Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
1-Biologia e Fisiologia Celular PDF
1-Biologia e Fisiologia Celular PDF
Reitor Coordenador
Coordenao de Tutoria
Pr-Reitor de Graduao
Mrcio Bernardino da Silva
Valdir Barbosa Bezerra
Coordenao Pedaggica
UNIDADE 1
MTODOS DE ESTUDO DA CLULA
3
Biologia e Fisiologia Celular
1. UM POUCO DE HISTRIA
1665! Este o ponto de partida da nossa jornada pela clula. Neste ano, o cientista
britnico Robert Hooke publicou o livro intitulado Micrographia. Trata-se do primeiro registro de
um trabalho cientfico utilizando a microscopia como ferramenta de estudo para a observao e a
descrio de um material biolgico. Desde ento, uma srie de conquistas tecnolgicas
permitiram, aos cientistas, uma maior aproximao do mundo microscpico, revelando, aos
poucos, o maravilhoso mundo celular e at mesmo subcelular.
Diversos pesquisadores do sculo XVII contriburam para os primrdios da Biologia
Celular, ramo da cincia que estuda as clulas e que inicialmente era denominado de Citologia.
Alguns destes pesquisadores merecem destaque, como Antonie van Leeuwenhoek, microscopista
holands, que no ano de 1674 reportou a descoberta de protozorios flagelados. Um ano mais
tarde, o pesquisador relata a descoberta dos glbulos vermelhos sanguneos em humanos,
peixes, anfbios e sunos. Em 1677, Leeuwenhoek descreveu, pela primeira vez, o
espermatozide em diversas espcies, tais como: peixes, anfbios, aves, ces e seres humanos.
Leeuwenhoek acreditava que os espermatozides eram parasitas que residiam nos rgos
sexuais masculinos. No ano de 1683, o cientista holands, observou, pela primeira, uma bactria
ao estudar o trtaro dentrio, descrevendo em seguida a presena de bactrias e protozorios
nas fezes. Leeuwenhoek contribuiu, ainda, para o aprimoramento da microscopia, desenvolvendo
uma srie de microscpios e lentes especiais, marcando de vez o seu nome na histria da
biologia celular e da Microbiologia. Seus estudos sobre a morfologia dos espermatozides de
diversas espcies levaram o cientista alemo Nicolaas Hartsoeker, inventor do microscpio
simples parafuso-barril, a postular a hiptese do homnculo (figura 1.2), onde propunha que o
espermatozide continha um indivduo completamente pr-formado em seu interior. O
desenvolvimento de novos indivduos seria, portanto, apenas uma questo de crescimento do
homnculo. O conceito do homnculo ia de encontro hiptese hereditria do preformacionismo.
4
Biologia e Fisiologia Celular
5
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
Estudar clulas no sculo XIX no era uma tarefa muito fcil. Os microscpios ainda
apresentavam uma srie de restries. A construo do primeiro microscpio composto foi
sugerida por Kepler no ano de 1611. At ento, grande parte dos microscpios eram simples, ou
seja, constitudos por apenas uma nica lente. Somente no final do sculo XIX comearam a
surgir os primeiros microscpios binoculares e os microscpios com vrias objetivas, o que
permitia uma observao mais apropriada do material biolgico (o revlver, pea que d suporte a
mais de uma objetiva foi inventada por Ernst Leitz no ano de 1873). Entretanto, ainda era
6
Biologia e Fisiologia Celular
necessrio aprimorar o sistema ptico. Os trabalhos tericos do fsico alemo Ernst Karl Abbe, em
conjunto com o desenvolvimento de um sistema adequado de lentes, pelo, tambm alemo, Carl
Zeiss, permitiram um avano extraordinrio no campo da microscopia. Zeiss construiu uma srie
de lentes que permitiram a obteno de imagens no limite terico da luz visvel. Era o incio de
uma nova era.
Em 1924, os cientistas franceses Antoine Lacassagne e Jeanne Latts, ao injetarem
polnio radioativo em ratos e coelhos, desenvolveram uma nova metodologia para a observao
de rgos e tecidos animais sob microscopia ptica. A nova tcnica foi denominada
autohistorradiografia e abria novas possibilidades de investigao celular e tecidual.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
(Model A Coulter Counter) foi produzido pelo americano Wallace H. Coulter, no ano de 1953,
sendo utilizado na contagem de eritrcitos e leuccitos do sangue. Os modelos subseqentes
comearam a agregar novas possibilidades de anlises de parmetros celulares ao equipamento,
como o tamanho celular, por exemplo, e que culminaria, no final da dcada de 1960, com a
incorporao da fluorescncia, no modelo criado pelo alemo Wolfgang Ghde. O americano
Leonard Arthur Herzenberg, na dcada de 1970, estenderia, ainda mais, as aplicaes da
citometria de fluxo ao criar o Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS), um equipamento que
permite a seleo de clulas viveis com base em propriedades especficas a partir do uso de
sondas moleculares fluorescentes (anticorpos conjugados com corantes fluorescentes ou corantes
fluorescentes com especificidade para determinados alvos celulares e moleculares). Nascia o
nosso tempo.
Na primeira dcada do sculo XXI, ampliamos as possibilidades tecnolgicas criadas
pelos cientistas do sculo passado. Tornamos os processos mais geis e o mais importante:
diminumos o custo dos equipamentos e reagentes, permitindo que a cincia se tornasse universal
e fosse feita, com qualidade, em todos os recantos do planeta.
Vamos conhecer de perto alguns dos principais mtodos de estudo da clula. importante
que, ao final da unidade, voc seja capaz de identificar o mtodo mais adequado para cada
estudo, ou seja, a abordagem experimental que permita que o seu objetivo seja alcanado.
4.1. MICROSCOPIA
A primeira pergunta que devemos nos fazer : por que os microscpios so necessrios
para o estudo das clulas? Precisamos, ento, nos lembrar do tamanho mdio das clulas e do
limite de resoluo do olho humano. A maioria das clulas mede entre 1 e 100 micrmetros (M).
Uma bactria pode medir entre 0,5 e 1 M, enquanto que um vulo de um ourio-do-mar, pode
medir at 200 M (figura 1.4). As estruturas internas de uma clula so ainda menores: as
mitocndrias medem cerca de 200 nM; os ribossomos, cerca de 50 nm; e uma protena globular,
cerca de 5 nm. O limite de resoluo do olho humano de apenas 100 M, ou seja, necessria
a utilizao de um equipamento que permita ampliar as clulas e as suas estruturas internas para
que possamos observ-las e estud-las.
O microscpio ptico comum utiliza a luz do visvel como fonte luminosa. A inveno do
primeiro microscpio composto, no ano de 1590, creditada aos holandeses Hans e Zacharias
Janssen. Nestes 400 anos, o microscpio foi recebendo uma srie de aprimoramentos tcnicos,
tornando-se o brao direito do bilogo celular. A figura 5 mostra um microscpio ptico comum e
seus principais componentes.
9
Biologia e Fisiologia Celular
10
Biologia e Fisiologia Celular
A resoluo mxima obtida com o microscpio ptico limitada pelo comprimento de onda
da luz no espectro do visvel (entre 400 e 700 nm). Um conceito importante em microscopia o
limite de resoluo, que vem a ser a menor distncia entre dois pontos que permite uma distino
entre os mesmos (individualizao dos pontos). Sob condies timas (comprimento de onda de
0,4 m e abertura numrica de 1,4), o limite terico de resoluo do microscpio ptico 0,2 m.
