APOSTILA Boas Práticas Lab

Rede PARF Documento Tcnico N 11
Rede Pan-Americana da Harmonizao

de Regulamentao Farmacutica
Grupo de Trabalho em Boas Prticas de Laboratrio
Boas prticas da OMS para laboratrios de microbiologia farmacuticas
Boas prticas da OMS para laboratrios

de microbiologia farmacutica
Traduzido de: World Health Organization. Annex 2: WHO good practices
for pharmaceutical microbiology laboratories. En: WHO Expert Committee
on Specifications for Pharmaceutical Preparations: forty-fifth report.
Geneva: World Health Organization; 2011. (WHO technical report series; 961).
Rede Pan-Americana de Harmonizao


Washington, DC
Janeiro 2013
Edio original em ingls: Annex 2: WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories. En: WHO Expert Committee
on Specifications for Pharmaceutical Preparations: forty-fifth report. Geneva: World Health Organization; 2011. (WHO technical report
series; 961). World Health Organization, 2011
Organizao Mundial da Sade
Boas prticas da OMS para laboratrios de microbiologa farmacutica. Washington, DC: OPS, 2012.
(Rede PARF Documento Tcnico N 11).
Organizao Mundial da Sade, 2012. Todos os direitos reservados.

A edio em portugus foi realizada pela Organizao Pan-Americana da Sade, rea de Sistemas de Salud basados en Atencin
Primaria de Salud.
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Todas as precaues razoveis foram tomadas pela Organizao Pan-Americana da Sade para confirmar as informaes contidas
na presente publicao. No entanto, o material publicado distribudo sem garantias de qualquer tipo, sejam elas explcitas ou implcitas. A responsabilidade pela interpretao e uso do material cabe ao leitor. Em nenhuma hiptese a Organizao Pan-Americana
da Sade dever ser responsabilizada por danos resultantes do uso do referido material.
Sumrio
Agradecimentos............................................................................................................................v
Antecedentes .............................................................................................................................. vi
Histrico...................................................................................................................................... vii
Introduo e escopo do documento............................................................................................viii
Glossrio...................................................................................................................................... ix
Boas prticas da OMS para laboratrios de microbiologia farmautica.......................................1
1. Pessoal..............................................................................................................................1
2. Ambiente ...........................................................................................................................1
3. Validao dos mtodos .....................................................................................................4
4. Equipamento......................................................................................................................5
5. Reagentes e meios de cultura...........................................................................................7
6. Materiais de referncia e culturas de referncia ............................................................10
7. Amostragem.................................................................................................................... 11
8. Manuseio e identificao das amostras.......................................................................... 11
9. Descarte de resduos contaminados...............................................................................12
10. Garantia da qualidade dos resultados e controle da qualidade do desempenho............12
11. Procedimentos do teste...................................................................................................12
12. Relatrios de ensaio........................................................................................................12
Referncias...........................................................................................................................13
Apndice 1:
Exemplos de reas (ambientes) em que as atividades operacionais podem ser realizadas .....15
Apndice 2:
Exemplos de manuteno dos equipamentos............................................................................17
Apndice 3:
Exemplo de intervalos de calibrao para diferentes equipamentos..........................................19
Apndice 4:
Exemplos de qualificao dos equipamentos e monitoramento.................................................21
Apndice 5:
Uso geral das culturas de referncia...........................................................................................23
Boas
prticas da
OMS
para laboratrios de microbiologia farmacutica
iii
Agradecimentos
A verso em Portugus do documento WHO Technical Report Series, No. 961, 2011, Anexo 2 foi realizada pelo grupo do Brasil ANVISA, INCQS, e FUNED:
Maria do Ceu Borralho e Albuquerque - Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA)
Reginelena Ferreira da Silva - Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade (INCQS)
Amlia Soares Santana - Fundao Ezequiel Dias (FUNED)
Roberta de Matos Caetano - Fundao Ezequiel Dias (FUNED)
Integrantes do Grupo de Trabalho de Boas Prticas de Laboratrio (GT/BPL):

Membros titulares
Mara Gloria Olate, LNC - ISP/Chile, Coordenadora
Ofelia Villalba, CNCC - INS/Peru
Nilka M. Guerrero, IEA/Panam
Lucette Cargill, CRDTL/Jamaica
Sigrid Mathison, MSP/Uruguai
Damian Cairatti, USP/United States Pharmacopeia
Thomas Schultz, FIFARMA
Membros alternos
Olga Gruc, INAME-ANMAT/Argentina
Ana Lara Sterling, CECMED/Cuba
Observadores
Rosalba Alzate, Univ. de Antioquia/Colmbia
Ruben Szyszkowsky, Univ. de Buenos Aires/Argentina
Carlos Saldarriaga Alzate, Univ. de Antioquia/Colmbia
Milagros Real Prez, Instituto Nacional de Salud/Peru
Catalina Massa, Univ. de Crdoba/Argentina
Secretariado
Jos M. Parisi OPS-OMS/Washington, DC
Boas
prticas da
OMS
Antecedentes
O Grupo de Trabalho de Boas Prticas de Laboratrio (GT/BPL) criado em junho de ano 2005 por recomendao da IV Conferncia Pan-Americana para a Harmonizao da Regulamentao Farmacutica
(Rede PARF), tem trabalhado desde ento para o fortalecimento do desempenho dos laboratrios de controle, a fim de assegurar que os medicamentos cumpram as normas internacionais de qualidade e sejam
seguros e eficazes. O cumprimento das recomendaes providas pela OMS proporciona a harmonizao
das boas prticas, a cooperao entre laboratrios e o reconhecimento mtuo de resultado. Alm disso,
permite que os laboratrios alcancem a pr-qualificao OMS, pela qual passam a ser laboratrios de
referncia para as Agncias das Naes Unidas que requeiram seus servios.
vi
Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11
Histrico
O Comit de Especialistas da OMS sobre Especificaes para Preparaes Farmacuticas adotou em
2009 uma verso revisada das Good practices for pharmaceutical quality control laboratories (1).
Durante as inspees de pr-qualificao, os inspetores haviam notado que alguns dos textos precisavam de um guia adicional, especialmente com foco em microbiologia.
Em face ao disposto, o Comit de Especialistas recomendou que a Secretaria da OMS elaborasse um
novo texto sobre boas prticas farmacuticas para os laboratrios de microbiologia.
O texto a seguir se prope a atender as especificaes deste tipo de laboratrio.
Boas
prticas da
OMS
vii
Introduo e escopo do documento

