Embriologia Captulo 2 Fecundao: iniciando um novo organismo Fecundao o processo no qual duas clulas sexuais se fundem para criar

ar um novo individuo com potencial gentico derivado de ambos os pais. A fecundao realiza, ento, duas atividades independentes: sexual (combinao dos genes) e reprodutiva (criao de novos organismos). Os principais eventos da fecundao so: Contato e reconhecimento entre espermatozide e vulo; Regulao da entrada do espermatozide no vulo; Fuso do material gentico do vulo e do espermatozide; Ativao do metabolismo do vulo para iniciar o desenvolvimento. Estrutura dos gametas Espermatozide: Leeuwenhoek acreditava primeiro que os espermatozides eram parasitas que viviam no smen humano, depois pensou que eram sementes e a mulher apenas forneciam o solo. Hartsoeker desenhou o homunculus, porm essa crena de que o espermatozide continha um embrio inteiro, nunca foi muito aceita, pois implicava um enorme desperdcio de vida em potencial. Spallazani demonstrou que filtrado, o smen de r sem espermatozide, no fecundava os vulos(???). Prevost e Dumas descobriram que os espermatozides no eram parasitas, mas sim agentes ativos da fecundao (existe uma ntima relao entre sua presena nos rgos e a capacidade fecundante do animal). Eles propuseram que o espermatozide realmente entrava no vulo e contribua concretamente para a prxima gerao. A. von Kolliker descreveu a formao do espermatozide a partir de clulas testiculares, desmentiu que havia algum contato fsico entre o espermatozide e o vulo e acreditava que o espermatozide excitava o vulo a se desenvolver. Hertwig e Fol demonstraram a penetrao do espermatozide no vulo e a unio dos ncleos destas clulas. Hertwig usou o ourio-do-mar do mediterrneo, no apenas por ser comum nesta regio ou por se apresentar sexualmente maduro uma boa parte do ano, mas tambm pela grande quantidade de ovos disponveis. Ele observou que apenas um espermatozide podia ser visto penetrando em cada vulo e que todos os ncleos do embrio eram derivados daqueles ncleos fundidos durante a fecundao. A fecundao foi finalmente reconhecida como a unio do espermatozide com o vulo. Cada espermatozide possui um ncleo haplide, um sistema de propulso para mover o ncleo e um saco de enzimas que torna o ncleo apto a penetrar no vulo. Durante o processo de maturao o ncleo se torna aerodinmico e seu DNA firmemente comprimido. frente est a vescula acrossmica que derivado do complexo de Golgi e contm enzimas que digerem protenas e aucares complexos e so usadas para digerir os envoltrios ovulares. A principal poro motora do flagelo denominada AXONEMA, que formado por microtbulos originados do centrolo localizado na base do ncleo do espermatozide. O centro do axonema constitudo por dois microtbulos centrais rodeados por uma fileira de nove duplas de microtbulos e so constitudos de uma protena chamada tubulina. A dinena est ligada aos microtbulos, ela pode hidrolizar molculas de ATP e converter a energia qumica em energia mecnica que impulsiona o espermatozide. A energia para mover o flagelo proveniente dos anis de mitocndria localizados na regio da pea intermediaria do espermatozide. vulo: todo o material necessrio para iniciar o crescimento e desenvolvimento deve estar estocado no vulo maduro. O espermatozide elimina a maior parte do seu citoplasma, o vulo em desenvolvimento no s conserva o seu material como est

ativamente envolvido em acumular mais. Ele tanto sintetiza como absorve protenas, como o vitelo, por exemplo, que constitui reserva de alimento para o embrio em desenvolvimento. Este rico citoplasma inclui: Protenas: so suficientes at o embrio estar pronto pra se alimentar pos si s, muitas destas protenas do vitelo so produzidas pelos rgos da me e transportadas para o vulo; Ribossomos e tRNA: h uma repentina sntese protica logo aps a fecundao efetuada pelos ribossomos e tRNA que j existem no vulo. O vulo em desenvolvimento tem mecanismos especiais para sintetizar ribossomos; RNA mensageiro: as mensagens para a sntese de protenas, utilizadas durante o inicio do desenvolvimento, j esto empacotadas no ovcito; Fatores morfognicos: molculas que dirigem a diferenciao das clulas em determinados tipos celulares. Sobre a membrana plasmtica est o envoltrio vitelnico. Esta membrana glicoprotica essencial para a ligao espcie-especfica do espermatozide. Em mamferos o envoltrio bastante espesso, sendo chamado de zona pelcida. O vulo de mamferos est tambm rodeado por uma camada de clulas, as clulas do cumulus, que representam as clulas foliculares ovarianas que nutrem o vulo quando este deixa o ovrio. O espermatozide dever passar por estas clulas para fecundar o vulo. Abaixo da membrana plasmtica h o crtex. O citoplasma dessa regio mais gelatinoso por causa das altas concentraes de molculas globulares de actina que durante a fecundao polimerizam para formar longos fios de actina conhecidos como microfilamentos. Presentes tambm no crtex esto os grnulos corticais que so organelas derivadas do complexo de golgi que contm enzimas proteolticas, mucopolissacardeos e protena hialina. As enzimas e os mucopolissacardeos so ativos na preveno da entrada de outro espermatozide no vulo, depois que o primeiro tenha entrado e molculas de protena hialina rodeiam o embrio jovem dando-lhe suporte durante o estagio de clivagem dos blastmeros. Reconhecimento entre espermatozide e vulo: na fecundao externa: (1) como podem o espermatozide e o vulo se encontrarem em concentraes to baixas?; (2) que mecanismo impede o espermatozide da estrela-do-mar de tentar fecundar o vulo do ourio-do-mar? Ovos secretam um fator quimiottico que atrai o espermatozide e regulam tambm o momento no qual esse fator ser liberado (resacina). A fuso da vescula acrossmica causada pela fuso, mediada pelo clcio, da membrana acrossmica com a membrana plasmtica adjacente do espermatozide. Alm de causar a extenso do processo acrossmico, este significante aumento do pH tambm responsvel pela ativao da dinena ATPase, localizada no pescoo do espermatozide. Esta ativao causa uma rpida utilizao do ATP e um aumento de 50% na respirao mitocondrial. A gelia do ovo pode promover um reconhecimento do tipo espcie-especfico em algumas espcies mas no em outras. O processo acrossmico do espermatozide contata a camada externa do envoltrio vitelnico do vulo, esse o principal passo do reconhecimento espcie-especfico e a protena mediadora a bindina. Bindinas de espcies muito prximas so de fato diferentes. Esta descoberta implica na existncia de receptores espcie-especficos para bindina, no envoltrio vitelnico. Mamferos reconhecimento e ligao dos gametas capacitao: espermatozides recm-ejaculados so incapazes de sofrer a reao acrossmica sem que tenham permanecido por um certo tempo no trato reprodutivo feminino. Este prrequisito para capacitao varia de espcie para espcie e pode ser mimetizado in vitro.

Ligao primaria do espermatozide zona pelcida: a camada mais externa composta pelas clulas do cummulus e sua matriz, rica em cido hialurnico. Estas clulas do cummulus so remanescentes das clulas da granulosa do folculo ovariano e acompanham o vulo durante a ovulao. Em algumas espcies as clulas do cummulus no esto presentes no momento da fecundao, mas elas no constituem barreira para o espermatozide mesmo quando esto presentes. A especificidade da ligao do espermatozide zona relativa, mas no absolutame4nte espcie-especfica (em fecundaes internas especificidade desse tipo no deveria ser um grande problema) e a ligao do espermatozide de camundongo zona pelcida de camundongo pode ser inibida por uma incubao previa do espermatozide com glicoprotenas da zona pelcida. ZP1 e ZP2 no competem pela ligao com o espermatozide. Um conjunto de protenas no espermatozide, capazes de reconhecer um carboidrato especifico e regies da protena ZP3 da zona pelcida do vulo, parece ser a hiptese mais provvel para a ligao entre os gametas de mamferos. Existem trs protenas, no espermatozide, que so capazes de se ligar zona pelcida. (1) protena que se liga aos resduos de galactose da ZP3; (2) enzima presente na membrana celular do espermatozide; (3) protease. Induo da reao acrossmica pela ZP3: a aglutinao dos receptores de espermatozides para ZP3 necessria para a reao acrossmica. A ZP3 poderia provocar uma liberao de ons clcio dentro do espermatozide. O receptor est acoplado protena de ligao ao GTP (protena- G) que ativada quando o receptor se liga ao seu stio ativo especfico. A protena-G ativada, ativa uma enzima que quebra um lipdio de membrana e capaz de liberar ons clcio ligados a compartimentos da membrana. Tal protena-G foi descoberta em espermatozides de mamferos e parece ser ativada pela ligao com ZP3. Alm disso, se a ativao da protena-G inibida, o espermatozide pode se ligar a ZP3, mas no sofre a reao acrossmica. Ligao secundria do espermatozide zona pelcida: a poro anterior da membrana plasmtica do espermatozide desprendida dele. A esto localizadas as protenas de ligao ZP3. Porm, o espermatozide precisa permanecer ligado zona pelcida para lisar um caminho atravs dela. Esta ligao secundaria zona completada por protenas na membrana acrossmica interna que se ligam ZP2. O acrossomo intacto no poder se ligar glicoprotena ZP2, mas o acrossoma do espermatozide que j reagiu o far. A estrutura da zona constituda por unidades repetidas de ZP3 e ZP2, ocasionalmente, ligadas pela ZP1. Parece que o acrossoma que j reagiu transfere suas ligaes de ZP3 para ZP2 adjacente. Aps a entrada do espermatozide no vulo seus grnulos corticais liberam seu contedo e uma dessas protenas uma protease que altera especificamente ZP2. Esta inibiria o espermatozide que j sofreu reao acrossmica de entrar mais profundamente no vulo. Em sunos a proacrosina uma protena que se liga fucose que mantm a conexo entre o espermatozide cujo acrossomo que j reagiu e a zona pelcida. Contracepo pelos anticorpos: se animais machos e fmeas so injetados com extratos de espermatozides, muitos produziro anticorpos e se tornaro infrteis. Primakoff descobriu uma protena do espermatozide de cobaia que poderia induzir este tipo de esterilidade. O soro desses animais continha altas concentraes de anticorpos conta a protena PH-20m que est presente tanto na membrana plasmtica como na membrana interna do acrossomo do espermatozide de cobaia. Outra forma de contracepo imunolgica por longos perodos foi conseguida produzindo-se anticorpos contra a zona pelcida (ZP3). Fuso dos gametas e preveno da poliespermia: o reconhecimento seguido pela lise de uma poro do envoltrio que contata a cabea do espermatozide. Esta lise

seguida pela fuso da membrana celular do espermatozide com a membrana celular do vulo. A fuso espermatozide-vulo parece causar a polimerizao da actina e extenso de muitas microvilosidades do vulo, para formar o cone de fecundao. As membranas do vulo e do espermatozide se fundem e o material da membrana celular do espermatozide pode, mais tarde, ser encontrado na membrana do vulo. Nem todos os componentes da membrana do espermatozide podem se misturar com a do vulo. Algum material parece estar localizado no ponto de entrada do espermatozide. Suspeitam que essa localizao dos componentes do espermatozide em uma rea restrita provoca uma assimetria celular, que auxilia diretamente o plano da primeira clivagem e os movimentos citoplasmticos dentro do ovo. Fuso um processo ativo, frequentemente mediado por protenas fusognicas especficas. A entrada de mltiplos espermatozides poliespermia traz, para a maioria dos organismos, conseqncias desastrosas. O ncleo triplide e o par extra de centrolos causam a distribuio desigual dos cromossomos. Algumas clulas poderiam receber cpias extras de certos cromossomos os quais faltariam em outras clulas. O modo mais comum prevenir a entrada de mais de um espermatozide no vulo. Existem dois mecanismos principais para prevenir a poliespermia: uma reao rpida, alcanada atravs de uma alterao eltrica na membrana plasmtica do vulo e uma reao mais lenta, provocada pela exocitose dos grnulos corticais. O bloqueio rpido poliespermia: alcana seu objetivo mudando o potencial eltrico da membrana do vulo. A concentrao inica do vulo deferente da do ambiente, e isso especialmente diferente para os ons potssio e sdio. No caso do ourio-do-mar, a gua do mar tem uma concentrao particularmente alta de ons sdio, enquanto que o citoplasma do vulo tem relativamente pouco sdio livre. Com os ons potssio acontece o inverso. Essa condio mantida pela membrana celular, o potencial de membrana em repouso -70mV. De 1 a 3 segundos aps a ligao do primeiro espermatozide, o potencial de membrana se desloca para um nvel positivo. Um pequeno influxo de ons sdio para dentro do vulo permitido, elevando assim a diferena de potencial para +20mV. O espermatozide no pode se fundir com membranas que tm uma ddp positiva. A abertura dos canais de sdio no vulo parece ser causada pela ligao do espermatozide ao vulo. O bloqueio eltrico poliespermia provavelmente no ocorre na maioria dos mamferos e s efetivo quando o espermatozide possui um componente que sensvel diferenas de voltagem. Bloqueio lento da poliespermia: a poliespermia pode ainda ocorrer se os espermatozides ligados ao envoltrio vitelino no so de alguma forma removidos. Esta remoo efetivada pela reao dos grnulos corticais. Estas vesculas contm a protena hialina, proteases, uma peroxidase e mucopolissacardeos. Aps a entrada do espermatozide, estes grnulos corticais se fundem com a membrana plasmtica do vulo liberando seu contedo na rea entre a membrana e o envoltrio vitelnico. As protenas que ligam o envoltrio vitelnico ao vulo so dissolvidas pelas enzimas proteolticas liberadas e os mucopolissacardeos, recm liberados, produzem um gradiente osmtico que permite a entrada de gua no espao entre a membrana celular e o envoltrio vitelnico, que ento elevado e passa a ser denominado membrana de fecundao. Primeiro, as proteases modificam ou removem o receptor de bindina e algum espermatozide ligado a ele. Segundo, a peroxidase endurece a membrana de fecundao pela ligao de resduos de tirosina s protenas adjacentes. A membrana de fecundao comea a se formar no local da entrada do espermatozide e se expande ao redor do vulo. To logo o envoltrio de fecundao se forma a protena hialina estocada nos grnulos corticais, forma uma cobertura ao redor do vulo. A clula estende microvilosidades longas cujas extremidades se ligam camada hialina. Este envoltrio hialino constitui suporte para

os blastmeros durante a clivagem. Em mamferos a reao dos grnulos corticais no produz uma membrana de fecundao, mas o efeito o mesmo. A liberao de enzimas modifica os receptores dos espermatozides na zona pelcida de tal forma que eles no podem mais se ligar aos espermatozides (reao de zona) em seguida fuso dos grnulos corticais prximos ao ponto de entrada do espermatozide, uma onda de exocitose dos grnulos corticais se propaga ao redor do crtex em direo ao lado oposto do ovo. ons de clcio so diretamente responsveis pela propagao da reao cortical e esto estocados no prprio vulo, dentro do reticulo endoplasmtico. Variaes nas estratgias que previnem a poliespermia esto amplamente distribudas na natureza. Fuso do material gentico: aps a fuso das membranas do espermatozide e do vulo, o ncleo e o centrolo do primeiro se separam das mitocndrias e do flagelo, sendo que esses se desintegram dentro do vulo. O ncleo do vulo, ainda haplide, denominado proncleo feminino. Dentro do citoplasma do vulo, o ncleo do espermatozide de descondensa para formar o proncleo masculino. As protenas ligadas cromatina do espermatozide, em seu estado condensado e inativo, so trocadas por protenas semelhantes, derivadas do vulo. Esta troca permite a descondensao da cromatina do espermatozide. Pedaos remanescentes do envoltrio nuclear original do espermatozide so transportados pela cromatina. Rapidamente novas vesculas membranosas se agregam ao longo da periferia da massa de cromatina e se conectam com os fragmentos do velho envoltrio para produzir a nova membrana do proncleo masculino. Esse sofre uma rotao de 180, de tal forma que o centrolo do espermatozide fica entre os dois proncleos. Os microtbulos do centrolo do proncleo masculino se estendem e conectam o proncleo feminino e ambos migram para se encontrarem. A fuso forma o ncleo zigtico diplide. O incio da sntese de DNA pode ocorrer ainda na fase de proncleo ou aps a formao do ncleo zigtico. O proncleo masculino de mamferos aumenta em tamanho enquanto o ncleo do ovcito completa sua segunda diviso de meiose. Ento, cada proncleo migra para se encontrar com o outro, replicando seu DNA enquanto viaja. No encontro, os dois envoltrios nucleares se tocam e rompem. Contudo, em vez de produzir um ncleo zigtico comum, a cromatina se condensa em cromossomos que se orientam para um fuso mittico comum. Ento podem ser vistos verdadeiros ncleos diplides em mamferos, no no zigoto, mas na fase de duas clulas. A no equivalncia dos proncleos de mamferos: os proncleos masculino e feminino e mamferos so geneticamente equivalentes, porm podem ser funcionalmente diferentes. A mola hidatiforme um tumor que se desenvolve a partir de um espermatozide haplide que fecunda um vulo cujo proncleo feminino est ausente. O desenvolvimento no ocorre nesse caso. Estas diferenas podem estar em modificaes do DNA que so diferentes nos ncleos dos vulos e dos espermatozides. Ativao do metabolismo do vulo: o vulo maduro uma clula inerte, que reativada pela entrada do espermatozide. Esta ativao meramente um estmulo, contudo, transforma em ao um conjunto de eventos metablicos pr-programados. As respostas do vulo ao espermatozide podem ser: (1) respostas imediatas muitos experimentos demonstram que esta liberao de clcio essencial para a ativao do desenvolvimento do embrio. A liberao de clcio responsvel pela ativao de uma serie de reaes metablicas. Uma delas a ativao da enzima NAD+ quinase, que converte NAD+ em NADP+. Esta mudana deve ter importantes conseqncias para o metabolismo da clula. Uma delas envolve o metabolismo dos lipdios. Assim, a mudana de NAD+ para NADP+ pode ser importante na construo de muitos

