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Alendronato de Sódio Metodologias para Análise Quantitativa
Alendronato de Sódio Metodologias para Análise Quantitativa
5, 852-858, 2005
Reviso
SODIUM ALENDRONATE: METHODS FOR ANALYTICAL QUANTITATION. This paper presents a review of some published
proposals for the analysis of sodium alendronate. The drug is an aminobisphosphonate compound used to inhibit the osteoclastic
resorption of bone, and different methods were developed for its quantitative determination. These methodologies employed reversedphase or ion-exchange HPLC analysis, both associated with different detectors: UV and fluorescence detection after derivatization
of the drug, conductivity and refractive index detectors, as well as the indirect UV detection. Titrimetry and spectrophotometry
(with previous complexation of the drug), which are simpler procedures, were also described, but they showed poor specificity
when compared to liquid chromatography.
Keywords: sodium alendronate; HPLC analysis; derivatization.
INTRODUO
O alendronato de sdio um frmaco pertencente a um grupo
de compostos denominados de bisfosfonados. Estas substncias
apresentam em comum dois grupos fosfricos em sua estrutura
molecular, possuindo grande afinidade pela matriz ssea humana e
capacidade de inibir sua reabsoro. Por esta razo, so amplamente utilizados no tratamento de desordens relacionadas ao tecido sseo, como o caso da osteoporose.
Apesar da crescente produo industrial do frmaco, apenas recentemente foi lanada monografia analtica do alendronato de sdio
em uma farmacopia1 (farmacopias so compndios oficiais para
anlise de frmacos e medicamentos). As demais obras internacionais
desta categoria, nas suas ltimas edies, ainda no contm metodologia
recomendada para anlise quantitativa do alendronato de sdio.
Tendo em vista a necessidade de se adotar uma metodologia analtica adequada para controle da qualidade do frmaco em questo, vrios
estudos propondo mtodos para sua determinao quantitativa foram
publicados. Grande parte das metodologias utiliza, para determinao
do alendronato e de outros bisfosfonados semelhantes, a cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE), seja em fase reversa ou por troca
inica, associada a diversos mtodos de deteco e, freqentemente,
emprega a derivatizao da substncia. Alm destes esto descritos, em
menor nmero, mtodos mais simples para determinao do alendronato,
tais como a espectrofotometria e a titulometria. Procedimentos utilizando tcnicas menos empregadas no controle da qualidade de medicamentos, como o plasma de acoplamento indutivo e a voltametria de
redissoluo andica, tambm foram publicados. Algumas destas propostas sero apresentadas e discutidas nesta reviso.
DESCRIO DO FRMACO
Caractersticas farmacolgicas
O osso o principal rgo envolvido na sustentao do organismo e constitudo por uma matriz formada de vrios componentes (entre eles clcio, fosfato e fibras colgenas), que conferem
rigidez e certa maleabilidade a este tecido. Assim como outros te*e-mail: volpato@pharma.ufrj.br
cidos do corpo, o osso se mantm em constante renovao, possuindo clulas como os osteoblastos, responsveis pela sntese e deposio de material protico na matriz, e os osteoclastos, os quais
secretam enzimas e substncias cidas, que digerem a matriz e
determinam sua reabsoro. Quando o equilbrio do processo de
renovao ssea afetado, a estrutura dos ossos pode ser prejudicada, resultando no aparecimento de doenas como osteoporose e
doena de Paget2.
Vrios frmacos vm sendo utilizados na preveno e no tratamento das desordens relacionadas ao processo de remodelagem
ssea, destacando-se entre estes um grupo de compostos denominados de bisfosfonados.
Um dos primeiros bisfosfonados a ser sintetizado foi o cido
etano-1-hidroxi-1,1-bisfosfnico (etidronato), cujo principal objetivo era ser utilizado como aditivo em detergentes. Mas logo foram
observados seus efeitos fisiolgicos, como a capacidade de inibir a
reabsoro ssea. A partir desta observao, iniciaram-se pesquisas para sntese de diversos outros bisfosfonados e avaliao de
seus efeitos fisiolgicos3.
O alendronato de sdio um potente inibidor especfico da
reabsoro ssea mediada por osteoclastos. O mecanismo de ao
dos bisfosfonados pode estar relacionado capacidade de se fixarem na matriz ssea, sendo assimilados pelos osteoclastos e, em
seguida, inibindo sua ao. Sabe-se que, em solues de fosfato de
clcio, so capazes de retardar a formao e a dissoluo dos cristais de hidroxiapatita ([Ca3(PO4)2]3 . Ca(OH)2), os quais, no organismo, se incorporam matriz ssea, conferindo ao osso a dureza
necessria para sua resistncia compressional2,4.
Desta forma, o frmaco indicado para preveno e tratamento da osteoporose (doena caracterizada por uma taxa de reabsoro
ssea maior que a de formao e associada ps-menopausa nas
mulheres), no controle da hipercalcemia associada ao neoplasma
maligno do osso e no controle da remodelagem ssea desordenada
que ocorre na doena de Paget4,5.
