Instrues de Uso
PRECAUES E CUIDADOS ESPECIAIS
CAPACIDADE DE
LIGAO DE FERRO
Ref.: 41
MS 10009010013
FINALIDADE
Sistema para determinao da Capacidade de Ligao de
Ferro em amostra de soro.
Somente para uso diagnstico in vitro.
PRINCPIO
Um padro de ferro com concentrao conhecida (500 mg/dL)
incubado com a amostra de soro em um tampo de pH 8,3.
Ocorre, ento, a saturao dos stios disponveis para ferro na
protena transportadora (transferrina).
O excesso de ferro no ligado ento medido atravs da
formao de um complexo magenta brilhante aps adio de
Ferrozine , permitindo a determinao da capacidade de
ligao de ferro.
CARACTERSTICAS DO SISTEMA
Capacidade de Ligao de Ferro da Labtest proporciona um
sistema seguro de ensaio homogneo direto, que atravs da
dosagem do excesso de ferro adicionado a uma amostra,
permite a medida do ferro no ligado. Este resultado possibilita
calcular a capacidade latente de ligao de ferro e juntamente
como o valor do ferro srico pode-se obter a capacidade total
de ligao de ferro, dado muito importante no diagnstico de
inmeras patologias hematolgicas.
O mtodo bastante preciso, com uma excelente robustez nos
ensaios do dia a dia e demonstra que no sofre interferncia de
valores pouco elevados da bilirrubina e dos triglicrides.
Os estudos da diluio da matriz e os experimentos de
comparao com um mtodo proposto como tentativa para
mtodo de referncia, indicam que o sistema de medio
apresenta especificidade e exatido adequadas para o ensaio
do analito.
O sistema utiliza metodologia manual facilmente aplicvel em
analisadores semi-automticos capazes de medir uma reao
de ponto final entre 540 e 580 nm.
METODOLOGIA
Goodwin modificado.
REAGENTES
1. Tampo - Armazenar entre 15 - 25 C.
Contm tampo 500 mmol/L, pH 8,3 e fenoxietanol
7,2 mmol/L.
2. Padro 500 mg/dL - Armazenar entre 15 - 25 C.
Aps manuseio armazenar bem vedado para evitar
evaporao.
3. Ferrozine - Armazenar entre 15 - 25 C.
Contm ferrozine 28 mmol/L.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas
condies indicadas, so estveis at a data de expirao
impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto
sujeitos a contaminaes de natureza qumica e microbiana
que podem provocar reduo da estabilidade.
A vidraria armazenada pode acumular resduos que levam
obteno de resultados falsamente elevados.
Todo material usado no procedimento deve ser tratado com
soluo de cido ntrico 10% por 12 horas, lavado
exaustivamente com gua corrente e enxaguado com gua
deionizada para evitar a obteno de resultados incorretos
devido a contaminao com traos de ferro.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulao dos reagentes.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas
condies indicadas, so estveis at a data de expirao
impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto
sujeitos a contaminaes de natureza qumica e microbiana
que podem provocar reduo da estabilidade.
MATERIAL NECESSRIO E NO FORNECIDO
Banho-maria mantido temperatura constante (37 C)
Fotmetro capaz de medir, com exatido, a absorbncia entre
540 e 580 nm.
Pipetas para medir amostras e reagentes.
Cronmetro.
INFLUNCIAS PR-ANALTICAS
Os fatores pr analticos de variao representam a causa
mais importante de determinaes incorretas de capacidade
de ligao de ferro e muitos outros analitos. A contaminao
pode ocorrer na coleta, no transporte e processamento da
amostra.
Para controle teraputico aconselhvel colher a amostra
sempre no mesmo horrio devido s variaes diurnas do ferro
srico.
Idade, sexo, perodo de gestao, uso de contraceptivos orais
e estrognio alteram as concentraes do ferro srico e podem
modificar os valores da capacidade de ligao de ferro.
O uso de detergente inico para limpeza do material outra
fonte de contaminao com ferro.
AMOSTRAS
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP)
que estabelea os procedimentos para colheita, preparao e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros
devidos amostra podem ser muito maiores que os erros
ocorridos durante o procedimento analtico.
Usar soro (sem hemlise) obtido em jejum. O analito estvel
4 dias entre 15 - 25 C e 6 dias entre 2 - 8 C.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras
de sangue no transmitem infeces, todas elas devem ser
consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao
manuse-las deve-se seguir as normas estabelecidas para
biossegurana.
Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos
aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteo
ambiental.