componentes das novas membranas celulares. Um outro efeito desta mudana envolve o consumo de oxignio. Uma sbita reduo do oxignio verificada durante a fecundao. A enzima responsvel pela reduo do oxignio dependente de NADPH. (2) respostas tardias acoplado ao aumento intracelular de clcio livre est um aumento do pH intracelular. Esse aumento inicia-se com um segundo influxo de ons sdio, causando a troca de um on sdio que entra novo por um on de hidrognio que vai para a gua do mar. Esta perda de ons de hidrognio provoca uma alterao no pH que aumenta de 6,8 para 7,2 e traz enormes mudanas na fisiologia do ovo. Ainda que se acredite que esta mudana seja causada por uma reao mediada por clcio, tem sido verificado que independente da causa, o aumento do pH intracelular pode iniciar muitas das respostas tardias, essas incluem a ativao da sntese de DNA e da sntese protica, para a qual so suados mRNAs j presentes no citoplasma do ovcito. Agentes que bloqueiam o aumento do pH tambm bloqueiam esses eventos tardios da fecundao. A bioqumica da ativao do vulo: a ativao do vulo causada por uma onda de liberao de clcio de compartimentos internos da clula. A ligao do espermatozide membrana celular do vulo provoca uma serie de reaes envolvendo enzimas da membrana que sintetizam mensageiros secundrios (inositol 1,4,5 trifosfato {IP3} pode liberar ons clcio). O IP3 liberado nesta reao se liga a uma protena no reticulo que libera ons clcio. A protena-G est envolvida na liberao dos ons clcio ligados e na exocitose dos grnulos corticais. Parece que a mesma qumica que permite ao vulo ativar o espermatozide tambm permite ao espermatozide ativar o vulo. Rearranjo do citoplasma do vulo: a fecundao pode tambm iniciar o deslocamento radical do material citoplasmtico. Estes arranjos do citoplasma do ovcito so frequentemente cruciais para a diferenciao celular durante o desenvolvimento. O citoplasma de vulo freqentemente contm determinantes morfognicos que se segregam em clulas especficas durante a clivagem. Esses determinantes conduzem ativao ou represso de genes especficos e consequentemente conferem certas propriedades s clulas que os incorporam. O arranjo espacial correto destes determinantes crucial para o desenvolvimento normal. O crescente amarelo, que se estende do plo vegetal ao equador traz o plasma amarelo para a rea onde futuramente os msculos sero formados na larva do tunicado. O movimento destas regies citoplasmticas dependente de microtbulos que provavelmente so gerados pelo centrolo do espermatozide. O citoplasma subjacente, localizado prximo ao equador, do lado exatamente oposto ao ponto de entrada do espermatozide o crescente cinzento, que marca a regio onde a gastrulao iniciada em embries de anfbios. O motor desses movimentos citoplasmticos em ovos de anfbios parece ser o arranjo paralelo dos microtbulos que se situam entre o citoplasma cortical e o citoplasma interno do hemisfrio vegetal. A orientao dos microtbulos paralela direo da rotao do citoplasma. Os microtbulos paralelos so originrios do vulo, mas parece que o ster do espermatozide d a orientao aos microtbulos. Esses movimentos citoplasmticos iniciam uma cascata de eventos que determinam o eixo dorso-ventral. Preparao para clivagem: o aumento intracelular de ons clcio livres tambm movimenta a aparelhagem da diviso celular. Os mecanismos atravs dos quais a clivagem iniciada, provavelmente diferem entre as espcies. O ritmo das divises celulares regulado pela sntese e degradao da ciclina, que mantm a clula em metfase e a quebra da ciclina permite clula retornar interfase. Clivagem, o evento que separa a fecundao da embriognese. A posio da primeira clivagem no ao acaso, mas, tende a ser determinada pelo ponto de entrada do espermatozide e a subseqente rotao do citoplasma do ovo. A coordenao do plano de clivagem e os

rearranjos do citoplasma so provavelmente mediados pelos microtbulos do ster do espermatozide.

Histologia bsica 1 A histologia e seus mtodos de estudo A histologia estuda as clulas e o material extracelular que constituem os tecidos do corpo. O ME que 1000 vezes mais potente que o MO ampliou bastante o campo de estudo da histologia, assim como outros instrumentos e tcnicas de estudo como a cultura de clulas, as tcnicas de radioautografia e de imuno-histoqumica. Como so feitas as lminas histolgicas: o que se deseja levar ao microscpio um preparado no qual os tecidos estejam perfeitamente preservados, apresentando a mesma estrutura e composio qumica que possuam quando vivos. A fixao estabiliza os tecidos: para que a clula no se destrua (autlise), ou bactrias no a destruam, os tecidos devem ser tratados imediatamente aps sua retirada. Esse tratamento denominado fixao, cuja principal funo insolubilizar as protenas do tecido. Um dos melhores fixadores para o MO o formaldedo a 4% em soluo tamponada. No ME so usadas duas fixaes, primeiro em soluo tamponada de aldedo glutrico, e em seguida, em soluo tambm tamponada, de tetrxido de smio. Etapas Finalidades Duraes 1. Fixao em fixador simples ou em mistura fixadora (liquido de Bouin, Helly etc.). 2. Desidratao em lcool etlico de concentraes crescentes, comeando com lcool a 70% e terminando com lcool absoluto. 3. Clareamento ou diafanizao em benzol, xilol ou toluol, solventes do lcool e da parafina. 4. Impregnao pela parafina fundida, geralmente realizada em estufa a 60C. Preservar a morfologia e a Cerca de 12 hs, composio dos tecidos. dependendo do fixador do tamanho da pea. Remover a gua dos tecidos. 6 a 24hs, dependendo do tamanho da pea.

Embeber a pea em substancia 1 a 6hs, dependendo o miscvel com a parafina. tamanho da pea.

A parafina penetra nos vasos, 30 min a 6hs, nos espaos intercelulares e dependendo do mesmo no interior das clulas, tamanho da pea. impregnando o tecido e tornando mais fcil a obteno dos cortes no micrtomo. 5. Incluso: a pea colocada Obteno do bloco de parafina num molde retangular de forma regular, para ser contendo parafina fundida. cortado no micrtomo. Aps a fixao os tecidos so impregnados com parafina ou resinas sintticas a fim de que possam ser cortados em fatias finas: para a obteno dos cortes os tecidos tem que ser embebido e envolvidos em substancias de consistncia firme (parafinas ou resinas plsticas). H uma srie de tratamentos que o tecido deve sofrer antes da impregnao. Na primeira etapa, a desidratao, a gua extrada dos tecidos pela passagem dos mesmos em banhos de concentraes crescentes de etanol, geralmente de 70% at o etanol absoluto (ou puro ou 100%). Em seguida, o etanol substitudo por um liquido miscvel como meio de incluso. Para a incluso em parafina usa-se o xilol ou benzol. Os tecidos embebidos nessas substancias tornam-se translcidos, por isso essa etapa chamada diafanizao ou clareamento. Mergulha-se o tecido em parafina a

60C. Devido ao calor o xilol ou benzol evaporam e os espaos anteriormente ocupados por eles so ocupados pela parafina. Em seguida coloca-se o tecido num recipiente contendo um pouco de parafina fundida e deixa solidificar em temperatura ambiente formando um bloco de parafina como tecido no seu interior, que seccionado pela navalha de ao do micrtomo, obtendo-se cortes de 6 a 8 m de espessura. Esses cortes so estirados em gua quente e colocados nas lminas. A imerso dos tecidos em etanol e xilol ou benzol retira os lipdios, quando so eles que se quer estudar usa-se o micrtomo de congelao. A colorao facilita a visualizao dos componentes teciduais: a maioria dos tecidos incolor. A maioria dos corantes utilizados em histologia comporta-se como cido ou base e tende a formar ligaes salinas com radicais ionizveis presentes nos tecidos. Os componentes basfilos tm carter cido e se ligam aos corantes com carter bsico, j os acidfilos tm carter bsico e se ligam aos corantes com carter cido. Azul-detoluidina, azul-de-metileno e a hematoxilina so corantes bsicos, enquanto orange G, eosina e fucsina cida so corantes cidos. O ncleo celular basfilo e o citoplasma quase sempre acidfilo. A colorao dupla pela hematoxilina e a eosina (HE) a mais utilizada na rotina em histologia, porem muitos outros corantes so usados. Alm dos corantes usa-se tambm a impregnao metlica com sais de prata e ouro. Tcnicas Constituintes Ncleos Citoplasma Fibras Fibras Fibras colgenas elsticas reticulares HE Hemalmen Azul ------Irregular ---(hematoxilina) Eosina ---Rseo Rseo Irregular ---Hematoxilina Preto frrica Fucsina cida ---e ponceau de xilidina Verde-luz ------Vermelho ---------Verde -------------------

Tricrmico de Masson

FucsinaFucsina---------Prpura ---resorcina de resorcina Weigert Impregnao Solues de ------Castanho- ---Preto argntica sais de prata escuro para fibras reticulares O microscpio ptico no permite o estudo de detalhes com menos de 0,2m: a parte ptica do microscpio consiste em trs sistemas de lentes: condensador, objetiva e ocular. A ampliao total dada pelo MO igual ao aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. O fator mais significativo para uma boa imagem a resoluo, que a menor distancia para que duas partculas apaream como objetos separados. O limite da resoluo dos melhores MO 0,2m e ele depende essencialmente da objetiva, a ocular apenas aumenta de tamanho a imagem projetada de foco pela objetiva. Os microscpios de contraste de fase facilitam a visualizao das clulas e tecidos vivos: o estudo de tecidos vivos difcil, pois a maioria dos seus componentes so incolores e transparentes. O microscpio de contraste permite o estudo de muitos detalhes celulares in vivo. A velocidade com que a luz atravessa um corpo transparente depende da quantidade de matria presente e determina o ndice de refrao desse corpo. Quanto maior a densidade, maior o ndice de refrao e menor a velocidade da

luz no corpo. Como as diversas estruturas celulares tm ndices diferentes, causam atrasos diferentes nas ondas luminosas dando origem a diferenas de fase entre as ondas luminosas emergentes, mas essas diferenas ao so visveis. No microscpio de contraste de fase existem dispositivos especiais que transformam essas diferenas de fase em diferenas de amplitude, dando diferenas de intensidade luminosa, para as quais a retina sensvel. Cortes pticos podem ser obtidos com o microscpio confocal: este tipo de microscpio utiliza raios laser e gera imagens de planos pticos do tecido em exame. Isto torna possvel imagens muito ntidas porque o material situado abaixo do plano de foco no contribui para a formao da imagem e, assim, no compromete sua nitidez. O microscpio de polarizao revela a presena de molculas alongadas e orientadas: ao atravessar um filtro polariode a luz torna-se polarizada. Colocando-se um segundo filtro no microscpio, acima do primeiro e com seu eixo perpendicular, a luz no atravessa o conjunto. O primeiro filtro colocado no condensador e recebe o nome de polarizador. O segundo filtro, ou analisador, colocado entre a objetiva e a ocular. Quando o polarizador e o analisador esto com seus eixos perpendiculares, o campo do microscpio aparece escuro, mas se entre os dois filtros existirem estruturas contendo molculas orientadas (anisotrpicas ou birrefringentes, modificam o eixo da luz recebida do polarizador), estas estruturas aparecero brilhantes contra um fundo escuro. Microscopia de fluorescncia: quando excitadas por certos comprimentos de onda, algumas substncias absorvem energia e emitem luz de maior comprimento de onda. Em microscopia utiliza-se a citao com radiao ultravioleta, para que a radiao emitida caia na faixa de luz visvel. As substancias fluorescentes aparecem como substancias brilhantes contra um fundo escuro. Microscopia eletrnica: os eltrons so produzidos graas ao aquecimento no vcuo de um filamento que ento emite eltrons. Essas partculas so aceleradas devido a uma ddp de 60 a 100 kV existente entre o filamento e o anodo. Devido ao fato de serem eltrons facilmente desviados pelo objeto, torna-se necessrio utilizar cortes muito finos de tecido (20 a 100 nm de espessura). Para isso foi necessrio desenvolver mtodos especiais de microtomia, os cortes so feitos em um ultramicrtmo, nos quais so utilizadas navalhas de vidro ou diamante. Enquanto no MO a luz absorvia pelas estruturas coradas, no ME os eltrons so desviados por pores do objeto que contenham tomos de elevado peso atmico. O resultado que as estruturas que desviam eltrons aparecem escuras na tela fluorescente e so chamadas de eltrondensas. A capacidade de desviar os eltrons depende do numero atmico, por isso se costuma impregnar os cortes de tecidos com metais pesados a fim de aumentar o contraste, resultando assim uma imagem ntida e bem visvel. A analise dos eltrons refletidos permite o estudo da superfcie de clulas e tecidos especialmente preparados: alem do ME j descrito, chamado de transmisso, existe outro tipo, denominado microscpio de varredura aqui, entre lente eletromagntica e o objeto interposta uma bobina de varredura que provoca um desvio no feixe de eltrons, de tal modo que o mesmo vai incidir sobe o objeto ponto por ponto, numa seqncia determinada. O objeto no se deixa atravessar pelo feixe eletrnico, devido a sua espessura e a uma cobertura feita por evaporao de metal pesado sobre a sua superfcie. Desse modo, o feixe de eltrons que incide sobre o objeto (feixe primrio) sofre reflexes, originando eltrons secundrios, os quais so captados por detectores especiais que geram um sinal eltrico, transferido para um tubo de vdeo. O uso combinado de molculas radioativas e suspenses de brometo de prata em gelatina (emulses fotogrficas) a base da tcnica radioautogrfica: essa tcnica

torna possvel a localizao de substancias radioativas nos tecidos. Cristais de brometo de prata agem como microdetectores da radioatividade, pois atingidos pela radiao, depois de revelados, transformam-se em gros de prata metlica, que aparecem negros ao microscpio, denunciando a presena de radioatividade nas estruturas com as quais esto em contato. Esse mtodo tem sido utilizado para o estudo de fenmenos biolgicos. Por exemplo, a sntese de protenas pode ser estudada pela injeo de aminocidos marcados com carbono 14 e hidrognio 3, as molculas que se formarem sero radioativas e podero ser encontradas pela radioautografia. A separao , em quantidade, dos componentes celulares possvel pela tcnica de centrifugao fracionada: um processo fsico que aplica a fora centrifuga para separar organelas celulares, de acordo como coeficiente de sedimentao de cada uma, esse depende do tamanho, forma e densidade da partcula e da densidade e viscosidade do meio. Submetendo-se uma clula ao de uma fora centrifuga adequada, suas organelas se distribuiro em diferentes camadas. Utilizando essa tcnica pode-se isolar qualquer organela celular, determinar sua composio qumica e estudar suas funes in vitro. Aps a homogeneizao, inicia-se a centrifugao d sobrenadante, utilizando-se foras centrfugas cada vez maiores. As partculas mais densas sedimentam primeiro. O sobrenadante de cada centrifugao submetido a uma fora centrfuga maior, obtendose, desse modo, a separao dos diversos componentes celulares. Histoqumica e citoqumica: esses termos so usados para indicar os mtodos para a localizao de diferentes substancias nos cortes de tecido e eles tm por base reaes qumicas especificas, ou a interao macromolecular de alta afinidade. Nos dois casos, o resultado final a produo de compostos insolveis, coados, ou eletrn-densos, que possibilitam a localizao de sustncias especficas nos cortes de tecidos atravs do uso do MO ou ME. Para os lipdios os corantes mais usados so: o Sudan IV e o Sudan negro, que coram os lipdios respectivamente em vermelho e preto; para os cidos nuclicos: a reao de Feulgen; para o RNA: azul-de-toluidina ou azul-de-metileno (precisa de lmina controle com ribonuclease); para polissacardeos: PAS (reao do acido peridico de Schiff, precisa de lmina controle com amilase); para enzimas: produzir um precipitado fortemente corado ou eltron-denso no local da atividade enzimtica. Interaes de alta afinidade entre macromolculas servem para a realizao de tcnicas importantes como a imunocitoqumica, a citoqumica com lectinas e a hibridizao in situ: essas interaes so muito especificas, localizando as molculas com muita preciso, o exemplo mais bem estudado a interao antgeno-anticorpo. A tcnica da imunocitoqumica baseia-se no seguinte fato: quando uma macromolcula estranha denominada antgeno introduzida em um organismo, este reage produzindo uma protena chamada anticorpo, que por sua vez combina-se especificamente com o antgeno. A tcnica consiste em acoplar sustncias marcadoras a anticorpos sem que estes percam a capacidade de se combinar como antgeno. Isto utilizado de duas maneiras, denominadas tcnicas direta e indireta de imunocitoqumica. Trs mtodos so muito utilizados para marcar os anticorpos: (1) conjugao com composto fluorescente; (2) conjugao com uma enzima e (3) conjugao com uma substancia que no se deixa atravessar pela luz e que dispersa eltrons. TCNICA DIRETA: para um antgeno x tirado de um animal feito um anticorpo em outro animal, que depois de purificado e acoplado com um composto fluorescente volta para o animal que tinha o antgeno X e se liga a ele formando uma estrutura acoplada fluorescente, ficando visvel a localizao do antgeno X. TCNICA INDIRETA: na primeira etapa faz-se a imerso do corte histolgico em soluo com anticorpo no marcado, obtido do sangue de um animal no qual foi injetado o antgeno cuja localizao se deseja determinar. O

anticorpo fixa-se ao antgeno, mas isso no pode ser observado ao microscpio, por isso o anticorpo no est marcado. Na segunda etapa, imerge-se o preparado em soluo com antigamaglobulina marcada. Esta ultima , portanto, um anticorpo. A antigamaglobulina marcada fixa-se gamaglobulina que j est ligada ao antgeno, revelando a localizao dele. TCNICAS DE HIBRIDIZAO IN SITU: para entender como a clula funciona necessrio entender o fluxo de informaes entre o DNA e as protenas sintetizadas na clula. Dentre as tcnicas com essa finalidade encontra-se a tcnica de anlise Southern, que possibilita caracterizar e quantificar o DNA de um gene; anlise Northern, que identifica e quantifica um RNAm mesmo na presena dos numerosos outros RNAs; e a anlise Western, para deteco de uma protena especifica, dentre as que existem numa clula ou tecido. As anlises Southern e Northern se baseiam na alta afinidade que existe entre segmentos complementares de cidos nuclicos, o que torna possvel a hibridizao. A anlise Western se baseia na alta afinidade e especificidade entre antgenos e respectivos anticorpos. HISTOQUMICA COM LECTINAS: as lectinas so protenas obtidas de sementes de vegetais, que se ligam com alta afinidade e especificidade a carboidratos da superfcie celular. As diferentes lectinas ligam-se a segmentos especficos de certos hidratos de carbono. Caracterizam molculas da membrana que contm certos carboidratos, e geralmente, marcada com peroxidase, para tornar possvel sua localizao atravs da tcnica histoqumica para peroxidase.