Em relao ao etidronato, o alendronato possui a vantagem de
no inibir acentuadamente a mineralizao ssea, embora possua a
capacidade de inibir sua reabsoro. Sendo assim, o alendronato
no apresenta o mesmo risco de desenvolvimento de osteomalcia,
como no caso de tratamento prolongado com o etidronato4. Por
outro lado, pode gerar algumas reaes adversas, tais como
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Ribeiro e Volpato
centando ao frmaco (diludo em soluo de cido ctrico) quantidade apropriada de uma soluo recm-preparada de FMOC em
acetonitrila. A concentrao de cido ctrico importante, pois o
citrato atua como um quelante de ons metlicos, evitando a
complexao do alendronato com metais e permitindo a reao
com FMOC. Tambm foi observada a relao entre o tempo de
reao e a quantidade de produto obtido, sendo necessrio um tempo mnimo de 20 min para que a reao seja completa. A reao de
derivatizao ocorre conforme apresentado na Figura 3, onde o
FMOC reage com o nitrognio da amina primria do alendronato.
Figura 3. Reao de derivatizao do alendronato (a) com 9fluorenilmetilcloroformato (FMOC) (b), originando produto cromforo (c)
passvel de deteco no UV. Adaptada da ref. 17
Quim. Nova
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1
0,88
0,94
1
0,88
0,93
FTC = feniltiocianato; Contra-ons: TEA = tetraetilamnio, THA = tetraexilamnio, TOA = tetraoctilamnio. Adaptada da ref. 26.
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Ribeiro e Volpato
Al3+-alendronato + morin
O complexo formado pelo alendronato e o alumnio no fluorescente e o morin sem a complexao com o Al3+ torna-se menos
fluorescente, o que ocasiona decrscimo na fluorescncia emitida
pela fase mvel. Esta diminuio na leitura da fluorescncia emitida proporcional concentrao de alendronato que elui da coluna. O LD encontrado foi de 10 ng na coluna3.
Encontra-se tambm, na literatura, estudo para caracterizao do alendronato onde se emprega a CLAE-TI e deteco por
espectrometria de massas com electrospray33.
Mtodos espectrofotomtricos
A utilizao do mtodo espectrofotomtrico na determinao
quantitativa de um frmaco pode ser muito conveniente em algumas situaes, considerando-se a simplicidade, rapidez e baixo custo
proporcionados por este tipo de anlise. No entanto o alendronato
de sdio, assim como alguns outros compostos bisfosfnicos, no
possui grupamentos cromofricos em sua estrutura, o que impede
sua anlise por tcnicas espectrofotomtricas convencionais.
Os compostos bisfosfonados so capazes de atuar como
quelantes de ons metlicos, devido propriedade ligante conferida
pelo grupamento hidroxila34. Observando esta capacidade, Ostovic
e colaboradores35 realizaram um estudo onde foi analisada a formao de um complexo cromforo entre o alendronato e ons
cpricos (Cu2+). Foi avaliada a cintica da reao de formao do
Quim. Nova
na presena do laranja de xilenol e o ponto final da titulao caracterizado pela viragem do indicador a uma cor vermelho-violcea39.
A volumetria de neutralizao tambm foi proposta para determinao do alendronato de sdio em formulaes farmacuticas,
aproveitando as propriedades cidas da molcula40. Foi utilizado
como titulante NaOH 0,1 e 0,05 mol/L para anlise de matriaprima e produto acabado, respectivamente. Segundo os autores, o
mtodo mostrou-se preciso e exato, porm, na anlise de uma formulao sob forma de comprimidos foi observada interferncia
dos excipientes. H tambm registros no publicados em meios
cientficos, provenientes principalmente de empresas produtoras
do frmaco, onde vem sendo utilizada a titulao cido-base para
determinao quantitativa do alendronato de sdio11,12. O mtodo,
entretanto, precisa ser melhor avaliado no que se refere
seletividade, quando da presena de impurezas de carter cido na
matria-prima.
Outros mtodos
Metodologias menos comuns na rotina laboratorial farmacutica tambm foram empregadas para determinao do alendronato
de sdio, tais como a Eletroforese Capilar (EC), Plasma de
Acoplamento Indutivo ou ICP (Inductively Coupled Plasma) e a
Voltametria de Redissoluo Andica ou ASV (Anodic Stripping
Voltammetry).
Eletroforese capilar (EC)
A eletroforese capilar um mtodo de separao bastante eficiente e que vem sendo utilizado cada vez mais na anlise de produtos farmacuticos. Sua aplicao voltada, principalmente, para
anlise de molculas carregadas eletricamente, o que torna este
mtodo bastante atraente para determinao dos compostos
bisfosfonados, j que estes possuem carga negativa. O uso da EC
apresenta algumas vantagens em relao CLAE, tais como elevada eficincia, alta resoluo, rapidez no desenvolvimento dos mtodos, reduzido consumo de solvente e menor volume de amostra
utilizada (este ltimo, s vezes, tornando-se uma desvantagem face
exigncia de deteco sensvel).
