Recombinação do

DNA

Israel José Pereira Garcia

1
 Recombinação de

• O que é Recombinação?
• Quais os principais tipos de recombinações?
• Existe diferença entre procariotos e eucariotos?
• Quais os principais mecanismos?

2
 Recombinaçã

• É um processo natural de troca genética que

aumenta a diversidade entre as espécies.

• É um rearranjo da informação genética.

3
 Recombinaçã

Homóloga • Envolve trocas genéticas entre duas moléculas de DNA

• Compartilhar uma região extensa de sequência quase
(Geral) idêntica.

Sítio-
• Trocas ocorrem em uma sequência específica do DNA.
específica

Transposição • Geralmente envolve um segmento curto de DNA com a

capacidade de se mover de uma localização no
cromossomo para outra (Genes Saltadores).
4
Qual é a Importância da
Recombinação?

5
 Reparo do DNA.

Qual é a Manutenção da
diversidade Regulação na
Importância da genética: geração
de novos alelos e
expressão de
certos genes.
genes.
Recombinação?
Facilita a
segregação
cromossômica
durante a divisão
celular meiótica.
6
 Recombinação Homóloga em Procariotos

Reparo de DNA (Reparo de DNA por r

Recombinação Homóloga

• Reconstruir a forquilha de replicação (que pararam por algum dano no DNA).

• Quebras duplas no DNA podem ocorrer via radiação ionizante, estresse oxidativo, etc.

• Durante a conjugação (DNA cromossômico é transferido de uma bactéria para outra).

7
Por que em procariotos não há variabilidade
genética com recombinação homologa?

8
 Por que em procariotos não á variabilidade
genética com recombinação homologa?
Replicação
É o mesmo material
genético
(idêntico)
Cromossomo

Procariotos
Procariotos

9
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

1
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

1
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

1
Recombinação Homóloga em

Helicase/nuclease RecBCD = 1
Chi = 5’GCTGGTGG3’

1
 D
C

B
D

Chi = 5’GCTGGTGG3’

1
 D
C

B
D

Chi = 5’GCTGGTGG3’

16
1
1
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

1
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

Recombinase

2
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?
Recombina

Recombinase

2
 Recombinação Homóloga em
Qual é o mecanismo?

2
 Ruv AB: Promove a
migração do Ramo

A junção de Holliday pode adotar múltiplas conformações e um con

Processo dependente de ATP

2
Ruv C: nuclease (5’ – A/T–T-T-G/C – 3’)

DNA Ligase: liga as fissuras

2
 Recombinação Homóloga em Procariotos

Qual é o mecanismo?
Forquilhas sereconstroem emumprocesso
chamado de Reinício da Replicação
Independente da Origem

Pri A, Pri B, Pri C e DNA T

Interação com DNAC que carrega a

helicase

2
Recombinação Homóloga em Eucariotos

2
 Recombinação Homóloga em
Eucariotos
É necessária para a segregação adequada dos cromossomos durante a meiose,

2
 Recombinação Homóloga em
Eucariotos
É necessária para a segregação adequada dos cromossomos durante a meiose,

2
 Recombinação Homóloga em
Eucariotos
É necessária para a segregação adequada dos cromossomos durante a meiose,

2
 Recombinação Homóloga em
Eucariotos
É necessária para a segregação adequada dos cromossomos durante a meiose,

3
Recombinação Homóloga em
Spo 11

MRX

Recombinase: Rad51 e Dmc1

3
Recombinação Homóloga em

3
Recombinação Homóloga em

3
 Recombinação Homóloga em
É necessária para a segregação adequada dos cromossomos durante a meiose,
também é importante no reparo das forquilhas de replicação paradas.

34
 Recombinação Homóloga em

Alinhamento • Aneuplodia (n° incorreto de cromossomos)

ou a • Podem não ter cópias ou ter duas cópias de um cromossomo.