Outro conceito importante em microscopia o poder de resoluo, que depende tanto do
comprimento de onda da luz quando da abertura numrica do sistema de lentes utilizado e
inversamente proporcional ao limite de resoluo, ou seja, quanto menor o limite de resoluo,
maior o poder de resoluo. O poder de resoluo expressa capacidade do microscpio em
detalhar, qualitativamente, uma imagem. A abertura numrica de uma lente objetiva corresponde
sua capacidade em captar luz. Quanto maior a abertura numrica de uma lente, maior ser o
seu poder de resoluo. Algumas lentes requerem o uso de leos de imerso (entre a lente e o
material a ser observado) para proporcionarem um aumento na abertura numrica e
conseqentemente aumentarem o poder de resoluo.
A fixao o processo pelo qual preservamos um material biolgico para posterior anlise,
sendo fundamental por impedirmos a degradao qumica ou microbiolgica do espcime de
interesse. Durante o processo de fixao importante preservamos as estruturas celulares o mais
prximo possvel das condies naturais, mantendo assim as suas caractersticas morfolgicas
originais.
A fixao pode ser obtida por processos qumicos ou fsicos. A fixao fsica mais comum
a fixao por calor, muito utilizada na preparao de esfregaos sanguneos utilizados nos
hemogramas. Entretanto, os processos de fixao qumica so os mais utilizados. A fixao
qumica pode ocorrer por promover a ligao cruzada entre macromolculas, como no uso do
formaldedo ou glutaraldedo, ou por ao de agentes precipitantes/desnaturantes, como o
metanol, o etanol, a acetona e cido actico.
A colorao uma tcnica que tem como objetivo aumentar o contraste entre os
componentes celulares, proporcionando, assim, uma melhor visualizao destas estruturas. As
estruturas subcelulares apresentam uma densidade ptica muito semelhante, o que dificulta a
identificao e a visualizao das mesmas sob microscopia. O emprego dos corantes na biologia
celular bastante amplo e permite a observao de uma vasta gama de molculas e estruturas.
No entanto, os corantes utilizados em microscopia ptica comum requerem que as clulas sejam
11
Biologia e Fisiologia Celular
Figura 1.6 Estrutura qumica da Safranina (A), Eosina (B) e Azul de Metileno (C). Fontes:
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Safranin_Cl.svg; http://en.wikipedia.org/wiki/File:Eosin_Y.png;
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Methylene_blue-2d-skeletal.svg
:: TA NA WEB!!! ::
Figura 1.7 Fotomicrografia de contraste de fase de uma clula epitelial da cavidade oral.
Modificado de http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cheek_cell_phase_contrast.jpg.
13
Biologia e Fisiologia Celular
E o que vem a ser o fenmeno de fluorescncia? Inicialmente descrito por George Gabriel
Stokes, no ano de 1852, ao estudar o mineral fluorita, a fluorescncia a propriedade que
algumas molculas apresentam em absorver luz em um determinado comprimento de onda, e
emitir luz em outro comprimento de onda, menor do que o da luz absorvida, portanto, com menor
energia. Os compostos que detm essa propriedade so denominados fluorocromos ou
simplesmente compostos fluorescentes. Tais compostos apresentam um grupamento funcional,
denominado fluorforo, que, de forma anloga aos cromforos, so responsveis pela absoro e
emisso da luz. A fluorescncia produzida quando um eltron absorve energia e salta para um
orbital mais externo. Ao retornar para o orbital original, o eltron libera energia na forma de um
fton luminoso.
:: PERGUNTAS?? ::
14
Biologia e Fisiologia Celular
:: TA NA WEB!!! ::
15
Biologia e Fisiologia Celular
16
Biologia e Fisiologia Celular
17
Biologia e Fisiologia Celular
:: TA NA WEB!!! ::
Nikon MicroscopyU
http://www.microscopyu.com/
18
Biologia e Fisiologia Celular
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
19
Biologia e Fisiologia Celular
O marco inicial, que deu incio ao estabelecimento da cultura celular, foi o trabalho de
Wilhelm Roux no ano de 1885. O zologo alemo conseguiu manter, por alguns dias, clulas
embrionrias de galinha em uma soluo salina. Era a primeira vez que um cientista obtinha
sucesso na tentativa de manter vivas as clulas de um organismo em um meio externo a ele.
O termo cultura celular refere-se manuteno de clulas eucariticas ou procariticas em
laboratrio. No caso de organismos multicelulares, estas clulas so isoladas e mantidas em
condies rgidas de cultivo. Os ensaios experimentais realizados com culturas celulares so
chamados ensaios in vitro - em contraste com os ensaios realizados com organismos intactos,
que denominamos ensaios in vivo.
As culturas celulares obtidas diretamente de organismos vivos, e mantidas em laboratrio
por um curto intervalo de tempo, so chamadas culturas primrias. Uma vez estabelecidas, as
culturas primrias so mantidas pelo tempo necessrio para a realizao dos ensaios in vitro. As
clulas tambm podem ser mantidas em culturas por meses ou anos. Neste caso, chamamos as
culturas de culturas secundrias ou linhagens celulares. Um atributo fundamental e obrigatrio,
neste caso, que tais clulas se dividam in vitro, desde que, claro, sejam cultivadas em um
meio de cultura adequado. O estabelecimento de uma linhagem celular depende de uma srie de
fatores, mas, fundamentalmente, tais clulas precisam estar constantemente entrando em um
processo de diviso celular, o que mantido por meio de estmulos extracelulares, mas que
tambm deve ser uma caracterstica intrnseca do prprio tipo celular.
As condies de manuteno de uma cultura celular dependem do tipo celular. Para cada
tipo celular existe um meio de cultura apropriado, alm de pH, temperatura e grau de oxigenao
especficos. Com relao composio dos meios de cultura, no geral, os meios de cultura para
clulas eucariticas so constitudos de aminocidos, acares, vitaminas, fatores de
crescimento, e antibiticos e antifngicos para prevenir a contaminao com microorganismos.
Os estudos in vitro, realizados tanto nas culturas primrias quanto nas linhagens celulares,
so essenciais para a biologia celular e para as mais diversas reas das cincias biolgicas e da
sade, tais como morfologia, farmacologia, imunologia, bioqumica, biofsica, gentica,
parasitologia, hematologia, oncologia, patologia e biologia de desenvolvimento, entre outras. O
uso das linhagens celulares permite o desenvolvimento de estudos cientficos com uma maior
consistncia e reprodutibilidade dos resultados.
Uma das desvantagens de se trabalhar com culturas celulares que aps um determinado
perodo de manuteno destas clulas em cultura, e aps sucessivas divises celulares, as
caractersticas originais das clulas podem ser alteradas. Para prevenir que tais alteraes
influenciem os estudos, o procedimento ideal descartar a cultura aps cerca de 50 ciclos de
renovao do meio de cultura (repique da cultura). Voc deve estar se perguntando: e comear
tudo de novo? Isolar novas clulas dos organismos e comear tudo novamente? No, no
preciso todo esse trabalho novamente. Existem diversos bancos de clulas que comercializam os
mais variados tipos celulares. Alm disso, possvel criopreservar a cultura original,
descongelando as amostras quando necessrio.
