Atividade: Diferenciar os tipos de mucinas com AB, AB/PAS e PAS

Sugestão: Fazer três lâminas com três tecidos em cada (estômago, intestino delgado e
cólon)
Introdução:
A coloração Alcian Blue pH2.5 é usada para evidenciar mucinas e mucossubstâncias
ácidas. Enquanto o PAS marca colagénio e as mucossubstâncias neutras. Estas duas
colorações também são muito utilizadas conjugadas com diastase, permitindo outros
resultados, tal como a demonstração do glicogénio.
Princípio da coloração:
A coloração Alcian Blue pH2.5 tem como princípio base a metacromasia, pois certas
células ficam com características cromotrópicas adquiridas através das
mucossubstâncias ácidas que as próprias contêm. O Alcian Blue vai reagir com os
constituintes que contenham grupos aniónicos (mucossubstâncias ácidas, mucinas
ácidas e DNA).
A coloração Ácido Periódico-Schiff (PAS) tem como princípio dois parâmetros: a reação
de Malaprade em que o ácido periódico oxida os grupos glicol em aldeídos e a
leucofucsina de Schiff que é uma solução cromogénica que reage com os aldeídos livres
marcando-os com uma tonalidade magenta. As substâncias PAS + englobam: o
glicogénio, mucopolissacáridos neutros, mucoproteínas, glicoproteínas, glicolípidos,
amilóide, membranas basais, cartilagem, mucinas epiteliais e fungos.

Protocolos:
Alcian Blue pH2.5
1. Desparafinar e hidratar.
2. Ácido acético a 3% – 3min.
3. Alcian Blue – 30 min.
4. Lavar em água corrente -10 min.
5. Contrastar com Kernechtrot – 3 min.
6. Lavar em água corrente
7. Desidratar e montar.

Resultados esperados:
 • Mucinas ácidas – azul

Alcian Blue (pH 2.5) / PAS

1- Desparafinar e hidratar.
2- Ácido acético a 3% – 3min.
3- Alcian Blue – 30min.
4- Lavar em água corrente – 5min.
5- Ácido periódico a 1% – 10min.
6- Lavar em água destilada
7- Reagente de Schiff – 25min.
8- Lavar em água corrente – 5min.
9- Hematoxilina de Harris – 30 seg.
10- Lavar em água corrente morna – 5min.
11- Desidratar e montar.

Resultados esperados:
• Mucinas ácidas – azul
• Mucinas neutras – magenta
• Mistas – púrpura

PAS
1. Desparafinar e hidratar.
2. Passar por água destilada.
3. Ácido periódico a 1% – 15 min.
4. Lavar rapidamente em água corrente e passar por água destilada.
5. Reagente de Schiff – 30 min.
6. Lavar em água corrente até o corte ficar com uma tonalidade rosada – 10min
7. Hematoxilina de Harris – 30 seg.
8. Lavar em água corrente morna – 5 min.
9. Desidratar e montar.

Resultados esperados:
 • Substâncias PAS+ - magenta

Nota:
No cólon é possível encontrar mucinas ácidas e neutras. No duodeno podem ser
observadas mucinas mistas. No estômago só é esperado encontrar neutras.