Histologia bsica 2 Tecido epitelial Os tecidos que constituem os diversos rgos do corpo so constitudos por clulas mais a matriz extracelular, que produzida pelas clulas. Existem quatro tipos bsicos de tecido: epitelial, conjuntivo, muscular e nervoso. Os epitlios so constitudos por clulas, geralmente, polidricas, justapostas, entre as quais se encontra pouca substncia extracelular. As clulas epiteliais aderem firmemente umas s outras, formando camadas celulares contnuas que revestem a superfcie externa e as cavidades do corpo. Alm dos epitlios de revestimento, existem tambm os epitlios glandulares, formados por clulas especializadas na produo de secreo. H ainda epitlios especializados na captao de estmulos provenientes do ambiente, so os neuroepitlios. Geralmente a forma do ncleo acompanha a forma da clula: clulas cbicas apresentam ncleo esfrico, ao passo que clulas prismticas tm ncleo elptico. O eixo maior dos ncleos acompanha o eixo maior das clulas. O glicoclice uma delgada camada glicoprotica que reveste as clulas epiteliais (e outras clulas tambm): as glicoprotenas tomam parte nos processos celulares de pinocitose, de adeso entre as clulas, em fenmenos imunolgicos e em outros processos vitais. A lmina basal separa e prende o epitlio ao tecido conjuntivo adjacente, permitindo porem a passagem de diversas molculas: os epitlios apresentam na sua superfcie de contato com o tecido conjuntivo, uma estrutura chamada lmina basal, que tem espessura de 20 a 100 nm, formada principalmente, por colgeno tipo IV, uma glicoprotena denominada laminina e proteoglicanas, sendo sintetizada pelas clulas epiteliais. Em determinadas regies do organismo, verifica-se, em continuao lmina basal, um acmulo de fibras reticulares e complexos de protenas e glicoprotenas, formando um conjunto que e visveis ao microscpio ptico. A associao da lmina basal com essa estrutura chama-se membrana basal. Nos epitlios sujeitos a atritos fortes, a lmina basal fixa-se ao tecido conjuntivo subjacente por meio de finas fibrilas de colgeno tipo VII, chamadas fibrilas de ancoragem. Quando as clulas migram para suas localizaes corretas, no desenvolvimento embrionrio, apoiando-se nas lminas basais, as mutaes que modificam as protenas normais da lmina basal afetam gravemente a organognese. Estruturas diversas, principalmente os desmossomos, asseguram forte coeso entre as clulas epiteliais: da aderncia das clulas epiteliais participam protenas da famlia das caderinas, que so protenas transmembrana, com a funo de prender as membranas de clulas contguas. As caderinas perdem sua adesividade na ausncia de Ca+. As junes celulares servem para a aderncia e tambm para vedar o espao intercelular. Certas junes formam canais de comunicao entre as clulas adjacentes. Nos epitlios prismticos com uma nica camada de clulas, frequentemente, as junes se apresentam numa ordem definida da parte apical para a parte basal da clula. Nessas clulas, as znulas de ocluso so as junes mais apicais. Todas as znulas so estruturas em forma de faixa, formando um cinturo em volta da clula. As znulas de ocluso so caracterizadas pela ntima justaposio peridica das membranas celulares das clulas vizinhas, com fuso dos folhetos externos das membranas e forma

uma barreira que impede a passagem de molculas por entre as clulas epiteliais, ou seja, ela tem um efeito soldador, contribuindo para a formao de compartimentos funcionais delimitados por clulas epiteliais. A juno encontrada a seguir a znula de adeso, que circunda toda a volta da clula e contribui para a aderncia entre clulas vizinhas. Aqui h uma discreta separao entre as membranas celulares e um pequeno acmulo de material eltrondenso na superfcie interna dessas membranas. No material eltron-denso se inserem componentes da trama terminal, uma estrutura localizada no plo apical das clulas e que contm a protena espectrina, filamentos de actina e filamentos intermedirios. Admite-se que a trama terminal refora o citoplasma do pice da clula. O conjunto formado pelas znulas de ocluso e de adeso constitui o complexo unitivo e responsvel por uma estrutura a muito conhecida como rede terminal. A juno comunicante (gap junction) ou nxus pode ocorrem em qualquer posio nas membranas laterais das clulas epiteliais. So encontradas tambm nos outros tecidos, menos no muscular estriado esqueltico. Caracteriza-se pela aposio das membranas de clulas adjacentes, aps criofratura observam-se agregados de partculas formando placas circulares nas membranas. As junes comunicantes so formadas de hexmeros proticos, cada um com um poro hidroflico central de 1,5 nm. Cada hexmero se alinha como da clula adjacente e forma um canal hidroflico entre as duas clulas, esses canais permitem a passagem de molculas informacionais como AMP cclico, GMP, ons etc., e podem propagar informaes entre clulas vizinhas integrando as funes celulares nos tecidos. As junes comunicantes se formam rapidamente entre clulas previamente isoladas. O fato de inibidores metablicos, especialmente os que bloqueiam a oxidao fosforilativa, impedirem a formao dessas comunicaes e tambm promoverem a desagregao das existentes mostra que elas se mantm graas a um processo que consome energia. Como as novas junes comunicantes se formam mesmo que a sntese protica seja interrompida, admite-se que elas podem se formar pela aproximao das molculas proticas (unidades do hexmero) preexistentes e dispersas na membrana celular. O desmossomo ou mcula de adeso est relacionado com a aderncia intercelular, ele uma estrutura complexa, em forma de disco constitudo pela membrana de duas clulas contguas. Na regio do desmossomo as membranas celulares se afastam. Desmossomos apresentam rigidez. Protenas da famlia das caderinas participam da aderncia proporcionada pelos desmossomos. Na face citoplasmtica de cada membrana existe uma placa circular constituda de ao menos 12 protenas na qual se prendem filamentos intermedirios de queratina (tonofilamentos). Na zona de contato entre algumas clulas epiteliais e a lamina basal, frequentemente, existem hemidesmossomos. Eles auxiliam a fixao da clula epitelial lmina basal subjacente e so mais freqentes onde o epitlio est sujeito a atritos fortes. Aqui a aderncia devido protenas da famlia das integrinas. As junes intercelulares podem ter trs funes: (1) junes de adeso (znula de adeso, desmossomos e hemidesmossomos), (2) junes impermeveis (znulas de ocluso) e (3) junes de comunicao (junes comunicantes). OBS.: a adeso entre as clulas pode ser aumentada pela grande quantidade de interdigitaces observadas nas membranas das paredes laterais das clulas epiteliais vizinhas. As clulas epiteliais geralmente so polarizadas: a maioria das clulas epiteliais possui uma estrutura diferente, conforme a extremidade do citoplasma que observada. Organelas, vesculas de secreo, material de deposito (incluses) no se distribuem de

modo uniforme no citoplasma. Certas estruturas predominam num plo, conforme a atividade funcional da clula. O plo basal aquele em contato com a lmina basal e o plo apical a direo oposta. A polaridade celular no exclusiva das clulas epiteliais. As clulas epiteliais apresentam estruturas para aumentar a superfcie ou movimentar partculas: MICROVILOS: as clulas epiteliais com funo de absoro apresentam na superfcie livre milhares de microvilos (formados por filamentos de actina). Frequentemente, nos microvilos, o revestimento glicoprotico (glicoclice) apresenta-se mais denso. ESTEREOCLIOS: so estruturas imveis, de distribuio restrita, encontradas na regio apical das clulas de revestimento do epiddimo e do canal deferente. So constitudos por longos prolongamentos citoplasmticos, que podem sofrer anastomose. Aumentam a superfcie celular, facilitando o transito de molculas para dentro e fora das clulas. Apesar do nome tem semelhana com os microvilos e no com os clios. CLIOS E FLAGELOS: os clios apresentam forma cilndrica, revestidos pela membrana celular, contendo no centro um par de microtbulos isolados e, na periferia, nove pares de microtbulos fundidos dois a dois e dispostos circularmente. Os clios se inserem nos corpsculos basais. O movimento celular coordenado, provocando uma corrente de fluido em uma s direo. Os movimentos ciliares resultam da atividade dos microtbulos, que utilizam a energia fornecida por molculas de ATP. Os flagelos, que no organismo humano existem apenas nos espermatozides, tm estrutura semelhante dos clios, porem so muito mais longos e, normalmente, cada espermatozide tem apenas um flagelo. As funes bsicas dos epitlios so de revestir, separando compartimentos, e secretar: os epitlios esto classificados em dois grandes grupos: de revestimento e glandulares. De acordo com as condies funcionais locais, os epitlios de revestimento podem ter uma ou mais camadas de clulas: so tecidos cujas clulas se dispem em camadas, recobrindo a superfcie externa ou as cavidades do corpo. Esto sempre apoiados numa camada de tecido conjuntivo que contem os vasos sanguneos cujo sangue nutre o epitlio. So classificados tendo em vista o numero de camadas constituintes e a forma das clulas na camada mais superficial. Pelo primeiro critrio, os epitlios podem ser simples ou estratificados. Os epitlios simples subdividem-se em pavimentosos, cbicos e prismticos ou cilndricos. Nos epitlios estratificados, a classificao baseia-se na forma das clulas da camada mais superficial do epitlio. O epitlio estratificado, chamado de transio, que reveste a bexiga, caracteriza-se pelo fato de suas clulas superficiais no serem nem pavimentosas nem prismticas, mas globosas. Nesse epitlio, o nmero de camadas e a forma das clulas superficiais variam conforme o rgo esteja distendido ou no. Chama-se mucosa o conjunto constitudo por epitlio mais tecido conjuntivo, que reveste cavidades midas, como boca, bexiga, intestino. O conjuntivo das mucosas recebe o nome de lmina prpria ou crion. Com raras excees, os vasos sanguneos no penetram no epitlio, de modo que a nutrio feita por difuso atravs do tecido conjuntivo. O tecido epitelial, geralmente, apresenta fibras nervosas sensoriais, que acabam em terminaes nervosas livres, constituindo, s vezes, uma rica rede intra-epitelial, conferindo grande sensibilidade ao epitlio. As clulas epiteliais glandulares se especializam na produo de vrios tipos de secreo: quase sempre os produtos elaborados pelas clulas glandulares so acumulados temporariamente no citoplasma, sob a forma de pequenas partculas envolvidas por membrana, as vesculas ou grnulos de secreo. Os epitlios

glandulares formam rgos denominados glndulas. Quando cada clula secretora aparece isolada, a glndula unicelular. A maioria das glndulas, porm, pluricelular. As glndulas originam-se pela proliferao das clulas de epitlios de revestimento, com invaso do tecido conjuntivo subjacente e posterior diferenciao. As glndulas so rgos envolvidos por uma cpsula de tecido conjuntivo que emite septos, dividindo-as em lobos e lbulos. Vasos sanguneos e nervos penetram na glndula dentro dos septos, fornecendo nutrientes e estmulo nervoso para as funes glandulares. De acordo coma maneira pela qual o produto de secreo sai das clulas, as glndulas podem ser mercrinas (s saem os produtos de secreo pncreas e glndulas salivares), holcrinas (a clula toda se destaca da glndula, arrastando consigo o produto de secreo sebcea) e apcrinas (so intermedirias, o produto de secreo eliminado com uma parte do citoplasma apical sudorparas). Glndulas endcrinas: - tipo cordonal (adrenal, hipfise e paratireide): clulas se dispem em cordes macios que sofrem anastomose e ficam separados por capilares sanguneos, que recolhem os produtos elaborados pela glndula. - tipo vesicular (tireide): clulas se agrupam formando vesculas, constitudas por uma s camada de clulas, limitando o espao onde a secreo se acumula temporariamente. Glndulas excrinas: existe uma poro secretora e o ducto excretor. Quando a glndula tem um nico ducto que no se divide, uma simples. Quando os ductos se dividem, a glndula chamada composta. A forma da poro secretora permite separar as glndulas em acinosas e tubulosas. Os cinos de luz ampla so por vezes chamados de alvolos. A associao das partes secretoras mencionadas forma as glndulas tubuloacinosas e as tubuloalveolares. Quanto parte secretora, as glndulas podem ser ramificadas ou no. Renovao das clulas epiteliais: h uma renovao constante das clulas graas a uma atividade mittica continua. Metaplasia a transformao patolgica de um tecido em outro: em condies patolgicas, certas clulas podem sofrer alteraes e dar origem a um novo tipo de tecido. Exemplos: o epitlio pseudo-estratificado da taqueia e dos brnquios, em fumantes crnicos sob a ao irritante do fumo, pode transformar-se em epitlio estratificado pavimentoso; na deficincia crnica de vitamina A, o epitlio dos brnquios, o epitlio de transio da bexiga e vrios outros so substitudos por epitlio estratificado pavimentoso queratinizado. As glndulas so controladas por mecanismos nervosos e hormonais mediados por mensageiros qumicos: geralmente um fator predomina sobre o outro no controle da atividade glandular. Tanto o controle nervoso como o hormonal se exercem atravs de substancias chamadas mensageiros qumicos. Os mensageiros qumicos so chamados neurotransmissores, e os produzidos pelas glndulas endcrinas so os hormnios. OBS.: a partir de ATP ou GTP formam-se AMP ou GMP cclicos, pela ao da enzima adenilato ciclase ativada pelo primeiro mensageiro. A adenilato ciclase est localizada na membrana e a ela se associa um receptor para o primeiro mensageiro. Os segundos mensageiros, cAMP ou cGMP, formam-se dentro da clula, enquanto o primeiro mensageiro permanece na face externa da membrana. Os efeitos de muitos neurotransmissores e hormnios so mediados por cAMP ou cGMP. A especificidade dos primeiros mensageiros sobre os diferentes tipos celulares depende dos receptores especficos. Os mensageiros qumicos agem atravs de dois mecanismos. No primeiro caso, o mensageiro penetra na clula, combina-se com receptores intracelulares e o complexo

do mensageiro com o receptor liga-se ao DNA ativando um ou mais genes, iniciando a produo de protenas especficas. Os hormnios esterides que atravessam facilmente a membrana plasmtica, graas a sua grande solubilidade nos lipdios, agem desta maneira. O segundo mecanismo depende da interao do mensageiro com receptores localizados na superfcie externa da membrana da clula glandular. Essa molcula mensageira, chamada primeiro mensageiro, induz o aparecimento dos mensageiros intracelulares, que iniciam uma serie de eventos culminando com a ativao da secreo. Os hormnios polipeptdicos e os neurotransmissores, que no so solveis nos lipdios e portanto no atravessam facilmente a membrana celular, atuam atravs dos mensageiros intracelulares. O transporte ativo de ons facilitado pelo aumento da superfcie celular e consome muita energia: nos mamferos, a concentrao de Na+ no liquido extracelular de 140 mmol/L, enquanto a concentrao intracelular desse on de apenas 5 15 mmol/L. Acresce que o interior da clula eletricamente negativo em relao ao meio extracelular. Nessas condies o on sdio eletricamente positivo, tende a penetrar na clula, a favor de um gradiente de concentrao e eltrico. A clula usa a energia acumulada em ATP para expelir Na+ por meio de um sistema conhecido como bomba de sdio, mantendo assim baixa a concentrao de sdio no meio intracelular. Em muitos epitlios simples pavimentosos intenso o transporte atravs de vesculas de pinocitose: as clulas utilizam pinocitose para transportar macromolculas. Essa atividade observa-se nos epitlios simples dos endotlios e mesotlios, caracterizados pela forma pavimentosa, presena de grande numero de vesculas pinocitticas na membrana e no citoplasma e relativa escassez de organelas. O material captado por pinocitose numa face da clula atravessa o citoplasma no interior das vesculas de pinocitose e descarregado na face oposta da clula. As clulas que secretam protenas so ricas em reticulo endoplasmtico rugoso: todas as clulas sintetizam protenas continuamente, para substituir as molculas gastas nos processos metablicos normais. Mas algumas so especializadas, pela diferenciao, para a produo de grandes quantidades de protenas. Em clulas que produzem enzimas digestivas, como o pncreas, os grnulos que ficam no pice da clula, so chamados de grnulos de zimognio. Clulas epiteliais com funo endcrina e parcrina, de localizao difusa: muitas clulas do sistema secretor difuso, encontrado no revestimento epitelial do estmago e dos intestinos, so capazes de captar precursores das aminas e de promover a descarboxilao destes precursores. Por estas razes, estas clulas secretoras foram denominadas clulas APUD (Amine Precursors Uptake and Decarboxylation). A secreo mucosa contm glicoprotenas complexas, hidroflicas, viscosas e de funo lubrificante e protetora: a clula caliciforme um exemplo desse tipo de clula. Apresentam muitos grnulos de secreo glicoprotica, grandes e pouco eltrondensos no seu plo apical. O ncleo geralmente achatado e deslocado para a base da clula. Esta regio rica em REG, o aparelho de Golgi bem desenvolvido e localizado logo acima do ncleo. Quando as glicoprotenas so liberadas da clula, tornam-se muito hidratadas e formam um gel viscoso e elstico chamado muco, que protege e lubrifica a superfcie do epitlio. Clulas serosas e mucosas: o termo seroso provm do fato do produto de secreo dessas clulas ser um fluido claro, pouco viscoso, rico em protenas, parecidas como soro sanguneo. As clulas mucosas caracterizam-se pela presena de grnulos de secreo grandes e pouco corados, que ocupam a maior parte do citoplasma, deslocando o ncleo, eu achatado, para a base da clula. As clulas serosas apresentam ncleo

arredondado e claro, basofilia citoplasmtica (REG) localizada principalmente no tero basal da clula e numerosos grnulos de secreo acidfilos, facilmente visveis na parte apical da clula. As clulas que secretam hormnios esterides so ricas em REL e em mitocndrias contendo cristas tubulares: essas clulas so encontradas nos testculos, nos ovrios, e nas glndulas adrenais. Elas distinguem-se pelas seguintes caractersticas: so clulas polidricas ou arredondadas, com ncleo central e citoplasma geralmente com numerosas gotculas de lipdios; o REL muito desenvolvido; apresentam mitocndrias grandes, geralmente esfricas ou ligeiramente alongadas, que contm parte das enzimas necessrias para a sntese dos hormnios esterides. Esta sntese resulta da colaborao entre o REL e as mitocndrias. As clulas mioepiteliais, contrteis, envolvem cinos e participam da expulso da secreo: em vrias glndulas (sudorparas, mamarias, salivares e lacrimais), encontram-se clulas contrateis denominadas mioepiteliais, que se localizam entre a lmina basal e as clulas secretoras. Aumentam o fluxo do produto de secreo das glndulas atravs da compresso das unidades secretoras. O citoplasma apresenta numerosos filamentos de actina e contm tambm miosina. Apresentam ainda filamentos intermedirios de queratina, o que confirma sua origem epitelial. Tumores derivados do tecido epitelial: os tumores malignos so os carcinomas, quando derivados de um epitlio glandular, devem ser denominados adenocarcinomas. Os tumores malignos so constitudos por clulas que se proliferam de modo descontrolado e so capazes de atacar e perfurar a lmina basal, para se espalharem pelo organismo, formando as metstases. Como nos tumores dos outros tecidos, tambm nos tumores de origem epitelial o grau de diferenciao das clulas tumorais varivel. Quanto mais indiferenciado o tumor, maior sua malignidade. Muitas vezes difcil identificar a origem dos tumores muito indiferenciados. Como geralmente as clulas dos tumores do tecido epitelial contm protenas da famlia das queratinas, a identificao dessas protenas, por meio de tcnicas imunocitoqumicas, auxilia no diagnostico e no planejamento do tratamento.