Os laboratrios de microbiologia farmacutica podem estar envolvidos em:
teste de esterilidade;
deteco, isolamento, enumerao e identificao de micro-organismos (bactrias, leveduras e
bolores), testes de endotoxinas bacterianas em diferentes materiais (por exemplo, matrias primas,
gua), produtos, superfcies, vesturio e ambiente, e
ensaio utilizando micro-organismos como parte do sistema teste.
Essas diretrizes dizem respeito a todos os laboratrios de microbiologia envolvidos nas atividades mencionadas anteriormente, sejam elas independentes, um departamento ou unidade de uma instalao de
fabricao de produtos farmacuticos.
Essas diretrizes so baseadas e complementam os requisitos descritos nos documentos Good practices
for pharmaceutical quality control laboratories (1); General guidelines for the establishment, maintenance
and distribution of chemical reference substances. Revision (2); The International Pharmacopoeia,Fourth
Edition (3); First Supplement to The International Pharmacopoeia, Fourth Edition (4); e ISO/IEC 17025 (5).
viii
Glossrio
calibrao
Conjunto de operaes que estabelece, sob condies especficas, a relao entre os valores indicados
por um instrumento ou sistema de medio (especialmente de pesagem), registro e controle ou os valores
representados pela medida de um material, com os correspondentes valores conhecidos de um padro de
referncia. Devem ser estabelecidos os limites de aceitao para os resultados da medio.
cepas de referncia
Micro-organismos definidos pelo menos para o gnero e espcie, catalogadas e descritas de acordo com
suas caractersticas e, de preferncia que ateste a origem (6). Normalmente so obtidos a partir de uma
coleo reconhecida nacional ou internacionalmente.
culturas de referncia
Termo coletivo para as cepas de referncia e os estoques de referncia.
cultura de trabalho
Subcultura primria a partir de uma cultura estoque de referncia (6).
especificidade (seletividade)
A capacidade do mtodo para detectar o(s) micro-organismo(s) especfico(s) que pode(m) estar presente(s)
na amostra de teste.
estoque de referncia
Um conjunto de culturas distintas idnticas obtidas por uma subcultura nica a partir da cepa de referncia
(6).
limite de deteco
O menor nmero de micro-organismos que podem ser detectados, mas em nmeros que no podem ser
estimados com exatido.
limite de quantificao
Aplicados a testes microbiolgicos quantitativos. O menor nmero de micro-organismos dentro de uma
variabilidade definida que pode ser determinada sob condies experimentais do mtodo em avaliao.
material de referncia
Material suficientemente homogneo e estvel com relao a uma ou mais propriedades especficas, as
quais foram estabelecidas para uso definido em um processo de medio.
material de referncia certificado
Material de referncia, caracterizado por um procedimento metrologicamente vlido para uma ou mais
propriedades especificas acompanhado por um certificado que fornece o valor da(s) propriedade(s)
especifica(s), sua(s) incerteza(s) associada(s) e uma declarao da rastreabilidade metrolgica. O limite
de aceitao dos resultados deve ser estabelecido.
mtodo de referncia
Mtodo que foi validado como sendo adequado ao uso e que pode ser comparado a um mtodo alternativo.
Boas
prticas da
OMS
ix
preciso
O grau de concordncia entre os resultados individuais.
repetitividade
Grau de concordncia entre os resultados de medies sucessivas da mesma medida e nas mesmas
condies de medio (Adaptado da ISO).
reprodutibilidade
Reprodutibilidade expressa a preciso entre laboratrios.
robustez
Capacidade do processo para fornecer os resultados analticos de aceitvel exatido e preciso sob uma
variedade de condies.
sensibilidade
A frao do nmero total de culturas positivas ou colnias corretamente identificadas no ensaio presuntivo
(7).
validao
Ao de provar, de acordo com os princpios dos guias de boas prticas da qualidade diretrizes e regulamentos (GxP - Boas Prticas), que qualquer procedimento, processo, equipamento (incluindo o software
ou hardware utilizado), material, atividade ou sistema so adequados para um uso pretendido.
verificao
Aplicao de mtodos, procedimentos, testes e outras avaliaes, alm do monitoramento para determinar a conformidade com os princpios de Boas Prticas de Laboratrio (GxP).
Boas prticas da OMS para laboratrios de

microbiologia farmautica
1. Pessoal
1.1
Os testes microbiolgicos devem ser realizados e supervisionados por uma pessoa experiente, qualificada em microbiologia ou equivalente. O pessoal deve ter formao bsica em
microbiologia e experincia prtica relevante antes de ser autorizado a executar o trabalho
abrangido pelo escopo analtico microbiolgico.
1.2
Descries atualizadas do trabalho devem ser disponibilizadas para todo o pessoal envolvido
nos testes ou calibraes, validaes e verificaes. O laboratrio deve manter registros de
todo o pessoal tcnico, descrevendo as suas qualificaes, treinamento e experincia.
1.3
Caso o laboratrio inclua opinies e interpretaes dos resultados dos testes em relatrios,
isso deve ser feito por pessoal autorizado, com experincia adequada e conhecimentos relevantes incluindo, por exemplo, conhecimento dos requisitos regulatrios, tecnolgicos, critrios de aceitao e aplicao especfica.
1.4
A gerncia do laboratrio deve garantir que todo o pessoal tenha recebido treinamento adequado para o desempenho competente de ensaios e operao de equipamentos. Isto inclui
treinamento em tcnicas bsicas, por exemplo, tcnica de plaqueamento, contagem de colnias, tcnica assptica, preparao de meios de cultura, diluies em srie e tcnicas bsicas
em identificao, com critrio de aceitao se for o caso. O pessoal somente pode realizar ensaios se for reconhecidamente competente para faz-lo ou se estiver sob superviso adequada. A competncia deve ser monitorada continuamente com previso de reciclagem quando
necessrio. Quando um mtodo ou tcnica no for de uso constante, pode ser necessrio a
verificao do desempenho do pessoal previamente realizao dos ensaios. Em alguns casos, pode ser mais apropriado capacitar o analista para a realizao de uma tcnica ou para o
uso de um instrumento especfico, ao invs de capacit-lo execuo de um mtodo analtico
completo. Em algumas situaes aceitvel relatar a competncia para a realizao de uma
tcnica geral ou instrumento utilizado ao invs de mtodos especficos.
1.5
O pessoal deve ser treinado em procedimentos necessrios para a conteno de micro-organismos dentro das instalaes do laboratrio.
1.6
O pessoal deve ser treinado para manusear com segurana os micro-organismos.
2. Ambiente
2.1 Dependncias
2.1.1
O laboratrio de microbiologia e certos equipamentos que do suporte (por exemplo,

autoclaves e vidrarias) devem ser de uso especfico e separados das outras reas,
especialmente das reas de produo.
2.1.2
Laboratrios de Microbiologia devem ser projetados para atender s operaes a serem realizadas nos mesmos. Devem ter espao suficiente para todas as atividades
a fim de prevenir contaminao e contaminao cruzada. Devem ter espao adequado para guarda de amostras, micro-organismos de referncia, meios de cultura
Boas
prticas da
OMS
(se necessrio, com refrigerao) , anlises e registros. Devido natureza de alguns

materiais (por exemplo, meios estreis, micro-organismos de referncia ou culturas
incubadas) necessrio separar os locais de armazenamento.
2.1.3
Os laboratrios devem ser adequadamente projetados e devem levar em conta a adequao dos materiais de construo para permitir limpeza adequada, desinfeco e
minimizar os riscos de contaminao.
2.1.4
Deve haver fornecimento de ar separado para laboratrios e para reas de produo.

