Apostila Micologia Clínica

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO FACULDADE DE FARMCIA FARMCIA LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA MICOLOGIA
MICOLOGIA CLNICA
PROF. PAULO MURILLO NEUFELD [pneufeld@pharma.ufrj.br
2003
NDICE
MICOLOGIA GERAL MICOLOGIA CLNICA PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS ASPERGILOSE BLASTOMICOSE NORTE-AMERICANA BLASTOMICOSE QUELOIDIANA [LOBOMICOSE] CANDIDASE COCCIDIOIDOMICOSE CRIPTOCOCOSE CROMOMICOSE DERMATOFITOSE ESPOROTRICOSE FEOHIFOMICOSE HIALOHIFOMICOSE HISTOPLASMOSE AMERICANA HISTOPLASMOSE AFRICANA MICETOMA PARACOCCIDIOIDOMICOSE PITIRASE VERSICOLOR RINOSPORIDIOSE ZIGOMICOSE BIOSSEGURANA NO LABORATRIO DE MICOLOGIA REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ANEXO: MODELO DE LAUDO MICOLGICO
01 14 24 48 50 52 53 55 57 59 61 63 65 66 67 69 71 73 75 77 78 82 94 98
MICOLOGIA GERAL
1. CONCEITO Micologia o ramo da microbiologia que estuda os fungos, organismos enquadrados em um reino bem definido, denominado de reino Fungi.
1. IMPORTNCIA GERAL DOS FUNGOS Os fungos tm existncia bastante difusa. Eles so considerados ubiquitrios por estarem presentes no solo, na gua e no ar e cosmopolitas por serem encontrados em todas as partes do planeta. Estes microrganismos necessitam de matria orgnica para a obteno de carbono e de energia para o seu metabolismo, por isso, estaro sempre associados ao material orgnico como saprbios ou decompositores, simbiontes, comensais e parasitas. So os efeitos decorrentes destas manifestaes que, dependendo do sentido, podero ser considerados teis ou prejudiciais. 1.1. Ao benfica Decomposio: a decomposio da matria orgnica resulta na produo de hmus e
auxilia na eliminao de resduos orgnicos. Os fungos, como decompositores, so importantes na reciclagem de elementos contidos em material orgnico de origem vegetal e animal. Lquens: os lquens so resultantes da associao de fungos com algas. So importantes
na colonizao da rocha na, transformando-a em solo aproveitvel. Elaboram enzimas e cidos que so liberados sobre a rocha, quebrando-a em suas estruturas formadoras e
produzindo uma espcie de solo que permitir a implantao dos vegetais. Micorrizas: so estruturas formadas pela associao de razes no lenhosas de vegetais
superiores e fungos especializados do solo. As micorrizas aumentam a absoro de gua e nutrientes; fornecem proteo contra ataques de pragas; aumentam a tolerncia dos vegetais a excessos de metais, a condies extremas de acidez, aridez e temperatura do solo.
Controle biolgico de vetores: muitos fungos parasitam e matam diversos insetos que
constituem verdadeiras pragas de culturas, dentre eles: Metharizium anisopliae que parasita a cigarrinha da cana-de-acar, Beauveria bassiana que parasita a broca da cana-de-acar, a broca da batata doce e a broca do coqueiro. Alimentao: os fungos podem ser consumidos como alimentos, os cogumelos dos
gneros Agaricus campestris, Morchella hortensis, Clavaria fava, Cantharellus cibarius, Lactarius deliciosus, Russula alutalea, Psalliota arvensis, Amanita caesarea, Boletus sp, e Helvellae sp. e trufas do gnero Tuber sp., so os mais frequentemente utilizados. Podem ainda ser empregados no preparo de numerosos alimentos como: po (Saccharomyces cerevisiae); bebidas alcolicas: cervejas, vinhos, usques, rum, gim e saqu (Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces carlsbergensis, Aspergillus oryzae); queijos: roquefort e gorgonzola (Penicillium roquefortii), camembert (Penicillium camembertii); molhos e pastas: shoyu (Aspergillus oryzae, Aspergillus soye), miss (Aspergillus oryzae). Indstria: os fungos so empregados em processos industriais de importncia indiscutvel.
Podem produzir: lcool (etanol e glicerol); vitaminas ( complexo B e vitamina D); antibiticos (penicilina e griseofulvina); esterides (progesterona); corticides (cortisona). 1.1. Ao prejudicial Fitopatgenos: os fungos podem devastar culturas inteiras ou determinar alteraes na
taxa de crescimento dos vegetais de interesse agronmico. Deteriorao de madeira e derivados: atacam madeiras de construo, dormentes de
ferrovia, postes de luz e telegrficos, mveis e utenslios em geral, molduras e telas de quadros, papel e etc. Deteriorao de alimentos e intoxicaes alimentares: so agentes de deteriorao de
alimentos, produzindo alteraes organolpticas, ou seja, alteraes na aparncia, na consistncia, no sabor e no aroma. Crescem sobre gros, carnes, leites, ovos, mel, produtos enlatados, alm de frutas, legumes e hortalias. Podem produzir tambm toxinas exgenas (micotoxinas) e toxinas endgenas que quando ingeridas desencadeiam quadros de intoxicao alimentar, denominados de micotoxicoses e micetismos respectivamente. As micotoxinas so elaboradas e liberadas para o meio ambiente durante o crescimento dos fungos. Para que ocorra intoxicao (micotoxicose) necessrio a ingesto de alimentos contaminados com estas toxinas. Os gneros mais comumente implicados na produo
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micotoxicoses so: Aspergillus spp., Penicillium spp. e Fusarium spp. As endotoxinas fazem parte da prpria estrutura dos fungos, no sendo liberadas para o meio ambiente. Para que ocorra intoxicao (micetismo) necessrio a ingesto do prprio fungo e no apenas da toxina, como no caso das micotoxicoses. Os fungos incriminados como produtores de micetismos so os chamados cogumelos venenosos: Amanita verna, Amanita muscaria, Amanita phalloides, Amanita pantherina, Coprinus atramentarius, Cantharellus auratialus, Lactarius tormentosum, Russula emetica, Lepiota helveola, Entoloma lividum, Gyromitra esculenta, Cortinarius orelanus, Psilocybe sp., Stropharia sp., Conocybe sp. e Tricholona sp. A ingesto de ambos os tipos de toxinas leva produo de variado quadro antomo-patolgico como: vmitos, tremores, diarrias, hemorragias e neoplasias. Micoses e alergias: estes microganismos podem causar diversos processos patolgicos no
homem e nos animais. Muitos so agentes de enfermidades conhecidas como micoses (esporotricose, causada pelo fungo Sporothrix schenckii; histoplasmose, causada pelo Histoplasma capsulatum; blastomicose, causada pelo Blastomyces dermatitidis;
paracoccidioidomicose, causada pelo Paracoccidioides brasiliensis) ou agentes de processos alrgicos em indivduos imunologicamente sensveis, devido a inalao de elementos fngicos em suspenso no ar. Outros: os fungos podem se desenvolver em combustveis (petrleo e derivados: gasolina,
leo diesel e querosene; lcool) causando enormes problemas para refinarias e para a aviao. Os avies abastecidos com querosene podem apresentar crescimento de fungos em seu tanque de combustvel, o que pode levar a entupimentos do sistema de conduo do combustvel ou ainda podem causar corroso microbiolgica, atacando a camada interna de poliesteruretano e as chapas de duralumnio dos tanques de querosene dos avies. 3. CITOLOGIA DOS FUNGOS A clula fngica menor e mais simples do que a clula dos vegetais e animais, porm apresenta basicamente os mesmos componentes encontrados nestas clulas eucariontes: Parede Celular: pode ser fundamentalmente de quitina, celulose ou composta de uma
mistura das duas substcias. Alguns fungos durante um perodo de seu ciclo de vida perdem a parede (esporos dos fungos aquticos). Lomassoma: estrutura formada a partir da membrana celular e que se localiza entre a
parede e a membrana plasmtica. Apresenta as seguintes funes:
Secreo e formao de parede celular. Proliferao de citomembranas. Micropinocitose. Sntese de glicognio. Manuteno do turgor celular. Funes de complexo de Golgi. Estrutura de resposta a tenses, sendo produzida em momentos de parasitismo ou traumatismo. Membrana Celular : apresenta permeabilidade seletiva, segue o modelo do mosaico
fluido e, em alguns fungos que perdem a parede durante parte de seu ciclo biolgico, d a forma e protege a clula. Ncleo: com membrana nuclear e fuso acromtico intra-nuclear (durante a diviso celular
por mitose no h desorganizao da membrana nuclear). Vacolos: existem basicamente dois tipos, o de reserva que contm glicognio e o
digestivo que contm enzimas digestivas, semelhantemente ao lisossoma. Septos: so projees da parede celular que divide transversalmente a hifa. Os septos
podem ser falsos ou verdadeiros. Os septos falsos so aqueles que apresentam um poro central que permite a passagem do citoplasma de um compartimento para o outro da hifa. Os septos verdadeiros no apresentam poro e so formados em dois momentos: no traumatismo para evitar o estravasamento do material citoplasmtico para o meio ambiente e na reproduo quando um septo formado para isolar a rea reprodutiva do restante do corpo vegetativo. Flagelo: nas clulas mveis (esporos de fungos aquticos) encontram-se dois tipos, o
Tinsil ou Penado que apresenta um dimetro uniforme ornamentado externamente por fibrilas e o Whiplash ou Chicote que afila progressivamente para a extremidade livre e no ornamentado.
4. MORFOLOGIA DOS FUNGOS. 4.1. Morfologia vegetativa: Os fungos podem ser divididos de acordo com a sua morfologia vegetativa em: Filamentosos: as clulas tm forma de filamentos tubulares denominados de hifas e o seu
conjunto chamado de miclio. As hifas ou o miclio, segundo a colorao que apresentem em sua parede celular, podem ser classificadas em hialinas quando apresentam cores claras
ou so transparentes e demceas quando apresentam cores escuras. Tambm podem ser divididas em septadas e asseptadas. Leveduriformes: as clulas tm formato arredondado ou ovalado e so chamadas de
leveduras. 4.1. Morfologia reprodutiva: Os esporos so as unidades reprodutivas dos fungos e se caracterizam por tambm apresentar formas e coloraes variadas. Os principais tipos de esporos so: Basidiosporos: esporos sexuados exgenos, formados no exterior de clulas chamadas
basdias. Ascosporos: esporos sexuados endgenos, formados no interior de hifas em forma de
saco denominadas de asco. Condios: esporos assexuados exgenos, formados sobre hifas reprodutivas chamadas de
clulas conidiognicas. Esporngiosporos: esporos assexuados endgenos, formados dentro de hifas
reprodutivas chamadas de esporngios. Zoosporos: esporos assexuados endgenos, formados no interior de hifas reprodutivas
chamadas de zoosporngios. Blastosporos: esporos assexuados, representados pelas gmulas ou brotos das leveduras.
As estruturas que formam e do sustentao aos esporos so genericamente conhecidas como esporforos. Estas estruturas apresentam denominaes especficas de acordo com o tipo de esporos que produzem. Assim, quando produzem condios, so denominados de conidiforos; quando produzem esporngios com esporngiosporos, so denominados de esporngiforos; quando produzem zoosporngios com zoosporos, so chamados de zoosporngiforos. Os esporforos podem ser ainda simples ou compostos. Conidiforos e esporangiosporos exemplos de esporforos simples que do origem a esporos assexuados, enquanto que sinmios, esporodquios, soros e acrvulos e picndios so exemplos de esporforos compostos e que tambm do origem a esporos assexuados (condios). Os esporforos compostos que do origem a esporos sexuados so chamados de ascocarpos quando ascos e ascosporos so produzidos em seu interior e de basidiocarpos (basidiforos) quando basidiosporos so produzidos sobre as suas estruturas (basdias). Os ascocarpos podem ser divididos em peritcios, apotcios, cleistotcios e gmnotcios de acordo com seu modo de comunicao com o meio exterior.
5. FISIOLOGIA DOS FUNGOS 5.1 Nutrio Heterotrficos para carbono. Tomada de nutrientes feita por absoro. Produo de exoenzimas e enzimas adaptativas.
5.1. Respirao Aerbios. Respirao celular: Ciclo de Krebs, Cadeia Respiratria e Fosforilao Oxidativa.
5.3. Fermentao Oxidao parcial do substrato com produo de lcool e dixido de carbono.
5.4. Dimorfismo Alguns fungos apresentam duas morfologias que variam principalmente em funo da
temperatura: filamentosos a 15o C e leveduriformes a 37o C. 5.5. Reproduo O ciclo biolgico dos fungos comea e termina no esporo, que pode ser oriundo de reproduo sexuada e/ou assexuada e ainda pode ser endgeno (quando produzido no interior de clulas ou hifas especializadas) e exgeno (quando produzido no exterior de clulas ou hifas especializadas). As formas conhecidas de reprodues nos fungos so:
Assexuada (Imperfeita ou Anamrfica): diviso nuclear por mitose. Ocorre puramente por
transformaes do sistema vegetativo. importante para a propagao da espcie porque produz grande nmero de esporos, porm, a variabilidade gentica baixa e dependente de mutaes. Sexuada (Perfeita ou Teleomrfica): diviso nuclear por meiose. derivada da unio de
ncleos compatveis. composta de trs fases: Plasmogamia: fuso ou anastomose de hifas; Cariogamia: unio de dois ncleos haplides compatveis (formao de ncleo diplide); meiose: diviso nuclear por meiose, retornando condio haplide (crossing-over meitico).
Esta reproduo produz baixo nmero de esporos (ocorrendo apenas aps um perodo de stress ambiental), mas com grande variabilidade gentica. Ciclo Parassexuado: diviso nuclear por mitose. No ocorre em um perodo ou ponto
especfico do ciclo biolgico do fungo e no h formao de estruturas de reproduo. composto pelas seguintes fases: plasmogamia; cariogamia.; mitose (com eventual crossingover mittico). Este ciclo fornece algumas vantagens que s seriam obtidas no ciclo sexuado. Desta forma, um certo grau de variabilidade gentica conseguido. O Ciclo Parassexuado muito importante para aqueles fungos que no se reproduzem sexuadamente e que dependem exclusivamente de mutaes para que haja alguma variao em seu cdigo gentico. O homem utiliza este ciclo, aliado a mutaes artificiais, fazer melhoramento gentico, ou seja , obteno de novas linhagens em fungos de interesse comercial, industrial e mdico cuja reproduo sexuada no se conhece. 6. CARACTERIZAO DOS FUNGOS Os fungos esto enquadrados no reino FUNGI, sendo suas principais caractersticas: Eucariontes: possuem membrana nuclear, o que caracteriza os ncleos verdadeiros. No
interior de seus ncleos, o nmero de cromossomos varivel, mas sempre diferente de um. Unicelular ou Filamentoso; Parede Celular: quitinosa e/ou celulsica; Aerbios; Aclorofilados (no fazem fotossntese); Nutrio heterotrfica por absoro; Armazenam glicognio e no armazenam amido; Reproduzem-se por esporos oriundos de reproduo assexuada ou sexuada.
7. TAXONOMIA DOS FUNGOS A exata posio dos fungos com relao aos outros organismos tem sido motivo de muita discusso. Inicialmente, os fungos foram tratados como pertencentes ao reino vegetal. Todavia, quando comparadas, as caractersticas dos fungos se chocavam com as caractersticas dos demais representantes deste reino. Somado a isso, algumas caractersticas observadas nas clulas animais eram compartilhadas pelos fungos. Com o objetivo de minimizar as diferenas, os fungos foram ento separados em um reino particular.
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Tradicionalmente, o reino Fungi tem sido dividido em dois filos (ou divises): o Myxomycota, para as forma plasmodiais, e o Eumycota (fungos verdadeiros), para as forma no plasmodiais que so usualmente miceliais ou leveduriformes. Os fungos verdadeiros, por sua vez, tm sido classificados a partir de suas relaes filogenticas e estruturas de reproduo sexuada nos subfilos (ou subdivises): Basidiomycotina, Ascomycotina, Zygomycotina e Mastigomycotina. A exceo fica por conta do subfilo (ou subdiviso) Deuteromycotina que no formada a partir de graus de parentesco e nem a partir de formas sexuadas de reproduo. Nele so colocados todos aqueles fungos cuja reproduo sexuada inexistente ou desconhecida, independentemente de sua origem filogentica (evolutiva). Na maioria das vezes, os deuteromicetos so formas assexuadas de ascomicetos ou basidiomicetos.
Classificao tradicional dos fungos

FILO EUMYCOTA EUCARIONTES, UNICELULARES OU FILAMENTOSOS, PAREDE CELULAR COM QUITINA E / OU CELULOSE, AERBIOS,
ACLOROFILADOS, NUTRIO HETEROTRFICA POR ABSORO, GLICOGNIO COMO RESERVA GLICDICA, REPRODUO POR ESPOROS PRODUZIDOS ASSEXUADA E / OU SEXUADAMENTE.
SUBFILOFILO BASIDIOMYCOTINA
MICLIO SEPTADO OU CLULAS DE LEVEDURA E ESPORO SEXUADO (BASIDIOSPORO) FORMADO SOBRE BASDIAS.
SUBFILO ASCOMYCOTINA
MICLIO SEPTADO OU CLULAS DE LEVEDURA E ESPORO SEXUADO (ASCOSPORO) FORMADO DENTRO DE ASCOS.
UBFILO ZYGOMYCCOTINA
MICLIO ASSEPTADO E ESPORO SEXUADO (ZIGOSPORO) E ASSEXUADO ESPORNGIOS. (ESPORANGIOSPORO) FORMADOS DENTRO DE
SUBFILO MASTIGOMYCOTINA
MICLIO
ASSEPTADO OU
FORMA UNICELULAR
ESPORO
ASSEXUADO FLAGELADO (ZOOSPORO).
SUBFILO DEUTEROMYCOTINA
MICLIO SEPTADO OU CLULAS DE LEVEDURA E ESPORO ASSEXUADO NO FORMADO EM ESPORNGIOS (CONDIO).
Com o avano das tcnicas de estudo, muitos organismos anteriormente considerados fungos foram retirados do reino Fungi por apresentarem caractersticas que conflitiam com aquelas reconhecidas para este grupo. Assim, o reino Fungi foi reestruturado e atualmente passou a conter os Filo Basidiomycota, Ascomycota, Zygomycota e Chytridiomycota. O antigo
Sbufilo Mastigomycotina foi retirado do reino Fungi, pois muitos organismos considerados neste taxon tinha pouca relao com os fungos verdadeiros, ficando apenas a antiga classe dos Chytridiomycetes como filo Chytridiomycota. O subfilo Deuteromycotina foi extinto por no ser uma unidade monofiltica e seus componentes passaram a ser designados como fungos mitospricos. Recentemente, o termo fungo mitosprico foi substitudo pelo o termo fungo anamrfico. importante ressaltar que estes termos no correspondem a uma classificao taxonmica, mas sim, apenas a uma designao sob a qual esto agrupadas as formas assexuadas de alguns fungos.
Classificao moderna dos fungos

REINO FUNGI EUCARIONTES, UNICELULARES OU FILAMENTOSOS, PAREDE CELULAR COM QUITINA, AERBIOS, ACLOROFILADOS, NUTRIO HETEROTRFICA POR ABSORO, GLICOGNIO COMO RESERVA GLICDICA, REPRODUO POR ESPOROS PRODUZIDOS
ASSEXUADA E / OU SEXUADAMENTE.
FILO BASIDIOMYCOTA
FILO ASCOMYCOTA
FILO ZYGOMYCOTA
FILO CHYTRIDIOMYCOTA
MICLIO
ASSEPTADO OU
FORMA UNICELULAR
ESPORO
ASSEXUADO FLAGELADO (ZOOSPORO).
Outra classificao proposta inclui os filos Basidiomycota, Ascomycota, Zygomycota e Deuteromycota. Nesta, nenhum dos membros do antigo subfilo Mastigomycotina considerado fungo verdadeiro e, mesmo no sendo uma unidade monofiltica, o antigo subfilo Deuteromycotina foi mantido como filo Deuteromycota.
Classificao moderna dos fungos