INTERFERNCIAS
Valores de Bilirrubina at 10 mg/dL e Triglicrides at
750 mg/dL no produzem interferncias significativas.
Valores de Bilirrubina maiores que 10 mg/dL e Triglicrides
maiores que 750 mg/dL produzem resultados falsamente
diminudos.
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PROCEDIMENTO
Ver observaes 1, 2 e 3.
Todo material usado no procedimento deve ser tratado com
soluo de cido ntrico 10% por 12 horas, lavado
exaustivamente com gua corrente e enxaguado com gua
deionizada para evitar a obteno de resultados incorretos
devido a contaminao com traos de ferro.
A gua deionizada deve ter uma resistividade 1 megaohm ou
uma condutividade 1 microsiemens e concentrao de
silicatos <0,1 mg/L (gua tipo II).
Tomar 3 cubetas do fotmetro, lavadas como acima e proceder
como a seguir:
Branco Teste Padro
Tampo (n 1) 1,5 mL 1,5 mL ----
Padro (n 2) ---- 0,5 mL 0,5 mL
gua destilada ou
1,0 mL ---- 2,0 mL
deionizada
Soro (sem hemlise) ---- 0,5 mL
Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 10
minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel
dos reagentes nos tubos de ensaio. Determinar a absorbncia
do teste em 560 nm ou filtro verde (540 a 580), acertando o
zero com o branco. A absorbncia do teste ser A1.
Ferrozine (n 3) 1 gota 1 gota 1 gota
Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 10
minutos. Determinar as absorbncias do teste e padro em
560 nm ou filtro verde (540 a 580), acertando o zero com o
branco. A absorbncia do teste ser A2.
O procedimento sugerido para a medio adequado para
fotmetros cujo volume mnimo de soluo para leitura igual
ou menor que 2,5 mL. Deve ser feita uma verificao da
necessidade de ajuste do volume para o fotmetro utilizado.
Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados
proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho do teste
e o procedimento de clculo se mantm inalterado. Em caso de
reduo dos volumes fundamental que se observe o volume
mnimo necessrio para a leitura fotomtrica. Volumes da
amostra menores que 0,01 mL so crticos em aplicaes
manuais e devem ser usados com cautela porque aumentam a
impreciso da medio.
CLCULOS
Ver Linearidade.
Capacidade latente de ligao de ferro: CLLF
Capacidade total de ligao de ferro: CTLF
ndice de saturao da transferrina: IST
( A2 - A1)
CLLF (mg/dL) = 500 - [ x 500]
Absorbncia do Padro
Exemplo
A1Teste = 0,023 Absorbncia do Padro = 0,475
A2Teste = 0,384
( 0,384 - 0,023)
CLLF (mg/dL) = 500 - [ x 500] = 120
0,475
CTLF (mg/dL) = Ferro srico + CLLF
Ferro srico
IST (%) = x 100
CTLF
Transferrina (mg/dL) = CTLF x 0,70
CALIBRAO
Calibrao manuais
"Obter o fator de calibrao ao usar novo lote de reagentes ou
quando o controle interno da qualidade indicar.
LINEARIDADE
O resultado da medio linear at 450 mg/dL. Para valores de
capacidade latente maiores que 450 mg/dL, diluir o soro 1:3
com gua destilada ou deionizada e repetir a determinao.
Multiplicar o resultado obtido por 3.
---- CONTROLE INTERNO DA QUALIDADE
O laboratrio deve manter um programa de controle interno da
qualidade que defina claramente os regulamentos aplicveis,
objetivos, procedimentos, critrios para especificaes da
qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas e registro
das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a impreciso e desvios da calibrao. Sugere-se que as
especificaes para o coeficiente de variao e o erro total
sejam baseadas nos componentes da variao biolgica
7,8
(VB) .
INTERVALO DE REFERNCIA
Os intervalos devem ser usados apenas como orientao.
Recomenda-se que cada laboratrio estabelea, na
populao atendida, seus prprios intervalos de referncia.
Capacidade de Ligao de Ferro (mg/dL)
CTLF: Crianas (9,10): 150 a 400 mg/dL
Adultos: 250 a 450 mg/dL
IST: 20 a 50%
Transferrina: 200 a 300 mg/dL
Converso: Unidades Convencionais (mg/dL) x 0,179 =
Unidades SI (mmol/L).