20
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 2
BIOMEMBRANAS
1. VISO GERAL
21
Biologia e Fisiologia Celular
A existncia de uma membrana plasmtica foi sugerida, inicialmente, por Nargeli, no ano
de 1855. A natureza lipdica e a permeabilidade seletiva das membranas celulares foi proposta por
Ernest Overton, em 1890. Trinta anos depois, dois cientistas alemes, E. Gortter e F. Grendel,
estudando a composio da membrana de eritrcitos, verificaram que as membranas celulares
eram formadas por uma bicamada lipdica. A observao de que as biomembranas no eram
constitudas somente por lipdeos, mas tambm por protenas associadas, foi feita por Davson e
Danielli no ano de 1935.
Finalmente, no ano de 1972, S. J. Singer e G. Nicolson propuseram o modelo de mosaico
fluido para as biomembranas (figura 2.2). Surge, assim, o conceito de que as membranas
celulares eram dinmicas. Neste modelo, tanto os lipdeos quanto as protenas podem se
movimentar bi-direcionalmente pela bicamada lipdica. Sabemos, hoje, que este dinamismo
fundamental para o papel biolgico desempenhado pelas biomembranas.
Somente a partir dos anos 90 do sculo XX, surge o conceito de domnios de membrana.
Estes domnios so regies com caractersticas estruturais prprias, distintas do restante da
membrana, e que apresentam particularidades funcionais. As balsas lipdicas so um exemplo de
um domnio de membrana.
3. ESTRUTURA DE BIOMEMBRANAS
Para entendermos o papel biolgico das membranas celulares precisamos responder a
uma pergunta crucial: como so constitudas as biomembranas?
As biomembranas so constitudas por lipdeos, protenas e carboidratos ligados covalentemente
s protenas (glicoprotenas ou proteoglicanas) ou lipdeos (glicolipdeos). Vamos aprender um
pouco mais sobre a estrutura molecular e as caractersticas qumicas de cada um destes
componentes das biomembranas.
22
Biologia e Fisiologia Celular
23
Biologia e Fisiologia Celular
24
Biologia e Fisiologia Celular
25
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
:: FIQUE DE OLHO!! ::
:: TA NA WEB!!! ::
26
Biologia e Fisiologia Celular
A fluidez das biomembranas depende de alguns fatores cruciais, tais como a temperatura
na qual se encontra a membrana e a prpria composio lipdica da membrana. As
biomembranas podem estar em dois estados fsicos: paracristalino (gel) ou fluido (lquido). A
mudana de um estado fsico para o outro conhecida como transio de fase e determinante
para a fluidez da membrana. Quanto mais elevada for a temperatura mais fluida ser uma
biomembrana. Com relao composio lipdica, a presena de fosfolipdeos ricos em cidos
graxos poliinsaturados, ou de cadeia curta, favorece a fluidez das membranas. O colesterol
tambm importante na manuteno da fluidez da membrana em condies de baixa
temperatura, uma vez que impede uma associao hidrofbica mais forte entre as caudas dos
cidos graxos dos fosfolipdeos, e previne, assim, a transio de fase para o estado gel.
A fluidez da membrana fundamental para diversos processos celulares, tais como
transporte de molculas e sinalizao celular. As balsas lipdicas, domnios da membrana ricos
em esfingolipdeos, colesterol e protenas associadas, dependem da fluidez da membrana para a
sua participao em processos de sinalizao e endocitose.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
27
Biologia e Fisiologia Celular
b) Protenas Ancoradas por Lipdeos. So quatro tipos de ncoras de lipdeos que promovem a
interao destas protenas com a membrana plasmtica: ncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI),
ncora de miristato, ncora de palmitato e ncora de prenilato. A ancoragem por GPI s ocorre no
domnio extracelular da membrana plasmtica, enquanto que a ancoragem pelos cidos graxos
restrita face citoslica da membrana plasmtica. A interao destas protenas com as
membranas se d pela interao hidrofbica dos lipdeos ligados covalentemente s protenas
com a cauda dos cidos graxos dos fosfolipdeos da membrana.
28
Biologia e Fisiologia Celular
bicamada lipdica. De forma geral, a bicamada lipdica permevel aos gases, como o dixido de
carbono (CO2), o xido ntrico (NO) e o oxignio (O2), por exemplo; s pequenas molculas de
carter hidrofbico, como os hormnios esterides; ou molculas pequenas polares, mas sem
carga, como o etanol. A bicamada muito pouco permevel gua e praticamente impermevel
aos ons e s molculas maiores, polares ou no, tais como a glicose, lactose, frutose,
aminocidos e nucleotdeos. Como ocorre, ento, o transporte destas molculas atravs das
biomembranas? Conforme discutimos na seo anterior, uma das atividades biolgicas das
protenas da membrana justamente realizar o transporte de ons e molecular atravs das
bicamadas lipdicas, e isto feito pelas protenas multipasso.
O transporte atravs das biomembranas classificado de acordo com a necessidade
energtica para a realizao deste transporte. Assim, temos dois tipos de transporte: passivo e
ativo. No transporte passivo no h gasto de energia, uma vez que as molculas ou ons so
transportados do compartimento de maior concentrao (da molcula ou on) para o
compartimento de menor concentrao (quadro A - figura 2.6). Ou seja, este tipo de transporte
ocorre favor do gradiente de concentrao e pode ou no ser mediado por protenas da
membrana. Quando o transporte no mediado por protenas da membrana denominamos
difuso simples (transporte de - figura 2.6) e quando o mesmo mediado por protenas, ele
denominado difuso facilitada (transporte de z - figura 2.6). Quem facilita? As protenas, sem as
quais esse transporte no poderia ocorrer. A difuso facilitada pode ser mediada por: protenas
carreadoras, como, por exemplo, a protena GLUT-4, que o transportador de glicose encontrado
no tecido adiposo e muscular cardaco e esqueltico; ou por canais inicos, que, como o nome
sugere, so protenas envolvidas no transporte de ons atravs das biomembranas, ons, estes,
que apresentam uma distribuio bastante distinta entre o meio extra e intracelular, como pode
ser observado na tabela 2.3. Os canais inicos podem ser regulados de diversas formas: por
interao com ligantes extracelulares; por interao com ligantes intracelulares, por meio de
alteraes na voltagem da membrana; ou mecanicamente (estiramento da membrana).
Sdio 145 15
Potssio 5,0 140
Clcio 1,0 a 2,0 10-4
Magnsio 1,0 a 2,0 0,5
Cloreto 110 5 a 15
-5
Hidrognio 4 x 10 7 x 10-5
29
Biologia e Fisiologia Celular
por exemplo, so atradas com maior velocidade para um compartimento com predominncia de
cargas negativas.
No transporte ativo, as molculas ou ons so transportadas contra o seu gradiente de
concentrao (quadros B, C e D - figura 2.6). Este tipo de transporte requer um gasto energtico,
uma vez que promove a diminuio da entropia e, conseqentemente, o aumento da energia livre
do sistema. O transporte ativo pode ser dirigido por hidrlise de ATP (trifosfato de adenosina),
sendo classificado como Transporte Ativo Primrio (quadro B - figura 2.6), ou pode ser dirigido por
gradiente eletroqumico, denominado Transporte Ativo Secundrio (quadros C e D - figura 2.6),
uma vez que o gradiente eletroqumico utilizado neste tipo de transporte gerado por um
transporte ativo primrio dependente do ATP. As protenas que realizam o transporte ativo
primrio so conhecidas como ATPases de membrana ou Bombas. Entre estas protenas
podemos destacar: a) a Na+K+-ATPase, que, para cada molcula de ATP hidrolisada, realiza o
transporte de 3 ons Na+ para o meio extracelular e 2 ons K+ para o interior da clula; b) as
protenas da superfamlia ABC (do ingls ATP-binding cassetes), que constituem a maior famlia
de protenas de membrana, sendo encontradas desde bactrias at seres humanos, e esto
envolvidas no transporte de uma srie de molculas, desde hormnios, nucleotdeos, pequenos
peptdeos at xenobiticos; c) a bomba de Ca2 da membrana plasmtica e da membrana do
retculo sarcoplasmtico, responsveis pelos baixos nveis citoslicos deste on; d) a bomba de
prton da membrana lisossomal, que mantm o pH cido desta organela. No caso dos
transportadores secundrios, destacamos os trocadores inicos, o Co-transportador Glicose-Na+,
responsvel pela absoro de glicose no trato digestrio, e os Co-transportadores de aminocidos
e Na+.