REINO FUNGI EUCARIONTES, UNICELULARES OU FILAMENTOSOS, PAREDE CELULAR COM QUITINA, AERBIOS, ACLOROFILADOS, NUTRIO HETEROTRFICA POR ABSORO, GLICOGNIO COMO RESERVA GLICDICA, REPRODUO POR ESPOROS PRODUZIDOS
ASSEXUADA E / OU SEXUADAMENTE.
FILO BASIDIOMYCOTA
FILO ASCOMYCOTA
FILO ZYGOMYCOTA
FILO DEUTEROMYCOTA
MICLIO SEPTADO E ESPORO ASSEXUADO (CONDIO) NO FORMADO EM ESPORNGIOS OU CLULAS DE LEVEDURA GEMULANTES (BLASTOSPORO)
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Esquema taxonmico dos principais grupos de fungos

Filo Zygomycota Classe Zygomycetes Ordem Entomophthorales Mucorales Famlia Entomophthoraceae Mucoraceae Gnero Basidiobolus Conidiobolus Absidia Mortierella Mucor Rhizomucor Rhizopus Cunnighamella Syncephalastrum Endomyces Lodderomyces Kluyveromyces Pichia Saccharomyces Piedraia Pseudoallecheria boydii Ajellomyces Arthroderma Nannizzia Filobasidiella Schyzophillum Aureobasidium Cryptococcus Candida/Torulopsis Malazzesia/Pityrosporum Rhodotorula Trichosporon Sporobolomyces
Cunninghamellaceae Syncephalastraceae Ascomycota Hemiascomycetes Endomycetales Endomycetaceae Saccharomycetaceae
Loculoascomycetes
Myriangiales Pleosporales Eurothiales
Saccardinulaceae Microascaceae Gymnoascaceae
Plectomycetes
Basidiomycota
Teliomycetes Hymenomycetes Blastomycetes
Ustilaginales Aphyllophorales
Filobasidiaceae Schyzophillaceae
Deuteromycota Hyphomycetes Moniliales Moniliaceae

Acremonium/Cephalosporium
Dematiaceae
Tuberculariaceae
Aspergillus Blastomyces Chrysosporium Coccidioides Epidermophyton Geotrichum Gliocladium Histoplasma Microsporum Paecilomyces Paracoccidioides Penicillium Sepedonium Scopulariopsis Sporothrix Trichoderma Trichophyton Alternaria Cladosporium Curvularia Drechslera Exophiala Fonsecaea Helmintosporium Madurella Nigrospora Phialophora Rhinocladiella Ulocladium Wangiella Epicoccum Fusarium Phoma
Ceolomycetes
Sphaeropsidales
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A classificao dos fungos est apoiada na micromorfologia das estruturas reprodutivas. Como alguns fungos podem se reproduzir tanto sexuada quanto assexuadamente, estes iro apresentar duas denominaes, uma em funo da morfologia sexuada e outra em funo da morfologia assexuada. Isto ocorre por que as estruturas de reproduo sexuada e assexuada so morfologicamente diferentes. Assim, um mesmo fungo poder ser conhecido pelo seu nome sexuado (perfeito ou teleomrfico) ou pelo seu nome assexuado (imperfeito ou anamrfico). Taxonomicamente, quando a reproduo sexuada for conhecida, deve se dar preferncia de uso para o nome teleomrfico. Contudo, na prtica, os fungos so tratados por seu nome anamrfico, j que as culturas so manipuladas, no laboratrio clnico, na fase assexuada.
Nomenclatura anamrfica e teleomrfica de alguns fungos de interesse mdico

Anamorfo Teleomorfo Anamorfo Teleomorfo
Alternaria
Clathrospora Leptosphaeria Pleospora Emericella Eurotium Sartorya Ajellomyces Hansenula Kluyveromyces Leucosporidium Lodderomyces Pichia Saccharomyces Arthroderma
Penicillium
Eupenicillium Penicilliops Talaromyces Gaeumannomyces Mollisia Rhodosporidium Petrielle Petriellidium Pseudoallescheria
Aspergillus
Phialophora
Blastomyces Candida
Rhodotorula Scedosporium
Chrysosporium
Scopulariopsis
Chaetonium Kernia Microascus Petriella Handersonula Corynoascus Hypomyces Peckiella Thielavia Aessosporon Ceratocystis
Cryptococcus Curvularia
Filobasidiella Filobasidium Cochliobolus
Scytallidium Sepedonium
Dreschslera Fusarium
Cochliobolus Pyrenophora Calonectria Giberella Micronetriella Nectria Dipodascus Endomyces
Sporobolomyces Sporothrix
Geotrichum
Stachybotrys
Melanopsamma
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Continuao
Anamorfo Teleomorfo Anamorfo Teleomorfo
Histoplasma
Ajellomyces
Torulopsis
Debaryomyces Hansenula Kluyveromyces Saccharomyces Filobasidium Hypocrea Podostroma
Microsporum Paecyllomyces
Arthroderma Byssochlamyces Cephalotheca Thermoascus
Trichoderma
Em micologia mdica, uma classificao (no taxonmica) orientada segundo a enfermidade causada por esses organismos, pode ser til. Neste esquema, os fungos so agrupados em trs grandes categorias: micoses superficiais (pele, plos e unhas), micoses subcutneas (msculos, ossos e tercido conectivo) e micoses profundas ou sistmicas (diversos rgos ou tecidos: pulmes, sistema linftico e sangineo).
Classificao clnica dos agentes fngicos
Superficiais Piedra Branca Trichosporon beigelii Piedra Preta Piedraia hortae Tinea Nigra Exophiala werneckii Candidase Candida spp. Dermatofitose Epidermophytom floccosum Microsporum spp. Trichophyton spp. Pitirase Versicolor Malassezia furfur
Subcutnea Cromoblastomicose Cladosporium carrionii Fonsecaea compacta Fonsecaea pedrosoi Phialophora verrucosa Rhinocladiella aquaspersa Esporotricose Sporothrix schenckii Micetoma Eumictico Acremonium spp. Aspergillus nidulans Curvularia spp. Exophiala jeanselmei Fusarium spp. Madurella spp. Pseudallescheria boydii Feohifomicose Alternaria spp. Cladosporium spp. Curvularia spp. Exophiala spp. Phialophora spp.
Sistmica Aspergilose Aspergillus spp. Blastomicose Blastomyces dermatititdis Candidase Candida spp. Coccidioidomicose Coccidioides immitis Cryptococcose Cryptococcus neoformans Hialohifomicose Acremonium spp. Fusarium spp. Paecilomyces spp. Penicillium spp. Scopulariopsis spp. Histoplasmose Histoplasma capsulatum Paracoccidioidomicose Paracoccidioides brasiliensis Zigomicose Absidia spp. Cunninghamella spp. Mucor spp. Rhizopus spp. Syncephalastrum spp. Basidiobolus sp. Conidiobolus sp.
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MICOLOGIA CLNICA
1. DEFINIO: MICOSE A patogenicidade dos fungos tem sido relacionada com a sua capacidade de desenvolvimento nos tecidos do hospedeiro. A ao espoliativa dos fungos patognicos pode levar a um variado quadro mrbido, genericamente, denominado de micose. 1. TERMINOLOGIA 1.1. Localizao Antomo-clnica: segundo o stio anatmico, as micoses podem ser denominadas como dermatomicose (micoses da pele), otomicose (micoses do conducto auditivo), oftalmomicose (micoses dos olhos), onicomicose (micoses das unhas) e pneumomicose (micoses dos pulmes). 1.1. Agente etiolgico: segundo o fungo responsvel, as micoses podem ser denominadas como aspergilose (micoses produzidas por fungos do genro Aspergillus), paracoccidioidomicose (micose produzida pelo Paracoccidioides brasiliensis), esporotricose (micose produzida pelo Sporothrix schenckii) e etc.
3. CLASSIFICAO 3.1. Localizao do processo: superficial, subcutnea e profunda 3.1. Origem do processo: primria, secundria e associadas
4. FATORES PR-DISPONENTES 4.1. Fatores biolgicos Hospedeiro: raa (fatores genticos); idade (imaturidade ou degenerao do sistema
imunolgico); sexo (alteraes fisiolgicas: gravidez, lactao e ciclo menstrual); Patologias (processos infecciosos, processos metablicos, processos neoplsicos, desnutrio e estados imunossupressivos).
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Fungo: fatores indutores de fase tecidual (dimorfismo); Afinidade tecidual
(equipamento enzimtico); presena de cpsula; parasitismo intracelular; toxicidade (exo e endotoxinas); poder invasor (orgos perfurantes: ao mecnica) 4.1. Fatores ecolgicos Clima: de maneira geral as micoses so mais freqentes em climas quentes do que
em climas temperados e frios. H, porm, algumas micoses em que a influncia climtica predominante. Neste casos, o fungo s sobrevive no ambiente em condies climticas estritas. Solo: a influncia da natureza do terreno sobre o desenvolvimento saprbio dos
fungos patognicos, em geral, mal estudada. Entretanto, parece haver certa relao entre algumas reas de maior prevalncia de micoses e a constituio do solo (histoplasmose ou coccidioidomicose). 4.3. Fatores sociolgicos Meio Social: considera-se o solo e os vegetais como sendo o principal habitat dos
fungos patognicos, assim, compreende-se que a incidncia das micoses seja maior no meio rural do que no meio urbano. Hbitos e Costumes: podem ser um fator de predisposio ou proteo contra
determinadas micoses. Alguns desses fatores esto ligados, por exemplo, ao vesturio, segregao e migrao.
Profisso: mdicos, veterinrios, laboratoristas, espeleologistas, entre outros, esto
mais expostos aos fungos patognicos. Higiene: importante para a preveno de muitas micoses, porm, pode ser um
tanto quanto ineficaz para as doenas produzidas por fungos da microbiota.
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5. DINMICA DAS MICOSES 5.1. Fontes de infeco e reservatrios Solo Vegetais Animais Homem.
5.1. Vias de infeco Inalao de elementos fngicos em suspenso no ar Traumatismo Ingesto
5.3. Vias de disseminao Hematognica Linftica Contiguidade
Epidemiologia das micoses

Fonte Porta de Entrada Micoses
Saprbica (solo, matria orgnica em decomposio)
Pulmo
Histoplasmose Blastomicose Coccidioidomicose Paracoccidioidomicose Criptococcose Aspergilose Mucormicose Pseudoallescheriose Esporotricose Adiaspiromicose Hialohifomicose Feohifomicose Dermatofitose por geoflicos Micetoma Esporotricose Cromoblastomicose Feohifomicose Rinosporidiose Entomoftoromicose Hialohifomicose Tinea nigra fungos
Epiderme e fio de cabelo Pele e tecido subcutneo
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Continuao
Fonte Porta de Entrada Micoses
Seios paranasais
Mucormicose Aspergilose Feohifomicose Entomoftoromicose Rinosporidiose
Aqutica
Pele e tecido subcutneo, mucosa nasal e conjuntiva Pele e plos Epiderme e plos
Animal Humana
Dermatofitose zooflicos Dermatofitose antropoflicos versicolor Candidase
por
fungos
por fungos e pitirase
Pele, membranas mucosas e trato gastrointestinal
6. TRANSMISSO 6.1. Micoses superficiais: a transferncia de agentes fngicos ocorre por contacto direto entre indivduos. 6.1. Micoses subcutneas e profundas: a doena adquirida por contacto direto pouco freqente. Na realidade, nestas o agente fngico transmitido de maneira indireta, ou seja, pelo contacto com solo, ambientes e objetos contaminados.
7. SINTOMATOLOGIA DAS MICOSES 7.1. Micoses pulmonares Geral: sindrome gripal passageira ou pneumonia localizada em um dos lobos ou
espalhada. Considerado como infeco inicial; Tosse: produo mnima de escarro, dispnia, taquipnia e hemoptase. A dor no
peito freqentemente de natureza pleural. Roncos e frico pleural podem ser detectados pela auscultao. Radiografias podem revelar pequeno infiltrado pulmonar e adenopatia hilar ou opacidade difusa e confluente; Alergia broncopulamonar: sintomas caractersticos de asma e tosse no produtiva.
Broncoespasmo episdico. Atalectasia causada por tampes mucides nos bronquolos. Cristais de Charcot-Leyden e eosinfilos no escarro. Eosinofilia do sangue perifrico
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e reao de hipersensibilidade cutnaea aos antgenos do Aspergillus spp. Elevada concentrao srica de Ig G anti-Aspergillus; Aspergiloma (bola fngica): crescimento de uma colnia dentro de uma cavidade
pr-formada. Hemoptase pode ocorrer a despeito de pouca ou nenhuma invaso da parede da cavidade. A disseminao rara mesmo em pacientes submetidos a terapia com corticides; Invasiva: sintomas de pneumonia aguda, febre baixa e inconstante, tosse produtiva
ou no produtiva, dor no peito usualmente presente e dispnia progressiva com respirao difcil. A ocorrncia de hemoptase pode indicar enfarto e necrose do parnquima pulmonar. Radiografias do trax podem revelar um infiltrado difuso na regio hilar, fibrose finamente nodular, abscessos multifocais ou cavitrios, dependendo da espcie fngica: fibrose com pontos difusos: histoplasmose; leso perifrica tipo moeda: coccidioidomicose; leso cavitria: histoplasmose e coccidioidomicose; bola fngica: aspergilose, pseudoallescheriose e zigomicose; alergia: Aspergillus fumigatus e Aspergillus flavus 7.1. Micoses superficiais Leses com descamao superficial, variando no tamanho forma e colorao
(acromia, hipopigmentao ou hiperpigmentao) na regio do trax e costas: infeco por Malassezia furfur (pitirase versicolor); Leses descamativas, pruriginosas, eritematosas com bordos elevados e conhecidas
com impigem: Epidermophyton floccosum, Micropsporum spp. e Trichophyton spp. (dermatofitoses); Leses descamativas, hiperqueratose, crostas, formao de esctulas:
Trichophyton schoenleinii (tinea favosa); Leses descamativas ou crostosas confinadas em reas midas e intertriginosas da
pele: Candida albicans (leveduroses);
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Leso nodular subcutnea no stio de infeco com espalhamento ascendente e
evoluo secundria de lceras cutneas no trajeto dos vasos linfticos: Sporotrix schenckii; Leses tumefeitas subcutneas, pustulares, ulcerosas com tratos sinuosos drenantes
e produo de gros: micetoma; Leses tumefeitas subcutneas, verrucosas, descoloradas e hemorrgicas:
cromoblastomicose; Leses purpurceas e cistos subcutneas: feohifomicose;
7.3. Micoses do sistema nervoso central Cefalia de incio insidioso que aumenta em freqncia e severidade, aconpanhada
de nusea, irritabilidade e instabilidade mental e emocional: criptococcose; Meningite e meningoencefalite: zigomicose em diabticos descompensados em
acidose; 7.4. Micoses do trato urinrio Pielonefrites associadas com terapia de longa durao com corticides, antibiticos,
imunossupressores e drogas antineoplsicas ou uso prolongado de cateteres para drenagem urinria: candidase; Piria: dor no baixo ventre, ato de urinar freqente, cistite: candidase;
7.5. Micose ocular infeco da cnea, da conjuntiva e do globo ocular aps traumatismo ou interveo
cirrgica: aspergilose e hialohifomicose; 7.6. Micoses cardacas Febre baixa, murmreo cardaco, ecograma positivo: candidase, aspergilose e
hialohifomicose;
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7.7. Micoses dos seios paranasais Dor facial e hiperemia cutnea, cefalia, febre baixa, evidncia radiogrfica de
preenchimento dos seios paranasais: aspergilose, hialohifomicose e pseudoalescheriose.
8. HISTOPATOLOGIA DAS MICOSES A resposta tecidual agresso dos patgenos fngicos to variada quanto a diversidade dos agentes. Nas infeces dos tecidos queratinizados (pele, plos e unhas), geralmente, a leso resultado de uma resposta irritativa presena dos fungos ou de seus metablitos. No caso dos organismos que invadem os tecidos vivos, como aqueles que causam enfermidades subcutneas ou profundas, se produz uma resposta piognica uniforme. 8.1. Reaes inflamatrias crnicas Linfcitos, clulas plasmticas, neutrfilos, fibroblastos e ocasionalmente clulas:
zigomicose crnica, histoplasmose crnica e rinosporidiose 8.1. Reaes piognicas Agudas ou crnicas, infiltrado neutroflico supurativo: Actinomyces israelii
(grnulos de enxofre e histicitos saturados de lipdios na periferia), Nocardia asteroides e aspergilose aguda e outras infeces oportunistas 8.3. Reaes piognicas e reaes granulomatosas mistas Infiltrado neutroflico e reao granulomatosa, linfcitos e clulas plasmticas:
Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis (neutrfilos ao redor de esfrulas rompidas), Sporothrix schenckii (raros nos tecidos), cromoblastomicose (reao piognica crnica, ndulos de clulas epiteliides e clulas gigante tipo corpo estranho), micetoma; alm disso, podem ocorrer clulas gigantes espumosas semelhantes s do xantoma 8.4. Hiperplasia pseudoepiteilomatosa (aps inflamao crnica da pele) Hiperplasia das clulas epidrmicas, hiperqueratose e alongamento das cristas
reticulares: Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, cromoblastomicose
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8.5. Granuloma histioctico Histicitos com microrganismo intracelulares, podendo se transformar em clulas
gigantes: Histoplasma capsulatum e Cryptococcus neoformans nas meninges 8.6. Granuloma com caseificao Reao granulomatosa, clula gigante de Langhans e necrose central: Histoplasma
capsulatum e Coccidioides immitis 8.7. Granuloma tipo sarcide No necrosante: Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum
8.8. Granuloma pulmonar fibro-caseoso Parede fibrosa espessa envolvida por clulas epiteliides, micorganismos dentro das
clulas gigantes de Langhans localizadas no centro da leso, frequentemente ocorre calcificao: Histoplasma capsulatum Parede fibrosa delgada, raramente calcificada: Coccidioides immitis Pobremente definida: Cryptococcus neoformans
8.9. Arterite trombtica Trombose, necrose coagulativa purulenta, invaso dos vasos: aspergilose e
zigomicose aguda: Aspergillus spp., zigomicose aguda 8.10. Fibrose Proliferao de fibroblastos, depsito de colgenos semelhante a quelides:
Paracoccidioide loboi 8.11. Granuloma esclerosante por corpo estranho (em seios paranasais ou aps infeco viral) Hifas atpicas em clulas gigantes: Aspergillus spp.
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9. IMUNOLOGIA DAS MICOSES A imunidade natural contra as micoses muito elevada, por isso, a infeco fngica depende da exposio macia de microrganismos e da resistncia geral do hospedeiro. Esta situao est bem demonstrada por duas categorias principais de enfermidade mictica. A primeira, infeco por fungos patognicos verdadeiros, ocorre em pacientes que se encontram em reas endmicas particulares e que inalam uma quantidade elevada de elementos fngicos em suspenso no ar. A maior parte dessas infeces so assintomticas ou resolvem com rapidez e normalmente ocorre resitncia reinfeo. Somente em raras ocasies, a enfermidade chega ser grave. Por outro lado, as infeces oportunistas so causadas por microrganismos presentes de maneira universal que possuem virulncia muita baixa. O estabelecimento de uma enfermidade depende exclusivamente da resistncia do hospedeiro. Neste casos, se o paciente se recupera desta situao, incluindo a infeco fngica, se observa a ocorrncia de resistncia no especfica reinfeco. Na atualidade, at onde se sabe, os anticorpos desempenham um papel muito pequeno na defesa frente as infees micticas. A imunidade celular parece ser a nica resistncia eficaz contra a invaso dos fungos. Esta situao est bem ilustrada pelos dois tipos de infeco que ocorrem em pacientes portadores de enfermidades linfomatosas ou que apresentam defeitos genticos da funo linfocitria. Em pacientes que apresentam discrasias ou defeitos da funo do linfcito T so freqentes as infeces fngicas oportunistas. Se o defeito s ocorre em clulas B, raramente ocorrem enfermidades causadas por fungos, todavia, so comuns as infeces bacterianas, em particular, as causadas por cocos Gram positivos. A importncia dos mecanismos celulares de defesa tambm se refletem nas manifestaes histolgicas. No hospedeiro normal, os fungos patognicos produzem reaes piognicas seguidas de reao granulomatosas. A resposta gerada por organismos oportunistas se traduz por necrose e supurao e o hospedeiro no capaz de conter os microrganismos. Os fungos so fracamente antignicos. Por esta razo, na maior parte dos casos, a sorologia no um bom auxlio diagnstico ou prognstico. Alm disso, a ocorrncia de reaes cruzadas e a falta de padronizao dos antgenos tornam os procedimentos sorolgicos de emprego limitado. A hipersensibilidade e alergia aos fungos se manifestam de diversas formas. Uma alergia intensa pode ser devido a inalao de condios. Estes podem provocar asma,
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enfermidades asmatiformes, fibrose e consolidao pulmonar. Os estados alrgicos tambm podem manifestar-se como processos secundrios (micedes ou ides) focos de infeco cutnea por dermatfitos (dermatoftides) ou candida (levedurdes). As leses de ide ocorrem pela liberao de alrgenos fngicos circulantes, os quais, em pessoas sensveis, so capazes de provocar erupes cutneas distantes do foco primrio. As reaes alrgicas como eritema nodoso podem ser parte da infeco primria de alguma enfermidade sistmica como histoplasmose e coccidioidomicose. Com freqncia, a hipersensibilidade, segundo se tem demonstrado por reaes cutneas positivas, est relacionada a uma boa resistncia infeco ou reinfeco.
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PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS
1. COLETA E TRANSPORTE DO ESPCIMEN CLNICO 1.1. Escarro: trs amostras matutinas devem ser coletadas aps levantar, mas antes do caf da manh. Os pacientes so instruidos para lavar a cavidade bucal com gua imediatamente antes da obteno do escarro. A produo de escarro pode ser induzida por nebuliao com salina se um adequado espcimen no for produzido. O espcimen de escarro deve ser colocado em um frasco estril e enviado ao laboratrio no mximo at duas horas aps coletado. Se demoras so inevitveis, o espcimen clnico deve ser refrigerado a 4o C. 1.1. Broncoscopia: escovamento brnqico, lavagem broncoalveolar ou bipsia devem ser transportados prontamente para o laboratrio em frasco fechados e estreis. O escarro ps-broncoscopia deve ser coletado quando possvel. 1.3. Fluido cerebroespinhal: fluido cerebroespinhal deve ser coletado sempre que se suspeita de infeces do sistema nervoso central. Se o processamento no for imediato, a amostra deve ser deixada a temperatura ambiente e no refrigerada, j que o fluido cerebroespinhal um adequado meio de cultura no qual os elementos fngicos podem sobreviver at serem subcultivados. 1.4. Urina: amostras matutinas so preferidas. Estas devem ser coletadas em frascos estreis e transportadas imediatamente para o laboratrio. Demoras no processamento no devem exceder 1 horas, todavia, se atrasos forem inevitveis, a amotra deve ser mantida a temperatura de 4o C. 1.5. Secrees prostticas: algumas micoses profundas, notadamente a blastomicose e menos comumente a histoplasmose e coccidioidomicose, podem ser diagnosticadas pela coleta do lqido prosttico. A bexiga primeiro esvasiada, em seguida, processasse uma massagem prosttica. as secrees devem ser inoculadas diretamente em apropriado meio de cultura; tambm 5-10ml de urina devem ser coletados em um recipiente a parte.
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1.6. Exudatos: a pele sobre as leses pustulares deve ser desinfectada e o exudato aspirado, usando uma seringa e agulha estreis. A seringa pode servir com recipiente de transporte. Bipsias das leses podem ser necessrias, se o aspirado falhar na recuperao dos fungos. 1.7. Pele, plos e unhas: a leso deve ser higienizada com gaze embebida em lcool 70% para remover as bactrias contaminantes. As amostras de pele devem ser obtidas por raspados das margens das leses com uma lmina de bisturi ou com bordo cortante da lmina de microscopia. O material de unhas infectadas deve ser coletado por raspagem profunda das reas quebradias, distrficas e descoloradas da lmina ungueal e/ou dos depsitos subungueais. Os espcimens de cabelo devem ser coletados por arrancamento com pina, j que o foco infeccioso se encontra no bulbo piloso, tcnica da escova de cabelo, tcnica do quadro de cabelo ou lampada de Wood. 1.8. Tecidos: bipsias de stios suspeitos devem ser transportadas em gaze estril umedecida em salina ou em frasco estril contendo salina. Os espcimens de bipsia devem apresentar uma rea de tecido so e lesado. O material no deve estar congelado, desidratado ou formolisado. 1.9. Sangue: coleta de sangue venoso feita por puno com seringa e agulha estreis. Frasco de hemocultura bifsico (agar BHI-caldo BHI) ventilados devem ser empregados para cultura.
Fungos patognicos mais comuns e principais stios anatmicos