Unidades de gerenciamento e tratamento de ar, incluindo controle de temperatura e
umidade, quando necessrios, devem ser instalados separadamente para os laboratrios de microbiologia. O ar fornecido ao laboratrio deve ser de qualidade adequada
e no deve ser uma fonte de contaminao.
2.1.5
O acesso ao laboratrio de microbiologia deve ser restrito ao pessoal autorizado. O

pessoal deve ser informado quanto ao que segue:
procedimentos apropriados para entrada e sada, incluindo a vestimenta e entrada
de materiais;
destinao de uso para reas especficas;
restries impostas ao trabalho dentro dessas reas;
as razes para a existncia de tais restries, e
nveis de conteno adequados.
2.2
2.1.6
Atividades do laboratrio, tais como a preparao da amostra, preparao de meio

de cultura, equipamentos e contagem de micro-organismos, devem ser realizadas em
espaos ou pelo menos em tempos diferentes, de modo a minimizar os riscos de contaminao cruzada, resultados falso-positivos e falso-negativos. Onde so utilizadas
reas no exclusivas, os princpios de gesto de risco devem ser aplicados. Testes de
esterilidade devem ser realizados sempre em uma rea especfica.
2.1.7
Deve-se considerar a adequao da planta para a classificao das reas e operaes a serem desempenhadas dentro do laboratrio de microbiologia. A classificao
deve ser baseada na criticidade do produto e operaes realizadas na rea. Deve- se
realizar o teste de esterilidade sob a mesma classe utilizada para operaes estril/
assptica de produo. O Apndice 1 mostra as recomendaes para as reas de
classificao.
2.1.8
Em geral, equipamentos de laboratrio no devem ser rotineiramente movidos entre

reas de diferentes classes de limpeza para evitar contaminao cruzada. Equipamento de laboratrio de microbiologia no deve ser utilizado fora da rea, a menos
que haja precaues especficas para prevenir a contaminao cruzada.
Monitoramento ambiental do laboratrio

2.2.1
2.3
Quando necessrio (por exemplo, em reas de teste de esterilidade) deve haver um

programa de monitoramento ambiental apropriado que cubra, por exemplo, a utilizao de monitoramento do ar ativo (impactao do ar), exposio de placas ou placas
de contato, temperatura e diferencial de presso. Devem ser definidos limites de alerta
e ao. Deve- se identificar as tendncias dos resultados do monitoramento ambiental.
Limpeza, Desinfeco e Higiene
2.4
2.3.1
Deve haver um programa de limpeza e desinfeco documentado. Os resultados do

monitoramento ambiental devem ser considerados quando relevantes.
2.3.2
Deve haver um procedimento para lidar com os derramamentos.
2.3.3
Instalaes adequadas para lavagem e desinfeco das mos devem estar disponveis.
Instalaes do teste de esterilidade

2.4.1
Instalaes utilizadas para a realizao de testes de esterilidade devem atender a

requisitos especficos a fim de garantir a integridade dos testes. WHO good manufacturing practices (GMP) for sterile pharmaceutical products (8) exige a realizao de
testes de esterilidade e traz requisitos especficos. Essa seo fornece detalhes dos
requisitos de instalao da sala limpa para o teste de esterilidade.
2.4.2
O teste de esterilidade deve ser realizado sob condies asspticas para o qual deve
estabelecer padres de qualidade do ar assptico requerido para a fabricao de produtos farmacuticos. As premissas, servios e equipamentos devem estar sujeitos a
processos de qualificaes adequados.
2.4.3
O teste de esterilidade deve ser efetuado dentro de uma zona de fluxo de ar unidirecional protegido de classe A ou cabine de segurana biolgica (certificada), que deve
estar localizada dentro da sala limpa circundada com classe B. Como alternativa, os
testes podem ser efetuados dentro de um isolador de barreira. Deve-se tomar cuidado
com o projeto do layout de instalaes e padres do fluxo de ar ambiente, para garantir que os padres de fluxo de ar unidirecional no sejam interrompidos.
2.4.4
A classificao de salas limpas e equipamentos de tratamento de ar das instalaes

do teste de esterilidade devem ser requalificados, pelo menos anualmente por pessoal competente do laboratrio ou contratado. Deve-se respeitar os limites de partculas
no-viveis e viveis do ambiente, executar a verificao da integridade do filtro de
ar de alta eficincia de partculas (HEPA) e fluxos de ar ambiente. De qualquer modo
uma frequncia alternativa do monitoramento pode ser justificada com base no Quality
Risk Management (QRM). O mapeamento dos locais dos pontos de amostragem para
monitoramento de rotina deve ser documentado, bem como a durao da exposio e
a freqncia de todos os tipos de monitoramento ambiental microbiolgico devem ser
especificados em procedimentos descritos.
2.4.5
O ar para as instalaes de classe A e B deve ser fornecido atravs de filtros terminais

HEPA.
2.4.6. Instrumentos indicadores, alarmes para fluxos de ar e diferenciais de presso devem

ser providenciados. (GMP: Heating, ventilation and air-conditioning systems for nonsterile pharmaceutical dosage forms (8); and GMP for sterile pharmaceutical products)
(8).
2.4.7
As leituras de presso da sala devem ser realizadas e registradas atravs de equipamentos montados externamente, a menos que um sistema validado de monitoramento contnuo da presso esteja instalado. Deve- se realizar e registrar as leituras, no
mnimo, para as entradas do operador na sala de teste. Os equipamentos de presso
para as reas devem ser identificados e suas especificaes definidas.
2.4.8
A entrada para a sala limpa deve ser atravs de sistema de antecmaras e oferecer
disponibilidade de ambiente para a troca, onde os operadores vistam roupas adequadas para a rea limpa. A ltima antecmara para troca da vestimenta deve ter quando
em repouso, a mesma classe da sala de anlise. O ambiente para troca da vestimenta
Boas
prticas da
OMS
deve ser de tamanho adequado para facilitar a troca. Deve existir demarcao clara
das diferentes reas.
2.4.9
O vesturio dos operadores para o teste de esterilidade deve estar de acordo com os
princpios da seo 10 do documento WHO GMP for sterile pharmaceutical products
(8). Os operadores devem ser treinados e certificados em procedimentos de paramentao e os registros de treinamento devem ser mantidos.
2.4.10 As conexes e acabamentos das instalaes devem cumprir seo 11 da WHO GMP
for sterile pharmaceutical products (8).
2.4.11 O monitoramento ambiental microbiolgico deve refletir a instalao utilizada ( sala ou
isolador) e incluir a combinao dos mtodos de amostragem do ar e superfcie como:
amostragem ativa do ar;
exposio de placas;
superfcie de contato;
replicata de placas para deteco e contagem de micro-organismos (RODAC),
swabs ou filmes flexveis;
luvas dos operadores.
O Monitoramento ambiental microbiolgico da rea de teste de esterilidade deve ser
realizado durante cada sesso de trabalho nas condies de funcionamento (dinmico).
As especificaes frente a contaminao microbiana devem estar descritas, incluindo os limites apropriados de alerta e ao. Os limites microbiolgicos para o monitoramento ambiental so dadas no WHO GMP for sterile pharmaceutical products (8).
3. Validao dos mtodos

3.1
Os testes farmacopicos normalizados so considerados validados. No entanto, o mtodo especfico a ser utilizado pelo laboratrio precisa ser demonstrado como adequado ao uso pela
recuperao de bactrias, leveduras e bolores na presena do produto especfico. O laboratrio deve demonstrar que o critrio de desempenho do mtodo normalizado atendido, antes
de introduzi-lo na rotina (mtodo de verificao) e que a especificao do mtodo adequada
para o produto (a demonstrao da adequao do mtodo inclui o uso de controles positivos
e negativos).
3.2
Os mtodos de ensaio no baseados em compndios ou outras referncias reconhecidas

devem ser validados antes da utilizao. A validao deve incluir, quando apropriado, determinao da exatido, preciso, especificidade, limite de deteco, limite de quantificao,
linearidade e robustez. Efeitos potencialmente inibitrios a partir da amostra deve ser levado
em conta quando testar diferentes tipos de amostras.
Os resultados devem ser avaliados com mtodos estatsticos adequados, por exemplo, conforme descritos em farmacopias nacionais, regionais ou internacionais.
4. Equipamento
Cada item de equipamento, instrumento ou outro dispositivo utilizado para testes, verificao e calibrao deve ser univocamente identificado.
Como parte do sistema da qualidade, o laboratrio deve ter documentado um programa de qualificao, calibrao, verificao do desempenho, manuteno e um sistema de monitoramento de uso
dos equipamentos.
4.1
Manuteno do equipamento
4.1.1
4.2
Qualificao
4.2.1
4.3
A manuteno de equipamentos essenciais devem ser realizadas em intervalos pr-determinados de acordo com um procedimento documentado. Registros detalhados
devem ser mantidos. (Para exemplos de manuteno de equipamentos e intervalos
ver Apndice 2).
Para qualificao dos equipamentos ver seo 8 e 12 em Good practices for pharmaceutical quality control laboratories (1).
Calibrao, verificao do desempenho e monitoramento de uso