Histologia bsica 3 Tecido conjuntivo Apresenta diversos tipos de clulas separadas por abundante material extracelular, sintetizado por elas. Esse material representado por uma parte com estrutura microscpica bem definida, as fibras do conjuntivo, e pela matriz extracelular ou substncia fundamental, um gel viscoso de macromolculas alongadas (glicosaminoglicanas, proteoglicanas e glicoprotenas adesivas) muito hidratadas, que formam um arcabouo entrelaado e ligado s fibras e a receptores celulares denominados integrinas. As fibras do conjuntivo so de trs tipos principais: colgenas, reticulares e elsticas. Os tecidos conjuntivos originam-se do mesnquima. As clulas mesenquimais possuem ncleos ovides, com a cromatina fina. O mesnquima deriva, principalmente, do mesoderma e suas clulas migram no embrio, envolvendo os rgos em formao e neles penetrando. As fibras do conjuntivo so constitudas por protenas que se polimerizam formando estruturas alongadas: os trs tipos de fibra se distribuem desigualmente entre as variedades de tecido conjuntivo. Muitas vezes as fibras predominantes so responsveis por certas propriedades do tecido. Como as fibras colgenas e as reticulares so constitudas por protenas da famlia dos colgenos, existem na realidade dois sistemas de fibras: o sistema colgeno e o sistema elstico. O colgeno constitui uma famlia de protenas que se diferenciaram durante a evoluo, para exercer funes diversificadas: o colgeno a protena mais abundante do corpo humano. Essa famlia de protenas produzida por diversos tipos celulares e se distingue pela composio bioqumica, caractersticas morfolgicas, distribuio, funes e patologia. De acordo com sua estrutura e funes, o colgeno pode ser classificado em grupos, como descrito a seguir: Colgenos que formam fibrilas: as molculas desse colgeno se agregam sem gasto de energia, para formar fibrilas bem visveis no ME. Pertencem a esse grupo os colgenos I, II, III, V e XI. O tipo I o mais abundante no corpo humano, fazendo parte de muitos tecidos, onde ocorre como estruturas que correspondem ao que classicamente se denomina fibras colgenas. Colgenos associados a fibrilas: suas molculas constituem estruturas pequenas que ligam as fibrilas colgenas umas s outras e tambm a outros componentes da matriz extracelular. Compem este grupo os colgenos tipos IX e XII. Colgenos que forma rede: suas molculas se associam para formar um feltro ou rede tridimensional o tipo IV. Colgeno de ancoragem: o tipo VII, que est presente nas fibrilas de ancoragem que prendem as fibras colgenas s lminas basais.
Tipos de colgenos I Distribuio Derme, tendo, osso, fibrocartilagem Cartilagem hialina, disco intervertebral Msculo liso, tecido conjuntivo reticular Clula produtora Fibroblastos, odontoblastos, osteoblastos, condroblastos Condroblastos Clulas musculares, clulas reticulares, Interaes com glicosaminoglicanas Fraca, com sulfato de dermatana Forte, com sulfato de condroitina Mdia, com sulfato de heparana Principal funo Resistncia a traes Resistncia presso Manuteno da estrutura de tecidos delicados e Organizao molecular Forma fibrilas

II III

Forma fibrilas Forma fibrilas

IV

Lminas basais

Derme, tendo, osso, fibrocartilagem Derme Cartilagem hialina Cartilagem hialina, disco intervertebral Tendo, ligamentos

clulas de Schwann Clulas endoteliais, epiteliais, e de Schwann Fibroblastos

expansveis Mdio, com sulfato de heparana Suporte de estruturas delicadas, filtrao Participa das funes do colgeno tipo I Une clulas ao tecido conjuntivo Associao lateral das fibrilas Participa das funes do colgeno tipo II Associao lateral de fibrilas Forma rede tridimensional (feltro) Forma fibrilas

VII IX XI

Colgeno de ancoragem Colgeno associado a fibrilas Forma fibrilas

Condroblastos Condroblastos

XII

Fibroblastos

Colgeno associado fibrilas

Os principais aminocidos encontrados no colgeno so glicina (33,5%), prolina (12%) e hidroxiprolina (10%). Os AA caractersticos desta protena so hidroxiprolina e hidroxilisina. A unidade protica que se polimeriza para formar fibrilas colgenas uma molcula alongada denominada tropocolgeno, que consiste em trs cadeias polipeptdicas dispostas em hlice. As diferenas nas estruturas qumicas dessas cadeias so responsveis pelos vrios tipos de colgeno. Nos colgenos dos tipos I, II e III, as molculas de tropocolgeno se agregam em unidade microfibrilares que se juntam para formar fibrilas. Pontes de hidrognio e interaes hidrofbicas so importantes para a unio dessas unidades que, posteriormente, so reforadas por ligaes covalentes, catalisadas pela atividade da enzima extracelular lisil-oxidase, que oxida molculas do aminocido lisina, estabelecendo pontes entre elas. Nos colgenos tipos I e III as fibrilas formam fibras e no tipo I as fibras podem formar feixes. O colgenos tipo II, presente nas cartilagens forma fibrilas mas no forma fibras. O colgeno tipo IV, caracterstico das lminas basais, no forma fibrilas nem fibras e, provavelmente, ocorre sob a forma de molculas de tropocolgeno no polimerizadas ou muito fracamente polimerizadas. Fibras colgenas tipo I: as fibra colgenas clssicas so as mais freqentes. No estado fresco so brancas. Essas fibras so birrefringentes, pois so constitudas por molculas alongadas e paralelas. Desse modo, quando examinadas ao microscpio de polarizao, entre os filtros polarides cruzados, as fibras colgenas aparecem brilhantes, contra um fundo escuro. Em muitos tecidos essas fibras aparecem formando feixes. Fibras colgenas so acidfilas e mostram estriao lateral. Biossntese do colgeno tipo I: ocorre de acordo com as seguintes etapas: De acordo com a codificao do mRNA, polirribossomos ligados ao REG sintetizam cadeias polipeptdicas, que crescem para o interior das cisternas. medida que essas cadeias (alfa) se formam, ocorre a hidroxilao da prolina e da lisina. Hidroxiprolina e hidroxilisina livres no so incorporadas s cadeias proticas. A hidroxilao comea com a cadeia ainda presa aos polirribossomos,

mas continua aps sua liberao nas cisternas. No processo tomam parte duas enzimas, a prolina hidroxilase e a lisina hidroxilase. Quando a hidroxilisina se forma comea sua glicosilao. Todas as cadeias colgenas tm galactose ou glicosilgalactose ligadas hidroxilisina. Cada cadeia alfa sintetizada com dois peptdeos de registro, um em cada extremidade. Esses peptdeos determinam o alinhamento das cadeias proticas em grupos de trs, facilitando a combinao dessas cadeias pra formar a molcula de procolgeno, que precursora, porm maior que o tropocolgeno. Outra funo dos peptdeos de registro impedir a formao de fibrilas colgenas no interior das clulas, pois as molculas de procolgeno so solveis e no se agregam, como acontece como tropocolgeno. No meio extracelular, os peptdeos de registro so separados das cadeias alfa pela ao das enzimas procolgeno peptidases, que aparentemente so produzidas pelas mesmas clulas que sintetizam colgeno. Originam-se, ento, as molculas de tropocolgeno, que se polimerizam para formar as fibrilas colgenas. Os resduos de hidroxiprolina formam pontes de hidrognio entre as trs cadeias alfa, contribuindo para a estabilidade da hlice tripla do tropocolgeno. Nos colgenos tipos I e III, as fibrilas se agregam espontaneamente, para formar fibras. Certas proteoglicanas e glicoprotenas estruturais desempenham papel importante na agregao do tropocolgeno para formar fibrilas e na agregao da fibrilas para formar fibras. A estrutura fibrilar reforada para a formao de ligaes covalentes entre as molculas de tropocolgeno. Este processo catalisado pela enzima extracelular lisil-oxidase (enzima que oxida a lisina). OBS.: a renovao do colgeno ,em geral, muito lenta, e em muitos rgos, como os tendes e ligamentos, ele praticamente estvel. A degradao, para renovao, iniciada por enzimas especficas, as colagenases. Essas enzimas quebram a molcula em dois pedaos que so suscetveis ao ataque das proteases (enzimas que digerem protenas) no especficas. As fibras reticulares so constitudas principalmente de colgeno do tipo II: formam uma rede extensa em certos rgos, geralmente apoiando as clulas. Em virtude de sua afinidade pelos sais de prata, so chamadas tambm de fibras argirfilas. So formadas pelo colgeno tipo III associado a elevado teor de glicoprotenas e proteoglicanas. As ME exibem estriao transversal tpica das fibrilas colgenas. Constituem o arcabouo de sustentao das clulas dos rgos hemocitopoticos (bao, linfonodos, medula ssea) das clulas musculares e das clulas de muitos rgos epiteliais, como o fgado, os rins e as glndulas endcrinas. O pequeno dimetro dessas fibras e sua disposio em rede criam um suporte adaptado s necessidades dos rgos que sofrem modificaes fisiolgicas de forma e de volume. O sistema elstico: fibras elsticas, elaunnicas e oxitalnicas: as fibras elsticas so facilmente distinguidas por serem mais delgadas que a fibras colgenas e no apresentarem estriao longitudinal. Ramificam-se e ligam-se umas s outras, formando uma trama de malhas muito irregulares. Tm colorao amarelada. Cedem facilmente, mesmo a traes mnimas, porem retornam a sua forma inicial to logo cessem as foras deformantes. Pela tcnica HE, as fibras elsticas coram-se mal e irregularmente. O principal componente das fibras elsticas a glicoprotena estrutural elastina, que resistente a diversas enzimas, mas pode ser digerida pela elastase secretada pelo pncreas.

As fibras elsticas so formadas por microfibrilas (aparecem primeiro) com 10 nm de espessura, envolvendo uma parte central, amorfa. A elastina constitui o material amorfo dessas fibras, sendo as microfibrilas formadas por vrias glicoprotenas, incluindo uma cuja molcula muito grane denominada fibrilina. OBS.: defeito no gene responsvel pela codificao da fibrilina, localizado no cromossomo 15, resulta na sndrome de Marfan na qual ocorre hiperextensibilidade das articulaes, deslocamento do cristalino e dilatao da aorta. Alem das fibras elsticas tpicas, nas quais existe grande abundancia de elastina e uma quantidade muito menor de microfibrilas, descreve-se ainda no sistema elstico as fibras elaunnicas e as oxitalnicas (s possuem microfibrilas, no tm elastina), encontradas com menor freqncia. As primeiras foram observadas na pele e as segundas no ligamento periodontal e nos tendes. As principais clulas produtoras de elastina so os fibroblastos e as clulas musculares lisas dos vasos sanguneos. Inicialmente, sintetizada uma molcula de proelastina que, no espao extracelular, polimeriza-se para formar elastina. A elastina contm dois aminocidos tpicos, desmosina e isodesmosina, formados por ligaes covalentes entre resduos de lisina. Clulas do tecido conjuntivo: algumas se originam localmente, enquanto outras, como os leuccitos, vm de outros locais e so habitantes temporrios desse tecido. As clulas do tecido conjuntivo so: fibroblastos, macrfagos, mastcitos, plasmcitos, clulas adiposas e leuccitos. Tipo celular Localizao Funes principais Moncito Sangue Precursor dos macrfagos Macrfago Tecido conjuntivo, rgos Secreo de citocinas, linfticos, pulmo fatores quimiotticos e diversas outras molculas que participam do processo defensivo da inflamao Clula de Kupffer Fgado A mesma dos macrfagos Clula da micrglia Tecido nervoso do SNC A mesma dos macrfagos Clula de Langerhans Pele Apresentao de antgenos Osteoclasto Tecido sseo Digesto da matriz ssea Clula gigante Tecido conjuntivo (fuso Digesto ou segregao de multinucleada de diversos macrfagos) corpos estranhos O fibroblasto sintetiza colgeno, elastina, proteoglicanas e glicoprotenas estruturais: a clula em intensa atividade sinttica, tem morfologia diferente do fibroblasto que j sintetizou muito e que se situa entre as fibras por ele fabricadas. O fibroblasto tem prolongamentos citoplasmticos irregulares, seu ncleo claro, com cromatina fina e nuclolo evidente. O citoplasma rico em REG e o aparelho de Golgi bem desenvolvido. O fibrcito uma clula menor, fusiforme, e com menor numero de prolongamentos. Tem ncleo menor, alongado, e mais escuro, apresentando o citoplasma acidfilo. Ao ME chama a ateno a deficincia em REG e aparelho de Golgi. OBS.: havendo um estmulo adequado, como na cicatrizao, o fibrcito pode voltar a sintetizar fibras, reassumindo a estrutura de fibroblasto. Os fibroblastos sintetizam as fibras colgenas, reticulares e elsticas, e as glicoprotenas e proteoglicanas da matriz extracelular. No tecido conjuntivo do adulto os fibroblastos no se dividem com freqncia, entrando em mitose apenas quando ocorre uma solicitao.

Macrfago e sistema mononuclear fagocitrio: o macrfago uma clula muito ativa na movimentao amebide, com grande capacidade de fagocitose, morfologia varivel conforme seu estado funcional e sua localizao, ncleo ovide ou em forma de rim, com cromatina condensada, seu citoplasma contm muitos lisossomos que derramam suas enzimas nos vacolos que contm material englobado, formando-se, assim, os fagossomos, onde se processa a digesto do material fagocitado. Os macrfagos atuam como elementos de defesa. Fagocitam restos de clulas, material extracelular alterado, clulas cancerosas, bactrias e partculas inertes que penetram no organismo, e secretam diversas substancias que tm papel importante nos processos imunitrios de defesa. Alem disso, atuam como clulas apresentadoras de antgenos. Quando encontram corpos estranhos de grandes dimenses, os macrfagos fundem-se uns com os outros, constituindo clulas muito grandes, com 100 ou mais ncleos: as clulas gigantes multinucleadas. Os macrfagos so originrios dos moncitos, que so produzidos na medula ssea. Os moncitos atravessam a parede das vnulas e capilares, penetrando no tecido conjuntivo, onde adquirem o aspecto morfolgico do macrfago. Durante esse processo de transformao h um aumento da sntese protica, do tamanho da clula, do tamanho do aparelho de Golgi e do numero de lisossomos, microtbulos e microfilamentos. O conjunto das clulas da medula ssea que so precursoras dos moncitos, mais os prprios moncitos e os macrfagos, denomina-se sistema fagocitrio mononuclear. Mastcito participa da inflamao e tem um papel central na alergia: uma clula globosa, grande e com o citoplasma carregado de grnulos basfilos que se coram intensamente, seu ncleo esfrico e central, mas frequentemente no pode ser visto por estar coberto pelos grnulos citoplasmticos. So difceis de serem observados nas lminas coradas com HE, porm com azul-de-toluidina os grnulos so corados de vermelho. A capacidade de modificar a colorao do corante chama-se metacromasia e devida presena de numerosos radicais cidos nas estruturas. Os grnulos dos mastcitos so metacromticos por conterem heparina ou ento sulfato de condroitina, glicosaminoglicanas sulfatadas, eles contm ainda histamina e o fator quimiottico dos eosinfilos na anafilaxia, mais conhecido pela sigla ECF-A (Eosinophil Chemotactic Factor of Anaphylaxis), que atrai eosinfilos. Mastcitos secretam tambm alguns leucotrienos (C4, D4 e E4) ou SRS-A (Slow Reacting Substance of Anaphylasis), porm esses compostos no existem pr-formados na clula. Produzem lentas contraes no msculo liso. As molculas produzidas pelo mastcito atuam localmente, caracterizando uma secreo parcrina. Embora com a mesma morfologia, h ao menos duas populaes diferentes de mastcitos. Numa delas, encontrada no tecido conjuntivo em geral, os grnulos contm heparina, uma substncia anticoagulante. Na outra populao, presente nas mucosas, os grnulos contm sulfato de condroitina. A superfcie do mastcito contm receptores especficos para a imunoglobulina E (IgE), produzida pelos plasmcitos. OBS.: a liberao dos mediadores qumicos armazenados nos mastcitos promove as reaes alrgicas denominadas reaes de sensibilidade imediata. Admite-se que na anafilaxia ocorra o seguinte: na primeira injeo forma-se IgE que se prende membrana dos mastcitos. Numa injeo subseqente, isto , na que provoca o choque, o medicamento reage com as molculas de IgE presas aos mastcitos, provocando a extruso macia dos grnulos e a liberao de histamina, leucotrienos e ECF-A. O plasmcito se origina do linfcito B ativado e produz anticorpos: so pouco numerosos no conjuntivo normal, exceto nos locais sujeitos penetrao de bactrias e protenas estranhas, mas aparecem em grande quantidade nas inflamaes crnicas. Os

