Tcnicas de Esterilizao e Desinfeco Esterilizao: Em Microbiologia importante a esterilizao de meios, solues e material de vidro ou metal que se utiliza.

. Uma das formas de esterilizao obtem-se atravs do uso do Autoclave, para grandes quantidades de meios, ou de uma panela de presso, para pequenas quantidades de meios. Um produto microbiolgicamente estril quando no contem nenhuma forma de microrganismo vivo. A asspsia extremamente importante na microbiologia. Entende-se por asspsia todas as condies, gestos e atitutes tendentes a manterem o estado de ausncia de microrganismos contaminantes no meio em que actua. Alguns instrumentos de disseco como tesouras, pinas podem ser esterilizadas mergulhando em 70% de alcool (70 ml de etanol absoluto e 30 ml de gua destilada). O material contaminado, por exemplo as ansas que tocaram em cultura de bactrias, devem ser descontaminados atravs da chama de um bico de Bunsen, aparelho igualmente necessrio num laboratrio de microbiologia. As bocas de tubos contendo cultura de bactrias, as bocas de frascos de vidro contendo os meios de cultura, devem sempre que destapados ser chamuscados chama do Bunsen. Meios contaminados com as culturas de bactrias, devem ser descontaminados por autoclavagem, e em seguida despejados em sacos plsticos fortes. Placas de petri de plstico com culturas, bem como outro material de plstico utilizado, devem ser colocados em sacos de plstico e enviados para incinerao. O material de vidro contaminado por sua vez aps autoclavagem deve ser lavado com lexivia e detergente, passado por gua destilada e seco na estufa de secagem. As pipetas de vidro utilizadas no laboratrio devero ser imersas numa proveta de plstico grande contendo lexivia ou outro liquido desinfectante, e posteriormente lavadas e autoclavadas. As bancadas devem ser esterilizadas passando um lquido desinfectante, e idealmente o laboratrio deve ser isolado, ou ento o trabalho dever ser realizado dentro de uma cmara de fluxo laminar. Esterilizao por calor hmido: 1. Autoclavagem Faz-se atravs do autoclave cujo funcionamento idntico ao da panela de presso sendo a temperatura necessria para esterilizaao de 121oC, e o

tempo de esterilizao de cerca de 15 minutos. Este tempo de esterilizao dever ser aumentado quando se enche bastante o autoclave com meios para esterilizar. Objectivo: morte de todos os possiveis organismos vivos. As solues ao sair do autoclave esto estreis. Utiliza-se este tipo de esterilizao pelo calor hmido para meios de cultura e diversas solues. Existem vrios tipos de autoclaves verticais ou horizontais. 2. Tindalizao Este mtodo consiste numa esterilizao fraccionada em que o meio sofre 3 aquecimentos em 3 dias consecutivos, para destruio de formas vegetativas bacterianas que evoluem de esporos. Utiliza temperaturas inferiores a 100oC, e faz-se em banho-maria, onde se mergulham os frascos de meio a esterilizar hermticamente fechados, durante cerca de 1h, repetindo-se o tratamento em 3 dias consecutivos. Objectivo: eliminao de formas esporuladas, as quais germinam quando submetidas a temperaturas de 100oC, resultando desta germinao as formas vegetativas no resistentes a essa temperatura. 3. Pasteurizao: Esterilizao utilizando uma temperatura inferior a 100oC, geralmente 57 a 600C em banho-maria. Objectivo: eliminao de microrganismos sensveis ao calor, entre estes, estirpes patognicas, sem adulterao das qualidades do produto a pasteurizar. Esterilizao por calor seco Pode constar do processo de chamuscar o material chama do Bunsen, ou por um periodo prolongado numa estufa a 160oC por periodos de no minimo 45 minutos. Este tipo de esterilizao utilizado para material de vidro, para material de disseco, mas no muito efectivo contra aquelas bactrias e fungos que produzem esporos resistentes secura. Irradiao e Filtrao Outros mtodos de esterilizao incluem a irradiao e a filtrao. A filtrao especialmente utilizada para esterilizao de meios e solues. Unidades de filtrao (acetato) que podem ser posteriormente autoclavadas. Esterilizao Quimica Com substncias volteis, alcool etlico a 70%, com sais metlicos ou compostos orgnicos de metais, como mertiolato e mercurocromo, com halgeneos, como o cloro sob a forma de hipoclorito de clcio e o iodo, os cidos e lcalis aumentam a concentrao hidrogeninica do meio e aceleram a taxa de mortalidade dos microorganismos. Os compostos de

amnio quaternrios so atxicos e extremamente enrgicos sobre bactrias e virus. A glicerina em soluo a 50%, tem utilizao na perservao de alguns virus, que mantm a sua virulncia ou viabilidade nessa soluo. Os antibiticos so produtos orgnicos no bactericidas, mas bacteriostticos ou seja impedem a evoluo de germes. So geralmente produtos do metabolismo de fungos e alguns so produzidos por bactrias. Alguns exemplos de antibiticos: Bacteriostticos: Penicilina, Estreptomicina, Neomicina, Tetraciclina Fungostticos: Micostatina, Fungisone Compostos sulfonamdicos, sulfamidas, so tambm utilizados para bacteriostase em trabalhos de laboratrio. Manuseamento de Microrganismos Essencial, uma ansa de fio recto e outra redonda na ponta, feita de metal de niquel e crmio, por exemplo. Tambm se utilizam ansas de material plstico de usar e deitar fora, cotonetes (swabs). Para cultura de microorganismos em meio slido, utilizam-se caixas de petri de plstico ou vidro, as primeiras so deitadas fora aps o uso, e as segundas podem ser reutilizadas aps descontaminao por autoclavagem. Os meios liquidos e os meios de conservao de microorganismos esto contidos em tubos de ensaio de vidro com tampas de algodo cardado ou rolha de cortia embebida em parafina (demonstrar com algodo hidrfilo como se faz uma rolha e se coloca no tubo de ensaio). Bibliografia de apoio: Penn, C (1991). Chapter 1. Equipment and materials; Chapter 5. Sterility and aseptic technique. In Handling Laboratory Microorganisms, Open University Press, Philadelphia: 5-25 e 41-48 pp. DIFCO Manual, Section 1: 12-16.