• Quando um gameta com duas cópias se junta a um gameta com uma
recombinação cópia na fecundação, as células no embrião resultante tem três cópias
daquele cromossomo (trissomias)

incorreta

Aneuplodias • S.Cerevisiae (1 a 10.000 eventos mitóticos)

• Camundongos (1 a 100)
• Humanos (10 a 30%) – Monossomias ou trissomias (Maiorias não
letais, abortos espontâneo)
3
3
 Recombinação

Recombinação Homóloga em Procarioto

Reparo de DNA (Reparo de DNA por r

3
 Recombinação

Reparo de DNA

Ligação física e transitória

entre as cromátides,
Recombinação homóloga promovendo a segregação
em eucariotos ordenada dos cromossomos
na primeira celular meiótica

Potencializa a diversidade
genética em uma população

3
Recombinação sítio-específica

3
 Recombinação sítio-específica
É limitada em sequências específicas
Enzima:
Todas as Recombinase (cliva e liga o DNA)
Local de ação: sequência de DNA única e curta (20 a 200 bp)
Duas classes: dependentes de resíduos de Tyr ou Ser no sítio ativo
Funções de regulação da expressão genéticas, promoção de rearranjos de
DNA programados

4
Recombinação sítio-

4
Recombinação sítio-

Liga-se covalentemente
aoDNAno sítiode
clivagempor meiode
ligação fosfotirosina

4
Recombinação sítio-

4
Recombinação sítio-

4
Recombinação
sítio-específica

Recombinase tem ação

de endonuclease e ligase

4
Elementos de Transposição

4
 Elementos de
Transposição
Movem-se ou “saltam” de um local no cromossomo (sítio doador) para outro
no mesmo cromossomo ou em cromossomo diferente (sítio-alvo).

Não é necessária uma sequência de DNA homóloga

Nova localização é aleatória
A inserção de um transposon em um gene essencial pode matar a célula

4
 Elementos de
Transposição

Vária Estrutura, mas a maioria tem sequências curtas em cada

extremidades que servem como locais de ligação para a transposases.

4
 Elementos de
Transposição
(Transposons)

4
 Tipos de

Com base em sua estrutura e mecanismo de transposição os

transposons podem ser divididos de três grupos:

1. Transposons de DNA
2. Retrotransposons semelhantes a vírus
3. Retrotransposons não-retrovirais

5
 Transposons de
• Existem em procariotos e eucariotos.
• Predominam em procariotos (disseminação da resistência a antibióticos): Conjugação
em bactérias.
• Os elementos móveis podem se mover dentro e entre células (transferência gênica
horizontal)
• Pequenas repetições invertidas em cada extremidade
• Enzima especializada necessária ao movimento: Transposase
• Recorta e cola (Transposição conservativa): o número original de cópias se
mantem constante.
• Copiar e colar (Transposição replicativa): o DNA do transposon é replicado durante
a transposição: uma cópia permanece no sítio original enquanto a outa é inserida no
novo sítio cromossômico.
5
 Transposons de DNA em
Sequências de Inserção (IS – Insertion Sequence)

• IS são pequenos transposons bacterianos que carregam apenas os genes que codificam as
proteínas
necessárias para sua própria transposição.

• Tamanho: 768 bp a 5 kb

• São os constituintes normais de plasmídeos e de cromossomos bacterianos.

5
 Transposons de DNA em

Mecanismo de Inserção do elemento IS

5
 Transposons de DNA em

Mecanismo de Inserção do elemento IS

O sítio alvo de inserção é cortado.

5
 Transposons de DNA em

Mecanismo de Inserção do elemento IS

O sítio alvo de inserção é cortado.

O elemento IS é inserido na região do DNA clivada

A DNA polimerase preenche a lacuna e a ligase

sela

5
 Transposons de DNA em

Transposons Tn

• São semelhantes aos elementos IS mas são mais estruturalmente complexos e carregam
genes adicionais (resistência a antibióticos).

• Existem 2 tipos de transposons: Compostos e Não-compostos

5
 Transposons de DNA em
Transposons Tn (Compostos)
• Transporta diferentes genes e são flanqueados por elementos IS.

• Transposon Tn10 tem 9.3 kb e possui 6.5 kb central que inclui gene para resistência a
tetraciclina e 1.4 kb nas extremidades de elementos IS.

• Elemento IS fornece a transposase e os sítios ITRs

5
 Transposons de DNA em
Transposons Tn (Não-Compostos)
• Transporta diferentes genes mas não são flanqueados por elementos IS.
• Transposon Tn3 tem 5 kb e possui 3 genes:
• bla (β-lactamase), tnpA (transposase), e tnpB (resolvase, cuja função é de recombinação).