plasmcitos so clulas ovides, com citoplasma muito basfilo, graas a sua riqueza em REG. A rea onde est o aparelho de Golgi aparece clara. O ncleo do plasmcito esfrico com a cromatina em grumos compactos e grosseiros, que se alternam com reas claras, o que lhe confere o aspecto de uma roda de carroa. Eles sintetizam e secretam anticorpos, protenas especficas tambm denominadas imunoglobulinas, fabricadas em resposta ao antgeno. Os efeitos da reao antgeno-anticorpo so variados, podendo neutralizar as aes prejudiciais que o antgeno teria sobre o organismo. Clulas adiposas: especializada no armazenamento de energia, sob a forma de triglicerdeos. O conjuntivo normal contm leuccitos vindos do sangue por diapedese: a diapedese aumenta muito nas invases locais de microorganismos, pois os leuccitos so clulas cuja funo defesa. Os leuccitos mais freqentes no tecido conjuntivo so: neutrfilos, eosinfilos e os linfcitos. Exceto os linfcitos, que circulam essas clulas no retornam ao sangue depois que penetram no tecido conjuntivo, onde permanecem por um perodo varivel e morrem pelo processo de apoptose. A matriz extracelular muito hidratada e constituda principalmente de proteoglicanas e glicoprotenas adesivas: a matriz formada por proteoglicanas e glicoprotenas adesivas assim chamadas porque participam da aderncia entre as clulas, fibras e macromolculas de matriz extracelular. As proteoglicanas so compostos macromoleculares, constitudos por glicosaminoglicanas sulfatadas ligadas por covalncia a protenas. Uma molcula de proteoglicana parece uma escova de limpar frascos, com uma parte central protica (cerne protico) e as glicosaminoglicanas como os plos da escova. Glicosaminoglicanas (GAGs) so polmeros lineares (no ramificados) de peso molecular elevado, formados por unidades dissacardicas constitudas por um cido urnico e uma hexosamina. As GAGs eram chamadas mucopolissacardeos, hoje no so mais, porm as doenas resultantes de defeitos no metabolismo da GAGs ainda so chamadas mucopolissacaridoses. O cido urnico das GAGs quase sempre o cido glicurnico e as hexosaminas so a glicosamina ou a galactosamina. As principais GAGs so o cido hialurnico e o dermatansulfato (tambm chamados sulfato de dermatana, sulfato de queratana, sulfato de condroitina e sulfato de heparana). A nica GAG no sulfatada o cido hialurnico, que apresenta a peculiaridade de no se ligar por covalncia a protenas, embora possa participar de agregados dos quais participam molculas proticas. Possuindo numerosos grupos carboxila e sulfato em suas molculas, as GAGs so polinions, ligando-se por eletro valncia a elevado numero de ctions, que atraem grande quantidade de molculas de gua. Por sua hidratao, as molculas de proteoglicanas ocupam enorme espao, tornando-se muito eficientes para resistir a foras de compresso, enquanto as fibras colgenas so muito resistentes a foras de distenso. Algumas proteoglicanas servem como locais de ancoragem para o fator do crescimento fibroblstico e para outras protenas que estimulam a proliferao celular. As molculas das glicoprotenas adesivas contm uma parte protica que se associa a glicdios. Porm, ao contrrio das proteoglicanas, h uma predominncia da parte protica, e as glicoprotenas no apresentam os polissacardeos lineares. Nas glicoprotenas a parte glicdica uma estrutura ramificada. As molculas dessas glicoprotenas possuem regies que aderem a receptores celulares e fibras do conjuntivo, promovendo a ligao entre esses elementos. A fibronectina e a laminina so glicoprotenas adesivas. A primeira representa uma famlia de glicoprotenas, com stios de aderncia para clulas, colgeno e glicosaminoglicanas, essa aderncia torna possvel a migrao das clulas, que s pode ser feita sobre um substrato, e a fixao

das clulas em locais determinados. A glicoprotena laminina encontrada nas lminas basais, onde participa da aderncia dessas estruturas s clulas e influencia a filtrao de molculas atravs das lminas basais. O edema causado pelo acumulo de gua no meio extracelular (excesso de entrada ou dificuldade de drenagem): h duas foras que atuam sobre a gua contida nos capilares: presso hidrosttica do sangue (presso arterial conseqncia da contrao cardaca) e presso osmtica do plasma sanguneo (que atrai gua para dentro dos capilares deve-se s protenas do plasma). Em condies normais, ocorre uma passagem de gua para fora dos capilares na poro arterial deles, pelo fato de que a a presso hidrosttica vence a presso osmtica. Mas a presso hidrosttica decresce ao longo do capilar, sendo mnima na sua extremidade venosa. Enquanto a hidrosttica cai, a osmtica aumenta, em conseqncia da sada de gua. O aumento da concentrao de protenas e a queda da presso hidrosttica fazem com que, na parte venosa do capilar, a presso osmtica prevalea, atraindo gua para o interior do capilar. A quantidade de gua que volta aos capilares menor do que a que saiu deles. A gua que resta na matriz extracelular do conjuntivo retorna ao sangue por meio dos vasos linfticos. A linfa movimenta-se em direo ao sangue, pois os vasos linfticos desembocam em veias onde toda a linfa lanada. Os capilares linfticos so estruturas em fundo de saco, que drenam o excesso de gua existente no conjuntivo. Variedades de tecido conjuntivo: os nomes dados aos diferentes tipos refletem o componente predominante ou a organizao estrutural do tecido. So comuns os tecidos cuja estrutura intermediaria entre duas variedades tpicas da classificao adiante mencionada.
Tecido conjuntivo

Tecido conjuntivo propriamente dito

Tecido conjuntivo de propriedades especiais

Tecido cartilaginoso

Tecido sseo

Frouxo

Denso

Tecido adiposo

Tecido elstico

Tecido reticular

Tecido mucoso

Modelado

Nomodelado

O tecido conjuntivo frouxo sustenta estruturas normalmente sujeitas a presso e atrito pequenos: preenche espaos entre as fibras e feixes musculares, serve de apoio para os epitlios e forma uma camada em torno dos vasos sangneos e linfticos. Aqui no h predomnio acentuado de qualquer um dos componentes. As clulas mais comuns so os fibroblastos e os macrfagos, mas todos os outros tipos descritos esto presentes. Esse tecido de consistncia delicada, flexvel e pouco resistente s traes.

O tecido conjuntivo denso adaptado para oferecer resistncia e proteo: formado pelos mesmos elementos encontrados no tecido frouxo, havendo predominncia acentuada das fibras colgenas. Menos flexvel que o frouxo e muito mais resistente s traes. Quando as fibras colgenas se dispem em feixes arranjados sem orientao fixa, o tecido chama-se denso no-modelado, aqui os feixes colgenos formam uma trama tridimensional, que confere ao tecido resistncia trao exercida em qualquer direo. O denso modelado apresenta feixes colgenos paralelos uns aos outros. Trata-se de um conjuntivo que formou suas fibras colgenas em resposta a traes exercidas num determinado sentido. Entre os feixes paralelos de fibras colgenas existe pequena quantidade de substancia fundamental. Seus fibroblastos tm ncleo alongados, paralelos s fibras, e citoplasma delgado com prolongamentos que tendem a envolver os feixes colgenos. os feixes colgenos do tendo (feixes primrios) formam conjuntos (feixes secundrios) envolvidos por tecido conjuntivo frouxo que contm vasos sangneos e nervos. Finalmente, o tendo envolvido externamente por uma bainha de conjuntivo denso. Em alguns tendes essa bainha dividida em duas camadas: uma presa ao tendo e a outra ligada s estruturas vizinhas. Forma-se, assim, uma cavidade revestida por clulas achatadas e de origem mesenquimatosa, que encera um liquido viscoso semelhante ao liquido sinovial das articulaes, o qual contm gua, protenas, GAGs, glicoprotenas e ons. Este lquido lubrificante e facilita o deslocamento do tendo dentro da sua bainha. Tecido elstico: formado por feixes paralelos de fibras elsticas grossas. O espao entre estas fibras ocupado por fibras colgenas e fibroblastos achatados. Um tecido rico nessas fibras tem cor amarela e grande elasticidade, porm ele pouco freqente, sendo encontrado nos ligamentos amarelos da coluna vertebral e no ligamento suspensor do pnis. O tecido reticular, muito delicado, forma uma rede tridimensional para sustentao celular: constitudo por fibras reticulares em intima associao com fibroblastos especializados chamados clulas reticulares. Encontra-se nos rgos formadores de clulas do sangue (medula ssea hematgena e rgos linfticos). O tecido mucoso encontrado principalmente no cordo umbilical: tem consistncia gelatinosa e apresenta predomnio da matriz extracelular, constituda principalmente por cido hialurnico. Contm poucas fibras colgenas e raras fibras elsticas e reticulares. As clulas so principalmente fibroblastos. O tecido mucoso o principal componente do cordo umbilical, onde chamado de gelatina de Wharton, sendo encontrado tambm na polpa dental jovem. HISTOFISIOLOGIA: o tecido conjuntivo desempenha as funes de: sustentao, preenchimento, armazenamento, transporte, defesa e reparao. O conjuntivo integra o sistema imunitrio de defesa contra protenas estranhas presentes nas bactrias, vrus, clulas tumorais etc.: esse tecido contm clulas fagocitrias e clulas produtoras de anticorpos. O material extracelular, sendo um gel viscoso, representa uma barreira penetrao da bactrias e partculas inertes. Por isso, as bactrias que produzem hialuronidase tm acentuado poder invasivo. Na inflamao, os leuccitos passam em grande quantidade do sangue para conjuntivo atravessando, por movimento amebide, a parede das vnulas e capilares, atrados por diversas substncias que se formam na inflamao. As clulas que se acumulam na rea inflamada fagocitam microorganismos, restos de clulas e fibras alteradas pela inflamao e produzem anticorpos contra os invasores. Clulas do conjuntivo tm a capacidade de se multiplicar para regenerar o tecido destrudo: esse tipo de tecido dotado de grande capacidade de regenerao, o que

muito importante, tambm, quando ocorre destruio de outros tecidos, pois o espao preenchido pelo conjuntivo, formando as cicatrizes. O conjuntivo muito sensvel hidrocortisona e aos hormnios da tireide: diversos hormnios influem sobre o metabolismo do tecido conjuntivo. Um exemplo o cortisol ou hidrocortisona (crtex da adrenal) que impede a sntese das fibras do conjuntivo. O hormnio adrenocorticotrfico (ACTH), produzido pela adenoipfise, tem o mesmo efeito porque estimula a produo de cortisol. Injees desses hormnios dificultam a cicatrizao e atenuam a resposta inflamatria. A deficincia em hormnio da tireide causa um acmulo excessivo de proteoglicanas no tecido conjuntivo. Por isso, o hipotireoidismo do adulto chamado de mixedema, o que significa edema de muco. A renovao normal do colgeno varia conforme o tecido, mas em geral lenta: o colgeno uma protena estvel, sendo sua renovao, portanto, um tanto lenta. A deficincia de vitamina C impede a sntese de colgeno pelos fibroblastos, de modo que as fibras removidas no podem ser substitudas. A conseqncia uma degenerao generalizada do tecido conjuntivo (escoburto), mais acentuada onde a renovao do colgeno , mas acelerada. A destruio fisiolgica do colgeno para sua renovao iniciada pela ao da enzima especfica colagenase, produzida por clulas do tecido conjuntivo.

Histologia bsica 4 Tecido adiposo um tipo especial de conjuntivo onde se observa predominncia de clulas adiposas (adipcitos), que podem ser encontradas isoladas ou em pequenos grupos no tecido conjuntivo comum, porm a maioria delas se agrupa no tecido adiposo espalhado pelo corpo. O tecido adiposo o maior depsito de energia (sob forma de triglicerdeos) do corpo. As clulas hepticas e o msculo esqueltico tambm acumulam energia, mas sob forma de glicognio. Os triglicerdeos so mais eficientes como reserva de energia porque fornecem 9,3 kcal/ g contra apenas 4,1 kcal/ g do glicognio. Outra funo do tecido adiposo que ele forma coxins absorventes de choques, principalmente na planta dos ps e na palma das mos. Como as gorduras so, mas condutoras de calor, o tecido adiposo contribui para o isolamento trmico do organismo. Alem disso preenche espaos entre outros tecidos e auxilia a manter certos rgos em suas posies normais. H duas variaes de tecido adiposo que apresentam distribuies no corpo, estrutura, fisiologia e patologia diferentes. Existe o tecido adiposo comum, amarelo ou unilocular (clulas com apenas uma gota de gordura) e o tecido adiposo pardo ou multilocular (clulas com numerosas gotculas lipdicas e muitas mitocndrias). O tecido adiposo unilocular apresenta-se distribudo no corpo humano de acordo como bitipo, sexo, idade, e constitui reserva de energia contra o frio: a colorao do tecido adiposo deve-se principalmente, ao acmulo de carotenides dissolvidos nas gorduras. Praticamente todo o tecido adiposo presente no homem adulto unilocular, que se distribui por todo o corpo e seu acmulo em certos locais depende do sexo e da idade. Esse tecido forma o panculo adiposo, camada disposta sob a pele e que de espessura uniforme por todo o corpo do recm-nascido. Com a idade, o panculo adiposo tende a desaparecer de certas reas e desenvolver em outras. Essa deposio seletiva de gordura regulada pelos hormnios sexuais e os adrenocorticais. Todas as gotculas das clulas, independente do tamanho so desprovidas de membranas envolventes, mas so envoltas por uma rede de filamentos intermedirios. Cada clula adiposa envolvida por uma lmina basal. O tecido unilocular apresenta septos de conjuntivo, que contm vasos e nervos. Desses septos partem fibras reticulares que vo sustentar as clulas adiposas. A vascularizao do tecido adiposo muito abundante, quando se considera a pequena quantidade de citoplasma funcionante. Histofisiologia do tecido unilocular: os triglicerdeos existentes originam-se da seguinte maneira: absorvidos da alimentao e trazidos at as clulas adiposas como triglicerdeos dos quilomcrons; oriundos do fgado e transportados at o tecido adiposo, sob a forma de triglicerdeos constituintes das lipoprotenas de pequeno peso molecular ou VLDL (Very Low Density Lipoproteins); da sntese nas prprias clulas adiposas, a partir da glicose. Quando necessria a hidrolise dos triglicerdeos desencadeada por estmulos neurognicos e humorais que promovem a liberao de cidos graxos e glicerol, os quais passam para o sangue. A enzima lpase sensvel a hormnio ativada pela adenilciclase, quando o tecido adiposo estimulado pela noradrenalina. A membrana dos adipcitos possui receptores para diversos hormnios, e o metabolismo do tecido adiposo complexo, nele intervindo o hormnio do crescimento, os glicocorticides, a insulina, o hormnio da tireide e a prolactina. O tecido adiposo unilocular e o multilocular so inervados por fibras simpticas do SN Autnomo. No tecido unilocular as terminaes so encontradas somente nas

paredes dos vasos sanguneos, j no multilocular as terminaes nervosas simpticas atingem diretamente as clulas adiposas. As clulas adiposas se originam no embrio, a partir de clulas derivadas do mesnquima, os lipoblastos. So parecidas com os fibroblastos, porm logo acumulam gordura no seu citoplasma. Em humanos o tecido multilocular est presente no recm-nascido, localizado na poro dorsal do tronco: a cor parda desse tecido devida vascularizao abundante e s numerosas mitocndrias presentes em suas clulas. O tecido adiposo pardo apresenta-se abundante nos animais que hibernam e, devido a isso, recebeu o nome pouco prprio de glndula hibernante. Esse tecido no cresce, por isso no adulto extremamente reduzido. No tecido adiposo multilocular as clulas tomam um arranjo epiteliide, formando massas compactes em associao com capilares sanguneos, lembrando as glndulas endcrinas. A principal funo do tecido adiposo multilocular produzir calor: esse tecido especializado na produo de calor, tendo papel importante nos mamferos que hibernam. Na espcie humana, a quantidade deste tecido s significativa no recmnascido, com funo auxiliar na termorregulao. Ao ser estimulado pela liberao de noradrenalina nas terminaes nervosas abundantes em torno das suas clulas, o tecido adiposo multilocular acelera sua liplise e oxidao dos cidos graxos. A oxidao dos AG produz calor e no ATP, porque as mitocndrias do tecido multilocular apresentam, nas suas membranas internas, uma protena transmembrana chamada termogenina. Esta protena permite a volta para a matriz mitocondrial dos prtons transportados para o espao intermembranoso, sem que eles passem pelo sistema de ATP sintetase existente nos corpsculos elementares das mitocndrias. Em conseqncia, a energia gerada pelo fluxo de prtons no usada para sintetizar ATP, sendo dissipada como calor. O calor aquece o sangue contido na extensa rede capilar presente no tecido multilocular e distribudo para todo o corpo, aquecendo os diversos rgos. Nas espcies que hibernam o despertar da hibernao devido ao dos estmulos nervosos sobre o tecido multilocular, que funciona como um acendedor dos outros tecidos, por distribuir para esses sangue aquecido. A histognese do tecido multilocular: sua formao diferente da do tecido unilocular. As clulas mesenquimatosa que vo formar o tecido multilocular tornam-se epiteliides, adquirindo um aspecto de glndula endcrina cordonal antes de acumularem gordura. No h neoformao de tecido adiposo multilocular aps o nascimento nem ocorre transformao de um tipo de tecido adiposo no outro.

