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Orientadora:
Profa. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna
So Paulo
2007
Fbio Nunes Dias
Comisso Julgadora
da
Dissertao para obteno do grau de Mestre
xodo 15:2227.
(*)
Indagao dos israelitas a Moiss diante de uma fonte de guas amargas, aps andarem trs dias
no deserto de Sur.
"No meio de qualquer dificuldade
encontra-se a oportunidade."
Albert Einstein
A verdadeira sabedoria consiste em saber
como aumentar o bem-estar do mundo.
Benjamin Franklin
DEDICATRIA
Adriana, minha esposa, com amor e gratido por sua compreenso e apoio
ao longo do perodo de elaborao deste trabalho. Pelos inmeros sonos solitrios,
enquanto velava-me a chama da busca pelo conhecimento. Ladrilhavam o caminho
as obras de muitos mestres. Sobre elas, meus pensamentos percorreram em
direo ao futuro e voc.
Ao Sr. Antnio e Sra. Helenita, meus pais, senhores de toda minha devoo.
Com carinho e gratido, por terem me mostrado atravs de suas experincias de
vida, a infinita generosidade de Deus e por terem me ensinado a Ele tudo confiar.
Prof. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna, minha orientadora, que alm
de excelente profissional acadmico tambm um ser humano maravilhoso e que
por simples inspirao, forma indivduos melhores como profissional, cidado, filho e
esposo. Com seu esprito otimista, voa longe, vai frente, retira as pedras, endireita
os caminhos: ensina-nos a crescer!
Dra. Thereza Christina, meus agradecimentos por tudo o que contribuiu
para o meu crescimento cientfico e intelectual nestes anos de convivncia.
AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Adalberto Pessoa Jnior, por ter acreditado no meu potencial
quando do ingresso neste curso e por toda sua ateno e apoio.
Aos amigos Ivan e Alzira, pela amizade, apoio e confiana. Pela lio
aprendida e nunca esquecida.
PRIMEIRA PARTE
1. INTRODUO 4
1.10. Aplicao 25
2. OBJETIVO 28
3. DESCRIO DA INDSTRIA 29
4. MATERIAIS E MTODOS 31
5. LIMPEZA E DESINFECO 42
6. RESULTADOS 44
6.3. Endotoxinas 66
7. DISCUSSO 69
8. CONCLUSO 72
9. REFERNCIAS 73
10. ANEXOS 77
Anexo 2. Oxidase 79
Anexo 3. Indol 80
SEGUNDA PARTE
1. INTRODUO 84
2. OBJETIVO 89
3. MATERIAIS E MTODOS 90
3.1. Oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC 90
3.3. Carga 93
3.3.1. Oxigenadores 94
3.3.2. Conjuntos de tubos de PVC 94
5. CONCLUSO 114
6. REFERNCIAS 115
PRIMEIRA PARTE
SEGUNDA PARTE
Tabela 1. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO 106
Tabela 2. Dissipao dos resduos em oxigenadores Vital 108
Tabela 3. Dissipao dos resduos em conjuntos de tubos de PVC 109
LISTA DE QUADROS
PRIMEIRA PARTE
SEGUNDA PARTE
PRIMEIRA PARTE
RESUMO
A gua exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricao de artigos
para sade (mdico-hospitalares, farmacuticos, e clnicos), exigindo elevado grau de
pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessrio maior controle dos
sistemas de purificao de gua e suas etapas de tratamento, onde a formao de biofilmes
pode contaminar os artigos para sade e, consequentemente, causar injria a pacientes
submetidos aplicao dos mesmos.
Embora os artigos mdicos sejam esterilizados por xido de etileno (ETO), seu processo de
manufatura deve prever o mnimo acrscimo possvel de contaminantes.
Considerando que a gua purificada e a esterilizao dos artigos para sade so fatores
determinantes para o sucesso de sua aplicao, este trabalho foi dividido em duas partes
distintas.
A primeira parte aborda o controle das etapas de purificao da gua, que destinada
lavagem de componentes termoplsticos, que so utilizados na fabricao de artigos para
sade.
Os nveis mximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL)
encontrados ao longo do sistema de purificao de gua foram: 3,48 log10 na gua de
entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de
carvo ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e
distribuio; 2,56 log10 na lmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05m; 1,98 log10 nos
pontos de uso.
Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactrias Gram-negativa e Gram-
positiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqncia na gua, em
diferentes estgios do sistema, inclusive aps a passagem dessa atravs das membranas
de osmose reversa.
A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aerao necessrio
para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, aps esterilizao por
ETO, permaneam em aerao, para dissipao dos resduos de ETO. Avaliou-se tambm
a potencialidade da protena verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de
esterilizao.