Tsai e colaboradores34 desenvolveram uma metodologia para determinao do alendronato de sdio utilizando a EC como mtodo de
separao. Foi utilizado tubo capilar de slica, no revestido, com soluo composta por uma mistura de HNO3 1,6 mmol/L e sulfato cprico
(CuSO4 2 mmol/L) e empregou-se a deteco direta do complexo formado entre alendronato e cobre (presente na soluo eletroltica), por
ultravioleta. Este mtodo apresentou algumas vantagens em comparao a dois outros mtodos utilizando CLAE (um com CLAE-FR e
deteco por UV e outro com CLAE-TI e deteco por condutividade),
tais como maior eficincia de separao, maior simplicidade e rapidez no preparo da amostra e consumo extremamente reduzido de fase
mvel. Contudo, a dificuldade dos autores em selecionar um padro
interno adequado resultou, como conseqncia, em menor preciso
do mtodo (DPR 2 5%)34.
Outros mtodos onde a EC utilizada para determinao de
compostos bisfosfonados foram descritos e empregam tanto a
deteco direta por UV como a deteco por espectrometria de
massas com electrospray41-43.
Plasma de acoplamento indutivo (ICP)
O ICP um mtodo que utiliza o plasma como fonte de excitao para emisso atmica e pode estar associado a mtodos de
deteco como a Espectroscopia de Emisso tica ou a
Espectrometria de Massas. Apesar de no ser um mtodo de uso
comum na rotina laboratorial, seu emprego na anlise de substn-
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Ribeiro e Volpato
CONSIDERAES FINAIS
Ao longo dos anos 90 foram publicadas diversas metodologias
analticas para determinao quantitativa do alendronato de sdio, a
maioria delas empregando a cromatografia lquida de alta eficincia.
A CLAE-FR, associada a diferentes formas de deteco (principalmente ultravioleta e fluorescncia), apresentou os melhores
resultados quanto sensibilidade, com limites de quantificao de
at 1 ng/mL, mostrando-se, portanto, bastante adequada para determinao do alendronato em matrizes biolgicas, considerandose a biodisponibilidade extremamente reduzida deste frmaco. No
entanto, como a molcula no apresenta absoro na regio do UV
ou capacidade de emitir fluorescncia, deve sofrer derivatizao
previamente deteco, com procedimentos extensivos, tornando
a execuo complexa e demorada.
As metodologias empregando a CLAE-TI parecem ser de execuo mais simples e mostraram-se alternativas adequadas para
determinao de um composto inico, como o alendronato, em
formulaes. No entanto, alguns detectores utilizados nas anlises
com CLAE-TI so menos comuns nos laboratrios e podem ser de
difcil manuseio. Alm disto, apresentaram sensibilidade reduzida
em relao aos mtodos com CLAE-FR, sendo o menor limite de
quantificao alcanado de 0,4 g/mL. A deteco indireta por
ultravioleta utiliza detector de uso mais comum e requer procedimentos mais simples, mas fornece elevado limite de deteco, prejudicando a sensibilidade do mtodo.
Tcnicas menos empregadas na rotina laboratorial farmacutica tambm mostraram-se adequadas para determinao do
alendronato em formulaes. O plasma de acoplamento indutivo
de execuo simples, a voltametria de redissoluo andica apresentou elevada sensibilidade e a EC, boa resoluo dos picos. A
principal desvantagem destes procedimentos a utilizao de equipamentos menos comuns quando comparados CLAE.
A espectrofotometria e a titulometria constituem mtodos mais
simples para determinao do alendronato, mas poucos estudos
envolvendo estas metodologias foram encontrados na literatura.
Normalmente, apresentam limitaes quanto especificidade, podendo apresentar erros resultantes da presena de impurezas e produtos de degradao, alm de serem mtodos pouco sensveis. Ainda
assim, alguns laboratrios utilizam a volumetria de neutralizao
para as anlises do controle de qualidade do frmaco.
Assim, a anlise quantitativa de compostos bisfosfnicos, como
o alendronato, necessita maiores estudos, no apenas visando o
desenvolvimento de novos mtodos, mas tambm documentando
cientificamente metodologias no oficiais, rotineiramente empregadas nos laboratrios farmacuticos que, mostrando-se adequadas e validadas, poderiam ser adotadas pela Farmacopia Brasileira ou compndios oficiais estrangeiros.
AGRADECIMENTOS
CAPES pela bolsa de mestrado recebida por A. F. Ribeiro.
REFERNCIAS
1. Farmacopia Portuguesa VII; 7 ed., Instituto Nacional da Farmcia e do
Medicamento: Lisboa, 2002 (CD-ROM).
2. Guyton, A. C.; Fisiologia Humana, 6 ed., Guanabara Koogan: Rio de
Janeiro, 1988, cap. 36.
3. Lovdahl, M. J.; Pietrzyk, D. J.; J. Chromatogr., A 1999, 850, 143.
4. Marcus, R. Em As Bases Farmacolgicas da Teraputica; Hardman, J. G.;
Limbird, L. E.; Molinoff, P. B.; Ruddon, R. W.; Gilman, A. G., eds.; 9
ed., McGraw-Hill: Rio de Janeiro, 1996, cap. 61.
Quim. Nova