Sangue LCR Trato Genitourinrio Trato Respiratrio Pele e Anexos
C. immitis H. capsulatum S. schenckii Candida spp. C. neoformans P. brasiliensis
B. dermatitidis C. immitis H. capsulatum Aspergillus spp. Candida spp. C. neoformans S. schenckii
B. dermatitidis C. immitis H. capsulatum Candida spp. C. neoformans
B. dermatitidis C. immitis H. capsulatum P. brasiliensis S. schenckii Aspergillus spp. Candida spp. C. neoformans Zigomicetes
B. dermatitidis C. immitis Dermatfitos H. capsulatum P. brasiliensis S. schenckii Aspergillus spp. Candida spp. C. neoformans Zigomicetes
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Critrios de recusa de amostras clnicas para cultivo micolgico Critrio para recusa
Sem identificao no recipiente que contm o material clnico ou discrepncia de informao sobre o paciente na requisio do exame e na etiqueta de identificao do material clnico Esfregao de escarro corados pelo Gram com 15 clulas epiteliais por campo microscpico
Ao
Devolver a quem enviou para esclarecimentos
Quando se suspeita de uma infeco de trato respiratrio baixo, a presena de grande quantidade de clulas epiteliais em amostras de escarro indica contaminao com secrees orais; isto no necessariamente um critrio de recusa j que se pode recuperar fungos patognicos particularmente se so empregados meios seletivos; cada caso deve ser analisado individualmente Pedir uma nova amostra se a condio clnica justifica; se uma nova amostra vivel, mas no possvel obtla por e tcnicas no invasivas, pode ser necessrio a coleta por bipsias Notificar que as amostras de 14 horas so inaceitveis e pedir o envia de amostras matinas com no mximo 1 horas de colhidas Pedir o reenvio de amostras em frascos apropriados
Swab seco ou material insuficiente
Amostras de urina ou escarros de 14 horas
Material adequado remetido em recipiente inapropriado; falta de esterilidade, presena de vasamentos, no refrigerao
1. PROCESSAMENTO DO ESPCIMEN CLNICO
1.1. Pr-tratamento a. Secrees Respiratrias: lise com agentes mucolticos (N-acetil-l-cistena, pancreatina 0,5%, fluimicil). um procedimento opcional, pode melhorar a recuperao dos microganismos patognicos, mas fungos contaminates tambm so benificiados. b. Fluidos Corporais (lquido cfalo-raquidiano, lquido sinovial): filtrao (filtro de 0,11m) ou centrifugao (1500 a 1500g). necessrio para uma tima recuperao, dev ser procedida em espcimens com volume maior que 1-1ml. c. Urina: centrifugao(1500 a 1500g). necessria para uma tima recuperao, especialmente quando se tratar de agentes de micoses profundas.
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d. Tecido: triturao com gral e pistilo ou cortes em pequenos fragmentos (zigomicetos) com bisturi ou tesoura estreis. necessrio para melhorar a recuperao dos fungos agentes de micoses profundas. e. Unhas: macarao prolongada (pernoites) com hidrxido de potssio. necessrio para uma tima recuperao de dermatfitos e outros agentes (hifomicetos e leveduras).
1.1. Exame microscpico direto dos espcimens clnicos a. Azul de Alciano Uso: deteco de Cryptococcus neoformans Tempo requerido: 1 minutos Vantagem: quando positivo em LCR diagnstico Desvantagem: no comumente empregado, como a tinta da china no detecta todos os casos b. lcool-cido resistncia Uso: deteco de Mycobacteria e Nocardia spp. Tempo requerido: 11 minutos Vantagem: cora Nocardia spp e Blastomyces dermatitidis Desvantagem: espcimens de tecido so difceis de interpretar poe causa da forte colorao de fundo c. Branco de Calcoflor Uso: deteco especfica de fungos Tempo requerido: 1 minuto Vantagem: pode ser misturado ao KOH; detecta fungos rapidamente como resutado de fluorescncia brillhante (reao especfica com a quitina da parede fngica) Desvantagem: requer microscpio de fluorescncia; prominente fundo
fluorescenteporm o fungo
apresenta uma fluorescencia mais intensa; secrees
vaginais so difceis de interpretar d. Giemsa Uso: exame de medula ssea ou esfregao de sangue perifrico Tempo requerido: 15 minutos
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Vantagem: deteco de Histoplasma capsulatum intracelular Desvantagem: deteco usualmente limitada ao Histoplasma capsulatum e. Gram Uso: deteco de bactrias Tempo requerido: 3 minutos Vantagem: empregado no exame bacterioscpico do espcimen clnico; permite a identificao da maioria dos fungos Desvantagem: alguns fungos se coram bem, outros, por exemplo o Cryptococcus neoformans, coram-se fracamente e exibem apenas um aspecto pontilhado. Alumas Nocardia isoladas falham em corar ou coram fracamente. Artefatos mimetizam as leveduras f. Tinta da China Uso: deteco de Cryptococcus neoformans Tempo requerido: 1 minuto Vantagem: quando positivo no LCR diagnstico de meningite Desvantagem: negativo em muitos casos de meningite, no confivel g. Hidrxido de Potssio Uso: deteco clarear o espcimen para tornar o fungo mais visvel Tempo requerido: 5 minutos, se o clareamento no completo, um tempo maior necessrio (10 minutos) Vantagem: rpida deteco de elementos fngicos Desvantagem: requer experincia, j que os artefatos podem confundir o analista. O clareamento de alguns espcimens pode ser demorado (unha) h. Azul de Metileno Uso: detecodeteco do fungo em escamas de pele Tempo requerido: 1 minutos Vantagem: usualmente adicionado ao KOH, fornece contraste para a deteco dos elementos fngicos Desvantagem: o contraste das clulas pode ser difcil
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l. Gromori Metanamina Silver (impregnao pela prata) Uso: deteco deteco de fungos em cortes histolgicos Tempo requerido: 1 hora Vantagem: cora especificvamente os elementos fngicos Desvantagem: mtodo de colorao fngica que no est usualmente disponvel no laboratrio de micologia clnica m. Papanicolaou Uso: exame de secreo vaginal para a presena de clulas malgnas Tempo requerido: 30 minutos Vantagem: citotcnico pode identificar elementos fngicos Desvantagem: requer colorao especializada e analista familiarizado com essa colorao n. cido peridico de Schiff (PAS) Uso: deteco especfica de fungos Tempo requerido: 10 minutos, 5 minutos adicionais se colorao com contraste for empregada Vantagem: cora elementos fngicos bastante bem, hifas e leveduras podem ser
prontamente distingidos Desvantagem: Nocardia spp. no se coram bem, Blastomyces dermatitidis aparece pleomorfisado, artefatos PAS positivos podem aparecer com clulas de levedura o. Wright Uso: exame de medula ssea ou esfregao de sangue perifrico Tempo requerido: 7 minutos Vantagem: detecta Histoplasma capsulatum Desvantagem: deteco limitada ao Histoplasma capsulatum
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Caracterstica dos elementos fngicos vistos em exame direto dos espcimens clnicos Morfologia em Tecido Leveduras Organismos Tamaho (m) 1-5 Aspectos Caractersticos
Histoplasma capsulatum
pequenas, ovaladas a arredondadas; gemulantes; frequentemente encontradas em cachos dentro de histicitos; deteco difcil quando em pequenas quantidades, normalmente intracelulares pequenas, ovais a arredondadas ou em forma de charuto; gemulao simples ou mltipla; raramente vistas em espcimens clnicos as clulas variam de tamanho, usualmente so esfricas, mas podem ter a forma de uma bola de football americano; gmulas so normalmente simples; cpsulas podem ser ou no evidentes; raramente pseudohifas so formadas as clulas so comumente grandes e esfricas, com paredes duplas e refratrias; gemulao normalmente simples, gmulas podem manter-se ligadas clula me, a ligao entre clula me e clula filha estreita as clulas so normalmente grandes e envolvidas por pequenas leveduras perifricas (leme de navio, chapu de Mickey); pequenas clulas podem estar presentes e lembrar as de H. capsulatum as esfrulas variam muito no tamnho, algumas contm endosporos, outras esto vazias; duas esfrulas juntas podem lembrar clulas de B. dermatitidis gemulantes; endosporos podem lembrar as clulas de H. capsulatum, mas no mostram evidncias de gemulao; as efrulas podem produzir mltiplos tubos germinativos, se a preparao direta for mantida em cma mida por mais de 14h.; hifas podem ser encontradas em leses cavitrias grandes com paredes espessas e contendo endosporos; maduros esporngios so maiores do que as esfrulas de C. immitis
Sporothrix schenckii
1-6
Cryptococcus neoformans
1-15
Blsatomyces dermatitidis
8-15
Paracoccidioides brasiliensis
5-60
Esfrulas
Coccidioides immitis
10-100
Esporngios
Rhinosporidium seeberi
6-300
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Continuao Morfologia em Tecido Leveduras, pseudohifas ou hifas vedadeiras Organismos Tamaho (m)
Levedura: 34 Pseudohifa: 5-10
Aspectos Caractersticos
Candida spp.
as clulas usualmente exibem simples gemulao; pseudohifas quando presentes apresentam constrices nos pntos de constrices e matm-se unidas com cordo de salsichas; hifas verdadeiras quando presentes tm paredes paralelas e so septadas hiflicos curtos e encurvados esto presentes com cachos de clulas de leveduras esfricas hifas so grandes, em forma de fita, freqentemente encurvadas, ocasionalmente septadas e com ramificaes em ngulo reto; pequenas hifas podem ser confundidas com as do Aspergillus spp., particularmente A. flavus
Leveduras e hifas
Malassezia furfur
Levedura: 3- elementos
8
Hifa: 1,5-4
Hifas septadas largas
Zygomycetes
10-30
Hifas septadas hialinas
Dermatfitos: Pele e unhas 3-15 hifas hialinas septadas so comumente vistas; cadeias de artrosporos podem estar presentes artrosporos na periferia do fio de cabelo, produzindo uma bainha que indica infeco ectotrix; artropsoros formados pela fragmentao de hifas dentro do fio de cabelo so indicativos de infeco endotrix; filamentos hialinos longos ou canais dentro dos plos so indicativos de favus as hifas so septadas e exibem ramificao dicotmica com ngulo de 45o; grandes hifas atpicas podem lembrar as de zigomicetos hifas e artrosporos retangulares esto presentes; formas irrregulares podem ser observadas hifas e artrosporos retangulares a ovalados esto presentes; blastosporos podem ser difceis de ser em observados
Plos
3-5
Aspergillus spp.
3-11
Geotricchum spp.
4-11
Trichospporon spp.
1-4/8
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Continuao Morfologia em Tecido Organismos Tamaho (m) Aspectos Caractersticos
Penicillium spp. Scopulariopsis spp. Paecilomyces spp. Fusarium spp. Pseuallescheria boydii Hifas septadas demceas Alternaria spp. Bipolaris spp. Cladosporium spp. Curvularisa spp. Drechslera spp. Exophiala spp. Phialophora spp. Wangiella dermatitidis 1-6
hifas so septadas e impossveis de distingir das outras dos demais fungos hialinos, p.ex. Aspergillus spp.
hifas demceas polimrficas so vistas; clulas gemulantes com septos simples e cadeias de clulas arredondadas e entumescidas podem estar presentes; ocasionalmente agragados podem ser encontrados em infeco por Phialophora e Exophiala
Corpsculos Muriformes
Cladosporium carrionii Fonsecaea compacta Fonsecaea pedrosoi Phialophora verrucosa Rhinocladiella aquaspersa
5-10
clulas de paredes marrom e espessas, arredondadas e pleomrficas asseptadas, unissetadas e septadas em dois planos; comumente as clulas contm duas divises que formam 4 clulas; ocasionalmente hifas septadas ramificadas podem ser encontradas alm dos corpsculos muriformes grnulos brancos, macios sem matriz cementada
Grnulos
Acremonium falciforme Acremonium kiliensi Acremonium recifei Curvularia geniculata Curvularia lunata Aspergillus nidulans
100-300
500-1000
grnulos negros, duros com matriz cementada na periferia grnulos negros, macios, sem matriz cementada grnulos negros, macios, vacuolados, sem matriz cementada, formados a partir de hifas escuras e clulas entumescidas
65-160
Exophiala jeanselmei
100-300
Fusarium moniliforme Fusarium solani Leptosphaeria senegalensis Leptosphaeria tompkinsii
100-500 300-600 400-600 500-1000
grnulos brancos e macios, sem matriz cementada grnulos negfros, duros, com matriz cementada; periferia composta de clulas poligonais; centro formado por rede de hifas
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Continuao Morfologia em Tecido Organismos Tamaho (m) 50-500 Aspectos Caractersticos
Madurella grisea
grnulos negros e macios, sem matriz cementada; periferia composta de clulas poligonais entumescidas; centro formado por rede de hifas grnulos negros a marrons-escuros, duros que podem ser de dois tipos: marrom ferrugem, compacto e preenchido com matriz cementada marrom escuro e preenchido com numerosas vesculas (614m), matriz cementada na periferia e rea central de hifas claras grnulos brancos com matriz cementada presente na periferia grnulos brancos, macios, compostos de hifas e clulas entumescidas na periferia dentro de uma matriz cementada grnulos negros, macios, compostos de clulas poligonais entumescidas na periferia; centro formado por rede de hifas; sem matriz cementada
Madurella mycetomatis
100900
Neotestudina rosatii
300-600
Pseudoallescheria boydii
100-300
Pyrenochaeta romeroi
300-600
3. CULTURA 3.1. Meios de cultura a. Isolamento primrio Agar de Sabouraud 1% (SDA): recuperao primria de fungos saprbios e
patognicos (no aconselhvel) Agar infuso de crebro-corao (BHIA): recuperao primria de fungos saprbios
e patognicos Agar infuso de crebro-corao com cloranfenicol e cicloheximida: recuperao
primria de fungos saprbios e patognicos, excluindo-se os dermatfitos Agar de Sabouraud e Agar BHI (SABHI): recuperao primria de fungos
saprbios e patogncios Agar mycosel: principal meio de recuperao primria de dermatofitos
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Frasco de hemocultura bifsico (agar BHI e caldo BHI): recuperao primria de
fungos do sangue
Meios de cultivo para recuperao de fungos de amostras clnicas