O processo de esterilizao destes artigos mdicos foi monitorado com indicadores
biolgicos Bacillus atrophaeus, protena verde fluorescente (GFP) e controles de
temperatura, presso e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo
longo).
As curvas de dissipao, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram nveis
residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm
para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilizao para os oxigenadores; e, aps
221 horas de aerao, para os conjuntos de tubos de PVC.
Nos ciclos de esterilizao, as redues na intensidade de fluorescncia da GFP ocorreram
em funo do tempo de exposio ao ETO; enquanto germinao de esporos e/ou
crescimento de B. atrophaeus no foi observado.
ABSTRACT
The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the
health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a
rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent
biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted
to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by
ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and
residues.
Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical
devices, this work was divided in two parts.
The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water,
which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic
components used in the manufacture of critical items.
The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water
purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters;
3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse
osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53
log10 in the 0.05m filters; 1.98 log10 in the consumption points.
Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Gram-
positive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis.
The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time
for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of
ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor.
ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its
derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these
devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients.
The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with
Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and
humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h
(long cycle).
The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the
residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of
EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of
aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were
observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores
was observed after cycles.
PRIMEIRA PARTE
1. INTRODUO
A histria antiga marcada por guerras provocadas pela invaso dos pases
com gua pelos que ficaram sem ela. Esse foi um dos motivos das seculares
A Guerra dos Seis Dias em 1967, teve a sua origem numa disputa sobre
gua, em que se pretendia desviar o curso do Rio Jordo, a principal fonte de gua
e a Jordnia, que preparavam uma ofensiva conjunta contra Israel (Figura 1). O
Mdio.
SPIEGEL, 2007).
Outros exemplos de conflitos, onde a gua tem sido motivo de disputas so:
frica, que possui parte do seu territrio desrtico; Estados Unidos da Amrica e
Mxico, devido construo de barragens pelos EUA no rio Colorado, que deixam
Figura 1. Manh de 5/07/1967 incio da Guerra dos Seis Dias. Fonte: www.unificado.com.br
FAO, agncia das Naes Unidas para agricultura e alimentao, sediada em Roma,
geraes futuras.
ilhas.
humano. Os 2,5% restantes so de gua doce (Figura 3), que esto distribudos na
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 7
97,50%
77,20%
22,40%
0,36%
2,50% 0,04%
O Brasil um pas privilegiado, pois aqui esto 11,6% de toda a gua doce do
planeta. Porm, 80% desta gua esto na Amaznia, onde vivem apenas 5% da
suma importncia para reduzir o crescimento de doenas causadas por estes fatores
infeces.
elaborou a planta da cidade ideal (la ideale citt), que seria erguida ao lado de um
educao sanitria.
hdricos. Diante deste quadro, declarou que 2008 ser o Ano Internacional do
rurais.
de gua de abastecimento.
transmitida principalmente pelo contato com a gua contaminada pela urina de ratos.
730 internaes por cem mil habitantes, enquanto em 2002, houve 375 internaes.
Paulo (105) e Distrito Federal (120) tinham os melhores quadros gerais (IBGE,
2004).
Mundial da gua. Este dia tem sido marcado, desde 1993, com vrias iniciativas
O Dia Mundial da gua deste ano (Folha de So Paulo, 2007) teve como
A cada ano, uma agncia diferente da ONU produz um kit sobre o tema e
civil.
gua), tem uma grande influncia sobre a sade. Se no for adequada, pode
associados gua, podem ser de curto prazo, quando resultam da poluio de gua
patognicos na gua.
disentrico.
diarria persistente.
1.5.2. Pseudomonas
1.5.3. Rotavrus
infectadas, so transmitidos pela via fecal-oral, por gua ou alimentos, por contato
causar doenas.
uma substncia que eles mesmos secretam (glicoclix), que os adere uma
o sistema com bactrias e matria orgnica e servir ainda como base para novas
formaes de biofilmes.
colaboradores. Produz 100 mil litros de gua por segundo para abastecer uma
irregular.
potabilidade.
etapas:
Pr-clorao: Adio de cloro assim que a gua chega estao para facilitar
partculas.
Filtrao: Passagem da gua por tanques que contm leito de pedras, areia e
tratamento. Desde que passou a ser utilizada houve queda no ndice de mortalidade
PARMETRO VMP(1)
A gua purificada tambm deve ser usada para todos os testes onde o uso de
nutritiva para crianas hospitalizadas. A gua para preparar estas formulaes foi
MEISTER et al., 1999) como um problema de sade pblica. A causa pode ser a
disseminao patognica.
purificao de gua deve ser executada para manter o nvel de qualidade da gua.
como uma das operaes usadas para produzir a gua purificada. Os sistemas
para assegurar a anlise peridica das diferentes etapas de purificao com relao
pacientes e expor meios que possam ser de utilidade para a soluo de problemas e
1.9.2. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30)
Quadro 6. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30).
gua para hemodilise a gua que atende aos requisitos da gua potvel
e que foi submetida a um tratamento adicional, por processo apropriado, para reduzir
gua para injeo, gua bacteriosttica para injeo, ou gua estril para injeo.
gua para a injeo obtida atravs da gua potvel que foi purificada por
gua estril para inalao preparada com gua para injeo, esterilizada
dissolvida ou diluda.