Os transportadores da membrana tambm podem ser classificados quanto ao tipo e
direcionamento do transporte efetuado. Protenas que transportam uma nica molcula, sem
gasto energtico, so denominadas Uniporte (quadro A figura 2.6). J os co-transportadores so
denominados Simporte (quadro C figura 2.6), quando transportam uma molcula e um ou mais
ons diferentes na mesma direo, ou Antiporte (quadro D figura 2.6), quando transportam uma
molcula e um ou mais ons diferentes em direes opostas. No co-transporte, a passagem de um
on a favor do gradiente de concentrao fornece a energia necessria para o transporte acoplado
de outro on, ou molcula, contra o gradiente de concentrao.
30
Biologia e Fisiologia Celular
31
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 3
ENDEREAMENTO DE PROTENAS
1. INTRODUO
A sntese de protenas que so codificadas a partir do genoma nuclear, nos organismos
eucariotos, pode ocorrer tanto nos ribossomos livres no citosol quanto nos ribossomos aderidos
face citoslica da membrana do Retculo Endoplasmtico Granuloso. Nestes organismos, a
sntese protica tambm pode ocorrer nas mitocndrias ou nos cloroplastos, a partir das
informaes contidas no DNA presente nestas organelas. Nesta unidade vamos discutir como as
protenas que so sintetizadas no citosol so endereadas aos seus destinos finais.
A primeira questo que devemos fazer : como a clula sabe para onde uma
determinada protena deve ser endereada? A resposta simples: a clula no sabe. Bem, mas
se a clula no sabe, como a protena chega, ento, ao seu destino correto? Quem respondeu a
essa pergunta pela primeira vez foi o cientista alemo Gnter Blobel no ano de 1970. Blobel
verificou que determinadas protenas apresentavam sequncias especficas de resduos de
aminocidos como parte de sua estrutura primria, e que estas sequncias eram responsveis
pelo endereamento da protena para um determinado compartimento celular. Estas sequncias
funcionam como verdadeiros cdigos postais biolgicos e so conhecidas como sequncia sinal
ou peptdeo sinal. Pelas suas contribuies no campo da biologia celular, Blobel foi contemplado
com o Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia no ano de 1999.
2. SEQUNCIAS SINAIS
O endereamento de uma protena ao seu destino final crucial para garantir clula que
todos os processos fisiolgicos ocorram de forma adequada. As protenas de localizao
citoslica so as nicas que no apresentam uma sequncia sinal. Tais protenas so sintetizadas
nos ribossomos livres no citosol. As protenas das mitocndrias, dos cloroplastos, dos
peroxissomos, e do interior do ncleo (nucleoplasma), so sintetizadas nos ribossomos livres no
citosol (figura 3.1A). Por outro lado, as protenas do retculo endoplasmtico, do complexo
golgiense, dos endossomos, dos lisossomos, das vesculas secretoras e da membrana
plasmtica, so sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da membrana do retculo
endoplasmtico granuloso (figura 3.1B). O aspecto granuloso do retculo endoplasmtico deve-se
justamente presena dos ribossomos envolvidos na sntese destas protenas. nesta regio do
retculo, conhecida como retculo endoplasmtico granuloso (REG), onde ocorre a sntese da
cadeia polipeptdica de forma simultnea ao transporte da mesma para o interior do retculo
endoplasmtico (lmen do retculo).
Diversas sequncias sinais j foram descritas. A tabela 3.1 apresenta uma relao de
algumas sequncias sinais caractersticas para o endereamento para alguns compartimentos
celulares, incluindo sequncias sinais de reteno de protenas no retculo endoplasmtico e de
exportao de protenas do ncleo para o citosol. Estudos modificando as sequncias sinais
demonstraram que pequenas alteraes nas sequncias podem comprometer o endereamento
correto destas protenas para o seu destino final. Alm do mais, a insero de uma sequncia
sinal em uma protena de localizao citoslica, pode direcionar esta protena para um
determinado compartimento celular.
32
Biologia e Fisiologia Celular
Figura 3.1 Sntese e endereamento de protenas.
3. ENOVELAMENTO DE PROTENAS
As protenas para exercerem a sua atividade biolgica necessitam adquirir a sua
conformao nativa, ou seja, uma estrutura terciria que permita uma interao com o(s) seu(s)
substrato(s) e conseqentemente permita o pleno exerccio de sua atividade biolgica. O
enovelamento de protenas o processo pelo qual as mesmas adquirem as suas estruturas
tridimensionais funcionais. As protenas sintetizadas nos ribossomos livres no citosol so
enoveladas por protenas especficas denominadas chaperonas. As chaperonas citoslicas so
importantes para prevenirem o dobramento incorreto das protenas antes do trmino da sntese e
por auxiliarem no enovelamento da protena para a aquisio da sua conformao nativa (figura
3.2). Dentro do lmen do retculo endoplasmtico granuloso tambm so encontradas
chaperonas. Estas chaperonas reticulares se ligam em regies hidrofbicas de protenas no-
33
Biologia e Fisiologia Celular
dobradas, prevenindo o seu transporte precoce para o complexo golgiense. Uma enzima bastante
importante no dobramento de protenas no lmen do retculo endoplasmtico a Dissulfeto
Isomerase, que catalisa a quebra e o estabelecimento de pontes de dissulfeto entre resduos de
cistena, permitindo o rearranjo correto destas pontes de dissulfeto e seu posterior enovelamento.
No enovelamento das protenas globulares, os resduos de aminocidos com cadeia lateral
hidrofbica tendem a ficar no interior da mesma, enquanto que os resduos de aminocidos com
cadeia lateral hidroflica tendem a ficar na superfcie das protenas, permitindo, assim, que a
protena seja solvel.
34
Biologia e Fisiologia Celular
35
Biologia e Fisiologia Celular
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
:: TA NA WEB!!! ::
Protena multipasso
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2202&rendertyp
e=figure&id=A2227
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/picrender.fcgi?book=mboc4&part=A2202&blo
bname=ch12f49.jpg
37
Biologia e Fisiologia Celular
insulina liberada pelas clulas das Ilhotas de Langerhans em resposta ao aumento da glicose na
corrente sangunea.
Figura 3.4 Diagrama ilustrativo do trfego vesicular. VEx = via de exportao. VR = via de
recuperao. VEn = via endoctica. SC = secreo constitutiva. SR = secreo regulada.