5
 Transposons de DNA em Eucariotos
1940 - Presença de zonas de coloração diferente na semente do
milho

Ela percebeu que inserções, deleções e translocações causadas

pelos elementos móveis de DNA eram responsáveis pela
variegação no milho.

Barbara McClintoc (Botânica americana

1902 – 1992)
Nobel fisiologia e medicina - 1983
5
Transposons de DNA em
Manchas púrpuras no milho são causados por transposons

Genótipo c/c = milho incolor

Genótipo C/- = milho púrpura

Se a reversão de c  C ocorrer na célula, esta irá produzir pigmento púrpura

Quanto mais cedo a reversão ocorrer durante o desenvolvimento do milho,

maior será a mancha púrpura

6
 Transposons de DNA em

T C

C
T

Barbara McClintoc
(Botânica americana 1902
– 1992)
Nobel fisiologia e
medicina - 1983
6
 Retrotransposons semelhantes
aos retrovírus
• Segundo grupo de transposons
• Existe somente em eucariotos (Drosophila, leveduras, plantas e humanos)
• Retrotransposons codifica uma transcriptase reversa que faz uma cópia do
DNA a partir de RNA transcritos
• As novas cópias do DNA se integram em diferentes regiões do genoma

Repetições terminais longas (LTR, long terminal

repeats) e diretas em cada extremidade. 6
 Retrotransposons semelhantes
aos retrovírus
• Segundo grupo de transposons
• Existe somente em eucariotos (Drosophila, leveduras, plantas e humanos)
• Retrotransposons codifica uma transcriptase reversa que faz uma cópia do
DNA a partir de RNA transcritos
• As novas cópias do DNA se integram em diferentes regiões do genoma
Nova cópia do
DNA do genoma Retransposon retransposon

Inserção
Transcriptase
Reversa

63
Mecanismo de retrotransposição
 Retrotranposons não-
• Terceiro grupo de elementos transponíveis.
• Trancriptase reversa e uma endonuclease
• Movem-se através de um intermediário de RNA normalmente produzido
por um promotor adjacente.
• LINEs e SINEs (humanos)

Cauda de Poli-A na extremidade 3’

6
 Retrotranposons não-
LINEs (Long Intersped Nuclear Elements)
Elementos nucleares intercalados
longos

• 6 a 8kb de comprimento
• 20,4 % do genoma humano
• Codificam proteinas que medeiam sua propria transposição (transcriptase reversa e uma endonuclease).

• A grande maioria (> 99%) acumulou mutações que os tornaram inativos do ponto de vista da transposição.

• O Line mais comun e que ainda é transcricionalmente ativo: LINE-1 (L1)

• Tem 6.5 kb
• Repetido cerca de 50.000-100.000 vezes (5% do genoma)

6
 Retrotranposons não-
SINEs (Short Intersped Nuclear Elements)
Elementos Nucleares intercalados curtos

• 100 a 400 pb
• 13 % do genoma humano
• Cada SINE contém um promotor para a RNA pol III
• Não codificam proteínas
• São aparentemente propagados por enzimas codificadas por LINES
• Alu é SINE humano mais conhecido
• ~300 bp
• Repetido cerca de 300,000-500,000 vezes (3% genoma)
• Flanqueado por repetições de 7-20 pb
• Contém um sítio para a enzima de restrição AluI

6
 Algumas das doenças associadas
a

• Deficiência da colinesterase

• ꞵ-Talassemia

• Hemofilia A

• Câncer do cólon (Inserção no gene APC)

• Câncer de mama (Inserção no gene BRCA1 e BRCA2)

• Câncer de endométrio (Inserção no gene PTEN)

6
 Algumas das doenças associadas
a

Normal
Transposon

GENE GENE
Proteína funcional

Proteína funcional

6
Significado Biológico dos

6
 Significado Biológico dos

• São apenas “DNA egoístas”?

• Os transposons causam mudanças genéticas e fazem importantes contribuições para a
evolução dos genomas:
• Inserção em genes
• Inserção em sequências reguladoras e alteração da expressão gênica
• Mutações cromossômicas

7
Próxima aula: Transcrição e processamento do RNA

7
Bom Almoço!