FUNDAMENTOS E PRÁTICA

DAS MEDIÇÕES DO PH
LRVSA – Microbiologia Alimentar

Laura Ornelas 2023

 CONTEÚDO
01 02
Introdução
Anatomia do equipamento
Conceitos teóricos sobre o pH.
Componentes do medidor de pH

03 04
Medições do pH Cuidados a ter
Calibração e medição Boas práticas na utilização do
equipamento.
01
INTRODUÇÃO
Conceitos teóricos sobre o pH
Dissociação Iónica

No final do século XIX, Arrhenius estudou a condução de

eletricidade em soluções aquosas e criou um sistema de
classificação.

Svante August Arrhenius,

recebeu o Prémio Nobel
em 1903.
 Dissociação Iónica

• Alguns iões livres são condutores elétricos

(eletrólitos).
• O potencial elétrico está correlacionado com o
caracter ácido/básico duma solução aquosa.

• Quanto maior a concentração de H3O+ ,

maior será a acidez da solução.
• Quanto maior a concentração de OH- ,
menor será a acidez da solução.
Conceito de pH

O pH é uma escala logarítmica inversamente

proporcional à quantidade de iões H3O+ numa
solução. (potencial de iões hidroxónio/oxónio)

pH = –log [H3O+]
Soren P. L. Sorensen, no ano de
1909 desenvolveu uma escala
para medir a acidez/alcalinidade.
Conceito de pH

Uma solução ácida contém excesso de iões de hidroxónio:

H3O+ > OH–

O excesso de iões de hidroxila tornam as soluções básicas ou

alcalinas.
OH– > H3O+

Na água pura, os iões de hidroxónio são neutralizados por iões

hidroxila e essa solução apresenta valor de pH neutro.
H3O+ = OH–

Hidroxónio (H3O+) Água Hidroxila (OH–)

Conceito de pH

A escala de pH varia de 0 a 14, à temperatura de 25ºC sendo:

• pH < 7 solução ácida

• pH = 7 solução neutra
• pH > 7 solução alcalina (ou básica)
Microrganismos e o pH

Para todos os microrganismos existe:

• pH mínimo, abaixo do qual não há crescimento

• pH máximo, acima do qual não há crescimento
• pH ótimo, onde o crescimento é mais acentuado

A maioria dos microrganismos

desenvolve-se em pH próximo a
neutralidade.
Microrganismos e o pH

Podem ser classificados segundo os requisitos de pH:

• Acidófilas, pH entre 0.1 e 5.4 Neutrófilas

• Neutrófilas, pH entre 5.5 e 8.5 Escherichia coli
• Basófilas, pH entre 8.6 e 11.5 Streptococcus spp

Acidófilas Basófilas
Lactobacillus spp Vibrio cholera
Thiobacillus spp Microcystis aeroginosa
Microrganismos e o pH

Microrganismo pH mínimo pH pH
máximo ótimo
Clostridium botulinum 4.5 7.0 6.5 a 7.0

Campylobacter spp 4.9 8.5 6.5 a 7.5

Legionella spp 5.0 8.5 7.0 a 8.0

Listeria 4.0 9.6 6.0 a 7.0

monocytogenes
Salmonella spp 3.8 9.5 6.5 a 7.5

Staphylococcus aureus 4.0 10.0 6.0 a 7.5

Vibrio cholera 5.0 9.6 7.5 a 8.0

 Microrganismos e o pH

https://br.pinterest.com/pin/207024914099149998/

O pH é um dos fatores que influencia os ambientes e

matrizes onde os microrganismos podem desenvolver-
se.

https://docplayer.com.br/70587317-Nutricao-e-cultivo-microbiano.html
Microrganismos e o pH

Lago Turkana (Quénia) pH= 10.0 Monte Katmai (Alasca) pH= 1.0

13
 02
ANATOMIA DO
EQUIPAMENTO
Componentes do leitor de pH e sua utilização
Fundamento teórico da medição do pH

O leitor de pH é formado por duas partes

fundamentais:

• Elétrodo – leitura da concentração do

Elétrodo hidroxónio na solução aquosa.

• Potenciómetro – converte a força eletromotriz

gerada em pH.

Potenciómetro
Fundamento teórico da medição do pH

O princípio da medição é utilizar um sensor com

uma membrana de vidro sensível aos iões de
hidrogénio (hidroxónio).

Da diferença de potencial entre o sensor de

medição e o sensor de referência que formam um
elétrodo combinado resulta o valor do pH da
solução.
Fundamento teórico da medição do pH

Como a temperatura influencia a

dissociação dos iões na solução é
importante que este parâmetro
também seja medido.
( aumento de temperatura -> aumento dissolução)

O equipamento faz a conversão do valor lido

para uma temperatura de referência, neste caso
25ºC, pois é o valor indicado pelo fabricante dos
meios de cultura e soluções.
Anatomia do Elétrodo Combinado

Porta de enchimento da
solução interna

Sensor de
temperatura

Sensor de
referência Solução
interna

Sensor de
Membrana
medição
de vidro
Anatomia do Elétrodo Combinado

Elétrodo Standard
Aplicação geral
laboratorial
Elétrodo Multifunções Elétrodo Alimentos Elétrodo Micro Elétrodo Superfície
Aplicação geral Pequenos volumes Plana- sólidos
de amostra
03
MEDIÇÕES DO PH
Calibração e preparação da amostra
 CALIBRAÇ
ÃO
O processo de calibração é geralmente efetuado
através da medição de duas ou três soluções padrão
(tampão) diferentes para aferir:

Zero pH - compensação entre os elétrodos de

referência e medição.