4.3.1
A data de calibrao e manuteno e a data em que a recalibrao realizada deve

ser claramente indicada na etiqueta anexada ao instrumento.
4.3.2
A frequncia das calibraes e as verificaes de desempenho devem ser determinadas pelo histrico documentado do equipamento e baseadas na necessidade, tipo e
desempenho anterior do equipamento.
Os intervalos entre calibrao e verificao devem ser menores quando o equipamento mostrar tendncia para sair do limite de aceitao (para exemplos de intervalos para verificao da calibrao para diferentes equipamentos do laboratrio, ver
Apndice 3; e para qualificao e monitoramento de equipamentos, ver Apndice 4).
O desempenho dos equipamentos deve estar conforme critrios de aceitao pr-definidos.
4.3.3
Dispositivos para medio de temperatura

4.3.3.1
Quando a temperatura possuir efeito direto sobre o resultado de uma anlise, ou for critica para o desempenho correto do equipamento, os dispositivos medidores de temperatura, devem ser de qualidade adequada para
alcanar a exatido necessria (e.x termmetros liquido de vidro, termopares e termmetros com resistncia de platina, usados em incubadoras e
autoclaves).
4.3.3.2
A calibrao dos dispositivos deve ser rastreavl a padres nacionais e internacionais de temperatura.
4.3.4 Incubadoras, banhos de gua (banhos-maria) e fornos

A estabilidade da temperatura, a uniformidade de distribuio da temperatura e o
tempo necessrio para atingir condies de equilbrio em incubadoras, banhos de
gua, fornos e salas com temperaturas controladas devem ser inicialmente estabelecidos e documentados, principalmente em relao ao uso normal do equipamento
(por exemplo: posio, espao, e altura das pilhas das placas de petri). A manu-
Boas
prticas da
OMS
teno das caractersticas registradas durante a validao inicial dos equipamentos

deve ser verificada e registrada aps cada reparo ou modificao significativa.
As temperaturas de operao de cada equipamento devem ser monitoradas e os
registros armazenados. A utilizao do equipamento deve ser considerada ao determinar quais controles de temperatura so necessrios.
4.3.5
Autoclaves, incluindo preparadores de meios

4.3.5.1
Autoclaves devem ser capazes de atender o tempo e a temperatura especificados no procedimento; o monitoramento da presso por si s no
aceitvel. Sensores utilizados para controle ou monitoramento do ciclo de
operao necessitam de calibrao e o desempenho dos cronmetros deve
ser verificado.
4.3.5.2
A validao inicial deve incluir estudos sobre o desempenho (pesquisas de

distribuio espacial da temperatura) para cada ciclo de operao e cada
configurao de carga usada na prtica. Esse processo precisa ser repetido aps reparo ou modificao significativa (e.x mudana do programador, sonda do termorregulador, mudana de carga ou ciclo de operao) ou
quando indicado pelos resultados das verificaes do controle de qualidade
do meio de cultura ou gerenciamento de risco.
Sensores de temperatura devem ser posicionados em nmero suficiente
dentro da carga (e.x recipientes cheios com lquido/meios) de tal forma que
as diferentes localizaes possam ser demonstradas. No caso de preparadores de meios, em que o aquecimento uniforme no pode ser demonstrado de outra forma, o uso de dois sensores, um adjacente a sonda de
controle e o outro afastado desta, pode ser considerado apropriado.
Para a validao e a revalidao deve-se considerar os tempos de elevao e decrscimo da temperatura bem como o tempo efetivo da temperatura de esterilizao.
4.3.5.3
Devem-se fornecer instrues operacionais claras, com base nos perfis de

aquecimento determinados para usos especficos durante a validao/revalidao. Devem ser estabelecidos critrios de aceitao/rejeio e registros de operao de autoclaves incluindo temperatura e tempo mantidos em
cada ciclo.
4.3.5.4
O monitoramento pode ser realizado de uma das seguintes formas:

utilizao de um termopar e de um registrador para produzir um grfico
ou relatrio impresso;
observao direta e registro da temperatura mxima alcanada e tempo
nessa temperatura.
Alm do monitoramento direto da temperatura de uma autoclave, a eficincia de sua operao durante cada ciclo pode ser verificada pelo uso
de indicadores qumicos ou biolgicos para fins de esterilizao ou descontaminao. Tiras indicadoras ou fitas de controle de esterilizao para
autoclaves devem ser utilizadas somente para indicar que uma carga foi
processada e no so suficientes para demonstrar a concluso de um ciclo
aceitvel.
Os laboratrios devem ter uma autoclave de descontaminao separada.
No entanto, em casos excepcionais uma nica autoclave pode ser aceitvel desde que precaues sejam tomadas para separar cargas de descontaminao e esterilizao, e um programa documentado de limpeza no
local para lidar com o ambiente interno e externo da autoclave.
4.3.6
Pesos e balanas
Pesos e balanas devem ser calibrados de forma rastrevel em intervalos regulares
(de acordo com seu uso pretendido) utilizando peso padro apropriados rastreveis
e pesos padro certificados.
4.3.7
4.3.8
Equipamentos volumtricos
4.3.7.1
Os laboratrios de microbiologia devem realizar a verificao inicial dos

equipamentos volumtricos (dispensadores automticos, dispensadores/
diluidores, pipetas manuais mecnicas e pipetas descartveis) e devem
realizar verificaes regulares para garantir que os equipamentos estejam
operando dentro da especificao requerida. A verificao inicial pode no
ser necessria para vidraria que for certificada para uma tolerncia especfica. Os equipamentos devem ser verificados quanto exatido do volume
dispensado, em comparao com o volume pr estabelecido (para diversos
ajustes diferentes, no caso de instrumentos com volume varivel). A preciso dos volumes dispensados deve ser avaliada.
4.3.7.2
Para dispositivos volumtricos descartveis os laboratrios devem adquirir

os suprimentos de empresas com um sistema de qualidade reconhecido.
Aps a validao inicial da adequao do dispositivo, recomenda-se a execuo de verificaes aleatrias de exatido. Se o fornecedor no tiver um
sistema de qualidade reconhecido, os laboratrios devem verificar a adequao de cada lote do dispositivo.
Outros equipamentos
Medidores de condutividade, medidores de oxignio, medidores de pH e outros instrumentos similares devem ser verificados regularmente ou antes de cada uso. As
solues-tampo usadas para fins de verificao devem ser guardadas em condies apropriadas e devem ser identificadas com uma data de validade.
Quando a umidade for importante para o resultado do ensaio, higrmetros devem
ser calibrados, sendo a calibrao rastrevel a padres nacionais ou internacionais.
Cronmetros, incluindo o cronmetro da autoclave, devem ser verificados, usando-se um cronmetro calibrado ou o sinal de tempo nacional (Hora do Observatrio
Nacional) como referncia.
Quando centrfugas forem utilizadas em procedimentos de ensaio, a verificao das
rotaes por minuto (RPM) deve ser feita e os registros mantidos. Quando for crtico
para o ensaio, a centrfuga deve ser calibrada.
5. Reagentes e meios de cultura