Sangue medula ssea agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro agar mycosel agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida. agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida. agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro e gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida; agar semente de niger. agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida. agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida. agar de Sabouraud com infuso de crebro-corao; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina e cloranfenicol; agar infuso de crebro-corao com ou sem sangue de carneiro, gentamicina, cloranfenicol e cicloheximida; agar semente de niger.
LCR
Pele, plos e unhas Membranas mucosas
Abscessos, lceras e leses subcutneas
Escarro e secrees pulmonares
Estomatite
Bipsia
Urina
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Antimicrobianos adicionados aos meios micolgicos ANTIMICROBIANOS Antibacterianos Cloranfenicol Gentamincina Antifngico Cicloheximida 500g/ml 16g/ml 5g/ml CONCENTRAO NO MEIO
b. Isolamento secundrio Agar milho com tween 80: identificao de Candida albicans por produo de
clamidosporos; identificao de outras leveduras por micromorfologia Agar base nitrognio-leveduras (YNB): identificao de leveduras por
determinao de assimilao de acares Agar base carbono-leveduras (YCB): identificao de espcies de Cryptococcus
pela reduo de nitratos Agar semente de niger: recuperao e identificao de Cryptococcus neoformans Agar ascosporos: deteco de ascosporos em leveduras ascosporognicas Agar uria: deteco de espcies de Cryptococcus neoformans; diferenciao de
Trichophyton mentagrophytes e Trichophyton rubrum; deteco das espcies de Trichosporon Agar batata dextrosado: demontrao da produo de pigmentos por Trichophyton
rubrum Meio de arroz: identificao de Microsporum audoiunii Agares tricofitons 1-7: identificao dos membros do gnero Trichophyton Agar Czapeck: recuperao e identificao diferencial de espcies de Aspergillus e
Penicillium
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Meios aconselhveis para subcultura de fungos Grupo Zygomycetes Meios de cultivo agar milho agar de Sabouraud 1% agar milho agar de Sabouraud agar Czapec-Dox agar de Sabouraud agar milho agar infuso de crebro-corao
Fungos hialinos
Aspergillus spp. Dermatfitos Fungos demceos Fungos dimrficos
Comparao: Placas x Tubos Caracterstica rea superficial Placa grande (aproximadamente 7500mm para 100mm de placa) Suprimento de oxignio Taxa de desidratao do meio Segurana no manuseio Possibilidade disseninao de fungos Deteco de culturas mistas fcil difcil de pobre grande boa pequena bom rpida
1
Tubo pequena (aproximadamente 1500mm1 por tubo de 15x115mm) pobre lenta
Taxa de Crescimento Grupo Crescimento rpido Crescimento intermedirio Crescimento lento Taxa de crescimento (dias) <5 6-10 >11 Fungos saprbios, oportunistas e leveduras oportunistas, subcutneos e dermetfitos sistmicos e subcutneos
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Distino entre fungos contaminantes e patognicos
So os sintomas da infeco consistentes com os sintomas de uma infeco fngica ?
Os elemtos fngicos foram visualizados no tecido ou em outro material obtido da leso ?
Houve crescimento fngico a partir da cultura do material clnico ?
Houve mais de uma cultura positiva para a mesma espcie fngica ?
O fungo isolado capaz de causar os sintomas observados na infeco sob investigao ?
3.1. Inoculao nos meios de cultura a. Equipamentos Ala em L (dobrada em ngulo reto): fungos filamentosos Ala em gota (bacteriolgica): fungos leveduriformes Ala de Drigalski: espalhamento sobre o meio de cultura Ala de Hockey: espalhamento sobre o meio de cultura
b. Tcnicas de inoculao Esgotamento sobre a superfcie do meio: fungos leveduriformes Perfurao do meio: fungos filamentosas
3.4. Tempo de incubao Uma semana para fungos saprbios e oportunistas Duas semanas para os dermatfitos Quatro semanas at 11 semanas para os fungos patogncios (dimrficos)
3.5. Temperatura de incubao Temperatura ambiente ou 30o C para isolamento primrio Trinta e sete graus para obteno do dimorfismo
4. PROCEDIMENTOS GERAIS 4.1. Escarro e secrees respiratrias: selecione as partes mais purulentas, sanguinolentas, caseosas e necrticas. Se a amostra muito viscosa, deve-se
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homogeneizar pela adio de NALC; NAOH e outros agentes de digesto qumica, usados para o processamento de espcimens suspeitos de tuberculose, no devem ser empregados. Prepare uma montagem mida da amostra para realizao de exame direto e inocule 0,5ml no meio de cultura empregado; como as secrees so freqentemente contaminada com bactrias, meios contendo antibiticos devem ser empregados; uma cobinao de meios seletivos, tal como BHIA com cloranfenicol e cicloheximida, e no seletivos, tal como SABHI, devem ser utilizada. 4.1. LCR: as amostras podem ser centrifugadas a 1500-100g por 10 minutos e o sedimento inoculado sobre a superfcie do meio de cultura no seletivo (SABHI); havendo pouca quantidade disponvel, inocule no meio 3-4 gotas de espcimen clnico; montagens com tinta da china (nigrosina) devem ser preparadas quando o C. neoformans for suspeito; para preparar a montagem microscpica tanto uma gota do sedimento centrifugado quanto uma alquota do material in natura devem ser misturadas a uma gota de tinta china sobre a lmina; uma lamnula aplicada e a preparao microscpica e examinada para a presena de leveduras gemulantes com cpsulas. 4.3. Urina: entorno de 10 ml de urina deve ser centrifugado e 0,5 ml de sedimento deve ser inoculado tanto em agar no seletivo (SABHI) quanto em meios seletivos (BHIA com cloranfenicol e cicloheximida); montagens diretas podem ser preparadas e examinadas microscopicamente para a presena de leveduras e hifas. 4.4. Pele, plos e unhas: escamas de pele, fragmentos de unha e fios de cabelos arrancados podem ser examinados em preparaes microscpicas com KOH; o propsito do KOH clarear ou macerar as estruturas proteinceas e esclerticas que podem dificultar a visualizao dos elementos fngicos (a macerao pode ser acelerada pelo rpido aquecimento da lmina sobre a chama do bico de Bunsen); uma lamnula aplicada e os espcimens so examinados para a presena de hifas estreitas e regulares que caracteristicamente se quebram em artrosporos; a visualizao da hifa melhorada pela adio de calcoflor ao KOH (microscpio de fluorescncia); em plos o arranjo dos esporos na superfcie do plo (ectotrix) e intrapilarmente (endotrix) podem ser vistos; fragmentos de hifas podem ser tambm encontrados dentro dos plos; escamas de pele, fragmentos de unha e plo devem ser colacados diretamente sobre a superfcie e dentro do agar mycosel com uma ala em L; as reas inoculadas devem ser
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examinadas em intervalos freqentes para o desenvolvimento de colnias; as culturas devem ser mantidas por pelo menos 30 dias antes de descartar como negativas. 4.5. Tecido: o processamento dos espcimens de tecido pode ser feito a partir da triturao com gral e pistilo (no recomendvel) ou a partir de cortes com tesoura ou bisturi estreis; os fragmentos (1mm3) devem ser inoculados diretamente sobre o meio de cultura e abaixo de sua superfcie; homogeneizados de tecido, medula ssea ou centrifugados de espcimens clnicos (5-10 ml) devem ser depositados sobre meios no seletivos (SABHI), j que esses espcimens so normalmente estreis e meios com antimicrobianos no so necessrios. 4.6. Sangue: frascos de hemocultura bifsicos (agar BHI e caldo BHI.
5. IDENTIFICAO DOS FUNGOS
5.1. Fungos filamentosos a. Exame Macroscpico: A morfologia colonial deve ser interpretada com cautela, pois fatores como tipo de meio de cultura, temperatura de incubao e tempo de incubao interferem no aspecto macroscpico das culturas fngicas. As caractersticas a serem investigadas so: Textura: algodonosa; velutina; granular; pulverulenta ou glabrosa Topografia: rugosa; umbeliforme; umbilicada ou verrucosa Colorao: negra; cinza; branca; marrom; amarela; creme; laranja; verde; violeta ou
vermelha b. Exame microscpico A observao da micromorfologia reprodutiva dos fungos filamentosos a base do diagnstico micolgico. Exame microscpico direto: um fragmento de cultura retirado da colnia em tubo
ou placa e montado sobre lmina e lamnula com lquido de montagem apropriado (lactofenol de Aman ou lactofenol com azul de algodo) e observado em microscpio ptico com objetivas de 10x e 40x e luz de baixa intensidade. O exame microscpico
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direto de preparao fcil e rpida e normalmente suficiente para a identificao de muitos fungos isolados no laboratrio. A principal desvantagem do mtodo a desorganizao das estruturas morfolgicas durante a preparao da montagem microscpica. Microcultivo em lmina: o cultivo de fungos em meios slidos (agar de Sabouraud)
ou lquidos (caldo de Sabouraud) depositados diretamente sobre lminas e/ou lamnulas preservam as estruturas morfolgicas, j que no se manipula diretamente os elementos fngicos. A principal desvantagem do mtodo a demora no diagnstico, pois h a necessidade de se esperar o crescimento da microcultura. A observao microscpica feita como no exame direto. Corantes: lactofenol com azul de algodo: fungos hialinos; lactofenol de Aman:
fungos demceos
Mtodos complementares para a identificao de fungos filamentosos
Teste ou Procedimento Dimorfismo Aplicao Permite diferenciar os fungos dimrfico pela obteno de sua fase leveduriforme ou de esfrulas quando cultivados tempratura de 37o C Fungos Blatomyces dermatitidis Coccidioides immitis Histoplasma capsulatum Paracoccidioides brasiliensis Sporothrix schenckii
Exoantgeno
Permite a identificao especfica de Blastomyces dermatitidis vrios fungos por imunodifuso Coccidioides immitis Histoplasma capsulatum Permite diferenciar os fungos pela Fungos oportunistas: rpido velocidade des crescimento que Dermatfitos: intermedirio apresentem Fungos sistmicos: intermedirio a lento Permite diferenciar as espcies patognicas que apresentam habilidade de crescimento em temperaturas elevadas Absidia corymbifera: 45-50o C Aspergillus fumigatus: 48-50o C Cladosporium batianum: 41-43o C Cladosporium trichoides: 37-41o C Cunnighamella bertholletie: 41o C Cunnighamella elegans: 40o C Rhizomucor pusillus: 50-55o C Rhizopus microsporus: 45o C Rhizopus oryzae: 45o C
Taxa de Crescimento
Termo-tolerncia
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Continuao Teste ou Procedimento

Resistncia Cicloheximida
Aplicao
Fungos
Permite diferenciar as espcies Epidermophyton floccosum patognicas a partir da capacidade de Microsporum spp. crescimento em agar mycosel a 30o C Trichophyton spp. Blatomyces dermatitidis Coccidioides immitis Histoplasma capsulatum Paracoccidioides brasiliensis Sporothrix schenckii Permite diferenciar alguns fungos da Basidiobolus ranarun classe dos Zygomycetes pela produo Conidiobolus coronatus de esporos que so lanados violentamente e aderem na parede do tubo ou placa Permite diferenciar o Trichophyton mentagrophytes e o Trichophyton rubrum quando cultivados em fios de cabelo esterilizados por autoclavao em tubo ou placa T. mentagrophytes: perfuraes cnicas no fio de cabelo, observadas em microscpio ptico T. rubrum: no produz perfuraes no plo
Demonstrao de Balistosporos
Perfurao do Fio de Cabelo
Urease
Permite diferenciar o Trichophyton T. mentagrophytes: urease positivo mentagrophytes e o Trichophyton T. rubrum: urease negativo rubrum quando cultivados em agar uria de Christensen Permite diferenciar nutricionalmente T. tonsurans e T. violaceum: tiamina alguns membros do gnero Trichophyton T. equinum: cido nicotnico quando cultivados em uma srie de M. megninii: histidina meios com ou sem nutrientes agregados Permite diferenciar o Microsporum canis M. canis: crescimento e o Microsporum audouinii quando M. audouinii: sem crescimento cultivados em meios de arroz a 30o C Permite diferenciar o Trichophyton T. rubrum: pigmento cor de vinho rubrum do Trichophyton mentagrophytes M. persicolor: pigmento cor de rosa quando cultivados em agar batata T. mentagrophytes: sem pigmentos dextrosado ou agar milho com 1% de glicose e o Microsporum persicolor do Trichophyton mentagrophytes quando cultivados em agar peptona 1% Permite diferenciar a Wangiella spp. das Wangiella dermatitidis: negativo outras espcies de fungos dematiceos Exophiala jeanselmei: positivo Permite diferenciar alguns patgenos Fonsecaea spp.: negativo dematiceos de saprbios quando Cladosporium spp.: positivo cultivados em caldo contendo gelatina a 11% Permite diferenciar alguns fungos Exophiala werneckii: positivo dematiceos quando cultivados na Exophiala jeanselmei: negativo presena de 15% de NaCl
Agares Tricofitons 1-7
Crescimento em Arroz
Produo de Pigmentos
Assimilao de Nitrato
Protelise
Tolerncia ao Cloreto de Sdio
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5.1. Identificao dos fungos leveduriformes a. Exame Macroscpico menos distintivo para as espcies de levedura. Tambm aqui a morfologia colonial deve ser interpretada com cautela, pois os mesmos fatores (tipo de meio de cultura, temperatura de incubao e tempo de incubao) que interferem no aspecto macroscpico das culturas filamentosas influenciam as caractersticas
macromorfolgicas das colnias levedudriformes. Normalmente, essas colnias tm uma aparncia mucide ou pastosa e uma topografia lisa ou rugosa. Como nas colnias filamentosas, diversas cores podem ser descritas, todavia, as colnias de colorao esbranquiadas so as mais frequentemente encontradas. b. Exame Microscpico Por terem poucas estruturas micromorfolgicas que permitam a identificao das espcies, o exame microscpico deve ser acompanhado de estudo do pefil biqumico. Empregando-se microscpico ptico, objetivas de 10x e 40x e luz de baixa intensidade, a observao microscpica pode ser procedida em preparaes diretas e/ou em microcultivos corados com azul de algodo. Clulas de levedura, blastosporos, pseudohifas, clamidosporos, artrosporos e hifas vedadeiras so as estruturas visualizadas.
Mtodos de identificao de fungos leveduriformes Teste ou Procedimento Morfologia em Agar Milho Aplicao Permite a diferenciao micromorfolgica de algumas leveduras a partir da produo em agar milho com tween 80 de blastosporos, pseudohifas, blastosporos, clamidosporos, hifas verdadeiras e/ou artrosporos Fungos C. albicans: pseudohifas, blastosporos e clamidosporos Candida spp.: pseudohifas e blastosporos Trichosporon spp.: hifas e artrosporos Geotrichum spp.: hifas e artrosporos Cryptococcus spp.: blastosporos Candida glabrata: blastosporos Saccharomyces spp.: blatosporos Hansenula spp.: blastosporos Tubo Germinativo Permite diferenciar a Candida albicans pela produo de tubo germinativo em 0,5ml de soro sanguneo ou clara de ovo a 37o C por 1-3 horas C. albicans: tubo germinativo positivo
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Continuao Teste ou Procedimento Tinta da China Aplicao Permite a diferenciao de leveduras patognicas pela deteco de cpsulas em colorao de contraste com tinta da china de Permite a identificao definitiva das espcies de levedura a partir do de padres de assimilao de acares obtidos em meios slidos (YNB) Permite a diferenciao de espcies de levedura a partir de padres de fermentao de acares obtidos em meios lquidos Permite a diferenciao de espcies de Cryptococcus pela reduo do nitrato de potssio obtida em meios slidos (YCB) ou pelo teste rpido da nitratoredutase Permite a diferenciao de espcies de leveduras patognicas a partir da produo de urease verificada em agar uria de Christensen, teste rpido da urease ou teste rpido urease -seletivo Permite a diferenciao de espcies patognicas de levedura a partir da sntese de fenol-oxidase verificada pela produo de colnias negras ou marrons em agar semente de niger Permite diferenciar espcies de levedura pela produo de ascosporos em meio ascosporoindutor Fungos Cryptococcus neoformans: tinta da china positiva
Assimilao Carbohidratos
Tabela de valores: crescimento (+), sem crescimento (-)
Fermentao Carbohidratos
de
Tabela de valores: produo de gs (+), sem produo de gs (-)
Assimilao de Nitrato
C. albidus e C. terreus: positivos
Hidrlise da Uria
Cryptococcus positivo
neoformans:
Trichoporon spp.: positivo
Deteco da Fenol-oxidase
Cryptococcus positivo
neoformans:
Formao de Ascosporos
Saccharomyces e ascosporo positivo
Hansenula:
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Continuao Teste ou Procedimento Crescimento a 37o C Aplicao Permite a diferenciao de espcies patognicas de levedura pela demonstrao de termotolerncia em agar de Sabouraud a 37o C Fungos Candida albicans: positivo Cryptococcus positivo Saccharomyces positivo neoformans:
Trichospporon beigelii: positivo cerevisiae:
Geotrichum candidum: negativo Formao de Pelcula Permite a diferenciao de espcies de levedura pela habilidade de formao de pelcula superficial em caldo de Sabouraud Candida tropicalis: positivo Candida krusei: positivo Trichoporon spp.: positivo Geotrichum candidum: positivo
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Fungos Leveduriformes (Cultura Pura)
Tubo Germinativo + Tinta da China + Candida albicans Agar Milho (Micromorfologia)
Blastosporos
Pseudohifas, Blastosporos e Clamidosporos
Pseudohifas e Blastosporos
Hifas e Artrosporos
Urease + Assimilao de Inositol + Assimilao de Nitrato + Rhodotorula

(ausncia de balistosporos)
Candida albicans Ascosporos
Assimilao de Carbohidratos + Candida spp. Assimilao de Carbohidratos
Urease Geotrichum
(ausncia de blastosporos)
Trichosporon
(presena de blastosporos)
+ Assimilao de Carbohidratos
Agar Semente de Niger + Assimilao de Carbohidratos Candida spp. Saccharomyces e Hansenula Candida glabrata Outros Padres de Assimilao
Assimilao de Carbohidratos
Cryptococcus spp. (identificao final)
Cryptococcus neoformans
Cryptococcus spp. (identificao final)
5.3. Diagnstico histopatolgico

Coloraes teis para o diagnstico histopatolgico das micoses
Colorao Hematoxilina & Eosina Cor do Fungo Rosa a rosa azulado Vantagens Mostra a resposta tecidual; cora alguns fungos; no mascara a colorao natural fngica; revela o fenmeno de SplendoreHoppli Limitaes Muitos fungos so pobremente corados ou no se coram
Gormori-Grocott
Marron escuro sobre um fundo verde claro
Os fungos so mais prontamente detectados
Mascara a colorao fngica natural e pode encobrir detalhes internos dos fungos; a resposta tecidual pode ser detectada
Coloraes Especiais para Fungos
cido Schiff
Peridico
de
Rosa avermelhado sobre um fundo verde
Os fungos so mais prontamente detectados
Mascara a colorao fngica natural e pode encobrir detalhes internos dos fungos; a resposta tecidual pode ser estudada; muitos elementos teciduais tambm se coram
Gridley
Vermelho prpura sobre um fundo amarelo
Os fungos so mais prontamente detectados; detalhes morfolgicos dos fungos visveis so
Mascara a colorao fngica natural; fungos no viveis no momento da fixao tecidual podem no ser corados
Mucicarmin de Mayer
Cpsula
de
Cryptococcus
Permite a diferenciao do C. neoformans das outras leveduras
No especfica para C. neoformans e algumas clulas podem no se corar; o Rhinosporidium seeberi e o Blastomyces dermatitidis podem ser corados
neoformans vermelha sobre um fundo prpura
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5.4. Diagnstico imunolgico

