ANLISE DOS PARMETROS DE COR E DE MATURAO DE UVAS TINTAS PRODUZIDAS NO ALENTEJO NA SUB-REGIO DE BORBA, PELO MTODO DE ESPECTROSCOPIA NIR

(ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO PRXIMO) Helena FERREIRA1; Jakob JNS2; Nuno NASCIMENTO 3; scar GATO4; Joo BARROSO5 RESUMO
A avaliao objectiva da qualidade das uvas essencial para a indstria vitivincola. A cor das uvas, que depende da concentrao de antocianinas, e os polifenis totais so indicadores importantes da qualidade e do potencial de envelhecimento dos vinhos. No entanto estes parmetros no so normalmente analisados na vindima, uma vez que a sua determinao utiliza mtodos complexos e morosos. A espectroscopia NIR (Espectroscopia de Infravermelho Prximo), actualmente utilizada na indstria alimentar e de bebidas, possibilita a anlise simples e rpida destes parmetros de maturao e qualidade das uvas. Foram recolhidos em 2006 espectros NIR, desde o pintor at vindima das castas tintas mais representativas do cadastro da Adega Cooperativa de Borba em diferentes tipos de solo e disponibilidade hdrica, tendo como objectivo a anlise e clculo equaes de calibrao dos parmetros Antocianinas Totais, Polifenis Totais, pH e Brix. Este trabalho rene os resultados obtidos. Palavras-chave: NIR, cor, antocianinas, polifenis, qualidade, uvas.

1 - INTRODUO A anlise das caractersticas das uvas que tm impacto na qualidade dos vinhos um requisito fundamental para a melhoria da produo vitcola e obteno do estilo de vinhos desejado (Cozzolino et al., 2006). Segundo o mesmo autor, para alcanar estes objectivos, a indstria vitivincola v a necessidade de utilizar tcnicas de anlise simples e rpidas para avaliar objectivamente a qualidade das uvas. Actualmente os parmetros indicadores da qualidade das uvas no se resumem concentrao de acares e acidez, sendo os parmetros como a cor e os polifenis de extrema importncia. Existem mtodos analticos para determinao destes parmetros nas uvas, mas no esto adequados s exigncias logsticas da indstria, onde a rapidez e o baixo custo das anlises so de extrema importncia. A espectroscopia por infravermelho prximo (NIR) tem sido amplamente utilizada na anlise quantitativa e qualitativa nas indstrias agro-alimentares porque fcil, no destrutiva e no exige grandes preparaes da amostra (Cozzolino et al., 2005). Os mesmos autores referem que a calibrao a chave para o sucesso da anlise NIR e que so necessrios vrios passos para a calcular. Incluem a seleco de amostras, a sua preparao, colheita dos espectros na gama NIR (400 a 2500nm), anlise e
1, 3 e 4

Adega Cooperativa de Borba, C.R.L. Largo Gago Coutinho Ap. 20. 7151-913 Borba. Portugal. E - mail: hferreira@adegaborba.pt; 3 nascimento@adegaborba.pt; 4 gato@adegaborba.pt; 2 FOSS Analytical, E-mail: jj@foss.dk; 5 Departamento de Fitotecnia, Universidade de vora. Portugal E mail: jmmb@uevora.pt

determinao dos resultados pelos mtodos de bancada, tratamento dos dados dos espectros recolhidos, clculo do modelo de regresso e por fim validao do modelo. Este estudo teve como objectivo investigar a influncia da preparao da amostra (uvas inteiras ou uvas trituradas e homogeneizadas) nos espectros NIR, assim como na performance das calibraes para a anlise das antocianinas totais, brix, pH e polifenis totais em castas de uvas tintas representativas da produo na Adega Cooperativa de Borba, C.R.L. 2 - MATERIAIS E MTODOS 2.1 Amostragem Com incio no pintor e ao longo da maturao das uvas e vindima de 2006 (final de Julho a Outubro), foram recolhidas 325 amostras de uvas tintas das castas Alfrocheiro, Alicante Bouschet, Aragonez, Cabernet Sauvignon, Castelo (vulgo Periquita), Syrah, Tinta Caiada, Touriga Nacional e Trincadeira. Para cada casta foram seleccionadas vinhas instaladas nos dois tipos de solos predominantes no cadastro da Adega Cooperativa de Borba, C.R.L.: Xistos e ArgiloCalcrios. Para cada tipo de solo e em cada casta, seleccionaram-se parcelas de regadio e de sequeiro e em cada parcela definiu-se um local para a colheita de amostras, com cerca de 10 cepas. Durante todo o ensaio, a colheita de amostras de cada casta foi feita apenas nas cepas situadas no local definido. Em cada cepa, os bagos foram colhidos aleatoriamente com o pecolo, tentando-se alternar entre cachos mais expostos ou mais resguardados. As amostras foram acondicionadas em sacos de plstico devidamente identificadas, e armazenadas em ambiente refrigerado e transportadas at ao laboratrio. 2.2- Preparao da amostra e Anlise Em cada amostra, analisaram-se primeiro os bagos inteiros no NIR (Espectroscopia por Infravermelho Prximo) InfraXact da Foss, na calibrao whole grapes para os parmetros brix, cor antocianinas totais (mg/g), pH e polifenis totais a 280nm (ua/g). Os bagos foram, de seguida, triturados de acordo com o descrito por Iland et al (2000) garantindo no final um homogeneizado uniforme e sem fragmentos de grainhas ou pelculas. O homogeneizado foi de seguida analisado no equipamento NIR, na calibrao