:: FIQUE LIGADO!! ::
38
Biologia e Fisiologia Celular
:: FIQUE DE OLHO!! ::
:: TA NA WEB!!! ::
:: PERGUNTAS?? ::
39
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 4
RETCULO ENDOPLASMTICO E COMPLEXO GOLGIENSE
1. INTRODUO
Grande parte das protenas sintetizadas nos ribossomos aderidos face citoslica da
membrana do retculo sofrem alteraes estruturais durante ou aps a sntese. A modificao
mais marcante a adio de resduos de acares, em um processo conhecido como
glicosilao. A adio dos carboidratos pode ocorrer tanto no retculo endoplasmtico quanto no
complexo golgiense. Alm da glicosilao de protenas outros processos biolgicos relevantes
ocorrem nestas duas organelas. Nesta unidade vamos conhecer um pouco mais sobre o papel
biolgico e a organizao estrutural destes compartimentos celulares.
2. RETCULO ENDOPLAMTICO
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
41
Biologia e Fisiologia Celular
:: TA NA WEB!!! ::
:: TA NA WEB!!! ::
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=cooper&part=A1466&rendertyp
e=figure&id=A1488
42
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
:: FIQUE DE OLHO!! ::
43
Biologia e Fisiologia Celular
5. COMPLEXO GOLGIENSE
O complexo golgiense foi identificado, no ano de 1898, pelo mdico e pesquisador italiano
Camilo Golgi. Golgi estava interessado no estudo da morfologia do tecido nervoso e as tcnicas
de colorao, vigentes na poca, eram insatisfatrias para uma adequada visualizao tecidual.
Assim, Camilo desenvolveu uma srie de tcnicas de impregnao destes tecidos com metais.
Uma destas tcnicas, denominada reao negra, onde o tecido era tratado com dicromato de
potssio e posteriormente impregnado com nitrato de prata, formando cromato de prata, permitiu,
ao pesquisador, a identificao de uma rede intracelular que ele denominou aparato reticular
interno. Nascia o complexo de Golgi, conhecido, hoje, como complexo golgiense (CG).
:: TA NA WEB!!! ::
44
Biologia e Fisiologia Celular
45
Biologia e Fisiologia Celular
46
Biologia e Fisiologia Celular
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
47
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 5
MITOCNDRIA
1. UM POUCO DE HISTRIA
A mitocndria (do grego, mitos, linha + chondros, grnulo) entrou para a histria da cincia
em 1857, quando foi descrita pela primeira vez por Albert von Klliker, que relatou a presena de
grnulos em clulas musculares. A primeira denominao da organela, no entanto, foi cunhada
pelo histologista alemo Richard Altmann em 1894. Ao observar que os grnulos presentes em
alguns tipos celulares; se assemelhavam a bactrias, Altmann denominou-os de bioblastos,
considerando-os como a unidade bsica da atividade celular (figura 5.1). O termo mitochondrion
foi atribudo pelo mdico e pesquisador alemo Carl Benda, em 1898. A organela, contudo, s
recebeu um destaque maior a partir da metade do sculo XX. A Bioqumica foi a grande
responsvel pelo crescente interesse na mitocndria, uma vez que o estudo do metabolismo
aerbico convergia para a organela.
No final do sculo XIX, os trabalhos de Louis Pasteur e Eduard Buchner davam incio ao
estudo do metabolismo glicdico, estudando o processo de fermentao em microorganismos e
extratos celulares. Franz Knoop, no incio do sculo XX, apresentava seus estudos sobre a
oxidao de cidos graxos. Estava pavimentada, assim, a estrada que levaria a bioqumica de
encontro mitocndria. Os anos 1930 e 1940 foram fundamentais para o desenvolvimento da
bioqumica. Os trabalhos de Gustav Embdem, Otto Meyerhoff, e Jacob Parnas (via glicoltica,
1930-40); Hans Krebs (ciclo da uria, 1932 - ciclo do cido tricarboxlico, 1937); Nathan Kaplan e
Fritz Lipmann (coenzima-A, 1945); e Severo Ochoa e Feodor Lynen (sntese do citrato, 1951)
conferiram uma nova dimenso ao estudo do metabolismo celular. A histria da mitocndria
caminhava de mos dadas com as vias metablicas: na medida em que se desvendavam etapas
nos processos de oxidao de substratos energticos, a mitocndria ia sendo revelada.
48
Biologia e Fisiologia Celular
A mitocndria foi isolada pela primeira vez em 1934, por Robert Bensley e Normand Hoerr.
Entretanto, somente com o estabelecimento da tcnica de centrifugao diferencial, por Martin
Behrens, a partir de 1938, que foi possvel obter preparaes mais purificadas da organela. Os
trabalhos do bilogo belga Albert Claude, no incio dos anos 40, foram de suma importncia para
o desenvolvimento de tcnicas que permitiriam o isolamento de mitocndrias e demais
componentes intracelulares. George Hogeboom, Walter Schneider e George Emil Palade, no final
da mesma dcada, refinaram as tcnicas desenvolvidas inicialmente por Claude, permitindo,
enfim, os estudos com mitocndrias bioquimicamente ativas. Com a mitocndria em mos,
Eugene Kennedy e Albert Lehninger dariam o passo decisivo. Os trabalhos desenvolvidos por
estes autores, entre os anos de 1948 e 1950, demonstrando que o ciclo do cido tricarboxlico, a
-oxidao e a fosforilao oxidativa ocorrem na mitocndria, foram cruciais para que a organela
fosse abraada, definitivamente, por todos aqueles que estudavam o metabolismo celular,
tornando-se um domnio quase exclusivo da bioqumica. A avalanche de estudos bioqumicos com
a organela culminaria, anos mais tarde, na formulao da Hiptese Quimiosmtica, pelo cientista
britnico Peter Mitchell, que correlacionava a impermeabilidade da membrana mitocondrial interna
com o transporte de prtons (H+), a gerao de um gradiente eletroqumico, e a sntese de ATP.
Mitchell, a bioqumica, e a mitocndria foram contemplados, no ano de 1978, com o Prmio Nobel
em Qumica.
Contudo, a mitocndria no era estudada somente sob o ponto de vista energtico. Em
1957 o grupo do pesquisador belga Chvremont identificou a presena de cidos nuclicos em
mitocndrias de clulas musculares, o que levantou suspeita sobre a existncia de um DNA
mitocondrial (DNAmt). As suspeitas iniciais de Chvremont seriam confirmadas seis anos depois.
Em 1963, dez anos aps a descrio da estrutura molecular do DNA por James Watson e Francis
Crick, Margit Nass e Sylvian Nass, atravs da microscopia eletrnica, observam em mitocndrias
de clulas embrionrias de aves, filamentos que julgavam ser de uma molcula de DNA. A
confirmao veio logo em seguida, a partir do isolamento de DNAmt de diversos tipos celulares,
dando incio a uma nova fase no estudo da organela.
2. VISUALIZANDO A MITOCNDRIA
49
Biologia e Fisiologia Celular
Sjstrand, como septa-like. Porm, foi o modelo proposto por Palade que acabou prevalecendo
e sendo incorporado por toda a literatura cientfica.
A mitocndria constituda por uma matriz envolta por duas membranas, denominadas
membrana mitocondrial interna (MMI) e membrana mitocondrial externa (MME). Tanto a
50
Biologia e Fisiologia Celular
membrana interna quanto a externa so bicamadas lipdicas, diferindo, entretanto, nas suas
composies lipdicas e proticas. Entre as duas membranas encontramos o espao
intermembrana (figura 5.3).
51
Biologia e Fisiologia Celular
52
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
53
Biologia e Fisiologia Celular
1000 cpias em uma nica clula. O processo de replicao do DNA, transcrio do DNA, e
sntese protica realizada a partir do DNAmt feito na prpria organela; no entanto, esse
processo controlado por protenas codificadas pelo DNA nuclear.