Testes imunolgicos para a deteco de micoses sistmicas
Fixao de Complemento
Contraimunoeletroforese
Ensaio imunoenzimtico
Anticorpo Fluorescente
Teste de Ssensibilidade
Aglutinao em Ltex
Micoses Sistmicas Aspergilose Blastomicose Candidase Coccidioidomicose Criptococose Histoplasmose Paracoccidioidomicose Esporotricose
X X X X
X X X
X X X X X X X X X X
X X X X X X X X X X X X X X X X
X X
X X
X X X X X X X
X X X X X X X X
X X
Precipitao em Tubo
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Aglutinao em Tubo
Prova do cido Nuclico
Radioimunoensaio
Imunodifuso
Exoantgeno
Cutnea
(DNA)
ASPERGILOSE
a. SINONMIA: sem referncia b. DEFINIO: a aspergilose um espectro de doenas causadas por membros do genro Aspergillus. A manifestao clnica e a severidade da doena dependem do estado fisiolgico do paciente e da espcie de Aspergillus envolvida. Hospedeiros com resistncia diminuda por doena debilitante, quimioterapia, perda da microbiota normal e imunocomprometimento pelo uso de antimicrobiano e esterides podem predispor o paciente colonizao e/ou doena invasiva. Aspergillus spp. so frequentemente patgenos secundrios oportunsticos em pacientes com bronquiectasia, carcinomas, outras micoses e tuberculose. c. FORMAS CLNICAS: colonizao; infeco; alergias e toxicoses. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: o prognstico depende do tipo e da severidade da doena e tambm do status fisiolgico do paciente. A aspergilose algica se torna tipicamente crnica. Contudo, a colonizao pode se manter crnica ou mesmo se tornar invasiva. A aspergilose alrgica tem sido tratada com sucesso com a predinisona, com cromoglicato de sdio e inalao de nistatina. O uso prolongado de esterides nos caso de aspergilose crnica deve ser visto com cautela. Os aspergilomas podem ser tratados por resseco cirrgica e anfotericina B. A aspergilose infeco pode ser tratada com anfotericina B, porm os Aspergillus no so muito sensveis nem a este antifngico e nem 5-fluorocitosina. Formas sistmicas e meningticas so geralmente fatais, mesmo depois de instituda a terapia. e. PATOLOGIA: a reao tecidual na aspergilose representada por uma inflamao supurativa aguda com reas de necrose isqumica. O fungo prolifera como hifas septada com dimetro 1,5 a 4,5 m. As hifas podem apresentar caracteristicamente ramificaes dicotmicas (aproximadamente 45o) com uma aparncia geral de exrcito em marcha. As hifas podem se ramificar irregularmente e ter um aspecto similar a hifas encontradas nos zigomicetos. Cabeas aspergilares e miclio (aspergilomas) podem ser produzidas em cavidades pulmonares. Invaso de vasos sangneos, trombose, enfartamentos e disseminao so extremamente comuns. f. LABORATRIO: Exame Direto: os materiais clnicos, tais como fludos, escarro ou tecidos, so montados em KOH a 10%. Hifas septadas, hialinas, ramificadas e longas,
medindo aproximadamente 3.0m de dimetro so observadas nas aspergiloses. A demonstrao das hifas nos espcimens clnicos e a recuperao repetida da mesma espcie de Aspergillus em cultura um forte indcio de aspergilose. Deve sempre ser lembrado que um nmero de outros fungos pode ser morfologicamente idntico ao Aspergillus no tecido. Em ocasies raras, o miclio pode dar origem a corpos de frutificao (cabeAqs aspergilares) e condios na fase parasitria. Isolamento: o material clnico deve ser inoculado em SDA com cloranfenicol e incubados a 30o C. Os Aspergillus so sensveis cicloheximida, dessa forma, eles no iro crescer em meio que contenham este antifngico. O descarte de culturas negativas deve ocorrer s depois de 4 semanas. g. MICOLOGIA: Aspergillus flavus; A. fumigatus; A. glaucus; A. nidulans; A. niger e A. terreus. h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais
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BLASTOMICOSE NORTE AMERICANA