Os laboratrios devem assegurar que a qualidade dos reagentes e meios de cultura utilizados estejam apropriados para o ensaio em questo.
5.1
Reagentes
Boas
prticas da
OMS
5.1.1
5.2
Os laboratrios devem verificar a adequao de cada lote de reagentes crticos para

o ensaio, inicialmente e durante sua validade.
Meios de cultura
5.2.1
Meios de cultura podem ser preparados internamente ou comprados parcialmente ou

totalmente preparados. Fornecedores de meios prontos para o uso devem ser aprovados e qualificados. O fornecedor qualificado pode certificar alguns dos parmetros
de qualidade listados abaixo.
A promoo do crescimento e, se apropriado, outros testes de desempenho (ver seo 5.2.2) devem ser realizados em todos os meios preparados em cada lote e em
cada remessa. Quando o fornecedor de meio totalmente preparado estiver qualificado e oferecer certificao de promoo do crescimento por lote de meio, e as condies de transporte tiverem sido qualificadas, o usurio poder utilizar o certificado do
fabricante como verificao peridica dos seus resultados.
5.2.2
O desempenho apropriado dos meios de cultura, diluentes e outras solues devem

ser verificados, quando relevante com relao:
recuperao ou a manuteno dos micror-organismos-alvo. Recuperao de 50200% que deve ser demonstrada aps a inoculao de no mais que 100 unidades formadoras de colnia (UFC);
inibio ou supresso de micro-organismos no-alvo;
propriedades bioqumicas (diferenciais e diagnsticas), e
propriedades adequadas (por exemplo: pH, volume e esterilidade).
Para avaliao da recuperao ou manuteno de micro-organismos deve ser dada
preferncia a procedimentos quantitativos.
5.2.3
Matrias-prima, (tanto formulaes comerciais desidratadas como constituintes individuais), e meios de cultura devem ser armazenados sob condies apropriadas recomendadas pelo fabricante, como, por exemplo, em ambiente frio, seco e protegido
da luz. Todos os recipientes, especialmente aqueles com meios desidratados devem
ser hermeticamente fechados. Meios desidratados que se apresentem endurecidos,
empedrados ou com mudana de colorao, no devem ser utilizados.
5.2.4
gua com qualidade microbiolgica adequada livre de substncias bactericidas, inibidoras ou interferentes, deve ser utilizada na preparao, a no ser que o mtodo de
teste especifique de outra forma.
5.2.5
Os meios contendo antimetablitos ou inibidores devem ser preparados utilizando vidrarias separadas para essa finalidade, sendo que esses agentes presentes dentro de
outros meios podem inibir o crescimento e a deteco de micro-organismos presentes
na amostra sob teste.
Se a vidraria utilizada na preparao de meios contendo antimetablitos ou inibidores for utilizada para outras finalidades os procedimentos de lavagem devem ser
validados.
5.2.6
A distribuio do meio aps a esterilizao deve ser realizada sob fluxo de ar unidirecional para minimizar a potencial contaminao pelo ambiente. Isto deve ser considerado como requisito mnimo para meios utilizados em testes de produtos estreis.
A etapa deve incluir o resfriamento do meio, assim como a remoo das tampas dos
recipientes para evitar a acumulao da gua de condensao durante o resfriamento.
5.2.7
Os meios plaqueados que so irradiados podem exigir a adio de um antioxidante

e varredura de radicais livres para oferecer proteo contra os efeitos do processo
de irradiao. Os meios irradiados e no irradiados devem ser validados atravs da
realizao de testes quantitativos de promoo de crescimento.
5.2.8
A validade dos meios preparados deve ser definida, conferida quanto a sua adequao e sob as condies determinadas de armazenamento.
5.2.9
Os lotes de meios devem ser identificados e verificados quanto a sua adequao

ao uso conforme documento especfico da qualidade. Para meio comprado pronto
o laboratrio usurio deve garantir que ser notificado pelo fabricante de quaisquer
alteraes especificao da qualidade.
5.2.10 Os meios de cultura devem ser preparados de acordo com as instrues do fabricante, tomando cuidado com as especificaes do tempo e temperatura para a esterilizao.
5.2.11 Equipamento de micro-ondas no deve ser utilizado para a fuso de meios de cultura
devido distribuio inconsistente do processo de aquecimento.
5.3
Rotulagem
5.3.1
5.4
Os laboratrios devem assegurar que todos os reagentes (incluindo solues estoque), meios de cultura, diluentes e outras solues devem estar devidamente rotulados para indicar, conforme o caso, a identificao, concentrao, condies de armazenamento, data de preparao, data de validade e perodos de armazenamento
recomendados. O responsvel pela preparao do meio de cultura deve ser identificado pelos registros.
Recuperao de micro-organismos
5.4.1
A recuperao dos micro-organismos necessria quando as metodologias utilizadas

nos testes produzirem efeitos subletais e ocasionar injrias nas clulas. Por exemplo,
exposio a:
injrias pelo processamento, por exemplo, uso de calor;
agentes antimicrobianos;
conservantes;
extremos de presso osmtica, e
extremos de pH.
5.4.2
A recuperao de micro-organismo pode ser obtida por:

exposio a meio lquido, como por exemplo, soluo salina temperatura ambiente por 2 horas, e
exposio a meio slido de recuperao por 4-6 horas.
Boas
prticas da
OMS
6. Materiais de referncia e culturas de referncia

6.1. Padres internacionais e substncias de referncia farmacopeicas
6.1.1
Materiais de referncia e materiais de referncia certificados so utilizados de forma

geral, no laboratrio de microbiologia, para qualificar, verificar e calibrar equipamentos.
Sempre que possvel os materiais de referncia devem ser utilizados nas matrizes
apropriadas.
Padres internacionais e substncias de referncia so empregados, por exemplo,
para:
determinar a potncia ou teor;
validar mtodos;
comparar mtodos;
controles positivos, e
testes de promoo de crescimento.
Se possvel, materiais de referncia devem ser usados nas matrizes utilizadas nos
ensaios.
6.2
Culturas de referncia
6.2.1
O uso de culturas de referncia necessrio para o estabelecimento do desempenho

aceitvel dos meios de cultura (incluindo kits de ensaio), para validao de mtodos,
para verificao da adequao do mtodo de ensaio e para avaliar o seu desempenho.
A rastreabilidade necessria, por exemplo, quando estabelecemos o desempenho
de meios, kits para testes e validao de mtodos de ensaio.
Para demonstrar a rastreabilidade, os laboratrios devem usar cepas de micro-organismos de referncia obtidas diretamente a partir de colees reconhecidas nacional
ou internacionalmente, caso existam.
Como alternativa, podem ser utilizadas culturas comerciais que o laboratrio tenha
comprovado ter propriedades equivalentes.
6.2.2
As cepas de referncia devem ser sub-cultivadas uma nica vez, para fornecer estoques de referncia. Verificaes bioqumicas e de pureza devem ser feitas em paralelo, conforme apropriado. Recomenda-se guardar estoques de referncia em alquotas
congeladas ou liofilizadas. Culturas de trabalho, para uso de rotina, devem ser subculturas primrias do estoque de referncia (ver Apndice 5 - Uso geral das culturas
de referncia). Uma vez descongelados, os estoques de referncia no devem ser
recongelados e reutilizados.
6.2.3
As cepas de trabalho no devem normalmente ser subcultivadas .