Histologia bsica 5 Tecido cartilaginoso uma forma especializada de tecido conjuntivo de consistncia rgida. Desempenha funo de suporte de tecidos moles, reveste superfcies articulares onde absorve choques e facilita o deslocamento, e essencial para a formao e o crescimento dos ossos longos. Como os demais tecidos do conjuntivo, o tecido cartilaginoso contm clulas, os condrcitos, e abundante material extracelular, que constitui a matriz. As cavidades da matriz ocupadas pelos condrcitos so chamadas lacunas. As funes do tecido cartilaginoso dependem principalmente da estrutura da matriz, que constituda por colgeno ou colgeno mais elastina em associao com macromolculas de proteoglicanas e glicoprotenas adesivas. Como colgeno e a elastina so flexveis, a consistncia firme das cartilagens, se deve, principalmente, s ligaes eletrostticas entre as GAGs sulfatadas e o colgeno, e grande quantidade de molculas de gua presa a essas GAGs (gua de solvatao), o que confere turgidez matriz. O tecido cartilaginoso no possui vasos sanguneos, sendo nutrido pelos capilares do conjuntivo envolvente (pericndrio) ou atravs do lquido sinovial das cavidades articulares. O tecido cartilaginoso desprovido de vasos linfticos e nervos. Existem trs tipos de cartilagem: (1) cartilagem hialina, que a mais comum e cuja matriz possui delicadas fibrilas constitudas principalmente de colgeno tipo II; (2) cartilagem elstica, que possui poucas fibrilas de colgeno tipo II e abundantes fibras elsticas; (3) cartilagem fibrosa), que apresenta matriz constituda por fibras de colgeno tipo I. As cartilagens (exceto as articulares e a fibrosa) so envolvidas por uma bainha conjuntiva que recebe o nome de pericndrio. Cartilagem hialina: o tipo mais frequentemente encontrado no corpo humano, tem cor branco-azulada e translcida. Forma o primeiro esqueleto do embrio, que posteriormente, substitudo por esqueleto sseo. Entre a difise e a epfise dos ossos longos em crescimento observa-se o disco epifisrio, de cartilagem hialina, que responsvel pelo crescimento do osso em extenso. encontrada: na parede das fossas nasais, traquia, brnquios, extremidade ventrais das costelas e recobrindo as superfcies articulares dos ossos longos. A matriz da cartilagem hialina contm fibrilas colgenas, proteoglicanas e glicoprotenas: a cartilagem hialina formada, em 40% do seu peso seco, por fibrilas de colgeno tipo II associadas proteoglicanas muito hidratadas e a glicoprotenas adesivas. Em adio ao colgeno, a matriz contm GAGs combinadas por covalncia com protenas, formando proteoglicanas. Ate 200 proteoglicanas podem estabelecer ligaes no covalentes com uma nica molcula de cido hialurnico, que uma glicosamina no sulfatada e de alto peso molecular, para formar uma molcula enorme de agrecana, que um agregado muito importante para manter a rigidez da matriz cartilaginosa, interage com as fibrilas colgenas. O alto contedo de gua de solvatao das molculas de GAGs atua como um sistema de absoro de choques mecnicos, ou mola biomecnica, de grande significado funcional, principalmente nas cartilagens articulares. Outro componente importante da matriz da cartilagem hialina a glicoprotena adesiva condronectina, uma macromolcula com stios de ligao para condrcitos, fibrilas colgenas e GAGs.

Histologia bsica 10 Tecido muscular responsvel pelos movimentos corporais. Constitudo por clulas alongadas caracterizadas pela presena de grande quantidade de filamentos citoplasmticos responsveis pela contrao. Tm origem mesodrmica. Pode se distinguir em trs tipos: Msculo liso: clulas fusiformes que no possuem estrias transversais. O processo de contrao lento e no est sujeito ao controle voluntrio. Msculo estriado esqueltico: feixes de clulas cilndricas muito longas e multinucleares, com estrias transversais. Tm contrao rpida, vigorosa e sujeita ao controle voluntrio. Msculo estriado cardaco: apresenta estrias transversais, formado por clulas alongadas e ramificadas, que se unem entre si por meio dos discos intercalares. Apresentam contrao involuntria, vigorosa e rtmica. Numa clula muscular a membrana chamada sarcolema, o citoplasma o sarcoplasma, o RE o retculo sarcoplasmtico e as mitocndrias so sarcosomas. O msculo esqueltico constitudo de fibras musculares envoltas por camadas gradualmente mais complexas de tecido conjuntivo: o endomsio, o perimsio e o epimsio: as fibras musculares se originam no embrio atravs da fuso de clulas alongadas, os mioblastos. Num msculo, os feixes de fibras no esto agrupados ao acaso, mas organizados em feixes envolvidos por uma membrana externa de tecido conjuntivo, chamada epimsio. Dele partem septos muito finos de tecido conjuntivo, que se dirigem para o interior do msculo, dividindo-o em feixes, esses septos constituem o perimsio. Cada fibra muscular envolvida por uma camada muito fina constituda pela lamina basal da fibra muscular e por fibras reticulares do endomsio. O tecido conjuntivo permite que a fora de contrao gerada por cada fibra atue sobre o msculo inteiro. Este papel tem grande significado funcional, porque na maioria das vezes as fibras no se estendem de uma extremidade do msculo at a outra. ainda por intermdio do tecido conjuntivo que a fora de contrao do msculo se transmite a outras estruturas como tendes, ligamentos e ossos. Cada fibra muscular apresenta perto do seu centro uma terminao nervosa motora, chamada placa motora. O citoplasma da fibra muscular apresenta-se preenchido principalmente por fibrilas paralelas - as miofibrilas. Cada miofibrila formada de unidades morfofuncionais os sarcmeros: as estriaes aparecem pela alternncia de faixas claras e escuras, ou seja, pela repetio de unidades iguais, chamadas sarcmeros. Um sarcmero formado por uma banda A (anisotrpica) escura, com uma banda H clara no meio dela, duas semibandas I (isotrpicas) claras e duas linhas Z. Da linha Z partem filamentos finos (actina) que correm at o bordo externo da banda H. os filamentos grossos de miosina ocupam a regio central do sarcmero. Na regio lateral da banda A, os filamentos finos e grossos se interdigitam, num arranjo hexagonal como filamento grosso no meio. Os filamentos grossos so formados de miosina e os filamentos finos tm actina, tropomiosina e troponina. Actina: polmeros longos (actina F) formados por duas cadeias de monmeros globulares (actina G) torcidas uma sobre a outra em hlice dupla. Uma caracterstica importante das molculas de actina G sua assimetria estrutural. Cada monmero globular de actina G possui uma regio que interage com a

miosina. Os filamentos de actina ancorados perpendicularmente em cada lado da linha Z exibem polaridades opostas em cada lado dessa linha. Tropomiosina: uma molcula longa e fina com duas cadeias polipeptdicas, uma enrolada na outra. Elas se unem pela extremidade para formar filamentos longos que se localizam ao longo do sulco existente entre os dois filamentos de actina F. Troponina: um complexo de trs subunidades: TnT, que se liga tropomiosina; TnC, que tem grande afinidade pelos ons clcio; e TnI, que cobre o sitio ativo da actina onde ocorre a interao entre a actina e a miosina. Cada molcula de tropomiosina tem um local especfico onde se prende um complexo de troponina. Miosina: formada por dois peptdeos enrolados em hlice. Numa de suas extremidades a miosina apresenta uma salincia globular ou cabea, que possui locais especficos para a combinao com ATP e dotada de atividade ATPsica. nesta parte da molcula que tem lugar todas as reaes relacionadas com a hidrlise do ATP. Nesta parte tambm se encontra o local de combinao com a actina. Quando submetida ligeira protelise, a molcula de miosina pode ser dividida em dois fragmentos; meromiosina leve e meromiosina pesada. As molculas de miosina so dispostas nos filamentos grossos de tal maneira que suas pares em basto se sobrepem e as cabeas situam-se pra fora.

Histologia bsica 12 Clulas do sangue O sangue a massa lquida contida no aparelho circulatrio, que a mantm em movimento regular e unidirecional. formado de duas fases: os glbulos sanguneos e o plasma, fase lquida na qual os primeiros esto suspensos. Os corantes para o sangue so: Leishman, Wrigth e Giemsa, que so misturas do tipo Romanowsky. Os glbulos sanguneos so os eritrcitos ou hemcias, as plaquetas e diversos tipos de leuccitos. Esses ltimos so esfricos quando suspensos no sangue e classificados em dois grupos: os granulcitos ou polimorfonucleares e os agranulcitos. Os granulcitos tm ncleo de forma irregular e mostram no citoplasma grnulos especficos. De acordo com a afinidade tintorial de seus grnulos citoplasmticos, distinguem-se trs tipos de granulcitos: neutrfilos, eosinfilos e basfilos, que vivem pouco e morrem por apoptose. O ncleo dos agranulcitos tem forma mais regular e o citoplasma no possui granulaes especificas, podendo, porm, apresentar grnulos azurfilos inespecficos, presentes tambm em outros tipos celulares. H dois tipos de agranulcitos: os linfcitos e os moncitos. As plaquetas so anucleadas e constitudas por fragmentos do citoplasma de clulas gigantes da medula ssea, os megacaricitos. O resultado obtido na centrifugao do sangue (sedimentao) chama-se hematcrito. Os glbulos sedimentam em duas camadas: a inferior formada pelas hemcias, a imediatamente superior (papa leucocitria), que contm os leuccitos e sobre esta repousa delgada camada de plaquetas, no distinguveis a olho nu. Funes do sangue: o sangue principalmente um meio de transporte. Por seu intermdio, os leuccitos, dos quais alguns so fagocitrios e representam uma das primeiras barreiras contra a infeco, percorrem todo o corpo e podem concentrar-se rapidamente nos tecidos atingidos por infeco. O sangue transporta oxignio e gs carbnico, o primeiro ligado hemoglobina dos eritrcitos e o segundo ou ligado hemoglobina ou dissolvido no plasma sob a forma de bicarbonato. O plasma tambm transporta nutrientes e metablitos dos locais de absoro ou sntese, distribuindo-os pelo organismo. Transporta, ainda, escorias do metabolismo que so removidas do sangue pelos rgos de excreo. O sangue, sendo o veiculo de distribuio dos hormnios, permite a troca de mensagens qumicas entre rgos distantes. Tem ainda papel regulador na distribuio d calor, do equilbrio cido-bsico e do equilbrio osmtico. Composio do plasma: o plasma uma soluo aquosa contendo componentes de pequeno e grande peso molecular. As protenas plasmtica correspondem a 7%, os sais inorgnicos a 0,9%, sendo o restante formado por compostos orgnicos diversos, tais como AA, vitaminas, hormnios, lipoprotenas e glicose. Os componentes de baixo peso molecular do plasma esto em equilbrio, atravs das paredes dos capilares e das vnulas, com o lquido intersticial dos tecidos. Por isso, a composio do plasma um indicador da composio do lquido extracelular. As principais protenas do plasma so as albuminas, as alfa e beta e gamaglobulinas, e o fibrinognio. As albuminas desempenham um papel fundamental na manuteno da presso osmtica. As gamaglobulinas so anticorpos, por isso, chamadas imunoglobulinas. O fibrinognio necessrio para a formao de fibrina, na coagulao do sangue. Diversas substncias, que so insolveis em gua, podem ser transportadas no plasma combinadas com as albuminas ou com as alfa e betaglobulinas. Os eritrcitos so glbulos anucleados e bicncavos contendo hemoglobina: a forma bicncava proporciona grande superfcie em relao ao volume, o que facilita as trocas

de gases. As hemcias so flexveis, passando facilmente pelas bifurcaes dos capilares mais finos, sem se romperem. As que tm mais de 8m e menos de 6m de dimetro so denominadas macrcitos e micrcitos. Quando o sangue contm muitas hemcias com dimenses anormais, diz-se que existe anisocitose. As anemias so doenas caracterizadas por baixa concentrao de hemoglobinas no sangue. Muitas vezes a anemia uma conseqncia de uma diminuio do numero de eritrcitos. No entanto, este pode ser normal, mas cada hemcia pode conter pouca hemoglobina (anemia hipocrmica). As anemias pode ser causadas por: (1) hemorragia; (2) produo insuficiente de hemcias pela medula ssea; (3) produo de eritrcitos com hemoglobina insuficiente, por deficincia de ferro na alimentao; e (4) destruio acelerada dos eritrcitos. Devido sua riqueza em hemoglobina, uma protena bsica, os eritrcitos so acidfilos, corando-se pe eosina. A forma bicncava mantida pelas protenas contrcteis ligadas membrana da hemcia, que usam energia derivada da glicose. Ao penetrarem na corrente sangunea, vindos da medula ssea vermelha, onde so formados, os glbulos vermelhos contm ainda certa quantidade de ribossomos. Quando corados esses corpsculos apresentam uma colorao azulada, devido basofilia do RNA, que quando precipitado forma uma rede de corpsculos chamados reticulcitos. A molcula hemoglobina formada por quatro subunidades, cada uma contendo um grupo heme ligado a um polipeptdeo. O grupo heme um derivado porfirnico contendo Fe+. Devido s variaes das cadeias polipeptdicas distinguem-se vrios tipos de hemoglobinas, dos quais trs so considerados normais as hemoglobinas A1 (Hb A1 97%), A2 (Hb A2 2%) e F (Hb F 100% da hemoglobina do feto, que muito vida pelo oxignio, tendo importante papel na vida fetal, pois o feto no tem acesso ao ar, e obtm oxignio dos eritrcitos do sangue materno, atravs da placenta). Cada molcula de hemoglobina se comina com quatro molculas de O2, formando-se a oxi-hemoglobina. Esta combinao reversvel e o oxignio transportado pela hemoglobina transferido para os tecidos, onde a presso de O2 baixa. A combinao da hemoglobina com CO2 tambm reversvel e constitui a carbamino-hemoglobina. Mas a maior parte do CO2 transportada, dos tecidos para os pulmes, dissolvida no plasma. O eritrcito falciforme no tem flexibilidade, frgil e tem vida curta. O sangue se torna mais viscoso, o fluxo sanguneo nos capilares prejudicado, levando os tecidos a uma deficincia em oxignio. O monxido de carbono (CO) reage com a hemoglobina, para formar a carbo-hemoglobina. A finidade entre eles maior que a Hb com o O2. O CO aspirado desloca o O2 e impede seu transporte pela Hb, determinando uma deficincia na oxigenao dos tecidos, eu pode levar morte. Durante a maturao na medula ssea, o eritrcito perde o ncleo e as outras organelas, ao tendo, portanto, a possibilidade de renovar suas molculas. Ao cabo de 120 dias, as enzimas j esto em nvel crtico, o rendimento dos ciclos metablicos geradores de energia insuficiente e o corpsculo digerido pelos macrfagos, principalmente no bao. Os leuccitos so clulas especializadas na defesa do organismo: os leuccitos deixam os capilares por diapedese, passando entre as clulas epiteliais, para penetrar no tecido conjuntivo. Quando os tecidos so invadidos por microrganismos os leuccitos so atrados por quimiotaxia. Chama-se leucocitose o aumento e leucopenia a diminuio do numero de leuccitos no sangue. Os neutrfilos contm grnulos especficos muito pequenos: os neutrfilos tm ncleos formados por dois a cinco lbulos, a clula muito jovem tem ncleo no segmentado em lbulos, sendo chamada de neutrfilo com ncleo em bastonete ou s bastonete. Nos ncleos dos neutrfilos de pessoas do sexo feminino aparece um apndice que contm a cromatina sexual. Os grnulos azurfilos ou primrios so

produzidos antes dos grnulos especficos ou secundrios. Esses ltimos so menores do que os azurfilos e sua composio qumica os diferencia dos lisossomos. Eles contm tipos de molculas dotadas de poder bactericida ou bacteriosttico. Os neutrfilos constituem importante defesa celular contra a invaso de microrganismos. No sangue, no fagocitam, mas se tornam amebides e fagocitrios to logo toquem um substrato slido sobre o qual possam emitir pseudpodos. A bactria invasora rodeada por pseudpodos, que se fundem em trono dela. Assim, a bactria finalmente ocupa um vacolo (fagossomo) delimitado por uma membrana derivada da superfcie do neutrfilo. Logo a seguir, os grnulos especficos se fundem com o fagossomo e esvaziam seu contedo no interior dele. Bombas de prtons localizados na membrana do fagossomo acidificam o interior deste vacolo. O pH cido pode matar bactrias e constitui ambiente adequado atividade das hidrolases dos grnulos azurfilos. Durante a fagocitose h um aumento brusco e acentuado no consumo de oxignio, devido produo de perxido de hidrognio (H2O2) e nion superxido (O2-), ambos oxidantes energticos so provavelmente os principais responsveis pela morte das bactrias fagocitadas. Morto o microrganismo, as enzimas lisossmicas promovem sua hidrlise em molculas pequena que se difundem para fora do vacolo. Como nem todas as bactrias so digeridas e nem todos os neutrfilos sobrevivem ao bacteriana, pode aparecer pus. O ncleo dos eosinfilos geralmente bilobulado e seus grnulos citoplasmticos especficos so lisossomos: presena de granulaes ovides que se coram pela eosina, que so maiores que as dos neutrfilos. Paralelamente ao eixo maior do granulo, encontra-se um cristalide ou internum alongado, eltron-denso, cuja principal protena rica em arginina. A camada que envolve o internum menos densa aos eltrons, rica em fosfatase cida e denomina-se externum ou matriz. Essas clulas fagocitam e eliminam complexos de antgenos com anticorpos que aparecem em casos de alergia. So atrados para as reas de inflamao alrgica pela histamina, produzida principalmente por basfilos e mastcitos. Eosinfilos produzem molculas que inativam leucotrienos e histamina, assim modulando a inflamao. Eosinfilos participam da defesa contra parasitas, no so clulas especializadas para a fagocitose de microrganismos. Sua atividade defensiva realizada pela liberao do contedo de seus grnulos para o meio extracelular e pela fagocitose de complexos antgenoanticorpo. Os corticosterides induzem uma queda imediata na concentrao dos eosinfilos do sangue e nos locais de inflamao. Esses hormnios interferem na passagem dos eosinfilos da medula ssea, onde so produzidos, para a corrente sangunea. Os basfilos participam dos processo alrgicos e possuem receptores para imunoglobulina E (IgE): o basfilo tem ncleo volumoso, com forma de S, seu citoplasma carregado de grnulos maiores do que os dos outros granulcitos, os quais muitas vezes obscurecem o ncleo, e contm histamina, fatores quimiotticos para eosinfilos e neutrfilos, e heparansulfato, que responsvel pela metacromasia. A membrana plasmtica dos basfilos tambm possui receptores para a imunoglobulina E (IgE). Eles liberam seus grnulos para o meio extracelular, sob ao dos mesmos estmulos que promovem a expulso dos grnulos dos mastcitos. Embora morfologicamente semelhantes, existem diversos tipos de linfcitos identificveis por tcnicas imunolgicas: o citoplasma do linfcito pequeno muito escasso, apresenta basofilia discreta e por vezes no visvel. Pode conter grnulos azurfilos, que no so exclusivos dos linfcitos e mostra-se pobre em organelas. Embora os linfcitos tenham morfologia semelhante, dependendo das molculas localizadas em sua superfcie, podem ser separados em dois tipos principais, linfcito B