a. SINONMIA: Doena de Chicago, Doena de Gilchrist.. b. DEFINIO: a blastomicose norte americana pode ser uma infeco benigna e
autolimitada ou ainda uma micose crnica granulomatosa e supurativa, na qual a infeco primria iniciada nos pulmes com freqente disseminao para outros orgos do corpo, especialmente pele e ossos. A doena mais prevalente em homens de 40 a 60 anos de idade e em crianas. A blastomicose pode coexistir com carcinoma broncognico, histoplasmose, doena pulmonar severa e tuberculose. c. FORMAS CLNICAS: crnica ssea; primria pulmonar e sistmica. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a terapia necessria. A anfotericina B a droga de escolha. e. PATOLOGIA: a resposta do tecido uma combinao de inflamao granulomatosa e supurativa aguda. Estas podem variar proporcionalmente de pessoa a pessoa e de um stio anatmico para o outro no mesmo indivduo. Os pulmes geralmente apresentam um
processo inflamatrio granulomatoso disseminado com pequenas reas abscedadas. Os fungos so geralmente demosntrados nos bordos ou margens dos abscessos. O envolvimento cutneo mostra uma hiperplasia pseudoepiteliomatosa com microabscessos focais nas papilas drmicas. As clulas de levedura so globosas a ovides com aproximadamente 8 a 15m de dimetro. Um simples blastosporos est unido clula me por uma base de insero larga. Na maioria das vezes, visto predominantemente celulas simples sem a presena de blastosporos. A parede celular da levedura espessa e duplamente refratria. f. LABORATRIO: Exame Direto: o material clnicos, tais como fludos prostticos, escarros ou tecidos, so examinadso ao KOH a 10%. O fungo usualmente ocorre como uma levedura globosa de paredes espessas e refringentes que mede de 8 a 15m de dimetro, contudo, algumas leveduras podem apresentar um dimetro de at 30m. O fungo pode apresentar tambm clulas de levedura que tm menos do que 8m. Cada blastosporo est ligado clula me por uma base larga. Pelo seu tamanho, o Blastomyces dermatitidis, sob certas circunstncias, pode ser confundido com o Coccidioides immitis ou Cryptococcus neoformans. Isolamento: inocular o material clnico em SDA com cloranfenicol, em agar
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infuso de crebro corao com cloranfenicol (BHIA), em agar extrato de levedura-fosfato e em um meio com cicloheximida e incubar a 30o C. As culturas devem ser mantidas por pelo menos 4 semanas antes de serem despresadas como negativas. O Blastomyces dermatitidis cresce melhor em agar extrato de levedura. Confirmao Laboratorial: a converso da forma filamentosa leveduriforme necessria para assegurar que o fungo suspeito o
Blastomyces dermatitidis e no outro fungo similar, tal como o Chrysosporium ou o Sepedonium. A converso do fungo pode ser prontamente acompanhada no agar de Kelley ou em agar sangue suplementado com vitaminas. Incubar os tubos inoculados a 37o C. A forma de levedura ir crescer dentro de alguns dias. g. MICOLOGIA: Blastomyces dermatitidis; Ajellomyces dermatitidis (forma sexuada). h. HABITAT NATURAL: America do Norte
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BLASTOMICOSE QUELOIDIANA
a. SINONMIA: Lobomicose, Doena de Jorge lobo. b. DEFINIO: a lobomicose uma infeco cutnea crnica que se manifesta como quelides, leses verrucosas a nodulares, placas crostosas e tumores. O fungo cresce como clulas globosas que se conectam umas com as outras por uma base de insero estreita. As clulas podem formar ainda cadeias ramificadas. As leses desenvolvidas so bem definidas, macias, indolores e mveis, j que estas se encontram livres nos tecidos mais profundos. Leses antigas tornam-se verrucosas e ulceradas com leses satlites resultantes de autoinfeco. c. FORMA CLNICA: cutnea. d. Prognstico e Tratamento: as leses so tratadas por exciso cirrgica, pois reincidncias comumente ocorrem. Esta exciso deve ser ampla, o que pode resultar em novas cicatrizes. e. PATOLOGIA: os ndulos so formados por granulomas histiocitrios subepidermais que se encontram sob a pele e o tecido subcutneo. Tecido fibroso est disperso por entre um grande nmero de celulas gigantes e histicitos. As clulas gigantes tm de 40 a 80m de dimetro. Nas leses antigas, infiltrados piognicos, paraceratose e acantose esto presentes. Hiperplasia pseudoepiteliomatosa e abscessos intraepidrmicos esto ausentes. O fungo ocorre como cadeias de clulas globosas de 7 a 14 m de dimetro. Cada clula est conectada clulas adjacentes por uma base de insero estreita. Algumas destas clulas ocorrem dentro de clulas gigantes e magrfagos, mas a maioria est entre elas. f. LABORATRIO: Exame direto: o material clnico, tecidos cutneo e subcutneo, montado em KOH a 10% e examinado para a presena de cadeias de clulas globosas em forma de limo ou ampulheta. Isolamento: o fungo no tem sido cultivado. g. MICOLOGIA: Paracoccidioides loboi (ou Loboa loboi ). h. HABITAT NATURAL: desconhecido.
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CANDIDASE
a. SINONMIA: Candidose, Monilase. b. DEFINIO: cadidase uma infeco mictica primria ou secundria causada por diversos fungos do gnero Candida. As manifestaes clnicas podem ser agudas, subagudas, crnicas ou episdicas. A doena apresenta certa dificuldade de diagnstico devido ao fato dos membros do gnero Candida serem tambm comumente recuperados de indivduos saudveis. c. FORMAS CLNICAS: alrgica; cutnea; mucocutnea e sistmica. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: o prognstico depende quase que inteiramente do tipo e da severidade dos fatores predisponentes e da subsequente forma clnica da candidase. A nistatina efetiva no controle do thrush, da doena cutnea, perinquea, doena esofagiana crnica, vaginites e infeces gastrointestinais. A anfotericina B pode ser usada topicamente e a droga de escolha no tratamento da candidase disseminada ou sistmica e candidase mucocutnea crnica. Aproximadamente 60% dos isolados de C. albicans recuperados de pacientes previamente no tratados so sensveis 5-fluorocitosina. A droga tem sido til no tratamento da doena sistmica. O teste de susceptibilidade e monitoramento dos nveis sricos da 5-fluorocitosina so obrigatrios quando este agente antifngico empregado. e. PATOLOGIA: a reao tecidual inicialmente uma inflamao supurativa aguda seguida por uma reao inflamtria granulomatosa. A formao de abscessos bastante comum. Blastosporos e pseudohifas so ambos vistos em seces teciduais. Essas formas so melhor visualizadas por coloraes especiais, tais como PAS (periodic acid-Schiff) e GMS (Gomori menthenamine silver). Os blastosporos so ovides e usualmente de 3 a 4m de dimetro. Algumas espcies de Candida podem produzir, sob certas condies, hifas verdadeiras. f. LABORATRIO: Exame Direto: clulas de levedura gemulantes, de forma ovide e com 3 a 7m de dimetro; pseudohifas; hifas verdadeiras so usualmente visualizadas nos espcimens clnicos montados em KOH a 10%. Pode ser extremamente difcil diferenciar a Candida sp. de fungos como Aspergillus, Trichosporon e Geotrichum porque eles so todos capazes de produzir hifas verdadeiras morfologicamente muito semelhantes. Tubos
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germinativos e clamidosporos so observados em C. albicans. Isolamento: incubar o material clnico em SDA com cloranfenicol. Muitas espcies de candida (C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis) so sensveis cicloheximida. Meios com cicloheximida devem ser usados com cautela. Incubar a 30o C. O crescimento est presente em 1 a 5 dias. Fluido espinhal e sangue devem ser processados por filtrao. Identificao: baseada na produo de tubo
germinnativo, pseudohifas, hifas verdadeiras, clamidosporos, zimograma e auxanograma de carbohidratos, auxanograma dos compostos nitorgenados. g. MICOLOGIA: Candida albicans; C. krusei; C. guilhermondii; C. parapsilosis; C. pseudotropicalis; C. stellatoidea e C. tropicalis. h. HABITAT NATURAL: homem, animais, solo e vegetais
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COCCIDIOIDOMICOSE
a. SINONMIA: Febre do Vale de So Joaquim, Granulomatose Coccidiidica b. DEFINIO: a coccidiodomicose uma infeco respiratria que apresenta resoluo rpida. A micose pode se tornar aguda, crnica, severa ou fatal. A doena pode levar a uma condio pulmonar crnica ou disseminar para meninges, ossos, articulaes ou tecido cutneo e subcutneo. A resposta tecidual inicial na doena disseminada a supurao, contudo, a doena progressiva e crnica caracterizada por uma reao granulomatosa com algumas reas apresentando resposta celular mista. Acredita-se que o restabelecimento resulte em imunidade a reinfeco. Aproximadamente 60% dos pacientes com infeco primria so assintomticos, 40% tm uma doena pulmonar moderada a aguda e entorno de 0,5% desenvolvem doena extremamente grave. Mais ou menos 15% dos pacientes com doena disseminada tm meningite. c. FORMAS CLNICAS: primria: pulmonar e disseminada. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a coccidioidomicose primria tratada com repouso e restrio da atividade. Esterides podem ser usados para controlar reaes alrgicas. A doena secundria no tratada tem um prognstico grave. A droga de escolha a anfotericina B. A meningite usualmente requer adminstrao intratecal e intravenosa de anfotericina B. A 5-fluorocitosina tem pouco valor no tratamento das coccidioidomicose. Alguns pacientes tratados com miconazole apresentam uma alta taxa de recorrncia. e. PATOLOGIA: a reao tecidual uma inflamao granulomatosa e supurativa aguda. A supurao aguda est usualmente presente entorno dos artrosporos e depois da ruptura das esfrulas. Inflamao granulomatosa normalmente ocorre ao redor da esfrula em cutnea; secundria: pulmonar e
desenvolvimento. Hifas podem estar presentes na cavidade pulmonar e em leses meningianas sem formar artrosporos, o que pode levar a confuses com hifas de Aspergillus.
f. LABORATRIO: Exame Direto: espcimens clnicos, tais como flidos, escarro e tecidos, so examinados em KOH a 10%. Esfrulas com paredes espessas (entorno de 1m) de 30 a 60m de dimetro e endosporos de 1 a 5m de dimetro so caractersticos de Coccidioides immitis. Os endosporos so liberados quando a parede da esfrula rompida. Confuses
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podem ser feitas com o Blastomyces dermatitidis se os endosporos no esto em grande quantidade dentro das esfrulas. Isolamento: inocular o material clnico em SDA com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol e incubar a 30o C. As culturas devem ser mantidas por 4 semanas antes de serem descartadas como negativas. O fungo cresce muito rpido e prontamente produz artrosporos em forma de barri de 1,5 a 4m e 3 a 6m com uma clula dijuntora (sem contdo citoplasmtico) entre cada artrosporo. O C. immitis um fungo perigoso e deve ser manipulado todo o tempo em cabine de segurana biolgica classe II ou III. Confirmao Laboratorial: a confirmao laboratorial com C. immitis necessria porque outros fungos, tais como os membros da famlia Gymnoascaceae, podem desenvolver anamorfos semelhantes ao C. immitis. Procedimentos laboratoriais incluem meios especiais para a converso e tambm tcnica de exoantgenos. Estudos com modelos animais podem ser necessrios, em alguns casos. g. MICOLOGIA: Coccidioides immitis. h. HABITAT NATURAL: Solos alcalinos da amrica do norte e latina.
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CRIPTOCOCOSE
a. SINONMIA: Blastomicose Europia, Torulose. b. DEFINIO: a criptococcose uma doena crnica, subaguda a aguda pulmomar, sistmica ou meningtica. A infeco primria ocorre nos pulmes aps a inalao dos elementos fngicos em suspenso no ar. A infeco pode manter-se localizada nos pulmesz ou disseminara outros orgos. Na disseminao, o fungo normalmente mostra predileo pelo sistema nervoso central. A infeco pulmonar primria no tem sintomas caracterticos e, na maioria das vezes, assintomtica. A doena enceflica a forma mais freqentemente diagnosticada. c. FORMAS CLNICAS: enceflica; cutnea e mucocutnea; ssea; pulmonar e viceral. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: as leses pulmonares localizadas em pacientes no imunocomprometidos tm um bom prognstico, regredindo normalmente sem tratamento. A disseminao hematognica para o SNC tm um mau prognstico, a menos que seja tratada imediatamente. Infeces sistmicas so usualmente fatais, especialmente em pacientes debilitados. Contudo, leses primrias cutneas ou mucocutneas regridem espontaneamente. A doena crnica caracterizada, na maioria dos vezes, por intervalos alternados de remisso ou exarcerbao, mas s eventualmente fatal. A anfotericina B a droga de escolha. Leses pulmonares crnicas e leses sseas podem ser tratadas por exciso cirrgica. Muitas
amostras rapidamente desenvolvem resistncia 5-fluorocitosina durante a quimioterapia, por isso, testes de susceptibilidade so requeridos correntemente no tratamento das meningites. e. PATOLOGIA: a reao tecidual inicialmente uma degenerao mucide com reas de inflamao, assumindo uma aparncia gelatinosa. Grande nmero de clulas arredondadas so encontradas na matriz mucide. Com o progresso das leses, reao granulomatosa pode ocorrer. Os organismos decrescem numericamente e so normalmente encontrados em clulas gigantes e histicitos. Com a resoluo, os granulomas antigos apresentam clulas de levedura mortas com a cpsula desintegrada. Eles podem ser difceis de serem vistos nas preparaes corados pela H & E. As leveduras so redondas, tipicamente encapsuladas e com 5 a 15m de dimetro. Os blastosporos esto ligados por uma base estreita. As cpsulas se coram de rosa pela tcnica de mucicarmin.
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f. LABORATRIO: Exame Direto: clulas de leveduras globosas so facilmente visualizadas na maioria dos materiais clnicos (Lquido crebro-epinhal e tecidos) montado em KOH a 10% ou em tinta da china (colorao de fundo). A cpsula pode estar ou no presente. Isolamento: inocular aspirados e tecidos (processado em homogeneizador) em SDA com cloranfenicol e incubar a 30o C. O C. neoformans sensvel cicloheximida. O crescimento est presente em 1 a 5 dias. O lquido cfalo-raquidiano pode ser processado pela tcnica da filtrao ou centrifugao. Identificao: baseada na presena de cpsula, prova da urease, assimilao de accares e nitratos, crescimento a 37o C e patogenicidade para animais. g. MICOLOGIA: Cryptococcus neoformans (forma assexuada); Filobasidiella neoformans (forma sexuada). h. HABITAT NATURAL: fezes de pombos, solo e vegetais (eucalipto).
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CROMOMICOSE
a. SINONMIA: Cromoblastomicose, Dermatite Verrucosa Cromomictica ou
Cromoparasitria, Blastomicose Negra. b. DEFINIO: a cromomicose uma infeco localizada crnica da pele e tecido subcutneo que se segue a uma implantao traumtica do agente. As leses so verrucosas, ulceradas e crostosas, podendo ainda ser planas ou elevadas. Leses satlites podem se desenvolver depois de auto-inoculaes e por espalhamento linftico reas adjacentes. A micose usualmente se mantm localizada com extensa formao de quelides. Depois de muitos anos as leses podem lembrar a cabea de uma couve-flor. Alguns agentes etiolgicos dessa doena (Fonsecaea pedrosoi e Phialophora verrucosa) podem disseminar para o crebro. Elefantase e estase linftica podem tambm ocorrer como resultado de infeces bacterianas. c. FORMA CLNICAS: dermatite verrucosa; sndrome cerebral; cistos simples e mltiplos e leses locais ou assintomticas. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a infeco usualmente mantm-se localizada, mas disseminaes hamatognicas para o crebro podem ocorrer com grave prognstico. Estgios precoces de cromomicose so tratados com exciso cirrgica, eletrodessecao ou criocirurgia. A anfotericina B e a 5-fluorocitosina usadas em combinao a terapia de escolha. e. PATOLOGIA: as leses de pele mostram uma hiperplasia pseudoepiteliomatosa hiperquertica e microabscessos queratinolticos na epiderme. Hifas demceas e corpos
esclerticos ou muriformes so encontrados nas reas de inflamao drmica no extrato crneo. Os corpos esclerticos so redondos, de parede espessa, colorao acastanhada, asseptados, unisseptados e septados em dois planos e com 5 a 11m dimetro. Os abscessos cerebrais so bem demarcados pela espessa parede. Hifas demceas irregulares esto dentro desses abscessos. f. LABORATRIO: Exame Direto: em materiais clnicos como crostas superfciais, montados em KOH a 10%, podem ser visualiszadas hifas ramificadas, septadas e escuras, com 1 a 5m de dimetro ao exame microscpio. Ps e tecido granulomatoso obtidos por
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curetagem ou bipsia de tecido subcutneo e pele contm corpsculos muriformes que so arredondados, demceos, de parede espessa e com 5 a 11m de dimetro. Isolamento: inocular os espcimens clnicos em SDA com cloranfenicol e em meio contendo cicloheximida e cloranfenicol. Incubar a 30o C e descartar como negativas somente depois de 4 semanas. g. MICOLOGIA: (principais fungos): Cladosporium carreonii; Fonsecaea pedrosoi; Fonsecaea compacta e Phialophora verrucosa e Rhinocladiella aquaspersa. h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais.
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DERMATOFITOSE
a. SINONMIA: Tinha (Tinea) ou Ringworm. b. DEFINIO: O grupo de alteraes cutneas designadas como dermatofitose, ou mais correntemente como tinha, considerado, de forma genrica, como um conjunto de leses provocadas na pele, nos plos e nas unhas, independentemente do tipo clnico e da respectiva localizao, por um grupo de fungos denominados de dermatfitos. c. FORMAS CLNICAS: tinea capitis; tinea barbae; tinea corporis; tinea manuum; tinea pedis; tinea cruris; tinea unguium; tinea favosa; tinea dos animais e favo dos animais. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: A doena tem um bom prognstico. As leses de pele podem ser tratadas com medicao tpica ou sitmica. Quando plos e unhas so infectados, o tratamento sistmico prefervel. Os derivados imidazlicos e triazlicos, a terbinafina e a griseofulvina so as drogas de eleio. A infeco normalmente est restrita pele e seus anexos. Algumas formas regridem espontneamente. e. PATOLOGIA: As alteraes cutneas apresentam-se de uma forma geral como ppulas, vesculas, deformaes, destruio de plos e unhas, e descamao superficial. As leses ppulo-vesiculosas tendem a se agrupar e adquirir aspectos figurados anulares ou policclicos que constituem a impigem (leses arredondadas de bordos elevados e eritematosos). Em regra, as leses acantonam-se em reas limitadas da superfcie cutnea, mas eventualmente adquirem distribuio regional ou dispersa, e em casos mais raros, generalizam-se. Em determinadas circunstncias, surgem na evoluo das leses, fenmenos inflamatrios mais ou menos intensos, particularmente nas reas pilosas, com aparecimento de tumefao, ndulos e supurao que clinicamente so chamados de Kerion. A deteco de fluorescncia nos plos parasitados pode ser feita utilizando-se uma fonte de radiao ultra-violeta (lampada de Wood). f. LABORATRIO: Exame Direto: materiais clnicos, tais como pele, plos e unhas, so montados em KOH a 10%. Hifas septadas e grande nmero de artrosporos esto presentes. O parasitismo dos plos pode apresentar um padro ectotrix, endotrix ou endo-ectotrix de acordo com a localizao extra ou intrapilar das estruturas fngicas. Isolamento: Os espcimens so inoculados em SDA com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol
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(mycosel) e incubados a 30o C. Colnias so observadas nos meios de culturas depois de 5 a 10 dias de incubao, mas so frequentes perodos mais prolongados. As culturas negativas devem ser descartadas somente aps 4 semanas. Identificao: baseada em caractersticas morfolgicas, prova da urease, provas nutricionais e perfurao do plo. g. MICOLOGIA: Microsporum spp.; Trichophyton spp. e Epidermophyton floccosum. h. HABITAT NATURAL: geoflicos, zooflicos e antropoflicos.
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ESPOROTRICOSE
a. SINONMIA: sem referncia b. DEFINIO: a esporotricose uma infeco crnica caracterizada por leses nodulares cutneas ou subcutneas com comprometimento de linfonodos adjacentes que supuram, ulceram e drenam. O espalhamento secundrio para as articulaes, ossos e msculos podem ocorrer. A micose pode, ocasionalmente, envolver o sistema nervoso central, pulmes, sistema genito-urinrio ou todos os orgos. Em caso de doena pulmonar, o fungo ganha entrada pela inalao de elementos fngicos em suspenso no ar ou via traumatismo da pele. c. FORMAS CLNICAS: cutnea; disseminada; linfocutnea (linfangite nodular ascendente) e pulmonar. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a esporotricose linfocutnea, cutnea e mucocutnea so infeces crnicas. Disseminaes so raras. O prognstico da doena disseminada grave e cura espontneas so desconhecidas. Iodeto de potssio oral usado em muitos casos. O tratamento deve ser feito por pelo menos 4 semanas para que ocorra a cura clnica. A anfotericina B usada para o tratamento da doena linfocutnea reincidente, para a esporotricose pulmonar e para a doena disseminada. Outra droga com variado grau de sucesso teraputico a 5-fluorocitosina. Antibiticos so usados quando infeco bacteriana secundria est presente. e. PATOLOGIA: o padro de infeco caracteristicamente bem circunscrito e granulomatoso com rea central de supurao aguda. Na pele esse modelo similar ao que visto na blastomicose e na coccidioidomicose. A demonstrao do microrganismo muito difcil no tecido, por no ser muito numeroso. O fungo leveduriforme, globoso a ovide, com 3 a 5m de dimetro e com mltiplos blastosporos. As leveduras no so encapsuladas. Corpos asterides podem estar presentes e consistir de uma clula basfila, globosa a ovide, de 3 a 5m de dimetro, com um raio eosinoflico de 10m de dimetro. Os corpos
asterides parecem ser mais comuns nas leses secundrias do que nas primrias. f. LABORATRIO: Exame Direto: de execuo difcil. A tcnica de anticorpos fluorescentes pode ser til. A digesto pela diastase antes da colorao pela H & E ou PAS pode ajudar. Isolamento: inocular aspirados, material de curetagem ou swabs de leses abertas em SDA
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com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol. Incubar o meio a 30o C. O crescimento ocorre usualmente em trs dias. Confirmao Laboratorial: a
converso da forma filamentosa em leveduriforme necessria, j que outros fungos so morfologicamente semelhantes. O fungo deve ser transferido para o agar infuso de crebro corao e incubados a 37o C em ambiente com 5 a 10% de CO1. g. MICOLOGIA: Sporothrix schenckii. h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais.
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FEOHIFOMICOSE
a. SINONMIA: Cisto Feohifomictico, Feosporotricose, Cisto Mictico Subcutneo. b. DEFINIO: a feohifomicose consiste de um grupo de infeces fngicas caracterizadas pela presena de miclio septado demcea nos tecidos. As hifas podem ser curtas ou longas, tortuosas, entumescentes ou regularmente formadas, ou ainda, podem apresentar uma combinao de todas essas formas. Os fungos demceos causadores da feohifomicose pertencem classe dos Hyphomycetes, Coelomycetes, Ascomycetes, Blastomycetes e Deuteromycetes. c. FORMAS CLNICAS: cutnea; crnea; subcutnea e disseminada. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a maioria dos casos de feohifomicose pode ser controlada por exciso cirrgica e quimioterapia. A anfotericina B e a 5-fluorocitisina so drogas de escolha. O miconazol pode ser til em alguns casos. A invaso do crebro tem um grave prognstico. e. PATOLOGIA: a histopatologia varia bastante, indo desde reaes teciduais associadas a abscessos at ativas invases teciduais pela hifa. f. LABORATRIO: Exame Direto: materiais clnicos, tais como ps e tecidos, so montados em KOH a 10% para exame. A natureza demcea do elemento hiflico a chave para o diagnstico da feohifomicose. A hifa pode ser varivel ou regular em sua forma. Isolamento: os espcimens so inoculados em SDA com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol e incubados a 30o C. Todavia, muitos dos seus agentes etiolgicos so sensveis cicloheximida. As culturas so descartadas como negativas em 4 semanas. O fungo isolado deve ser compatvel com a doena clnica e a morfologia no tecido (demceo). g. MICOLOGIA: (principais fungos): Cladosorium bantianum; Curvularia sp.; Drechslera sp. e Exophiala jeanselmei. h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais.
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HIALOHIFOMICOSE
a. SINONMIA: sem referncia. b. DEFINIO: a hialohifomicose consiste de um grupo de infeces fngicas caracterizadas pela presena de miclio septado hialino nos tecidos. Os fungos hialinos causadores da hialohifomicose pertencem classe dos Hyphomycetes, Coelomycetes, Ascomycetes, Basidiomycetes e Deuteromycetes. Nos tecidos parasitados esses fungos apresentam morfologia semelhante, provocando o mesmo tipo de reao tecidual. c. FORMAS CLNICAS: cutnea; onicomicose; ocular; osteoarticular; meningtica; cerebral; pulmonar; cardaca e septicmica. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a doena em imunocomprometidos pode apresentar um prognstico grave. Para o tratamento, pode-se usar a anfotericina B associada ou no 5fluorocitosina. Derivados imidazlicos e triazlicos podem ser empregados. Intervees cirrgicas podem ser procedidas nas formas localizadas. O uso de colrio de pimaricina pode ser empregado nos casos de ceratite. e. PATOLOGIA: a reao tecidual bastante variada. f. LABORATRIO: Exame Direto: materiais clnicos, tais como ps e tecidos, so montados em KOH a 10% para exame. A natureza hialina do elemento hiflico um aspecto importamte para o diagnstico. A hifa pode apresentar uma forma varivel ou regular. Isolamento: os espcimens so inoculados em SDA com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol e incubados a 30o C. Todavia, muitos dos seus agentes etiolgicos so sensveis cicloheximida. As culturas so descartadas como negativas em 4 semanas. O fungo isolado deve ser compatvel com a doena clnica e a morfologia no tecido (hialino). g. MICOLOGIA: Acremonium spp.; Beauveria spp.; Fusarium spp.; Paecilomyces spp.; Penicillium spp.; Pseudoallescheria boydii e Scopulariopsis spp. h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais.
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HISTOPLASMOSE AMERICANA
a. SINONMIA: Histoplasmose Norte Americana b. DEFINIO: Aproximadamente 95% dos casos de histoplasmose so inaparentes, subclnicos e benignos. Cinco porcento tm uma doena pulmonar progressiva crnica ou uma doena sistmica aguda fulminante. Todos os estgios dessa doena podem mimetizar a tuberculose. A histoplasmose pode coexistir com a actinomicose, outra micoses, sarcoidiose ou tuberculose. c. FORMAS CLNICAS: disseminada e pulmonar. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a doena disseminada, crnica cavitria, mucocutnea ou sistmica requer terapia. A anfotericina B a droga de eleio. A recuperao rpida e essencialmente sem recadas, se o tratamento adequado instituido e o paciente no apresenta doena debilitante associada. e. PATOLOGIA: o quadro histopatolgico na histoplasmose disseminada aguda diferente daquele visto na doena mais crnica e nos ndulos pulmonares solitrios. Na primeira entidade, o Histoplasma capsulatum est localizado nos histicitos e nas clulas reticuloendoteliais. As clulas aumentam, mas sem evidncias de inflamao. As leveduras gemulantes intracelulares so aproximadamente de 3m de dimetro e similares s da Leishmania spp., mas sem apresentarem os cinetoplastos. Em adio, as Leismania no se coram pelas tcnicas especiais de colorao utilizadas para os fungos (PAS, GMS). Leses antigas apresentam granulomas bem desenvolvidos e tm uma rea central caseosa semelhante tuberculose. Os ndulos pulmonares solitrios so bem organizados e frequentemente tm um bordo de calcificao arredondado detectvel ao raio-X de trax. Os fungos no interior dos ndulos esto normalmente mortos. f. LABORATRIO: Exame Direto: a deteco do fungo no material clnico, tal como medula ssea, escarro e tecidos, usualmente difcil. O material corado pela tcnica do PAS, Giemsa, ou GMS so superiores s preparaes com KOH. Isolamento: inocular o material em SDA com cloranfenicol, em agar extrato de levedura-fosfato com cloranfenicol, em um meio contendo cicloheximida e cloranfenicol, em Sabhi com cloranfenicol e em agar sangue com cloranfenicol. Incubar as culturas a 30o C e no descartar com menos de 11 semanas.
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Confirmao Laboratorial: a converso das formas filamentosas em leveduriformes necessria para assegurar que o fungo no uma espcie de Chrysosporium ou Sepedonium. Transferir o fungo para um tubo teste contendo agar infuso de crebro corao com vitaminas e incubar a 37o C. Tcnicas de exoantgenos podem ser empregadas. g. MICOLOGIA: Histoplasma capsulatum; Ajellomyces capsulatus (forma sexuada). h. HABITAT NATURAL: solo com altos teores de nitrognio (cavernas habitadas por morcegos e deltas de rios).
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HISTOPLASMOSE AFRICANA
a. SIMONMIA: Histoplasmose de Grandes Formas. b. DEFINIO: a histoplasmose africana uma infeco mictica que envolve primariamente a pele, pulmo, figado, rins, linfonodos, tecido subcutneo e ossos. Os ossos so os stios mais frequentemente invadidos. O agente etiolgico cresce como uma grande levedura dentro das clulas gigantes e tambm como clulas pequenas semelhantes quelas vistas na histoplasmose clssica. Os aspectos clnicos primrios da histoplasmose africana so representados por leses nodulares, cutneas ulceradas e osteolticas que podem se disseminar ou se manter localizadas. c. FORMAS CLNICAS: disseminada e localizada. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: leses isoladas podem ter cura espontnea ou requerer interveno cirrgica. A doena disseminada tem um prognstico grave,
especialmente se o pulmo e o bao esto envolvidos. A anfotericina B a droga preferida. e. PATOLOGIA: pequena reao celular ao fungo notada, com excesso do grande nmero de clulas gigantes (com at 80m) e macrfagos. Neutrfilos esto usualmente presentes, especialmente durante a necrose. O fungo apresenta paredes grossas, so globosos a ovides, tm de 7 a 15m de dimetro e podem formar pseudohifas rudimentares com 3 a 5 clulas. Grandes agregados de leveduras podem ser prontamente visualizados dentro das clulas gigantes e no espao extracelular, juntamete com necrose do tecido do hospedeiro. Diferentemente do Blastomyces dermatitidis, os blastosoporos no esto unidos clula me por uma base de insero larga. f. LABORATRIO: Exame Direto: espcimens clnicos, tais como tecidos, so examinados em KOH a 10%. Grandes clulas de levedura so prontamente observadas. Frequentemente o Blastomyces dermatitidis confundido com o agente a histoplasmose africana, j que ambas ocorrem na frica. Isolamento: inocular o material em SDA com cloranfenicol, em agar extrato de levedura-fosfato com cloranfenicol, em meio contendo cicloheximida e Sabhi com sangue e cloranfenicol. Incubar as culturas a 30o C e descartar como negativas depois de 11 semanas. Confirmao Laboratorial: a converso da forma filamentosa leveduriforme requerida para assegurar que o fungo recuperado no do gnero Chrysosporium ou
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Sepedonium. Os agentes etiolgicos da histoplamose clssica e da histoplasmose africana so morfologicamente idnticos a 30o C. A converso das fases feita em agar infuso de crebro corao com vitamina, incubado a 37o C. g. MICOLOGIA: Histoplasma capsulatum var. duboisii (ou Histoplasma duboisii) e Ajellomyces capsulatus (forma sexuada) h. HABITAT NATURAL: solo
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MICETOMA
a. SINONMIA: P de Madura, Maduromicetoma, Maduromicose. b. DEFINIO: o micetoma uma sndrome clnica caracterizada por tumefao, fistulao e granulao. Os micetomas so infeces localizadas que envolvem o tecido cutneo e subcutneo, fcias e ossos. As leses consistem de abscessos, granulomas e ftulas (tratos sinuosos drenantes). Aps a implantao do agente etiolgico, a leso primria torna-se localmente invasiva, indolente e tumefeita ou surge como um inchao subcutneo, indolor e pequeno que se torna flegmoso. A ruptura da leso resulta em trato sinuoso, inchao e deformao da parte do corpo afetada. Grnulos esto presentes no ps e no tecido entorno deste trato sinuoso. c. PROGNSTICO E TRATAMENTO: os micetomas causados por fungos (eumicetomas) so normalmente resistentes quimioterapia. Drogas antimicticas tm sido usadas em conjunto com cirurgias, com variado grau de sucesso. A amputao geralmente a ao final. d. PATOLOGIA: as lceras e tratos sinuosos abertos so envolvidos por bordas planas ou elevadas. Os abscessos so preenchidos com material piognico e grnulos que freqentemente so cobertos por um exudato. A parede do abscesso formada por reao granulomatosa, inflamao crnica e tecido de granulao. e. LABORATRIO: Exame Direto: ps, exudato ou tecidos devem ser observados macroscopicamente para a presena de grnulos. Os grnulos so montados em salina estril, comprimidos entre lmina e lamnula e visualizados ao microscpio ptico. Os micetomas produzidos pelos actinomicetos (actinomicetomas) tm grnulos compostos por filamentos de 0,5 a 1,0m de dimetro e elementos bacilares e coccides. Aqueles produzidos por fungos so formados por hifas de 1 a 5m de dimetro com clulas dilatadas intercalarmente. Isolamento: os espcimens contendo fungos so inoculados em SDA com cloranfenicol e incubados a 30o C. Os grnulos devem ser lavados em gua destilada estril ou salina estril, ou ainda em soluo antibitica, antes da inoculao no meio. Alguns fungos so sensveis cicloheximida, por isso, meios contendo esse antifngico devem ser empregados sempre em associao com meios livres de antimicrobianos.
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f. MICOLOGIA: (principais fungos):
Fungo
Colorao dos Grnulos
Acremonium falciforme Acremonium recifei Aspergillus nidulans Exophiala jeanselmi Leptosphaeria senegalensis Madurela grisea Madurela mycetomatis Neotestudina rosatii Petriellidium boydii Pyrenochaeta remoroi
branco branco branco preto preto preto preto branco branco preto
g. HABITAT NATURAL: solo e vegetais
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PARACOCCIDIOIDOMICOSE
a. SINONMIA: Blastomicose Sul Americana, Blastomicose Brasileira. b. DEFINIO: a paracoccidioidomicose uma doena granulomatosa crnica que se origina como uma infeco pulmonar. A disseminao resulta em granuloma ulcerativo na cavidade nasal e bucal (estomatite ulcerada muriforme), e ainda, ocasionalmente, na mucosa gastrointestinal. Ndulos linfticos so comumente envolvidos. A paracoccidioidomicose frequentemente encontrada em associao com outras doenas, tal como chagas, infeces helmnticas, m nutrio, esquistossomose ou tuberculose. A infeco produz basicamente leses na orofaringe, gengivas e, menos frequentemente, no trato digestivo e mucosa anoretal. c. FORMAS CLNICAS: disseminada; mucocutnea linftica e pulmonar. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: o prognstico similar ao de outras micoses sistmicas. A anfotericina B a droga de escolha. As sulfonamidas podem ser usadas no tratamento e controle de vrias formas moderadas da doena. e. PATOLOGIA: reas de inflamao granulomatosa apresentando regies caseosas centrais e associadas a abscessos piognicos esto usualmente presentes. Muitas clulas gigantes
contendo o organismo compem o granuloma. O fungo ocorre como uma levedura gemulante de paredes duplas e refringentes, medindo de 11 a 14m de dimetro. A clula central circundada por numerosos blastosporos de variados tamanhos, ligados clula me por base de insero estreita. f. LABORATRIO: Exame Direto: escarro, material de bipsia (base e margem externa das lceras), crosta e pus (linfonodos supurativos) contm as clulas de levedura. O material montado em KOH a 10% para o exame. O fungo caracterizado por mltiplas gemulaes de pequenas clulas globosas (1 a 10m de dimetro) observadas entorno de uma clula madura globosa (30m de dimetro) de paredes espessas e refringentes, formando figuras denominadas de roda de leme ou chapu de mickey. Isolamento: inocular o material clnico em BHIA com cloranfenicol e em um meio contendo cicloheximida. Incubar as clulas a 30o C e no descartar o material com menos de 4 semanas. As colnias podem necessitar de 10 ou mais dias para alcanarem 1cm de dimetro. Confirmao Laboratorial: a
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converso da fase filamentosa fase leveduriforme necessria, j que o Paracoccidioides brasiliensis geralmente estril na forma filamentosa. Alm disso, os condios quando formados so muito semelhante queles encontrados no gnero Chrysosporium e Sepedonium. Inocular o fungo em Agar infuso de crebro corao suplementado com sangue e vitaminas e incubar a 37o C. g. MICOLOGIA: Paracoccidioides brasiliensis h. HABITAT NATURAL: solo e vegetais
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PITIRASE VERSICOLOR
a. SINONMIA: Tinea Versicolor, Dermatite furfurcea. b. DEFINIO: a pitirase versicolor uma dermatomicose muito difundida em todas as partes do mundo. A doena caracterizada pelo aparecimento de pequenas manchas bem delimitadas, de colorao varivel, localizadas principalmente no pescoo, ombros, tronco e abdmen. A superfcie das leses podem se apresentar lisas ou pulverulentas. As manchas so de colorao amarelada ou parda, e raspando-as com a unha, nota-se ligeira descamao que constitui o chamado sinal de unhada ou sinal de Besnier. c. FORMAS CLNICAS: folicular; generalizada; inguinal; da face; do couro cabeludo; das mos; circinada; ppulo-acromiante e pseudopapulosa. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: A pitirase versicolor assintomtica, causando apenas incmodos estticos. Os derivados imidazlicos e triazlicos so os de preferncia de uso. e. LABORATRIO: Exame Direto: o material clnico, tal como as escamas epidrmicas, montado em KOH a 10% para exame. A microscopia revela clulas de leveduras
arredondadas com um aspecto de botijo de gs dispostas como cachos e formas filamentosas. As clulas apresentam brotamento polar e a clula me se separa da clula filha por um colarete ou pescoo bem ntido. Apenas com o exame direto possivel fechar o diagnstico. Isolamento: inocular as escamas epidrmicas em (SDA) acrescido de leo de oliva (1%), bile bovina (3%), cloranfenicol (5mg%) e incubar a 37o C. f. PATOLOGIA: A principal caracterstica clnica da doena so as manchas associadas descamao furfurcea superficial. Leses acromiantes, hipopigmentadas ou Sabouraud dextrose agar cicloheximida (50mg%) e
hiperpigmentadas iro produzir manchas brancas, amareladas, cor de caf com leite ou castanho escuro. O mecanismo patognico dessa discromia continua por esclarecer, mas no parece que seja apenas devido ao efeito de filtro solar desempenhado pela descamao. Modificaes do fenmeno de queratinizao e dificuldades no transporte dos grnulos de melanina so observados. possvel que exista tambm uma ao sobre o prprio melancito. Essas alteraes so decorrentes da ao dos metablitos do fungo sobre a fisiologia da pele.
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Os achados histopatolgicos revelam penetrao folicular, hipergranulose
sinais de dermite crnicas, hiperqueratose com vacuolizao e acantose. Nas
com leses
hipopigmentadas registram-se incontinncia de melanina. Por vezes h inflamao perifolicular, outra vezes, h inflamao perivascular. g. MICOLOGIA: Malassezia furfur (Pityrosporum orbiculare) e Pityrosporum ovale. h. HABITAT NATURAL: microbiota da pele humana e couro cabeludo.
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RINOSPORIDIOSE
a. SINONMIA: sem referncia b. DEFINIO: a rinosporidiose uma infeco mictica das membranas mucosas
caracterizada pelo desenvolvimento de plipos. Os sintomas variam de acordo com o estgio de desenvolvimento do tumor e do stio anatmico. Os plipos so geralmente rosa ou prpura e friveis. c. FORMAS CLNICAS: cutnea; disseminada (rara); nasal e ocular. d. PROGNSTICO E TRATAMENTO: os plipos so crnicos, mas indolores. A remoo cirrgica e instilao local de anfotericina B so as formas de tratamento mais usadas. e. PATOLOGIA: grande nmero de cistos bem definidos esto logo abaixo do epitlio hiperplsico. O estroma denso com infiltrao crnica e microabscessos purulentos
ocasionais. As esfrulas alcanam um tamanho de 300m de dimetro e contm grande nmero de endosporos que variam de 7 a 10m de dimetro na maturidade. A liberao dos endoporos produz uma reao inflamatria polimorfonuclear, formao de abscessos e algum tecido necrtico. Tecidos de granulao so normalmente proeminentes. f. LABORATRIO: Exame Direto: tecido macerado, excisado ou descarga nasal so montado em KOH a 10% para exame. Esfrulas e grande nmero de endosporos esto presentes. Isolamento: o organismo no tem sido cultivado. g. MICOLOGIA: Rhinosporidium seeberi h. HABITAT NATURAL: guas paradas.
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ZIGOMICOSE
1. Entomoftoromicose 1.1. Entomoftoromicose causada por Conidiobolus sp. (conidiobolomicose) a. DEFINIO: a infeco um processo inflamatrio crnico ou granulomatoso, restrita mucosa nasal e caracterizada por plipos ou massas subcutneas limitadas e palpveis. Os sintomas incluem inchao nasal, comeando nos ossos turbinados inferiores e que podem se estender por toda a regio da orofaringe. As infeces so tipicamente bilaterais, mas podem ser unilaterais. As massas podem ser desfigurantes, palpveis e ancoradas. A epiderme pode tornar-se acantonada (acanttica) e eritematosa. As plpebras podem apresentar-se inchadas. O raio-x mostra antro opaco, obliterao dos espaos areos nasais e engrossamento da mucosa. Cerca de 80% dos casos ocorrem em homens. b. FORMAS CLNICAS: mucosa nasal, subcutnea c. PROGNSTICO E TRATAMENTO: a doena relativamente benigna, algumas vezes cura espontaneamente. Iodeto de potssio e/ou anfotericina B so drogas de escolha. d. PATOLOGIA: as hifas so regularmente septadas com 4 a 10m de dimetro. Uma bainha eosinoflica com um arranjo digitiforme semelhante quela encontrada na esporotricose, coccidioidomicose, blastomicose, paracoccidioidomicose e mais raramente na candidase observada. Invaso vascular est ausente. A reao celular pode ser aguda e/ou crnica. As reaes inflamatrias crnica so granulomatosas com infiltrados contendo clulas gigantes do tipo corpo estranho e hifas fagocitadas. A reao aguda consiste de eosinfilo, linfcitos e clulas plasmticas. Os eosinfilos podem originar abscessos eosinoflicos. e. LABORATRIO: Exame Direto: vesculas macias e/ou raspados de mucosas infectadas so montados em KOH a 10% e examinados para a presena de hifas septadas, largas e com paredes duplamente refratarias. Isolamento: incubar o material clnico em SDA com cloranfenicol e no usar meio contendo cicloheximida, j que o fungo sensvel a este antimicrobiano. Incubando a 30o C, o crescimento esta presente em 48 horas. f. MICOLOGIA: Conidiobolus coronatus
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g. HABITAT NATURAL: solo 1.1. Entomoftoromicose causada por Basidiobolus sp. (basidiobolomicose) a. DEFINIO: A micose uma doena inflamatria crnica ou granulomatosa, geralmente restrita ao trax, costas, membros e ndegas. Ela caracterizada por uma grande quantidade de massas subcutneas no ulceradas, endurecidas e palpveis. A doena ocorre principalmente em crianas com predominncia de meninos. A micose comea como um ndulo subcutneo. O inchao firme, bem circunscrito, sem dor e com algum prurdo. A massa palpvel e unida a parte superficial da pele, mas no a fscia. A pele atrfica e descolorada ou hiperpigmentada. A massa aumenta de tamanho e pode envolver todo o brao, ombros, face, pescoo, pernas e ndegas. Comprometimento de orgos internos tm sido relatado ocasionalmente. Leucositose de at 19.000 e eosinofilia de at 30% podem estar presentes. b. FORMAS CLNICAS: subcutnea c. PROGNSTICO E TRATAMENTO: O prognstico geralmente bom e a deformao corporal usualmente resolve. Iodeto de potssio e/ou anfotericina B so drogas de eleio. d. PATOLOGIA: Os processos patolgicos so semelhantes aos observados na zigomicose por Conidiobolus coronatus. Todavia, os elementos hiflicos tm de 10 a 40m de dimetro e as hifas esto esparsamente dispostas no granuloma. e. LABORATRIO: Exame Direto: o exame de bipsia em KOH a 10% deve revelar hifas refringentes, septadas e largas. Isolamento: deve-se proceder como indicado para o isolamento do Conidiobolus coronatus. f. MICOLOGIA: Basidiobolus ranarum. g. HABITAT NATURAL: solo e fezes animais. 1. Mucormicose a. DEFINIO: As micoses causadas por membros da ordem Mucorales so geralmente agudas e desenvolvem-se rapidamente em paciente debilitado. A doena envolve reas crniorino-facial, pulmes, trato gastrointestinal, pele e menos comumente outros sistemas. A
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doena esta associada com o diabetes descompensado em acidose (alterao na migrao e fagocitose), m nutrio, pacientes gravemente queimados e outras doenas tais como leucemia e linfoma, ou terapia imunossupressora com o uso de citotoxinas e corticides. Os fungos mostram uma predileo pelos vasos (artrias). A invaso resulta em embolias e necrose do tecido adjacente. Reaes piognicas supurativas podem ocorrer. As infeces so tipicamente agudas e fulminantes. A doena rinocerebral em pacientes com acidose usualmente leva morte em poucos dias. b. FORMA CLNICAS: orbito-rino-cerebral; cutnea. c. PROGNSTICO E TRATAMENTO: o prognstico grave, especialmente quando reas rino-cerebrais so envolvidas em pacientes com diabetes descompensado. A maioria dos caso de doena gstrica e plvica so diagnosticados em autpsia. Muitos casos ocorrem em pacientes com leucemia ou linfoma. Esses so usualmente fatais. O controle da diabetes, o desbridamento cirrgico dos tecidos envolvidos e o emprego da anfotericina B so recomendados. d. PATOLOGIA: a reao tecidual normalmente leve. Inflamao supurativa aguda com reas focais de inflamao granulomatosa predomina. As hifas variam de 6 a 50m de dimetro, so esparsamente septadas ou no septadas e irregularmente ramificadas. O organismo invade caracteristicamente a parede dos vasos sangneos adjacentes, produzindo trombose e infartamento, mas raramente disseminam atravs das vasos. e. LABORATRIO: Exame Direto: crtico um diagnstico rpido. Os elementos fngicos so normalmente pouco numerosos nas supuraes. Raspados dos ossos turbinados, material aspirado dos tratos sinuosos, escarro na doena pulmonar e material de bispia montados em KOH a 10% contm hifas de parede espessas refratrias com 6 a 15m de dimetro. Clulas entumescidas com mais ou menos 50m e hifas distorcidas podem estar presentes. Isolamento: inocular o material clnico em SDA com cloranfenicol e incubar a 30o C. Meios contendo cicloheximida no so empregados porque esses fungos so sensveis a este antimicrobiano. Fatias de po esterilizado em tubos de ensaio podem ser teis para a recuperao de zigomicetes quando outros meios falharem. Um tubo com po esterilizado no inoculado deve ser usado como controle. torxica; plvica-abdominal e gstrica e
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f. MICOLOGIA: Absidia corymbifera; Rhizomucor pusillus; Rhizopus oryzae; Rhizopus arrhizus; Cunninghamella bertholetiae; Syncephalastrum racemosum. g. HABITAT NATURAL: solo e vegetais.
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BIOSSEGURANA NO LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA

Profa. Cintia de Moraes Borba, FIOCRUZ
DEFINIO: o conjunto de normas e procedimentos considerados seguros e adequados manuteno da sade em atividades de risco de aquisio de doenas profissionais (Hoefel & Schneider, 1997). LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS: COMO TRABALHAR COM SEGURANA? Em um Laboratrio de Anlises Clnicas muita ateno deve ser dada ao manuseio de material biolgico, como excrees, secrees, enfim qualquer tipo de matria orgnica mida proveniente do corpo humano, at mesmo escamas secas de pele, pois estes podem conter agentes potencialmente infectantes. Nunca se deve assumir que as pessoas que trabalham em laboratrio tenham conhecimento adequado sobre as prticas de segurana, individual ou coletiva, sendo portanto necessrio treinamento constante. Mimica, 1997 descreve que a infeco adquirida a partir de materiais no laboratrio pode no somente comprometer os funcionrios do mesmo, mas tambm seus familiares, estudantes e outras pessoas que visitam suas dependncias, e, s vezes, at mesmo de pessoas de laboratrios ou locais vizinhos. Assinala ainda que no conhecida a real incidncia de infeco adquirida no laboratrio clnico. Nos Estados Unidos a incidncia anual estimada de 1,4 a 3,5 infeces adquiridas no laboratrio em cada 1000 funcionrios por ano. Como neste captulo trataremos especificamente de fungos, toda a ateno ser voltada a estes microorganismos. No caso de um acidente envolvendo fungos vivos, as seguintes normas gerais de segurana devero ser cumpridas (McGinnis, 1980): a) Prenda a respirao e deixe a sala imediatamente, fechando a porta; b) Avise todas as pessoas do laboratrio e no permita a entrada na rea contaminad c) Descontamine o local do acidente (veja O que se deve fazer em caso de acidentes).
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Collins, 1983 descreve que a exposio aos microorganismos, inclusive os fungos, pode ocorrer por: 1. Inalao de partculas fngicas - pelo ar; aps derramamento ou quebra de vidrarias; aps remoo de buchas de algodo ou tampa de rosca; 1. Ingesto - por pipetagem com a boca; pela falta de lavagem das mos aps manuseio de culturas e/ou animais infectados; 3. Inoculao direta como resultado de acidentes com - agulhas; quebra de vidrarias; contato com a pele e subsequente entrada no organismo atravs de cortes e arranhes. NORMAS GERAIS PARA O TRABALHO NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS: 1- Todos os acidentes devem ser comunicados Chefia; 1- No fumar; 3- No comer, nem beber; 4- No aplicar cosmticos no laboratrio; 5- No usar lentes de contato. Em caso de necessidade, proteger os olhos com culos de segurana; 6- Utilizar roupa de proteo de mangas compridas e de comprimento abaixo dos joelhos. Retir-la caso saia do laboratrio; 7- Lavar as mos freqentemente; 8- Usar luvas quando se manipular espcimens patognicos, sangue, lquidos biolgicos e animais infectados; 9- No pipetar com a boca; 10- Evitar a formao de aerossis durante os procedimentos tcnicos; 11- Utilizar tubos com meio inclinado, sempre que possvel, ao invs de placa de Petri para fungos patognicos. Nunca usar placas para semear Coccidioides immitis, ou quando se suspeita deste (Larone, 1987); 11- Esterilizar materiais contaminados ou potencialmente infecciosos antes de serem lavados ou descartados. Esta esterilizao pode ser qumica ou fsica; 13- Desinfetar regularmente as bancadas, os pisos, os equipamentos e outros materiais onde so manipulados materiais biologicamente perigosos, com hipoclorito de sdio a 5% diludo a razo de 1:10, recentemente preparado, para obter uma concentrao final de 5g/litro de cloro livre, ou fenol a 5%. Sempre bom lembrar que ambos so txicos e irritantes para a pele, os olhos e o sistema respiratrio (Costa, 1996). Existem outros desinfetantes eficazes para fungos. Maiores detalhes, consulte Romo, 1996;
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14- Fungos perigosos, tais como, Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum entre outros, devem ser manipulados em cabines de segurana biolgica Classe II ou III. Segundo McGinnis, 1980 acidentes envolvendo espcimens clnicos e fungos podem ocorrer dentro ou fora da cabine de segurana. Um acidente fora da cabine de segurana mais difcil de administrar. O QUE SE DEVE FAZER EM CASO DE ACIDENTES: 1. Acidentes fora da cabine de segurana com espcimens clnicos e culturas de fungos que no so potencialmente perigosos: 1.1. Feche a ventilao da rea e espere aproximadamente por 1h antes de entrar at que os aerossis possam ser depositados; 1.1. Vista um jaleco de mangas compridas, mscara, e luvas de borracha; cubra o material clnico ou a cultura quebrada com hipoclorito de sdio a 5% diludo a razo de 1:50 para obter uma concentrao final de 1g/litro de cloro livre, ou fenol (cido fnico) a 5%; 1.3. Mantenha a rea molhada com o desinfetante por aproximadamente 1h antes de limp-la; 1.4. Todos os equipamentos contaminados ou potencialmente contaminados devem ser desinfetados; 1.5. Aps a desinfeco do local do acidente, autoclave e descarte todos os resduos. Se as mos entrarem em contato com o material contaminado, lave-as com sabo e gua, ou lcool isoproplico a 70%, ou ambos. 1. Acidentes fora da cabine de segurana envolvendo fungos perigosos: 1.1. Feche a ventilao da rea e espere, aproximadamente, por 1h antes de entrar na sala; 1.1. Vista um macaco ajustado nos pulsos, respirador e cubra os sapatos. Coloque na rea do acidente fenol a 5%, ou hipoclorito de sdio a 5%, diludo a 1:10. Espalhe o desinfetante ao redor do stio do acidente, mas no diretamente sobre o derramado para no produzir aerossis; 1.3. Coloque papel toalha embebido com desinfetante sobre o derramado por 1h. A descontaminao com formaldedo se faz necessria, quando se tratar de agentes do grupo de risco 3; 1.4. Autoclave todos os materiais contaminados durante o acidente; 1.5. Limpe os equipamentos e acessrios do laboratrio com desinfetante.
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3. Acidentes ocorrendo em uma centrfuga: 3.1. Prenda a respirao e desligue a centrfuga imediatamente e deixe a sala fechando a porta; 3.1. Comunique ao pessoal do laboratrio e feche a ventilao da rea; 3.3. Espere aproximadamente por 1h; 3.4. Vista roupa protetora, entre na sala e desinfete a centrfuga com hipoclorito de sdio a 5% diludo a 1:10 ou fenol a 5%; 3.5. Limpe os equipamentos e desinfete a sala; 3.6. Autoclave o material contaminado. 4. Acidentes dentro da cabine de segurana com fungos perigosos: 4.1. Deixe a cabine; 4.1. Vista luvas, esfregue todas as paredes, superfcies de trabalho e equipamentos com hipoclorito de sdio a 5%, diludo a 1:10 ou fenol a 5%, deixando o desinfetante em contato com as superfcies da cabine por 10 a 15 min.; 4.3. Autoclave as luvas e esponjas. 5. Acidentes ocasionando a contaminao do laboratorista: Passe no local material absorvente embebido em povidine e procure atendimento mdico, no caso de contato com fungos. Porm, se o trabalhador tiver contato acidental, certo ou duvidoso com materiais biolgicos humanos dever ser submetido pelo menos sorologia para AIDS, hepatite B e hepatite C, nos tempos zero (data do acidente), trs e seis meses aps o acidente. Os riscos de contaminao laboratorial variam de acordo com o tipo de agente manipulado. O Center for Disease Control (CDC) em 1988 elaborou normas de segurana a serem seguidas nos laboratrios. Nestas normas foram estabelecidos quatro nveis de biossegurana (NB-1, NB-1, NB-3, NB-4) de acordo com as classes de risco dos microorganismos. As classes so: a) Classe de risco 1- (baixo risco individual e baixo risco para a comunidade) - organismo que no causa doena ao homem ou animal; b) Classe de risco 1- (risco individual moderado e risco limitado para a comunidade) patgeno que causa doena ao homem ou aos animais, mas que no consiste em srio risco a quem o manipula em condies de conteno, comunidade, aos seres vivos e ao meio ambiente. As exposies laboratoriais podem causar infeco, mas a existncia de medidas eficazes de tratamento e preveno limitam o risco, sendo o risco de disseminao bastante limitado;
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c) Classe de risco 3- (elevado risco individual e risco limitado para a comunidade) - patgeno que geralmente causa doena grave ao homem ou aos animais e pode representar srio risco a quem o manipula. um risco se disseminado na comunidade, mas usualmente existem medidas de tratamento e de preveno; d) Classe de risco 4- (elevado risco individual e elevado risco para a comunidade) patgeno que representa grande ameaa para o ser humano e para os animais. Grande risco de contaminao para quem o manipula e com grande poder de transmissibilidade de um indivduo a outro. Os fungos conhecidos se enquadram nas classes de risco 1, 1 e 3. No existem fungos classe de risco 4. Os nveis de biossegurana (NB) de um experimento sero determinados segundo o organismo de maior classe de risco envolvido no experimento. Laboratrio NB-1: adequado ao trabalho que envolva agentes de menor grau de risco. Normas de biossegurana a serem seguidas: treinamento especfico do pessoal; proibido comer, beber, fumar, aplicar cosmticos; proibido guardar alimentos nas reas de trabalho; uso de pipetadores: proibido pipetar com a boca; uso obrigatrio de roupas de proteo; acesso restrito ao laboratrio; descontaminao das superfcies de trabalho e dos resduos antes do descarte; descontaminao dos resduos, produzidos durante os trabalhos, antes do descarte; retirada de materiais contaminados em recipientes rgidos e prova de vazamentos; superfcies resistentes a gua, cidos, lcalis, solventes orgnicos, e ao calor moderado; espao suficiente entre as bancadas, cabines e equipamentos para permitir fcil acesso limpeza; controle rotineiro de insetos e roedores; existncia obrigatrioa de pia para lavar as mos; lavar as mos antes de deixar o laboratrio;
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Laboratrio NB-2: adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado. Deve-se seguir as indicaes para NB-1 e as normas especficas para NB-1 descritas abaixo: alm de treinamento especfico, deve haver superviso competente einformao
especfica do risco; acesso limitado durante procedimentos operacionais; procedimentos que podem originar aerossis infecciosos devem ser efetuados em
conteno (cabines de segurana biolgica); usar roupas apropriadas (jalecos, gorros, mscaras, etc.); a roupa protetora deve ser retirada antes de sair do laboratrio e deixada na rea de
trabalho; laboratrio sinalizado com: agente de risco, possibilidades de contato, aviso dos
requisitos necessrios para a entrada na rea de trabalho, pesquisador responsvel e endereo; proibida a entrada de animais no correlacionados ao trabalho; obrigatrio o uso de luvas; descontaminao obrigatria do lixo antes do descarte; evitar o uso de objetos perfuro/cortantes; nunca separar agulha/seringa, bisturi/suporte;
aloc-los em recipiente apropriado para descontaminao antes do descarte; cuidados especiais obrigatrios para evitar a formao de aerossis; derramamento e acidentes devem ser imediatamente comunicados para manuteno de
registro. Providncias adequadas devem ser tomadas (descontaminao, atendimento mdico, vigilncia); quando apropriado, amostras de soro referncia do pessoal de laboratrio devem ser
mantidas e amostras adicionais colhidas periodicamente; manual de biossegurana especfico deve existir e estar disponvel; equipamentos de conteno devem ser usados (cabines de segurana biolgica classe I ou
II) sempre que houver o risco de produo de aerossis (centrifugao, triturao, homogeneizao, agitao vigorosa, ruptura por sonicao, abertura de recipientes contendo material sob presso diferente da ambiental, inoculao intranasal em animais e em cultura de tecidos infectados); normas especficas para a manipulao de volumes grandes (maiores de 10 litros) existem
e devem ser seguidas;
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autoclave deve estar disponvel para a descontaminao no interior ou prximo do
laboratrio.
Laboratrio NB-3: aplicvel aos locais onde so desenvolvidos trabalhos com agentes infecciosos classe de risco 3. Seguir as indicaes para NB-1 e as normas especficas para NB-3 descritas abaixo: O laboratrio dever ter instalaes especficas para o trabalho com agentes de NB-3. Para alguns casos, quando no existirem condies especficas para NB-3, particularmente em instalaes laboratoriais sem rea de acesso especfica, ambientes selados ou fluxo de ar unidirecional, as atividades de rotina e operaes repetitivas podem ser realizadas em laboratrio com instalaes NB-1, acrescidas das prticas recomendadas para NB-3 e o uso de equipamentos de conteno para NB-3. Cabe ao pesquisador principal a deciso de implantar essas modificaes, comunicando-as a CIBio e CTNBio; menores de 18 anos no podero entrar no laboratrio; devem ser usadas toalhas absorventes com uma face de plstico voltada para baixo, recobrindo as superfcies de trabalho; roupas de proteo de uso limitado ao laboratrio devem ser usadas e descontaminadas antes de lavadas ou descartadas; devem ser usadas mscaras faciais ou respiradores nas salas de manipulao de animais; animais de laboratrio em NB-3 devem ser mantidos em sistemas de confinamento parcial (sistemas de caixas com filtros e paredes rgidas ou sistemas de conteno de caixas equipados com radiao ultravioleta e refletores); os sistemas convencioanais de caixas s podero ser usadas quando todo o pessoal utilizar dispositivos e roupas protetoras; todo o pessoal deve tomar banho ao deixar as reas de trabalho; as linhas de vcuo devem estar protegidas com filtro de ar com elevada eficincia (filtros HEPA-high efficiency particulated air) e coletores com lquido desinfetante; cabines de segurana biolgica (classes I, II, III) ou outra combinao apropriada de dispositivos de proteo pessoal e conteno fsica devem ser usadas para a manipulao de culturas e de material clnico ou ambiental, operaes de desafio de animais, cultivo de tecido ou fluidos infectados de animais ou ovos embrionados, necrpsia de animais infectados; o laboratrio dever estar separado de reas de acesso comum. Deve ter sistema de dupla porta a partir de reas contguas;
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o laboratrio com superfcies lisas e resistentes deve ser selado e sem reentrncias; prximo a sada deve existir uma pia com torneira de sistema automtico de acionamento ou pedais; as janelas do laboratrio devem ser fechadas ou lacradas; as portas devem possuir fechamento automtico; deve existir autoclave para descontaminao de resduos, localizada no interior do laboratrio ou em reas contguas, preferencialmente com sistema de dupla porta; o laboratrio deve ter um sistema de ar independente, com ventilao unidirecional, onde o ar penetre pela rea de entrada. No deve existir exausto do ar para outras reas do prdio. O ar exaurido no pode ser circulado e deve ser filtrado por filtro HEPA antes de eliminado ao exterior do laboratrio. Deve haver verificao constante do fluxo de ar no laboratrio; o ar de sada das cabines de segurana biolgica aps passar por filtros HEPA deve ser eliminado para o exterior do edifcio por sistema de exausto; o ar de sada das cabines pode recircular no interior do laboratrio se a cabine for testada e certificada anualmente. Laboratrio NB-4: aplicvel aos locais onde so desenvolvidos trabalhos com agentes infecciosos classe de risco 4. Seguir as indicaes para NB-3 e as normas especficas para NB-4 descritas abaixo: nenhum material dever ser removido do laboratrio de conteno mxima, a menos que tenha sido autoclavado ou descontaminado, exceo para materiais que tenham que sair viveis; material a serem usados no laboratrio devem ser descontaminados em autoclave de dupla porta, cmara de fumigao, ou sistema de ante-cmara pressurizada; material vivel a ser removido de cabines classe III ou do laboratrio deve ser acondicionado em recipeinte inquebrvel e selado. Este, por sua vez, deve ser colocado dentro de um segundo recipiente que ser desinfetado ou fumigado; equipamentos que no resistam a temperaturas elevadas devem ser descontaminados por gases ou vapor em cmara especfica; somente os trabalhadores do laboratrio podem ter permisso para entrar; as portas devem ser hermeticamente fechadas e a entrada deve ser controlada; deve-se avisar a todos aqueles que entrarem no laboratrio do potencial risco e as medidas de segurana;
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deve haver um registro de entrada e sada de pessoal, com data, horrio e assinaturas; protocolos definidos para situaes de emergncia devem ser elaborados; a entrada e a sada de pessoal do laboratrio deve ocorrer aps uso de chuveiro e troca de roupa. A roupa protetora utilizada para o trabalho deve ser descontaminada antes do descarte; deve se organizar um sistema de notificao de acidentes e vigilncia mdica; todos os procedimentos laboratoriais devem ocorrer em cabine de segurana classe III, ou classes I ou II usadas em associao com roupas de proteo pessoal com presso positiva, ventiladas por sistema de suporte de vida; o laboratrio de conteno mxima deve estar localizado em prdio separado; as paredes, tetos e pisos do laboratrio devem ser construdos com sistema de vedao interna, para aumentar a eficincia da fumigao e evitar o acesso de animais e insetos; as superfcies internas do laboratrio devem ser resistentes a lquidos e produtos qumicos; sistema de drenagem do solo deve conter depsito com desinfetante qumico eficaz, conectado a um sistema coletor de descontaminao. O sistema de esgoto e ventilao deve estar acoplado a filtros HEPA; sistema de luz, dutos de ar e linhas utilitrias devem estar posicionados verticalmente para evitar acmulo de poeira; os lquidos liberados de chuveiros ou de sanitrios devem ser descontaminados quimicamente ou pelo calor; deve haver sistema de ar com presso diferencial e fluxo direcional para assegurar o diferencial de presso no permitindo a sada do agente de risco. Deve estar acoplado ao sistema manmetros com alarmes. COMO TRABALHAR COM AGENTES FNGICOS PATOGNICOS? COCCIDIOIDES IMMITIS (NB 3) . Fungo dimrfico . Fase micelial: hifas que se quebram em artrocondios . No tecido: esfrula repleta de endosporos A coccidioidomicose uma infeco respiratria benigna que pode se resolver espontaneamente ou progredir para uma doena sistmica severa. Riscos laboratoriais: inalao de artrocondios e esfrulas. A inoculao subcutnea da forma de esfrula pode resultar na formao de granulomas locais que regridem espontaneamente.
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Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 nas instalaes laboratoriais e no trabalho com espcimens clnicos; identificao de isolados; processamento de tecidos animais e no manuseio de dejetos de animais, pois a urina pode conter o fungo. Nvel de biossegurana 3 no trabalho com a fase filamentosa esporulada ou processamento de solo com suspeita de conter artrocondios. PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS (NB 1) . Fungo dimrfico. Fase micelial: hifas e clamidocondios . Fase leveduriforme: elementos esfricos uni e/ou multibrotantes As manifestaes clnicas resultam da inalao de elementos infectantes do fungo, com envolvimento dos pulmes, reas mucocutneas e outros rgos. Riscos laboratoriais: com a fase filamentosa o perigo est em se inalar elementos infectantes. Com a fase leveduriforme o risco est na inoculao acidental do fungo. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 ao se trabalhar com espcimens clnicos, animais, culturas filamentosas e leveduriformes em meios ricos. nvel de biossegurana 3 para a manipulao de culturas filamentosas em meios pobres e solo. BLASTOMYCES DERMATITIDIS (NB 1) . Fungo dimrfico . Fase micelial: hifas com condios esfricos a ovais . Fase leveduriforme: clulas esfricas com unibrotamentos A blastomicose uma doena crnica supurativa e granulomatosa. As manifestaes clnicas podem ser: forma pulmonar, formas disseminada e cutnea. Riscos laboratoriais: inoculao de formas de levedura presentes em tecidos de animais e em espcimens clnicos. Outro perigo a manipulao de culturas filamentosas. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 para o trabalho com animais, materiais clnicos e culturas leveduriformes. Nvel de biossegurana 3 para o trabalho com culturas filamentosas, solo e outros materiais contendo condios. HISTOPLASMA CAPSULATUM (NB 3) . Fungo dimrfico . Fase micelial: hifas com condios de dois tipos, microcondios e macrocondios (tuberculados) . Fase leveduriforme: elementos ovalados com brotamento unipolar
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. Nicho ecolgico: solo e restos orgnicos contaminados com fezes de galinha, morcego e pssaros. A histoplasmose pode ser uma micose pulmonar aguda, subaguda, crnica ou sistmica. Riscos laboratoriais: manuseio de culturas na fase filamentosa, processamento de solo contaminado e de material biolgico. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 no manuseio de espcimens clnicos e no trabalho com tecidos animais. nvel de biossegurana 3 na manipulao de culturas filamentosas identificadas como H. capsulatum e processamento de solo contendo condios. CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS (NB 1) . Levedura patognica . Aspecto parasitrio: elementos esfricos com um s brotamento . Aspecto em cultivo: lvedo unibrotante encapsulado A criptococose uma micose que pode ser pulmonar ou disseminada. A partcula infecciosa, acredita-se ser propgulos de leveduras desidratadas e/ou basidiosporos que so inalados. Nos casos de exposio laboratorial o nvel de patogenicidade para adultos imunocompetentes normais baixo. Riscos laboratoriais: inoculao acidental de culturas e outros materiais contaminados, mordidas de camundongos infectados experimentalmente, manipulao de materiais ambientais infectados (ex: fezes de pombo) e contato com material contaminado com urina de animais infectados. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 para o trabalho com materiais clnicos, com culturas e com animais infectados experimentalmente. Cabine de segurana biolgica classe II dever ser usada durante o manuseio de solo e outros materiais contendo clulas de leveduras ou quando se trabalha com o estado perfeito do agente (Filobasidiella neoformans). SPOROTHRIX SCHENCKII (NB 1) . Fungo dimrfico . Fase micelial: hifas delicadas e condios formando pequenos bouquets . Fase leveduriforme: elementos com forma navicular e de charuto, alm de corpos asterides O fungo vive na natureza, usualmente associado a vegetais, e inoculado acidentalmente na pele ou tecido subcutneo determinando as leses nodulares. Ocasionalmente o fungo pode ser inalado causando a forma sistmica.
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Riscos laboratoriais: respingos de materiais de culturas nos olhos, arranho ou injeo de material infectado na pele ou mordidas de animais infectados experimentalmente, manipulao de culturas ou necrpsia de animais. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 no trabalho com culturas e animais. Luvas devero ser usadas. DERMATFITOS - EPIDERMOPHYTON, MICROSPORUM E TRICHOPHYTON (NB 1) . Aspecto em cultivo: hifas delicadas com macro e microcondios . Aspecto parasitrio: hifas hialinas que podem se desarticular formando os artrocondios. As dermatofitoses so leses da pele, plos e/ou unhas. Os dermatfitos so saprfitas do solo, onde vivem sobre restos de queratina. Riscos laboratoriais: contato com animais infectados experimentalmente ou naturalmente. Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 durante todo o trabalho. Usar luvas ao manusear animais experimentais. FUNGOS EM GERAL Segundo o CDC vrios fungos tm causado srias infeces em hospedeiros imunocompetentes que inalaram ou se inocularam acidentalmente por via subcutnea de fontes ambientais. Os agentes so: Cladosporium trichoides, C. bantianum, Penicillium marneffei, Exophiala dermatitidis e outros. Alm destes, existem os Aspergillus fumigatus, A. flavus e Candida albicans que podem causar srios problemas em humanos. Atualmente uma srie de fungos esto surgindo como patgenos oportunsticos (Torres-Rodriguez, 1996). Precaues recomendadas: nvel de biossegurana 1 ao se trabalhar com fungos que estejam esporulando ou ao se inocular animais experimentais.
93
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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96
TEIXEIRA,
P.
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VALLE,
S.
BIOSSEGURANA
UMA
ABORDAGEM
MULTIDISCIPLINAR. EDITORA FIOCRUZ, RJ, 1996.
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97
ANEXO: MODELO DE LAUDO MICOLGICO
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO CENTRO DE CINCIAS DA SADE FACULDADE DE FARMCIA LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA
33.663.683/0012CGC: 33.663.683/0012-79
Laudo No.:
RESULTADOS
Paciente: XXXXX Sexo: XXXXX Idade: XX Protocolo de Origem: XXXX Data de Entrada: XX.XX.XXXX Data de Emisso: XX.XX.XXXX
Solicitante: Laboratrio XXXXXXX
Material
Escamas de pele da regio das costas e axilas
Exame Micolgico Direto