O genoma mitocondrial apresenta um nmero variado de pares de bases nuclicas de
acordo com a espcie. Em humanos, o DNAmt constitudo por 16.569 pares de base, ao passo
que em algumas plantas superiores, o DNAmt chega a ter at 2.500.000 pares de base. No
somente no nmero de nucleotdeos que o DNAmt varia entre as espcies. O prprio cdigo
gentico mitocondrial apresenta algumas diferenas entre organismos distintos. Por exemplo, a
sequncia de nucleotdeos AUA, que codifica o aminocido isoleucina, no DNA nuclear, codifica o
aminocido metionina em mamferos; o aminocido serina, em Drosophila; e o aminocido
arginina em fungos e vegetais superiores. O cdigo gentico mitocondrial tambm se apresenta
bastante variado entre as espcies com relao sua capacidade de codificar protenas. O DNA
mitocondrial da Reclinomonas americana capaz de codificar 67 protenas, enquanto que o
genoma mitocondrial do Plasmodium falciparum responde por apenas 3 protenas. Entretanto,
independentemente da sua capacidade de codificao, o genoma mitocondrial codifica,
essencialmente, componentes envolvidos na converso de energia pela clula. Durante a
evoluo, algumas espcies, como Saccharomyces cerevisiae perderam parte do contedo do
genoma mitocondrial, uma vez que nem o DNA mitocondrial, nem o DNA nuclear, contm o gene
que codifica o complexo I da cadeia respiratria.
4. TEORIA ENDOSSIMBITICA
As primeiras idias sobre uma origem simbitica para uma organela surgiram no final do
sculo XIX, nos trabalhos do botnico alemo Andreas Franz Wilhelm Schimper, ao estudar a
diviso dos cloroplastos em plantas verdes. No entanto, foi o cientista russo Konstantin
Mereschkowsky o primeiro a conceber a teoria simbitica, ao publicar, em 1905, um artigo onde
discorria sobre a natureza e a origem dos cromatforos (plastdeos) no Reino Plantae.
Mereschkowsky expos com extrema clareza a hiptese de que os plastdeos seriam derivados de
uma cianobactria endossimbitica. Nos ano de 1923 e 1927, o cientista norte-americano Ivan
Emanuel Wallin publica dois trabalhos fundamentais: The Mitochondria Problem e
Symbionticism and the origin of species; onde sugere uma origem simbitica bacteriana para a
mitocndria, em contrapartida para uma origem citoslica proposta por alguns pesquisadores da
poca. Mais ainda, Wallin sugeria que o surgimento de novas espcies poderiam estar associado
infeces repetidas de um protoplasma primitivo por uma bactria e que esta teria se tornado
parte do prprio protoplama com um simbionte. As propostas simbiticas de Mereschkowsky e
Wallin foram fortemente criticadas na poca. Sem bases moleculares para darem suporte teoria
proposta por estes brilhantes cientistas, a simbiose ficar esquecida por algumas dcadas, at que
a pesquisadora norte-americana Lynn Margulis ressuscita a idia da simbiose no ano de 1967, ao
tambm propor que a mitocndria teria se originado de uma bactria ancestral de vida livre. As
idias de Margulis sobre a teoria simbitica foram amadurecendo e culminaram com a publicao
do livro Symbiosis in Cell Evolution, no ano de 1981, onde a cientista expe definitivamente as
bases celulares e moleculares que suportam a teoria endossimbitica.
A teoria endossimbitica postula que a mitocondria teria se originado da endocitose de
procariotos heterotrficos por clulas eucariticas. Tais procariotos seriam organismos aerbicos,
que utilizam o oxignio para a converso energtica a partir de substratos orgnicos. A teoria
54
Biologia e Fisiologia Celular
postula que os procariotos teriam passado a viver no citoplasma dos eucariotos, tornado-se, ao
poucos, dependentes, metabolicamente, da clula hospedeira. Por outro lado, a simbiose teria
proporcionado clula eucaritica hospedeira um incremento na disponibilidade de ATP para a
realizao das suas atividades fisiolgicas, refletindo, posteriormente, em um aumento do grau de
complexidade estrutural e funcional da mesma, e que culminaria com a formao dos primeiros
organismos eucariotos multicelulares. Acredita-se que grande parte do genoma do organismo
procarioto foi transferida para o genoma nuclear da clula eucaritica, o que notvel pela
dependncia da transcrio e traduo efetivadas a partir do DNA nuclear para a constituio da
organela, e consequente perda da redundncia gentica. Tal fato justificaria a perda de autonomia
das mitocndrias nos dias de hoje.
Diversas evidncias estruturais e funcionais suportam a teoria endossimbitica. Entre
estas, podemos destacar:
55
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
56
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 6
NCLEO
1. VISO GERAL
O ncleo foi a primeira organela a ser descrita. Antonie van Leeuwenhoek ao descrever a
presena de lumens, em hemcias de salmo, no sculo XVII, foi o primeiro cientista a notar a
presena do ncleo (figura 6.1A). Entretanto, foi o botnico escocs Robert Brown, na primeira
metade do sculo XIX, quem nomeou a organela ao estudar os rgos e a forma de fecundao
em orqudeas. Outro cientista que foi fundamental para a descrio da estrutura nuclear foi o
bilogo alemo Walther Flemming com os seus estudos sobre a diviso celular em diversas
espcies, onde apresentava belssimas ilustraes revelando os cromossomos e o nuclolo
(figura 6.1B).
Figura 6.1 Ilustraes originais dos trabalhos de Antonie van Leeuwenhoek (1719) e
Walther Flemming (1882). A Eritrcitos de Salmo; B Clula da Glndula Salivar de Larvas de
Chironomidae.
57
Biologia e Fisiologia Celular
2. ENVELOPE NUCLEAR
58
Biologia e Fisiologia Celular
nucleares: lamina do tipo A, lamina do tipo B e lamina do tipo C. A lamina nuclear do tipo B uma
protena integral da membrana nuclear interna, ancorada por lipdeo. As laminas do tipo A e C so
protenas perifricas que se associam, por meio de ligaes no-covalentes, s laminas do tipo B.
A lmina nuclear formada pela polimerizao das laminas nucleares. A interao entre as
laminas que constituem a lmina nuclear fundamental para a estruturao do envelope nuclear.
Durante o processo de mitose, as laminas nucleares so fosforiladas em resduos especficos de
aminocidos. Essa fosforilao reduz a interao entre as laminas nucleares, desfazendo a lmina
nuclear e, por sua vez, o envelope nuclear. Este processo permite que o material gentico, com o
auxlio das protenas que constituem o microtbulo, migre para os plos da clula.
:: PERGUNTAS?? ::
3. NUCLEOPLASMA
59
Biologia e Fisiologia Celular
60
Biologia e Fisiologia Celular
responsvel pela remoo dos grupamentos acetila, portanto, pelo aumento da interao das
histonas com a molcula de DNA e pela condensao da cromatina.
Sob o ponto de vista estrutural e funcional, a cromatina pode ser classificada em
eucromatina e heterocromatina. A eucromatina caracterizada, morfologicamente, sob
microscopia eletrnica de transmisso, como a regio mais clara e menos densa da cromatina.
Por outro lado, a heterocromatina a regio mais eletrodensa sob microscopia eletrnica,
refletindo um maior grau de condensao da cromatina.
