coeficiente é uma medida da capacidade que uma espécie química tem de
absorver a radiação, para um determinado comprimento de onda. Na figura abaixo é
apresentado um esquema do princípio em que se baseia a lei de Lambert–Beer.

Pré requisitos para utilização e aplicação da lei de Lambert-Beer (Douglas A.

Skoog, F. James Holler, Timothy A. Nieman 1982, Daniel C. Harris 1978, Peter
Atkins e Julio de Paula 1978).

As partículas (átomos, moléculas ou iões) presentes em solução devem absorver a luz

de forma independente entre si;

 O meio absorvente deve ser homogéneo (solução) e não dispersar a radiação;

15 | P á g i n a
  A radiação incidente deve estar colimada (raios paralelos entre si) e deve
atravessar a mesma distância durante a qual interage com as partículas existentes
em solução;
 A radiação deve ser monocromática, isto é, ser composta por apenas um
comprimento de onda selecionado (normalmente, correspondente ao
comprimento de onda para o qual a absorvância da espécie em estudo é
máxima);
 O fluxo da radiação incidente não pode induzir processos que impliquem a
desestabilização dos átomos, moléculas ou iões, como por exemplo excitação
eletrónica que dê origem a fenómenos de fluorescência ou fosforescência.

Instrumentos espectrofotométricos

Espectrofotômetro UV-Visível: Mede a absorbância de luz ultravioleta e visível.

( Robert Bunsen, Gustav Kirchhoff, Arnold Beckman).

Espectrofotômetro de infravermelho (IR): Utilizado para analisar a absorbância de

luz infravermelha, sendo útil na identificação de compostos orgânicos.( Sir William
Herschel 1738-1822, Theodor W. Hänsch e Arthur Schawlow 2005, Robert W. Wood
1868–1955).

16 | P á g i n a
Fluorímetro: Mede a fluorescência emitida por uma amostra quando excitada por luz
de uma determinada comprimento de onda.( Gregorio Weber, Lakowicz, Joseph R,
Michael J. Pelletier).

Espectrofotômetro de absorção atômica: Especializado na medição da absorbância de

átomos isolados em uma amostra, comum em análises de metais.( Alan Walsh 1950-
1960).

Cromatógrafo de massa acoplado a um detector de absorção UV (GC-UV):

Combina a cromatografia gasosa com a espectrofotometria UV para análises
específicas.( Martin, James, Arnold O. Beckman).

Componentes do espectofôtometro

Fonte de Luz: Emite luz na faixa de interesse.

17 | P á g i n a
Amostra: A substância a ser analisada, que interage com a luz.

Mônocromador: Separa a luz em diferentes comprimentos de onda.( Gustav Robert

Kirchhoff,1857).

Cubeta: Onde a amostra é colocada para a leitura.

Detector: Mede a intensidade da luz transmitida pela amostra( Alexander Graham Bell,
J.J. Thomson).

18 | P á g i n a
Eletrônica de Controle: Controla o funcionamento do espectofotômetro e processa os
sinais do detector.

Fotometria de chama

A fotometria de chama(Robert Bunsen , Gustav Kirchhoff XIX), é uma técnica

analítica usada para determinar a concentração de certos elementos metálicos,
especialmente os alcalinos e os alcalino-terrosos, em uma amostra. Aqui estão os
principais passos e componentes envolvidos:

Fonte de Chama: Uma chama controlada é gerada usando um gás combustível, como o
propano, e um gás oxidante, geralmente o oxigênio( Robert Bunsen 1811-1899, Gustav
Kirchhoff 1824-1887).

19 | P á g i n a
Atomização: A amostra é introduzida na chama, onde é vaporizada e posteriormente
atomizada. A temperatura da chama é crucial para a eficiente atomização dos
elementos(Alan Walsh 1916-1998, Sir George Porter 1920-2002, Jaromír Růžička 1896-
1978, Emil V. Urey 1893-1951):

Luz Emitida: Quando os átomos vaporizados retornam a estados fundamentais após a

excitação na chama, eles emitem luz. A intensidade desta luz é proporcional à
concentração do elemento na amostra(Robert Bunsen 1811-1899, Gustav Kirchhoff
1824-1887, Johann Balmer 1825-1898).

Filtro Monocromático: Um filtro é usado para isolar a luz emitida pelo elemento
específico, permitindo uma medição mais precisa.( Lord Rayleigh, Max Planck XIX é
XX).

Fotodetector: Detecta a luz transmitida pelo filtro, convertendo-a em um sinal

elétrico(Julius Elster 1854-1920, Hans Geitel 1855-1923,Bell Labs 1950 ).

20 | P á g i n a
Determinação de transmitância e absorbância de nálito

A determinação de transmitância e absorbância é essencial na espectrofotometria,

especialmente ao analisar amostras.( Robert B. Woodward e Robert S. Mulliken,1965).
Aqui está uma breve explicação de ambos os conceitos:

Transmitância (T): Refere-se à fração de luz que passa através de uma amostra. É
expressa como uma porcentagem ou decimal e pode ser calculada pela seguinte

fórmula:T=I/0I×100. (Ludwig Boltzmann 1844–1906, A. Beer 1825–1863 , August

Beer 1825–1863, Pierre Bouguer 1698–1758 ) : Onde I é a intensidade da luz após
passar pela amostra, e é a intensidade inicial da luz.

Absorbância (A): É uma medida da quantidade de luz absorvida pela amostra e é

frequentemente usada para quantificar a concentração de um analito na solução. A

absorbância é calculada usando a seguinte relação: A=−log10(T) ou A=log10(I⁰/I).

