KIT PARA ENTEROBACTÉRIAS
1. FINALIDADE
Sistema destinado à identificação bioquímica de bacilos Gram negativos
oxidase negativa e fermentadores da glicose.
2. INTRODUÇÃO
O sistema proposto pela Laborclin utiliza 5 meios de cultura que fornecem 10
provas bioquímicas, que associadas à leitura da fermentação da lactose
(proveniente do meio de isolamento) permitem uma identificação segura da
bactéria analisada.
3. IMPORTÂNCIA CLÍNICA
Uma vez que uma grande parte das doenças infecciosas é causada por
Enterobactérias, a identificação destas possibilita adoção de medidas mais
eficazes de tratamento e controle de tais doenças .
4. AMOSTRA
a- Tipo de amostra
Colônias recém-obtidas de bacilos Gram negativos provenientes de meios de
isolamento adequados, de preferência meios diferenciais que permitam a
leitura da lactose, como o Mac Conkey Agar, Ágar Eosina Azul de Metileno, CLED
etc.
b- Armazenamento e estabilidade
As colônias a serem identificadas devem ser recentes. Caso a identificação
tenha de ser protelada, deve-se proceder o repique do material em meio
apropriado e uma nova incubação a 35 oC por 18-24h, para então realizar a
identificação.
c- Critérios para rejeição
Rejeitar as colônias provenientes de culturas com mais de 24h de semeadura ou
colônias que sejam oxidase positiva.
d- Precauções e cuidados especiais
Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem
veicular diversas doenças infecto-contagiosas . Seu descarte deve ser feito
preferencialmente após sua autoclavação devendo-se evitar sua eliminação
diretamente no meio ambiente.
5. INFORMAÇÕES GERAIS SOBRE O PRODUTO
a- Registro no Ministério da Saúde: 10097010109 (família de produtos)
b- Princípio de técnica
As colônias a identificar são semeadas em 5 tubos de meios de cultura que
compõe o conjunto, que serão incubados a seguir a 35 oC por 18-24h.
Terminada a incubação, é realizada a leitura dos tubos, e os dados são
analisados através de tabela apropriada ou por via eletrônica, para então se
obter a identificação da bactéria analisada.
c- Reagentes
- Tubo no 1: consiste no meio de Rugai sem sacarose , sólido e inclinado em um
tubo com tampa de rosca;
- Tubo no 2: consiste no meio LMI - Lisina, Motilidade e Indol, semi-sólido, em um
tubo com tampa de rosca;
- Tubo no 3: consiste no meio de MIO - Motilidade Indol e Ornitina, semi- sólido,
em um tubo com tampa de rosca;
- Tubo no 4: consiste no meio de Rhamnose, líquido, em um tubo com tampa de
rosca;
- Tubo no 5: consiste no meio de Citrato, sólido e inclinado em um tubo com
tampa de rosca;
- Vaselina estéril (LB cód. 570069).
d- Armazenamento e estabilidade
Para fins de transporte o produto pode ser mantido em temperatura ambiente
por até 3 dias. No laboratório os meios devem ser armazenados em geladeira (2-
8 oC) aonde permanecem estáveis até a data de validade impressa em rótulo
desde que isentos de contaminação química ou biológica e sem sinais de
ressecamento. Não congelar .
e- Precauções e cuidados especiais
-Deve-se manipular os reagentes com cautela no sentido de se evitar sua
contaminação química ou biológica.
6. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS NECESSÁRIOS (porém não incluídos)
- Agulha bacteriológica (preferencialmente em platina , código LB 570657);
- Bico de Bunsen;
- Estufa bacteriológica;
- Tiras reagentes para oxidase (cód. LB 570661);
- Reativo de Kovac’s (cód. LB 571004 ou 570461);
- Manual para identificação impresso (cód. LB 570116) , em disquetes (cód. LB
570110) ou em CD (cód. LB 570115).
7. PROCEDIMENTO TÉCNICO
a- Deixar que os meios de cultura e demais materiais atinjam temperatura
ambiente;
b- Verificar se as colônias a analisar são oxidase negativas, pois o sistema não
pode ser usado para identificação de bactérias oxidase positivas;
c- Usando a agulha bacteriológica flambada, encostar na superfície de uma
colônia e inocular no tubo no 1 por picada central até o fundo do tubo e ao voltar a
agulha, semear por estrias a superfície inclinada do meio; fechar o tubo deixando
a tampa frouxa para uma melhor aeração;
d- Usando a mesma agulha do tubo anterior (sem flambar) inocular o tubo no 2 por
picada central até o fundo e a seguir fechar o tu bo;
e- Usando a mesma agulha (sem flambar) do tubo anterior, inocular o tubo no 3
por picada central até o fundo, cuidando para que ao voltar, a agulha siga o
mesmo trajeto (para não criar dificuldades na prova da motilidade) fechando o
tubo a seguir;
f- Flambar a agulha e encostar na mesma colônia, semeando o tubo no 4 na
superfície, cobrindo-o com vaselina estéril (para garantir ambiente anaeróbio) e
fechando o tubo em seguida;
g- Flambar a agulha, encostar novamente na mesma colônia e semear a
superfície do tubo no 5, cuidando para que não haja excesso de inóculo e
fechando o tubo a seguir;
h- Incubar a bateria de tubos em estufa bacteriológica entre 35-37 oC por 18-
24h e ler os resultados:
Tubo no 1