e T, com diversos subtipos. Ao contrrio dos outros leuccitos que no retornam ao sangue depois de migrarem para os tecidos, os linfcitos voltam dos tecidos para o sangue, recirculando continuamente. Depois de sarem do sangue, por diapedese, os moncitos se transformam em macrfagos: os moncitos do sangue representam uma fase na maturao da clula mononuclear fagocitria originada na medula ssea. Esta clula passa para o sangue, onde permanece apenas alguns dias, e, atravessando a parede dos capilares e vnulas, penetra em alguns rgos, transformando-se em macrfagos, que constituem uma fase mais avanada na vida da clula mononuclear fagocitria. As plaquetas, resultantes da fragmentao do citoplasma dos megacaricitos da medula ssea, desempenham importantes funes na coagulao do sangue: as plaquetas so corpsculos anucleados que promovem a coagulao do sangue, auxiliando a reparao da parede dos vasos sanguneos e evitando hemorragia. Elas apresentam uma parte transparente, o hialmero, o qual contm grnulos corados em prpura, que constituem o crommero, alm de microfilamentos de actina e molculas de miosina, responsveis pela formao de filopdios e pela contrao das plaquetas. O granulmero possui uma variedade de grnulos delimitados por membrana, algumas mitocndrias e grnulos de glicognio. Os grnulos densos ou delta armazenam ADP, ATP e serotonina; os grnulos alfa contm fibrinognio e fator de crescimento plaquetrio; e os grnulos lambda so lisossomos carregados com as enzimas usuais dessas organelas. Quando um vaso sanguneo sofre leso inicia-se a hemostasia (que visa impedir a hemorragia), que envolve a musculatura lisa do vaso lesado, as plaquetas e diversos fatores do plasma sanguneo, que promovem a coagulao do sangue. A contrao do msculo liso estimulada pela serotonina liberada pelas plaquetas. A participao das plaquetas na coagulao do sangue pode ser resumida da maneira que segue: (1) agregao primria: as plaquetas tambm aderem ao colgeno formando um tampo plaquetrio; (2) agregao secundria: as plaquetas do tampo liberam ADP, que um potente indutor da agregao plaquetria, fazendo aumentar o nmero de plaquetas do tampo; (3) coagulao do sangue: fatores do plasma sanguneo, dos vasos lesados e das plaquetas promovem a interao seqencial de cerca de 13 protenas plasmticas, dando origem a um polmero, a fibrina, e formando uma rede fibrosa tridimensional, que aprisiona eritrcitos, leuccitos e plaquetas. Forma-se assim o cogulo sanguneo, mais consistente e firme do que o tampo plaquetrio; (4) retrao do cogulo: se contrai graas ao da actina, miosina e ATP das plaquetas; e (5) remoo do cogulo: protegida pelo cogulo, a parede do vaso se restaura pela formao de tecido novo. Ento o cogulo removido principalmente pela enzima plasmina.

Histologia bsica 13 Hemocitopoese As clulas do sangue tm vida curta e so constantemente renovadas pela proliferao mittica de clulas localizadas nos rgos hemocitopoticos. As primeiras clulas sanguneas do embrio surgem muito precocemente, no mesoderma do saco vitelino. Posteriormente, o fgado e o bao funcionam como rgos hemocitopoticos temporrios, porm, no segundo ms de vida intra-uterina a clavcula j comeou a se ossificar e inicia a formao de medula ssea hematgena em seu interior. Na vida psnatal, a medula ssea origina todas as clulas do sangue (eritropoese, granulocitopoese, linfocitopoese, monocitopoese e megacitopoese). Clulas fonte, fatores de crescimento e diferenciao: (1) clulas fonte: originam clulas filhas que seguem dois destinos: umas permanecem como clulas fonte e outras se diferenciam em outros tipos celulares com caractersticas especificas. O pool de lulas fonte se mantm constante porque as que se diferenciam so substitudas por clulas filhas que se mantm no pool. As clulas do estroma da medula ssea sintetizam glicoprotenas estimulantes das clulas hemocitopoticas. Essas glicoprotenas ficam integradas na membrana das clulas do estroma, de modo que s atuam por contato, estimulando as clulas hemocitopoticas; (2) clulas fonte pluripotentes: todas as clulas do sangue derivam de um nico tipo celular da medula ssea, essas clulas se proliferam e formam duas linhagens: a das clulas linfides, que vai formar linfcitos, e a as clulas mielides, que origina os granulcitos, eritrcitos, moncitos e plaquetas. Os linfcitos so transportados pelo sangue para os linfonodos, timo, bao e outros rgos linfticos onde completam sua maturao; (3) clulas progenitoras e clulas precursoras: a proliferao das clulas fonte pluripotentes origina clulas filhas com potencialidade menor. Estas clulas filhas so as clulas progenitoras uni ou bipotentes que produzem as clulas precursoras (blastos). nas clulas precursoras que as caractersticas morfolgicas diferenciais das linhagens aparecem pela primeira vez. As clulas progenitoras, quando se dividem, podem originar outras clulas progenitoras e tambm clulas precursoras, mas as precursoras s originam clulas sanguneas maduras. A hemocitopoese resulta da proliferao e diferenciao simultneas de clulas fonte que, medida que se diferenciam, vo reduzindo sua potencialidade. A hemocitopoese depende do microambiente adequado e da presena de fatores de crescimento ou fatores estimuladores de colnias (CSF), que estimulam a proliferao e a diferenciao das clulas imaturas e a atividade funcional da clulas maduras. Na hemocitopoese o potencial de diferenciao e a capacidade de auto-renovao diminuem gradualmente e a resposta mittica ao fatores de crescimento aumenta. A capacidade de estimular mitoses, promover a diferenciao e acelerar as atividade funcionais da clulas freqentemente esto presentes no mesmo fator de crescimento, mas estas trs propriedades podem variar de intensidade de acordo como fator de crescimento considerado. A medula ssea encontrada no canal medular dos ossos longos e nas cavidades dos ossos esponjosos. Distinguem-se a medula ssea vermelha, hematgena, que deve sua cor presena de numerosos eritrcitos em diversos estgios de maturao, e a medula ssea amarela, rica em clulas adiposas e que no produz clulas sanguneas. No recm-nascido, toda a medula ssea vermelha e, portanto, ativa na produo de clulas do sangue. Com o avanar da idade, porm, a maior parte da medula ssea transforma-se na variedade amarela, existindo a medula vermelha no adulto apenas no esterno, vrtebras, costelas, dploe dos ossos do crnio e, no adulto

jovem, nas epfises proximais do fmur e do mero. Em certos casos, a medula amarela pode voltar a produzir clulas do sangue, transformando-se em medula vermelha. A hemocitopoese ocorre na medula ssea vermelha, em microrregies contendo diversos estgios de uma mesma linhagem celular: a medula ssea vermelha, como todo tecido hemocitopotico, constituda por clulas reticulares, associadas a fibras reticulares. Esses elementos formam uma esponja percorrida por numerosos capilares sinusides. Entre as clulas reticulares existe um nmero varivel de macrfagos, clulas adiposas e muitas clulas hemopoticas. A matriz extracelular possui colgeno tipos I e III, fibronectina e laminina (que junto com a hemonectina interagem com receptores celulares, fixando temporariamente as clulas), alm das proteoglicanas. Alm e produzir as clulas do sangue, a medula ssea armazena ferro sob a forma de ferritina (ferro + apoferritina) e hemossiderina (ferro + apoferritina + outras protenas + glicdios + lipdios + outras molculas) no citoplasma das clulas reticulares, clulas endoteliais dos sinusides e macrfagos. A liberao de clulas maduras da medula para o sangue controlada pelos fatores de liberao, molculas produzidas em resposta s necessidades do organismo, tais como o componente C3 do complemento, hormnios como os glicocorticides e os andrgenos, e certas toxinas bacterianas. Maturao dos eritrcitos: de acordo com o grau de maturao, as clulas eritrcitas so chamadas de: proeritroblastos (as protenas sintetizadas por ele destinam-se principalmente a aumentar seu prprio protoplasma, pois esta clula s divide ativamente e h tambm sntese de hemoglobina), eritroblastos basfilos (menor que a anterior), eritroblastos policromatfilos (menor ainda que a precedente, contm hemoglobina em quantidade suficiente para aparecer uma acidofilia citoplasmtica), eritroblastos ortocromticos (ou acidfilos ou normoblastos ncleo se torna picntico, por sua riqueza em hemoglobina o citoplasma acidfilo, em certo momento essa clula comea a emitir uma srie de salincias citoplasmticas, uma delas contendo o ncleo, que expelido levando ao seu redor uma delgada camada de citoplasma), reticulcitos (parte anucleada que sobra aps a expulso do ncleo da clula anterior) e hemcias. O processo bsico da maturao a sntese da hemoglobina e a formao de um corpsculo pequeno e que oferece o mximo de superfcie para as trocas de oxignio. Durante a maturao ocorre o seguinte: (1) o volume das clulas diminui; (2) a cromatina torna-se cada vez mais densa, at que o ncleo se apresenta picntico e finalmente expulso da clula; (3) os ncleos diminuem de tamanho e depois se tornam invisveis no esfregao; (4) h uma diminuio dos polirribossomos (basofilia) e um aumento da hemoglobina (acidofilia) no citoplasma; e (5) a quantidade de mitocndrias diminui. O ferro trazido para os pro e os outros eritroblastos pela transferrina, uma protena plasmtica transportadora de ferro. Os ncleos como resto do citoplasma, separados dos normoblastos, so fagocitados pelos macrfagos da medula ssea. Ertron: chama-se ertron ao conjunto formado pelos eritrcitos mais as clulas precursoras desses corpsculos. Funo: suprir o meio interno com oxignio necessrio ao metabolismo dos tecidos. Pode ser dividido em dois compartimentos funcionais: (1) o compartimento circulante ou sanguneo representado pelas hemcias e reticulcitos do sangue, e (2) o compartimento medular, onde ocorre a formao dos elementos do ertron. O compartimento medular praticamente ao contm eritrcitos, sendo constitudo por elementos nucleados (proeritroblastos, eritroblastos, normoblastos) e u nmero relativamente pequeno de reticulcitos. Como o ertron no tem um compartimento de reserva, a concentrao de eritrcitos no sangue traduz o nvel de produo medular. A deficincia em oxignio nos tecidos aumenta o teor sanguneo do hormnio glicoprotico eritropoetina, que estimula o compartimento medular a produzir maior nmero de eritrcitos (85% da eritropoetina sintetizado nos rins e 15% no fgado).

Numerosas substncias so essenciais para o bom funcionamento do ertron, entre elas, o hormnio eritropoetina, ferro, vitamina B12 e cido flico. Maturao dos granulcitos: o mieloblasto a clula mais imatura, j determinada para formar exclusivamente os trs tipos de granulcitos. Quando nela surgem granulaes citoplasmticas especificas, essa clula passa a ser chamada de promielcito neutrfilo, eosinfilo e basfilo, conforme o tipo de granulao presente. Os estgios seguintes de maturao so: mielcito, metamielcito, o granulcito com ncleo em basto e o granulcito maduro (neutrfilo, eosinfilo e basfilo). Mieloblasto: rico em grnulos azurfilos. Promielcito: menor que o mieloblasto e contm alguns grnulos especficos (promielcitos, neutrfilos, eosinfilos e basfilos) ao lado das granulaes azurfilas. Mielcito: desaparece a basofilia citoplasmtica e aumenta a quantidade de grnulos especficos. Metamielcito: possui ncleo com uma chanfradura profunda, o basfilo no costuma ser descrito. Antes de tomar a forma lobulada tpica da clula madura, o granulcito neutrfilo passa por uma fase intermediria, chamada neutrfilo com ncleo em bastonete. Os neutrfilos encontram-se localizados nos compartimentos de formao, de reserva, circulante e de marginao: (1) compartimento medular de formao: onde novos neutrfilos so produzidos e amadurecem; (2) compartimento medular de reserva: contm neutrfilos maduros; (3) compartimento circulante: neutrfilos suspensos no plasma e circulando nos vasos sanguneos; (4) compartimento de marginao: neutrfilos que, embora contidos nos vasos sanguneos, no circulam. Estes neutrfilos esto: (a) nos capilares colocados temporariamente fora de circulao, por vasoconstrio, e (b) ligados ao endotlio dos vasos, no sendo levados pela corrente sangunea. H uma troca constante de clulas entre compartimento circulante e o de marginao. Maturao dos linfcitos e moncitos: linfoblasto (citoplasma basfilo, sem granulaes azurfilas, apresenta dois ou trs ncleos) forma o prolinfcito (menor que a anterior, citoplasma basfilo, podendo conter granulaes azurfilas, d origem ao linfcito circulante). Ao contrrio dos granulcitos, que so clulas diferenciadas e terminais, que no mais se dividem, os moncitos so clulas intermedirias, destinadas a formar os macrfagos dos tecidos. A clula mais jovem da linhagem o promoncito (numerosos grnulos azurfilos finos, que so lisossomos), encontrado somente na medula ssea, se dividem duas vezes e se transformam em moncitos que passam para o sangue, depois migram para os tecidos, e se diferenciam em macrfagos. Origem das plaquetas: a primeira clula o megacarioblasto (ncleo poliplide ?; citoplasma homogneo e intensamente basfilo), depois vem o megacaricito (ncleo irregularmente lobulado, citoplasma abundante e levemente basfilo e com numerosas granulaes que ocupam sua maior parte essas granulaes vo formar os crommeros das plaquetas). Durante a maturao do megacaricito aparecem grnulos citoplasmticos, delimitados por membranas, que so precursores do hialmero das plaquetas. As primeiras clulas do sangue se formam nas ilhotas sanguneas do saco vitelino do embrio, e este processo gradualmente transferido para outros rgos: fgado, bao, timo, medula ssea e linfonodos: todos os glbulos sanguneos so os de origem mesenquimatosa. Em rgos de origem embrionria dupla, como o fgado e o timo, as clulas originadas do mesoderma so as responsveis pela hemocitopoese. A hemocitopoese intra-uterina passa por trs perodos mal definidos, quando um perodo se inicia, os processos que predominavam no anterior ainda persistem por algum tempo, os perodos so: (1) perodo primordial ou pr-heptico: primeiras clulas do sangue aparece no mesoderma do saco vitelino. A surgem ilhotas sanguneas, que so

aglomerados alongados de clulas mesenquimatosas. As clulas mais superficiais de cada ilhota do origem ao endotlio dos primeiros vasos, enquanto as mais internas tornam-se esfricas e se diferenciam nas primeiras clulas sanguneas. Pela unio do endotlio de ilhotas contguas, formam-se vasos sanguneos que se comunicam com os do corpo do embrio, das clulas sanguneas formadas no saco vitelino, que divide.-se no interior dos vasos e formam eritroblastos primitivos (eritropoese megaloblstica), que no chegam a perder seus ncleos. Durante o perodo primordial, o sangue possui apenas os elementos j mencionados. No contm leuccitos nem plaquetas. (2) perodo hepatoesplnico-tmico: (segundo ms) hemocitopoese no fgado e bao, em seguida, o timo comea a produzir linfcitos. No mesnquima que invade o esboo endodrmico do fgado, aparecem clulas precursoras dos granulcitos, megacaricitos e eritroblastos definitivos (sem perder os ncleos). Durante este perodo predomina a sntese de HbF. O bao produz principalmente clulas da srie vermelha e, em menor quantidade, granulcitos e plaquetas. (3) perodo medular-linfide: a clavcula o primeiro osso a mostrar atividade hemocitopotica. Sua medula ssea comea a funcionar entre o segundo e o terceiro ms de vida fetal. A medula ssea mostra grande atividade eritroctica, granuloctica e megacarioctica. Forma tambm linfcitos e moncitos. Nesse perodo, e prximo ao nascimento, entram em atividade os linfonodos, que, desde o incio da sua existncia, so rgos produtores de linfcitos.

