Técnicas Básicas para

UFSC Confecção de Lâminas

Histológicas para Microscopia
CCB
de Luz
 Lâminas Temporárias
• Duram em média de 1 a 5 dias

Ex: Mitose de raiz de cebola

Lâminas Semi-permanentes

• Duram em média de 1 a 5 anos.

• Ex. Esfregaço sanguíneo
 Lâminas Permanentes

• Podem durar mais de 20 anos.

 Noções de Preparo de Lâminas
• Coleta do Material Biológico
• Fixação
• Desidratação
• Diafanização
• Embebição e inclusão em
parafina
• Corte
• Desparifinização
• Hidratação
• Coloração
• Desidratação
• Montagem da lâmina
• com resina
 Fixação e Fixadores
1. Fixação
Tipos de fixadores:

Fixadores físicos: utilizam

agentes físicos: temperatura
(congelamento).

Fixadores químicos:
utilizam compostos
químicos com propriedade
de preservação.
 Fixação Química
Fixadores não denaturantes de proteínas: Aldeídos
(formaldeído; glutaraldeído; glioxal; acroleína)
Fixadores denaturantes de proteínas: Alcoois
(metanol, etanol, propanol..., ácido acético também)
Fixadores oxidantes: tetróxido de ósmio;
permanganato de potássio, dicromato de potássio.
Fixadores de mecanismos desconhecidos: cloreto de
mercúrio; ácido pícrico.
 Misturas Fixadoras:
Exemplos
BOUIN: Formol (25ml) +
solução saturada de ácido
pícrico (75 ml) + ácido
acético (5 ml).
HELLY: dicloreto de
mercúrio (5 g) + dicromato
de potássio (2,5 g) + sulfato
de sódio (1 g) água dest. )100
ml) + formol 4% (5 ml)
Obs: O formol preserva muito bem proteínas e
álcool/ácido acético preservam bem ácidos nucléicos.
 Propriedades de uma boa
fixação
•PRESERVAR o material biológico deixando-o o mais
próximo possível de quando estava vivo.
•Impedir a AUTÓLISE (autodegradação).
•Evitar a PROLIFERAÇÃO de microorganismos
(bactérias e fungos).
•Tornar o material biológico mais RESISTENTE a
tratamentos e manipulações posteriores (cortes,
inclusões, hidratações e desidratações...).
•Preparar ou aumentar a AFINIDADE para
determinados corantes.
 Lâminas Permanentes
2. Desidratação
ÁLCOOL ETÍLICO
(série de conc. crescente)
álcool butílico, acetona

3. Diafanização
• Xilol/Toluol (solventes orgânicos hidrofóbicos)
•Acetato de Butila
(Tornam o material mais translúcido e preparam-no para receber a parafina que
é hidrofóbica: líquido ponte entre álcool e parafina)
 Lâminas Permanentes
4. Embebição e
Inclusão

• PARAFINA
•(hidrofóbica)

• Histo-resina
•(hidrofóbica)
 Lâminas Permanentes
5. Corte ou
Microtomina

• Micrótomo Rotativo

Em geral são realizados cortes

de 3-10 µm, com média de 7 µm
 Lâminas Permanentes
6. Desparafinização

• Xilol/Toluol
(solventes orgânicos hidrofóbicos) 8-Coloração
• Acetato de butila
• HE: Hematoxilina
(básica) e Eosina (ácida)
(corantes aquosos)
7-Hidratação
• Série decrescente de
conc. de Álcool Etílico
 Coloração
Se faz para criar CONTRASTE entre as diferentes
estruturas celulares e os tecidos.
Os corantes podem ser classificados em:
•Corantes básicos: compostos químicos com afinidade por
estruturas celulares ácidas ou basófilas, como o núcleo.
•Exs: hematoxilina; azul de metileno; violeta de genciana;
azul de toluidina; orceína; fucsina básica etc...
•Corantes ácidos: compostos químicos com afinidade por
celulares básicas ou acidófilas. O citoplasma é menos ácido
que o núcleo, mas contem uma mistura variável de estruturas
básicas e ácidas.
•Exs: eosina; fucsina ácida; eritrosina, orange G; vermelho
Congo...
 Corantes neutros e vitais

Corantes neutros: misturas ou soluções contendo

simultaneamente corantes ácidos e básicos:
Exs: soluções de Leishman, Giemsa, Wright

Corantes vitais: são corantes que são “suportados”

pela célula, sem provocar sua morte:
Exs: verde Janus (mitocondria), azul de metileno
(núcleo), vermelho neutro (vacúolos digestivos)
etc...
 Lâminas Permanentes

9. Desidratação
• Série crescente de
Álcool Etílico

10. Diafanização
• Xilol/Toluol (solventes
orgânicos hidrofóbicos)
 Lâminas Permanentes
11. Montagem

• Resina: Balsamo do
Canadá, PerMount,
Entellan e outros (todos
hidrofóbicos)...
 Lâminas Histológicas
Permamentes

Temporária Semi-Permanente

Permanente - Historesina Permanente - Parafina

FIM