1.10. Aplicao
lavando-os com gua purificada antes de serem montados (Figura 4. (A) e (B)).
A B
parada.
2. OBJETIVO
3. DESCRIO DA INDSTRIA
servios de perfuso.
4. MATERIAIS E MTODOS
Pontos de
Estgios do sistema de purificao
amostragem
Entrada de gua potvel I
Filtros multimeios II
Pr-tratamento
Abrandadores III
Filtro de carvo ativado IV e V
Osmose reversa VI
Purificao
Deionizador VII
Tanque de estocagem VIII
Lmpada ultravioleta IX
Filtros 0,05m X
Estocagem e distribuio
Consumo Teste de vazamentos* XI
Consumo Lavadora automtica** XII
Consumo Pia** XIII
Quadro 7. Estgios do sistema de purificao de gua.
*Teste realizado para deteco de vazamentos em cmaras de oxigenao de sangue.
**Lavadora automtica e pia para lavagem, localizadas no interior de sala limpa classe 100.000 (ISO 08).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 32
Figura 5. Detalhe dos estgios do sistema de purificao de gua. (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
10.000 litros de gua. Uma bomba de 413 kPa de presso, com fluxo de 34 L/min,
pressuriza a gua atravs do sistema de purificao (U.S. Filter, Lowell, MA, USA).
capazes de remover material particulado maior que 10m e segue atravs de dois
abrandadores (III) de sdio alternados, que removem a dureza da gua por meio da
troca de ons clcio e magnsio por ons sdio. As resinas de troca inica dos
Uma vez abrandada, a gua atravessa um filtro de carvo ativado (IV e V),
alcana a unidade da osmose reversa (VI), onde forada por presso, a atravessar
resina mista de troca aninica e catinica (VII) para remover os ons que no foram
armazenamento (VIII) com capacidade para 1.500 litros de gua, equipado com um
diariamente.
A gua distribuda aos pontos do uso (XI, XII, XIII), no interior de uma Sala
sanitizado com lcool 70% filtrado e 100 mL de amostra de gua foram envasados
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 34
EUA).
Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) para contagem de heterotrficos e meio
de cultura m-Endo (Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA), para
A B
Figura 7. (A) Assentamento de membrana filtrante sobre agar. (B) Unidades Formadoras de Colnia
exibem uma cor rsea a vermelho escuro, com um brilho verde-metlico, quando em
meio seletivo.
Esta leitura gera um perfil numrico que comparado com os perfis padres
tcnicas de colorao.
vantagem por requerer pouco espao, vida til prolongada e fcil utilizao.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 37
Figura 9. Tela para introduo do perfil gerado pelo Kit BBLTM CrystalTM
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 38
Figura 10. Tela para visualizao da identificao microbiana gerada pelo Kit BBLTM CrystalTM
clinicamente importantes.
positivas aerbicas.
(Figura 11).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 39
Figura 11. Manipulao do Kit BBLTM CrystalTM - (1) Alada de crescimento microbiano em agar TSA.
(2) Transferncia para tubo com soro fisiolgico 0,9%. (3) Homogeneizao. (4) Recolhimento do
inculo com pipeta de Pasteur. (5) Transferncia do inculo para o kit. (6) kit inoculado.
identificao.
microrganismos.
Herisau, Switzerland).
(Beverly, MA, EUA). Devido temperatura ter um impacto substancial nas leituras de
5. LIMPEZA E SANITIZAO
minutos. Um pr-filtro de 5m (Figura 12) foi utilizado entre o filtro de carvo ativado
e a osmose reversa, pois o carvo ativado granular comumente libera uma grande
ocasio das sanitizaes, este filtro foi substitudo por filtro novo.
Figura 12. Reposio do filtro 5m. Filtro usado (esquerda) e filtro novo (direita)
180 minutos.
minutos.