homogeneized grapes para os mesmos parmetros referidos anteriormente, tal como ilustra a figura 1.

Figura 1 Etapas de preparao e anlise das amostras no NIR

O homogeneizado foi ento analisado para todos os parmetros pelos mtodos de bancada (Tabela 1) com duas repeties para cada parmetro. Tabela 1 Mtodos de Anlise de Bancada
Parmetros Brix pH Cor - Antocianinas Totais (mg/g) Polifenis Totais a 280 nm (ua/g) Mtodos de anlise de bancada utilizados Refractometria* Potenciometria* Extraco em meio alcolico e cido + expresso da cor a pH baixo** Extraco em meio alcolico e cido + Leitura do extracto a 280nm**

* Regulamento CEE, 1990; ** Iland et al, (2000). ua unidades de absorvncia

2.3. Repetibilidade e qualidade dos resultados Foi feito um ensaio em duas amostras, para calcular a repetibilidade dos mtodos de bancada e tambm da anlise NIR. Os bagos inteiros de cada amostra foram analisados 10 vezes na calibrao whole grapes para todos os parmetros. Aps a triturao e homogeneizao das duas amostras, procedeu-se da mesma forma anlise no NIR do homogeneizado na calibrao homogenized grapes. De seguida recolheram-se 10 sub pores de cada amostra para a anlise pelos mtodos de bancada. A repetibilidade dos mtodos de bancada foi calculada atravs do desvio padro entre as 10 sub pores de cada amostra. A repetibilidade da anlise NIR foi calculada, para cada parmetro e para cada calibrao, pelo desvio padro entre as 10 anlises consecutivas em cada amostra dos bagos inteiros e das uvas homogeneizadas. Diariamente e de acordo com o recomendado pelo fabricante do equipamento NIR, foram feitos testes de performance e de verificao com uma clula de referncia para assegurar a sua capacidade em manter os resultados numa calibrao de controlo. 2.4. - Calibraes Foram calculadas calibraes da totalidade das amostras, para os bagos inteiros (whole grapes) e para as uvas homogeneizadas (homogeneized grapes) em todos parmetros antocianinas totais, brix, pH e polifenis totais. O clculo foi feito no software

estatstico da Foss WinISI III e utilizou equaes de regresso pelo mtodo de quadrados mnimos parciais modificado (mPLS). Individualmente, para cada casta, para os dois tipos de preparao da amostra (bagos inteiros e uvas homogeneizadas) e em todos os parmetros, calculou-se a correlao entre os valores obtidos pelos mtodos de bancada e na anlise NIR. Nas equaes de calibrao calculadas por mPLS com a totalidade das amostras, para cada parmetro e para os dois tipos de preparao da amostra (bagos inteiros ou uvas homogeneizadas) foi determinado o SEC (erro standard de calibrao) como medida de exactido da equao calculada. Quanto menor este valor, melhor o comportamento da calibrao em anlises futuras. Calculou-se tambm o coeficiente de correlao (RSQ) para cada equao de calibrao. Paralelamente para cada tipo de preparao da amostra e individualmente por casta, fez-se a anlise da correlao entre os valores dos mtodos de bancada e os valores do NIR e determinou-se o respectivo coeficiente de correlao (R2). 3 RESULTADOS E DISCUSSO No ensaio de anlise da repetibilidade dos mtodos de bancada e da anlise pelo NIR, os resultados foram os seguintes (Tabela 2): Tabela 2 Resultados ensaios de repetibilidade dos mtodos de anlise
Mtodo de Anlise / Preparao da Amostra Mtodos de Bancada Parmetro Cor - AT PT pH Brix Cor - AT PT pH Brix Cor -AT PT pH Brix Repetibilidade Mdia 0.053 0.029 0.008 0.103 0.030 0.011 0.008 0.072 0.023 0.032 0.011 0.251

