Atividade: Comparação fibras de reticulina vs elásticas (Gordon&Sweet vs Verhoeff)

Introdução:
As fibras de reticulina não coram com HE e, apesar de serem positivas com o PAS, são muitas vezes
confundidas com as fibras de colagénio. O Gordon&Sweet usa a impregnação pela prata para diferenciar as
fibras de reticulina das restantes pois estas são argirofilas. Já a coloração de Verhoeff usa a combinação de
hematoxilina, iodo e cloreto férrico com a finalidade de demonstrar fibras elásticas.

Princípios da coloração:
As fibras de reticulina apresentam estrutura e tamanho diferentes das fibras de colagénio. No adulto,
encontram-se associadas às camadas basais e maioritariamente aos órgãos hematopoieticos e linfóides.
Quimicamente, estas fibras contêm uma parte glicídica e outra lipídica (não presente no colagénio). É esta
estrutura glicídica e lipídica que provoca e estabiliza as anastomoses entre as fibras de reticulina.
A técnica de impregnação pela prata das fibras de reticulina segue uma série de etapas importantes, tais
como: Oxidação (prepara o tecido através de reações de oxidação de grupos hidroxilo em aldeídos; exemplos
de agentes oxidantes: Permanganato de potássio (seguido de um branqueamento com ácido oxálico),
Metabissulfito de sódio, Ácido fosfomolíbdico, ou Ácido Periódico), Sensibilização (utiliza-se um sal metal de
modo a formar compostos orgânico-metálicos com o tecido. Sais mais usados: Alúmen de ferro (funciona
melhor com o permanganato de potássio), ou Nitrato de uranilo), Impregnação (pela prata, usualmente
Solução de Prata Amoniacal), Redução (a prata iónica presente nas fibras é reduzida a prata metálica. O
redutor mais utilizado é o formol pois oxida e forma ácido fórmico), Viragem (trata-se o tecido com uma
solução de cloreto de ouro de forma a retirar a prata metálica), Segunda Redução (também chamada de
“fixação”, elimina-se não só a prata não reativa como também restos do cloreto de ouro que ainda possa
estar no tecido. Usa-se normalmente o tiossulfato de sódio, pois os seus iões formam complexos de prata
solúveis com qualquer prata iónica que não tenha reagido), por fim utiliza-se um contraste.
As fibras elásticas são, normalmente, mais finas que as fibras de colagénio e tem a capacidade de voltarem
à sua forma original após uma deformação. Na derme, aparecem como formações finas e algumas vezes
ramificadas; enquanto nos vasos sanguíneos, aparecem em agrupamentos orientados em camadas e de
disposição concêntrica.
A coloração de Verhoeff baseia-se na coloração das fibras elásticas pela hematoxilina combinada com o iodo
e o cloreto férrico. A hematoxilina forma uma laca que tem afinidade para os mucopolissacáridos ácidos das
fibras elásticas. O iodo age, impedindo a laca de sair das fibras durante a diferenciação. Por sua vez, o cloreto
férrico está fortemente ligado ao comportamento das fibras elásticas durante a coloração.
Protocolos:
Gordon & Sweet
1. Desparafinar e hidratar.
2. Permanganato de potássio a 1% – 5min.
3. Lavar em água corrente – 1min.
4. Branquear em ácido oxálico a 1%.
5. Lavar em água corrente – 1min.
6. Várias passagens por água destilada
7. Alúmen de ferro a 2,5% - 15min.
8. Várias passagens por água destilada.
9. Solução de prata – 2min.
10. Várias passagens por água destilada.
11. Reduzir numa solução de formol a 10%.
12. Várias passagens por água destilada
13. Tiossulfato de sódio a 5% – 3min.
14. Várias passagens por água destilada
15. Cloreto de ouro 0,2% – 3min.
16. Várias passagens por água destilada
17. Contrastar com Kernechtrot – 3min.
18. Lavar em água corrente – 3min.
19. Desidratar e montar.
Resultados esperados:
• Fibras de reticulina – preto
• Citoplasma e núcleos – Vermelho (depende do contraste utilizado)
Verhoeff
1. Desparafinar e hidratar.
2. Colocar a lâmina durante 60 min na solução extemporânea (A+B+C).
3. Passar por água.
4. Diferenciar em cloreto férrico a 2%.
5. Lavar bem em água.
6. Colocar a lâmina em álcool a 95º – 5 min.
7. Lavar bem.
8. Contrastar com Van Gieson – 3 min.
9. Desidratar e montar.

Soluto A – 30 ml
Hematoxilina 5%:
Hematoxilina ---- 5g.
Álcool Absoluto – 100ml.

Soluto B – 12 ml
Cloreto Férrico a 10%:
Cloreto de Ferro – 10g
Água destilada – 100ml.

Soluto C – 12 ml
Iodina Forte:
Iodina (Iodo Sublimado) – 2g.
Iodeto de potássio --------- 4g.
Água destilada --------------100ml
Resultados esperados:
• Fibras elásticas – preto
• Núcleos – cinzento/preto
• Colagénio, Citoplasma, músculo – terão a cor do contraste usado