Pontos de Tempo de
Estgios Componentes Agentes qumicos
amostragem contato
gua potvel I - -
Filtros multimeios II Bissulfito de sdio 1% 90 min
Pr-
Tratamento Abrandadores III Bissulfito de sdio 1% 90 min
Filtro de carvo IV e V Bissulfito de sdio 1% 90 min
Filtro 5m - - -
Osmose Reversa VI Proxitane 1% 180 min
Tratamento
Deionizador VII - -
Tanque de VIII Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
estocagem
Estocagem Lmpada U.V. IX - -
e
Filtros 0,05m X Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
Distribuio
Pontos de uso XI, XII e XIII Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 44
6. RESULTADOS
carga microbiana de 1,60 log10, arrastada com a gua de entrada, fornecida pelo
abastecimento municipal (I), foi elevada para 2,26 log10 no filtro de carvo ativado
Deste estgio em diante, a carga microbiana foi reduzida a 0,30 log10 nas
etapas subseqentes (VII, VIII, IX, X) e este valor foi mantido aos pontos do uso
eficiente entre a gua de entrada e o filtro de carvo ativado, como mostra a Figura
13.
2,5 2,5
2,0 2,0
Log10 UFC/100mL
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Figura 13. Contagens heterotrficas dezembro de 2002 e janeiro de 2003 (I gua de entrada, II
filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
ativado foi reduzida aos nveis de 0,60 log10 pela osmose reversa e aumentada a
1,53 log10 na unidade de deionizao, permanecendo neste nvel nos pontos de uso.
foi reduzida a 0,30 log10 aps a passagem pela osmose reversa e aumentada, com a
passagem pelo deionizador, a 2,14 log10. Esta biocarga foi reduzida novamente a
foi reduzida mais uma vez a 0,30 log10 na unidade de osmose reversa. Entretanto,
aumentou para 2,56 log10 na unidade de deionizao e retornou a 0,30 log10 aps a
a osmose reversa, foi aumentada em 1,0 log10, atingindo valores de at 2,53 log10
nos filtros 0,05 m, o que acarretou a presena de at 1,79 log10 de biocarga nos
pontos de consumo.
gua, a unidade de carvo ativado aumentou para 3,88 log10 a carga microbiana
Esta biocarga foi ento reduzida a nveis to baixos quanto 0,30 log10 (Figura
osmose reversa.
filtros 0,05 m, sendo mantidos nveis inferiores a 1,0 log10 nos pontos de consumo.
heterotrfica.
4,0 4,0
3,5 3,5
3,0 3,0
Log 10 UFC/100mL
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Figura 14. Contagens heterotrficas dezembro de 2003 e janeiro de 2004 (I gua de entrada, II
filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
membranas de osmose reversa, uma vez que a sanitizao com cido peractico
presente no filtro de carvo, que permaneceu superior a 3,0 log10 e alcanou 4,24
de 2005.
que permaneceu ao nvel de 2,00 log10, mas que foi reduzida entre 1 e 2 ciclos
purificao de gua (somente nos pontos II, III, IV, e V), que no reduziu
Por exemplo, a carga microbiana presente no filtro de carvo ativado foi reduzida em
apenas 1,0 log10. Com as membranas de osmose reversa, houve reduo adicional
de mais 1,0 log10 e a gua pde alcanar os pontos do uso com uma biocarga de
5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
Log10 UFC/100mL
3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII
dezembro de 2004, uma sanitizao foi conduzida (somente no ponto VI), e no foi
Aps ter deixado o filtro de carvo ativado com biocarga de 4,60 log10, as
5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
3,5 3,5
Log10 CFU/100mL
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII
Figura 16. Contagens heterotrficas janeiro e fevereiro de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
sanitizao nas etapas VIII, IX, X, XI, XII, e XIII. A sanitizao destes estgios
importante para assegurar a reduo de 4,0 log10 (Figura 17), conseguidos pela
4,5 4,5
4,0 4,0
Log 10 UFC/100mL 3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII
Figura 17. Contagens heterotrficas Fevereiro/05 (I gua de entrada, II filtros multimeios, III
abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII tanque de
estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII lavadora
automtica, XIII pia de lavagem).
5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
Log 10 UFC/100mL
3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII
Figura 18. Contagens heterotrficas junho e julho de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
setembro de 2005 uma limpeza foi conduzida com soluo de Bissulfito de sdio
1% (m/v), com circulao desta soluo por uma hora, numa taxa de fluxo de 34
L/minuto. Aps este perodo, a soluo foi drenada e substituda por uma nova
hora. Aps a drenagem desta soluo de limpeza, foi feito enxge de 20 minutos
encontrada no filtro de carvo ativado era de 3,0 log10 e aps o enxge e j com o
uma biocarga de 4,31 log10 no filtro de carvo ativado, mostrando que a limpeza com
(Figura 19).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 54
5,0 5,0
4,5 4,5
Log 10 UFC/100mL 4,0 4,0
3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Set/05 - Aps Sanitizao (I ao V) Set/05 - Anterior Sanitizao (I ao V)
Ago/05
Figura 19. Contagens heterotrficas agosto e setembro de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
etapas VIII, IX, X, XI, XII, e XIII, isto , ambos rendem os mesmos resultados.