Desaminação do L-Triptofano (TRI):
- Positivo: Desenvolvimento de uma cor verde garrafa no ápice do tubo;
- Negativo: Mantém-se a cor original do meio (verde azulado) no ápice do tubo.
Fermentação da glicose (GLI):
- Positivo: Desenvolvimento de uma cor amarela no fundo do tubo (esta cor pode
estar mascarada no caso de bactérias que produzem H2S ou que hidrolisam a
uréia, formam-se respectivamente coloração negra e azulada);
- Negativo: O fundo do tubo mantém a cor original do meio (verde azulado): não se
trata de enterobactéria.
Produção de gás a partir da glicose (GAS):
- Positivo: Desenvolvimento de bolhas com intensidade variável no interior do
meio;
- Negativo: O meio mantém-se íntegro.
Produção de gás sulfídrico (H2S):
- Positivo: Desenvolvimento de cor negra de intensidade variável no fundo do
tubo;
- Negativo: O meio mantém coloração diferente da mencionada.
Hidrólise da uréia: apesar desta prova não fazer parte do sistema, ela pode ser
utilizada como subsídio para a identificação (prova complementar);
- Positivo: Desenvolvimento de coloração azul na base do tubo (que pode
mascarar a leitura da prova da glicose, ou pode estar mascarada quando a
bactéria produz concomitantemente H2S);
- Negativo: Coloração diferente da mencionada.
Tubo no 2
Descarboxilação da lisina (LIS):
- Positivo: Desenvolvimento de coloração que passa do amarelo ao púrpura no
meio;
- Negativo: Desenvolvimento de coloração amarela no meio.
Tubo no 3
Descarboxilação da ornitina (ORN):
- Positivo: Desenvolvimento de coloração que passa do amarelo ao púrpura no
meio;
- Negativo: Desenvolvimento de coloração amarela no meio.
Observação: Tanto no meio para lisina como no meio para a ornitina, a coloração
inicialmente amarela nas primeiras horas de incubação é devida a fermentação
da glicose presente no meio, indicativo da viabilidade da bactéria inoculada. Em
ambos os meios (LMI e MIO) podem ser feitas as leituras de indol e motilidade.
Motilidade (MOT):
- Positiva: Crescimento difuso com turvação total ou parcial do meio;
- Negativa: Crescimento restrito à linha de picada.
Indol (IND): 0800-410027. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa resposta do
Adicionar 2-4 gotas do reativo de Kovac’s sobre a superfície do meio e aguardar produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da Laborclin serão
cerca de dois minutos: resolvidos sem ônus para o cliente.
- Positivo: Surgimento de um anel vermelho;
- Negativo: Não se desenvolve coloração no reagente. 11. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Edwards, P.R. & Ewing, W.H. Identification of Enterobateriaceae, 3rd edition,
- Tubo no 4 Burgess Pub. Co., CINN, 1972.
Rhamnose (RHA): 2. Fontes, C.F. Proposição de dois novos meios de cultura e de um sistema
- Positivo: Desenvolvimento de uma coloração amarela com turvação do meio; simplificado para identificação de enterobactérias, Escola Paulista de Medicina,
- Negativo: O meio mantém sua coloração ori ginal e com crescimento São Paulo, 1979.
(turvação). 3. Lenette, Edwin H. Microbiologia clínica, B. Aires: Editorial Medica
panamericana, 3 ed., 1982.
- Tubo no 5 4. Finegold, S.M.; Baron, E.J. Diagnóstico microbiológico. B. Aires: Ed. Medica
Citrato (CIT): Panamericana, 7 ed, 1989.
- Positivo: Observa-se crescimento no meio e/ou desenvolvimento de coloração 5. Mahon, C.E.; Manuselis Jr., G. Diagnostic microbiology, Philadelhia: W.B.
azul; Saunders Co., 1995.
- Negativo: A coloração do meio se mantém inalterada e sem sinais de 6. Koneman, Elmer W. et al. Diagnostic microbiology, 5th ed., 1997.
crescimento. 7. Ewing, W.H. Edwards and Ewing’s Identification of Enterobacteriaceae, 4th
ed. Elsevie Science Pub. Co., Inc, N.Y., 1986.
- Precauções e cuidados especiais
- Para assegurar uma boa performance, procurar utilizar apenas uma colônia, Visite nosso site na internet (www.laborclin.com.br) , no link “Manual de
usando metade desta para os 3 primeiros tubos e a outra metade para os tubos Técnicas” estão disponíveis diversas fotografias dos meios descritos
restantes ; (crescimento, mudanças de coloração etc.).
- Manter a tampa do meio de Rugai sempre frouxa (tubo no 1);
- Observar rigorosamente o tempo e temperatura de incubação, que devem
estar respectivamente entre 18-24h e entre 35-37 oC;
- Todos os tubos devem apresentar crescimento , exceto o último tubo, aonde a
prova do citrato negativa implica em não crescimento;
- Existem casos em que a identificação é duvidosa, e o próprio sistema sugere a
execução de provas complementares para proporcionar um melhor grau de
certeza;
- É indispensável o uso do Manual de Identificação impresso, em CD ou em
disquete para se chegar no resultado final;
- Bactérias não fermentadoras da glicose crescem apenas na superfície dos
meios, devendo-se ter cuidado na interpretação dos resultados, em especial
com Stenotrophomonas maltophilia e Acinetobacter sp que são oxidase
negativas.