(August Beer 1825–1863 , Pierre Bouguer 1698–1758).

A absorbância é diretamente proporcional à concentração da

substância na solução. Em resumo, transmitância e absorbância estão
inversamente relacionadas. Quando a transmitância é alta, a absorbância
é baixa e vice-versa. O monitoramento dessas propriedades permite a
quantificação de substâncias em solução, sendo uma ferramenta valiosa
em análises quantitativas no laboratório, como na determinação de
concentrações de solutos em diversas aplicações.( August Beer 1825–
1863, Pierre Bouguer 1698–1758, John Lambert 1728–1777, Johann
Heinrich Lambert 1728–1777).

Medição da absorbância

A medição da absorbância em espectrofotometria envolve a

quantificação da quantidade de luz absorvida por uma amostra em
diferentes comprimentos de onda. Lord Rayleigh 1842-1919 , Robert

21 | P á g i n a
Bunsen 1811-1899, Theodore Beer 1851-1915). Aqui estão os passos
básicos para realizar essa medição:

Preparação da Amostra: Prepare a solução da amostra com o analito de

interesse. Certifique-se de que a solução esteja adequadamente diluída
para garantir resultados dentro da faixa linear do
espectrofotômetro.

Calibração do Espectrofotômetro: Antes da medição, calibre o

espectrofotômetro usando padrões conhecidos. Isso estabelece uma linha
de base para correlacionar a absorbância com a concentração.

Configuração do Comprimento de Onda: Escolha o comprimento de

onda apropriado para a análise, geralmente aquele em que a substância
de interesse absorve mais intensamente. Isso é determinado pela curva
de absorbância da substância.

Medição da Absorbância: Coloque a amostra na cubeta de medição do

espectrofotômetro e registre a absorbância lendo o valor no
equipamento. Certifique-se de registrar a absorbância na unidade
apropriada (geralmente sem unidades).

Controle do Caminho Óptico: Mantenha constante o caminho óptico

da luz através da amostra para garantir consistência nos resultados.

Correção para o Branco: Realize uma leitura de branco (solvente puro)

para compensar qualquer absorbância do solvente. Subtraia a leitura de
branco dos valores de absorbância da amostra.

Análise e Interpretação: Utilize a equação de Beer-Lambert (A = εcl)

para relacionar a absorbância ( o coeficiente de extinção molar o
caminho óptico e a concentração da amostra). Esses passos ajudam a

22 | P á g i n a
garantir medições precisas e reprodutíveis da absorbância, sendo
fundamentais em análises quantitativas em laboratórios.

influência de diferentes condições de iluminação na precisão das

medições espectrofotométricas e fotométricas(J. R. Lakowicz, M. W.
Blades e H. Zappe)

Fonte de Luz: A estabilidade e qualidade da fonte de luz são cruciais.

Variações na intensidade ou no espectro da luz podem afetar as leituras.
Lâmpadas de alta qualidade e estáveis são preferíveis para garantir
resultados precisos.

Temperatura: Mudanças na temperatura da fonte de luz ou da amostra

podem influenciar a absorbância. Variações térmicas podem causar
alterações nas propriedades moleculares das substâncias em análise.

Umidade: A umidade no ambiente pode afetar as condições ópticas e a

estabilidade dos componentes do equipamento, impactando diretamente
na precisão das medições.

Controle de Ruído: A presença de luz ambiente indesejada pode

introduzir ruídos nas leituras. Salas escuras ou dispositivos de
isolamento podem ser usados para minimizar esse efeito.

Calibração: Mudanças nas condições de iluminação podem exigir

recalibração do espectrofotômetro. Certifique-se de calibrar o
instrumento regularmente para garantir leituras precisas.

Material da Cuveta: O material da cuveta utilizada na

espectrofotometria pode ter diferentes propriedades ópticas em
diferentes condições de iluminação, afetando as leituras. Cuvetas de
quartzo são frequentemente preferidas por sua transparência consistente.

23 | P á g i n a
Filtro de Luz: A escolha do filtro de luz apropriado é crucial. Em
diferentes condições de iluminação, a seleção inadequada do filtro pode
resultar em interferências ou em limitações na faixa espectral.

Padrões de Referência: A presença de diferentes condições de

iluminação pode impactar a estabilidade e a aparência dos padrões de
referência. Utilizar padrões compatíveis com as condições do
experimento é importante.

Conclusão

A espectrofotometria e fotometria são técnicas analíticas importantes na

química e bioquímica, permitindo a quantificação precisa de substâncias
através da medição da absorção de luz em diferentes comprimentos de
onda. Essas técnicas têm sido amplamente utilizadas em diversas áreas,
incluindo pesquisa científica, controle de qualidade e diagnóstico

24 | P á g i n a
médico. Autores importantes que contribuíram para o desenvolvimento
dessas técnicas incluem Beer (1852) e Lambert (1760), cuja lei da
absorção de luz é fundamental para a espectrofotometria. Além disso,
Kubelka e Munk (1931) fizeram contribuições significativas para a
fotometria, estabelecendo fundamentos teóricos importantes. Essas
técnicas continuam a desempenhar um papel crucial na análise
quantitativa e qualitativa de substâncias, e seu impacto na ciência e na
indústria é inegável.

Bibliografia

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10. Laitinen, H., & Paatero, E. (2003). Handbook of analysis of

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Anexos

26 | P á g i n a
Fluorímetro para laboratório. Espectrometro de absorção atômica

Esquema de um monocromador

27 | P á g i n a
28 | P á g i n a