3,5 3,5
3,0 3,0
Log 10 UFC/100mL
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
topo do cilindro.
Figura 21. Carga dos filtros de areia (1 - cascalho de 4,0 a 6,0 mm; 2 - areia de 2,4 a 4,0 mm; 3 -
areia de 1,0 a 2,4 mm; 4 - areia de 0,30 a 1,0 mm; 5 - areia verde (Greensand) de 0,30 a 0,35 mm.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 56
(Figura 23).
Figura 23. Drenagem dos cilindros (1 - Jato dgua para drenagem do carvo ativado; 2 - cilindro
parcialmente drenado; 3 - viso externa do cilindro vazio; 4 - viso interna do cilindro vazio).
vlvulas dos cilindros, expondo seus interiores. A gua drenada juntamente com a
grande reteno de ferro feita por este processo, alm de uma infinidade de
Nesta, a gua dentro do cilindro estava isenta de partculas que pudessem ser
Com a ajuda de um cone, a nova carga foi introduzida nos cilindros, com o cuidado
vlvulas dos cilindros dos filtros multimeios foram fechadas e deixou-se correr fluxo
de gua atravs dos cilindros. Esta lavagem inicial foi necessria para remover
que desprende uma quantidade grande de p que origina-se pelo atrito entre seus
grnulos.
mesmo processo foi realizado no filtro de carvo ativado com a nova carga.
processo da limpeza deste estgio foi iniciada, bem como tambm os outros
Partindo da gua de entrada, com uma carga microbiana de 2,93 log10, foram
observados 1,88 log10 aps os filtros multimeios, 1,90 log10 aps os abrandadores, o
filtro de carvo ativado apresentou 2,41 log10 e 2,28 log10 nos pontos IV e V
4,5 4,5
4,0 4,0
3,5 3,5
Log10 UFC/100mL
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Figura 24. Contagens heterotrficas julho e agosto de 2006 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
4,0 4,0
3,5 3,5
Log10 UFC/100mL
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
acrescida de 2,0 log10 e atingia nveis de 4,0 log10, saturando a capacidade das
A troca das cargas dos filtros multimeios e carvo ativado reduziu em 2,0 log10
III e manteve a biocarga inferior a 3log10 nas etapas IV e V. Esta biocarga foi
4,5
4,0
3,5
o
06
o
6
06
06
06
6
o
o
6
l/0
/0
/0
/0
t /0
r/0
a
n/
n/
a
a
v/
v/
ut
ai
ar
Ju
Se
Ja
Ju
Fe
Ab
tiz
ti z
M
O
z
ti z
M
N
ti
ni
ni
ni
ni
Sa
Sa
Sa
Sa
s
s
io
io
p
p
er
er
-A
-A
nt
nt
-A
-A
6
06
/0
6
o/
06
ez
/0
IV V I
Ag
o/
D
ez
Ag
D
Figura 26. Contagens heterotrficas janeiro dezembro de 2006 (I gua de entrada, IV e V
filtro de carvo ativado).
I Bergeyella Flavimonas
Leifsonia aquaticum
gua potvel zoohelcum oryzihabitans
II Flavimonas Chryseobacterium
Micrococcus luteus Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Filtros multimeios oryzihabitans indologenes
III Flavimonas Chryseobacterium
Gardnerella vaginalis Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Abrandadores oryzihabitans indologenes
IV e V Flavimonas Chryseobacterium
Pseudomonas putida Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Filtro de carvo oryzihabitans indologenes
VI
Myroides odoratus
Osmose reversa
VII Corynebacterium Flavimonas
Deionizadores renale group oryzihabitans
VIII
Myroides odoratus
Estocagem/Distribuio
IX Lactococcus
Micrococcus luteus
Lmpada UV raffinolactis
X
Filtros 0,05
XI
Consumo
XII
Consumo
XIII Flavimonas
Consumo oryzihabitans
6.2.1. Gram-negativos
organismos podem tolerar. Produzem tambm uma camada de limo resistente aos
al., 1996).