Geralmente no mais do que cinco geraes (ou passagens) da cepa de referncia
original podem ser subcultivadas, se for definido por um mtodo padro ou os laboratrios comprovarem por evidncias documentais que no houve nenhuma alterao
em qualquer propriedade relevante.
10
Derivados comerciais de cepas de referncia s podem ser utilizados como culturas

de trabalho.
7. Amostragem
Os princpios gerais so referidos em Good practices for pharmaceutical quality control laboratories
(1).
7.1
Onde laboratrios de ensaio so responsveis pela amostragem inicial para a obteno dos
itens de ensaio, recomenda-se fortemente que o procedimento de amostragem seja coberto
por um sistema de garantia da qualidade e submetido a auditorias regularmente.
7.2
Qualquer processo de desinfeco utilizado para obter a amostra (ex. desinfeco em alguns
pontos da embalagem da amostra) no deve comprometer o nvel microbiolgico interno da
amostra.
7.3
O transporte e o armazenamento das amostras devem ser realizados em condies que mantenham a integridade das mesmas (por exemplo: resfriada ou congelada quando apropriado).
Os ensaios devem ser realizados o mais rpido possvel aps a amostragem.
Para as amostras onde for possvel o crescimento da populao microbiana durante o transporte e o armazenamento, deve ser demonstrado que as condies de armazenamento, tempo
e de temperatura, no afetam a exatido dos resultados dos testes. As condies de armazenamento devem ser monitoradas e os registros mantidos. A responsabilidade pelo transporte,
armazenamento entre a amostragem e chegada ao laboratrio do teste deve estar claramente
documentado.
7.4
A amostragem deve ser executada somente por pessoal treinado. Deve ser realizada de forma
assptica utilizando material estril. Precaues apropriadas devem ser tomadas para garantir
que a integridade das amostras mantida por meio do uso de recipientes estreis selados,
onde apropriado. Pode ser necessrio monitorar as condies ambientais, por exemplo, contaminao do ar e temperatura, no local de amostragem. A hora da amostragem deve ser
registrada, se apropriado.
8. Manuseio e identificao das amostras

8.1
O laboratrio deve ter procedimentos que cubram a entrega, o recebimento e a identificao

da amostra. Se houver amostra insuficiente, ou em condies inadequadas devido deteriorao fsica, temperatura incorreta, embalagem danificada ou rotulagem deficiente, o laboratrio
deve entrar em contato com o cliente, antes de decidir testar ou recusar a amostra.
8.2
O laboratrio deve registrar todas as informaes relevantes exemplo:

data e, quando relevante, horrio de recebimento;
condies da amostra no recebimento e quando necessrio temperatura, e
caractersticas do procedimento de amostragem (incluindo data e condies da amostragem;
8.3
As amostras que sero analisadas posteriormente devem ser armazenadas sob condies
adequadas para minimizar as variaes na populao microbiana presente. As condies de
armazenamento devem ser validadas, definidas e registradas.
Boas
prticas da
OMS
11
8.4
As embalagens e rtulos das amostras podem estar altamente contaminados e devem ser
manipulados e estocados com cuidado, a fim de evitar qualquer disseminao de contaminao. Os processos de desinfeco aplicados nos recipientes no devem afetar a integridade
da amostra. Deve-se saber que o lcool no esporicida.
8.5
A subamostragem feita no laboratrio imediatamente antes dos ensaios considerada como

parte do mtodo de ensaio. Deve ser feita de acordo com os padres nacionais ou internacionais, caso existam, ou por mtodos internos validados. Procedimentos de subamostragem
devem ser projetados para coletar uma amostra representativa.
8.6
Deve haver um procedimento escrito para a reteno e descarte de amostras. Se a intregridade das amostras puder ser mantida apropriado que as mesmas sejam estocadas at que os
resultados do ensaio estejam disponveis, ou por um tempo maior, se necessrio. As amostras
sabidamente contaminadas devem ser descontaminadas antes de serem descartadas (ver
seo 11.1).
9. Descarte de resduos contaminados

9.1
Os procedimentos de descarte dos materiais contaminados devem ser projetados para minimizar a possibilidade de contaminao do ambiente do teste ou dos materiais. Isto uma
questo de boas prticas de laboratrio, devendo obedecer a regulamentos nacionais ou internacionais ou regulamentos ambientais de sade e segurana.
10. Garantia da qualidade dos resultados e controle da qualidade do

desempenho
10.1 Controle interno da qualidade
10.1.1 O laboratrio deve ter um sistema de garantia da qualidade interna ou controle de
qualidade (por exemplo: monitoramento dos desvios, uso de amostras fortificadas,
testes replicados e participao em testes de proficincia, se for o caso) para garantir
a consistncia dos resultados do dia a dia e sua conformidade com os critrios definidos.
11. Procedimentos do teste

11.1 Os testes normalmente devem ser feitos de acordo com procedimentos descritos em farmacopias nacionais, regionais ou internacionais.
11.2 Procedimentos alternativos para testes podem ser utilizados, desde que adequadamente validados e seja demonstrado a sua equivalncia aos mtodos oficiais.
12. Relatrios de ensaio

12.1 Se o resultado da contagem for negativo, este deve ser relatado como no detectado para
uma unidade definida ou menor que o limite de deteco para uma unidade definida. O resultado no deve ser apresentado como zero para uma unidade definida, a no ser que ele
seja uma exigncia regulatria. Os resultados de ensaios qualitativos devem ser registrados
como detectado/no detectado numa quantidade ou volume definido. Tambm podem ser
expressos como menor que um nmero especificado de micro-organismos para uma unidade
definida, quando o nmero de micro-organismo especificado exceder o limite de deteco do
12
mtodo e isto tiver sido acordado com o cliente. Nos dados brutos o resultado no deve ser
dado como zero para uma unidade definida a no ser que seja uma exigncia regulatria.
Um valor reportado de 0 pode ser utilizado para entrada de dados e clculos ou anlise de
tendncias em bases de dados eletrnicos.
12.2 Quando uma estimativa da incerteza do resultado do ensaio for expressa no relatrio de ensaio, quaisquer limitaes (particularmente se a estimativa no incluir a contribuio do componente da distribuio dos micro-organismos dentro da amostra) precisam ser esclarecidas
com o cliente.
Referncias
1.
Good Practices for pharmaceutical quality control laboratories. In: WHO Expert Committee
on Specifi cations for Pharmaceutical Preparations. Fortyfourth report. Geneva, World Health
Organization. WHO Technical Report Series, No. 957, 2010, Annex 1.
2.
General guidelines for the establishment, maintenance and distribution of chemical reference substances. Revision. In: WHO Expert Committee on Specifi cations for Pharmaceutical
Preparations. Forty-first report. Geneva, World Health Organization. WHO Technical Report
Series, No. 943, 2007, Annex 3.
3.
The International Pharmacopoeia, Fourth Edition. Geneva, World Health Organization, 2006.
Also available on CD-ROM.
4.
The International Pharmacopoeia, Fourth Edition, First Supplement. Geneva, World Health
Organization, 2008. Also available on CD-ROM.
5.
ISO/IEC 17025 (2005) General requirements for the competence of testing and calibration
laboratories.
6.
ISO 11133-1 (2000) Microbiology of food and animal feeding stuffs Guidelines on preparation and production of culture media Part 1: General guidelines on quality assurance for the
preparation of culture media in the laboratory.
7.
ISO 13843 (2000) Water quality Guidance on validation of microbiological methods.
8.
WHO good manufacturing practices: main principles for pharmaceutical products. In: Quality assurance of pharmaceuticals. A compendium of guidelines and related materials. Volume 2, 2nd updated edition. Good manufacturing practices (GMP) and inspection. Geneva,
World Health Organization, 2007, and subsequent updates, including WHO GMP for sterile
pharmaceutical products. In: WHO Expert Committee on Specifictions for Pharmaceutical
Preparations. Forty-fifth report. Geneva, World Health Organization. WHO Technical Report
Series, No. 961, Annex 6, 2011; and GMP: Heating, ventilation and air-conditioning systems
for non-sterile pharmaceutical dosage forms. In: WHO Expert Committee on Specifi ctions
for Pharmaceutical Preparations. Forty-fi fth report. Geneva, World Health Organization. WHO
Technical Report Series, No. 961, 2011, Annex 5.
Leitura complementar
ISO 7218 (2007) Microbiology of food and animal feeding stuffs General requirements and guidance for microbiological examinations.
ISO 6887-1 (1999) Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test samples,
initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination Part 1: General
rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions.
ISO Guide 30 (1992) Terms and defi nitions used in connection with reference materials.
Boas
prticas da
OMS
13
ISO 9000 (2008) Quality management systems fundamentals and vocabulary.