Declive – determina o estado da membrana

(sensibilidade).
 CALIBRAÇ
ÃO
Solução-tampão é uma solução que contém,
geralmente, um ácido fraco com um sal desse ácido, ou
uma base fraca com o sal dessa base, com a finalidade
de evitar que o pH varie.
 CALIBRAÇ
ÃO
Grupo da Solução-Tampão

● USA
● NIST
● DIN

São certificados por entidades acreditadas garantindo

cumprem os parâmetros de repetibilidade , precisão e
exatidão dos referenciais.

Verificar qual o grupo da solução tampão na embalagem

ou no certificado do fabricante.
 CALIBRAÇ
ÃO

U.S. DEPARTMENT OF COMMERCE DIN 19266-01: 2000

 CALIBRAÇ
ÃO

Realizar a calibração com dois pontos:

• pH 7 e 4 para amostra de ácida.

• pH 7 e 10 para amostra alcalina.

• valor de pH desconhecido: pH 7, 4 e 10
 PREPARAÇÃO DA
AMOSTRA
Para uma leitura correta o elétrodo deve
estar submerso na solução a pelo menos 3
centímetros de profundidade para uma leitura
precisa.

Garantir que a amostra é homogénea.

Elétrodo a 3 cm
de profundidade Agitar levemente o elétrodo se houver
dificuldade na estabilização da leitura.
 04
CUIDADOS A
TER
Boas práticas de utilização do equipamento
CUIDADOS A
TER

Se as condições ambientais da sala de preparação

apresentarem variações ao longo do dia , nomeadamente
de temperatura e humidade, é importante efetuar várias
calibrações ao longo da sessão de trabalho para que o
potencial Zero seja real e os resultados mais corretos.
 CUIDADOS A
TER
O estado de conservação da membrana de vidro do sensor
de medição determina a sensibilidade do elétrodo.

Durante a limpeza nunca esfregar o elétrodo pois riscará e

danificará a membrana de vidro sensível ao pH, removendo
a camada de gel e criando uma carga eletrostática.
Esta carga eletrostática faz com que o sinal medido se
torne muito instável.
Limpeza do
elétrodo
 CUIDADOS A
TER
Podem ser necessários procedimentos especiais de
limpeza após a contaminação do elétrodo com
determinados tipos de sujidade.

Se for difícil remover a sujidade, limpar com um pano

humedecido com álcool.

Limpeza do
elétrodo
 CUIDADOS A
TER
Fechar a porta de enchimento no final da sessão de
trabalho, de modo a evitar a perda da solução de eletrólito
através da evaporação, o que pode causar a formação de
cristais dentro do elétrodo.

Nunca guardar o elétrodo seco. Acondiciona-lo na tampa

com a solução indicada pelo fabricante (água desionizada).
Fechar a porta de
enchimento.
 CUIDADOS A
TER

A manutenção regular é muito importante para prolongar a

vida útil de qualquer elétrodo de pH. Em elétrodos com
eletrólito líquido, o eletrólito deve ser cheio quando o nível
ameaça se tornar menor do que o nível de solução da
amostra.
Porta para repor a
solução interna.
(KCl)
05
PRÁTICA
Funcionamento do leitor de pH – HORIBA
FUNÇÕES GERAIS
 Modelo HORIBA LAQUAPH2000
LRVSA 738 – Leitor de pH

1
Ligar o aparelho e lavar o elétrodo
com água desionizada e secar com
toalha de papel
CALIBRAÇÃO

Grupo de tampão Quando o valor Calibração concluída

selecionado estiver estável - pH 7
ENTER

Introduzir o elétrodo
no Tampão pH 7 -
CAL

Repetir para os pontos de

calibração necessários;
lavar e secar o elétrodo
entre calibrações.
2
O visor mostra os valores calibrados e indica o declive e a compensação.

Para consultar os dados da

calibração – CAL + DATA 3
 Quando o valor estiver
estável –
ENTER
VALIDAÇÃO

Iniciar as medições com a solução de

validação do pH 7 (marca diferente da
utilizada)

Registar o resultado obtido.

Se o resultado for válido iniciar a
leitura de pH das soluções
 Apagar dados de calibração

Setpoint (Set) Enter (Ent) Tecla para cima até aparecer

no visor C.CLEAR

Enter (Ent) Tecla para cima até aparecer Enter (Ent)

no visor YES