6.2.2. Gram-positivos
Lactococcus geralmente so isolados de seres humanos e so associados
6.3. Endotoxinas
elevados aps a passagem por leito de troca inica (0,13 - >9,49 UE/mL) e o
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 67
tratamento com osmose reversa conduziu a uma diminuio satisfatria dos nveis
Research Institute, New York, N.Y., USA) descreveu que se o teste de LAL
sensibilidade 0,06 UE/mL fosse positivo, mas negativo para sensibilidade 0,25
UE/mL, uma sanitizao completa do sistema deve ser programada para breve.
imediatamente.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 68
de gua purificada (XI, XII e XIII) e os resultados destas medies durante todo o
de condutividade que variaram entre 0,8 e 1,3 S/cm2, valores mdios semestrais de
de substncias oxidveis.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 69
7. DISCUSSO
conduzido com uma freqncia regular. Estes procedimentos devem ser seguidos,
que resultou em danos renais fatais para aqueles pacientes (COELHO, 2006).
seus baixos pesos moleculares (0,5 a 200 kDa). As endotoxinas transferidas aos
Foram encontrados nveis mximos de 3,48 log10 na gua de entrada (I), 3,57
log10 nos filtros multimeios (II), 3,75 log10 nos abrandadores (III), 4,97 log10 aps o
filtro de carvo ativado (VI e V), 2,53 log10 aps a osmose reversa (VI), 2,70 log10 no
(IX), 2,53 log10 aps os filtros 0,05m (X) e 1,98 log10 nos pontos de consumo (XI,
XII e XIII).
abaixo deste limite, exceto no leito de carvo ativado que remove o cloro da gua de
gua.
que excedem 100 UFC/mL somente em 10,0% das amostras de gua da entrada e
tratamento de gua (SMEETS et al., 2003), um apenas com osmose reversa (centro
por luz ultravioleta e tratado com oznio uma vez por semana (centro B), Smeets
obteve contagens acima de 100 UFC/mL em 16% das amostras incubadas a 22C e
carvo ativado, indicando mais uma vez, que este promove o crescimento
do cloro.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 72
8. CONCLUSO
bacteriana.
o filtro de 5m.
O uso da lmpada ultravioleta e dos filtros 0,05m, contribuiu para que a gua
chegasse aos pontos de uso com baixos nveis microbianos, cumprindo com os
9. REFERNCIAS
ASSER, M. Obstculos paz: gua. BBC News, 24 de maio de 2007. Disponvel em:
http://www.bbc.co.uk/portugueseafrica/news/story/2007/05/070524_middleeastwaterlv.shtml
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http://www.fao.org/newsroom/en/news/2007/1000494/index.html.
Acessado em 11/02/2007.
10. ANEXOS
microscopia limpa.
vidro) com uma soluo de violeta de genciana. Deixar atuar durante 1 minuto.
Escorrer o corante e lavar com gua. Secar levemente com papel filtro.
Cobrir com lugol e deixar atuar durante 1 minuto. Escorrer a soluo de lugol,
Escorrer o corante, lavar com gua e retirar o excesso de gua com papel
(Figura 28 A).
parede celular dissolvida pelo lcool, criando poros diminutos na parede celular
A B
Figura 28. (A) Gram-negativo; (B) Gram-positivo
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 79
Anexo 2. Oxidase
resultando numa mudana de cor de amarelo para prpura escura, que percebida
Anexo 3. Indol
anaerbicos ou facultativos.
at a fervura.
SEGUNDA PARTE
1. INTRODUO
esterilizao por calor mido ou aqueles que so deteriorados pela radiao gama
atravs da troca de gases no sangue por uma membrana (fibra oca microporosa).
sangue do paciente.
MIYAMAE, 1982).
al., 1993; PAGE e CYR, 2000; FOST et al., 1991; ISO 14937; ISO 11134), que
requerem sua remoo dos dispositivos mdicos por processos de aerao, para
dos conjuntos de tubos de PVC e assegurar que possam ser utilizados com
mdicos foi avaliada atravs da extrao por uso simulado do produto, mtodo de
atrophaeus ATCC 9372 (Bacillus subtilis variao niger) como indicadores biolgicos
(IB) (RUTALA, 1998; USP 30, 2007) e foi tambm avaliado pela protena verde
A GFP emite mxima fluorescncia quando excitada por luz ultravioleta (360-
tem sido estuda como indicador biolgico em uma variedade de aplicaes como
Uma vez que a GFP exibe estabilidade s condies extremas tais como a
et al., 2005; MAZZOLA et al., 2006), pode ser aplicada como um potencial marcador
diversos tamanhos de bolhas. Cada uma das bolhas formadas funciona como um
sangue. A bolha contm oxignio no seu interior e est imersa em uma atmosfera de
oxignio.
ar dos alvolos.
atravessados pelas molculas dos gases. A difuso dos gases muito mais rpida e
eficiente.
oxignio. Nestes, existe uma membrana, que separa o sangue do gs utilizado para
sangue.
foram utilizados com sucesso por vrios anos at que foram substitudos pelo novo
adulto disponveis no mercado atual e, com isto, permite a hemodiluio que elimina
2. OBJETIVO
estudo foi determinar o intervalo de tempo em que estes artigos mdicos devem
esterilizados.
