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Mendo
08/09
3ª Aula:
Cultivo e Crescimento de MO
Conceitos/conhecimentos chave a
S.Mendo
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apreender
• Diferentes tipos nutricionais dos microrganismos
• Crescimento e manutenção de microrganismos em
laboratório (culturas puras e contagem de bactérias- UFC, tipos de
meios de cultura; técnicas de inoculação)
• Curva de crescimento bacteriano e taxa específica de
crescimento
• Influência de alguns factores no crescimento microbiano
(pH, temperatura, nutrientes, oxigénio)
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NUTRIÇÃO MICROBIANA
FONTES DE C, ENERGIA, H e e-
FONTE DE CARBONO
faz parte do esqueleto de todos as células
Microganismos
FONTE DE ENERGIA DE H OU e-
ENERGIA
Fototróficos: luz
Quimiotróficos: Oxidação de compostos orgânicos e
inorgânicos
H ou e-
Litotróficos: moléculas inorgânicas reduzidas
Organotróficos: moléculas orgânicas reduzidas
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Tipos nutricionais
Fontes de E, H/electrões e C
dos microrganismos
FACTORES DE CRESCIMENTO
compostos orgânicos, componentes essenciais da célula,
sintetizados por MO
aminoácidos
purinas e pirimidinas
Biotina
Niacina
Riboflavina-B2-
Ácido fólico Ex. Lactobacillus: várias mutações acumuladas
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CRESCIMENTO E MANUTENÇÃO DE
MICRORGANISMOS EM LABORATÓRIO
DEFINIDOS OU SINTÉTICOS
Meios de cultura
COMPLEXOS
(peptona, extracto de carne e extracto de
levedura)
ex: NB e TSB
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• SELECTIVOS
• DIFERENCIAIS
ISOLAMENTO DE BACTÉRIAS
figura
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ESTERILIZAÇÃO
“Processo pelo qual todas as células vivas, esporos viáveis,
vírus e viróides são destruídos”
Radiação: ionizante, UV
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TÉCNICAS DE INOCULAÇÃO
dil. décimais
Sementeira à superfície
(100 l de amostra)
Filtração
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CRESCIMENTO MICROBIANO
Aumento dos constituintes celulares – pode ser medido
pelo aumento do tamanho das células/ nº de células
(FISSÃO BINÁRIA E GEMULAÇÃO)
µ = µ máx
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µ=0
µ < µ máx
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CRESCIMENTO EXPONENCIAL
A representação gráfica dos logaritmos naturais da
densidade populacional em função do tempo traduz-se
numa relação linear (utiliza-se papel logarítmico).
= 1/x . dx/dt
1 Corresponde ao
declive da recta
Integrando xt= x0 . e t ln xt= ln x0 . t
2 3
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EXEMPLO
(Log nºcél)
LB
E. coli MM
(t)
nºde cél
lactose
glucose
t
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Câmaras de Neubauer
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CONCENTRAÇÃO DE NUTRIENTES
TEMPERATURA
PH
OXIGÉNIO
ACTIVIDADE DA ÁGUA (aw)
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4 GRUPOS:
pH
Acidófilos e Alcalófilos
Tolerância ao oxigénio S.Mendo
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Antisépticos e desinfectantes
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1. Tamanho da população
2. Composição da população
3. Concentração do agente antimicrobiano
4. Duração da exposição ao agente antimicrobiano
5. Condições do local onde ocorre a exposição
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MORTE CELULAR
D121
t (min.)
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CALOR HÚMIDO
Autoclave – para destruição de células de endósporos
bacterianos (atmosfera saturada de vapor e sobre
pressão, 1atm)
Pasteurização Tindalização
FILTRAÇÃO:
Membranas com poro de 0,2 m (de acetato de celulose,
policarbonato, nitrato de celulose, etc).
Filtração do ar:
câmara de fluxo
máscaras cirúrgicas
salas assépticas
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Filtração
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RADIAÇÃO
UV pode ser letal. Não atravessa superfícies de
UV-
forma eficaz, pelo que é utilizada para a sua
esterilização.
Radiação
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COMPOSTOS FENÓLICOS
poderosos microbicidas
muito tóxicos
alterações na membrana celular dos MO
bactericidas ou bacteriostáticos (depende da concentração)
ALCOÓIS
COMPOSTOS HALOGENADOS
IODO
METAIS PESADOS
DETERGENTES CATIÓNICOS
ALDEÍDOS
Formaldeído
- tóxico e letal para todos os micróbios e esporos
- bactericida, esporocida e virucida
Glutaraldeído
- sol. aq. 2% menos irritante que o Formaldeído
- desinfecção de material hospitalar
- desnaturação de proteínas e ác. nucleicos
ÓXIDO DE ETILENO