ISO Guide 99 (1993) International vocabulary of basic and general terms in metrology (VIM).
ISO (CIPM):1995. Guide to the expression of uncertainty in measurements.
Draft ISO/DIS 16140. (1999) Food microbiology. Protocol for the validation of alternative methods.
Draft ISO/FDIS (2003) 11133-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 2 Practical guidelines on performance testing on culture media.
EN 12741 (1999). Biotechnology Laboratories for research, development and analysis Guidance for biotechnology laboratory operations.
Draft Quality Risk Management. Disponivel em: <http://www.who.int/medicines/services/expertcommittees/pharmprep/QualityRiskManagement-QAS10-376_18082010.pdf>. Acesso em
07/03/2012.
Apndice 1:
Exemplos de reas (ambientes) em que as
atividades operacionais podem ser realizadas
As reas so projetadas e classificadas durante a instalao, conforme categorias abaixo, e monitoradas, por exemplo, atravs de abastecimento adequado de ar.
r ea
Classe de instalao
P ro p o s t o
Recebimento de amostra
Sem classificao
Sem classificao
Preparo de Meios
Sem classificao
Sem classificao
Autoclave
Sem classificao
Sem classificao
Autoclave dentro da rea de teste de esterilidade
Classe B
ISO 5 (turbulncia) < 10 UFC/ m3
Unidade de Fluxo de Ar Unidirecional UDAF

(cabine de segurana biolgica)
Classe A
ISO 5 (UDAF) e < 1 UFC/ m3
Local onde est instalado a Unidade de Fluxo de

Ar Unidirecional - UDAF
Classe B
ISO 5 (turbulncia) < 10 UFC/ m3
Isolador onde ser realizado o teste de

esterilidade
Classe A (Nmero de particulas viveis NVP somente Microbiologia)
ISO 5 (UDAF) e < 1 UFC/ m3
Local onde est instalado o isolador
Sem classificao
Sem classificao
Incubadora
Sem classificao
Sem classificao
Contagem
Sem classificao
Sem classificao
Descontaminao
Sem classificao
Sem classificao
UFC unidade formadora de colnia.
Boas
prticas da
OMS
15
Apndice 2:
Exemplos de manuteno dos equipamentos
Estas informaes so fornecidas como exemplo e a frequncia ser baseada na necessidade, tipo e
desempenho prvio do equipamento e das recomendaes do manual do fornecedor.
Tipo d e equi pam ent o
Exigncia
Incubadora
Limpar e desinfetar a superfcies

internas
Refrigeradores
Freezers, Fornos
F re q u n c i a s u g e ri d a
Mensalmente
Quando necessrio (e.x a cada 3 ms)
Quando necessrio (e.x anualmente)
Banho Maria
Esvaziar, limpar desinfetar e repor a

gua
Mensalmente ou a cada 6 meses se

usado biocida
Centrfuga
Revisar
Anualmente
Limpar e desinfetar
A cada uso
Fazer inspeo visual do cesto, limpar

e drenar a cmara
Regularmente, ou conforme
recomendado pelo fabricante
Reviso completa
Anualmente ou conforme recomendado

pelo fabricante
Verificar a segurana da vlvula de

presso
Anualmente
Cabine de Segurana Biolgica,

Cabine unidirecional
Reviso completa e verificao

mecnica

pelo fabricante
Microscpio
Servio completo de manuteno

pelo fabricante
pHmetro
Limpar eletrodo
A cada uso
Balanas, diluentes gravimtricos
Limpar
A cada uso
Autoclave
Revisar
Anualmente
Destilador
Limpeza e remover crosta
Conforme necessrio ( e.x a cada 3

meses)
Deionizador e unidade de osmose

reversa
Trocar cartucho/ membrana
Conforme recomendado pelo fabricante
Jarra de anaerobiose
Limpar/desinfetar
Aps cada uso
Distribuidores de meios, equipamentos

volumtricos, pipetas e equipamentos
para servios gerais
Descontaminar, limpar e esterilizar

conforme apropriado
A cada uso
Semeadores em espiral
Revisar
Anualmente
Descontaminar, limpar e esterilizar
A cada uso
Limpar e desinfetar a superfcie de

trabalho
Diariamente e durante o uso
Limpar pisos, desinfetar tanques e pias
Diariamente
Limpar e desinfetar outras superfcies
A cada 3 meses
Laboratrio
Boas
prticas da
OMS
17
Apndice 3:
Exemplo de intervalos de calibrao
para diferentes equipamentos
Esta informao fornecida como um exemplo e a freqncia ser baseada sobre a necessidade, o tipo
de desempenho, anterior e criticidade dos equipamentos.
Tipo de equi pam ent o
F re q u n c ia
s u g e ri da
Exigncia
Termmetros de referncia (lquido em

vidro)
Recalibrao inteiramente rastravel

Um nico ponto (p.e.x: verificao do ponto de
congelamento)
A cada 3 anos
Termopares de referncia
Recalibrao inteiramente rastravel
A cada 3 anos
Verificao com termmetro de refrncia
Anualmente
Termmetros de trabalho e Termopares de

Trabalho
Verificao com termmetro de refrncia no ponto de

congelamento e/ou faixa de temperaturas operacionais
Anualmente
Balanas
Calibrao interamente rastravel
Anualmente
Pesos de calibrao
Calibrao interamente rastravel
Anualmente
Peso(s) aferidor(es)
Verificao com peso calibrado ou verificao na balana

imediatamente aps calibrao rastravel
Anualmente
Vidrarias volumtricas
Calibrao gravimtrica na tolerncia exigida
Anualmente
Microscpios
Calibrao rastravel por estgio do micrmetro de mesa