3. MATERIAIS E MTODOS
membrana de fibra oca que permite a troca de gases em fluxo mximo de sangue de
O circuito de CEC conectado por uma cnula venosa e uma cnula arterial
sangue arterial e tubos de PVC com medidas de: (i) 0,35m x (13mm x 1,8mm); (ii)
7,05m x (8mm x 1,6mm); (iii) 17,7m x (80,8 x 10,2mm); (iv) 2,1m x (15mm x 2,4mm)
com a mistura.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 92
(505C) e tempos de exposio ao ETO de duas horas (ciclo curto), quatro horas
(ciclo mdio) e oito horas (ciclo longo). O tempo de exposio ao gs, para cada
(405C) com ventilao forada (26 trocas de ar por hora e mximo de 30% de
da carga, que eleva a presso a 122 kPa a uma temperatura de 505C (uma hora
(ii) Exposio ao ETO: O gs ETO injetado e presso eleva-se de 122 kPa para
sala de aerao e os conjuntos de tubos de PVC permanecem por oito dias na sala
resduos de ETO.
3.3. Carga
BR), em cmara de esterilizao (Anton Pfaf Ltda, So Paulo, SP, BR) medindo 1,4x
4,2x 2,0m e volume de 11,76 m3, com capacidade para acomodar trs pletes por
3.3.1. Oxigenadores
com oito caixas por camada. Um ciclo de esterilizao compreende trs pletes que
totalizam 144 oxigenadores de sangue com uma densidade igual a 0,07g/cm3 para
cada oxigenador.
Para os conjuntos de tubos de PVC, cada plete (medindo 1,2 x 1,2 x 1,7 m)
carregado com 96 caixas de papelo (medindo 35,5 x 39,0 x 13,5 cm) dispostas
em doze camadas com oito caixas por camada. Cada ciclo de esterilizao
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 95
compreende trs pletes que totalizam 288 conjuntos de tubos de PVC com uma
(Bacillus subtilis variao niger) ATCC 9372 (SGM Biotech, Inc., Bozeman, MT,
meio de cultura Trypticase Soy Broth (TSB) e incubados a 361C durante sete dias.
vials de vidro com tampa de rosca e septo em papel grau cirrgico, que permite a
foram embalados em embalagens Tyvek e dispostos nos pletes com: (i) Conjuntos
Wilmington, DE, USA) equipado com uma coluna capilar de polietileno glicol
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 97
(HP19091N-133) medindo 30m (250m x 0,25 m) foi usado para a anlise dos
ChemStation HP6890.
Tabela 2.
conjunto de tubos foi retirado aps 72 horas de aerao e uma unidade retirada nos
retirado.
A extrao por uso simulado foi realizada sobre condies que representam o
maior desafio (pior caso) para a utilizao do produto, conforme descrito na ISO
10993-7.
um circuito, simulando uma cirurgia cardaca com CEC, onde a gua purificada
(EPI) adequado.
conectado a uma bomba peristltica que promove uma circulao contnua de gua
purificada (<10 UFC/mL e condutividade < 1,3 S/cm)(USP 30, 2007) por todo o
circuito.
ETO, de EC e de EG.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 99
para que o circuito fosse totalmente preenchido. A circulao de gua foi mantida a
de CEC.
fechado, esta gua (extrato) foi retirada dos produtos e analisada quanto aos
padres de ETO (Solutech, So Paulo, SP, Brazil), EC (Sigma, Saint Louis, MO,
USA) nas concentraes de 5,0 g/mL, 25,0 g/mL e 50,0 g/mL e padres de EG
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 100
(Sigma, Saint Louis, MO, USA) nas concentraes de 50 g/mL, 250 g/mL e 500
g/mL.
Cada um dos padres de ETO foram injetados duas vezes e o desvio padro
C).
60
Concentrao (g/mL)
50
40
30
20
y = 22,472x - 18,232
10 R2 = 0,9957
0
0 1 2 3 4
Padres
60
Concentrao (g/mL)
50
40
30
20
y = 22,686x - 18,706
10 R2 = 0,9963
0
0 1 2 3 4
Padres
600
Concentrao (g/mL)
500
400
300
200
y = 224,79x - 183,2
100 R2 = 0,9959
0
0 1 2 3 4
Padres
dividida por 1000g/g (para resultados em mg) ou dividida pelo peso da amostra
Onde:
(Marte, Santa Rita do Sapuca, MG, Brasil). O peso dos oxigenadores de membrana
Portaria Interministerial 482 (i) ETO 25 ppm, (ii) EC 25 ppm, (iii) EG 250 ppm.
4. RESULTADOS E DISCUSSO
esterilizao para oxigenadores, meio ciclo (de tubos de PVC) e ciclo para tubos de
PVC.