11
CARACTERSTICAS DO DESEMPENHO
Exatido
Em duas amostras com concentraes de capacidade de
ligao de ferro iguais a 129 e 254 mg/dL foram adicionadas
quantidades diferentes de uma amostra com capacidade de
ligao de ferro igual a 453 mg/dL, obtendo-se recuperaes
entre 94 e 100%. O erro sistemtico proporcional mdio obtido
em um valor de 140 mg/dL foi igual a 4,2 mg/dL ou 3,0%.
Especificidade
O mtodo proposto foi comparado com um mtodo do NCCLS
3
utilizando 80 amostras com valores situados entre 105 e
335 mg/dL. A comparao resultou na equao da regresso: y
= 0,960x - 5,866 e um coeficiente de correlao (r) igual a
0,964. O erro sistemtico total (constante e proporcional)
verificado no nvel de deciso (140 mg/dL) foi igual a 11,5 mg/dL
ou 8,2%.
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Como as amostras foram selecionadas aleatoriamente em No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna
pacientes de ambulatrio e pacientes hospitalizados, pode-se deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a
inferir que o mtodo tem uma especificidade metodolgica produo de gua alcalina com liberao de vrios ons,
adequada. silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou
reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou
Repetitividade - Impreciso intra-ensaio mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel.
Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da
N MDIA DP CV% qualidade da gua.
Amostra 1 20 278 5,62 2,0
3.Para uma reviso das fontes medicamentosas de
interferncia nos resultados e na metodologia sugere-se
Reprodutibilidade - Impreciso total consultar. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory
Tests , 3 edio, 1990, Washington: AACC Press, 1990.
N MDIA DP CV%
Amostra 2 20 281 8,33 2,96 REFERNCIAS
1. Goodwin J, Murphy B, Guillemette M. Clin Chem 1966;
12:47.
Sensibilidade metodolgica
Utilizando-se a absorbncia do padro como parmetro, o 2. Henry RJ, Cannon DC, Winkelman JW. Clinical Chemistry,
limite de deteco fotomtrica 0,001 mg/dL, correspondendo Principles and Technics, 2 edio. New York:, Harper &
a uma absorbncia igual a 0,001. Row, 1974.

Efeitos da diluio da matriz 3. Determination of Serum Iron and Total Iron-Binding

Duas amostras com valores iguais a 357 e 394 mg/dL foram Capacity. NCCLS Document H17-P, Vol 10 No.4
utilizadas para avaliar a resposta do sistema nas diluies da
matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatores de 4. Stookey L. Anal Chem. 1970;42:779.
diluio que variaram de 1 a 8 foram encontradas
recuperaes entre 100 e 106%. 5. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-
Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division,
SIGNIFICADO CLNICO Scarborough, Canada, 1972.
Alteraes do Ferro RF (*)
CTLF IST 6. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem
Metabolismo Srico
1981;27:493-501.
Deficincia de ferro D E D A
Infeces crnicas D D D E 7. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa
Doenas malgnas D D D E Molecular, Base de Datos de Variacin Biolgica. Disponvel
Atransferrinemia D D S E em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170>
Perodo menstrual D S D S (acesso em 04/2006).
Gravidez (3 trimestre) D E D S
Hemosiderose pulmonar D S D A 8. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica. Labtest
Nefrose D D E E Diagnstica 2005.
Kwashiorkor D D S S
Contraceptivos orais S/E E S S 9. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry,
Intoxicao com ferro E D E E 2a. edio, Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.
Anemia hemoltica E S/D E E
Hemocromatose E S/D E E 10. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference
Deficincia de piridoxina E S E E Intervals, 5a. edio, Washington: AACC Press, 2005.
Anemia sideroblstca E S/D E E p.132-133.
Talassemia Major E D E E
11. Labtest: Dados de arquivo.
D = diminudo E = elevado
S = sem alterao A = ausente APRESENTAO
REF 41-40
(*) Reserva de ferro: avaliada pela colorao especfica de
esfregao da medula ssea. Tampo 1 X 60 mL
Padro 1 X 20 mL
OBSERVAES
Ferrozine 1 X 2,5 mL
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so
fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e
obteno de resultados corretos. INFORMAES AO CONSUMIDOR
Termos e Condies de Garantia
2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade A Labtest Diagnstica garante o desempenho deste produto
adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e dentro das especificaes at a data de expirao indicada
usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou nos rtulos, desde que os cuidados de utilizao e
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos armazenamento indicados nos rtulos e nestas instrues
<0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua sejam seguidos corretamente.
pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou
condutividade 10 microsiemens.

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Ref.: 061207 Reproduo sob prvia autorizao.

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