Os cromossomos so formados pela compactao da cromatina, e so encontrados
somente na fase de mitose do ciclo celular. O grau de compactao observado entre a fibra de
DNA e os cromossomos de cerca de 10.000 vezes. Essa compactao fundamental para que
o material gentico seja distribudo de forma homognea e ntegra, aps a devida duplicao,
para as clulas filhas durante a diviso celular. A anlise do padro cromossomial de uma dada
espcie gera um perfil especfico que denominamos caritipo, que inclui o nmero de
cromossomos, o tamanho dos cromossomos, bem como a localizao dos centrmeros (regio de
unio das cromtides irms e onde ocorre a ligao das protenas que compem o fuso mittico)
(figura 6.5).
:: TA NA WEB!!! ::
3.2 NUCLOLO
:: PERGUNTAS?? ::
62
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 7
SINALIZAO CELULAR
1. VISO GERAL
A sinalizao celular um mecanismo de comunicao entre as clulas que se encontra
presente nas mais diversas formas de vida, desde organismos unicelulares, como bactrias,
fungos e protozorios, at seres multicelulares. Em organismos procariotos, a sinalizao extra e
intracelular crucial para o controle de diversos processos, tais como a formao do biofilme e a
virulncia. J em organismos eucariotos unicelulares, a sinalizao celular pode ser responsvel
pelo controle da reproduo sexual ou dos mecanismos de diferenciao celular, sendo
geralmente controlada por fatores ambientais. A complexidade dos organismos multicelulares
exibe um elevado grau de sofisticao extremamente dos sistemas de sinalizao celular, que
esto presentes na fertilizao, desenvolvimento embrionrio, morfognese e organognese,
crescimento, regulao do perodo reprodutivo, resposta aos estmulos ambientais, manuteno
da homeostasia e outros processos vitais.
O mecanismo de sinalizao celular envolve a participao de uma clula sinalizadora,
responsvel pela produo e, na maioria dos casos, liberao de uma molcula sinalizadora,
denominada ligante, e uma clula-alvo, que apresenta receptores (protenas que reconhecem
especificamente o ligante) que sero responsveis pela propagao do sinal e conseqente
resposta celular. A natureza qumica dos ligantes bastante diversa, incluindo desde gases, como
o xido ntrico, at pequenas molculas hidrofbicas, como lipdeos e esterides, ou mesmo
peptdeos e protenas. Por outro lado, os receptores celulares so protenas especficas que
podem estar localizadas nas membranas celulares ou solveis no citosol ou ncleo celular.
Vamos, a partir da prxima seo, conhecer melhor estes mecanismos de sinalizao
celular.
Existem diferentes formas de comunicao celular (figura 7.1). Cada forma de sinalizao
est presente em um diferente sistema biolgico ou microambiente, sendo o tipo de sinalizao
determinante para o sucesso da resposta ao estmulo. As formas de sinalizao celular so:
63
Biologia e Fisiologia Celular
64
Biologia e Fisiologia Celular
Figura 7.1 Esquema ilustrativo das formas de sinalizao celular . (A) De contato; (B) Parcrina;
(C) Autcrina; (D) Endcrina.
65
Biologia e Fisiologia Celular
:: FIQUE LIGADO!! ::
66
Biologia e Fisiologia Celular
:: FIQUE DE OLHO!! ::
4. RECEPTORES CELULARES
67
Biologia e Fisiologia Celular
a) Receptores acoplados canais inicos. Neste caso, os prprios receptores atuam como
canais inicos e a sua interao com os ligantes extracelulares que regula o fluxo inico
atravs do canal. Dois exemplos deste tipo de receptores so os receptores de acetilcolina da
clula muscular esqueltica, que atuam como um canal de sdio, e os receptores gabargicos
expressos nos neurnios, que ao se ligarem ao neurotransmissor inibitrio GABA, promovem
o influxo de ons cloreto e a conseqente hiperpolarizao da membrana plasmtica da clula
neuronal.
c) Receptores com Atividade Enzimtica. Esta classe de receptores inclui receptores com
atividades enzimticas intrnsecas, ou seja, cuja cadeia polipeptdica do receptor possui um
domnio de localizao citoslica com atividade enzimtica, e receptores com atividade
enzimtica extrnseca, onde a atividade enzimtica encontra-se em uma protena perifrica
associada ao receptor pelo lado citoslico da membrana. Os receptores com atividade
enzimtica intrnseca so divididos em: receptores tirosina-cinase; receptores serina-treonina-
cinase; receptores histidina-cinase; receptores tirosina-fosfatase; e receptores guanilil-ciclase.
Essa diviso baseia-se na atividade cataltica presente no receptor. Os receptores que
apresentam atividade cinase (ou quinase) promovem a fosforilao da protena alvo (adio de
um grupamento fosfato a um resduo de aminocido de uma protena). Os receptores com
atividade fosfatase removem um grupamento fosfato da protena-alvo e os receptores guanilil-
ciclase convertem GTP (trifosfato de guanosina) em GTPc (trifosfato cclico de guanosina). J
os receptores com atividade extrnseca esto associados enzimas com atividade tirosina-
cinase.
68
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
:: FIQUE LIGADO!! ::
70
Biologia e Fisiologia Celular
:: TA NA WEB!!! ::
Comunicao Hormonal
http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter17/animation__hormonal_communic
ation.html
71
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 8
CICLO CELULAR
1. VISO GERAL
Figura 8.1 Fases e subfases do ciclo celular. I - Intrfase; M - Mitose; P - Prfase; PM - Pr-
metfase; MT - Metfase; A - Anfase; T Telfase. Modificado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cell_Cycle_2.svg
72
Biologia e Fisiologia Celular
A diviso celular de organismos procariotos segue outro padro, tendo em vista que tais
organismos no possuem um sistema de endomembranas, e, portanto, no apresentam ncleo.
Nestes organismos, a diviso celular conhecida como fisso binria (uma forma de reproduo
assexuada), sendo caracterizada pela duplicao do material gentico, crescimento celular, e
diviso celular.
73
Biologia e Fisiologia Celular
divididas em duas classes: ciclinas G1/S, que inclui as ciclinas D, A e E; e a ciclina G2/M, que
inclui a ciclina B.
As ciclinas formam dmeros funcionais com protenas cinases especficas, conhecidas
como cinases dependentes de ciclina (cdks). A formao do dmero ativa as protenas cdks que
passam a adicionar grupamentos fosfato em seus substratos (fosforilao). A adio destes
grupamentos, em protenas-alvo especficas, responsvel pela progresso do ciclo celular,
regulando desde a replicao do DNA, na fase S, at a condensao da cromatina, o desarranjo
do envelope nuclear e a formao do fuso mittico na fase M.
J foram descritas mais de 10 ciclinas diferentes em clulas animais. A figura 8.2 ilustra a
expresso e formao dos dmeros ciclina-cdk nas diferentes fases do ciclo celular de mamferos.
Figura 8.2 Esquema representando a expresso das ciclinas e a dimerizao dos complexos
ciclina-Cdk durante as fases do ciclo celular de mamferos. Em G1, a ciclina D pode se associar tanto
com a cdk 4 ou a cdk 6.
4. INTRFASE
74
Biologia e Fisiologia Celular
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
Aps a verificao da integridade do DNA, a clula progride para a fase S, onde o DNA
ser, finalmente, replicado. Diversas enzimas so importantes nesta etapa, com destaque para a
DNA polimerase, enzima responsvel pela catlise da polimerizao dos dexorribonucleotdeos
em uma fita de DNA. Durante a fase S, a taxa de transcrio e traduo drasticamente reduzida,
mantendo-se apenas a sntese de protenas (histonas) que sero importantes para a montagem
da cromatina a partir do DNA recm sintetizado.