Uvas Homogeneizadas NIR Bagos Inteiros

AT Antocianinas Totais; PT- Polifenis Totais

Os resultados indicam boa repetibilidade dos mtodos de bancada e tambm da anlise NIR, que apenas apresenta valores de repetibilidade inferiores aos mtodos de bancada nos bagos inteiros, para os parmetros polifenis totais, pH e brix. Estes resultados so espectveis, revelando claramente a heterogeneidade da amostra de bagos inteiros em leituras sucessivas. Nos resultados apresentados de seguida, compararam-se os coeficientes de correlao calculados com o intuito de verificar se o R2 das equaes individuais de cada casta era superior ao RSQ das equaes de calibrao da totalidade das amostras,

indicando que uma calibrao com a totalidade das amostras menos exacta do que a calibrao individual por casta. 3.1. Uvas homogeneizadas Antocianinas totais cor: A
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.907 0.868 0.907 0.709 0.917 0.676
Slope: 1.006 RSQ: 0.824 SECV: 0.185 1-VR: 0.813 SEC: 0.178

Figura 2 (A) Coeficientes de correlao R2entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Equao calibrao da cor nas uvas homogeneizadas (WinISI III Foss).

A melhor equao de calibrao calculada para a cor (Figura 2 B) mostra que possvel analisar este parmetro no NIR, com exactido (SEC 0.178) em toda a gama de medio durante a maturao das uvas. No entanto, analisando os coeficientes de correlao individualmente por casta (Figura 2 A), os resultados mostram que, para determinadas castas, temos melhores R2 do que na calibrao global com a totalidade das amostras, o que indicia a vantagem de se calcularem calibraes individuais por casta para a anlise da cor nas uvas homogeneizadas. Brix: A B
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.996 0.995 0.997 0.997 0.994 0.996
Slope: 1.000 RSQ: 0.997 SECV: 0.349 1-VR: 0.996 SEC: 0.300

calibrao do brix nas uvas homogeneizadas (WinISI III Foss).

A melhor equao de calibrao calculada para o brix (Figura 3 B) mostra que possvel analisar com exactido este parmetro no NIR (SEC 0.3) em toda a gama de medio. Nos coeficientes de correlao por casta (Figura 3 A), os resultados mostram que no h vantagens no clculo de calibraes individuais neste parmetro, face ao elevado coeficiente de correlao determinado na calibrao global (0.997).

pH:

Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira

R2 0.889 0.783 0.867 0.798 0.841 0.889

Slope: 1.001 RSQ: 0.947 SECV: 0.091 1-VR: 0.940 SEC: 0.085

Figura 4 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Equao calibrao do pH nas uvas homogeneizadas (WinISI III Foss).

Tal como os resultados do brix, a calibrao global calculada para o pH, para alm de permitir a anlise com exactido (SEC 0.085 na Figura 4 B), tem um coeficiente de correlao mais alto dos que os determinados individualmente por casta (Figura 4 A). Polifenis totais: A

Casta

R2 0.373 0.402 0.273 0.052 0.422 0.230

Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira

Slope: 1.004 RSQ: 0.532 SECV: 0.202 1-VR: 0.394 SEC: 0.169

Figura 5 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Equao calibrao dos polifenis totais nas uvas homogeneizadas (WinIsi III Foss).

A melhor calibrao global calculada nos polifenis totais (Figura 5 B) devolve um erro de calibrao cruzada baixo (SEC 0.169), mas o coeficiente de correlao (0.532) fica muito aqum dos outros parmetros, indicando que esta poder eventualmente ser melhorada, aumentando do nmero de amostras (N). No entanto os coeficientes de correlao individuais para cada casta (Figura 5 A) so inferiores ao da calibrao global, o que indicia que no h vantagens no clculo de calibraes individuais nos polifenis totais. 3.2. Bagos inteiros Antocianinas totais cor: A
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.824 0.761 0.860 0.698 0.887 0.660

Figura 6 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Parmetros estatsticos da equao de calibrao da cor nos bagos inteiros (WinISI III Foss).

A calibrao global calculada (Figura 6 B) obteve uma correlao mais baixa (0.777) do que a observada nas uvas homogeneizadas. Na anlise das correlaes por casta obtemos melhores resultados em algumas individualmente, indicando que os resultados podem ser melhorados, com calibraes da cor por casta (Figura 6 A). Brix: A
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.970 0.956 0.967 0.976 0.973 0.978

Figura 7 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Parmetros estatsticos da equao de calibrao do brix nos bagos inteiros (WinISI III Foss).