A avaliao com a cmara cheia indicou que as reas mais frias coincidem
(i) 44,26 (1,10) C para ciclo de 2 h, (ii) 44,64 (1,32) oC para ciclo de 4 h; (iii) 43,69
umidade relativa na cmara, sob uma presso de 285 (2) kPa, variou entre (i) 44,26
e 49,07 (1,12)C com umidade relativa entre 87,36 (6,67)% e 95,51 (3,16)% para
ciclo de 8 h.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 104
Ciclo de 2 horas
100 300
Presso (kPa)
250
80
200
60
150
40
100
20 50
0 0
Incio do ciclo
Injeo de vapor
Exposio
Injeo de gs
Evacuaes
Condicionamento
Ciclo de 4 horas
Temperatura Umidade Presso
Temperatura (C) e Umidade (%)
120 350
100 300
Presso (kPa)
250
80
200
60
150
40
100
20 50
0 0
Incio do ciclo
Injeo de vapor
Exposio
Injeo de gs
Evacuaes
Condicionamento
Ciclo de 8 horas
Temperatura Umidade Presso
Temperatura (C) e Umidade (%)
120 350
100 300
Presso (kPa)
250
80
200
60
150
40
100
20 50
0 0
Incio do ciclo
Injeo de vapor
Exposio
Injeo de gs
Evacuaes
Condicionamento
concentrao de GFP similar nos trs pletes, sendo a reduo mdia de 23,52%,
ETO de forma tal que a maior concentrao de GFP foi verificada no centro da
fluorescncia da GFP.
Figura 11. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO.
tubos de PVC) foi calculado em ppm e mg como descrito nas Tabelas 2 e 3, para
forada.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 108
aps o processo de esterilizao foi de 24,12 ppm e 38,42 mg, isto , inferiores aos
70
Concentrao (mg e ppm)
60
50
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tempo de aerao
aerao, a concentrao mxima de ETO foi de 11,72 ppm e 19,47 mg (Tabela 2).
tendo sido encontrados valores mximos de residual de ETO de 222 ppm e 488 mg.
regresso linear expressa pelo grfico (Figura 13) mostra que so necessrias 216
400
350
Concentrao (mg e ppm)
300
250
- - - - 204 horas (mg)
200
100
50
0
70 90 110 130 150 170 190 210 230 250 270 290
Tempo de aerao
que materiais porosos (como o PVC) tendem a reter maiores quantidades de ETO
faz com que os fabricantes acumulem grandes estoques para suprir o mercado,
acarretando custos.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 112
ETO permitidos assim que o ciclo de esterilizao termina, seu modelo predecessor
60
50
Concentrao (mg e ppm)
40 -- -- -- 29 horas (ppm)
30
20
10
0
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Tempo de aerao
Oxigenador Vital
Corpo Policarbonato
Tipo de membrana Membrana capilar oca (esteira)
Material da membrana Polipropileno
2
rea da membrana 2m
Volume de priming inicial 180mL
Oxigenador Oxim-II-34 Ultra (modelo antecessor)
Corpo Polimetilmetacrilato (Acrlico)
Tipo de membrana Membrana capilar oca (linear)
Material da membrana Polipropileno
rea da membrana 2,1m2
Volume de priming inicial 480mL
pode ser relacionada aos materiais usados em cada produto. Os tubos de PVC tm
5. CONCLUSO
de exposio ao gs.
O ETO adsorvido nas paredes dos artigos em PVC levam uma permanncia
maior destes produtos em sala de aerao forada, fazendo disto, um desafio para
irreparveis.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 115
6. REFERNCIAS
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UNIVERSIDADE DE SO PAULO
Faculdade de Cincias Farmacuticas
Secretaria de Ps-Graduao
Av. Prof. Lineu Prestes, 580, Bloco 13 A - Cidade Universitria - CEP 05508-900 - So Paulo - SP
Fone: (11) 3091 3621 - Fax (11) 3091 3141 e-mail: pgfarma@usp.br
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 119
UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS
Eu, Fbio Nunes Dias, nmero USP 5507251, matriculado no curso de Ps-
Graduao da Faculdade de Cincias Farmacuticas, no Programa de Ps-
Graduao em Tecnologia Bioqumico-Farmacutica, juntamente com minha
orientadora, Prof Dra. Thereza Christina Vessoni Penna, declaramos para os
devidos fins, que o Projeto de Mestrado intitulado Avaliao de eficcia da
sanitizao de um sistema de purificao de gua. Esterilizao de artigos mdicos,
dissipao residual do xido de etileno e uso da protena verde fluorescente (GFP)
como indicador de controle do processo dispensou anlise do Comit de tica em
Pesquisa e/ou do Comit de tica em Experimentao Animal desta instituio, em
razo de todos os ensaios terem sido realizados por meio in vitro, no envolvendo
humanos ou animais.
Atenciosamente,