Histologia bsica 14 Sistema imunitrio e rgos linfticos Sua principal funo defender o organismo contra microrganismos e molculas estranhas. As clulas desse sistema tm a capacidade de identificar as molculas que so prprias do corpo e as molculas estranhas, quer estejam isoladas, quer faam parte de um vrus, bactria, fungo, clula maligna ou protozorio. Aps identificar os agressores, o sistema imunitrio coordena a inativao ou a destruio do invasor. O sistema imunitrio compreende estruturas individualizadas (linfonodos e bao) e clulas livres (linfcitos, granulcitos e clulas do sistema mononuclear fagocitrio). Outro componente importante desse sistema so as clulas apresentadoras de antgenos, encontradas no tecido linftico, na pele etc. As clulas desse sistema se comunicam entre si e com clulas de outros sistemas atravs de molculas proticas denominadas citocinas. rgos linfticos: as principais estruturas so: timo, bao, linfonodos e ndulos linfticos (localizados na mucosa do aparelho digestivo tonsilas, placas de Peyer do leo, e apndice; do aparelho respiratrio e do aparelho urinrio, formando um conjunto conhecido como MALT {Mucosa-Associated Lymphoid Tissue}). Todos os linfcitos se originam na medula ssea, mas os linfcitos T completam sua maturao no timo, enquanto os linfcitos B saem da medula j como clulas maduras. Por esse motivo o timo e a medula ssea so chamados de rgos linfticos centrais. Os linfcitos migram dos rgos centrais, atravs do sangue e da linfa, para os rgos linfticos perifricos (bao, linfonodos, ndulos linfticos isolados, tonsilas, apndice e placas de Peyer do leo), onde eles proliferam e completam a diferenciao. Tipos bsicos de resposta imunitria: existem dois mecanismos bsicos: (1) imunidade celular, pela qual clulas imunocompetentes reagem e matam clulas que exibem na superfcie molculas estranhas, essa resposta imunitria celular mediada principalmente pelos linfcitos T; e (2) imunidade humoral, depende de glicoprotenas circulantes no sangue e outros lquidos, chamados anticorpos (plasmcitos - linfcitos B), que neutralizam molculas estranhas e participam da destruio das clulas que contm essas molculas. Imungenos e antgenos: as molculas estranhas so os imungenos. Antgeno uma molcula que reage com um anticorpo, mesmo que no seja capaz de desencadear uma resposta imune. Geralmente, todo imungeno antgeno tambm. Na resposta humoral (linfcitos B) a parte da molcula antignica que determina a resposta imunitria chamada determinante antignico ou epitopo. A resposta celular (linfcitos T) determinada por pequenos peptdeos associados s molculas MHC localizadas na membrana das clulas apresentadoras de antgenos. Anticorpos: so glicoprotenas plasmticas circulantes, do tipo gamaglobulinas, tambm chamadas imunoglobulinas (Ig). Cada um interage especificamente como determinante antignico que promoveu sua formao. Uma importante funo do anticorpo combinar especificamente com o epitopo que ele reconhece e, ento, provocar o aparecimento de sinais qumicos iniciando a presena do invasor aos outros componentes do sistema imunitrio. Alguns anticorpos podem aglutinas clulas e precipitar antgenos solveis, a primeira facilita a fagocitose e a segunda pode torn-las incuas. Os neutrfilos e macrfagos tm receptores para a regio Fc do complexo antgeno-IgG, e, dessa maneira, IgG prende o complexo antgeno-anticorpo superfcie dessas clulas, o que facilita a fagocitose. A imunoglobulina mais abundante no plasma sanguneo a IgG, que consistem em duas cadeias leves idnticas e duas cadeias

pesadas, tambm idnticas. Os quatro segmentos da extremidade amnica constituem os fragmentos Fab da imunoglobulina. A seqncia de AA do segmento Fab muito varivel, sendo responsvel pela especificidade da resposta imune. IgG a nica que atravessa a barreira placentria humana e penetra no sangue fetal, contribuindo para a defesa do recm-nascido. IgA aparece em pequena quantidade no sangue ( encontrado: lgrima, leite, saliva, secreo nasal, bronquial, intestino delgado, prstata, lquido que umedece a vagina). IgM existe sob a forma de pentmero, predomina no incio das respostas imunitrias, junto com IgD, a principal Ig encontrada na superfcie do linfcito B, onde funcionam como receptores para antgenos especficos. IgE, est sob a forma de monmero e tem grande afinidade para receptores localizados na membrana dos mastcitos e basfilos. Quando o antgeno que provocou a produo de IgE novamente encontrado, o complexo antgeno-IgE que se forma na superfcie dos mastcitos e basfilos determina a produo e a liberao de diversas substncias biologicamente ativas como histamina, heparina e leucotrienos. Linfcitos B e T: a diferenciao em clulas imunocompetentes tem lugar na medula ssea e no timo (rgos linfticos primrios ou centrais). A bursa de Fabricius uma massa de tecido linftico localizada prximo da cloaca em aves, sem essa estrutura a ave no capaz de produzir Ig, portanto a imunidade humoral prejudicada. A remoo do timo resulta numa deficincia profunda nas respostas imunitrias de base celular. Os linfcitos B originados na medula ssea so transportados pelo sangue e vo se instalar nas estruturas linfticas no-tmicas, onde, quando ativados, proliferam e se diferenciam em plasmcitos, que so as clulas produtoras de anticorpos. Alguns linfcitos B ativados no se diferenciam em plasmcitos, formando as clulas B da memria imunitria. Os precursores dos linfcitos T se originam na medula ssea, penetram no sangue, so retidos no timo onde proliferam e se diferenciam em linfcitos T que, novamente carregados pelo sangue, vo ocupar reas definidas nos outros rgos linfticos. No timo os linfcitos T se diferenciam nas subpopulaes das clulas T helper (estimula a transformao de linfcitos B em plasmcitos), T supressora (inibem a resposta humoral e celular e apressam o termino da resposta imunitria) e T citotxica (perforinas provocam a lise celular; induo apoptose). Em outros locais se podem formar as clulas T da memria. As clulas T helper so mortas pelo retrovrus HIV que causa AIDS, que paralisa o sistema imune do paciente, tornando-o muito susceptvel ao ataque de microrganismos, mesmo os que, usualmente no causam doenas.a diferenciao entre essas clulas e tambm seus subtipos torna-se possvel porque elas possuem protenas integrais em suas membranas que so especificas e podem ser identificas por tcnicas imunocitoqumicas. Quando estimuladas por antgenos, as clulas B e T produzem clulas grandes e de citoplasma basfilo, chamadas imunoblastos, os que derivam da clula B produzem plasmcitos, enquanto os derivados das clulas T continuam com muitos polirribossomos no ligados ao RE. O linfcito NK (natural killer) no apresenta em sua superfcie nem os marcadores da clulas B nem os das clulas T, eles atacam clulas cancerosas e clulas infectadas por vrus, sem necessidade de estimulo prvio. Clulas apresentadoras de antgenos: so clulas dendrticas, macrfagos, clulas de Langerhans da epiderme, linfcitos B e clulas epiteliais reticulares do timo. No processamento de antgenos as clulas digerem parcialmente as protenas, transformando-as em pequenos peptdeos. O processamento essencial para a ativao do linfcito T, pois ela no reconhece molculas antignicas nativas, s reconhecem peptdeos e outro antgenos quando associados a molculas MHC, enquanto as clulas B reconhecem diretamente certas substncias. CLULAS DENDRTICAS: se originam de precursores provenientes da medula ssea, na pele recebem o nome de clulas de

Langerhans, so imunoestimuladoras, pois alm de apresentarem os antgenos s clulas T, elas so capazes de estimular clulas T que ainda no entraram em contato com qualquer antgeno. So levadas pelo sangue para muitos rgos linfticos, onde elas se alojam, ainda numa forma imatura. Essas clulas dendrticas imaturas se caracterizam por sua grande capacidade de capturar e processar antgenos, porm tm pequena capacidade de estimular clulas T. A inflamao induz a maturao das clulas dendrticas que, ento, migram pelo sangue ou pela linfa, indo para os rgos linfticos perifricos. Nesse estagio, elas perdem a capacidade de capturar antgenos e adquirem capacidade de ativar clulas T. centros germinativos dos linfonodos bao e outros rgos linfticos tm clulas denominadas clulas foliculares dendrticas que no derivam da medula ssea, no so capazes de englobar no citoplasma antgenos por endocitose, nem so capazes de processar antgenos. So eficiente na captao do complexo antgeno-anticorpo e de fatores do complemento, retendo antgenos em sua superfcie por longos perodos de tempo, onde os antgenos so reconhecidos por linfcitos B. Complexos de histocompatibilidade: o sistema imune distingue as molculas prprias do organismo das molculas estranhas, por meio da presena na superfcie celular do complexo MHC, tambm conhecido como HLA. O MHC I est presente em todas as clulas, enquanto o MHC II de distribuio mais restrita, sendo encontrado nas clulas apresentadoras de antgenos. Os MHCs tm uma estrutura que nica para cada pessoa, e esse o principal motivo pelo qual enxertos e transplantes de rgos so rejeitados, exceto quando feitos entre irmos univitelinos. A rejeio deve-se principalmente atividade dos linfcitos NK e citotxicos, que penetram o transplante e destroem suas clulas. Citocinas na resposta imunitria: coletivamente, so chamadas citocinas e as produzidas pelos linfcitos so as linfocinas. Algumas citocinas so mediadoras entre leuccitos e so chamadas interleucinas. Certas citocinas so fatores estimuladores de colnias sintetizados por linfcitos T e que atuam sobre clulas dos rgos linfticos e hemocitopoticos. Outras citocinas, como os fatores alfa e beta da necrose tumoral, e o fator beta de transformao e crescimento, esto relacionadas com a inflamao, defesa contra tumores, crescimento celular e cicatrizao da feridas. Timo: no apresenta ndulos, cada lbulo formado por uma zona cortical e uma zona medular, onde podem ser encontrados corpsculos de Hassall, constitudos por clulas reticulares epiteliais achatadas, em arranjo concntrico. O timo tem origem embrionria dupla, seus linfcitos formam-se a partir de clulas mesenquimatosas, que invadem um esboo epitelial derivado do endoderma. Alm dos linfcitos T e da clulas reticulares epiteliais, o timo possui macrfagos, principalmente na cortical. As clulas reticulares epiteliais formam uma camada por dentro do tecido conjuntivo da cpsula e septos; formam o retculo da cortical e da medular, onde se multiplicam e diferenciam os linfcitos T; formam uma camada em torno dos vasos sanguneos do parnquima tmico; e constituem os corpsculos de Hassall. Aps a puberdade o timo entra em involuo, mas no desaparece: a cortical pouco a pouco se torna mais delgada. As clulas reticulares epiteliais e os corpsculos de Hassall so mais resistentes involuo do que os linfcitos. Vascularizao e barreira hematotmica: os capilares do timo possuem endotlio sem poros e lmina basal muito espessa. As clulas endoteliais possuem prolongamentos finos que perfuram a lmina basal e podem entrar em contato com as clulas reticulares epiteliais. Estas clulas envolvem, externamente, os capilares, contribuindo para a formao da barreira hematotmica, cujos outros componentes so lmina basal das clulas reticulares e as clulas endoteliais no fenestradas da parede capilar. A barreira,

que s existe na zona cortical, impede que antgenos circulantes penetrem na cortical do timo, onde se esto formando os linfcitos T. no existe tal barreira na medular. O timo responsvel pela diferenciao dos linfcitos T e produz hormnios que estimulam outros rgos linfticos: clulas fonte migram continuamente da medula ssea atravs do sangue, e vo para o timo, onde proliferam e se diferenciam em linfcitos T. Elas formam uma populao localizada na zona cortical do timo. Essas clulas imaturas, ou timcitos, j expressam certas molculas em suas superfcies, como os marcadores CD1 e CD4. O primeiro rearranjo gnico de receptor da clula T tem lugar nesse estagio. A seleo positiva envolve a interao de timcitos duplamente positivos com complexos de MHC com autopeptdeos, esses sobrevivero e iro se proliferar, a seleo negativa envolve a interao de timcitos duplamente positivos com complexos de autopeptdeos localizados nas clulas apresentadoras de antgenos do timo, o que leva esses timcitos morte por apoptose. medida que s timcitos sobreviventes se diferenciam, eles migram para a zona medular e tornam-se clulas helper CD4+ ou clulas citotxicas CD8+. Ao contrario da clulas T, cuja especificidade adquirida exclusivamente no timo, as clulas B adquirem suas especificidades no somente na medula ssea, mas tambm nos rgos perifricos, por um processo de maturao por afinidade, que modifica a afinidade e pode at modificar a especificidade do receptor da clula B. aps atravessarem a parede das vnulas pscapilares e sarem do timo, pelo sangue, os linfcitos T vo se estabelecer em certas reas de outros rgos linfoides, denominados secundrios ou perifricos. Essas reas so, portanto, timo-dependentes e esto representadas pela zona paracortical dos linfonodos, pelas bainhas periarteriais da polpa branca do bao e pelo tecido linfide frouxo situado entre os ndulos linftico das placas de Peyer e das tonsilas. O resto do tecido linfide contm linfcitos B e timo-independente. O timo, provavelmente por suas clulas reticulares epiteliais, produz vrios fatores de crescimento proticos que estimulam a proliferao e a diferenciao de linfcitos T, atuando localmente por secreo parcrina. O hormnio adrenocorticotrfico (ACTH) e os hormnios sexuais aceleram a involuo do timo, e a castrao tem efeito oposto. Linfonodos: so rgos encapsulados constitudos por tecido linfide e que aparecem espalhados pelo corpo. O parnquima do rgo sustentado por um arcabouo de clulas reticulares e fibras reticulares, sintetizadas por essas clulas. A circulao da linfa unidirecional. O parnquima do linfonodo apresenta a regio cortical e a regio medular, entre elas h a regio paracortical. A regio cortical superficial (predominncia de linfcitos B) constituda ndulos linfticos suja rea central, contm imunoblastos em diviso mittica e chamada de centro germinativo. A regio medular tambm formada principalmente por linfcitos B. Histofisiologia: os linfonodos so filtros da linfa, removendo partculas celulares estranhas, antes eu a linfa retorne ao sistema circulatrio sanguneo. A passagem da linfa pelo linfonodo remove, por fagocitose pelos macrfagos, cerca de 99% da molculas, microrganismos e clulas estranhas. Infeces e estmulos antignicos provocam a diviso mittica de imunoblastos, responsveis pelo aparecimento de reas menos coradas no centro dos ndulos linfticos denominados centros germinativos. Recirculao de linfcitos: um sistema de comunicao: os linfcitos deixam os linfonodos pelos vasos linfticos eferentes, que confluem com outros vasos linfticos, at se formarem os grandes linfticos, que desembocam em veias. Pelo sangue, os linfcitos retornam aos linfonodos atravs de vnulas de endotlio alto, presentes na regio paracortical. Os linfcitos possuem em suas membranas glicoprotenas para as quais h receptores nessas clulas endoteliais, eles migram, por diapedese, passando por entre as clulas endoteliais. Aps atravessarem as vnulas, os linfcitos caem no tecido

linftico e finalmente saem do linfonodo pelo vaso linftico eferente. O significado funcional da recirculao parece residir no fato de que os linfcitos estimulados podero partir para informar outros rgos linfticos, contribuindo para que o organismo prepare uma resposta imunitria mais geral e mais eficiente contra a infeco. A recirculao de linfcitos constitui num sistema de monitorizao constante de todas as partes do corpo. Bao: o maior acmulo de tecido linfide do organismo, um importante rgo de defesa contra microrganismos e o principal rgo destrudos de eritrcitos desgastados pelo uso. Por sua localizao na corrente sangunea, o bao responde com rapidez aos antgenos que invadem o sangue, sendo um importante filtro fagocitrio e imunolgico para o sangue e grande produtor de anticorpos. Circulao sangunea: ao deixarem as trabculas para penetrarem no parnquima, as artrias so imediatamente envolvidas por uma bainha de linfcitos, chamada bainha linftica periarterial. Esses vasos so chamados de artrias centrais ou artrias da polpa branca. Ao longo do seu trajeto a bainha fagocitria, que parte da polpa branca, se espessa diversas vezes, formando ndulos linfticos, nos quais o vaso (agora uma arterola) ocupa posio excntrica. Depois de deixar a polpa branca, as arterolas se subdividem, formando as arterolas peniciladas. Alguns amos da arterola penicilada apresentam, prximo sua terminao, um espessamento, o elipside, constitudo por macrfagos, clulas reticulares e linfcitos. Aos elipsides seguem-se capilares arteriais que levam sangue para os sinusides ou seios da polpa vermelha. Polpa branca: constituda pelo tecido linftico que constitui as bainhas periarteriais e pelos ndulos linfticos que se formam por espessamentos dessas bainhas (linfcitos T). Predominam os linfcitos B nos ndulos. Entre a polpa branca e a vermelha existe uma faixa mal determinada, denominada zona marginal que contm muitos antgenos trazidos pelo sangue e desempenha um importante papel na funo imunitria do bao (filtragem). Polpa vermelha: formada por cordes esplnicos separados por sinusides. Esses cordes so contnuos e de espessura varivel, constitudos por uma rede frouxa de clulas reticulares e fibras reticulares (colgeno tipo III) que contm outras clulas como macrfagos, linfcitos B e T, plasmcitos, moncitos, granulcitos, alm de plaquetas e eritrcitos. Histofisiologia: as funes mais conhecidas do bao so: a formao de linfcitos, a destruio de eritrcitos desgastados (hemocaterese), a defesa do organismo contra invasores e o armazenamento de sangue. A polpa branca do bao produz linfcitos, que migram para a polpa vermelha e atingem a luz dos sinusides, incorporando-se ao sangue a contido. As hemcias fagocitadas so digeridas pelos lisossomos do macrfagos e a hemoglobina desdobrada em diversos fragmentos, dando origem a um pigmento sem ferro, a bilirrubina. Esta devolvida ao sangue, captada pelas clulas hepticas e por estas excretada como um dos constituintes da bile. O ferro formado pelo desdobramento da hemoglobina pode ser imediatamente armazenado sob a forma de ferritina, ou passar para o sangue, onde se combinar com a transferrina. DEFESA: contendo linfcitos T e B e macrfagos, o bao um rgo de defesa importante. Do mesmo modo que os linfonodos filtram a linfa, o bao atua como um filtro para o sangue. De todos os macrfagos do organismo, os do bao so os mais ativos na fagocitose de partculas vivas e inertes que penetram no sangue. Tonsilas: esto localizadas em posio estratgica para defender o organismo contra antgenos transportados pelo ar e pelos alimentos, iniciando uma resposta imunitria. Existem as tonsilas: palatinas, faringianas e linguais.