Presena de hifas hialinas e ramificadas e cadeias de artrosporos compatveis com dermatfito
Cultura de Fungos
Cultura positiva para Microsporum canis
________________________
Prof. Paulo Murillo Neufeld
Chefe do Laboratrio de Micologia Clnica Faculdade de Farmcia UFRJ
Farmcia Laboratrio de Micologia Clnica Faculdade de Farmcia - UFRJ Prdio do CCS - bloco A - 2o. andar - sala 025 Janeiro21941Ilha do Fundo - Rio de Janeiro-RJ - 21941-590 2562Tel/Fax (021) 2562-6421
98

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO FACULDADE DE FARMCIA FARMCIA LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA MICOLOGIA

PROF. PAULO MURILLO NEUFELD [pneufeld@pharma.ufrj.br

parede e a membrana plasmtica. Apresenta as seguintes funes:

basdias. Ascosporos: esporos sexuados endgenos, formados no interior de hifas em forma de

clulas conidiognicas. Esporngiosporos: esporos assexuados endgenos, formados dentro de hifas

Classificao tradicional dos fungos

ASSEXUADO FLAGELADO (ZOOSPORO).

MICLIO SEPTADO OU CLULAS DE LEVEDURA E ESPORO ASSEXUADO NO FORMADO EM ESPORNGIOS (CONDIO).

Classificao moderna dos fungos

ASSEXUADO FLAGELADO (ZOOSPORO).

Classificao moderna dos fungos

Esquema taxonmico dos principais grupos de fungos

Cunninghamellaceae Syncephalastraceae Ascomycota Hemiascomycetes Endomycetales Endomycetaceae Saccharomycetaceae

Myriangiales Pleosporales Eurothiales

Saccardinulaceae Microascaceae Gymnoascaceae

Teliomycetes Hymenomycetes Blastomycetes

Deuteromycota Hyphomycetes Moniliales Moniliaceae

Nomenclatura anamrfica e teleomrfica de alguns fungos de interesse mdico

Eupenicillium Penicilliops Talaromyces Gaeumannomyces Mollisia Rhodosporidium Petrielle Petriellidium Pseudoallescheria

Filobasidiella Filobasidium Cochliobolus

Cochliobolus Pyrenophora Calonectria Giberella Micronetriella Nectria Dipodascus Endomyces

Debaryomyces Hansenula Kluyveromyces Saccharomyces Filobasidium Hypocrea Podostroma

Arthroderma Byssochlamyces Cephalotheca Thermoascus

Classificao clnica dos agentes fngicos

Fungo: fatores indutores de fase tecidual (dimorfismo); Afinidade tecidual

Profisso: mdicos, veterinrios, laboratoristas, espeleologistas, entre outros, esto

tanto quanto ineficaz para as doenas produzidas por fungos da microbiota.

5.1. Vias de infeco Inalao de elementos fngicos em suspenso no ar Traumatismo Ingesto

5.3. Vias de disseminao Hematognica Linftica Contiguidade

Epidemiologia das micoses

Saprbica (solo, matria orgnica em decomposio)

Epiderme e fio de cabelo Pele e tecido subcutneo

Mucormicose Aspergilose Feohifomicose Entomoftoromicose Rinosporidiose

Dermatofitose zooflicos Dermatofitose antropoflicos versicolor Candidase

por fungos e pitirase

Pele, membranas mucosas e trato gastrointestinal

pele: Candida albicans (leveduroses);

Leso nodular subcutnea no stio de infeco com espalhamento ascendente e

e produo de gros: micetoma; Leses tumefeitas subcutneas, verrucosas, descoloradas e hemorrgicas:

cromoblastomicose; Leses purpurceas e cistos subcutneas: feohifomicose;

preenchimento dos seios paranasais: aspergilose, hialohifomicose e pseudoalescheriose.

reticulares: Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, cromoblastomicose

Fungos patognicos mais comuns e principais stios anatmicos

C. immitis H. capsulatum S. schenckii Candida spp. C. neoformans P. brasiliensis

B. dermatitidis C. immitis H. capsulatum Aspergillus spp. Candida spp. C. neoformans S. schenckii

B. dermatitidis C. immitis H. capsulatum Candida spp. C. neoformans

Swab seco ou material insuficiente

Amostras de urina ou escarros de 14 horas

1. PROCESSAMENTO DO ESPCIMEN CLNICO

apresenta uma fluorescencia mais intensa; secrees

Hifas septadas largas

Hifas septadas hialinas

Continuao Morfologia em Tecido Organismos Tamaho (m) Aspectos Caractersticos

Fusarium moniliforme Fusarium solani Leptosphaeria senegalensis Leptosphaeria tompkinsii

100-500 300-600 400-600 500-1000

Continuao Morfologia em Tecido Organismos Tamaho (m) 50-500 Aspectos Caractersticos

e patognicos Agar infuso de crebro-corao com cloranfenicol e cicloheximida: recuperao

saprbios e patogncios Agar mycosel: principal meio de recuperao primria de dermatofitos

Frasco de hemocultura bifsico (agar BHI e caldo BHI): recuperao primria de

Meios de cultivo para recuperao de fungos de amostras clnicas

Pele, plos e unhas Membranas mucosas

Abscessos, lceras e leses subcutneas

Escarro e secrees pulmonares

Aspergillus spp. Dermatfitos Fungos demceos Fungos dimrficos