(onde apropriado)
Inicialmente
Higrmetros
Calibrao rastrevel
Anualmente
Centrfugas
Calibrao rastrevel ou verificao com um tacmetro

independente, conforme apropriado
Anualmente
Boas
prticas da
OMS
Anualmente
19
Apndice 4:
Exemplos de qualificao
dos equipamentos e monitoramento
Esta informao fornecida como um exemplo e a freqncia ser baseada na necessidade, o tipo de
desempenho, anterior e criticidade dos equipamentos.
Tipo de eq ui pam ent o
Requisito
F re q n c i a s u g e ri d a
Equipamento com temperatura

controlada (incubadoras,
banhos, geladeiras, freezers)
Estabelecer estabilidade e uniformidade de

temperatura
Inicialmente, a cada 2 anos e aps reparo/

modificao
Monitorar a temperatura
Diariamente/a cada uso
Estufas de esterilizao
Estabelecer estabilidade e uniformidade de

temperatura
Inicialmente a cada 2 anos e aps reparo/

modificao
Monitorar a temperatura
A cada uso
Estabelecer caractersticas para cargas/ciclos
Inicialmente a cada 2 anos e aps reparo/

modificao
Monitorar a temperatura/presso tempo
A cada uso
Estabelecer desempenho
Inicialmente a cada ano e aps reparo/

modificao
Monitoramento microbiolgico
Cada uso
Monitoramento do fluxo de ar
6 meses
Teste de integridade do filtro HEPA
6 meses
Estabelecer desempenho
Inicialmente e aps reparo/modificao
Monitoramento microbiolgico
Cada uso
Monitoramento do fluxo de ar
6 meses
Autoclaves
reas classe A utilizadas para

o teste de esterilidade
Cabine de segurana
unidirecional
Isolador
Cabine unidirecional
Teste de integridade do filtro HEPA
6 meses
Cronmetro
Verificar com sinal de tempo nacional
Anualmente
Microscpio
Verificar alinhamento
pHmtro
Ajustar utilizando, pelo menos solues

tampo de qualidade adequada
Balanas
Verificar o zero e a leitura com peso aferidor
Deionizadores e unidades de
osmose reversa
Verificar condutividade
Semanalmente
Verificar contaminao microbiana
Mensalmente
Diluentes gravimtricos
Verificar peso de volume dispensado
Diria
Verificar relao de diluio
Diria
Dispensadores de meios
Verificar volume dispensado
A cada ajuste de troca
Pipetadores / Pipetas
Verificar exatido e preciso do volume

dispensado
Regularmente (a ser definido, levando em

conta a frequncia e a natureza de uso)
Semeadores em espiral
Estabelecer desempenho com mtodo

convencional
Inicialmente e anualmente
Verificar estado da cnula e os pontos iniciais

e finais
Verificar volume dispensado
Mensalmente
Continua...
Boas
prticas da
OMS
21
...Continuao Apndice 4
Tipo de eq ui pam ent o
Requisito
F re q n c i a s u g e ri d a
Contador de colnias
Verificar com nmero contado manualmente
Anualmente
Centrfuga
Verificar velocidade com um tacmetro

calibrado e independente
Anualmente
Incubadoras e jarras de
anaerobiose
Verificar com indicador anaerbico
A cada uso
Ambiente de laboratrio
Monitorar quanto contaminao microbiana

do ar e das superfcies, utilizando, por
exemplo, amostradores de ar, exposio de
placas, placas de contato ou swabs
Com base na avaliao de risco, e um

programa de monitoramento ambiental
estabelecido
Apndice 5:
Uso geral das culturas de referncia
Cepas de referncia
Proveniente de fonte reconhecida por rgos de
habilitao
Estoque de referncia G1
Liofilizada, armazenamento em nitrognio lquido,
congelados, etc.
Condies especficas e tempos de armazenamento
recomendados.
Cultura de trabalho
Condies especficas e tempos de
armazenamento recomendados
Uso de rotina
congelados, etc.
recomendados.
Cultura de trabalho
Uso de rotina
congelados, etc.
recomendados.
Cultura de trabalho
Uso de rotina
congelados, etc.
recomendados.
Cultura de trabalho
Uso de rotina
Cultura de trabalho
recomendados
Uso de rotina
Todas as partes do processo devem ser devidamente documentadas, mantendo-se registros detalhados
de todas as etapas. Verificaes de pureza e testes bioqumicos devem ser realizadas conforme o caso.

Boas
prticas da
OMS
23

Rede Pan-Americana da Harmonizao

Boas prticas da OMS para laboratrios de microbiologia farmacuticas


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Rede PARF Documento Tcnico N 11

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Boas prticas da OMS para laboratrios de microbiologia farmacuticas

Boas prticas da OMS para laboratrios

Rede PARF Documento Tcnico N 11

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Boas prticas da OMS para laboratrios

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para laboratrios de microbiologia farmacutica

Integrantes do Grupo de Trabalho de Boas Prticas de Laboratrio (GT/BPL):

para laboratrios de microbiologia farmacutica

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

para laboratrios de microbiologia farmacutica

Introduo e escopo do documento

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

para laboratrios de microbiologia farmacutica

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

Boas prticas da OMS para laboratrios de

O pessoal deve ser treinado para manusear com segurana os micro-organismos.

O laboratrio de microbiologia e certos equipamentos que do suporte (por exemplo,

para laboratrios de microbiologia farmacutica

(se necessrio, com refrigerao) , anlises e registros. Devido natureza de alguns

Deve haver fornecimento de ar separado para laboratrios e para reas de produo.

O acesso ao laboratrio de microbiologia deve ser restrito ao pessoal autorizado. O

Atividades do laboratrio, tais como a preparao da amostra, preparao de meio

Em geral, equipamentos de laboratrio no devem ser rotineiramente movidos entre

Monitoramento ambiental do laboratrio

Quando necessrio (por exemplo, em reas de teste de esterilidade) deve haver um

Limpeza, Desinfeco e Higiene

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

Deve haver um programa de limpeza e desinfeco documentado. Os resultados do

Deve haver um procedimento para lidar com os derramamentos.

Instalaes do teste de esterilidade

Instalaes utilizadas para a realizao de testes de esterilidade devem atender a

A classificao de salas limpas e equipamentos de tratamento de ar das instalaes

O ar para as instalaes de classe A e B deve ser fornecido atravs de filtros terminais

2.4.6. Instrumentos indicadores, alarmes para fluxos de ar e diferenciais de presso devem

para laboratrios de microbiologia farmacutica

3. Validao dos mtodos

Os mtodos de ensaio no baseados em compndios ou outras referncias reconhecidas

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

Calibrao, verificao do desempenho e monitoramento de uso

A data de calibrao e manuteno e a data em que a recalibrao realizada deve

Dispositivos para medio de temperatura

4.3.4 Incubadoras, banhos de gua (banhos-maria) e fornos

para laboratrios de microbiologia farmacutica

teno das caractersticas registradas durante a validao inicial dos equipamentos

Autoclaves, incluindo preparadores de meios

A validao inicial deve incluir estudos sobre o desempenho (pesquisas de

Devem-se fornecer instrues operacionais claras, com base nos perfis de

O monitoramento pode ser realizado de uma das seguintes formas:

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

Os laboratrios de microbiologia devem realizar a verificao inicial dos

Para dispositivos volumtricos descartveis os laboratrios devem adquirir

5. Reagentes e meios de cultura

para laboratrios de microbiologia farmacutica

Os laboratrios devem verificar a adequao de cada lote de reagentes crticos para

Meios de cultura podem ser preparados internamente ou comprados parcialmente ou

O desempenho apropriado dos meios de cultura, diluentes e outras solues devem

Srie Rede PARF - Documento Tcnico N 11

Os meios plaqueados que so irradiados podem exigir a adio de um antioxidante

Os lotes de meios devem ser identificados e verificados quanto a sua adequao

A recuperao dos micro-organismos necessria quando as metodologias utilizadas