Verificaram-se resultados semelhantes aos das uvas homogeneizadas, com o coeficiente de correlao na calibrao global elevado (0.977, Figura 7 B) e que no h vantagens no clculo de calibraes individuais por casta neste parmetro uma vez que os R2 obtidos (Figura 7 A) so inferiores ao da calibrao global. pH: A
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.844 0.871 0.817 0.856 0.898 0.865

Figura 8 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Parmetros estatsticos da equao de calibrao do pH nos bagos inteiros (WinIsi III Foss).

Tal como nas uvas homogeneizadas, esta calibrao obteve um coeficiente de correlao na calibrao global elevado (0.884, Figura 8 B) e no h vantagens no clculo de calibraes individuais por casta (Figura 7 A) uma vez que os R2 obtidos so inferiores. Polifenis totais: A
Casta Alicante Bouschet Aragonez Cabernet Sauvignon Periquita Touriga Nacional Trincadeira R2 0.419 0.376 0.305 0.000 0.231 0.066

Figura 9 (A) Coeficientes de correlao R2 entre os dois mtodos de anlise em cada casta. (B) Parmetros estatsticos da equao de calibrao dos polifenis totais nos bagos inteiros (WinIsi III Foss).

Resultados semelhantes aos das uvas homogeneizadas, a melhor calibrao global calculada nos polifenis totais (Figura 9 B) obteve um coeficiente de correlao baixo (0.421). Os R2 para cada casta (Figura 9 A) so tambm inferiores ao da calibrao global. 4 CONCLUSES Este trabalho confirma a aplicabilidade da tecnologia NIR anlise de parmetros de qualidade das uvas, em particular da cor (antocianinas totais), que por outros mtodos de anlise muito morosa, ou com resultados pouco exactos. A preparao da amostra

fundamental para a obteno de melhores resultados, uma vez que as calibraes dos quatro parmetros nas uvas homogeneizadas apresentaram melhores coeficientes de correlao do que as calibraes de bagos inteiros. No entanto, em parmetros como o brix e o pH, obtiveram-se coeficientes de correlao muito bons na anlise NIR de bagos inteiros, o que simplifica determinaes rpidas, em que a cor e os polifenis totais no sejam fundamentais, uma vez que no necessria a homogeneizao das uvas. A operao de triturao e homogeneizao da amostra de fcil realizao, uma vez que a triturao das uvas um processo simples e rpido, desde que efectuada com os equipamentos adequados. As calibraes dos polifenis totais nas duas formas de preparao da amostra obtiveram correlaes mais baixas, comparativamente aos outros parmetros, que se devem ao facto da gama de leitura do NIR no ser to prxima da utilizada na determinao pelo mtodo de bancada (280nm). Estes resultados revelam a necessidade de um maior nmero de espectros para melhorar os resultados das calibraes. Para o parmetro antocianinas totais, nos dois tipos de preparao, o clculo de calibraes individuais por casta conduz a melhores resultados, uma vez que se obtiveram coeficientes de correlao mais elevados. Esta situao vivel do ponto de vista prtico, dada a versatilidade do NIR em mudar a calibrao rapidamente em anlises consecutivas. AGRADECIMENTOS: FOSS, em particular ao Jakob JNS pela possibilidade de realizao do ensaio e pelos tratamentos estatsticos inerentes ao clculo das calibraes. Agrovete, em particular ao Jos Carola pela disponibilidade e como representante da FOSS em Portugal. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS Cozzolino, D.; Cynkar W.U.; Dambergs, R.G.; Janik, L.;; Gishen M., 2005. Effect of both homogenization and storage on the spectra of red grapes and on the measurement of total antocyanins, total soluble solids and pH by visual near infrared spectroscopy. J. N. Infrared Spectroscopy, 13, 213 223. Cozzolino, D.; Dambergs, R.G.; Janik, L.; Cynkar W.U.; Gishen M., 2006. Analysis of grapes and wines by near infrared spectroscopy. J. N Infrared Spectroscopy, 14, 279 289. Iland, P.G.; Ewart, A.; Sitters, J.; Markides, A.; Bruer, Nick. 2000. Techniques for chemical analysis and quality monitoring during winemaking. Patrick Iland Wine Promotions, Campbelltown, SA. REGULAMENTO (CEE) N 2676/90, 17 de Setembro de 1990. Mtodos de anlise comunitrios aplicveis no sector do vinho. Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 272 de 3 de Outubro de 1990.