Ao entrar na fase G2, a clula verifica, atravs de um sistema enzimtico extremamente
qualificado, a integridade do DNA recm-sintetizado (segundo ponto de restrio ou verificao).
Nesta fase inicia-se a sntese de protenas que sero fundamentais para a mitose, como as
tubulinas, que constituem o microtbulo, estrutura responsvel pela formao do fuso mittico.
5. MITOSE
Apesar de ser a fase mais curta do ciclo celular, a mitose um das fases mais fascinantes
do processo de diviso celular, tendo em vista as evidentes alteraes morfolgicas que
representam esta fase. As diversas fases da mitose podem ser visualizadas, com o auxlio de
corantes, sob microscopia ptica comum. Uma das preparaes mais usuais feita a partir do
esmagamento da raiz de Allium cepa (cebola) e posterior colorao com azul de metileno. Como
vimos anteriormente, a mitose sub-dividada em diversas fases, que passaremos a estudar
agora.
5.1 PRFASE
75
Biologia e Fisiologia Celular
5.2 PR-METFASE
5.3 METFASE
A metfase marcada pela localizao dos centrossomos nos plos da clula e pelo
alinhamento das cromtides irms no plano equatorial da mesma. O alinhamento das cromtides
na placa metafsica, atravs do fuso mittico, garante, ao processo de diviso celular, que o
contedo gentico, duplicado na intrfase, seja distribudo de forma homognea para ambas as
clulas filhas. O alinhamento das cromtides irms no plano equatorial uma condio essencial
para o prosseguimento do ciclo celular. Este requisito considerado o terceiro ponto de restrio
(ou verificao) do ciclo.
5.4 ANFASE
5.5 TELFASE
76
Biologia e Fisiologia Celular
:: SAIBA MAIS... ::
6. MEIOSE
meiose, quatro clulas filhas haplides so geradas a partir de uma nica clula me, em duas
divises celulares seqenciais (figura 8.4).
A meiose dividida em duas fases distintas: meiose I e meiose II. A meiose I tem incio
logo aps a duplicao do material gentico na fase S da intrfase, e dividida em quatro fases:
prfase I, metfase I, anfase I e telfase I. Durante a prfase I, os cromossomos homlogos so
pareados, ocorrendo a permuta de material gentico (recombinao ou crossing-over) entre
estes cromossomos. Essa permuta responsvel pela diversidade gentica proporcionada pela
reproduo sexuada. Ao fim da meiose I, cada uma das duas clulas filhas contm um membro
de cada par de cromossomos homlogos, consistindo, estes, de duas cromtides irms.
A entrada na meiose II ocorre sem que as clulas geradas pela meiose I entrem na
intrfase, ou seja, no ocorre uma nova duplicao do material gentico. Ao trmino da telfase I,
as clulas entram diretamente na prfase II, seguindo ento para a metfase II, anfase II, e,
finalmente, para a telfase II.
Na anfase II, as cromtides irms so segregadas para os plos da clula. Assim, cada
clula dever conter apenas uma cpia de cada cromossomo homlogo, ou seja, ao trmino da
meiose teremos 4 clulas haplides. A exceo fica por conta da formao dos ocitos, durante a
oognese, onde apenas 3 clulas so geradas. A diploidia restaurada por ocasio da fertilizao
e formao de um novo indivduo.
:: TA NA WEB!!! ::
http://www.cellsalive.com/cell_cycle.htm
http://nobelprize.org/educational/medicine/2001/
78
Biologia e Fisiologia Celular
UNIDADE 9
CITOESQUELETO
1. VISO GERAL
79
Biologia e Fisiologia Celular
Os filamentos de actina podem estar associados a diversas protenas, que promovem, por
exemplo, a sua interao com a membrana plasmtica, a formao de malhas ou feixes de
filamentos, o deslocamento de um filamento sobre outro, ou o aumento ou diminuio da
estabilidade do polmero.
Os filamentos de actina so responsveis pela formao de projees da membrana
plasmtica em processos de migrao celular e fagocitose, alm da estruturao das
microvilosidades presentes em clulas epiteliais. A actina F tambm importante na determinao
do formato celular e no processo de clivagem celular que ocorre durante a citocinese.
3. FILAMENTOS INTERMEDIRIOS
Sincoilina Neurnios
Sinemina & Sinemina /Desmulina Clulas musculares
V Laminas nucleares Expresso ubqua
Filesina Clulas fibrosas do cristalino
VI
Faquinina Clulas fibrosas do cristalino
80
Biologia e Fisiologia Celular
Voc j deve ter ouvido falar em queratina, no? Calma, no perca seus fios
de cabelo por causa disto. Vamos saber um pouco mais sobre essa intrigante
protena!
A queratina uma protena formadora dos filamentos intermedirios nas
clulas epiteliais, podendo ser dividida, quanto sua caracterstica qumica, em
queratinas cidas ou queratinas bsicas. A interao entre estas duas formas de
queratinas produz o heterodmero responsvel pela formao do filamento de
queratina, que vem a ser um dos filamentos intermedirios mais rgidos. Anlises
recentes do genoma humano revelaram um total de 54 genes funcionais para a
queratina, sendo 28 genes correlacionados ao tipo I e 26 genes correlacionados ao
tipo II, o que faz desta protena a mais diversificada entre todas as que compem os
filamentos intermedirios.
Os queratincitos da epiderme so as clulas responsveis pela sntese da
queratina e a conseqente formao da camada de queratina que protege a pele
contra os danos ambientais, tais como: o calor; a perda de gua; ou a incidncia de
radiaes ultravioleta. A formao da camada de queratina denominada
queratinizao, sendo bastante evidente em rpteis, aves e mamferos, onde, neste
ltimo, encontrada, tambm, na formao dos pelos e das unhas.
:: ARREGAANDO AS MANGAS!! ::
:: TA NA WEB!!! ::
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=cooper&part=A1808&rendert
ype=figure&id=A1813
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4&part=A2957&rendert
ype=figure&id=A2984
4. MICROTBULOS
trfego intracelular de vesculas e organelas, e a formao dos clios e flagelos das clulas
eucariticas.
Assim como nos filamentos de actina, o microtbulo tambm formado pela polimerizao
de protenas globulares. Estas protenas, denominadas tubulinas e , formam os heterodmero
responsveis pelo elongamento do filamento. Os microtbulos, da mesma forma que a actina F,
tambm apresentam uma estrutura polarizada, onde a adio das subunidades de tubulina ocorre
na extremidade mais (+), e a dissociao destas subunidades, na extremidade menos (-). A
adio do heterotrmero ao polmero mediada pela ligao das subunidades de tubulina com o
trifosfato de guanosina (GTP). Aps a incorporao do heterotrmero no filamento, o GTP
hidrolisado em difosfato de guanosina (GDP), o que afeta a estabilidade do heterodmero no
filamento e permite uma eventual separao do mesmo. Este processo conhecido como
instabilidade dinmica e fundamental para todos os processos biolgicos regulados pelos
microtbulos.
A nucleao e organizao dos microtbulos ocorrem em regies especializadas no
citoplasma, denominadas centros organizadores dos microtbulos, e inclui os centrossomos,
estrutura supramolecular composta por um par de centrolos e os corpsculos basais. A protena
responsvel pela na nucleao dos microtbulos, nos centrossomos, a tubulina .
:: SAIBA MAIS... ::
5. CITOESQUELETO EM PROCARIOTOS
82
Biologia e Fisiologia Celular
83