8. LIMITAÇÕES DO MÉTODO
Praticamente a metodologia empregada sofre limitação em se tratando de
bactérias oxidase positiva (não fermentadores da glicose) ou bactérias não
catalogadas no sistema . Muito comuns são os problemas de inoculação
(excesso ou falta de material), temperatura de incubação (alta ou baixa) e erros
no reconhecimento de cores. Para uma identificação com maior precisão, a
Laborclin disponibiliza o sistema Bactray, que permite identificação de BGN
tanto fermentadores da glicose como não fermentadores (incluindo oxidase
positiva ou negativa). Consulte o SAC para maiores informações.

9. CONTROLE DA QUALIDADE
- Materiais necessários
- Cepas padrão ATCC ou derivadas de boa procedência, ou amostras oriundas de
programas externos de controle da qualidade.

- Periodicidade
Sugere-se testar as cepas padrão a cada novo lote de meios a usar, podendo o
laboratório definir outros critérios de execução segundo sua rotina e interesses.

- Interpretação e avaliação
Os meios deverão apresentar o perfil bioquímico característico para cada cepa
testada, do contrário deverá o laboratório avaliar o ocorrido e não liberar o
produto para uso até esclarecer a situação.

10. GARANTIA DE QUALIDADE

A Laborclin obedece o disposto na Lei 8.078/90 - Código de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho, é
necessário :
- que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente procedimento técnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados em condições adequadas;
- que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam em boas
condições de uso , manutenção e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido a testes
específicos, que são repetidos periodicamente até a data de vencimento
expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem ser
solicitados junto ao SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente, bem como em caso
de dúvidas ou quaisquer problemas de origem técnica, através do telefone

Dúvidas, sugestões Laborclin produtos para laboratórios ltda.

e/ou reclamações
ligue para o nosso:
R. Cassemiro de Abreu, 521 Pinhais/PR - CEP. 83.321-210
CNPJ: 76.619.113/0001-31 - Insc.Est.: 13700129-26
Responsável Técnico: Elisa H. Uemura CRF-PR 4311
www.laborclin.com.br
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